CN108948016A

CN108948016A - 嘌呤酮类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用

Info

Publication number: CN108948016A
Application number: CN201810477603.9A
Authority: CN
Inventors: 张国宝; 费洪博; 贺峰; 陶维康
Original assignee: Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2017-05-19
Filing date: 2018-05-18
Publication date: 2018-12-07
Anticipated expiration: 2038-05-18
Also published as: CN108948016B

Abstract

本发明涉及嘌呤酮类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。具体而言，本发明涉及一种通式(I)所示的新的嘌呤酮类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂，特别是作为TLR7激动剂的用途，其中通式(I)的各取代基与说明书中的定义相同。

Description

嘌呤酮类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种通式(I)所示的新的嘌呤酮类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂，特别是作为TLR7激动剂的用途。

背景技术

Toll样受体(toll-like receptors；TLRs)是参与先天免疫的一类重要蛋白质分子。TLRs是单体跨膜的非催化性受体，通常在岗哨细胞如巨噬细胞和树突状细胞中表达，可以识别由微生物产生的结构保守的分子。一旦这些微生物突破如皮肤或肠道粘膜的物理屏障，就会被TLRs识别，继而激活免疫细胞应答(Mahla,R S.等人,Front Immunol.4:248(2013))。免疫系统之所以具有广泛识别病原微生物的能力，某种程度上是由于Toll样免疫受体的广泛存在。

在哺乳动物中至少有10种不同的TLRs。一些此类受体的配体和相应的信号级联放大已经被鉴定出。TLR7是TLRs(TLRs 3、7、8和9)亚组的成员，局限于专门检测非己核酸的细胞的内涵体隔室。TLR7在通过识别ssRNA抗病毒防御方面起关键作用(Diebold S.S.等,Science,2004:303,1529-1531；和Lund J.M.等,PNAS,2004:101,5598-5603)。TLR7在人身上具有有限的表达分布，并主要通过B细胞和浆细胞样树突细胞(pDC)表达，而较低程度地通过单核细胞表达。浆细胞样DCs是淋巴衍生的树突细胞的唯一群体(0.2-0.8％的外周血单核细胞(PBMCs))，它是响应病毒感染而分泌高水平干扰素-α(IFNα)和干扰素-β(IFNβ)的最初的I型干扰素生成细胞(Liu Y-J,Annu.Rev.Immunol.,2005:23,275-306)。

很多疾病、障碍与TLRs的异常有关，比如黑色素瘤、非小细胞肺癌、肝细胞癌、基底细胞癌(basalcellcarcinoma)、肾细胞癌、骨髓瘤、变应性鼻炎、哮喘、慢性阻塞性肺炎(COPD)、溃疡性结肠炎、肝纤维化，HBV、黄病毒科(Flaviviridae)病毒、HCV、HPV、RSV、SARS、HIV或流行性感冒的病毒感染等。因此运用TLRs的激动剂治疗相关疾病是很有前景的。

由于TLR7和TLR8高度同源，因此TLR7配体，在大多数情况下也是TLR8配体。TLR8刺激主要诱导产生细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)和趋化因子。干扰素α是治疗慢性乙型肝炎或丙型肝炎的主要药物之一，而TNF-α是一种促炎细胞因子，过多分泌可能导致严重的副作用。所以对TLR7和TLR8的选择性对于开发TLR7激动剂用于治疗病毒感染性疾病至关重要。

目前已有相关的TLR7激动剂专利申请，如WO2005025583、WO2007093901、WO2008011406、WO2009091032、WO2010077613、WO2010133882、WO2011031965、WO2012080730和WO2010018133。但仍需进一步研发更安全的和更有效的TLR7激动剂。

本发明针对上述技术问题，提供一种起效浓度低，选择性好，激活效果明显的嘌呤酮类药物化合物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的化合物：

或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，

其中：

为顺式或反式；

L¹选自-O-、-C(O)-、-S(O)_t-、-NR⁶-、-N(R⁶)C(O)-、-C(O)N(R⁶)-、-N(R⁶)S(O)₂-和-S(O)₂N(R⁶)-；

R¹选自氢原子、烷基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；

R²选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；

R³选自烷基、卤代烷基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-NR⁷R⁸、-C(O)NR⁷R⁸、-C(O)R⁹、-C(O)OR⁹和-S(O)_tR⁹中的一个或多个取代基所取代；

R⁴和R⁵相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R⁶选自氢原子、烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R⁷和R⁸相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；

或者，所述R⁷和R⁸与相连接的氮原子一起形成杂环基，其中所述的杂环基除含有1个氮原子之外，还任选含有1～2个相同或不同的选自N、O和S的杂原子，并且所述的杂环基任选被选自烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；

R⁹选自氢原子、烷基、卤代烷基、氨基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；并且

t为0、1或2。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物为通式(II)所示的化合物：

其中：

alk为亚烷基，其任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；

L¹、R¹、R²、R⁴和R⁵如通式(I)中所定义。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物为通式(III)所示的化合物：

其中：

为顺式或反式；

R⁷和R⁸与相连接的氮原子一起形成杂环基，其中所述的杂环基除含有1个氮原子之外，还任选含有1～2个相同或不同的选自N、O和S的杂原子，并且所述的杂环基任选被选自烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；

n为1到6的整数；

L¹、R¹、R²、R⁴和R⁵如通式(I)中所定义。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的R⁴和R⁵均为氢原子。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的L¹为-O-。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物为通式(IV)所示的化合物：

其中：

R¹⁰选自烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

q为0、1、2或3，优选q为0；

m为0、1、2或3，优选为1或2；

n为1到6的整数；

R¹和R²如通式(I)中所定义。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(V)所示的化合物：

其中：

q为0、1、2或3，优选q为0；

m为0、1、2或3，优选为1或2；

n为1到6的整数；

R¹和R²如通式(I)中所定义。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(II)所示的化合物，其中所述的n为2或3。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的R¹为烷基。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的R²为烷基，优选为甲基或乙基。

本发明的典型化合物包括但不限于：

或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐。

在本发明一个优选的实施方案中，一种通式(IA)所示的化合物，其为制备通式(I)化合物的中间体：

其中：

L¹、R¹、R²、R⁴和R⁵如通式(I)中所定义。

通式(IA)所示的化合物包括，但不限于：

本发明的另一方面涉及一种制备通式(I)所示的化合物的方法，该方法包括：

通式(IA)的化合物和通式(IB)化合物反应得到通式(I)的化合物；

其中：

R¹～R⁵和L¹如通式(I)中所定义。

本发明的另一方面涉及一种制备通式(II)所示的化合物的方法，该方法包括：

其中：

L¹、R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁷、R⁸和n如通式(II)中所定义。

本发明的另一方面涉及一种药物组合物，所述药物组合物含有治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

本发明进一步涉及通式(I)所示化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐或包含其的药物组合物在制备用于激动TLR7的药物中的用途。

本发明进一步涉及通式(I)所示化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐或包含其的药物组合物在制备用于治疗由病毒引起的感染的药物中的用途。

本发明进一步涉及通式(I)所示化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐或包含其的药物组合物在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的用途。

本发明进一步涉及一种激动TLR7的方法，其包括将通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物与TLR7接触的步骤。

本发明进一步涉及一种治疗由病毒引起的感染的方法，所述方法包括给予所需患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物。

本发明进一步涉及一种治疗或预防肿瘤的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物。

本发明进一步涉及一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物，其用作药物。

本发明进一步涉及一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物，其用作TLR7激动剂。

本发明进一步涉及一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物，其用于治疗或预防由病毒引起的感染。

本发明进一步涉及一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物，其用于治疗或预防选肿瘤。

本发明中所述病毒优选选自登革热病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病毒、蜱传脑炎病毒、昆津病毒、墨累山谷脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、鄂木斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、济卡病毒、HIV、HBV、HCV、HPV、RSV、SARS和流感病毒，更优选选自HBV和HCV。

本发明中所述肿瘤优选选自黑色素瘤、非小细胞肺癌、肝细胞癌、基底细胞癌、肾细胞癌和骨髓瘤。

含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的药用制剂。片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。

水悬浮液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂。

油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油中配制而成。油悬浮液可含有增稠剂。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。

本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。

药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳。例如将活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后将油溶液加入水和甘油的混合物中处理形成微乳。可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本发明化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型静脉注射泵。

药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。

可按用于直肠给药的栓剂形式给予本发明化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。此类物质包括可可脂、甘油明胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。

如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用具体化合物的活性、患者的年龄、患者的体重、患者的健康状况、患者的行为、患者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、通式化合物(I)的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。

发明的详细说明

除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。

术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基，更优选含有1至6个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、-NR⁷R⁸、-C(O)NR⁷R⁸、-C(O)R⁹、-C(O)OR⁹和-S(O)_tR⁹中的一个或多个取代基所取代。

术语“亚烷基”指饱和的直链或支链脂肪族烃基，其具有2个从母体烷的相同碳原子或两个不同的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子，更优选含有1至6个碳原子的亚烷基。亚烷基的非限制性实例包括但不限于亚甲基(-CH₂-)、1,1-亚乙基(-CH(CH₃)-)、1,2-亚乙基(-CH₂CH₂)-、1,1-亚丙基(-CH(CH₂CH₃)-)、1,2-亚丙基(-CH₂CH(CH₃)-)、1,3-亚丙基(-CH₂CH₂CH₂-)、1,4-亚丁基(-CH₂CH₂CH₂CH₂-)等。亚烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、-NR⁷R⁸、-C(O)NR⁷R⁸、-C(O)R⁹、-C(O)OR⁹和-S(O)_tR⁹中的一个或多个取代基所取代。

术语“烯基”指分子中含有碳碳双键的不饱和烷基化合物，烷基的定义如上所述。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自氢原子、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-NR⁷R⁸、-C(O)NR⁷R⁸、-C(O)R⁹、-C(O)OR⁹和-S(O)_tR⁹中的一个或多个取代基所取代。

术语“炔基”指分子中含有碳碳三键的不饱和烷基化合物，烷基的定义如上所上所述。炔基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自氢原子、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-NR⁷R⁸、-C(O)NR⁷R⁸、-C(O)R⁹、-C(O)OR⁹和-S(O)_tR⁹中的一个或多个取代基所取代。

术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至6个碳原子，最优选包含5至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。

术语“螺环烷基”指5至20元的单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实例包括：

术语“稠环烷基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。稠环烷基的非限制性实例包括：

术语“桥环烷基”指5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥环烷基的非限制性实例包括：

所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等；优选苯基并环戊基、四氢萘基。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。

术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_t(其中t是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；最优选包含3至8个环原子，其中1～3个是杂原子；最优选包含5至6个环原子，其中1～2或1～3个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等，优选四氢吡喃基、哌啶基、吡咯烷基。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。

术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_t(其中t是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：

术语“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_t(其中t是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：

术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_t(其中t是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括：

所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：

等。

杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地任选选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、-NR⁷R⁸、-C(O)NR⁷R⁸、-C(O)R⁹、-C(O)OR⁹和-S(O)_tR⁹中的一个或多个取代基所取代。

术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，更优选5至6元，例如苯基和萘基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：

芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地任选选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、-NR⁷R⁸、-C(O)NR⁷R⁸、-C(O)R⁹、-C(O)OR⁹和-S(O)_tR⁹中的一个或多个取代基所取代。

术语“氨基保护基”是为了使分子其它部位进行反应时氨基保持不变，用易于脱去的基团对氨基进行保护。非限制性实施例包含叔丁氧羰基、乙酰基、苄基、烯丙基和对甲氧苄基等。这些基团可任选地被选自卤素、烷氧基或硝基中的1-3个取代基所取代。所述氨基保护基优选为对甲氧苄基。

术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，含1至3个杂原子；更优选为5元或6元，含1至2个杂原子；优选例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等，优选为咪唑基、吡唑基或嘧啶基、噻唑基；更优选吡唑基。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：

杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、-NR⁷R⁸、-C(O)NR⁷R⁸、-C(O)R⁹、-C(O)OR⁹和-S(O)_tR⁹中的一个或多个取代基所取代。

术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基和环烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基中的一个或多个取代基所取代。

术语“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基如上所定义。术语“羟基”指-OH基团。

术语“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。

术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。

术语“氨基”指-NH₂。

术语“氰基”指-CN。

术语“硝基”指-NO₂。

术语“氧代基”指＝O。

“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。

“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

“可药用盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。

t和R⁷～R⁹如通式(I)化合物中所定义。

本发明化合物的合成方法

为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

方案一

本发明通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

第一步，通式(I-1)的化合物或其盐(优选为三氟乙酸盐)和通式(I-2)的化合物在碱性条件下，发生亲核取代反应得到通式(I-3)的化合物；

第二步，通式(I-3)的化合物在酸性条件下脱去R^a得到通式(IA)的化合物；

第三步，通式(IA)的化合物和通式(IB)的化合物在酸性条件下，反应得到通式(I)的化合物；

其中：

提供碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱类，所述的有机碱类包括但不限于三乙胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶、N,N-二异丙基乙胺、正丁基锂、二异丙基氨基锂、双三甲基硅基胺基锂、醋酸钾、叔丁醇钠、叔丁醇钾和正丁醇钠，所述的无机碱类包括但不限于氢化钠、磷酸钾、碳酸钠、碳酸钾、醋酸钾、碳酸铯、氢氧化钠和氢氧化锂；

提供酸性的条件的试剂包括但不限于盐酸、氯化氢的1,4-二氧六环溶液、三氟乙酸、甲酸、乙酸、盐酸、硫酸、甲磺酸、硝酸、磷酸、对苯甲磺酸、Me₃SiCl和TMSOTf；

上述反应优选在溶剂中进行，所用溶剂包括但不限于：乙酸、三氟乙酸、甲醇、乙醇、正丁醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、水、N,N-二甲基甲酰胺及其混合物；

R^a为烷基，优选为甲基；

X为卤素，优选为溴；

L¹和R¹～R⁵如通式(I)中所定义。

方案二

本发明通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

通式(IA)的化合物和通式(IIB)的化合物在酸性条件下，反应得到通式(II)的化合物；

其中：

alk、L¹、R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁷和R⁸如通式(II)中所定义。

方案三

本发明通式(III)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

通式(IA)的化合物和通式(IIIB)的化合物在酸性条件下，反应得到通式(III)的化合物；

其中：

L¹、R¹、R²、R⁴、R⁵、R⁷、R⁸和n如通式(III)中所定义。

方案四

本发明通式(IV)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

通式(IVA)的化合物和通式(IVB)的化合物在酸性条件下，反应得到通式(IV)的化合物；

其中：

q为0、1、2或3，优选q为0；

R¹、R²、m和n如通式(IV)中所定义。

具体实施方式

实施例

化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10^-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d₆)，氘代氯仿(CDCl₃)，氘代甲醇(CD₃OD),内标为四甲基硅烷(TMS)。

MS的测定用FINNIGAN LCQAd(ESI)质谱仪(生产商:Thermo,型号：Finnigan LCQadvantage MAX)。

HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)。

手性HPLC分析测定使用LC-10A vp(Shimadzu)或者SFC-analytical(BergerInstruments Inc.)。

薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。

柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。

手性制备柱层析使用Prep Star SD-1(Varian Instruments Inc.)或SFC-multigram(Berger Instruments Inc.)。

快速制备仪使用CombiFlash快速制备仪，型号为RF+UV。

手性制备柱使用CHIRALPAK AS-H 20*250mm,5μm。

激酶平均抑制率及IC₅₀值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。

本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(AccelaChemBio Inc)、达瑞化学品等公司。

实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。

氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。

氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。

加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或HC2-SS型氢化仪。

氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。

微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。

实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。

实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。

实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂，纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷/甲醇体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。

实施例1，2

(E)-6-氨基-2-丁氧基-9-(2-((2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)氨亚基)丙基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮1

(Z)-6-氨基-2-丁氧基-9-(2-((2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)氨亚基)丙基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮2

第一步

1-(6-氨基-2-丁氧基-8-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)丙烷-2-酮1b

0℃条件下，将2-丁氧基-8-甲氧基-9H-嘌呤-6-胺三氟乙酸盐1a(450mg，1.89mmol，采用PCT专利申请“WO2016075661”公开的方法制备而得)溶于N,N-二甲基甲酰胺中，加入碳酸钾(1.3g，9.45mmol)，再加入1-溴丙烷-2-酮(519mg，3.79mmol)，室温搅拌反应12小时。反应液中加入50mL水，用乙酸乙酯(50mL)萃取，有机相依次用水(30mL×3)和饱和氯化钠溶液(30mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化所得残余物，再用薄层色谱法以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物1b(140mg)，产率：25.3％。

MS m/z(ESI):294.4[M+1]

第二步

6-氨基-2-丁氧基-9-(2-氧代丙基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮1c

将化合物1b(140mg，0.4mmol)溶于8mL盐酸中，搅拌反应4小时。反应液减压浓缩，所得残余物中加入10mL水，滴加饱和碳酸氢钠溶液至pH为7～8，过滤，收集滤饼，真空干燥，得到粗品标题化合物1c(100mg)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

MS m/z(ESI):280.4[M+1]

第三步

将粗品化合物1c(110mg，0.39mmol)溶于10mL甲苯中，加入O-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)羟胺1d(51mg，0.39mmol，采用美国专利申请“US20040116710”公开的方法制备而得)和对甲苯磺酸(3.7mg，0.0195mmol)，升温至110℃搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层色谱法以展开剂体系A纯化所得残余物，进行手性制备(分离条件：手性制备柱CHIRALPAK AS-H 20*250mm,5μm；流动相：正己烷：乙醇：二乙胺＝85：15：0.01，流速：15mL/min)，收集其相应组分，减压浓缩，得到标题化合物1(80mg)和2(45mg)。

化合物1：

MS m/z(ESI):392.5[M+1]；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.18(s,1H),6.58(s,2H),4.38(s,2H),4.13(t,2H),4.08-4.11(m,2H),2.87-2.56(m,6H),1.77(s,3H),1.76-1.68(m,4H),1.68-1.57(m,2H),1.44-1.32(m,2H),0.92(t,3H)。

化合物2：

MS m/z(ESI):392.5[M+1]；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.08(s,1H),6.54(s,2H),4.54(s,2H),4.14(t,4H),2.92-2.38(m,6H),1.71-1.68(m,4H),1.68-1.62(m,2H),1.54(s,3H),1.43-1.36(m,2H),0.91(t,3H)。

实施例3,4

(E)-6-氨基-2-丁氧基-9-(2-((3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)氨亚基)丙基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮3

(Z)-6-氨基-2-丁氧基-9-(2-((3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)氨亚基)丙基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮4

第一步

2-(3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)异吲哚-1,3-二酮2c

冷却至0℃，将2-羟基异吲哚-1,3-二酮2a(2.5g，15.33mmol)，3-(吡咯烷-1-基)丙醇2b(1.98g，15.33mmol，采用公知的方法“Catalysis Communications,2007,8(11),1671-1674”制备而得)和三苯基膦(4.02g，15.33mmol)溶于50mL四氢呋喃中，滴加入N,N-二异丙基乙胺(3.1g，15.33mmol)，室温搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，加入乙醚，过滤，滤液减压浓缩所得残余物，用乙醚打浆，过滤，重复以上操作三次，滤液减压浓缩，用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题化合物2c(1.1g)，产率：26.2％。

MS m/z(ESI):275.2[M+1]

第二步

O-(3-(吡咯烷-1-基)丙基)羟胺2d

将化合物2c(1.1g，4mmol)溶于15mL乙醇中，加入水合肼(342mg，6mmol，88％溶液)，升温至80℃搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物中加入10mL乙醚打浆，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物中加入10mL乙醚和10mL正己烷打浆，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品标题化合物2d(400mg)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

MS m/z(ESI):145.4[M+1]

第三步

将粗品化合物1c(240mg，0.86mmol)溶于25mL甲苯中，加入粗品化合物2d(124mg，0.86mmol)和对甲苯磺酸(8mg，0.043mmol)，升温至100℃搅拌反应96小时。反应液冷却至室温，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化所得残余物，进行手性制备(分离条件：手性制备柱CHIRALPAK AS-H 20*250mm,5μm；流动相：正己烷：乙醇：二乙胺＝85：15：0.01，流速：15mL/min)，收集其相应组分，减压浓缩，得到标题化合物3(50mg)和4(35mg)。

化合物3：

MS m/z(ESI):406.5[M+1]；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.95(s,1H),6.45(s,2H),4.36(s,2H),4.13(t,2H),3.93(t,2H),2.44-2.28(m,6H),1.74(s,3H),1.72-1.55(m,8H),1.48-1.32(m,2H),0.91(t,3H)。

化合物4：

MS m/z(ESI):406.5[M+1]；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.04(s,1H),6.51(s,2H),4.51(s,2H),4.14(t,2H),4.04(t,2H),2.48-2.37(m,6H),1.80-1.73(m,2H),1.71-1.66(m,4H),1.66-1.58(m,5H),1.44-1.35(m,2H),0.91(t,3H)。

实施例5,6

(Z)-6-氨基-2-丁氧基-9-(2-((2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)氨亚基)丁基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮5

(E)-6-氨基-2-丁氧基-9-(2-((2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)氨亚基)丁基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮6

第一步

1-(6-氨基-2-丁氧基-8-甲氧基-9H-嘌呤-9-基)丁烷-2-酮3a

0℃条件下，将化合物1a(2g，5.7mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺中，加入碳酸钾(3.93g，28.5mmol)，再加入1-溴丁烷-2-酮(1.72g，11.4mmol)，室温搅拌反应1小时。反应液中加入50mL水，用乙酸乙酯(50mL)萃取，有机相依次用水(30mL×3)和饱和氯化钠溶液(30mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化所得残余物，再用高效液相色谱法纯化所得残余物，得到标题化合物3a(420mg)，产率：24％。

MS m/z(ESI):308.4[M+1]

第二步

6-氨基-2-丁氧基-9-(2-氧代丁基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8酮3b

将化合物3a(420mg，1.37mmol)溶于10mL盐酸中，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，所得残余物中加入10mL水，滴加饱和碳酸氢钠溶液至pH为7～8，过滤，收集滤饼，真空干燥，得到粗品标题化合物3b(340mg)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

MS m/z(ESI):294.4[M+1]

第三步

将粗品化合物3b(180mg，0.61mmol)溶于20mL甲苯中，加入化合物1d(80mg，0.61mmol)和对甲苯磺酸(6mg，0.03mmol)，升温至105℃搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化所得残余物，进行手性制备(分离条件：手性制备柱CHIRALPAK AS-H 20*250mm,5μm；流动相：正己烷：乙醇：二乙胺＝85：15：0.01，流速：15mL/min)，收集其相应组分，减压浓缩，得到标题化合物5(170mg)和6(20mg)。

化合物5：

MS m/z(ESI):406.2[M+1]；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.92(s,1H),6.44(s,2H),4.39(s,2H),4.13(t,2H),3.97(t,2H),2.57-2.52(m,2H),2.44-2.34(m,4H),2.20(q,2H),1.68-1.58(m,6H),1.42-1.35(m,2H),0.96(t,3H),0.91(t,3H)。

化合物6：

MS m/z(ESI):406.2[M+1]；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.02(s,1H),6.51(s,2H),4.54(s,2H),4.13(dd,4H),2.78-2.66(m,2H),2.50-2.45(m,4H),2.08-1.91(m,4H),1.77-1.57(m,6H),0.88(m,6H)。

实施例7,8

(E)-6-氨基-2-丁氧基-9-(2-((3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)氨亚基)丁基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮7

(Z)-6-氨基-2-丁氧基-9-(2-((3-(吡咯烷-1-基)丙氧基)氨亚基)丁基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮8

将粗品化合物3b(150mg，0.51mmol)溶于20mL甲苯中，加入化合物2d(74mg，0.51mmol)和对甲苯磺酸(5mg，0.026mmol)，升温至115℃搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化所得残余物，进行手性制备(分离条件：手性制备柱CHIRALPAK AS-H 20*250mm,5μm；流动相：正己烷：乙醇：二乙胺＝85：15：0.01，流速：15mL/min)，收集其相应组分，减压浓缩，得到标题化合物7(45mg)和8(50mg)。

化合物7：

MS m/z(ESI):420.3[M+1]；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.93(s,1H),6.44(s,2H),4.38(s,2H),4.13(t,2H),3.91(t,2H),2.40-2.30(m,6H),2.20(q,2H),1.72-1.56(m,8H),1.44-1.36(m,2H),0.97(t,3H),0.91(t,3H)。

化合物8：

MS m/z(ESI):420.3[M+1]；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.03(s,1H),6.51(s,2H),4.53(s,2H),4.13(t,2H),4.05(t,2H),2.48-2.35(m,6H),1.98(q,2H),1.76(p,2H),1.71-1.57(m,6H),1.44-1.35(m,2H),0.90(td,6H)。

实施例9,10

(E)-6-氨基-2-丁氧基-9-(2-((2-(哌啶-1-基)乙氧基)氨亚基)丙基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮9

(Z)-6-氨基-2-丁氧基-9-(2-((2-(哌啶-1-基)乙氧基)氨亚基)丙基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮10

将粗品化合物1c(200mg，0.716mmol)溶于15mL甲苯中，加入O-(2-(哌啶-1-基)乙基)羟胺4a(206.54mg，1.43mmol，采用美国专利申请“US20040116710”公开的方法制备而得)和对甲苯磺酸(6.17mg，35.8mmol)，升温至110℃搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化所得残余物，进行手性制备(分离条件：手性制备柱CHIRALPAK AS-H 20*250mm,5μm；流动相：正己烷：乙醇：二乙胺＝90：10：0.01，流速：15mL/min)，收集其相应组分，减压浓缩，得到标题化合物9(130mg)和10(50mg)。

化合物9：

MS m/z(ESI):406.2[M+1]；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.92(s,1H),6.44(s,2H),4.36(s,2H),4.13(t,2H),3.98(t,2H),2.42(t,2H),2.35-2.25(m,4H),1.74(s,3H),1.70-1.56(m,2H),1.50-1.29(m,8H),0.92(t,3H)。

化合物10：

MS m/z(ESI):406.2[M+1]；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.01(s,1H),6.50(s,2H),4.51(s,2H),4.12(dt,4H),2.57-2.51(m,2H),2.44-2.34(m,4H),1.68-1.57(m,5H),1.53-1.44(m,4H),1.43-1.31(m,4H),0.91(t,3H)。

测试例：

生物学评价

测试例1、本发明化合物对人源TLR激动活性的测定

本发明化合物对HEK-Blue^TM hTLR7稳转株细胞表达的hTLR7蛋白激活作用和对HEK-Blue^TM hTLR8稳转株细胞表达的hTLR8蛋白激活作用采用如下实验方法测定：

一、实验材料及仪器

1.DMEM(Gibco，10564-029),

2.胎牛血清(GIBCO,10099),

3.台盼蓝溶液(Sigma,T8154-100ML),

4.Flexstation 3多功能酶标仪(Molecμlar Devices),

5.HEK-Blue^TM hTLR7细胞系(InvivoGen,hkb-hTLR7),

6.HEK-Blue^TM hTLR8细胞系(InvivoGen,hkb-hTLR8)，

7.HEK-Blue检测试剂(InvivoGen,hb-det3),

8.磷酸盐缓冲液(PBS)pH7.4(上海源培生物科技股份有限公司，B320)。

二、实验步骤

配置HEK-Blue检测培养基，取HEK-Blue检测干粉一袋，加入50ml去内毒素水溶解，再放入37℃培养箱，10分钟后无菌过滤。化合物先配制成20mM的原液；再用纯DMSO稀释至最高浓度为6x10⁶nM，经3倍梯度稀释，共10个点。

用培养基先把上述配制好的化合物稀释20倍，然后每孔加入20μl稀释后的化合物。分别取HEK-Blue^TM hTLR7细胞和HEK-Blue^TM hTLR8细胞，先去掉上清，再加入2-5ml预热的PBS，放入培养箱1-2分钟，轻轻吹打细胞，台盼蓝染色计数。用HEK-Blue检测培养基重悬细胞调整浓度为2.2x 10⁵个细胞/ml，加180μl细胞至上述已加入20μl药物的96孔细胞培养板中，37℃，培养6-16h。

酶标仪读数，波长为620nm。可获得相应的OD值，经Graphpad Prism计算得到药物的EC₅₀值。本发明化合物对人源TLR7和TLR8激活作用可通过以上的试验进行测定，测得的EC₅₀值见表1。

表1本发明化合物对人源TLR7和TLR8的EC₅₀值。

结论：本发明化合物表现出对人源TLR7具有明显的激活作用，相比对人源TLR8的激活作用，本发明化合物对TLR7的激活作用具有更高的选择性。

测试例2、本发明中化合物刺激外周血单个核细胞(PBMC)分泌IFN-α能力的测定

本发明中化合物刺激PBMC分泌IFN-α能力采用如下实验方法测定：

一、实验材料及仪器

1.RPMI 1640(Invitrogen,11875),

2.FBS(Gibco,10099-141),

3.Ficoll-Paque PREMIUM(GE,17-5442-02),

4.台盼蓝溶液(Sigma,T8154-100ML),

5.SepMateTM-50(Stemcell,15460),

6.Bright-Line^TM血细胞计数仪(Sigma,Z359629-1EA),

7.96孔平底板(Corning,3599),

8.96孔v底板(Corning,3894),

9.人源IFN-α试剂盒(cisbio,6FHIFPEB),

10.PHERAStar多功能酶标仪(BMG，PHERAStar)。

二、实验步骤

化合物用纯DMSO稀释，最高浓度为5mM，4倍梯度稀释，共9个点。然后取4μl化合物，加入到196μl含10％FBS的RMPI 1640培养基中，混匀。每孔取50μl至新的96孔细胞培养板。

所有试剂平衡到室温，取250ml培养瓶，将60ml血液和PBS+2％FBS加入其中，轻轻吹打混匀稀释。取50ml PBMC分离管SepMateTM-50，加入15ml淋巴细胞分离液Ficoll-PaquePREMIUM，然后加入30ml稀释后血液。1200g离心10分钟,室温。取上清，然后300g，离心8分钟。用含10％FBS的RMPI 1640培养基重悬并计数，调整PBMC数量至3.33×10⁶个细胞/ml，取150μl至已加入化合物的细胞培养板中，37℃，5.0％CO₂的培养箱中培养24h。

将细胞培养板放入离心机中，1200rpm，室温离心10分钟。每孔取出150μl上清。先平衡人源IFN-α试剂盒中的试剂至常温，在避光条件下根据试剂盒说明书配制抗-IFN-α-Eu³⁺-穴状结合物(Cryptate conjugate)和抗-IFN-α-d2-结合物，两者均以1：40的比例与结合缓冲液(conjugate Buffer)混匀。然后每孔加入16μl的离心取得的上清液。再每孔加入2μl刚配好的抗-IFN-α-Eu³⁺-穴状结合物和抗-IFN-α-d2-结合物，震荡混匀，室温避光孵育3h。

在PHERAStar上用HTRF模式读数。我们将刺激产生最低检测限至少3倍以上细胞因子水平的最低药物浓度，定义为该化合物在该细胞因子刺激实验上的MEC(最小有效浓度Minimal Effective Concentration)值。

本发明化合物刺激PBMC分泌IFN-α的能力通过以上的试验进行测定，测得的MEC值见表2。

表2本发明化合物刺激PBMC分泌IFN-α的MEC

实施例编号	MEC(nM)
		1	1.4
3	<0.4

结论：从刺激PBMC分泌IFN-α的活性的数据上看，本发明化合物能够较好的引起IFN-α释放。

测试例3、本发明化合物对人肝微粒体CYP3A4咪达唑仑代谢位点的酶活性的抑制作用

本发明化合物对人肝微粒体CYP3A4咪达唑仑代谢位点的酶活性采用如下实验方法测定：

一、实验材料及仪器

1.磷酸缓冲液(PBS),

2.NADPH(Sigma N-1630),

3.人肝微粒体(Corning Gentest),

4.ABI QTrap 4000液质两用仪(AB Sciex),

5.Inertsil C8-3柱,4.6×50mm,5μm(美国迪马公司),

6.CYP探针底物(15μM的咪达唑仑，SIGMA UC429)和阳性对照抑制剂(酮康唑，SIGMA K1003)。

二、实验步骤

配置100mM的PBS缓冲液，用该缓冲液配制2.5mg/ml的微粒体溶液和5mM的NADPH溶液，用PBS梯度稀释5X浓度的化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS梯度稀释5X浓度的酮康唑工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS稀释至15μM浓度的咪达唑仑工作液。

分别取2.5mg/ml的微粒体溶液、15μM的咪达唑仑工作液、MgCl₂溶液和化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM，每个浓度设置不同的反应体系)各20μl，混合均匀。阳性对照组用相同浓度的酮康唑代替化合物。同时将5mM的NADPH溶液一起在37℃预孵育5分钟。5分钟之后取20μl NADPH加入到个孔中，启动反应，孵育30分钟。所有孵育样品设双样本。30分钟后向所有样本中加入250μl含内标的乙腈，混匀，800rpm摇10分钟，然后3700rpm离心10分钟。取80μl的上清液，转移至LC-MS/MS分析。

数值经Graphpad Prism计算得到药物对CYP3A4咪达唑仑代谢位点的IC₅₀值见表3。

表3本发明化合物对CYP3A4咪达唑仑代谢位点的IC₅₀值

实施例编号	IC₅₀(μM)
		1	7.7
3	24

结论：本发明化合物对人肝微粒体CYP3A4的咪达唑仑代谢位点没有抑制作用或抑制作用较弱，表现出更好的安全性，提示不会发生基于CYP3A4代谢咪达唑仑代谢位点的代谢性药物相互作用。

测试例4、本发明化合物对人肝微粒体CYP2D6酶活性的抑制作用

本发明化合物对人肝微粒体CYP2D6酶活性采用如下实验方法测定：

一、实验材料及仪器

1.磷酸缓冲液(PBS),

2.NADPH(Sigma N-1630),

3.人肝微粒体(Corning Gentest),

4.ABI QTrap 4000液质两用仪(AB Sciex),

5.Inertsil C8-3柱,4.6×50mm,5μm(美国迪马公司),

6.CYP探针底物(20μM的右美沙芬，SIGMA Q0750)和阳性对照抑制剂(奎尼丁，SIGMA D9684)。

二、实验步骤

配置100mM的PBS缓冲液，用该缓冲液配制2.5mg/ml的微粒体溶液和5mM的NADPH溶液，用PBS梯度稀释5X浓度的化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS梯度稀释5X浓度的奎尼丁工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS稀释至20μM浓度的右美沙芬工作液。

分别取2.5mg/ml的微粒体溶液、20μM的右美沙芬工作液、MgCl₂溶液和化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM，每个浓度设置不同的反应体系)各20μl，混合均匀。阳性对照组用相同浓度的奎尼丁代替化合物。同时将5mM的NADPH溶液一起在37℃预孵育5分钟，5分钟之后取20μl NADPH加入到个孔中，启动反应，孵育30分钟。所有孵育样品设双样本。30分钟后向所有样本中加入250μl含内标的乙腈，混匀，800rpm摇10分钟。3700rpm离心10分钟。取80μl的上清液，转移至LC-MS/MS分析。

数值经Graphpad Prism计算得到药物对CYP2D6代谢位点的IC₅₀值见表4。

表4本发明化合物对CYP2D6代谢位点的IC₅₀值

实施例编号	IC₅₀(μM)
		1	4.6
3	5.2

结论：本发明化合物对人肝微粒体CYP2D6的酶活性抑制作用弱，表现出更好的安全性，提示不会发生基于CYP2D6发生代谢性药物相互作用。

测试例5、本发明化合物对hERG钾电流的阻断作用

1、实验目的

应用全自动膜片钳在转染hERG钾通道的稳定细胞株上测试本发明化合物对hERG钾电流的阻断作用。

2、实验方法

2.1实验材料与仪器

2.1.1实验材料：

试剂名称	供货公司	货号
			FBS	GIBCO	10099
丙酮酸钠溶液	sigma	S8636-100ML
			MEM非必需氨基酸溶液(100×)	sigma	M7145-100ML
G418硫酸盐	Enzo	ALX-380-013-G005
			MEM	Hyclone	SH30024.01B
hERG cDNA	Origene	-

2.1.2实验仪器：

2.2全自动膜片钳实验步骤

HEK293-hERG稳定细胞株按照1:4的密度在MEM/EBSS培养基(10％FBS，400μg/mlG418,1％MEM非必需氨基酸溶液(100×),1％丙酮酸钠溶液)中进行传代培养，培养48-72小时之内进行全自动膜片钳实验。实验当天将细胞用0.25％胰酶消化后，离心收集细胞，用细胞外液(140mM NaCl，4mM KCl，1mM MgCl₂，2mM CaCl₂，5mMD一水葡萄糖，10mM Hepes,pH7.4,298mOsmol)重悬细胞制成细胞悬液。将细胞悬液放置在Patchliner仪器的细胞库上，Patchliner仪器利用负压控制器将细胞加到芯片(NPC-16)上，负压将单个细胞吸引在芯片的小孔上。当形成全细胞模式后，仪器将按照设定的hERG电流电压程序得到hERG电流，然后仪器自动的由低浓度到高浓度，进行化合物灌流。通过HEAK Patchmaster,HEAK EPC10膜片钳放大器(Nanion)和Pathlinersoftware以及Pathcontrol HTsoftware提供的数据分析软件，对化合物各浓度下的电流以及空白对照电流进行分析。

2.3测试结果

本发明化合物对hERG钾电流的阻断作用通过以上的试验进行测定，测得的IC₅₀值见表5。

表5本发明化合物对hERG钾电流的阻断作用的IC₅₀

实施例编号	IC₅₀(μM)
		1	＞30
3	＞30

结论：本发明化合物对hERG的抑制作用弱，由hERG通路引起的副作用可能性小。

Claims

1.一种通式(I)所示的化合物：

其中：

为顺式或反式；

t为0、1或2。

2.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(II)所示的化合物：

其中：

为顺式或反式；

L¹、R¹、R²、R⁴和R⁵如权利要求1中所定义。

3.根据权利要求1或2所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(III)所示的化合物：

其中：

为顺式或反式；

n为1到6的整数；

L¹、R¹、R²、R⁴和R⁵如权利要求1中所定义。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的R⁴和R⁵均为氢原子。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的L¹为-O-。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(IV)所示的化合物：

其中：

q为0、1、2或3，优选q为0；

m为0、1、2或3，优选为1或2；

n为1到6的整数；

R¹和R²如权利要求1中所定义。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(V)所示的化合物：

其中：

q为0、1、2或3，优选q为0；

m为0、1、2或3，优选为1或2；

n为1到6的整数；

R¹和R²如权利要求1中所定义。

8.根据权利要求2～7中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的n为2或3。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的R¹为烷基。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的R²为烷基。

11.根据权利要求1～10中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其选自：

12.一种通式(IA)所示的化合物：

其中：

L¹、R¹、R²、R⁴和R⁵如权利要求1中所定义。

13.根据权利要求12中所述的通式(IA)所示的化合物，其选自：

14.一种制备根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物的方法，该方法包括：

其中：

R¹～R⁵和L¹如权利要求1中所定义。

15.一种药物组合物，所述药物组合物含有治疗有效量的根据权利要求1～11中任一项所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

16.根据权利要求1～11中任一项所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐或根据权利要求15所述的药物组合物在制备用于激动TLR7的药物中的用途。

17.根据权利要求1～11中任一项所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐或根据权利要求15所述的药物组合物在制备用于治疗由病毒引起的感染的药物中的用途。

18.根据权利要求17所述的用途，其中所述的病毒选自：登革热病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病毒、蜱传脑炎病毒、昆津病毒、墨累山谷脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、鄂木斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、济卡病毒、HIV、HBV、HCV、HPV、RSV、SARS和流感病毒。

19.根据权利要求1～11中任一项所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐或根据权利要求15所述的药物组合物在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的用途。

20.根据权利要求19所述的用途，其中所述肿瘤选自黑色素瘤、非小细胞肺癌、肝细胞癌、基底细胞癌、肾细胞癌和骨髓瘤。