CN108901826A - 一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法 - Google Patents

一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，步骤包括：选择优质水稻品种为母本，有明确抗病基因水稻品种为父本，进行杂交，获得F1代种子，种植获得F2种子；将F2种子脱壳成糙米，选取无垩白的完整糙米切成两个半粒，一一对应，其中有胚乳的半粒发苗、取样，并分子标记检测抗病基因；另半粒刮去种皮和糊粉层后碾磨成精米粉，用于测定单粒种子直链淀粉含量；筛选含纯合抗病基因、直链淀粉含量在13‑18％之间的幼苗进行移栽，选择综合农艺性状优良的单株，系谱法选育，室内考种、筛选，自交至F7代；测定F7代不同株系种子的各项品质指标，选择优质品系，即得优质抗病水稻品种。本发明大大缩短了育种年限，同时既节约田间育种用地又减少田间工作量。

Description

一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法
技术领域
本发明涉及水稻遗传改良与生物技术领域，具体涉及一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法。
背景技术
水稻是我国最主要的粮食作物之一，在过去相当长的一段时间，由于我国人口众多，为解决粮食不足，高产育种一直是我国育种家的首要目标，而品质改良相对滞后。近年来，随着人民生活水平和消费水平的不断提高，对稻米品质的要求越来越高。特别是农业供给侧结构的改革，突出要推广优质水稻品种，使水稻的品种和质量能更好的符合市场需求。
稻瘟病和白叶枯病是制约水稻大面积生产的主要病害，近年来，稻瘟病和白叶枯病在生产上普遍发生，给水稻大面积生产造成了很大损失，全球平均每年由病害造成的水稻产量损失足以养活6000万以上人口，导致经济损失高达数十亿美元。实践证明，水稻抗病品种的选育与种植是控制病害最有效的措施。
目前市场上中低端水稻品种较为充足，优质且抗稻瘟病或白叶枯病的高端水稻品种较为匮乏，因此，选育优质且抗病的水稻品种是目前育种的重要目标。而期望在水稻优质和抗病育种方面都有所突破，必须建立一套能够对水稻后代材料同时进行优质和抗病筛选鉴定的科学准确的选育方法，进而快速精准培育出优质抗病水稻品种。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，其解决了目前市场上优质且抗稻瘟病或白叶枯病的高端水稻品种较为匮乏的问题。
本发明通过以下技术方案来实现上述目的：
一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，步骤包括
(1)选择优质水稻品种为母本，有明确抗病基因水稻品种为父本，进行杂交，获得F1代种子，种植F1代种子，获得F2种子；
(2)将步骤(1)中F2种子脱壳成糙米，选取无垩白的完整糙米并将其切成两个半粒，一一对应，其中有胚乳的半粒发苗、取样，并分子标记检测抗病基因；其中没有胚乳的半粒刮去种皮和糊粉层后碾磨成精米粉，用于测定单粒种子直链淀粉含量；
(3)筛选步骤(2)中含纯合抗病基因、直链淀粉含量在13-18％之间的幼苗进行移栽，选择综合农艺性状优良的单株，系谱法选育，室内考种、筛选，自交至F7代；
(4)测定F7代不同株系种子的各项品质指标，选择优质品系，即得优质抗病水稻品种。
进一步改进在于，步骤(1)中所述母本与父本千粒重不低于22g，保证F2种子半粒的重量能够达到后续检测需要。
进一步改进在于，步骤(1)中所述优质水稻品种为携带或不携带抗病基因的水稻品种，所述有明确抗病基因水稻品种为含有抗稻瘟病基因或抗白叶枯病基因的水稻品种。
进一步改进在于，步骤(2)中，选取无垩白的完整糙米不低于3000粒，其中含胚乳的半粒糙米置于96孔PCR板中发芽至两叶一心，无胚乳的半粒置于另一PCR板中，一一对应编号。
进一步改进在于，步骤(2)中，标记检测抗病基因具体包含如下步骤：根据抗病基因序列设计特异性扩增引物，提取待测样品基因组DNA，并以待测样品基因组DNA为模板进行PCR扩增，获得的PCR扩增产物经电泳检测后，记录样品DNA的特征谱带；
其中，所述提取待测样品基因组DNA的具体步骤包括：
对应剪取96孔PCR板的幼苗一个叶片，装入96孔深孔板中，放入-80℃冰箱冷冻1h，用组织捣碎仪打碎样品，加入300uL含200mM PH8.0Tris-HCL、25mM PH8.0EDTA、1％SDS的提取液，充分混匀，加入150uL 7.5M NH4AC溶液，轻摇2min，4000r/min离心15min，抽提上清200uL置新的96孔深孔板中，加入2倍体积冰冻无水乙醇，4000r/min离心15min，弃上清，于室温下充分干燥，加双蒸水溶解DNA，即为待测样品基因组DNA，4℃下保存备用。
进一步改进在于，步骤(2)中，直链淀粉含量的检测具体包括如下步骤：
A、样品吸光度值的测定
称取步骤(2)中精米粉样品10mg，置于10mL容量瓶中，加入0.1mL 95％乙醇溶液，轻摇容量瓶使样品湿润分散，加入0.9mL 1.00ml/L的氢氧化钠溶液，使碱液沿颈壁缓慢留下，旋转容量瓶，使碱液冲洗粘附于瓶壁上的样品，将容量瓶置沸水浴中煮10min后取出，冷却至室温后加蒸馏水定容，充分摇匀，静置20min，得到样品溶液。相对于传统样品溶液的制备，本方法选取的精米粉样品10mg来自半粒米，样品取样量仅为半粒量，相比较现有技术缩小了10倍以上，并且精度不变。
吸取上述0.5mL样品溶液，加入已盛有5mL蒸馏水的试管中，再在试管中加入0.1mL1.00mol/L的乙酸溶液，使样品酸化，加入0.2mL碘液，充分摇匀，用蒸馏水定容，静置20min，再以0.09mol/L的氢氧化钠溶液代替样品，配制空白溶液，用空白溶液于分光光度计波长620nm处调节零点并测出有色样品液的吸光度值；
B、标准曲线的绘制
称取与待测样品保存在同样条件下三天以上的直链淀粉含量为1.5％，10.4％，16.2％，26.5％4个标准样品，方法同步骤A，再以标样的直链淀粉含量为纵坐标，以相对应的吸光度为横坐标，绘制标准曲线；
C、直链淀粉含量的计算
将步骤A中测得的吸光度值带入步骤B绘制的标准曲线，计算直链淀粉含量。
进一步改进在于，步骤(4)中所述水稻品质指标为NY/T 593-2013食用稻品种品质指标。
本发明的有益效果在于：
(1)目标明确，精准快速：一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法开创性的提出在F2代采用“半粒法”同步进行水稻抗病基因的筛选以及直链淀粉含量的测定，目标更明确；同时克服了现有聚合优质与抗病育种年限长的的不足，常规方法需要6-8年，本方法只需3-4年，大大缩短了育种年限。
(2)减少田间用地和育种工作量：一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法在F2代大群体就进行室内大批量筛选，筛选出约十分之一群体大小的单株，再移栽大田，大大减少了田间育种用地，节约成本，同时减少田间工作量。
附图说明
图1为本发明的方法流程图；
图2是F2群体进行稻瘟病抗性基因Pi-2分子标记筛选的特征谱带，1-38为不同单株，(-)和(+)分别代表阴性和阳性对照，其中编号12、14、15、19、21、27、29、30、32、34、35、36含有纯合Pi-2基因，保留；编号1、2、3、6、7、13、20、22、23、24、25、28、33含有Pi-2杂合基因，淘汰；编号4、5、8、9、10、11、16、17、18、26、31、37、38不含Pi-2基因，淘汰。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本申请作进一步详细描述，有必要在此指出的是，以下具体实施方式只用于对本申请进行进一步的说明，不能理解为对本申请保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述申请内容对本申请作出一些非本质的改进和调整。
实施例1
本发明实施例中所用母本“中健2号”出糙率82.6％，整精米率60.6％，长宽比3.7，垩白度0.3％，透明度1级，直链淀粉含量18.1％，胶稠度62mm，千粒重27g，感穗颈稻瘟病，有香味，2003年湖南审定(XS009-2003)；所用父本“五山丝苗”出糙率78.8％，整精米率62.5％，长宽比3.0，垩白度1.9％，直链淀粉含量16.6％，胶稠度70mm，千粒重23.6g，抗稻瘟病(含稻瘟病抗性基因Pi-2)，2009年广东审定(粤审稻2009031)，2016年安徽审定(皖稻2016055)。
一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，如图1所示,包括以下步骤：
一、2013年冬季于海南，以优质水稻品种“中健2号”为母本，含稻瘟病抗性基因Pi-2的水稻品种“五山丝苗”为父本，杂交得到F1种子；
二、2014年夏季于合肥，种植F1种子，收获得F2种子；将F2种子经FC-2K型糙米机脱壳成糙米，优选无垩白的完整糙米3072粒，用干净刀片将糙米切成两个半粒，有胚乳半粒与无胚乳半粒一一对应分别放入相应96孔PCR板，PCR板分别编号1-32板。其中有胚乳半粒PCR板底部剪开小口，半粒糙米漏不下去即可(便于发芽时吸水)，无胚乳半粒糙米放入对应的PCR板中备用，用于测定直链淀粉含量。
有胚乳半粒糙米发芽至两叶一心时分子标记检测Pi-2基因，步骤如下：
(1)DNA提取：
对应剪取96孔PCR板的幼苗一个叶片，装入96孔深孔板中，放入-80℃冰箱冷冻1h，用组织捣碎仪打碎样品，加入300uL含200mM PH8.0Tris-HCL、25mM PH8.0EDTA、1％SDS的提取液，充分混匀，加入150uL 7.5M NH4AC溶液，轻摇2min，4000r/min离心15min，抽提上清200uL置新的96孔深孔板中，加入2倍体积冰冻无水乙醇，4000r/min离心15min，弃上清，于室温下充分干燥，加双蒸水溶解DNA，即为待测样品基因组DNA，4℃下保存备用；
(2)PCR扩增：
①反应体系
反应体系由样品基因组DNA、含Mg2+的buffer、dNTPs、引物、Taq酶和ddH2O构成。总体积为：20uL。其体积比为：2∶3.5∶2∶1∶0.5∶11。其中Pi-2引物序列为AP22F：5’-GTGCATGAGTCCAGCTCAAA-3’，AP22R：5’-GTGTACTCCCATGGCTGCTC-3’；
在配置PCR反应混合液过程中，始终保持在冰上进行。在最后一步加入Taq酶后，迅速混匀，快速分装到96孔PCR板内，盖上专用封口盖，在PCR仪上进行扩增反应。
②反应条件
先进行95℃下的预变性5min；接着以94℃下变性45sec、58℃退火45sec、72℃下延伸1min为一个循环，进行32个循环反应；最后在72℃下延伸5min，反应完成后，加入Loadingbuffer终止反应，得扩增产物，4℃下保存备用。
(3)电泳检测，步骤(2)中的扩增产物经8％的双垂直板非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，220V稳压电泳直至溴酚蓝指示剂迁移至可以使扩增DNA片段能够被清楚识别的距离时，停止电泳；银染法染色拍照记录样品DNA的特征谱带，如图2所示(显示部分检测结果)；
通过上述步骤分子标记筛选得到含有纯合抗稻瘟病基因的单株714份，将这714份单株对应的无胚乳半粒糙米取出，测定直链淀粉含量，步骤如下：
(1)精米粉制备：
用刀片刮去种皮和糊粉层，得到精米，用碾磨棒碾磨成精米粉。
(2)测定吸光度：
称取精米粉样品10mg，置于10mL容量瓶中，加入0.1mL 95％乙醇溶液，轻摇容量瓶使样品湿润分散，加入0.9mL 1.00ml/L的氢氧化钠溶液，使碱液沿颈壁缓慢留下，旋转容量瓶，使碱液冲洗粘附于瓶壁上的样品。将容量瓶置沸水浴中煮10min后取出，冷却至室温后加蒸馏水定容，充分摇匀，静置20min。吸取0.5mL样品溶液，加入已盛有5mL蒸馏水的试管中，再在试管中加入0.1mL 1.00mol/L的乙酸溶液，使样品酸化，加入0.2mL碘液，充分摇匀。用蒸馏水定容，静置20min。以0.09mol/L的氢氧化钠溶液代替样品，配制空白溶液。用空白溶液于分光光度计波长620nm处调节零点并测出有色样品液的吸光度值。
(3)标准曲线的绘制：
称取与待测样品保存在同样条件下三天以上的直链淀粉含量为1.5％，10.4％，16.2％，26.5％4个标准样品，方法同步骤(2)，以标样的直链淀粉含量为纵坐标，以相对应的吸光度为横坐标，绘制标准曲线。
(4)直链淀粉含量的计算
将步骤(1)中测得的吸光度值带入标准曲线计算直链淀粉含量。
通过上述直链淀粉含量的测定，筛选直链淀粉含量在13％-18％之间有249份，这249份既含有稻瘟病纯合Pi-2抗性基因，直链淀粉含量在部标一级稻米范围内。2014年冬季将对应幼苗带至海南移栽至大田得F2群体249株，田间农艺性状筛选，收获得F3单株31株。
2015年夏季至2017年夏季，系谱法选择，结合田间综合农艺性状筛选和室内考种结果，得F7种子，根据NYT593-2013食用稻品种品质标准对F7单系种子的各项稻米品质指标进行检测，最终筛选得到稻米品质达到NYT593-2013食用稻品种品质二级以上且含有纯合稻瘟病抗性基因，农艺性状优良且有香味的3个单系，综合品质指标为：出糙率≥79％，整精米率≥58.0％，垩白度≤1，直链淀粉含量14％-18％，胶稠度≥80mm，且高抗稻瘟病。
2017年冬季海南种植3个单系，即优质抗稻瘟病水稻品系，分别命名为荃香68、荃香118、荃香158。
实施例2
本发明实施例中所用母本“鄂中5号”出糙率78.1％，整精米率60.0％，长宽比3.6，垩白粒率0.0％，垩白度0.0％，直链淀粉含量15.1％，胶稠度83毫米，2004年湖北审定(鄂审稻2004010)；所用父本为安徽荃银高科种业股份有限公司自育优良中间材料“BJ206”，出糙率79.2％，整精米率61.9％，长宽比3.1，垩白度2.6％，直链淀粉含量14.3％，胶稠度74mm，千粒重24.2g，抗白叶枯病(含白叶枯抗性基因Xa23)，可购买于安徽荃银高科种业股份有限公司。
一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，包括以下步骤：
一、2013年冬季于海南，以优质水稻品种“鄂中5号”为母本，含白叶枯抗性基因Xa-23的水稻品种“BJ206”为父本，杂交得到F1种子；
二、2014年夏季于合肥，种植F1种子，收获得F2种子；将F2种子经FC-2K型糙米机脱壳成糙米，优选无垩白的完整糙米3162粒，用干净刀片将糙米切成两个半粒，有胚乳半粒与无胚乳半粒一一对应分别放入相应96孔PCR板，PCR板分别编号1-33板。其中有胚乳半粒PCR板底部剪开小口，半粒糙米漏不下去即可(便于发芽时吸水)，无胚乳半粒糙米放入对应的PCR板中备用，用于测定直链淀粉含量。
有胚乳半粒糙米发芽至两叶一心时分子标记检测Xa-23基因，分子标记检测步骤如下：
(1)DNA提取步骤同实施例1，在此不做重复描述；
(2)PCR扩增：
①反应体系
反应体系由样品基因组DNA、含Mg2+的buffer、dNTPs、引物、Taq酶和ddH2O构成。总体积为：20uL。其体积比为：2∶3.5∶2∶1∶0.5∶11。其中Xa-23引物序列为C189F：5’-TAAGTTCTACATCGACCCCA-3’，C189R：5’-CACATGAAGAGCTGGAAACG-3’；
在配置PCR反应混合液过程中，始终保持在冰上进行。在最后一步加入Taq酶后，迅速混匀，快速分装到96孔PCR板内，盖上专用封口盖，在PCR仪上进行扩增反应。
②反应条件
先进行95℃下的预变性5min；接着以94℃下变性45sec、56℃退火45sec、72℃下延伸1min为一个循环，进行32个循环反应；最后在72℃下延伸5min，反应完成后，加入Loadingbuffer终止反应，得扩增产物，4℃下保存备用。
(3)电泳检测，步骤(2)中的扩增产物经1％的琼脂糖电泳分离，150V稳压电泳直至溴酚蓝指示剂迁移至可以使扩增DNA片段能够被清楚识别的距离时，停止电泳；放入凝胶成像系统拍照记录样品DNA的特征谱带；
上述分子标记筛选得到含有纯合抗白叶枯病基因的单株782份，将这782份单株对应的无胚乳半粒糙米取出，测定直链淀粉含量，直链淀粉含量检测过程同实施例1。
筛选直链淀粉含量在13％-18％之间有261份，这261份既含有白叶枯病纯合Xa-23抗性基因，直链淀粉含量在部标一级稻米范围内。2014年冬季将对应幼苗带至海南移栽至大田得F2群体261株，田间农艺性状筛选，收获得F3单株23株。
2015年夏季至2017年夏季，系谱法选择，结合田间综合农艺性状筛选和室内考种结果，得F7种子，根据NYT593-2013食用稻品种品质标准对F7单系种子的各项稻米品质指标进行检测，最终筛选得到稻米品质达到NYT593-2013食用稻品种品质二级以上且含有纯合白叶枯病抗性基因，农艺性状优良的2个单系，综合品质指标为：出糙率≥79％，整精米率≥58.0％，垩白度≤1，直链淀粉含量14％-18％，胶稠度≥80mm，且高抗白叶枯病。
2017年冬季海南种植2个单系，即优质抗白叶枯病水稻品系，分别命名为荃恢508、荃恢608。
实施例3
本发明实施例中所用母本“五山丝苗”出糙率78.8％，整精米率62.5％，长宽比3.0，垩白度1.9％，直链淀粉含量16.6％，胶稠度70mm，千粒重23.6g，抗稻瘟病(含稻瘟病抗性基因Pi-2)，2009年广东审定(粤审稻2009031)，2016年安徽审定(皖稻2016055)；所用父本为安徽荃银高科种业股份有限公司自育优良中间材料“BJ206”，出糙率79.2％，整精米率61.9％，长宽比3.1，垩白度2.6％，直链淀粉含量14.3％，胶稠度74mm，千粒重24.2g，抗白叶枯病(含白叶枯抗性基因Xa23)，可购买于安徽荃银高科种业股份有限公司。
一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，包括以下步骤：
一、2013年冬季于海南，以优质水稻品种“五山丝苗”为母本，含白叶枯抗性基因Xa-23的水稻品种“BJ206”为父本，杂交得到F1种子；
二、2014年夏季于合肥，种植F1种子，收获得F2种子；将F2种子经FC-2K型糙米机脱壳成糙米，优选无垩白的完整糙米4512粒，用干净刀片将糙米切成两个半粒，有胚乳半粒与无胚乳半粒一一对应分别放入相应96孔PCR板，PCR板分别编号1-47板。其中有胚乳半粒PCR板底部剪开小口，半粒糙米漏不下去即可(便于发芽时吸水)，无胚乳半粒糙米放入对应的PCR板中备用，用于测定直链淀粉含量。
有胚乳半粒糙米发芽至两叶一心时分子标记同时检测抗稻瘟病基因Pi-2和抗白叶枯病基因Xa-23，分子标记检测步骤同实施例1和实施例2，在此不做重复描述；
上述分子标记筛选得到同时含有纯合抗稻瘟病基因和纯合抗白叶枯病基因的单株523份，将这523份单株对应的无胚乳半粒糙米取出，测定直链淀粉含量，直链淀粉含量检测过程同实施例1。
筛选直链淀粉含量在13％-18％之间有194份，这194份既含有纯合抗稻瘟病基因Pi-2又含有纯合抗白叶枯病基因Xa-23，同时直链淀粉含量在部标一级稻米范围内。2014年冬季将对应幼苗带至海南移栽至大田得F2群体194株，田间农艺性状筛选，收获得F3单株27株。
2015年夏季至2017年夏季，系谱法选择，结合田间综合农艺性状筛选和室内考种结果，得F7种子，根据NYT593-2013食用稻品种品质标准对F7单系种子的各项稻米品质指标进行检测，最终筛选得到稻米品质达到NYT593-2013食用稻品种品质二级以上且含有纯合稻瘟病抗性基因和纯合白叶枯病抗性基因，农艺性状优良的2个单系，综合品质指标出糙率≥79％，整精米率≥58.0％，垩白度≤1，直链淀粉含量14％-18％，胶稠度≥80mm，且高抗稻瘟病和白叶枯病。
2017年冬季海南种植2个单系，即优质抗稻瘟病和抗白叶枯病水稻品系，分别命名为荃抗恢198、荃抗恢298。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，其特征在于：步骤包括
(1)选择优质水稻品种为母本，有明确抗病基因水稻品种为父本，进行杂交，获得F1代种子，种植F1代种子，获得F2种子；
(2)将步骤(1)中F2种子脱壳成糙米，选取无垩白的完整糙米并将其切成两个半粒，一一对应，其中有胚乳的半粒发苗、取样，并分子标记检测抗病基因；其中没有胚乳的半粒刮去种皮和糊粉层后碾磨成精米粉，用于测定单粒种子直链淀粉含量；
(3)筛选步骤(2)中含纯合抗病基因、直链淀粉含量在13-18％之间的幼苗进行移栽，选择综合农艺性状优良的单株，系谱法选育，室内考种、筛选，自交至F7代；
(4)测定F7代不同株系种子的各项品质指标，选择优质品系，即得优质抗病水稻品种。
2.根据权利要求1所述的一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，其特征在于：步骤(1)中所述母本与父本千粒重不低于22g。
3.根据权利要求1所述的一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，其特征在于：步骤(1)中所述优质水稻品种为携带或不携带抗病基因的水稻品种，所述有明确抗病基因水稻品种为含有抗稻瘟病基因或抗白叶枯病基因的水稻品种。
4.根据权利要求1所述的一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，其特征在于：步骤(2)中，选取无垩白的完整糙米不低于3000粒，其中含胚乳的半粒糙米置于96孔PCR板中发芽至两叶一心，无胚乳的半粒置于另一PCR板中，一一对应编号。
5.根据权利要求4所述的一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，其特征在于：步骤(2)中，标记检测抗病基因具体包含如下步骤：根据抗病基因序列设计特异性扩增引物，提取待测样品基因组DNA，并以待测样品基因组DNA为模板进行PCR扩增，获得的PCR扩增产物经电泳检测后，记录样品DNA的特征谱带；
其中，所述提取待测样品基因组DNA的具体步骤包括：
对应剪取96孔PCR板的幼苗一个叶片，装入96孔深孔板中，放入-80℃冰箱冷冻1h，用组织捣碎仪打碎样品，加入300uL含200mM PH8.0 Tris-HCL、25mM PH8.0 EDTA、1％SDS的提取液，充分混匀，加入150uL 7.5M NH4AC溶液，轻摇2min，4000r/min离心15min，抽提上清200uL置新的96孔深孔板中，加入2倍体积冰冻无水乙醇，4000r/min离心15min，弃上清，于室温下充分干燥，加双蒸水溶解DNA，即为待测样品基因组DNA，4℃下保存备用。
6.根据权利要求1所述的一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，其特征在于：步骤(2)中，直链淀粉含量的检测具体包括如下步骤：
A、样品吸光度值的测定
称取步骤(2)中精米粉样品10mg，置于10mL容量瓶中，加入0.1mL 95％乙醇溶液，轻摇容量瓶使样品湿润分散，加入0.9mL 1.00ml/L的氢氧化钠溶液，使碱液沿颈壁缓慢留下，旋转容量瓶，使碱液冲洗粘附于瓶壁上的样品，将容量瓶置沸水浴中煮10min后取出，冷却至室温后加蒸馏水定容，充分摇匀，静置20min，吸取0.5mL样品溶液，加入已盛有5mL蒸馏水的试管中，再在试管中加入0.1mL 1.00mol/L的乙酸溶液，使样品酸化，加入0.2mL碘液，充分摇匀，用蒸馏水定容，静置20min，再以0.09mol/L的氢氧化钠溶液代替样品，配制空白溶液，用空白溶液于分光光度计波长620nm处调节零点并测出有色样品液的吸光度值；
B、标准曲线的绘制
称取与待测样品保存在同样条件下三天以上的直链淀粉含量为1.5％，10.4％，16.2％，26.5％4个标准样品，方法同步骤A，再以标样的直链淀粉含量为纵坐标，以相对应的吸光度为横坐标，绘制标准曲线；
C、直链淀粉含量的计算
将步骤A中测得的吸光度值带入步骤B绘制的标准曲线，计算直链淀粉含量。
7.根据权利要求1所述的一种快速精准选育优质抗病水稻品种的方法，其特征在于：步骤(4)中所述水稻品质指标为NY/T 593-2013食用稻品种品质指标。
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