CN108918628A - 一种适体复合物的制备方法和基于该复合物的电化学传感器的制备及其用于重金属的检测 - Google Patents

一种适体复合物的制备方法和基于该复合物的电化学传感器的制备及其用于重金属的检测 Download PDF

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Abstract

硫堇‑金纳米粒子‑适体复合物的制备方法和基于该复合物的电化学传感器的制备及其用于重金属的检测，属于电化学传感技术领域，该电化学传感器结合较为牢固稳定，不易脱落，有较好的稳定性，将该电化学传感器放入冰箱中在4oC下储存15天后，其响应电流是最初响应电流的92.2%，同时基于该复合物制备的电化学传感器来检测Hg2+和Ag+具有较低的检测限、良好的选择性和抗干扰性。

Description

一种适体复合物的制备方法和基于该复合物的电化学传感器 的制备及其用于重金属的检测
技术领域
本发明属于电化学传感技术领域，具体涉及硫堇-金纳米粒子-适体复合物的制备方法和基于该复合物的电化学传感器的制备及其用于重金属的检测。
背景技术
Hg2+和Ag+在水体中不能被分解，在微生物的作用下能够转化为毒性更强的金属化合物。生物从环境中提取重金属，经过食物链的生物放大作用，在较高级别生物体内富集，然后通过食物进入人体，危害人体健康。
核酸适配体是一段脱氧核糖核酸DNA或者核糖核酸RNA序列，可以通过体外筛选出具有特定序列的一种物质，它能与多种目标物质高特异性、高选择性的结合。它是一种新型的识别分子，具有许多优点，如可化学合成、稳定性好、没有毒性。经过科研工作者的大量研究表明，核酸适配体中的碱基“T”和“C” 能够特异性的识别重金属离子Hg2+和Ag+，从而形成稳定的“T-Hg2+-T”和“C-Ag+-C”结构。研究者利用这一特殊的结构，设计了许多检测Hg2+和Ag+的体系，如荧光、电化学、电化学发光以及比色法。但是检测限较高，检测范围较窄，在有极少量的Hg2+和Ag+存在时，不容易检测出来。
发明内容
为解决现有技术中检测Hg2+和Ag+的检测限较高不能实现使用较低、检测范围较窄，在有极少量的Hg2+和Ag+存在时，不容易检测出来的问题，本发明目的在于提供了硫堇-金纳米粒子-适体复合物的制备方法，并基于该复合物制备的电化学传感器来检测Hg2+和Ag+具有较低的检测限、良好的选择性、抗干扰性和稳定性。
本发明的上述目的通过以下技术方案实现：硫堇-金纳米粒子-适体复合物的制备方法，包括以下步骤：
（1）取体积为100µL硫堇溶液（THi）与体积为1mL金纳米粒子溶液（AuNPs）混合30min，得到复合物A；
（2）取体积为10µL的巯基标记的适体P1、体积为10µL的三（羟甲基）氨基甲烷缓冲溶液（Tris-HCL缓冲溶液）和10µL的磷酸三氯乙酯溶液（TCEP溶液）放入离心管中活化1h，得到B；
（3）将步骤（1）得到的溶液A与步骤（2）得到的溶液B混合后，37℃，加热16h，得到复合物C；
（4）将步骤（3）得到的溶液C用高速冷冻离心机10000～13000 rpm下离心3～5次，之后用体积为1 mL的磷酸盐缓冲溶液（PBS缓冲溶液）定容，得到硫堇-金纳米粒子-适体复合物；
其中，P1的序列为5’-HS-TTT CTT CCC ATA-3’。
优选地，步骤（1）中金纳米粒子溶液的制备步骤为：取体积为100mL、浓度为10mg/mL氯金酸溶液，并将其加热至沸腾，之后加入体积为1.4mL质量比为1%的柠檬酸三钠溶液，搅拌10min并加热至沸腾，颜色由微黄色变成酒红色，得到金纳米粒子溶液。
优选地，步骤（1）中所述硫堇溶液的浓度为0.01mmol/L。
优选地，步骤（2）中所述适体P1的浓度为1×10-2mmol/L，所述Tris-HCL缓冲溶液的浓度为50mmol/L，所述磷酸三氯乙酯溶液的浓度为10mmol/L。
基于上述硫堇-金纳米粒子-适体复合物的电化学传感器，包括以下步骤 ：
（1）将玻碳电极依次用1.0、0.3和0.05µm的Al2O3纳米粉末抛光至镜面，再分别放入1:1的硝酸、乙醇和二蒸水中各超声清洗3min，然后用氮气将电极表面吹干，使用电化学工作站以三电极体系进行测试，将GCE作为工作电极，饱和甘汞作为参比电极，铂丝电极作为对电极，用浓度为5mmol/L其中含有浓度为0.1 mol/L的KCL溶液的K4[Fe(CN)6]/K3[Fe(CN)6]作为电子媒介，用循环伏安法在-0.2~0.6 V范围内得到一对氧化还原峰，当峰的差值小于80mV时，说明电极已清洁干净可用，然后用超纯水冲洗，最后用氮气吹干；
（2）取体积为5µL氨基化的多壁碳纳米管纳米复合物（WMCNTs）或者氨基化的石墨烯纳米复合物（RGO）滴加到预处理过的GCE表面，并放入干燥器内干燥30～50min，用超纯水冲洗，得到电极D；
（3）再取体积为5µL上述硫堇-金纳米粒子-适体复合物，滴加到电极D表面，放入干燥器内1～2h，之后用Tris-HCL缓冲溶液冲洗5.0min，并用0.1%的十二烷基硫酸钠溶液（SDS溶液）洗涤5.0min，得到电极E；
（4）在Tris-HCL缓冲溶液中加入与所述适体P1错配的适体P2，将步骤（3）所得到的电极E侵泡在该Tris-HCL缓冲溶液中37oC温育30～120min，之后用Tris-HCL溶液冲洗5.0min，并用0.1%的SDS溶液于洗涤5.0min，得到电极F，适体P2序列为5’-TAT GCG AAG TAA-3’；
（5）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，将步骤（3）中的电极F作为工作电极，饱和甘汞作为参比电极，铂丝电极作为对电极，以铂丝电极为对电极，构建金属离子电化学传感器。
优选地，步骤（2）中所述多壁碳纳米管纳米复合物或者氨基化的石墨烯纳米复合物的制备：称取质量为0.01g氨基化的多壁碳纳米管粉末或者石墨烯粉末，然后将其溶于体积为10mL的浓度为10mg/mL的壳聚糖中，超声至完全溶解配置成浓度为1mg/mL的多壁碳纳米管纳米复合物或者氨基化的石墨烯纳米复合物。
优选地，将步骤（4）中温育60min，所述适体P2的浓度为1×10-2mmol/L。
上述电化学传感器的用于金属离子的检测，将电化学传感器在电极在体积为5～10mL、浓度为20mmol/L、pH为6.0～9.0的PBS缓冲溶液中，通过循环伏安法进行测试。
优选地， PBS缓冲溶液的pH为8.0。
优选地，重金属离子可以是汞离子（Hg2+）和银离子（Ag+）。
本发明的有益效果：
1、本发明制备了硫堇-金纳米粒子-适体复合物，利用AuNPs的生物相容性好，表面易被功能化，且与其它原子结合会使其表面积、表面能及表面结合能迅速增大，THi具有良好的电化学可逆性、稳定性以及快速的电子传递能力，将AuNPs、THi及巯基标记的适体P1复合，AuNPs与THi及巯基标记的适体P1通过化学键Au-S间结合形成稳定的复合物，而且该复合物及保留了THi的化学活性也保留了AuNPs的化学活性；
2、本发明制备了电化学传感器，该电化学传感器上修饰有氨基化的WMCNTs或RGO，硫堇-金纳米粒子-适体复合物通过化学键Au-N结合在WMCNTs或RGO的表面，结合较为牢固稳定，不易脱落，使该电化学传感器较好的稳定性，将该电化学传感器放入冰箱中在4oC下储存15天后，其响应电流是最初响应电流的92.2%；
3、本发明提供基于该复合物制备的电化学传感器来检测Hg2+和Ag+具有较低的检测限、良好的选择性和抗干扰性。
附图说明
图1 本发明提供硫堇-金纳米粒子-适体复合物紫外-可见分光光度图。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面结合实施实例进一步阐述本发明的内容，但本发明的内容并不仅仅局限于下述的实施例。
实施例1
硫堇-金纳米粒子-适体复合物的制备方法，包括以下步骤：
（1）取体积为100µL、浓度为0.01mmol/L硫堇溶液与体积为1mL金纳米粒子溶液混合30min，得到复合物A。
（2）取体积为10 µL、浓度为1×10-2mmol/L的巯基标记的适体P1、体积为10 µL、浓度为50mmol/L的Tris-HCL缓冲溶液和体积为10µL、浓度为10mmol/L的磷酸三氯乙酯溶液放入离心管中活化1h，得到B。
（3）将步骤（1）得到的溶液A与步骤（2）得到的溶液B混合后，37℃，加热16h，得到复合物C。
（4）将步骤（3）得到的溶液C用高速冷冻离心机10000～13000rpm下离心3～5次，之后用体积为1mL的PBS缓冲溶液定容，得到硫堇-金纳米粒子-适体复合物；其中，P1的序列为5’-HS-TTT CTT CCC ATA-3’，其中P1浓度用pH为8.0的Tris-HCL缓冲溶液稀释成1×10- 2mmol/L。
其中，步骤（1）中金纳米粒子溶液的制备步骤为：取体积为100mL、浓度为10mg/mL氯金酸溶液，并将其加热至沸腾，之后加入体积为1.4mL质量比为1%的柠檬酸三钠溶液，搅拌10min并加热至沸腾，颜色由微黄色变成酒红色，得到金纳米粒子溶液。
通过紫外-可见分光光度法测试硫堇、金纳米粒子、硫堇-金纳米粒子及硫堇-金纳米粒子-适体复合物的光谱，如图1所示，在280nm左右有吸收峰，这也归因于硫堇中芳香族的π-π*跃迁的吸收环从283nm蓝移到280nm。说明硫堇-金纳米粒子-适体复合物中含有硫堇分子。硫堇-金纳米粒子-适体复合物的光谱中含有从约550nm至571nm的强峰值波长，这是由于适体与金纳米粒子自组装导致532nm的吸收峰红移所致，说明金纳米粒子成功组装到硫堇-金纳米粒子-适体复合物中。
实施例2
基于硫堇-金纳米粒子-适体复合物的重金属离子电化学传感器，包括以下步骤 ：
（1）将玻碳电极依次用1.0、0.3和0.05µm的Al2O3纳米粉末抛光至镜面，再分别放入1:1的硝酸、乙醇和二蒸水中各超声清洗3min，然后用氮气将电极表面吹干，使用电化学工作站以三电极体系进行测试，将GCE作为工作电极，饱和甘汞作为参比电极，铂丝电极作为对电极，用浓度为5mmol/L其中含有浓度为0.1 mol/L的KCL溶液的K4[Fe(CN)6]/K3[Fe(CN)6]作为电子媒介，用循环伏安法在-0.2~0.6 V范围内得到一对氧化还原峰，当峰的差值小于80mV时，电极清理干净。
（2）取体积为5µL氨基化的多壁碳纳米管纳米复合物或者氨基化的石墨烯纳米复合物滴加到预处理过的玻碳电极表面，并放入干燥器内干燥30～50min，用超纯水冲洗，得到电极D；其中多壁碳纳米管纳米复合物或者氨基化的石墨烯纳米复合物的制备：称取质量为0.01g氨基化的多壁碳纳米管粉末或者石墨烯粉末，然后将其溶于体积为10mL的浓度为10mg/mL的壳聚糖中，超声至完全溶解配置成浓度为1mg/mL的多壁碳纳米管纳米复合物或者氨基化的石墨烯纳米复合物。
（3）再取体积为5µL上述硫堇-金纳米粒子-适体复合物，滴加到电极D表面，放入干燥器内1～2h，之后用Tris-HCL缓冲溶液冲洗5.0min，并用0.1%的SDS溶液洗涤5.0min，得到电极E。
（4）在Tris-HCL缓冲溶液中加入与所述适体P1错配的适体P2，将步骤（3）所得到的电极E侵泡在该Tris-HCL缓冲溶液中37oC温育30min，之后用Tris-HCL溶液冲洗5.0min，并用0.1%的SDS溶液于洗涤5.0min，得到电极F，适体P2序列为5’-TAT GCG AAG TAA-3’、浓度为1×10-2mmol/L。
（5）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，将步骤（3）中的电极F作为工作电极，饱和甘汞作为参比电极，铂丝电极作为对电极，以铂丝电极为对电极，构建电化学传感器。
实施例3
将实施例2中步骤（3）所得到的电极E侵泡与适体P2的Tris-HCL缓冲溶液中37oC温育60min，其他不变。
实施例4
将实施例2中步骤（3）所得到的电极E侵泡在与适体P2的Tris-HCL缓冲溶液中37oC温育90min，其他不变。
实施例5
将实施例2中步骤（3）所得到的电极E侵泡在与适体P2的Tris-HCL缓冲溶液中37oC温育120min，其他不变。
实施例6
将实施例3制备的电化学传感器在体积为5～10mL、浓度为20mmol/L、pH为6.0的PBS缓冲溶液中，通过循环伏安法进行测试。
实施例7
将实施例6中PBS缓冲溶液pH换成7.0，其他不变。
实施例8
将实施例6中PBS缓冲溶液pH换成8.0，其他不变。
实施例9
将实施例6中PBS缓冲溶液pH换成9.0，其他不变。
实施例10
将实施例2制备的电化学传感器的分别对相同浓度的金属离子Ag+、Hg2+、Cu2+、Pb2+、Cr6 +、Te3+、Co3+的检测：将电化学传感器放入体积为5～10mL、浓度为20mmol/L、pH为8.0的PBS缓冲溶液中，并在PBS缓冲溶液中分别加入相同浓度的金属离子Ag+、Hg2+、Cu2+、Pb2+、Cr6+、Te3+、Co3+，通过循环伏安法进行测试。
实施例11
将实施例2制备的电化学传感器的分别用对不同浓度金属离子Hg2+的检测：将电化学传感器放入体积为5～10mL、浓度为20mmol/L、pH为8.0的PBS缓冲溶液中，并在PBS缓冲溶液中加入不同浓度金属离子Hg2+，通过循环伏安法进行测试。
实施例12
将实施例2制备的电化学传感器的分别用对不同浓度金属离子Ag+的检测：将金属离子电化学传感器放入体积为5～10mL、浓度为20mmol/L、pH为8.0的PBS缓冲溶液中，并在PBS缓冲溶液中加入不同浓度金属离子Ag+，通过循环伏安法进行测试。
对实施例2～5制备的电化学传感器的性能进行测试，将实施例2～5制备的电化学传感器在5～10mL、浓度为20mmol/L、pH为8.0的PBS缓冲溶液中通过循环伏安法测试。由于硫堇-金纳米粒子-适体复合物中S+的存在，由S+的氧化而产生响应电流。而将硫堇-金纳米粒子-适体复合物修饰过的电极侵泡在含重金属及与适体P2的Tris-HCL缓冲溶液中37oC温育后，响应电流逐渐减弱，这是由于适体P1与适体P2互补配对形成的磷酸骨架带有负电荷，使电极表面的负电荷数量增多，减弱了硫堇-金纳米粒子-适体复合物表面S+的电子转移。其响应电流I 1，之后取出用二蒸水冲洗，再用氮气吹干，之后将实施例2～5制备的电化学传感器在4oC下储存15天，之后取出在5～10mL、浓度为20mmol/L、pH为8.0的PBS缓冲溶液中测试其响应电流I 2。如表1所示
实施例2 实施例3 实施例4 实施例5
I 1与I 2百分比 85.8% 92.2% 88.9% 87.5%
表1电化学传感器将稳定性性能测试
表1表明：实施例3制备的电化学传感器感器的I 2与I 1百分比最高接近92.2%，因此在电极E侵泡在Tris-HCL缓冲溶液中37oC温育60min时电化学传感器稳定性最好。
将实施例6～9制备的电化学传感器在5～10mL、浓度为20mmol/L、pH为6.0～9.0的PBS缓冲溶液中通过循环伏安法测试其响应电流I 3，将实施例2中用硫堇-金纳米粒子-适体复合物修饰过的电极在5～10mL、浓度为20mmol/L、pH为6.0～9.0的PBS缓冲溶液中测试其响应电流I 0。电流变化率为I 0-I 3与I 0百分比，如表2所示
实施例 6 7 8 9
变化率 32.4% 34.9% 35.5% 34.3%
表2电化学传感器将响应电流变化率
表2表明：实施例8制备的电化学传感器将响应电流变化率最大，响应效果最好。
将实施例2制备的离子电化学传感器在5～10mL、浓度为20 mmol/L、pH为6.0～9.0的PBS缓冲溶液中通过循环伏安法测试其响应电流I 0，将实施例10中将电化学传感器放入体积为5～10mL、浓度为20mmol/L、pH为8.0的PBS缓冲溶液中，并在PBS缓冲溶液中分别加入相同浓度的金属离子Ag+、Hg2+、Cu2+、Pb2+、Cr6+、Te3+、Co3+，通过循环伏安法进行测试其响应电流I 4。电流变化率为I 0-I 4与I 0百分比，如表3所示：
金属离子 Ag+ Hg2+ Cu2+ Pb21 Cr6+ Te3+ Co3+
变化率 92.5% 90.2% 33.9% 35.8% 34.2% 36.7% 35.1%
表3电化学传感器检测Ag+和Hg2+的抗干扰性
由于核酸适配体中的碱基“T”和“C”能够特异性的识别重金属离子Hg2+和Ag+，从而形成稳定的“T-Hg2+-T”和“C-Ag+-C”，互补配对的适体P1和P2存在错配的碱基T-T及C-C，在互补配对过程中难易形成双螺旋结构，电流变化率较小，当溶液中有Hg2+和Ag+存在时Hg2+和Ag+可将T-T及C-C结合形成稳定的“T-Hg2+-T”和“C-Ag+-C”此时使适体P1和P2形成双螺旋结构，此时形成磷酸骨架带有负电荷，阻碍电子的转移，响应电流明显变小，变化率增大。
表3结果表明：当溶液中存在Cu2+、Pb2+、Cr6+、Te3+、Co3+时变化率较小，而在检测Ag+和Hg2+时变化率较大达到90%以上，说明该电化学传感器具有较好的抗干扰性。
将实施例2制备的离子电化学传感器在5～10mL、浓度为20mmol/L、pH为6.0～9.0的PBS缓冲溶液中通过循环伏安法测试其响应电流I 0，将实施例11中将电化学传感器放入体积为5～10mL、浓度为20mmol/L、pH为8.0的PBS缓冲溶液中，并在PBS缓冲溶液中分别加入不同浓度的金属离子Hg2+，通过循环伏安法进行测试其响应电流I 5。对实施例11中不同浓度的金属离子Hg2+的电流差I 0-I 5与Hg2+浓度的关系，绘制工作曲线，其检测限0.067nmol/L，检测范围为1～300nmol/L。
将实施例2制备的离子电化学传感器在5～10mL、浓度为20mmol/L、pH为6.0～9.0的PBS缓冲溶液中通过循环伏安法测试其响应电流I 0，将实施例11中将电化学传感器放入体积为5～10mL、浓度为20mmol/L、pH为8.0的PBS缓冲溶液中，并在PBS缓冲溶液中分别加入不同浓度的金属离子Hg2+，通过循环伏安法进行测试其响应电流I 6。对实施例11中不同浓度的金属离子Hg2+的电流差I 0-I 6与Hg2+浓度的关系，绘制工作曲线，其检测限0.041nmol/L，检测范围为1～300nmol/L。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围。

Claims (10)

1.硫堇-金纳米粒子-适体复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）取体积为100µL硫堇溶液与体积为1mL金纳米粒子溶液混合30min，得到复合物A；
（2）取体积为10µL的巯基标记的适体P1、体积为10µL的Tris-HCL缓冲溶液和体积为10µL的磷酸三氯乙酯溶液放入离心管中活化1h，得到B；
（3）将步骤（1）得到的溶液A与步骤（2）得到的溶液B混合后，37℃，加热16h，得到复合物C；
（4）将步骤（3）得到的溶液C用高速冷冻离心机10000～13000rpm下离心3～5次，之后用体积为1mL的PBS缓冲溶液定容，得到硫堇-金纳米粒子-适体复合物；
其中，P1的序列为:5’-HS-TTT CTT CCC ATA -3’。
2.基于权利要求1所述的硫堇-金纳米粒子-适体复合物的电化学传感器，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将玻碳电极依次用1.0、0.3和0.05µm的Al2O3纳米粉末抛光至镜面，再分别放入1:1的硝酸、乙醇和二蒸水中各超声清洗3min，然后用氮气将电极表面吹干，使用电化学工作站以三电极体系进行测试，将GCE作为工作电极，饱和甘汞作为参比电极，铂丝电极作为对电极，用浓度为5mmol/L其中含有浓度为0.1mol/L的KCL溶液的K4[Fe(CN)6]/K3[Fe(CN)6]作为电子媒介，用循环伏安法在-0.2~0.6V范围内得到一对氧化还原峰，当峰的差值小于80mV时，电极清理干净；
（2）取体积为5µL氨基化的多壁碳纳米管纳米复合物或者氨基化的石墨烯纳米复合物滴加到预处理过的GCE表面，并放入干燥器内干燥30～50min，用超纯水冲洗，得到电极D；
再取体积为5µL上述硫堇-金纳米粒子-适体复合物，滴加到电极D表面，放入干燥器内1～2h，之后用Tris-HCL缓冲溶液冲洗5.0min，并用0.1%的SDS溶液洗涤5.0min，得到电极E；
（3）在Tris-HCL缓冲溶液中加入与所述适体P1错配的适体P2，并将步骤（3）所得到的电极E侵泡在该Tris-HCL缓冲溶液中37oC温育30～120min，之后用Tris-HCL溶液冲洗5.0min，并用0.1%的SDS溶液于洗涤5.0min，得到电极F，适体P2序列为:5’-TAT GCG AAG TAA-3’；
（4）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，将步骤（3）中的电极F作为工作电极，饱和甘汞作为参比电极，铂丝电极作为对电极，以铂丝电极为对电极，构建电化学传感器。
3.权利要求2所述的电化学传感器的用于金属离子的检测，其特征在于，将所述电化学传感器在电极在体积为5～10mL、浓度为20mmol/L、pH为6.0～9.0的PBS缓冲溶液中，并在该PBS缓冲溶液中加入不同浓度的重金属离子，通过循环伏安法进行测试。
4.根据权利要求1所述的硫堇-金纳米粒子-适体复合物的制备方法，其特征在于，步骤（1）中金纳米粒子溶液的制备步骤为：取体积为100mL、浓度为10mg/mL氯金酸溶液，并将其加热至沸腾，之后加入体积为1.4mL质量比为1%的柠檬酸三钠溶液，搅拌10min并加热至沸腾，颜色由微黄色变成酒红色，得到金纳米粒子溶液。
5.根据权利要求1所述的硫堇-金纳米粒子-适体复合物的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述硫堇溶液的浓度为0.01mmol/L。
6.根据权利要求1所述的硫堇-金纳米粒子-适体复合物的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述适体P1的浓度为1×10-2mmol/L，所述Tris-HCL缓冲溶液的浓度为50mmol/L，所述磷酸三氯乙酯溶液的浓度为10mmol/L。
7.根据权利要求2所述基于硫堇-金纳米粒子-适体复合物的制备方法的电化学传感器，其特征在于，步骤（2）中所述多壁碳纳米管纳米复合物或者氨基化的石墨烯纳米复合物的制备：称取质量为0.01g氨基化的多壁碳纳米管粉末或者石墨烯粉末，然后将其溶于体积为10mL的浓度为10 mg /mL的壳聚糖中，超声至完全溶解配置成浓度为1mg/mL的多壁碳纳米管纳米复合物或者氨基化的石墨烯纳米复合物。
8.根据权利要求2所述基于硫堇-金纳米粒子-适体复合物的制备方法的电化学传感器，其特征在于，将步骤（4）中温育60min，所述适体P2的浓度为1×10-2mmol/L。
9.根据权利要求3所述的电化学传感器的用于金属离子的检测，其特征在于，所述PBS缓冲溶液的pH为8.0。
10.根据权利要求3所述的电化学传感器的用于金属离子的检测，其特征在于，所述的重金属离子可以是Hg2+和Ag+。
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