CN108896675A - 一种l-瓜氨酸-dl-苹果酸的高效液相检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种L‑瓜氨酸‑DL‑苹果酸的高效液相检测方法,色谱条件为:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;流动相:19~21g/L磷酸氢二铵溶液,pH2.0±0.1;检测波长:212~216nm;柱温:25~35℃。本方法所得色谱峰与杂质峰有很好的分离效果,能够准确测定出待测样品中L‑瓜氨酸‑DL‑苹果酸的含量,可用于检测待测产品中L‑瓜氨酸‑DL‑苹果酸的含量。并且本发明操作便捷,在同样的时间内可以检测多个样品,显著提高了检测的工作效率,节省了人工、时间和溶剂等成本。

Description

一种L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法
技术领域
本发明属于色谱柱技术领域,尤其涉及一种L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法。
背景技术
L-瓜氨酸,是一种α氨基酸,是从鸟氨酸及胺基甲醯磷酸盐在尿素循环中生成,或是透过一氧化氮合酶(NOS)催化生成精氨酸的副产物。首先精氨酸会被氧化为N-羟基-精氨酸,然后再氧化成瓜氨酸并释出一氧化氮。瓜氨酸可以使人的血管获得松弛,可用于增强男性性功能,以及治疗性功能障碍,并能够维护健康的肺功能,提高脑力清晰度,有帮助脑神经细胞贮藏与调回讯息的功能。
DL-苹果酸是人体必需的一种有机酸,是生物体三羧酸的循环中间体,口感接近天然果汁并具有天然香味,产生的热量低,口味好,因此广泛应用于多种食品中,是目前世界食品工业中用量最大和发展前景较好的有机酸之一。DL-苹果酸还可以用于治疗肝病、贫血、免疫力低下、尿毒症、高血压、肝衰竭等多种疾病,并能减轻抗癌药物对正常细胞的毒害作用;还可用于制备和合成驱虫剂、抗牙垢剂等。
二者组合而成的L-瓜氨酸-DL-苹果酸能够增加运动中ATP的产生率和运动后磷酸肌酸恢复率,从而明显降低疲劳感,因此可以被用于人类体格增强补剂或运动增补剂。但现有技术中暂无检测L-瓜氨酸-DL-苹果酸的方法。
发明内容
针对现有技术暂无检测L-瓜氨酸-DL-苹果酸的方法的问题,本发明提供一种L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法。
为达到上述发明目的,本发明实施例采用了如下的技术方案:
一种L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法,色谱条件如下:
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;
流动相:19~21g/L磷酸氢二铵溶液,pH为2.0±0.1;
检测波长:212~216nm;
柱温:25~35℃;
流动相流速:0.7~1.0mL/min。
本方法所得色谱峰与杂质峰有很好的分离效果,能够准确测定出待测样品中L-瓜氨酸-DL-苹果酸的含量,可用于检测待测产品中L-瓜氨酸-DL-苹果酸的含量。并且当样品数量较多时,本发明在同样的时间内可以检测更多样品,显著提高了检测的工作效率,节省了人工、时间和溶剂等成本。
优选地,所述磷酸氢二铵溶液的浓度为20g/L。
优选地,所述检测波长为214nm。
优选地,所述柱温为30℃。柱温范围接近室温,容易控制温度使其稳定,样品在该温度范围内分离良好。
优选地,上述L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法包括如下步骤:
步骤a、配制含有L-瓜氨酸-DL-苹果酸对照品的对照品溶液;
步骤b、用高效液相色谱法对所述对照品溶液进行检测,根据所得峰面积绘制L-瓜氨酸-DL-苹果酸对照品的标准曲线,得出L-瓜氨酸-DL-苹果酸对照品的浓度-峰面积线性回归方程;
步骤c、提供待测样品,用所述色谱条件对所述待测样品进行检测,将得到的峰面积代入所述浓度-峰面积线性回归方程,计算所述待测样品中L-瓜氨酸-DL-苹果酸的含量。
相对于现有技术而言,本发明采用高效液相色谱法的操作步骤中,样品的处理方法简单、操作便捷,能够提高工作效率。
具体地,步骤a中所述L-瓜氨酸对照品溶液至少为5份,浓度范围相当于L-瓜氨酸0.84~1.96mg/mL,DL-苹果酸0.324~0.756mg/mL,溶剂的组成与流动相相同。在该浓度范围内的L-瓜氨酸溶液可以得到线性良好的标准曲线。以流动相为溶剂,可避免引入其他杂质对实验结果产生干扰。
优选地,步骤c中所述待测样品在检测前用与流动相组成相同的溶剂溶解,避免引入其他杂质对实验结果产生干扰。
优选地,所述待测样品为含有L-瓜氨酸-DL-苹果酸的溶液,在检测前用与流动相组成相同的溶剂稀释。
附图说明
下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明,附图中:
图1是本发明实施例1的对照品溶液高效液相色谱图;
图2是本发明实施例1的待测品溶液高效液相色谱图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图及实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
实施例1
本发明实施例提供了一种L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法,采用的高效液相色谱仪为天美L-3000,色谱柱为PERKINELMER C18柱(5μm,4.6*250mm),进样体积为20μl(定量环)。包括如下步骤:
1、配制含有L-瓜氨酸-DL-苹果酸对照品的对照品溶液,每份对照品溶液中的对照品含量分别相当于L-瓜氨酸0.84mg/mL、1.12mg/mL、1.40mg/mL、1.68mg/mL、1.96mg/mL,DL-苹果酸0.324mg/mL、0.432mg/mL、0.540mg/mL、0.648mg/mL、0.756mg/mL;
2、用高效液相色谱法对所述对照品溶液进行检测,色谱条件为:
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;
流动相:20g/L磷酸氢二铵溶液,pH为2.0±0.1;
检测波长:214nm;
柱温:30℃;
流动相流速:0.8mL/min。
取对照品溶液20μl注入高效液相色谱仪进行检测,L-瓜氨酸浓度与峰面积的结果见表1,DL-苹果酸浓度与峰面积的结果见表2。各色谱图的理论塔板数大于5000,且与杂峰分离度良好,其中L-瓜氨酸浓度为1308.90μg/mL、DL-苹果酸浓度为539.5μg/mL的色谱图如图1所示,4.253min为L-瓜氨酸的峰,5.340min为DL-苹果酸的峰,其余的为杂峰,主峰的出峰时间适宜,且与杂峰分离度良好。
表1
表2
根据对照品浓度和相应峰面积绘制L-瓜氨酸-DL-苹果酸对照品的标准曲线,以峰面积为横坐标,以浓度为纵坐标,得出L-瓜氨酸的浓度-峰面积线性回归方程:y=0.0012x-81.012,R2=0.9998,DL-苹果酸的浓度-峰面积线性回归方程:y=0.0007x+7.224,R2=0.9998;
3、提供含有L-瓜氨酸-DL-苹果酸的待测样品0.5mL,用流动相稀释至10mL,在与对照品溶液完全相同的检测条件下,对所述待测样品进行检测,得到L-瓜氨酸峰面积为1161677,DL-苹果酸峰面积为760394,将该峰面积代入上述浓度-峰面积线性回归方程,计算所述待测样品中相当于含有L-瓜氨酸26.26mg/mL(外标法测得含量为26.24mg/mL),含有DL-苹果酸10.79mg/mL(外标法测得含量为10.81mg/mL)。
4、精密度考察
取L-瓜氨酸浓度为1308.90μg/mL、DL-苹果酸浓度为539.5μg/m的对照品溶液20μl注入高效液相色谱仪,在上述检测条件下进行检测,重复6针。所得L-瓜氨酸的峰面积分别为1155464、1154745、1155900、1152339、1146329、1149672,平均值为1152408.17,RSD为0.33%;DL-苹果酸的峰面积分别为747681、747159、746952、743218、742089、743101,平均值为745033.33,RSD为0.33%。以上结果说明本实施例提供的L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法精密度良好。
5、稳定性考察
取一份L-瓜氨酸-DL-苹果酸对照品溶液,于配制后0h、4h、8h、12h取20μl注入高效液相色谱仪,在上述检测条件下进行检测,其L-瓜氨酸峰面积分别为1155531、1148455、1146605、1147247,平均值为1145459.5,RSD为0.36%,DL-苹果酸峰面积分别为749066、741975、743376、741145,平均值为743890.5,RSD为0.49%。以上结果说明本实施例提供的L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法稳定性良好。
6、回收率考察
精密称取含有相当于L-瓜氨酸56mg与DL-苹果酸21.6mg,L-瓜氨酸70mg与DL-苹果酸27mg,L-瓜氨酸84mg与DL-苹果酸32.4mg的样品,各3份,分别于50mL容量瓶中用流动相溶解稀释定容,计算出每份加入质量,取20μl注入高效液相色谱仪,在上述检测条件下进行检测,计算回收率。L-瓜氨酸回收率结果见表3,DL-苹果酸回收率结果见表4。
表3
表4
L-瓜氨酸和DL-苹果酸的回收率均大于98%,说明本实施例提供的L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法回收率良好。
7、定量限
精密称取含有相当于L-瓜氨酸70mg、DL-苹果酸27mg的对照品于50mL容量瓶中,用流动相溶解稀释定容,取20μl注入高效液相色谱仪,在上述检测条件下进行检测,测得L-瓜氨酸峰高为87858,DL-苹果酸峰高为65075,基线噪音为22。将对照品溶液稀释400倍,再次检测,测得L-瓜氨酸峰高为246;将对照品溶液稀释300倍,再次检测,测得DL-苹果酸峰高为232;故该方法检测L-瓜氨酸的定量限为70/50/400=0.0035mg/mL,检测DL-苹果酸的定量限为27/50/300=0.0018mg/mL。说明本实施例提供的L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法具有较低的检测限。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法,其特征在于,色谱条件如下:
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;
流动相:19~21g/L磷酸氢二铵溶液,pH为2.0±0.1;
检测波长:212~216nm;
柱温:25~35℃;
流动相流速:0.7~1.0mL/min。
2.根据权利要求1所述的L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法,其特征在于,所述磷酸氢二铵溶液的浓度为20g/L。
3.根据权利要求1所述的L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法,其特征在于,所述检测波长为214nm。
4.根据权利要求1所述的L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法,其特征在于,所述柱温为30℃。
5.根据权利要求1~4任一项所述的L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤a、配制含有L-瓜氨酸-DL-苹果酸对照品的对照品溶液;
步骤b、用高效液相色谱法对所述对照品溶液进行检测,根据所得峰面积绘制L-瓜氨酸-DL-苹果酸对照品的标准曲线,得出L-瓜氨酸-DL-苹果酸对照品的浓度-峰面积线性回归方程;
步骤c、提供待测样品,用所述色谱条件对所述待测样品进行检测,将得到的峰面积代入所述浓度-峰面积线性回归方程,计算所述待测样品中L-瓜氨酸-DL-苹果酸的含量。
6.根据权利要求5所述的L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法,其特征在于,步骤a中所述对照品溶液至少为5份,浓度范围相当于L-瓜氨酸0.84~1.96mg/mL,DL-苹果酸0.324~0.756mg/mL,溶剂的组成与流动相相同。
7.根据权利要求5所述的L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法,其特征在于,步骤c中所述待测样品在检测前用与流动相组成相同的溶剂溶解。
8.根据权利要求5所述的L-瓜氨酸-DL-苹果酸的高效液相检测方法,其特征在于,步骤c中所述待测样品为含有L-瓜氨酸-DL-苹果酸的溶液,在检测前用与流动相组成相同的溶剂稀释。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112198236A (zh) * 2019-12-05 2021-01-08 湖北远大生物技术有限公司 一种瓜氨酸原料中瓜氨酸含量的检测方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1697658A (zh) * 2003-05-21 2005-11-16 株式会社琉球生物资源开发 发酵处理物及其制造方法
CN104807924A (zh) * 2014-01-28 2015-07-29 黑龙江天行健医药科技开发有限公司 门冬氨酸鸟氨酸原料及制剂特定杂质检测方法
US20160000921A1 (en) * 2013-03-15 2016-01-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Ceftolozane antibiotic compositions
CN107007838A (zh) * 2016-09-30 2017-08-04 南京优科制药有限公司 一种含有马来酸依那普利、叶酸和酸稳定剂的药物组合物
CN107064508A (zh) * 2017-04-21 2017-08-18 深圳大学 辅助结直肠癌早期诊断及预后监测的分子标志物及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1697658A (zh) * 2003-05-21 2005-11-16 株式会社琉球生物资源开发 发酵处理物及其制造方法
US20160000921A1 (en) * 2013-03-15 2016-01-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Ceftolozane antibiotic compositions
CN104807924A (zh) * 2014-01-28 2015-07-29 黑龙江天行健医药科技开发有限公司 门冬氨酸鸟氨酸原料及制剂特定杂质检测方法
CN107007838A (zh) * 2016-09-30 2017-08-04 南京优科制药有限公司 一种含有马来酸依那普利、叶酸和酸稳定剂的药物组合物
CN107064508A (zh) * 2017-04-21 2017-08-18 深圳大学 辅助结直肠癌早期诊断及预后监测的分子标志物及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李小平 等: "果汁中9种有机酸的反相高效液相色谱法测定", 《中国卫生检验杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112198236A (zh) * 2019-12-05 2021-01-08 湖北远大生物技术有限公司 一种瓜氨酸原料中瓜氨酸含量的检测方法
CN112198236B (zh) * 2019-12-05 2022-04-22 湖北远大生物技术有限公司 一种瓜氨酸原料中瓜氨酸含量的检测方法

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