CN108892722A - AtSRAC1基因在调控植物盐胁迫抗性中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了AtSRAC1基因在调控植物盐胁迫抗性中的应用，或在制备/培育具有抗盐/耐盐性能的转基因植物中的应用，所述AtSRAC1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明从拟南芥中获取了AtSRAC1基因，之后将其连接到pBI121表达载体，利用农杆菌介导的方法侵染拟南芥，发现该基因超表达可以使模式植物拟南芥出现抗盐胁迫的性状，以此为基础可以直接应用于农业生产中。本发明为培育农作物新品种提供理论依据和基因来源。

Description

AtSRAC1基因在调控植物盐胁迫抗性中的应用

技术领域

本发明涉及AtSRAC1基因在调控植物盐胁迫抗性中的应用，属于植物生物技术领域。

背景技术

近年来，随着环境恶化，各种非生物胁迫使作物的生长发育受到严重影响，导致籽粒的产量明显下降，比如高盐可引起植物细胞膜系统破坏，细胞渗透压改变，细胞内外离子浓度改变，导致各种水解酶和蛋白酶失去活性；干旱可引起植物遭受生理干旱，细胞中的多种蛋白生理活性降低，导致作物发育畸形，从而影响产量。因此，研究植物响应盐胁迫的分子机制具有非常重要的意义，可以为后期育种提供更多的理论依据。

植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Kondo et al.,1991)是I型半胱氨酸蛋白酶(类木瓜蛋白酶)家族的竞争性抑制剂，含有半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族成员的特征保守基序，也就是位于多肽链的中心部位的Gln-Xaa-Val-Xaa-Gly基序(Xaa指任意一种氨基酸)，在羧基端保守的Pro-Trp(Leu-Trp)基序，在氨基端保守的Gly基序(W.Bode et al.,1991)(Turket al.,1991)。通过核磁共振发现水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂溶解状态时的三维结构，包括了五条反向平行的β折叠链，一条α螺旋，β折叠链围绕着中心的α螺旋，它与动物中的半胱氨酸蛋白酶抑制剂(比如鸡蛋清中的半胱氨酸蛋白酶抑制剂和人类的半胱氨酸蛋白酶抑制剂stefin A)的三维结构是一致的(Koji Nagata et al.,2000)。植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂与半胱氨酸蛋白酶形成了紧密的可逆性的等分子复合体，半胱氨酸蛋白酶抑制剂作为一个假的底物来嵌入到目标酶的活性中心，从而阻止真正蛋白底物的进入。

大多数植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂具有抑制类木瓜半胱氨酸蛋白酶活性的能力，高度保守的三维结构和蛋白酶抑制基序，以及在植物中的普遍分布，可以看出植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂对蛋白酶调控网络至关重要。由于基因功能的分化，植物基因组上出现了许多补偿半胱氨酸蛋白酶抑制剂的复杂结构，这些基因结构通常以独特的表达模式编码为多样的具有抑制活性的变体，这些变体可以与半胱氨酸蛋白酶互作(Kondo et al.,1990；Abraham et al.,2006；Massonneau et al.,2005；Kiyosaki et al.,2007；Miyazaki etal.,2009)。关于植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂靶向的内源蛋白酶依然知之甚少，但是过去20多年评估它们的抑制特性和表达方式的研究支持一种假说，该假说认为植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂对内源蛋白水解过程有多重作用，对食草动物和真菌分泌到植物组织的外源蛋白酶也有抑制作用。

在植物体内，半胱氨酸蛋白酶抑制剂也发挥非常重要的功能。植物中半胱氨酸蛋白酶与细胞的多样性和多种生理过程密切相关，比如储存蛋白的沉淀和动员，衰老器官中蛋白的分解代谢和更新，维管组织分化，胁迫条件下的蛋白更新和真菌诱导的细胞程序性死亡(Grudkowska et al.,2004；Müntz,2007)。通过基因组序列分析，评估出的原始和更高植物类群半胱氨酸蛋白酶抑制剂和半胱氨酸蛋白酶的进化模式，表明了半胱氨酸蛋白酶抑制剂和半胱氨酸蛋白酶以一个长期协同的关系来发挥功能，可能与复合体建立以及功能多样性有关系。在过去的几年中，一些研究表明，在一些半胱氨酸蛋白酶参与的生理过程中，包括在储存和衰老器官中的蛋白质池的沉淀和动员中，半胱氨酸蛋白酶抑制剂都扮演了一个调控角色。

许多的基因表达研究已经发现了在储存器官中存储蛋白堆积，半胱氨酸蛋白酶抑制剂生物合成和半胱氨酸蛋白酶下调三者之间的联系。在水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆和最初的特点描述的研究中，Abe等人发现(Abei et al.,1987)，在开花两周后与谷蛋白沉积一周前的种子中，半胱氨酸蛋白酶抑制剂mRNA转录体会有明显的积累。在马铃薯块茎蛋白提取物中，大量的马铃薯糖蛋白和多结构域半胱氨酸蛋白酶抑制剂转录物及少量的半胱氨酸蛋白酶三者之间也存在着明显的联系(Weeda et al.,2009)。在植物生殖器官中，半胱氨酸蛋白酶抑制剂/半胱氨酸蛋白酶的化学平衡对整个生长过程具有决定性作用，它们的这种平衡可以简单的决定储存蛋白的命运。半胱氨酸蛋白酶抑制剂在幼小的发育的种子中或生长的储存器官中积极的合成，从而在数量上超过半胱氨酸蛋白酶，进一步来促进储存蛋白的沉积。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂生物合成的转录调控对叶和其它新陈代谢活跃的器官也起了一个重要作用，同时控制半胱氨酸蛋白酶所参与到的多种生理过程，其中包括在衰老过程中的蛋白循环和非生物胁迫状态下保护代谢通路的激活。研究表明在衰老的器官中半胱氨酸蛋白酶抑制剂和丝氨酸蛋白酶抑制剂表达量下降，相一致的是，在储存器官萌发的过程中，半胱氨酸蛋白酶和丝氨酸蛋白酶表达量上升(Sugawara et al.,2002；Philippeet al.,2007)。

其它研究表明，植物在干旱，盐和低温的不利条件下生长时，叶中的半胱氨酸蛋白酶抑制剂转录本含量会上调，在非生物胁迫诱导下响应ABA和脱水时顺式调控原件，会结合到半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的启动子上(Zhang et al.,2008)。

植物中半胱氨酸蛋白酶抑制剂作为关键性的决定因子能够调控很多基因(蛋白)的表达模式，但其他调控机制的重要性也不可低估。关于植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂在翻译后的调控以及在这一阶段中蛋白质的水解的资料仍是十分稀少的。

一些株系表明半胱氨酸蛋白酶抑制剂在植物抵抗生物胁迫方面有重要作用。当一些如食草性昆虫，机械伤害，茉莉酸或真菌诱导子相关的生物信号出现时，半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的表达量会上调，而且在外伤诱导下的半胱氨酸蛋白酶抑制剂会出现高变异的正向选择的氨基酸，这就促使植物在应对食草性动物中的消化性半胱氨酸蛋白酶时可以快速实现功能分化。植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂对节肢动物和根寄生线虫中的半胱氨酸蛋白酶强烈的抑制作用(Murdock et al.,1987；Thie and Houseman,1990；Vinokurov et al.,2006；Mika et al.,2015)，以及对大量的食草性昆虫，根节肢性动物和真菌的致命作用，同样间接的肯定了植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂的防御作用(Christova et al.,2006；Soares-Costa et al.,2002；Popovic et al.,2013)。

已有研究发现，拟南芥半胱氨酸蛋白酶抑制剂对体内体外对植物生长发育有重要影响，但半胱氨酸蛋白酶抑制剂相关基因及其编码蛋白的功能研究较少。拟南芥半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族相关基因是否也参与非生物胁迫响应亟待深入探索。

发明内容

针对上述现有技术，本发明公开了一个调控拟南芥响应盐胁迫的基因AtSRAC1的克隆，及其在调控植物盐胁迫抗性中的应用。本发明的发明人从拟南芥中分离和克隆到At5G17090基因，并将其命名为AtSRAC1，将AtSRAC1的全长CDS连接到35S启动子启动的表达载体pBI121上，利用农杆菌侵染转化拟南芥，发现该基因可以使模式植物拟南芥出现抗盐胁迫的性状。

本发明是通过以下技术方案实现的：

AtSRAC1基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

AtSRAC1基因在调控植物盐胁迫抗性中的应用，在制备/培育具有抗盐/耐盐性能的转基因植物中的应用。本发明通过研究发现，AtSRAC1基因超表达可以使模式植物拟南芥出现抗盐胁迫的性状，并以此为基础可以直接应用于农业生产中。本发明为培育农作物新品种提供理论依据和基因来源，有助于从根本上改善拟南芥的抗盐性能。

一种植物表达载体，其含有上述AtSRAC1基因。优选的，所述植物表达载体所用的质粒为PBI121。

一种遗传工程化的宿主细胞，其含有上述植物表达载体，或其基因组中插入了上述AtSRAC1基因。

所述遗传工程化的宿主细胞的构建方法为常规技术手段，将植物表达载体导入宿主细胞，使植物表达载体/AtSRAC1基因在宿主细胞中有效表达。

上述植物表达载体、遗传工程化的宿主细胞在制备具有耐盐性能的转基因植物(耐盐性能优于野生型植株)中的应用。所述植物包括拟南芥。

本发明的发明人首先从拟南芥中获取了总RNA(拟南芥RNA的提取和纯化可直接采用现有工艺，也可采用本发明实施例中所记载的工艺；cDNA第一链的合成的也是相同的情况，也可以采用现有的工艺或者试剂盒)，反转录获得cDNA第一链，之后利用其作为模板，用AtSRAC1对应的特异性引物对获得的cDNA进行Phusion高保真酶扩增，其中所采用的引物的序列如下：

上游引物：5’-GGTACCATGACTACCAATAGTAGCTCC-3’；如SEQ ID NO.3所示。

下游引物：5’-AAGCTTTGGAAGTGTTAGGGGTTTA-3’，如SEQ ID NO.4所示。

其中划线处为酶切位点，上游引物的酶切位点为Kpn1，下游引物的酶切位点为HindⅢ。

扩增获得的产物用Kpn1和HindⅢ酶切，之后将其连接到pBI121表达载体，利用农杆菌介导的方法侵染拟南芥。发现该基因超表达可以使模式植物拟南芥出现抗盐胁迫的性状，并以此为基础可以直接应用于农业生产中。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

附图说明

图1：AtSRAC1的表达量的电泳图。

图2：转基因拟南芥种子与野生型拟南芥种子在正常1/2MS培养基上生长的萌发率统计，其中，WT代表野生型拟南芥种子，OE5、OE8、代表转基因拟南芥种子。

图3：转基因拟南芥种子与野生型拟南芥种子在175mM NaCl培养基中培养的萌发率统计，其中，WT代表野生型拟南芥种子，OE5、OE8、代表转基因拟南芥种子。

图4：转基因拟南芥种子与野生型拟南芥种子在3μM ABA培养基中培养的萌发率统计，其中，WT代表野生型拟南芥种子，OE5、OE8、代表转基因拟南芥种子。

图5：转基因拟南芥种子与野生型拟南芥种子在正常1/2MS培养基、125mM NaCl培养基上培养后的情况，其中，A：正常1/2MS培养基；B：125mM NaCl培养基。WT代表野生型拟南芥种子，OE5、OE8、代表转基因拟南芥种子。

图6：转基因拟南芥种子与野生型拟南芥种子在正常1/2MS培养基、125mM NaCl培养基上培养后根长的统计情况，其中，A：正常1/2MS培养基；B：125mM NaCl培养基。WT代表野生型拟南芥种子，OE5、OE8、代表转基因拟南芥种子。

图7：AtSRAC1可以抑制木瓜蛋白酶的活性(吸光度比较图)。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。

本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。

下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。

本发明将表达载体导入到模式植物拟南芥细胞中，导入方法为农杆菌介导的转化法。其中将表达载体导入植物细胞中，导入方法都是本领域人员熟知的，这些方法包括但不限于：农杆菌介导的转化法、基因枪法、电激法、子房注射法等。本发明选用的筛选阳性苗的抗生素为卡那霉素；除此之外，本发明所采用的均为本领域现有技术。

实施例1：拟南芥AtSRAC1基因的获得、克隆与载体构建

发明人在拟南芥数据库TAIR上找到基因AtSRAC1，AtSRAC1基因组序列全长为1294bp，而CDS序列为693bp(如SEQ ID NO.1所示)。

(1)利用TRIZOL法提取RNA，具体如下：

(a)预先在1.5mL离心管加入1mL TRIZOL提取液；

(b)液氮充分研磨植物材料，称取约0.1g至提取液，混匀，室温静置5min，12000rpm，4℃，离心10～15min；

(c)吸取上清至新的离心管中，加0.2mL的氯仿，涡旋15s，室温静置2～3min至分层，2～8℃，12000rpm，离心15min；

(d)再取上层至一新离心管，加等体积异丙醇，室温静置10min，2～8℃，离心，12000rpm，10min；

(e)用75％乙醇漂洗沉淀，4℃，7500rpm，离心5min，用无RNase水回溶RNA，-80℃保存。

(2)RNA中基因组DNA的去除：

反应体系的配置如表1所示。42℃反应2min，4℃保存。

表1

RNA反转录：如表2所示。

表2

PCR仪，37℃，15min；85℃，5s灭活；4℃保存。

配置反应液时先加入5×PrimeScript Buffer2和RNase free-dH₂O，混匀后，然后加入PrimeScript RT Enzyme Mix 1以及RT primer Mix，轻轻吸打混匀。

(3)ATSRAC1基因的克隆：

ATSRAC1基因引物序列如下：

上游引物：5’-GGTACCATGACTACCAATAGTAGCTCC-3’；如SEQ ID NO.3所示。

下游引物：5’-AAGCTTTGGAAGTGTTAGGGGTTTA-3’，如SEQ ID NO.4所示。

使用Phusion高保真酶进行扩增，反应体系为：10×反应缓冲液2.5μL，脱氧核糖核酸(dNTP)2μL，上游引物1μL，下游引物1μL，Phusion高保真酶0.5μL，DMSO 0.75μL，cDNA模板1μL，水补齐到25μL。

PCR反应条件为：95℃预变性5分钟；

95℃变性15秒，55℃退火15秒，72℃延伸2分钟，共35个循环；

72℃后延伸5分钟；

16℃保温。

反应结束后，进行琼脂糖凝胶电泳，检测到目的条带后，切胶并进行胶回收，胶回收方法根据BioTeke公司的快捷型琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(Cat#DP1722)进行。

高保真酶扩增的产物末端为平末端，需要添加polyA后才能进行T-A克隆，反应体系如下：10×反应缓冲液1.5μL，脱氧核糖核酸(dNTP)1.2μL，Easy Taq酶0.15μL，胶回收产物补齐15μL。之后再72℃反应30分钟。

(4)取上述4μL加尾产物与pEASY-T1克隆载体进行连接，操作步骤按照全式金公司的产品pEASY-T1说明书进行.然后连接产物使用热激法转化大肠杆菌TOP10菌株，在含有卡那霉素的LB平板上生长过夜。挑取白色单个菌落在LB平板上划线，进行菌落PCR，反应体系如上，选取阳性菌落在LB液体培养基中过夜。

(5)质粒DNA的提取：使用捷瑞生物科技有限公司高纯度质粒小提取试剂盒提取质粒DNA。

(6)序列测定：本工作在上海生工生物工程股份有限公司进行。

(7)表达载体的构建：用Kpn1和HindⅢ酶切测序正确的带有ATSRAC1基因的质粒和带有35S的pBI121空载体，37℃酶切一个小时之后，进行琼脂糖凝胶电泳，切除正确的条带进行胶回收，将胶回收产物用Thermo公司的T4DNA连接酶连接，连接产物转化TOP10菌株，在含有卡那霉素的LB平板上生长过夜。挑取白色单个菌落在LB平板上划线，进行菌落PCR，选取阳性菌落在LB液体培养基中过夜。质粒DNA的提取：使用捷瑞生物科技有限公司高纯度质粒小提取试剂盒提取质粒DNA，酶切鉴定，构建得到35S::ATSRAC1的过表达载体。

实施例2：超表达AtSRAC1转基因拟南芥阳性苗的筛选

(1)拟南芥花序侵染

侵染液配方(5ml体系)：蔗糖0.25g Silwet(有毒，避光)1.5ul ddH₂O定容至5ml。

侵染步骤如下：

挑选PCR和酶切鉴定呈阳性农杆菌单菌落，加20ml左右LB(壮观霉素加利福平)培养基中，过夜培养。

拟南芥开花时间一般在11-13点，待侵染的苗子要求条件潮湿；因此应在上午9-10点左右将待侵染的苗子浇足水。

室温条件下，5000rpm，离心5min，收集菌体2-3次，用8-10ml侵染液重悬菌体。

中午前后，将已经开了的花浸入侵染液中6-7s，间隔5-7天后可二次侵染以提高侵染效率。

暗处理，潮湿包裹24h。

(2)转基因阳性苗的筛选

单株受到侵染后的拟南芥的种子为T0代。

T0代种子在含有卡那霉素的培养基上培养，挑选绿苗种在基质中，单株收到的种子为T1代。

T1代种子在含有卡那霉素的培养基上培养，挑选绿苗：黄苗约为3：1的株系中的绿苗种在基质中，单株收到的种子为T2代。

T2代种子在含有卡那霉素的培养基上培养，挑选全部是绿苗的株系种在基质中，收到的种子即为纯合的转基因株系的种子。本发明获得了三种株系，分别命名为：OE4、OE5、OE8。

实施例3：超表达AtSRAC1转基因株系和srac1突变体表达量的检测

依据基因编码区用DNA Club等软件来设计特异性引物，上海生物工程有限公司进行引物的合成。取材并按照前面的方法进行RNA的提取及反转录。以EF1-α为内参，调整各模板的加样体积，使模板浓度一致，扩增23个循环，琼脂糖凝胶电泳检测条带亮度，保证EF1-α的亮度一致，并用各模板的加样体积扩增AtSRAC1,检测突变体和转基因株系中AtSRAC1的表达量。扩增产物的电泳图如图1所示，可以看出OE4、OE5、OE8均为超表达株系。

以下所有实验均选用纯合的转基因株系的种子。

实施例4：超表达AtSRAC1转基因拟南芥种子对植物盐胁迫抗性的影响

取野生型拟南芥种子、转基因拟南芥种子(OE5、OE8)，在1/2MS培养基上进行种子萌发实验，培养条件为(下同)：光周期为16小时光照，8小时黑暗；光强为300-400umol/M²/S；光照条件下的温度为22-24℃，相对湿度为70-90％；黑暗条件下的温度为18-20℃，相对湿度大于90％。每12小时统计萌发率，结果如图2所示。

取野生型拟南芥种子、转基因拟南芥种子(OE5、OE8)，在175mM NaCl培养基(基质培养基为1/2MS培养基，下同)中进行种子萌发实验，每12小时统计萌发率，结果如图3所示。

取野生型拟南芥种子、转基因拟南芥种子(OE5、OE8)，在3μM ABA培养基中进行种子萌发实验，每12小时统计萌发率，结果如图4所示。

从图2中可以看出，野生型拟南芥种子、转基因拟南芥种子在正常培养条件下，萌发率基本相同。从图3、图4中可以看出，转基因拟南芥种子在175mM NaCl培养基、3μM ABA培养基中的萌发率快于野生型拟南芥种子。结论：AtSRAC1基因超表达株系在遭受盐胁迫时，所受影响小，相比野生型株系，体现出明显的抗盐胁迫的性状。

取野生型拟南芥种子、转基因拟南芥种子(OE5、OE8)，在1/2MS培养基上培养4天，然后分别移至1/2MS培养基、125mM NaCl培养基中继续培养10天，观察并统计根长，观察结果如图5所示，统计结果如图6所示。可以看出，在正常培养条件下，根长基本一致，但在125mM NaCl培养基中，转基因株系的根长明显长于野生型。结论：AtSRAC1基因超表达株系在遭受盐胁迫时，所受影响小，相比野生型株系，体现出明显的抗盐胁迫的性状。

实施例5：超表达AtSRAC1转基因拟南芥的培养

拟南芥种子用现配的70％乙醇消毒5min，然后用2.6％的次氯酸钠消毒10min，最后用含有Tween-20的ddH2O冲洗5-7次，将消毒的无菌种子平铺在1/2MS固体培养基上。4℃避光处理3d，放置于22℃的长日照培养箱生长7d，然后将拟南芥幼苗转入含有营养液的基质中继续培养。长日照条件为16h光照/8h黑暗，22℃。

实施例6：AtSRAC1可以抑制木瓜蛋白酶的活性

AtSRAC1和AtCYS1的编码片段被克隆到pET30(a)表达载体上，AtSRAC1和AtCYS1可以和谷胱甘肽(GST)形成融合蛋白，转化E.coli Rosseta感受态细胞，细胞培养，蛋白分离和纯化利用康维世纪His标签蛋白纯化试剂盒。纯化的AtSRAC1-His和AtCYS1-His(5-20μg)和20μl木瓜蛋白酶溶液混合至终体积为100μl，37℃孵育15min,然后加入500μl偶氮酪蛋白，37℃孵育1小时，再加入250μl冰浴的10％的三氯乙酸(TCA)冰浴30min终止反应，15000rpm离心5min,吸取上清850μl，OD420nm处检测吸光度值。其中木瓜蛋白酶溶液浓度和偶氮酪蛋白溶液浓度为1mg/ml,溶于pH 6.1的0.1M磷酸盐溶液,10mM EDTA和10mM半胱氨酸溶液中。

结果如图7所示，从图中可以看出，随着AtSRAC1蛋白的加入，木瓜蛋白酶的活性逐渐降低，AtCYS1为已知的半胱氨酸蛋白酶抑制剂，作为阳性对照。结论：AtSRAC1可以抑制木瓜蛋白酶的活性。

给本领域技术人员提供上述实施例，以完全公开和描述如何实施和使用所主张的实施方案，而不是用于限制本文公开的范围。对于本领域技术人员而言显而易见的修饰将在所附权利要求的范围内。本说明书引述的所有出版物、专利和专利申请通过引用并入本文，如同这些出版物、专利和专利申请各自特别地和个别地表明通过引用并入本文。

序列表

<110>山东农业大学

<120> AtSRAC1基因在调控植物盐胁迫抗性中的应用

<141> 2018-07-24

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 693

<212> DNA

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 1

atgactacca atagtagctc cgatgtgacg gaaaaacaag cttcagaaac ggatttattg 60

gcgtacgata aggaaaaatt taactttaag ttttccccga atagggtgga cgaggaagac 120

gacggagata ctgaaaccga aggcgagagc gaaagtgaag taggtgatgg aagcgtgacg 180

tatggggatt acaaagtgat agaagactta ccgaaaccgg atccggagtg ggatgtggac 240

agctttgatg ggctcgaata cgaatccgat cctgagcttc gtgcccgctt cgctaacgac 300

aatgcttaca tggaataccg cgaagtgagg atccaggctt tggagaatag gggtttttta 360

ccagatccat tcaatttcat cgacgctatt cagaatctag atggaccagc ttatgataac 420

atgactaata gggagtactt ggcgggtctg gcttcctcgt gcgttaagaa actcaacgac 480

cttaaggcaa agactgtgga atttgtaagt attgtgagag ccactacaac tggtggagga 540

gctagttgga aggtgtatat aacgtttatg gctcgggagt atcccaatgg gcctctcatg 600

gagtatcagg ctaaggccat ggatttcgtt ggagatcgat ctcccgttcc cattctctgc 660

agaccagccc ctaaacccct aacacttcca tag 693

<210> 2

<211> 230

<212> PRT

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 2

Met Thr Thr Asn Ser Ser Ser Asp Val Thr Glu Lys Gln Ala Ser Glu

1 5 10 15

Thr Asp Leu Leu Ala Tyr Asp Lys Glu Lys Phe Asn Phe Lys Phe Ser

20 25 30

Pro Asn Arg Val Asp Glu Glu Asp Asp Gly Asp Thr Glu Thr Glu Gly

35 40 45

Glu Ser Glu Ser Glu Val Gly Asp Gly Ser Val Thr Tyr Gly Asp Tyr

50 55 60

Lys Val Ile Glu Asp Leu Pro Lys Pro Asp Pro Glu Trp Asp Val Asp

65 70 75 80

Ser Phe Asp Gly Leu Glu Tyr Glu Ser Asp Pro Glu Leu Arg Ala Arg

85 90 95

Phe Ala Asn Asp Asn Ala Tyr Met Glu Tyr Arg Glu Val Arg Ile Gln

100 105 110

Ala Leu Glu Asn Arg Gly Phe Leu Pro Asp Pro Phe Asn Phe Ile Asp

115 120 125

Ala Ile Gln Asn Leu Asp Gly Pro Ala Tyr Asp Asn Met Thr Asn Arg

130 135 140

Glu Tyr Leu Ala Gly Leu Ala Ser Ser Cys Val Lys Lys Leu Asn Asp

145 150 155 160

Leu Lys Ala Lys Thr Val Glu Phe Val Ser Ile Val Arg Ala Thr Thr

165 170 175

Thr Gly Gly Gly Ala Ser Trp Lys Val Tyr Ile Thr Phe Met Ala Arg

180 185 190

Glu Tyr Pro Asn Gly Pro Leu Met Glu Tyr Gln Ala Lys Ala Met Asp

195 200 205

Phe Val Gly Asp Arg Ser Pro Val Pro Ile Leu Cys Arg Pro Ala Pro

210 215 220

Lys Pro Leu Thr Leu Pro

225 230

<210> 3

<211> 27

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 3

ggtaccatga ctaccaatag tagctcc 27

<210> 4

<211> 25

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 4

aagctttgga agtgttaggg gttta 25

Claims (10)

1.AtSRAC1基因在调控植物盐胁迫抗性中的应用，或在制备/培育具有抗盐/耐盐性能的转基因植物中的应用，所述AtSRAC1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.AtSRAC1基因编码的蛋白在调控植物盐胁迫抗性中的应用，或在制备/培育具有抗盐/耐盐性能的转基因植物中的应用，所述AtSRAC1基因编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：具体应用时，将含有AtSRAC1基因的植物表达载体导入植物细胞或种子，使AtSRAC1基因超表达，从而获得抗盐/耐盐性能强于野生型植株的转基因植株。

4.一种植物表达载体，其含有AtSRAC1基因，所述AtSRAC1基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1。

5.根据权利要求4所述的植物表达载体，其特征在于：所述植物表达载体所用的质粒为PBI121。

6.一种遗传工程化的宿主细胞，其含有权利要求4或5所述的植物表达载体，或其基因组中插入了AtSRAC1基因，所述AtSRAC1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。

7.权利要求4或5所述的植物表达载体在制备/培育具有抗盐/耐盐性能的转基因植物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述转基因植物的抗盐性能强于野生型植株。

9.权利要求6所述的遗传工程化的宿主细胞在制备/培育具有抗盐/耐盐性能的转基因植物中的应用。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述转基因植物的抗盐性能强于野生型植株。