CN108902052A - 一种棉蚜室内生物测定的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种棉蚜室内生物测定的方法，包括以下步骤：将棉苗整株浸入杀虫剂中10～20s，取出通风晾干后，置于透气的透光塑料盒中；以每片子叶15～25头的密度接入无翅棉蚜成虫；将所述透光塑料盒置于虫室内，24～48h后检查棉蚜死亡率，计算毒力测定结果。本发明提供的棉蚜室内生物测定的方法，采用棉苗整株浸染杀虫剂，能够更有效地模拟供试棉蚜取食模式，而且本发明在生物测定过程中，能形成一个相对独立的微环境，免除外部不稳定因素对实验的影响，减少变量，提高了生物测定的准确性，明显优于叶碟法。另外，本发明以改装的透明塑料盒进行饲养棉蚜，极大的节省了空间，成本低，操作方便。
Description
技术领域
本发明涉及植物保护领域，尤其涉及一种棉蚜室内生物测定的方法。
背景技术
棉蚜是广泛分布于世界各地的多食性害虫之一，主要危害方式是吸食植物汁液导致叶片卷曲，排泄蜜露影响棉苗光合作用进程并导致病菌滋生，还在瓜类等蔬菜种类中作为植物病毒的传播媒介。且因其具有生殖周期短、繁殖量大的特点，条件合适的情况下极易在短期内爆发，对农业生产造成不可估量的损失。
目前棉蚜的防治主要以化学防治为主，但田间杀虫剂的不合理施用，导致棉蚜抗药性的现象日趋严重。这就需要科研人员对棉蚜的药剂代谢和抗药性机制更多更深入的研究，从而给出更好更快更环保的防治方法和防治策略。现有的棉蚜室内生物测定的方法主要为叶碟法，但叶碟法在叶碟大小、十二孔板和琼脂底座等方面都存在一定缺陷，导致高对照死亡率、棉蚜逃逸和异常死亡等现象发生，影响测试结果的准确度。
另外，研究中也需要以在相对独立、稳定、无毒的条件下饲养得到的棉蚜作为实验材料。目前棉蚜的一般饲养方法为，将棉花种子浸泡过夜，用蛭石种于花盆中，5-7天后长出真叶，轻轻拔出洗净根部后移栽于盛有清水的塑料口杯中，添置于有需要的虫笼中。虫笼为覆有100目尼龙网的50cm*50cm*50cm体积的网笼，需要定制的钢架及足够面积的虫室来安置，空间成本高，特别在单头饲养和保种饲养等方面不实用。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供一种棉蚜室内生物测定的方法，该方法相较现有的叶碟法，测试结果更为准确。
本发明提供的一种棉蚜室内生物测定的方法，包括以下步骤：
(1)将棉苗整株浸入杀虫剂中10～20s，取出通风晾干后，置于透气的透光塑料盒中；
(2)以每片子叶15～25头的密度接入无翅棉蚜成虫；
(3)将所述透光塑料盒置于虫室内，24～48h后检查棉蚜死亡率，计算所述杀虫剂毒力测定结果。
上述技术方案中，先将棉苗整株浸染杀虫剂置于透光塑料盒中，再接入棉蚜，更接近棉蚜取食模式，且不会产生叶碟法中棉蚜逃逸等问题造成的棉蚜异常死亡现象，从而杀虫剂毒力测定结果更为准确。而且，将棉苗置于透光塑料盒中，也能免除部分外部环境不稳定因素对测定结果的影响。
进一步地，检查棉蚜死亡率的标准为：轻触蚜虫，只有一条腿低频晃动或者完全不动的记为死亡。
优选地，所述透光塑料盒为分体式，大小为(9～10)cm*(4～5)cm*(1.5～3)cm或其它适用规格。
上述技术方案中，所述透光塑料盒为分体式，例如推拉式或是盒身与盒盖两半式，方便实验操作。另外，所述透光塑料盒大小比现有的50cm*50cm*50cm体积的网笼体积小，节省空间和成本。
优选地，对所述透光塑料盒进行如下改装：在盒身两侧打2～4个孔，孔直径小于2cm，用铜网封住所述孔；在盒底部打3～5个孔，孔直径小于1.5mm；在所述透光塑料盒下部空间填充吸水性海绵，并在所述海绵中设置夹缝用于安放棉苗根部。
上述技术方案中，在盒身两侧打孔并用铜网封住，是为了既可以进行气体交换，又使棉蚜无法逃逸；在盒底部打孔是为了便于海绵吸水，为固定在其中的棉苗提供所需水分。
优选地，所述透光塑料盒进行改装后，还包括带有凹槽的隔板用于放置并固定棉苗的茎部。
上述技术方案中，透光塑料盒中还带有凹槽的隔板更有利于棉苗的固定，保证棉苗的正常生长。
优选地，所述透光塑料盒中的棉苗为1棵。
上述技术方案中，当透光塑料盒中的棉苗为1棵时，能形成一个相对独立的微环境，不存在棉苗之间的影响，生物测定结果更准确。
优选地，所述棉苗为发芽4～6天长势良好的棉苗。此时叶片大小适宜放置于塑料盒中使用，且棉蚜取食情况好。
优选地，所述虫室条件为温度22±1℃，相对湿度65％～75％,光周期为16h光照:8h黑暗。
上述技术方案中，虫室条件更有利于棉蚜的生存，减少杀虫剂以外的因素造成棉蚜死亡。
优选地，上述方法还包括：在进行棉蚜室内生物测定前，利用所述透光塑料盒饲养所述无翅棉蚜成虫。
上述技术方案中，利用所述透光塑料盒饲养棉蚜既能节省空间，又能在相对独立、稳定、无毒的条件下饲养得到棉蚜用于生物测定，使生物测定结果可靠性更高。
优选地，利用所述透光塑料盒饲养所述无翅棉蚜成虫包括以下步骤：
(1)取发芽4～6天的棉苗洗净，将其根部没于所述海绵夹缝中，所述海绵事先用水浸湿；
(2)接种棉蚜于棉苗子叶上，合上所述透光塑料盒；
(3)以所述棉苗叶片在上、所述海绵在下的方式，将所述透光塑料盒放置于虫室托盘中，所述托盘中装有1～2cm的水。
上述技术方案中，饲养器皿占地小，简单易操作，棉苗生长健康，与采用离体的棉苗器官进行饲养相比，饲养模式更接近田间实际情况，得到的棉蚜用于生物测定，结果更有参考价值。
优选地，利用所述透光塑料盒饲养时，所述棉苗为1棵。
上述技术方案中，当透光塑料盒中的棉苗为1棵时，能形成一个相对独立的微环境，比较适用于单头饲养和保种饲养等方面。
优选地，利用所述透光塑料盒饲养时，棉蚜接种密度为12～22头/cm2。
本发明提供的棉蚜室内生物测定的方法，采用棉苗整株浸染杀虫剂后进行生物测定，能够更有效地模拟供试棉蚜取食模式，而且本发明在生物测定过程中，能形成一个相对独立的微环境，免除外部环境不稳定因素对实验的影响，减少变量，提高了生物测定的准确性，几乎不会产生叶碟法中各种问题造成的棉蚜异常死亡现象，明显优于叶碟法。另外，本发明以改装的透明塑料盒进行饲养棉蚜，极大的节省了空间，成本低，操作方便。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例1中所用塑料收纳盒打孔改装后的照片；
图2为实施例1中棉苗安置后的照片；
图3为实施例1中进行棉蚜饲养时的照片；
图4为其它适用规格透光塑料盒改装后的照片；
图5为其它适用规格透光塑料盒改装后进行棉蚜饲养的照片；
图6为其它适用规格透光塑料盒改装后进行生物测定的照片；
图7为实施例2中叶碟置于十二孔板内的琼脂底座上的照片；
图8为实施例2中棉蚜逃逸进琼脂缝和琼脂底中的照片。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例提供一种棉蚜在改装透明塑料盒中的饲养方法，具体包括以下步骤：
(1)取一个大小为9.2cm*4.4cm*1.8cm的透明推拉式塑料收纳盒，在盒体、盒盖各打1个直径2cm圆孔，然后用100目铜网封住(如图1所示)；
(2)在盒体隔断层中间位置打出一个半径为2mm的凹槽；
(3)在盒底打3个直径为1.5mm的圆孔；
(4)在隔断下部空间填充吸水性强的海绵块，在海绵块中间与隔断凹槽对应的位置划开一定深度的夹缝；
(5)将单株发芽4～6天的棉苗洗净，将其茎部卡于隔板凹槽处，根部没于海绵夹缝中，海绵事先用水浸湿(如图2所示)；
(6)挑取50头健康无翅成蚜(实验室稳定饲养多代的棉蚜田间种群)接于棉苗子叶上，推紧盒盖封口；
(7)将塑料盒放置于虫室(虫室条件为温度22±1℃，相对湿度65％～75％,光周期为16h光照:8h黑暗)托盘中，托盘中倒入1～2cm高度的水，塑料盒中海绵在下便于吸收水分(如图3所示)，每3～5天补充一次水，观察棉蚜生长繁殖情况。
利用本实施例中的塑料盒能够长时间稳定饲养棉蚜，可一直饲养棉蚜至棉苗萎蔫，为期一个月以上。与养虫笼相比空间占用极小，且不影响透气性、取食方式等关键因素，没有蚜虫异常死亡，在单头饲养、保种饲养等方面优于传统养虫笼的饲养方式。
本实施例中的塑料盒也可以替换成其他适用规格的透光塑料盒，改装后的照片及利用改装后的塑料盒进行棉蚜饲养、生物测定的照片分别如图4～6所示。
实施例2
本实施例提供一种棉蚜室内生物测定的方法，具体包括以下步骤：
(1)～(4)同实施例1；
(5)将单株发芽4～6天的棉苗浸入氟啶虫胺腈15s，取出置阴凉通风处晾干，放入塑料盒中固定好；
(6)每片叶子接入15～25头无翅棉蚜成虫，盖好盒盖；
(7)将塑料盒放置于虫室(虫室条件为温度22±1℃，相对湿度65％～75％,光周期为16h光照:8h黑暗)带水的托盘内，48h后检查死亡率，记录毒力测定结果，如表1所示。
其中，检查死亡率的标准为：轻触蚜虫，只有一条腿低频晃动或者完全不动的记为死亡。
表1 利用本发明方法获得的棉蚜对氟啶虫胺腈的生物测定结果
从表1中可以看出，对照无死亡，说明生测结果稳定准确。
对比例
1、研究对象
实验室稳定饲养多代的棉蚜田间种群。
2、方法
供试药剂为氟啶虫胺腈。采用叶碟法，在十二孔板中进行室内毒力测定。
2.1药剂配制
用丙酮溶解原药、容量瓶定容，于药剂瓶中4℃保存。毒力测定前，4℃取出放至室温，用含0.01％(v/v)TritonX-100的蒸馏水稀释至所需浓度。
2.2叶碟法毒力测定
选用实验室自行培养的无虫大棉花叶片，用直径15mm的打孔器打出所需个数的叶碟。去离子水溶解琼脂条配置成1.5％～2％的琼脂，倒入十二孔板各孔1/3处。将叶碟浸入各浓度15s，取出后在阴凉通风处晾干，置于十二孔板内的琼脂底座上(如图7所示)。
用毛笔挑取健康的无翅成蚜，每孔放置25～40头，宣纸封口，在实验室人工气候室中饲养(温度22±3℃，相对湿度60％～75％，光照16h:8h(L:D))，48h后检查结果。死亡标准为毛笔轻触蚜虫，试虫不动或只有单足微弱颤动。结果记录如表2。
表2 利用叶碟法获得的棉蚜对氟啶虫胺腈的生物测定结果
图8所示为棉蚜逃逸进琼脂缝和琼脂底中，从而导致异常死亡。上述结果表明，现阶段用于棉蚜生物测定的叶碟法，存在叶碟不易保持水分、棉蚜逃逸造成异常死亡和高对照死亡率(高于10％)等问题，影响了生物测定结果的准确度。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种棉蚜室内生物测定的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将棉苗整株浸入杀虫剂中10～20s，取出通风晾干后，置于透气的透光塑料盒中；
(2)以每片子叶15～25头的密度接入无翅棉蚜成虫；
(3)将所述透光塑料盒置于虫室内，24～48h后检查棉蚜死亡率，计算所述杀虫剂毒力测定结果。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，对所述透光塑料盒进行如下改装：在盒身两侧打2～4个孔，孔直径小于2cm，用铜网封住所述孔；在盒底部打3～5个孔，孔直径小于1.5mm；在所述透光塑料盒下部空间填充吸水性海绵，并在所述海绵中设置夹缝用于安放棉苗根部。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述透光塑料盒进行改装后，还包括带有凹槽的隔板用于放置并固定棉苗的茎部。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述透光塑料盒中的棉苗为1棵。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述棉苗为发芽4～6天长势良好的棉苗。
6.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，所述虫室条件为温度22±1℃，相对湿度65％～75％,光周期为16h光照:8h黑暗。
7.根据权利要求1～6任一项所述的方法，其特征在于，还包括：在进行棉蚜室内生物测定前，利用所述透光塑料盒饲养所述无翅棉蚜成虫。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，利用所述透光塑料盒饲养所述无翅棉蚜成虫，包括以下步骤：
(1)取发芽4～6天的棉苗洗净，将其根部没于所述海绵夹缝中，所述海绵事先用水浸湿；
(2)接种棉蚜于棉苗子叶上，合上所述透光塑料盒；
(3)以所述棉苗叶片在上、所述海绵在下的方式，将所述透光塑料盒放置于虫室托盘中，所述托盘中装有1～2cm的水。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，利用所述透光塑料盒饲养时，所述棉苗为1棵。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，利用所述透光塑料盒饲养时，棉蚜接种密度为12～22头/cm2。
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