CN108949705A

CN108949705A - 过氧化物还原酶1结合蛋白及其应用

Info

Publication number: CN108949705A
Application number: CN201810462792.2A
Authority: CN
Inventors: 汤晓飞; 齐墨词; 张敏; 陈慧; 李玲玉; 王敏; 葛丽华; 杨晶
Original assignee: Beijing Stomatological Hospital
Current assignee: Beijing Stomatological Hospital
Priority date: 2018-05-15
Filing date: 2018-05-15
Publication date: 2018-12-07
Anticipated expiration: 2038-05-15
Also published as: CN108949705B

Abstract

本发明公开了过氧化物还原酶1结合蛋白及其应用，所述过氧化物还原酶1(Peroxiredoxin 1,Prx1)的结合蛋白包括TXN(Trx)、ASK1、TPM3、CFL1、GTPBP4、DIRAS2、PPP2R1A中的一种或多种。经免疫共沉淀检测分析，所述过氧化物还原酶1的结合蛋白可以与过氧化物还原酶1结合，且尼古丁可以促进两者的结合。在口腔癌前病变如白斑细胞中，所述过氧化物还原酶1的结合蛋白的表达显著提高，且尼古丁可调控结合蛋白的表达。本发明提供的过氧化物还原酶1结合蛋白可作为分子标记物诊断或防治口腔癌前病变如口腔白斑，制备Prx1蛋白结合物，或用于结合、标记、鉴定、富集、分选或纯化Prx1高表达细胞。

Description

过氧化物还原酶1结合蛋白及其应用

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及过氧化物还原酶1结合蛋白及其应用。

背景技术

口腔癌发病率位于全身肿瘤的第六位，每年全球新发口腔癌约为65万例，死亡病例为35万人。我国是口腔癌高发和高死亡率国家之一，尽管近30年来治疗手段不断改进，但平均5年生存率始终徘徊在50％左右，仍未得到明显改善，严重威胁着人们的生命健康和生存质量。口腔癌的发病是多步骤、多阶段的过程，约70％口腔癌都有明确的癌前病变阶段，若能有效的治疗和干预口腔癌前病变发生及癌变，则能大大降低口腔癌的发病率。

口腔白斑(oral leukoplakia,OLK)是最常见的口腔癌前病变，其每年的发病率为1.36％，单纯白斑的癌变率为4％-17.5％，白斑伴上皮异常增生者癌变率上升到36％，白斑与鳞癌共存的患病率高达60％。平均癌变病程约为8.2年。流行病学研究报道OLK的发生发展与吸烟密切相关。过去30年，不同国家的流行病学调查发现OLK发病率为1.1％-11.7％，而吸烟人群中OLK发病率则增加到3.7％-60.3％。每天吸烟超过20支的人群中，有74.0％患有口腔白斑。吸烟4-10年可诱发伴上皮异常增生的OLK，继续吸烟4-8年则可发生癌变。吸烟的OLK患者在戒烟1-4年后，患癌风险比持续吸烟的OLK患者明显降低，戒烟10年后，其患癌风险与不吸烟者接近。

过氧化物还原酶(peroxiredoxin,Prx)是新近备受学界关注的特异性巯基抗氧化蛋白超家族，广泛存在于原核生物和真核生物中。过氧化物还原酶1(peroxiredoxin 1,Prx1)是家族中含量最多，分布最广的2-Cys型Prx蛋白，主要分布于细胞质和细胞核。Prx1蛋白N端和C端分别含有一个高度保守的半胱氨酸残基(2-Cys)，是细胞中氧化还原反应的灵敏的调节器。研究表明Prx1在一些病变和恶性肿瘤中表达异常增高，如糖尿病、食道癌、肝细胞癌、口腔白斑及口腔鳞状细胞癌等，具有增加细胞存活及抗衰老能力，与一些肿瘤的预后密切相关，提示Prx1可能在多种疾病及肿瘤的发生中发挥重要的作用。

Prx1蛋白具有多种功能，主要的功能有：1)抗氧化功能：Prx1以二聚体的形式，发挥过氧化物酶的作用，清除过多的ROS，维持细胞内的氧化还原稳态；2)分子伴侣功能：Prx1以十聚体的形式，作为分子伴侣参与细胞凋亡、增殖、免疫及炎症等多种生理病理过程。

申请人前期研究率先发现吸烟与Prx1表达密切相关，吸烟鳞癌患者、人口腔白斑及小鼠口腔癌前病变等组织中Prx1表达明显增高；Prx1敲除导致口腔癌前病变程度减轻，引起小鼠舌癌前病变及人癌前病变DOK细胞凋亡水平显著升高，MAPK凋亡信号通路相关分子p-JNK及p-p38MAPK表达增高；Prx1通过激活p-NFκB、p65及p-IκBα,促进人口腔鳞癌细胞增殖、侵袭及转移。以上结果提示Prx1促进了烟草相关OLK的发生及癌变。研究烟草相关的口腔白斑细胞中Prx1相互作用蛋白，以期进一步揭示烟草在口腔白斑发生发展中的作用机制，为口腔白斑的诊断和防治提供新的理论依据，这将对防治口腔白斑发生发展，降低口腔癌的发病率具有重要的现实意义。

发明内容

为解决现有技术中存在的技术问题，本发明的目的在于提供Prx1蛋白的结合蛋白及其应用。

本发明提供了一种分子标记物，包含Prx1结合蛋白的一种或多种，所述Prx1结合蛋白为具有如SEQ ID NO.1～7所示的氨基酸序列或如SEQ ID NO.1～7所示的氨基酸序列经替换、缺失或插入一个或多个氨基酸得到的具有相同功能蛋白的氨基酸序列。

进一步地，本发明提供编码所述分子标记物的基因。

所述的基因具有如下任意一种核苷酸序列：

(1)具有如SEQ ID NO.8～SEQ ID NO.14所示的核苷酸序列；

(2)具有如SEQ ID NO.8～SEQ ID NO.14所示的核苷酸序列经一个或多个核苷酸的替换、缺失或插入得到的编码具有相同功能蛋白的核苷酸序列；

(3)在严格条件下，能够与SEQ ID NO.8～SEQ ID NO.14所示的核苷酸序列杂交的编码具有相同功能蛋白的核苷酸序列。

在本发明的具体实施方式中，所述Prx1结合蛋白分别为TXN(Trx,SEQ ID NO.1)、ASK1(SEQ ID NO.2)、TPM3(SEQ ID NO.3)、CFL1(SEQ ID NO.4)、GTPBP4(SEQ ID NO.5)、DIRAS2(SEQ ID NO.6)、PPP2R1A(SEQ ID NO.7)蛋白中的一种或多种。这些蛋白能够与Prx1蛋白结合并相互作用，而Prx1蛋白的表达与多种肿瘤及细胞或组织病变的发生和发展存在相关性，本发明提供的具体实施方式中证明Prx1结合蛋白TXN、ASK1、TPM3、CFL1、GTPBP4、DIRAS2、PPP2R1A在口腔癌前病变细胞中的表达显著提高。

因此，本发明提供所述分子标记物在辅助诊断和/或防治组织病变或肿瘤中的应用。优选地，所述组织病变为口腔癌前病变，所述肿瘤为口腔癌，更优选地，所述口腔癌前病变为口腔白斑，所述口腔癌前病变和口腔癌为尼古丁诱导型。

Prx1蛋白在多种肿瘤及细胞或组织病变中呈现高水平表达，因此，Prx1蛋白结合物以及鉴定Prx1蛋白高表达细胞能够辅助诊断、治疗、预后和研究肿瘤及细胞或组织病变，对相关疾病的防治具有重要的指导意义。

所述防治组织病变或肿瘤为使用Prx1蛋白或Prx1结合蛋白的抑制剂和/或尼古丁中和剂或抑制剂。

因此，进一步地，本发明还提供了所述的分子标记物在制备Prx1蛋白结合物以及在标记、鉴定、富集、分选和/或纯化Prx1高表达细胞中的应用。

另一方面，本发明提供一种制剂，其包含所述的分子标记物。

其中，所述制剂可以为药物或分子标记制剂。

本领域技术人员应该理解，所述药物或分子标记制剂除包含所述分子标记物外，还可以根据需要包含其它辅料或载体。

本发明的有益效果在于：

(1)首次发现了多种Prx1蛋白的结合蛋白，其能够与Prx1蛋白有效结合，从而能够用于辅助诊断和/或防治组织病变或肿瘤；或用于制备Prx1蛋白结合物以及标记、鉴定、富集、分选和/或纯化Prx1高表达细胞。

(2)首次发现口腔癌前病变细胞中Prx1蛋白的结合蛋白的表达显著提高，且其表达受尼古丁的调控，从而能够用于辅助诊断和/或防治口腔癌前病变或口腔癌，尤其是尼古丁诱导的口腔癌前病变或口腔癌。

附图说明

图1为免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)结合SDS-PAGE检测结果。

图2为SDS-PAGE凝胶中提取的Prx1结合蛋白(其中一部分)的质谱鉴定结果。

图3为尼古丁处理组和未经处理组的Prx1结合蛋白的维恩图。

图4为尼古丁处理组和未经处理组共有的结合蛋白和尼古丁处理组特有的结合蛋白生物信息学分析流程示意图。

图5为GO-Analysis分析结果柱状图展示图，其中，图5A、图5B和图5C分别为尼古丁处理组独有的结合蛋白生物学过程、分子功能、细胞组分的GO分析结果，图5D、图5E和图5F为尼古丁处理组和未经处理组共有的结合蛋白生物学过程、分子功能、细胞组分的GO分析结果。

图6为Pathway分析结果，其中，图6A和图6B分别为尼古丁处理组独有的结合蛋白和尼古丁处理组和未经处理组共有的结合蛋白Pathway富集分析柱状图，图6C和图6D分别为尼古丁处理组独有的结合蛋白和尼古丁处理组及未经处理组共有的结合蛋白Pathway显著性水平柱状图。

图7为PPI network分析结果。

图8为对筛选出的结合蛋白采用免疫共沉淀进行验证结果，其中Input代表总蛋白组，IP代表免疫共沉淀组，IgG代表阴性对照组，+代表加入尼古丁处理，-代表未加尼古丁处理。

图9为采用HE染色对小鼠舌黏膜病变程度进行诊断并采用免疫组化染色(×200)检测ASK1、TXN、CFL1在各组小鼠黏膜中的表达，对各组间MOD值进行比较，其中A为小鼠舌黏膜不同病变程度HE染色示意图，B为ASK1免疫组化染色结果，C为TXN免疫组化染色结果，D为CFL1免疫组化染色结果。

图10为采用免疫组化染色(×200)检测PPP2R1A、TPM3、GTPBP4、DIRAS2在各组小鼠黏膜中的表达，对各组间MOD值进行比较，其中A为PPP2R1A免疫组化结果，B为TPM3免疫组化结果，C为GTPBP4免疫组化结果，D为DIRAS2免疫组化结果。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为本领域技术人员所掌握的常规实验操作。所用试剂若未特别说明，均为商业渠道购买获得。

实施例中所用到的主要研究方法包括利用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)结合质谱鉴定的方法分析未经处理和经1μmol/L尼古丁处理7天的DOK细胞中Prx1结合蛋白，分析出两组共有的结合蛋白和尼古丁处理组特有的结合蛋白，绘制维恩图，对以上结合蛋白进行生物信息学分析，包括GO分析、kegg pathway分析，PPI蛋白互作网络分析，筛选出的结合蛋白采用免疫共沉淀结合western blot检测的方法进行验证。利用申请人前期构建的动物模型标本，采用免疫组化实验方法从蛋白质水平检测验证出的结合蛋白在小鼠舌组织中的表达。

实施例中部分材料和试剂说明如下：

人口腔癌前病变细胞株DOK细胞(美国北卡罗来纳州中央大学陈晓欣教授惠赠)；高糖达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco’s modified Eagle’s medium，DMEM)、磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)、胎牛血清、青霉素及链霉素(Hyclone，美国)；0.25％胰蛋白酶(Gibco，美国)；尼古丁(wako，日本)；苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonylfluoride,PMSF)、蛋白酶抑制剂(protease inhibitorcocktail，PIC)、蛋白A琼脂糖珠(Sigma，美国)；Bradford法蛋白质定量试剂盒、封闭洗涤缓冲液、电泳缓冲液、β-肌动蛋白(β-actin)抗体(北京普利莱基因技术有限公司)；Prxl抗体(Abcam，美国)；TXN抗体(Abcam，美国)；ASK1抗体(Abcam，美国)；TPM3抗体(Abcam，美国)；CFL1抗体(Abcam，美国)；GTPBP4抗体(Abcam，美国)；DIRAS2抗体(Abcam，美国)；PPP2R1A抗体(Abcam，美国)；正常兔IgG(Santa Cruz，美国)；预制胶、转印包、脱脂牛奶粉、双色预染蛋白Marker(Bio-Rad.美国)；免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)裂解液、羊抗兔二抗、羊抗鼠二抗、Co-IP检测试剂、电化学发光液(Pierce，美国)；Cell Lysis Buffer(FNN0021,Life technologies)；100×蛋白酶抑制剂混合液(#11-10601,SinoGene)；Protein A/G-Agarose(A10001,Ab-mart)；粉剂型柠檬酸盐修复液、粉剂型PBS磷酸盐缓冲液，粉剂型柠檬酸盐抗原修复液、3％过氧化氢溶液、封闭用正常羊血清原液、通用型二抗、DAB显色液(迈新生物技术开发有限公司，福州)。

实施例1Prx1结合蛋白的初步鉴定

采用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)结合SDS-PAGE检测未经处理和经1μmol/L尼古丁处理7天的DOK细胞中的Prx1结合蛋白,具体操作如下：

(1)100mm的细胞培养皿放在冰上，用冷的PBS洗涤一次，倒掉PBS，加入1ml预冷的Lysis Buffer，用细胞刮铲刮掉细胞，收集细胞，转移到预冷的2ml离心管里。

(2)在步骤1)收集的细胞中加入10μl 100×蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂，在冰上放置40min，每10min涡旋一次。

(3)4℃，15300rpm离心40min，收集上清，得到可溶性全蛋白，冰上放置备用。

(4)准备细胞全蛋白，调整至1μg/μl，500μl，加入抗体(Ab)，放在15rpm的涡旋仪上，4℃孵育过夜。

(5)取50μl到beads一个1.5ml离心管里，加入1ml PBS，漂洗beads。

(6)3000rpm，离心，去除上清，重复漂洗2次，加入50μl PBS重新悬浮beads。

(7)把制备好的beads加入步骤2的蛋白+Ab的混合液里，放在15rpm的涡旋仪上，4度孵育4h。

(8)3000rpm，离心1min，去除上清，保留proteinA+G beads+Ab+protein，加入1mlPBS，漂洗复合物，保留proteinA+G beads+Ab+protein，PBS漂洗3遍。

(9)加入30μl 1xSDS-PAGE Loading Buffer到beads-Ab-Protein里，沸水煮样品10min，离心，转移上清到新的离心管。

(10)SDS-PAGE检测：IP上样15μl，首先90V电泳30min，后120V电泳2h，取下胶，考马斯亮蓝染色脱色分析。

实验结果：结合SDS-PAGE检测结果(图1)，标记为A的样品(尼古丁组)能看到5个明确的蛋白条带，标记为B(对照组)的样品，无明显蛋白条带，对尼古丁组和对照组中分离的结合蛋白进行质谱鉴定(图2)，分析出两组共有的结合蛋白和尼古丁处理组特有的结合蛋白，绘制维恩图(图3)。

实施例2采用生物信息学方法分析Prx1结合蛋白

对实施例1中检测得到的Prx1结合蛋白进行生物信息学分析，主要包括GO分析，kegg pathway分析，PPI蛋白互作网络分析(图4)。

(1)GO分析是基于基因注释数据库，检测差异基因显著功能的手段，具体说明如下。

①将尼古丁处理组特有的、两者共有的基因分别基于数据库分别从生物学过程、分子功能、细胞组分三个层面进行GO注释。

②将上述操作得到基因参与的所有GO，采用Fisher检验计算每个GO的显著性水平(P-Value)，从而筛选出基因富集的显著性GO。

③显著性的P-Value<0.05用灰白相间的表格标出。

实验结果：通过GO分析可以粗略了解差异基因富集在基因表达、多聚RNA结合以及外泌体方面，结果见图5。

(2)Pathway分析，是基于基因注释数据库，检测差异基因显著Pathway的手段,

①将尼古丁处理组独有的、两者共有的基因分别基于KEGG数据库进行Pathway注释。

②将得到基因参与的所有Pathway Term，采用Fisher检验计算Pathway的显著性水平(P-Value)，从而筛选出基因富集的显著性Pathway Term。

③显著性的P-Value<0.05用灰白相间的表格标出。

实验结果：通过Pathway分析，可以看出实验条件下显著改变的代谢通路为核糖体和三羧酸循环途径，具体结果见图6。

(3)KEGG是系统分析基因功能、基因组信息数据库，它有助于研究者把基因及表达信息作为一个整体网络进行研究，说明如下：

①将KEGG组分编号或KEGG的KO号输入KEGG数据库进行预测得到Keggmap。

②以并集基因为研究对象，将其参与的信号转导通路图片信息下载。

(4)PPI，是对蛋白与蛋白、基因与基因间相互作用关系网络构建的结果

①根据分析要求从两者共有的基因GO分析结果中选出与凋亡、侵袭相关的基因。

②以与凋亡、侵袭相关的基因为研究对象，通过NCBI数据库对蛋白互作关系进行检索分析，构建蛋白间互作关系网络。

实验结果：PPI分析结果见图7。

实施例3对筛选出的Prx1结合蛋白进行验证

主要包括两个方面：采用免疫共沉淀(Co-IP)结合Western Blot方法对筛选出的结合蛋白进行验证；采用免疫组化实验方法从蛋白质水平检测验证的结合蛋白在小鼠舌组织中的表达。

(1)采用Co-IP结合Western Blot方法对筛选出的结合蛋白进行验证Co-IP实验按如下步骤进行：

①用预冷的PBS洗细胞2次，刮刀收集细胞。

②加入1ml免疫共沉淀裂解液(含PMSF、PIC)，冰上裂解15min。

③4℃、14 000r/min(离心半径9.5cm)离心15min，取上清液。

④使用Bradford法蛋白质定量试剂盒测定蛋白浓度，留取25μg总蛋白。

⑤将剩余的上清液平均分为Prxl Co-IP组(IP组)和阴性对照组(IgG组)，IP组中加入0.5μg Prxl抗体，IgG组中加入0.5μg正常兔IgG，旋转摇床4℃过夜。

⑥加入40μl蛋白A琼脂糖珠，旋转摇床4℃孵育4h。

⑦6 000r/min(离心半径9.5cm)离心1min，去上清液。

⑧使用裂解液洗涤沉淀复合物3次，加入30ul 2倍蛋白上样缓冲液，95℃煮沸5min。

⑨4℃、14 000r/min(离心半径9.5cm)离心1min，取上清液，与留取的总蛋白一起进行蛋白质印迹法检测。

Western Blot实验按如下步骤进行：

①新鲜配制电泳液，将预制胶与固定板组装于电泳槽内。

②取25μg总蛋白和适量免疫共沉淀所得蛋白复合物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，电压80V，跑胶2h，半干转7min。

③取出聚偏氟乙烯(polyvinylidenefluorid，PVDF)膜，封闭洗涤缓冲液(Tris-HClTween，TBST)洗膜3次，每次5min。

④5％脱脂牛奶封闭1h。

⑤配制一抗(GTPBP4 1:2 000，DIRAS2 1:200，PPP2R1A 1:1 000，TPM3 1:1 000、TXN 1:500，CFL 1:1 000，ASK1 1:500，β-肌动蛋白：1:1 000，Prxl：1:5 000)4℃摇床孵育过夜，TBST洗膜3次，每次5min。

⑥配制工作浓度的二抗(1:5000)，室温摇床孵育1h，TBST洗膜3次，每次10min。

⑦新鲜配制发光液，暗室显影。

实验结果：尼古丁对DOK细胞中TXN、ASK1、TPM3、CFL、GTPBP4、DIRAS2、PPP2R1A和Prxl蛋白结合的影响；Co-IP结果显示，对照组和尼古丁组DOK细胞中TXN、ASK1、TPM3、CFL、GTPBP4、DIRAS2、PPP2R1A与Prxl蛋白均存在结合，尼古丁组结合量高于对照组(图8)。

(2)采用免疫组化法检测结合蛋白在小鼠舌白斑组织中的表达

课题组前期构建了Prx1基因敲除小鼠，采用4NQO饮水法在野生型小鼠和敲除型小鼠舌部建立了口腔白斑模型，并通过涂抹尼古丁的方式模拟吸烟刺激，实验共分为6组，即野生型对照组、4NQO组、4NQO+尼古丁组，敲除型对照组、4NQO组、4NQO+尼古丁组。本实验使用课题组前期建立的口腔白斑动物模型舌组织标本进行后续实验。采用免疫组化实验从蛋白质水平检测上述各组小鼠舌组织中结合蛋白的表达情况。

免疫组化实验方法实验按如下步骤进行：

①将组织切片放在60℃恒温箱中烘烤60分钟。

②分别置于二甲苯I、Ⅱ、III中浸泡10min，无水乙醇I、Ⅱ中浸泡5min，95％乙醇I、Ⅱ中浸泡5min。PBS洗三次，每次5min。

③微波热修复：将组织切片置于柠檬酸钠抗原修复液微波炉中高火处理4min，中火处理6min，自然晾至室温。

④滴加过氧化氢，湿盒内室温孵育15min，PBS洗三次，每次5min。

⑤滴加10％山羊血清封闭液,湿盒内37℃孵育30min。

⑥甩去多余液体滴加一抗,湿盒内4℃过夜。PBS洗三次，每次5min。

⑦滴加生物素化二抗，湿盒内室温孵育30min，PBS洗3次每次5min。

⑧DAB显色，苏木素复染。

⑨脱水、透明、封片、镜检。

实验结果：结果表明与对照组相比，舌口腔白斑中TXN、ASK1、TPM3、CFL1、GTPBP4、DIRAS2、PPP2R1A的表达均升高；尼古丁可促进舌口腔白斑中TXN、TPM3、CFL1、GTPBP4、DIRAS2的表达，抑制ASK1、PPP2R1A的表达，差异有统计学意义；Prx1敲除导致小鼠舌口腔白斑中ASK1、PPP2R1A、CFL1的表达明显升高，TXN、GTPBP4、DIRAS2的表达明显降低，提示所筛选出的Prx1结合蛋白在口腔白斑发生发展中发挥重要作用。具体结果见图9、图10。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 首都医科大学附属北京口腔医院

<120> 过氧化物还原酶1结合蛋白及其应用

<130> KHP181112281.5

<160> 14

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Met Val Lys Gln Ile Glu Ser Lys Thr Ala Phe Gln Glu Ala Leu Asp

1 5 10 15

Ala Ala Gly Asp Lys Leu Val Val Val Asp Phe Ser Ala Thr Trp Cys

20 25 30

Gly Pro Cys Lys Met Ile Lys Pro Phe Phe His Ser Leu Ser Glu Lys

35 40 45

Tyr Ser Asn Val Ile Phe Leu Glu Val Asp Val Asp Asp Cys Gln Asp

50 55 60

Val Ala Ser Glu Cys Glu Val Lys Cys Met Pro Thr Phe Gln Phe Phe

65 70 75 80

Lys Lys Gly Gln Lys Val Gly Glu Phe Ser Gly Ala Asn Lys Glu Lys

85 90 95

Leu Glu Ala Thr Ile Asn Glu Leu Val

100 105

<210> 2

<211> 1374

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Met Ser Thr Glu Ala Asp Glu Gly Ile Thr Phe Ser Val Pro Pro Phe

1 5 10 15

Ala Pro Ser Gly Phe Cys Thr Ile Pro Glu Gly Gly Ile Cys Arg Arg

20 25 30

Gly Gly Ala Ala Ala Val Gly Glu Gly Glu Glu His Gln Leu Pro Pro

35 40 45

Pro Pro Pro Gly Ser Phe Trp Asn Val Glu Ser Ala Ala Ala Pro Gly

50 55 60

Ile Gly Cys Pro Ala Ala Thr Ser Ser Ser Ser Ala Thr Arg Gly Arg

65 70 75 80

Gly Ser Ser Val Gly Gly Gly Ser Arg Arg Thr Thr Val Ala Tyr Val

85 90 95

Ile Asn Glu Ala Ser Gln Gly Gln Leu Val Val Ala Glu Ser Glu Ala

100 105 110

Leu Gln Ser Leu Arg Glu Ala Cys Glu Thr Val Gly Ala Thr Leu Glu

115 120 125

Thr Leu His Phe Gly Lys Leu Asp Phe Gly Glu Thr Thr Val Leu Asp

130 135 140

Arg Phe Tyr Asn Ala Asp Ile Ala Val Val Glu Met Ser Asp Ala Phe

145 150 155 160

Arg Gln Pro Ser Leu Phe Tyr His Leu Gly Val Arg Glu Ser Phe Ser

165 170 175

Met Ala Asn Asn Ile Ile Leu Tyr Cys Asp Thr Asn Ser Asp Ser Leu

180 185 190

Gln Ser Leu Lys Glu Ile Ile Cys Gln Lys Asn Thr Met Cys Thr Gly

195 200 205

Asn Tyr Thr Phe Val Pro Tyr Met Ile Thr Pro His Asn Lys Val Tyr

210 215 220

Cys Cys Asp Ser Ser Phe Met Lys Gly Leu Thr Glu Leu Met Gln Pro

225 230 235 240

Asn Phe Glu Leu Leu Leu Gly Pro Ile Cys Leu Pro Leu Val Asp Arg

245 250 255

Phe Ile Gln Leu Leu Lys Val Ala Gln Ala Ser Ser Ser Gln Tyr Phe

260 265 270

Arg Glu Ser Ile Leu Asn Asp Ile Arg Lys Ala Arg Asn Leu Tyr Thr

275 280 285

Gly Lys Glu Leu Ala Ala Glu Leu Ala Arg Ile Arg Gln Arg Val Asp

290 295 300

Asn Ile Glu Val Leu Thr Ala Asp Ile Val Ile Asn Leu Leu Leu Ser

305 310 315 320

Tyr Arg Asp Ile Gln Asp Tyr Asp Ser Ile Val Lys Leu Val Glu Thr

325 330 335

Leu Glu Lys Leu Pro Thr Phe Asp Leu Ala Ser His His His Val Lys

340 345 350

Phe His Tyr Ala Phe Ala Leu Asn Arg Arg Asn Leu Pro Gly Asp Arg

355 360 365

Ala Lys Ala Leu Asp Ile Met Ile Pro Met Val Gln Ser Glu Gly Gln

370 375 380

Val Ala Ser Asp Met Tyr Cys Leu Val Gly Arg Ile Tyr Lys Asp Met

385 390 395 400

Phe Leu Asp Ser Asn Phe Thr Asp Thr Glu Ser Arg Asp His Gly Ala

405 410 415

Ser Trp Phe Lys Lys Ala Phe Glu Ser Glu Pro Thr Leu Gln Ser Gly

420 425 430

Ile Asn Tyr Ala Val Leu Leu Leu Ala Ala Gly His Gln Phe Glu Ser

435 440 445

Ser Phe Glu Leu Arg Lys Val Gly Val Lys Leu Ser Ser Leu Leu Gly

450 455 460

Lys Lys Gly Asn Leu Glu Lys Leu Gln Ser Tyr Trp Glu Val Gly Phe

465 470 475 480

Phe Leu Gly Ala Ser Val Leu Ala Asn Asp His Met Arg Val Ile Gln

485 490 495

Ala Ser Glu Lys Leu Phe Lys Leu Lys Thr Pro Ala Trp Tyr Leu Lys

500 505 510

Ser Ile Val Glu Thr Ile Leu Ile Tyr Lys His Phe Val Lys Leu Thr

515 520 525

Thr Glu Gln Pro Val Ala Lys Gln Glu Leu Val Asp Phe Trp Met Asp

530 535 540

Phe Leu Val Glu Ala Thr Lys Thr Asp Val Thr Val Val Arg Phe Pro

545 550 555 560

Val Leu Ile Leu Glu Pro Thr Lys Ile Tyr Gln Pro Ser Tyr Leu Ser

565 570 575

Ile Asn Asn Glu Val Glu Glu Lys Thr Ile Ser Ile Trp His Val Leu

580 585 590

Pro Asp Asp Lys Lys Gly Ile His Glu Trp Asn Phe Ser Ala Ser Ser

595 600 605

Val Arg Gly Val Ser Ile Ser Lys Phe Glu Glu Arg Cys Cys Phe Leu

610 615 620

Tyr Val Leu His Asn Ser Asp Asp Phe Gln Ile Tyr Phe Cys Thr Glu

625 630 635 640

Leu His Cys Lys Lys Phe Phe Glu Met Val Asn Thr Ile Thr Glu Glu

645 650 655

Lys Gly Arg Ser Thr Glu Glu Gly Asp Cys Glu Ser Asp Leu Leu Glu

660 665 670

Tyr Asp Tyr Glu Tyr Asp Glu Asn Gly Asp Arg Val Val Leu Gly Lys

675 680 685

Gly Thr Tyr Gly Ile Val Tyr Ala Gly Arg Asp Leu Ser Asn Gln Val

690 695 700

Arg Ile Ala Ile Lys Glu Ile Pro Glu Arg Asp Ser Arg Tyr Ser Gln

705 710 715 720

Pro Leu His Glu Glu Ile Ala Leu His Lys His Leu Lys His Lys Asn

725 730 735

Ile Val Gln Tyr Leu Gly Ser Phe Ser Glu Asn Gly Phe Ile Lys Ile

740 745 750

Phe Met Glu Gln Val Pro Gly Gly Ser Leu Ser Ala Leu Leu Arg Ser

755 760 765

Lys Trp Gly Pro Leu Lys Asp Asn Glu Gln Thr Ile Gly Phe Tyr Thr

770 775 780

Lys Gln Ile Leu Glu Gly Leu Lys Tyr Leu His Asp Asn Gln Ile Val

785 790 795 800

His Arg Asp Ile Lys Gly Asp Asn Val Leu Ile Asn Thr Tyr Ser Gly

805 810 815

Val Leu Lys Ile Ser Asp Phe Gly Thr Ser Lys Arg Leu Ala Gly Ile

820 825 830

Asn Pro Cys Thr Glu Thr Phe Thr Gly Thr Leu Gln Tyr Met Ala Pro

835 840 845

Glu Ile Ile Asp Lys Gly Pro Arg Gly Tyr Gly Lys Ala Ala Asp Ile

850 855 860

Trp Ser Leu Gly Cys Thr Ile Ile Glu Met Ala Thr Gly Lys Pro Pro

865 870 875 880

Phe Tyr Glu Leu Gly Glu Pro Gln Ala Ala Met Phe Lys Val Gly Met

885 890 895

Phe Lys Val His Pro Glu Ile Pro Glu Ser Met Ser Ala Glu Ala Lys

900 905 910

Ala Phe Ile Leu Lys Cys Phe Glu Pro Asp Pro Asp Lys Arg Ala Cys

915 920 925

Ala Asn Asp Leu Leu Val Asp Glu Phe Leu Lys Val Ser Ser Lys Lys

930 935 940

Lys Lys Thr Gln Pro Lys Leu Ser Ala Leu Ser Ala Gly Ser Asn Glu

945 950 955 960

Tyr Leu Arg Ser Ile Ser Leu Pro Val Pro Val Leu Val Glu Asp Thr

965 970 975

Ser Ser Ser Ser Glu Tyr Gly Ser Val Ser Pro Asp Thr Glu Leu Lys

980 985 990

Val Asp Pro Phe Ser Phe Lys Thr Arg Ala Lys Ser Cys Gly Glu Arg

995 1000 1005

Asp Val Lys Gly Ile Arg Thr Leu Phe Leu Gly Ile Pro Asp Glu Asn

1010 1015 1020

Phe Glu Asp His Ser Ala Pro Pro Ser Pro Glu Glu Lys Asp Ser Gly

1025 1030 1035 1040

Phe Phe Met Leu Arg Lys Asp Ser Glu Arg Arg Ala Thr Leu His Arg

1045 1050 1055

Ile Leu Thr Glu Asp Gln Asp Lys Ile Val Arg Asn Leu Met Glu Ser

1060 1065 1070

Leu Ala Gln Gly Ala Glu Glu Pro Lys Leu Lys Trp Glu His Ile Thr

1075 1080 1085

Thr Leu Ile Ala Ser Leu Arg Glu Phe Val Arg Ser Thr Asp Arg Lys

1090 1095 1100

Ile Ile Ala Thr Thr Leu Ser Lys Leu Lys Leu Glu Leu Asp Phe Asp

1105 1110 1115 1120

Ser His Gly Ile Ser Gln Val Gln Val Val Leu Phe Gly Phe Gln Asp

1125 1130 1135

Ala Val Asn Lys Val Leu Arg Asn His Asn Ile Lys Pro His Trp Met

1140 1145 1150

Phe Ala Leu Asp Ser Ile Ile Arg Lys Ala Val Gln Thr Ala Ile Thr

1155 1160 1165

Ile Leu Val Pro Glu Leu Arg Pro His Phe Ser Leu Ala Ser Glu Ser

1170 1175 1180

Asp Thr Ala Asp Gln Glu Asp Leu Asp Val Glu Asp Asp His Glu Glu

1185 1190 1195 1200

Gln Pro Ser Asn Gln Thr Val Arg Arg Pro Gln Ala Val Ile Glu Asp

1205 1210 1215

Ala Val Ala Thr Ser Gly Val Ser Thr Leu Ser Ser Thr Val Ser His

1220 1225 1230

Asp Ser Gln Ser Ala His Arg Ser Leu Asn Val Gln Leu Gly Arg Met

1235 1240 1245

Lys Ile Glu Thr Asn Arg Leu Leu Glu Glu Leu Val Arg Lys Glu Lys

1250 1255 1260

Glu Leu Gln Ala Leu Leu His Arg Ala Ile Glu Glu Lys Asp Gln Glu

1265 1270 1275 1280

Ile Lys His Leu Lys Leu Lys Ser Gln Pro Ile Glu Ile Pro Glu Leu

1285 1290 1295

Pro Val Phe His Leu Asn Ser Ser Gly Thr Asn Thr Glu Asp Ser Glu

1300 1305 1310

Leu Thr Asp Trp Leu Arg Val Asn Gly Ala Asp Glu Asp Thr Ile Ser

1315 1320 1325

Arg Phe Leu Ala Glu Asp Tyr Thr Leu Leu Asp Val Leu Tyr Tyr Val

1330 1335 1340

Thr Arg Asp Asp Leu Lys Cys Leu Arg Leu Arg Gly Gly Met Leu Cys

1345 1350 1355 1360

Thr Leu Trp Lys Ala Ile Ile Asp Phe Arg Asn Lys Gln Thr

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<210> 3

<211> 248

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Met Ala Gly Ile Thr Thr Ile Glu Ala Val Lys Arg Lys Ile Gln Val

1 5 10 15

Leu Gln Gln Gln Ala Asp Asp Ala Glu Glu Arg Ala Glu Arg Leu Gln

20 25 30

Arg Glu Val Glu Gly Glu Arg Arg Ala Arg Glu Gln Ala Glu Ala Glu

35 40 45

Val Ala Ser Leu Asn Arg Arg Ile Gln Leu Val Glu Glu Glu Leu Asp

50 55 60

Arg Ala Gln Glu Arg Leu Ala Thr Ala Leu Gln Lys Leu Glu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Lys Ala Ala Asp Glu Ser Glu Arg Gly Met Lys Val Ile Glu Asn

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Arg Ala Leu Lys Asp Glu Glu Lys Met Glu Leu Gln Glu Ile Gln Leu

100 105 110

Lys Glu Ala Lys His Ile Ala Glu Glu Ala Asp Arg Lys Tyr Glu Glu

115 120 125

Val Ala Arg Lys Leu Val Ile Ile Glu Gly Asp Leu Glu Arg Thr Glu

130 135 140

Glu Arg Ala Glu Leu Ala Glu Ser Lys Cys Ser Glu Leu Glu Glu Glu

145 150 155 160

Leu Lys Asn Val Thr Asn Asn Leu Lys Ser Leu Glu Ala Gln Ala Glu

165 170 175

Lys Tyr Ser Gln Lys Glu Asp Lys Tyr Glu Glu Glu Ile Lys Ile Leu

180 185 190

Thr Asp Lys Leu Lys Glu Ala Glu Thr Arg Ala Glu Phe Ala Glu Arg

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Ser Val Ala Lys Leu Glu Lys Thr Ile Asp Asp Leu Glu Asp Lys Leu

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245

<210> 4

<211> 166

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

Met Ala Ser Gly Val Ala Val Ser Asp Gly Val Ile Lys Val Phe Asn

1 5 10 15

Asp Met Lys Val Arg Lys Ser Ser Thr Pro Glu Glu Val Lys Lys Arg

20 25 30

Lys Lys Ala Val Leu Phe Cys Leu Ser Glu Asp Lys Lys Asn Ile Ile

35 40 45

Leu Glu Glu Gly Lys Glu Ile Leu Val Gly Asp Val Gly Gln Thr Val

50 55 60

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130 135 140

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165

<210> 5

<211> 634

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

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1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

Arg Lys Val Lys Phe Thr Gln Gln Asn Tyr His Asp Arg Leu Ser Gln

50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

Leu Lys Arg Ala Ala Leu Gly Arg Met Cys Thr Val Ile Lys Arg Gln

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145 150 155 160

Leu Pro Thr Ile Asp Pro Asn Thr Arg Thr Leu Leu Leu Cys Gly Tyr

165 170 175

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180 185 190

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His Met Asp Tyr Lys Tyr Leu Arg Trp Gln Val Val Asp Thr Pro Gly

210 215 220

Ile Leu Asp His Pro Leu Glu Asp Arg Asn Thr Ile Glu Met Gln Ala

225 230 235 240

Ile Thr Ala Leu Ala His Leu Arg Ala Ala Val Leu Tyr Val Met Asp

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465 470 475 480

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530 535 540

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<211> 199

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

Met Pro Glu Gln Ser Asn Asp Tyr Arg Val Ala Val Phe Gly Ala Gly

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Gly Val Gly Lys Ser Ser Leu Val Leu Arg Phe Val Lys Gly Thr Phe

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Arg Glu Ser Tyr Ile Pro Thr Val Glu Asp Thr Tyr Arg Gln Val Ile

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Ser Cys Asp Lys Ser Ile Cys Thr Leu Gln Ile Thr Asp Thr Thr Gly

50 55 60

Ser His Gln Phe Pro Ala Met Gln Arg Leu Ser Ile Ser Lys Gly His

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<212> PRT

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<400> 7

Met Ala Ala Ala Asp Gly Asp Asp Ser Leu Tyr Pro Ile Ala Val Leu

1 5 10 15

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Lys Lys Leu Ser Thr Ile Ala Leu Ala Leu Gly Val Glu Arg Thr Arg

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Val Leu Leu Ala Leu Ala Glu Gln Leu Gly Thr Phe Thr Thr Leu Val

65 70 75 80

Gly Gly Pro Glu Tyr Val His Cys Leu Leu Pro Pro Leu Glu Ser Leu

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100 105 110

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115 120 125

Val Pro Leu Val Lys Arg Leu Ala Gly Gly Asp Trp Phe Thr Ser Arg

130 135 140

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145 150 155 160

Ala Val Lys Ala Glu Leu Arg Gln Tyr Phe Arg Asn Leu Cys Ser Asp

165 170 175

Asp Thr Pro Met Val Arg Arg Ala Ala Ala Ser Lys Leu Gly Glu Phe

180 185 190

Ala Lys Val Leu Glu Leu Asp Asn Val Lys Ser Glu Ile Ile Pro Met

195 200 205

Phe Ser Asn Leu Ala Ser Asp Glu Gln Asp Ser Val Arg Leu Leu Ala

210 215 220

Val Glu Ala Cys Val Asn Ile Ala Gln Leu Leu Pro Gln Glu Asp Leu

225 230 235 240

Glu Ala Leu Val Met Pro Thr Leu Arg Gln Ala Ala Glu Asp Lys Ser

245 250 255

Trp Arg Val Arg Tyr Met Val Ala Asp Lys Phe Thr Glu Leu Gln Lys

260 265 270

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275 280 285

Asn Leu Met Lys Asp Cys Glu Ala Glu Val Arg Ala Ala Ala Ser His

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Lys Val Lys Glu Phe Cys Glu Asn Leu Ser Ala Asp Cys Arg Glu Asn

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Ser Pro Ile Leu Gly Lys Asp Asn Thr Ile Glu His Leu Leu Pro Leu

355 360 365

Phe Leu Ala Gln Leu Lys Asp Glu Cys Pro Glu Val Arg Leu Asn Ile

370 375 380

Ile Ser Asn Leu Asp Cys Val Asn Glu Val Ile Gly Ile Arg Gln Leu

385 390 395 400

Ser Gln Ser Leu Leu Pro Ala Ile Val Glu Leu Ala Glu Asp Ala Lys

405 410 415

Trp Arg Val Arg Leu Ala Ile Ile Glu Tyr Met Pro Leu Leu Ala Gly

420 425 430

Gln Leu Gly Val Glu Phe Phe Asp Glu Lys Leu Asn Ser Leu Cys Met

435 440 445

Ala Trp Leu Val Asp His Val Tyr Ala Ile Arg Glu Ala Ala Thr Ser

450 455 460

Asn Leu Lys Lys Leu Val Glu Lys Phe Gly Lys Glu Trp Ala His Ala

465 470 475 480

Thr Ile Ile Pro Lys Val Leu Ala Met Ser Gly Asp Pro Asn Tyr Leu

485 490 495

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Gly Gln Asp Ile Thr Thr Lys His Met Leu Pro Thr Val Leu Arg Met

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Ala Gly Asp Pro Val Ala Asn Val Arg Phe Asn Val Ala Lys Ser Leu

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Gln Lys Ile Gly Pro Ile Leu Asp Asn Ser Thr Leu Gln Ser Glu Val

545 550 555 560

Lys Pro Ile Leu Glu Lys Leu Thr Gln Asp Gln Asp Val Asp Val Lys

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580 585

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<211> 886

<212> DNA

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<400> 8

ctcgcaggct ccaggggcgg ggcgtggccg gggcgcagcg acgggcgcgg aggtccggcc 60

gggcgcgcgc gcccccgcca cacgcacgcc gggcgtgcca gtttataaag ggagagagca 120

agcagcgagt cttgaagctc tgtttggtgc tttggatcca tttccatcgg tccttacagc 180

cgctcgtcag actccagcag ccaagatggt gaagcagatc gagagcaaga ctgcttttca 240

ggaagccttg gacgctgcag gtgataaact tgtagtagtt gacttctcag ccacgtggtg 300

tgggccttgc aaaatgatca agcctttctt tcattccctc tctgaaaagt attccaacgt 360

gatattcctt gaagtagatg tggatgactg tcaggatgtt gcttcagagt gtgaagtcaa 420

atgcatgcca acattccagt tttttaagaa gggacaaaag gtgggtgaat tttctggagc 480

caataaggaa aagcttgaag ccaccattaa tgaattagtc taatcatgtt ttctgaaaat 540

ataaccagcc attggctatt taaaacttgt aattttttta atttacaaaa atataaaata 600

tgaagacata aacccagttg ccatctgcgt gacaataaaa cattaatgct aacacttttt 660

aaaaccgtct catgtctgaa tagctttcaa aataaatgtg aaatggtcat ttaatgtatt 720

ttcctatatt ctcaatcact ttttagtaac cttgtaggcc actgattatt ttaagatttt 780

aaaaattatt attgctacct taatgtattg ctacaaaaat ctcttgttgg gggcaatgca 840

ggtaataaag tagtatgttg ttatttgtaa aaaaaaaaaa aaaaaa 886

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

cgagcgcggc gcccttgagc tgcaccgcgg cgcaggtttg cgagccgact tgtcagccgg 60

ccaagaaaag gaagctccgt cccttcccgc tcacccggct tccccacccc ttgtactcta 120

aactctgcag agggcgagcg gcgcggccac ggaggcgccg aggaggagcg agccgccgcc 180

gggcagcggc gtgccctcgg gggagagggc gccggagagg aggcggcggc gcggcggcga 240

gggcgcggcg cgcgatggca gctgcttagc ccggcgggcg cggagcagcc ccgagctgtg 300

gctggccagg cggtgcggct gggcggggga cgccgccgcc gttgctgccc ggcccggaga 360

gatgagcacg gaggcggacg agggcatcac tttctctgtg ccacccttcg ccccctcggg 420

cttctgcacc atccccgagg gcggcatctg caggagggga ggagcggcgg cggtgggcga 480

gggcgaggag caccagctgc caccgccgcc gccgggcagc ttctggaacg tggagagcgc 540

cgctgcccct ggcatcggtt gtccggcggc cacctcctcg agcagtgcca cccgaggccg 600

gggcagctct gttggcgggg gcagccgacg gaccacggtg gcatatgtga tcaacgaagc 660

gagccaaggg caactggtgg tggccgagag cgaggccctg cagagcttgc gggaggcgtg 720

cgagacagtg ggcgccaccc tggaaaccct gcattttggg aaactcgact ttggagaaac 780

caccgtgctg gaccgctttt acaatgcaga tattgcggtg gtggagatga gcgatgcctt 840

ccggcagccg tccttgtttt accaccttgg ggtgagagaa agtttcagca tggccaacaa 900

catcatcctc tactgtgata ctaactcgga ctctctgcag tcactgaagg aaataatttg 960

ccagaagaat actatgtgca ctgggaacta cacctttgtt ccttacatga taactccaca 1020

taacaaagtc tactgctgtg acagcagctt catgaagggg ttgacagagc tcatgcaacc 1080

gaacttcgag ctgcttcttg gacccatctg cttacctctt gtggatcgtt ttattcaact 1140

tttgaaggtg gcacaagcaa gttctagcca gtacttccgg gaatctatac tcaatgacat 1200

caggaaagct cgtaatttat acactggtaa agaattggca gctgagttgg caagaattcg 1260

gcagcgagta gataatatcg aagtcttgac agcagatatt gtcataaatc tgttactttc 1320

ctacagagat atccaggact atgattctat tgtgaagctg gtagagactt tagaaaaact 1380

gccaaccttt gatttggcct cccatcacca tgtgaagttt cattatgcat ttgcactgaa 1440

taggagaaat ctccctggtg acagagcaaa agctcttgat attatgattc ccatggtgca 1500

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gtttttggac tctaatttca cggacactga aagcagagac catggagctt cttggttcaa 1620

aaaggcattt gaatctgagc caacactaca gtcaggaatt aattatgcgg tcctcctcct 1680

ggcagctgga caccagtttg aatcttcctt tgagctccgg aaagttgggg tgaagctaag 1740

tagtcttctt ggtaaaaagg gaaacttgga aaaactccag agctactggg aagttggatt 1800

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agtattaata ttagaaccaa ccaaaatcta tcaaccttct tatttgtcta tcaacaatga 2100

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acttcattgt aaaaagtttt ttgagatggt gaacaccatt accgaagaga aggggagaag 2340

cacagaggaa ggagactgtg aaagtgactt gctggagtat gactatgaat atgatgaaaa 2400

tggtgacaga gtcgttttag gaaaaggcac ttatgggata gtctacgcag gtcgggactt 2460

gagcaaccaa gtcagaattg ctattaagga aatcccagag agagacagca gatactctca 2520

gcccctgcat gaagaaatag cattgcataa acacctgaag cacaaaaata ttgtccagta 2580

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aagtctttct gctctccttc gttccaaatg gggtccatta aaagacaatg agcaaacaat 2700

tggcttttat acaaagcaaa tactggaagg attaaaatat ctccatgaca atcagatagt 2760

tcaccgggac ataaagggtg acaatgtgtt gattaatacc tacagtggtg ttctcaagat 2820

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agcagcagac atctggtctc tgggctgtac aatcattgaa atggccacag gaaaaccccc 3000

attttatgaa ctgggagaac cacaagcagc tatgttcaag gtgggaatgt ttaaagtcca 3060

ccctgagatc ccagagtcca tgtctgcaga ggccaaggca ttcatactga aatgttttga 3120

accagatcct gacaagagag cctgtgctaa cgacttgctt gttgatgagt ttttaaaagt 3180

ttcaagcaaa aagaaaaaga cacaacctaa gctttcagct ctttcagctg gatcaaatga 3240

atatctcagg agtatatcct tgccggtacc tgtgctggtg gaggacacca gcagcagcag 3300

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tccagatgag aattttgaag atcacagtgc tcctccttcc cctgaagaaa aagattctgg 3480

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agaccaagac aaaattgtga gaaacctaat ggaatcttta gctcaggggg ctgaagaacc 3600

gaaactaaaa tgggaacaca tcacaaccct cattgcaagc ctcagagaat ttgtgagatc 3660

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<210> 10

<211> 3212

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

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<400> 11

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<210> 12

<211> 2537

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

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<210> 13

<211> 4386

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

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gcatagcagt ttttgaccca ggcagaataa gttaatattt aattaaatat tgctttgaag 3720

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cctccatcca gcgacaagcc atgggcatgc atacaatgca gcaagaccaa cacaagagca 3840

atattgaatt gttcattcta tctaaaatta catgtatata aaatatataa tttatcttcc 3900

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taaaaattgc tctgtgatac ttaatttttt tccccaaaat ttgtaatgtg ttgcttctac 4080

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ctggaattca taccccacaa ggacagtgtg tatacaaagt atttgcagag catgactttt 4200

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<211> 2519

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<400> 14

aatcttggtc gctaggacac ggctaacttc cgctttcttc cccctctcct aggctcaaac 60

tagtcaaatc ttgttcactc gaccaatggc aaatcggaag tgggcgggac ttcacaagtc 120

cggaccaaag aaacgcgagc ttagccctgg gtagcgcggc caatggccgt ggagcagccc 180

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gcgggccgca gcctccaagc tgggggagtt tgccaaggtg ctggagctgg acaacgtcaa 900

gagtgagatc atccccatgt tctccaacct ggcctctgac gagcaggact cggtgcggct 960

gctggcggtg gaggcgtgcg tgaacatcgc ccagcttctg ccccaggagg atctggaggc 1020

cctggtgatg cccactctgc gccaggccgc tgaagacaag tcctggcgcg tccgctacat 1080

ggtggctgac aagttcacag agctccagaa agcagtgggg cctgagatca ccaagacaga 1140

cctggtccct gccttccaga acctgatgaa agactgtgag gccgaggtga gggccgcagc 1200

ctcccacaag gtcaaagagt tctgtgaaaa cctctcagct gactgtcggg agaatgtgat 1260

catgtcccag atcttgccct gcatcaagga gctggtgtcc gatgccaacc aacatgtcaa 1320

gtctgccctg gcctcagtca tcatgggtct ctctcccatc ttgggcaaag acaacaccat 1380

cgagcacctc ttgcccctct tcctggctca gctgaaggat gagtgccctg aggtacggct 1440

gaacatcatc tctaacctgg actgtgtgaa cgaggtgatt ggcatccggc agctgtccca 1500

gtccctgctc cctgccattg tggagctggc tgaggacgcc aagtggcggg tgcggctggc 1560

catcattgag tacatgcccc tcctggctgg acagctggga gtggagttct ttgatgagaa 1620

acttaactcc ttgtgcatgg cctggcttgt ggatcatgta tatgccatcc gcgaggcagc 1680

caccagcaac ctgaagaagc tagtggaaaa gtttgggaag gagtgggccc atgccacaat 1740

catccccaag gtcttggcca tgtccggaga ccccaactac ctgcaccgca tgactacgct 1800

cttctgcatc aatgtgctgt ctgaggtctg tgggcaggac atcaccacca agcacatgct 1860

acccacggtt ctgcgcatgg ctggggaccc ggttgccaat gtccgcttca atgtggccaa 1920

gtctctgcag aagatagggc ccatcctgga caacagcacc ttgcagagtg aagtcaagcc 1980

catcctagag aagctgaccc aggaccagga tgtggacgtc aaatactttg cccaggaggc 2040

tctgactgtt ctgtctctcg cctgatgctg gaagaggagc aaacactggc ctctggtgtc 2100

caccctccaa cccccacaag tccctctttg gggagacact ggggggcctt tggctgtcac 2160

tccctgtgca tggtctgacc ccaggcccct tcccccagca cggttcctcc tctccccagc 2220

ctgggaagat gtctcactgt ccacctccca acgggctagg ggagcacggg gttggacagg 2280

acagtgacct tgggaggaag gggctactcc gcccacgtca gggagagatg tgagcatccc 2340

gggtcactgg atcctgctgc tgtaatggga acccctcccc catttacttc tccacctccc 2400

gtcctcccca tcattggttt ttttttgtgt gtcaactgtg ccgtttttat tttattcctt 2460

ttattttccc ccttttcaca gagaaataaa ggtctagaag tagttggtca aaaaaaaaa 2519

Claims

1.一种分子标记物，其特征在于，包含Prx1结合蛋白的一种或多种，所述Prx1结合蛋白为具有如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列或如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列经替换、缺失或插入一个或多个氨基酸得到的具有相同功能蛋白的氨基酸序列。

2.编码权利要求1所述的分子标记物的基因。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，其具有如下任意一种核苷酸序列：

(1)具有如SEQ ID NO.8～SEQ ID NO.14示的核苷酸序列；

4.权利要求1所述的分子标记物或权利要求2或3所述的基因在辅助诊断和/或防治组织病变或肿瘤中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述组织病变为口腔癌前病变，优选为口腔白斑；所述肿瘤为口腔癌。

6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述防治组织病变或肿瘤为使用Prx1蛋白或Prx1结合蛋白的抑制剂和/或尼古丁中和剂或抑制剂。

7.权利要求1所述的分子标记物或权利要求2或3所述的基因在制备Prx1蛋白结合物中的应用。

8.权利要求1所述的分子标记物或权利要求2或3所述的基因在标记、鉴定、富集、分选和/或纯化Prx1高表达细胞中的应用。

9.一种包含权利要求1所述的分子标记物或权利要求2或3所述的基因的制剂。

10.根据权利要求9所述的制剂，其特征在于，其为药物或分子标记制剂。