CN108904814A - 具有双功能的脂质材料及制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents

具有双功能的脂质材料及制备抗肿瘤药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108904814A
CN108904814A CN201810765588.8A CN201810765588A CN108904814A CN 108904814 A CN108904814 A CN 108904814A CN 201810765588 A CN201810765588 A CN 201810765588A CN 108904814 A CN108904814 A CN 108904814A
Authority
CN
China
Prior art keywords
lipid
quercetin
molecular
lipid molecular
matrix material
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810765588.8A
Other languages
English (en)
Inventor
袁弘
陈少青
胡富强
孟廷廷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang University ZJU
Original Assignee
Zhejiang University ZJU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang University ZJU filed Critical Zhejiang University ZJU
Priority to CN201810765588.8A priority Critical patent/CN108904814A/zh
Publication of CN108904814A publication Critical patent/CN108904814A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明提供一种具有双功能的脂质材料，是槲皮素‑脂质分子通过二硫键共价结合的脂质材料，具有还原敏感和P‑gp抑制作用的脂质材料。再采用溶剂扩散法制备载紫杉醇槲皮素‑脂质分子的脂质纳米粒，由该材料制备的脂质纳米粒结构中的槲皮素与紫杉醇能够产生π‑π重叠，显著增加了纳米粒对紫杉醇的负载。通过槲皮素与脂质分子的二硫键连接，实现了槲皮素‑脂质纳米粒在高浓度还原物质下的响应性裂解，快速释放大量游离药物，而在正常细胞内不会产生明显的载体裂解快速释放游离药物，对正常细胞的安全性较好。同时裂解后产生的槲皮素能够与P‑gp结合，抑制P‑gp，从而减少了肿瘤细胞对游离药物的外排，增加了药物的胞内滞留，有利于提高疗效。脂质材料的结构式如下：

Description

具有双功能的脂质材料及制备抗肿瘤药物中的应用
技术领域
本发明属于制药领域，涉及具有双功能作用的脂质材料合成、载药纳米粒制备和在制备抗肿瘤靶向纳米药物中的应用。
背景技术
癌症目前仍是横亘于人类健康面前的巨大障碍和极大威胁，在我国癌症已经成为城市居民的首位死因，根据美国癌症协会2017年最新年度数据预测2017年美国将会有近169万新增肿瘤病例和60多万死亡人数,抗癌药物的发展成为了全世界医药行业的当务之急。化学治疗仍然是恶性肿瘤治疗最常用的方法，但化疗的安全性与耐药性问题仍然是治疗路上的绊脚石，固有的或获得性的耐药在临床上造成了超过90％的治疗失败。
为了解决化疗药物的安全性、低疗效问题，药物制剂研究工作者通过制剂手段---纳米给药系统的设计帮助实现药物治疗高效、低毒的目的。因载体粒径呈纳米态,可透过细胞膜和穿透血脑屏障等,更有效地向靶器官、靶细胞和靶分子输送药物,起到更好的治疗效果。尺寸在10～1000nm的纳米给药系统远小于细胞器尺寸,使其可有效负载药物分子进入细胞或各种细胞器,并通过增强渗透和保留作用(enhanced permeation and retention,EPR)实现药物在肿瘤部位的蓄积。靶向修饰后的纳米给药系统可将药物浓集于病杜部位实现靶向治疗。靶向给药系统包括脂质体、聚合物胶束、树枝状聚合物、聚合物前药、纳米囊、纳米球以及脂质纳米粒等。近十几年来，脂质纳米粒已经被用于提高许多难递送药物的口服生物利用度，受到很大关注。脂质纳米粒以脂质为载体，药物吸附或包裹于脂质核中，形成脂质纳米给药系统，具有良好的生理相容性，可提高不稳定药物的稳定性，包载难溶性药物，同时也适用于一些亲水性的多肽药物，核酸如microRNA和药物联合治疗等。其具有缓控释、长效作用，适合于静脉注射、口服等多种途径给药。可采用一定比例的液态油或混合脂质可克服固体脂质材料结晶度高、载药量低等特点。也可对纳米粒表面进行修饰，改善动物体内分布，起到肿瘤靶向及增强药效的作用，兼具脂质体与聚合物纳米粒的优势。同时与其他纳米载体材料相比，脂质材料结构简单，材料安全，主要包括单甘酯，双甘酯，其他类甘油酯，磷脂，鞘脂类等，具有极高的生物安全性、生产规模性。但脂质纳米给药系统存在双相药物释放的特点，前期突释，后期缓释，体外释放可进行到96h,不能在肿瘤部位实现敏感释放，这可能是影响包载化疗药物脂质纳米粒并没有非常杰出的药效结果的原因之一。
在维持体系稳定和促进靶部位药物释放的问题上,传统的纳米给药系统并不十分理想。因此有关智能型药物递释系统的设计已逐渐成为药剂学领域的研究热点之一。环境响应性药物递释系统可针对肿瘤与正常组织的生理差异,在维持其体循环稳定的同时,特异性响应物理(如光敏感)、化学(如针对肿瘤内部偏酸性而设计的pH敏感，针对肿瘤细胞内高还原物质浓度设计的还原敏感)、生物(如基质金属蛋白酶)等内源性或外源性的刺激,在接近药物作用位点位置,响应内外环境条件,触发释放药物,选择性地富集于肿瘤组织,实现靶部位的环境响应性药物递释,提高抗肿瘤疗效并降低毒副作用。但目前通过这些手段进行改造的药物递释系统主要是结构有较大可调控改造性的聚合物胶束，及具有光热敏感、还原敏感特性的脂质体，少有具有敏感特性的脂质纳米粒的报道，我们设想能通过脂质材料的结构改造设计敏感特性。
针对化疗过程中固有的或获得性的耐药问题，大量体外研究已证实ABC转运蛋白如P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药蛋白(MRP)在药物外排方面起到的作用，这些蛋白能主动转运药物出细胞尤其是天然疏水性药物如紫杉烷,蒽环类和长春碱类。与多药耐药相关的P-gp蛋白在很多耐药细胞和许多白血病和实体瘤中都被发现存在过表达。在天然产物中研究表明黄酮类物质有很好的抑制P-gp作用。槲皮素是在大量植物果实，根，茎，花中发现的丰富存在的天然多酚类黄酮，有多种生理活性，如诱导凋亡，血管生成抑制，抑制癌细胞和氧化应激、突变的活性。许多研究证明槲皮素能有效抑制ABC转运子，如P-gp，MRP1和BCRP。有研究报道槲皮素能直接与纯化的P-gp蛋白相互作用，有效抑制其活性。它也能以剂量依赖的方式下调P-gp表达，经研究是通过抑制热休克蛋白-DNA结合行为或抑制β-连环蛋白信号通路。已有研究将槲皮素用于壳寡糖胶束结构改造并取得了很好的P-gp抑制效果。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种具有双功能的脂质材料，是一种槲皮素-脂质分子通过二硫键共价结合的脂质材料，
具有如下结构式：
其中：R1和R2代表H或
当脂质分子为辛癸酸甘油酯时，R1中n＝7，R2中n＝9。除了辛癸酸甘油酯还可以选用其他含羟基脂质；当脂质分子为单硬脂酸甘油酯时，R1中n＝17，R2为H；当脂质分子为山嵛酸甘油酯时，R1中n＝21，R2为H。
包括且并不局限于以下几种，如单硬脂酸甘油酯、山嵛酸甘油酯等。
本发明的第二个目的是提供所述槲皮素-脂质分子的合成方法，通过以下步骤实现：
以摩尔数为单位份数，称取1份3,3'-二硫代二丙酸(3,3'-Dithiodipropionicacid,DTPA)，0.2份4-二甲基氨基吡啶(4-Dimethylaminopyridine,DMAP)和1份1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide,EDC)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(N,N-Dimethylformamide,DMF)，45℃恒温水浴搅拌30min以活化DTPA的一端羧基，活化结束后加入1份槲皮素，氮气保护反应12h。完成后于反应中继续加入1份DMAP和1份EDC活化DTPA另一端的羧基，30min后加入1份脂质分子，氮气保护反应12h。反应完成后将反应液倒入冰水中析出沉淀，离心(4000rpm，10min)得到沉淀进行冻干。冻干后样品以洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(25：1，v/v)作为洗脱剂，通过硅胶柱层析进行纯化，得到槲皮素-脂质分子通过二硫键共价结合的脂质材料。其中按照摩尔比1:1选用槲皮素与脂质分子。
所述脂质分子为含羟基脂质分子，选用辛癸酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、山嵛酸甘油酯等。
以辛癸酸甘油酯为例的合成路线如下：
本发明的第三个目的是提供载紫杉醇脂质纳米粒，通过以下步骤实现：
采用溶剂扩散法制备载紫杉醇槲皮素-脂质分子的脂质纳米粒，将10mg槲皮素-脂质分子，0.5～3mg紫杉醇溶于1mL无水乙醇，于70℃恒温水浴搅拌溶解作为有机相，水相为10mL含有0.1％泊洛沙姆188的水溶液，70℃恒温水浴加热。将有机相快速均匀注入水相中，加热搅拌5min，冷却至室温，即得到所需载紫杉醇脂质纳米粒。
所述脂质分子选用辛癸酸甘油酯脂质、槲皮素-单硬脂酸甘油酯脂质、槲皮素-山嵛酸甘油酯脂质。
本发明的第四个目的是提供载紫杉醇脂质纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用。结果表明载紫杉醇脂质纳米粒具有还原响应释放药物的特点，在高浓度还原条件下载体快速裂解，大量完全地释放药物。同时裂解产生的槲皮素具有P-gp抑制作用。
本发明的有益之处是：通过槲皮素与脂质的二硫键连接，实现了脂质纳米粒在肿瘤细胞内高浓度还原物质下的响应性裂解，快速释放大量游离药物与靶作用点结合发挥药效，而在正常细胞内不会产生明显的载体裂解，不会快速释放游离药物，对正常细胞的安全性较好。同时裂解后产生的槲皮素能够与P-gp结合，抑制P-gp，从而减少了肿瘤细胞对游离药物的外排，增加了药物的胞内滞留，有利于提高疗效。
附图说明
图1是槲皮素(Qu)，DTPA，辛癸酸甘油酯(Gcc)，槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质(Qu-SS-Gcc)核磁共振碳谱图。
图2是不同浓度还原物质条件下(0，1，10mM谷胱甘肽)，载紫杉醇的槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质纳米粒的释放情况。
图3是未经处理(A)和经槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质纳米粒共孵育后(B)，人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR中P-gp的表达变化。标尺，20μm。
具体实施方式
本发明结合附图和实施例作进一步的说明。
实施例一：槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质合成与验证
精密称取178mg 3,3'-二硫代二丙酸(3,3'-Dithiodipropionic acid,DTPA)，24.2mg 4-二甲基氨基吡啶(4-Dimethylaminopyridine,DMAP)和192mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide,EDC)溶于10mL无水N,N-二甲基甲酰胺(N,N-Dimethylformamide,DMF)，45℃恒温水浴搅拌30min以活化DTPA的一端羧基，活化结束后加入302mg槲皮素，氮气保护反应12h。完成后于反应中继续加入24.2mgDMAP和192mg EDC活化DTPA另一端的羧基，30min后加入373mg辛癸酸甘油酯，氮气保护反应12h。反应完成后将反应液倒入100mL冰水中析出沉淀，离心(4000rpm，10min)得到沉淀进行冻干。冻干后样品以洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(25：1，v/v)作为洗脱剂，通过硅胶柱层析进行纯化，得到目的产物槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质。对产物进行核磁共振碳谱分析。
因为槲皮素中7位羟基的活性最强，发生反应的可能性最大，经过薄层色谱监测和过柱纯化，核磁共振碳谱结果如图1，槲皮素-辛癸酸甘油酯中槲皮素的7位碳往高场发生了位移，说明槲皮素的7位羟基参与了反应，且槲皮素-辛癸酸甘油酯成功合成。
实施例二：槲皮素-单硬脂酸甘油酯脂质合成
精密称取178mg 3,3'-二硫代二丙酸(3,3'-Dithiodipropionic acid,DTPA)，24.2mg 4-二甲基氨基吡啶(4-Dimethylaminopyridine,DMAP)和192mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide,EDC)溶于10mL无水N,N-二甲基甲酰胺(N,N-Dimethylformamide,DMF)，45℃恒温水浴搅拌30min以活化DTPA的一端羧基，活化结束后加入302mg槲皮素，氮气保护反应12h。完成后于反应中继续加入24.2mg DMAP和192mg EDC活化DTPA另一端的羧基，30min后加入359mg单硬脂酸甘油酯，氮气保护反应12h。反应完成后将反应液倒入100mL冰水中析出沉淀，离心(4000rpm，10min)得到沉淀进行冻干。冻干后样品以洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(25：1，v/v)作为洗脱剂，通过硅胶柱层析进行纯化，得到槲皮素-单硬脂酸甘油酯脂质。对产物进行核磁共振氢谱分析。
实施例三：槲皮素-山嵛酸甘油酯脂质合成
精密称取178mg 3,3'-二硫代二丙酸(3,3'-Dithiodipropionic acid,DTPA)，24.2mg 4-二甲基氨基吡啶(4-Dimethylaminopyridine,DMAP)和192mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide,EDC)溶于10mL无水N,N-二甲基甲酰胺(N,N-Dimethylformamide,DMF)，45℃恒温水浴搅拌30min以活化DTPA的一端羧基，活化结束后加入302mg槲皮素，氮气保护反应12h。完成后于反应中继续加入24.2mg DMAP和192mg EDC活化DTPA另一端的羧基，30min后加入412mg山嵛酸甘油酯，氮气保护反应12h。反应完成后将反应液倒入100mL冰水中析出沉淀，离心(4000rpm，10min)得到沉淀进行冻干。冻干后样品以洗脱剂为二氯甲烷：甲醇(25：1，v/v)作为洗脱剂，通过硅胶柱层析进行纯化，得到槲皮素-山嵛酸甘油酯脂质。
实施例四：载药脂质纳米粒的制备
采用溶剂扩散法制备载紫杉醇脂质纳米粒。脂质合成方法如实施例一，二和三，将10mg槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质(或槲皮素-单硬脂酸甘油酯脂质，或槲皮素-山嵛酸甘油酯脂质)，0.5～3mg紫杉醇溶于1mL无水乙醇，于70℃恒温水浴搅拌溶解作为有机相。水相为10mL含有0.1％泊洛沙姆188的水溶液，70℃恒温水浴加热。将有机相快速均匀注入水相中，加热搅拌5min，冷却至室温，即得到所需载紫杉醇脂质纳米粒。对载药纳米粒的粒径大小、包封率、载药量进行测定。不同投药量的载紫杉醇槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质纳米粒的粒径、包封率、载药量如表1所示。
表1不同投药量的载紫杉醇槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质纳米粒的粒径、包封率、载药量
投药量(％) 粒径(nm) 多分散系数 包封率(％) 载药量(％)
5 90.4±2.0 0.136 94.6±0.7 4.5±0.03
10 100.5±3.3 0.188 93.5±0.9 8.6±0.1
20 199.0±11.1 0.278 89.2±1.5 15.1±0.2
30 293.3±21.7 0.346 87.9±1.9 20.9±0.4
实施例五：脂质纳米粒的还原敏感释药
脂质合成方法如实施例一，载药脂质纳米粒的制备方法如实施例四。制得投药量为10％的载紫杉醇槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质纳米粒溶液。脂质纳米粒以含0.2％吐温-80的磷酸缓冲液(PBS)为释放介质,确保PTX释放符合漏槽条件。移取载紫杉醇槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质纳米粒溶液1mL至透析袋(截留分子量7kDa)中,置于含有不同浓度还原型谷胱甘肽(0mM,1mM,10mM)的释放介质中,37℃恒温振荡(100rpm)。在预设的时间点取样,并替换新鲜释放介质。样品经0.22μm微孔滤膜过滤,HPLC法测定PTX浓度，得到不同浓度GSH条件下载紫杉醇槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质纳米粒的释药能力差异。
不同浓度GSH条件下载紫杉醇槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质纳米粒的释药情况如图2。结果显示，在10mMGSH条件下，载紫杉醇在48h内药物释放量达到约95％，而在0mM和1mMGSH中差异不大，48h内药物释放量约为65％,说明具有载紫杉醇槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质纳米粒具有还原敏感释放的作用。
实施例六：脂质纳米粒的P-gp抑制
脂质合成方法如实施例一，脂质纳米粒的制备方法如实施例四,制得槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质纳米粒。取生长状态良好的P-gp多表达的人乳腺癌耐药细胞(MCF-7/ADR),以3x104/mL密度接种至24孔板内培养12h，与50μM槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质纳米粒共孵育作用12h后进行hoechst 33342核染，PBS清洗3次，4％多聚甲醛固定，PBS再次清洗，2％BSA封闭1h后，加入适当稀释的P-gp一抗，室温孵育4h，PBS清洗除去未结合的抗体，加入绿色荧光标记的二抗，继续孵育2h，激光共聚焦显微镜观察比较。
激光共聚焦显微镜结果如图3，经槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质纳米粒共孵育后MCF-7/ADR的P-gp免疫荧光减弱，说明槲皮素-辛癸酸甘油酯脂质纳米粒能够对MCF-7/ADR表面的P-gp进行抑制。

Claims (7)

1.一种槲皮素-脂质分子通过二硫键共价结合的脂质材料，其特征在于，结构式如下：
其中：R1和R2代表H或n≥0。
2.根据权利要求1所述的一种槲皮素-脂质分子通过二硫键共价结合的脂质材料，其特征在于，当脂质分子为辛癸酸甘油酯时，R1中n＝7，R2中n＝9；当脂质分子为单硬脂酸甘油酯时，R1中n＝17，R2为H；当脂质分子为山嵛酸甘油酯时，R1中n＝21，R2为H。
3.本根据权利要求1所述的一种槲皮素-脂质分子的合成方法，其特征在于，通过以下步骤实现：
以摩尔数为单位份数，称取1份3,3'-二硫代二丙酸，0.2份4-二甲基氨基吡啶和1份1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺溶于无水N,N-二甲基甲酰胺，45℃恒温水浴搅拌30min以活化3,3'-二硫代二丙酸的一端羧基，活化结束后加入1份槲皮素，氮气保护反应12h，完成后于反应中继续加入1份4-二甲基氨基吡啶和1份1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺活化3,3'-二硫代二丙酸另一端的羧基，30min后加入1份脂质分子，氮气保护反应12h，反应完成后将反应液倒入冰水中析出沉淀，4000rpm，10min离心，得到沉淀进行冻干，冻干后样品以洗脱剂为二氯甲烷：甲醇，25：1，v/v作为洗脱剂，通过硅胶柱层析进行纯化，得到槲皮素-脂质分子的脂质材料；其中按照摩尔比1:1选用槲皮素与脂质分子。
以辛癸酸甘油酯为例的合成路线如下：
4.根据权利要求3所述的一种槲皮素-脂质分子的合成方法，其特征在于，所述脂质分子为含羟基脂质分子，选用辛癸酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、山嵛酸甘油酯。
5.一种载紫杉醇脂质纳米粒，其特征在于，通过以下步骤实现：
采用溶剂扩散法制备载紫杉醇槲皮素-脂质分子的脂质纳米粒，将权利要求1所述的槲皮素-脂质分子和紫杉醇溶于无水乙醇，于70℃恒温水浴搅拌溶解作为有机相，水相为10mL含有0.1％泊洛沙姆188的水溶液，70℃恒温水浴加热，将有机相快速均匀注入水相中，加热搅拌5min，冷却至室温，即得到所需载紫杉醇脂质纳米粒。
6.根据权利要求5所述的一种载紫杉醇脂质纳米粒，其特征在于，所述的脂质分子选用辛癸酸甘油酯脂质、槲皮素-单硬脂酸甘油酯脂质、槲皮素-山嵛酸甘油酯脂质。
7.权利要求5或6所述的载紫杉醇脂质纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用。
CN201810765588.8A 2018-07-12 2018-07-12 具有双功能的脂质材料及制备抗肿瘤药物中的应用 Pending CN108904814A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810765588.8A CN108904814A (zh) 2018-07-12 2018-07-12 具有双功能的脂质材料及制备抗肿瘤药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810765588.8A CN108904814A (zh) 2018-07-12 2018-07-12 具有双功能的脂质材料及制备抗肿瘤药物中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108904814A true CN108904814A (zh) 2018-11-30

Family

ID=64411335

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810765588.8A Pending CN108904814A (zh) 2018-07-12 2018-07-12 具有双功能的脂质材料及制备抗肿瘤药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108904814A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2022517434A (ja) * 2019-02-01 2022-03-08 シェンヤン ファーマシューティカル ユニバーシティ リンパ媒介輸送に基づくトリグリセリドプロドラッグおよびその調製方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1850070A (zh) * 2006-03-06 2006-10-25 山东大学 槲皮素固体脂质纳米粒制剂及其制备方法
CN103705943A (zh) * 2014-01-03 2014-04-09 北京大学 一种还原响应型聚乙二醇化药物纳米组合物的制备及其应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1850070A (zh) * 2006-03-06 2006-10-25 山东大学 槲皮素固体脂质纳米粒制剂及其制备方法
CN103705943A (zh) * 2014-01-03 2014-04-09 北京大学 一种还原响应型聚乙二醇化药物纳米组合物的制备及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SHAO-QING CHEN ET AL.: ""Rational Design of Redox-Responsive and P-gp-Inhibitory Lipid Nanoparticles with High Entrapment of Paclitaxel for Tumor Therapy"", 《ADVANCED HEALTHCARE MATERIALS》 *
陈少青: ""环境响应型脂质纳米载体的构建及其应用于肿瘤和炎症治疗的研究"", 《中国博士学位论文全文数据库》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2022517434A (ja) * 2019-02-01 2022-03-08 シェンヤン ファーマシューティカル ユニバーシティ リンパ媒介輸送に基づくトリグリセリドプロドラッグおよびその調製方法
EP3919481A4 (en) * 2019-02-01 2022-09-28 Shenyang Pharmaceutical University TRIGLYCERIDE PRODRUG BASED ON LYMPHATIC-MEDIATED TRANSPORT AND METHOD FOR PREPARING IT

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zhigaltsev et al. Development of a weak-base docetaxel derivative that can be loaded into lipid nanoparticles
Li et al. Histology and antitumor activity study of PTX-loaded micelle, a fluorescent drug delivery system prepared by PEG-TPP
Chen et al. Rational design of redox‐responsive and P‐gp‐inhibitory lipid nanoparticles with high entrapment of paclitaxel for tumor therapy
Gorain et al. Dendrimers as effective carriers for the treatment of brain tumor
CN104530256B (zh) 透明质酸维生素e琥珀酸酯聚合物及其制备和用途
Wu et al. Folate-mediated solid–liquid lipid nanoparticles for paclitaxel-coated poly (ethylene glycol)
Wang et al. Biodegradable polymeric micelles coencapsulating paclitaxel and honokiol: a strategy for breast cancer therapy in vitro and in vivo
KR102190093B1 (ko) 난소암을 특이적으로 표적하는 생분해성 양친성 폴리머, 이로부터 제조된 폴리머 배시클 및 용도
CN104177624A (zh) 含二硫键与酰腙键的双重敏感两亲性三嵌段共聚物及其制备方法与应用
CN102133190A (zh) 一种转铁蛋白纳米粒及其制备方法和用途
Jin et al. Codelivery of thioridazine and doxorubicin using nanoparticles for effective breast cancer therapy
Zhang et al. Cyclic hexapeptide-conjugated nanoparticles enhance curcumin delivery to glioma tumor cells and tissue
CN103751787A (zh) 维生素e tpgs在制备多孔药物载体微粒中的用途
CN108309938A (zh) 主动定制白蛋白冕的药物传递载体及其在药学中的应用
CN111479593A (zh) 奎尼酸-修饰的纳米粒子及其用途
CN102357075A (zh) 一种多西他赛纳米制剂及其制备方法
CN105055375A (zh) 具有抗多药耐药作用的阿霉素和白藜芦醇共递送纳米递药系统
Qu et al. Combination therapy of metastatic castration-recurrent prostate cancer: hyaluronic acid decorated, cabazitaxel-prodrug and orlistat co-loaded nano-system
Zhou Co-drug delivery of regorafenib and cisplatin with amphiphilic copolymer nanoparticles: enhanced in vivo antitumor cancer therapy in nursing care
Chen et al. Adjudin-loaded redox-sensitive paclitaxel-prodrug micelles for overcoming multidrug resistance with efficient targeted Colon cancer therapy
Zhou et al. Transferrin-modified mangiferin-loaded SLNs: preparation, characterization, and application in A549 lung cancer cell
CN108904814A (zh) 具有双功能的脂质材料及制备抗肿瘤药物中的应用
CN103012778B (zh) 一种具有肿瘤主动靶向性的水溶性紫杉醇聚合物
CN101219144B (zh) 一种羟基喜树碱长循环纳米粒及其制备方法
CN112386586A (zh) 一种白蛋白纳米粒的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20181130