CN108866223A - 一种用于鉴定金黄色葡萄球菌的lamp引物组及其应用 - Google Patents

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CN108866223A CN201710339476.1A CN201710339476A CN108866223A CN 108866223 A CN108866223 A CN 108866223A CN 201710339476 A CN201710339476 A CN 201710339476A CN 108866223 A CN108866223 A CN 108866223A
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姚贵哲
王玮琳
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Abstract

本发明公开了一种用于鉴定金黄色葡萄球菌的LAMP引物组及其应用。本发明提供的引物组，由引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LF和引物LB组成，各条引物依次如序列表的序列1至6所示。所述引物组的用途为如下(b1)或(b2)：(b1)鉴定或辅助鉴定金黄色葡萄球菌；(b2)检测待测样本中是否含有金黄色葡萄球菌。本发明提供了用于检测金黄色葡萄球菌的引物组，建立一种快速、便捷的LAMP检测方法，为金黄色葡萄球菌的快速诊断提供新方法，具有重大的应用价值。

Description

一种用于鉴定金黄色葡萄球菌的LAMP引物组及其应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鉴定金黄色葡萄球菌LAMP引物组以及应用所述引物组鉴定金黄色葡萄球菌的方法。
背景技术
金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)无论是在临床还是在食品行业都是一种重要的病原菌，属于葡萄球菌属，也被称作“嗜肉菌”，是典型的革兰氏阳性菌，在临床上主要引起多个系统的严重感染和腹泻，在食品行业主要污染食品。
如何能快速的检测金黄色葡萄球菌是一个研究的热点。目前,检测方法有很多,主要有分离培养法、免疫学方法、基因芯片法、基因探针法、测试片法、PCR法、real-time PCR法等检测方法。以上这些方法，或者需要复杂的仪器，或者需要高成本的试剂，或者需要较长的检测周期。
因此，迫切需要开发可以通过裸眼直接判断结果的快速检测方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于鉴定金黄色葡萄球菌的LAMP引物组及其应用。
本发明首先保护一种引物组，由引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LF和引物LB组成；
所述引物F3为如下(a1)或(a2)：
(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；
(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；
所述引物B3为如下(a3)或(a4)：
(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；
(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；
所述引物FIP为如下(a5)或(a6)：
(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；
(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；
所述引物BIP为如下(a7)或(a8)：
(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；
(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；
引物LF如下(a9)或(a10)：
(a9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；
(a10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子。
引物LB如下(a11)或(a12)：
(a11)序列表的序列6所示的单链DNA分子；
(a12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子。
所述引物组是基于环介导等温扩增的原理设计的。
所述引物组的用途为如下(b1)或(b2)：(b1)鉴定或辅助鉴定金黄色葡萄球菌；(b2)检测待测样本中是否含有金黄色葡萄球菌。
本发明还保护所述引物组在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为如下(b1)或(b2)：(b1)鉴定或辅助鉴定金黄色葡萄球菌；(b2)检测待测样本中是否含有金黄色葡萄球菌。
本发明还保护含有所述引物组的试剂盒；所述试剂盒的用途为如下(b1)或(b2)：(b1)鉴定或辅助鉴定金黄色葡萄球菌；(b2)检测待测样本中是否含有金黄色葡萄球菌。
本发明还保护所述试剂盒的制备方法，包括将所述引物组中的各条引物进行独立包装的步骤。
本发明还保护一种鉴定或辅助鉴定金黄色葡萄球菌的方法，包括如下步骤：
(1)提取待测微生物的基因组DNA；
(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，采用所述引物组进行环介导等温扩增；如果所述引物组可以实现以所述基因组DNA为模板的特异性扩增，待测微生物为或候选为金黄色葡萄球菌；如果所述引物组不能实现以所述基因组DNA为模板的特异性扩增，待测微生物为或候选为非金黄色葡萄球菌。
所述待测微生物具体可为待测细菌。
所述待测细菌具体可为金黄色葡萄球菌、巨大芽孢杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、阿伯丁沙门氏菌、单增李斯特氏菌、肺炎链球菌或脑膜炎奈瑟菌。
所述待测细菌具体可为布氏不动杆菌、沙鱼弧菌、嗜麦芽假单胞菌、结核杆菌、霍乱弧菌O139群、炭疽杆菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、副溶血性弧菌、鲁氏不动杆菌、鼠疫耶尔森菌、类鼻疽伯克霍尔德菌、鲍曼不动杆菌或大肠杆菌。
本发明还保护一种检测待测样本中是否含有金黄色葡萄球菌的方法，包括如下步骤：
(1)提取待测样本的总DNA；
(2)以步骤(1)提取的总DNA为模板，采用所述引物组进行环介导等温扩增；如果所述引物组可以实现以所述总DNA为模板的特异性扩增，所述待测样本含有或疑似含有金黄色葡萄球菌；如果所述引物组不能实现以所述总DNA为模板的特异性扩增，所述待测样本不含有或疑似不含有金黄色葡萄球菌。
所述待测样本具体可为食品样本，例如蔬菜、蔬菜加工品、肉类或肉类加工品。
以上任一所述环介导等温扩增的反应体系中：每25μl体系可含有40pmol FIP、40pmol BIP、5pmol F3、5pmol B3、20pmol LF、20pmol LB。
以上任一所述环介导等温扩增的反应体系具体可为(25μl)：2μl模板、10mM KCl、10mM(NH4)2SO4、0.1％(体积百分含量)Tween20、0.8M甜菜碱、8mM MgSO4、1.4mM dNTP(即dATP\dCTP\dGTP\dTTP的浓度均为1.4mM)、8U Bst DNA聚合酶、40pmol FIP、40pmol BIP、5pmol F3、5pmol B3、20pmol LF、20pmol LB，余量为Tris-HCl缓冲液(pH8.8、20mM)。
以上任一所述环介导等温扩增的反应条件可为63℃。
以上任一所述环介导等温扩增的反应条件具体可为63℃，60min。
“所述引物组可以实现以所述基因组DNA为模板的特异性扩增”的判断标准具体如下：采用实时浊度仪监测，出现阳性扩增曲线。
“所述引物组不能实现以所述基因组DNA为模板的特异性扩增”的判断标准具体如下：采用实时浊度仪监测，没有出现阳性扩增曲线。
“所述引物组可以实现以所述总DNA为模板的特异性扩增”的判断标准具体如下：采用实时浊度仪监测，出现阳性扩增曲线。
“所述引物组不能实现以所述总DNA为模板的特异性扩增”的判断标准具体如下：采用实时浊度仪监测，没有出现阳性扩增曲线。
本发明还保护一种鉴定或辅助鉴定金黄色葡萄球菌的方法，包括如下步骤：检测待测微生物的基因组DNA中是否具有特异DNA分子；如果待测微生物的基因组DNA中具有所述特异DNA分子、待测微生物为或候选为金黄色葡萄球菌；如果待测微生物的基因组DNA中不具有所述特异DNA分子、待测微生物为或候选为非金黄色葡萄球菌；所述特异DNA分子为金黄色葡萄球菌基因组DNA中特异引物对的靶序列；所述特异引物对由序列表的序列1所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成。
本发明还保护一种检测待测样本中是否含有金黄色葡萄球菌的方法，包括如下步骤：检测待测样本的总DNA中是否具有特异DNA分子；如果待测样本的总DNA中具有所述特异DNA分子、所述待测样本含有或疑似含有金黄色葡萄球菌；如果待测样本的总DNA中不具有所述特异DNA分子、所述待测样本不含有或疑似不含有金黄色葡萄球菌；所述特异DNA分子为金黄色葡萄球菌基因组DNA中特异引物对的靶序列；所述特异引物对由序列表的序列1所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成。所述待测样本具体可为食品样本，例如蔬菜、蔬菜加工品、肉类或肉类加工品。
本发明提供了用于检测金黄色葡萄球菌的引物组，建立一种快速、便捷的LAMP检测方法，为金黄色葡萄球菌的快速诊断提供新方法，具有重大的应用价值。
附图说明
图1为实施例2的步骤一的结果。
图2为实施例2的步骤二的结果。
图3为实施例3的结果。
图4为实施例4的步骤3的结果。
图5为实施例4的步骤4的结果。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
实施例中，均采用荣研生物科技(中国)有限公司的环介导等温扩增实时浊度仪LA-320c对反应体系的浊度进行实时监测。
ATCC,全称为美国模式培养物保藏所，网址为：https://www.atcc.org/。CICC，全称为中国工业微生物菌种保藏管理中心(China Center of Industrial CultureCollection,)，网址为：http://www.china-cicc.org/。CMCC，全称为中国医学细菌保藏管理中心，网址为：http://www.cmccb.org.cn/cmccbnew/。
实施例1、引物的设计和制备
基于大量序列比对，引物设计、引物筛选与效果验证，获得了一组用于金黄色葡萄球菌检测的效果最好的环介导等温扩增引物组，将其命名为引物组SA22。引物组SA22中，各条引物的核苷酸序列见表1。
表1
将筛选过程中设计的其它引物组(SA1、SA7、SA20、SA40、SA52、SA70)作为引物组SA22的对照。引物组SA1中，各条引物的核苷酸序列见表2。引物组SA7中，各条引物的核苷酸序列见表3。引物组SA20中，各条引物的核苷酸序列见表4。引物组SA40中，各条引物的核苷酸序列见表5。引物组SA52中，各条引物的核苷酸序列见表6。引物组SA70中，各条引物的核苷酸序列见表7。
表2
引物名称 序列(5'-3')
F3-2 AGTGCTGGCATATGTATGG
B3-2 GTTGAAGTTGCACTATATACTGT
FIP-2 TAGCGAAAAAGAAAAACCTCTTTGCTTCAATATTACTTATAGGGATGGCTAT
BIP-2 TAGTTTCAAGTCTAAGTAGCTCAGCTTTTTGGATCTTCAGAACCACTT
LF-2 GTATTGCCCTTTCGAAACATTACTG
表3
引物名称 序列(5'-3')
F3-3 GCATATGTATGGCAATTGTTTCA
B3-3 ACTATATACTGTTGGATCTTCAGA
FIP-3 ACTAAGCAACTAGTAGCGAAAAAGATTGCTATCAGTAATGTTTCGAAAGG
BIP-3 TAGTTTCAAGTCTAAGTAGCTCAGCTTTTACCACTTCTATTTACGCCG
表4
引物名称 序列(5'-3')
F3-4 ACAAACAGATAACGGCGTAA
B3-4 GGGCCATATTTCTCTACACC
FIP-4 CGCTTTAATTAATGTCGCAGGTTCTTTTTTAGAAGTGGTTCTGAAGATCC
BIP-4 AATGTACAAAGGTCAACCAATGACATTTTGGATGCTTTGTTTCAGGTG
表5
引物名称 序列(5'-3')
F3-5 AACAGTATATAGTGCAACTTCAA
B3-5 CTTTGTCAAACTCGACTTCAA
FIP-5 ATGTCATTGGTTGACCTTTGTACATTTTTAAATTACATAAAGAACCTGCGA
BIP-5 GTTGATACACCTGAAACAAAGCATCTTTATTTTTTTCGTAAATGCACTTGC
LF-5 CCGTATCACCATCAATCGCTTTAAT
LB-5 AAAGGTGTAGAGAAATATGGCCCTG
表6
引物名称 序列(5'-3')
F3-6 CGATTGATGGTGATACGGTT
B3-6 CAGTTCTTTGACCTTTGTCA
FIP-6 TGCTTTGTTTCAGGTGTATCAACTATTTAAATTAATGTACAAAGGTCAACC
BIP-6 AAGGTGTAGAGAAATATGGCCCTTTTTCTCGACTTCAATTTTATTTGCA
表7
引物名称 序列(5'-3')
F3-7 CGATTGATGGTGATACGGTTA
B3-7 CACGTCCATATTTATCAGTTCTT
FIP-7 TTAGGATGCTTTGTTTCAGGTGTATTTTACAAAGGTCAACCAATGACAT
BIP-7 AAGGTGTAGAGAAATATGGCCCTTTTTCTCGACTTCAATTTTATTTGCA
实施例2、LAMP检测方法的建立
用于本实施例的金黄色葡萄球菌为ATCC编号为6538P的菌株。
一、各个引物组的性能比较
1、提取金黄色葡萄球菌的基因组DNA。
2、以步骤1得到的基因组DNA为模板，采用待测引物组进行环介导等温扩增，反应过程中采用实时浊度仪对反应体系的浊度进行实时监测。
待测引物组为引物组SA22、引物组SA1、引物组SA7、引物组SA20、引物组SA40、引物组SA52或引物组SA70。
环介导等温扩增的反应体系(25μl)：2μl模板(DNA含量约150ng)、10mM KCl、10mM(NH4)2SO4、0.1％(体积百分含量)Tween20、0.8M甜菜碱、8mM MgSO4、1.4mM dNTP(即dATP\dCTP\dGTP\dTTP的浓度均为1.4mM)、8U Bst DNA聚合酶、40pmol FIP、40pmol BIP、5pmolF3、5pmol B3、20pmol LF(如果引物组中具有引物LF则采用此浓度，如果引物组中不具有LF，则反应体系中无本组分)、20pmol LB(如果引物组中具有引物LB则采用此浓度，如果引物组中不具有LB，则反应体系中无本组分)，余量为Tris-HCl缓冲液(pH8.8、20mM)。
将等体积蒸馏水代替模板，作为阴性对照。
环介导等温扩增的反应条件：63℃，60min。
实时监测的浊度值变化见图1(横坐标的单位为分钟，纵坐标为浊度值)。由图1可以看出，采用引物组SA22时反应21分钟时出现明显的阳性扩增曲线，采用引物组SA1时反应28分钟时出现明显的阳性扩增曲线，采用引物组SA7时无阳性扩增曲线，采用引物组SA20时无阳性扩增曲线，采用引物组SA40时反应22分钟时出现明显的阳性扩增曲线，采用引物组SA52时无阳性扩增曲线，采用引物组SA70时反应44分钟时出现明显的阳性扩增曲线。结果表明，引物组SA22的效果显著优于其它六个引物组。
二、最佳反应温度的确定
1、提取金黄色葡萄球菌的基因组DNA。
2、以步骤1得到的基因组DNA为模板，采用引物组SA22进行环介导等温扩增，反应过程中采用实时浊度仪对反应体系的浊度进行实时监测。
环介导等温扩增的反应体系同步骤一。
环介导等温扩增的反应条件：“61℃或62℃或63℃或64℃”，60min。
实时监测的浊度值变化见图2(横坐标的单位为秒，纵坐标为浊度值)。结果表明，63℃为最佳反应温度。
实施例3、特异性检测
待测菌分别为：金黄色葡萄球菌(ATCC编号为6538P)；布氏不动杆菌，巨大芽孢杆菌(ATCC编号为14581)，沙鱼弧菌，嗜麦芽假单胞菌，结核杆菌，霍乱弧菌O139群，炭疽杆菌，肠出血性大肠杆菌，小肠结肠炎耶尔森氏菌，鼠伤寒沙门氏菌(CICC编号为21484)，阿伯丁沙门氏菌(CMCC编号为50107)，单增李斯特氏菌(ATCC编号为19111)，副溶血性弧菌，鲁氏不动杆菌，致病性大肠杆菌，肠粘附性大肠杆菌，鼠疫耶尔森菌，肺炎链球菌(CICC编号为10913)，脑膜炎奈瑟菌(ATCC编号为13077)，类鼻疽伯克霍尔德菌，鲍曼不动杆菌，大肠埃希氏菌。布氏不动杆菌、沙鱼弧菌、嗜麦芽假单胞菌、结核杆菌、霍乱弧菌O139群、炭疽杆菌、肠出血性大肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、副溶血性弧菌、鲁氏不动杆菌、致病性大肠杆菌、肠粘附性大肠杆菌、鼠疫耶尔森菌、类鼻疽伯克霍尔德菌、鲍曼不动杆菌、大肠埃希氏菌均为吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心保存。
1、提取待测菌的基因组DNA。
2、以步骤1得到的基因组DNA为模板，采用引物组SA22进行环介导等温扩增，反应过程中采用实时浊度仪对反应体系的浊度进行实时监测。
环介导等温扩增的反应体系(25μl)：2μl模板(DNA含量约150ng)、10mM KCl、10mM(NH4)2SO4、0.1％(体积百分含量)Tween20、0.8M甜菜碱、8mM MgSO4、1.4mM dNTP(即dATP\dCTP\dGTP\dTTP的浓度均为1.4mM)、8U Bst DNA聚合酶、40pmol FIP、40pmol BIP、5pmolF3、5pmol B3、20pmol LF、20pmol LB，余量为Tris-HCl缓冲液(pH8.8、20mM)。
将等体积双蒸水代替模板，作为阴性对照。
环介导等温扩增的反应条件：63℃，60min。
实时监测的浊度值变化见图3。只有金黄色葡萄球菌显示阳性扩增曲线，其它各个待测菌均不显示阳性扩增曲线，结果表明，引物组SA22可以实现针对金黄色葡萄球菌的特异性扩增，具有良好的特异性。
实施例4、灵敏度检测
用于本实施例的金黄色葡萄球菌为ATCC编号为6538P的菌株。
1、提取金黄色葡萄球菌的基因组DNA。
2、将步骤1得到的基因组DNA进行梯度稀释，得到基因组DNA浓度为71.6ng/μL、7.16ng/μL、0.716ng/μL、0.0716ng/μL、0.00716ng/μL、0.000716ng/μL、0.0000716ng/μL、0.00000716ng/μL或0.000000716ng/μL的DNA溶液。
3、以步骤2得到的DNA溶液为模板DNA，采用引物组SA22进行环介导等温扩增，反应过程中采用实时浊度仪对反应体系的浊度进行实时监测。
环介导等温扩增的反应体系(25μl)：2μl模板DNA、10mM KCl、10mM(NH4)2SO4、0.1％(体积百分含量)Tween20、0.8M甜菜碱、8mM MgSO4、1.4mM dNTP(即dATP\dCTP\dGTP\dTTP的浓度均为1.4mM)、8U Bst DNA聚合酶、40pmol FIP、40pmol BIP、5pmol F3、5pmol B3、20pmol LF、20pmol LB，余量为Tris-HCl缓冲液(pH8.8、20mM)。
环介导等温扩增的反应条件：63℃，60min。
实时监测的浊度值变化见图4(横坐标的单位为分钟，纵坐标为浊度)。图4中，扩增曲线自左至右依次对应的DNA溶液的浓度为71.6ng/μL、7.16ng/μL、0.716ng/μL、0.0716ng/μL、0.00716ng/μL、0.000716ng/μL、0.0000716ng/μL、0.00000716ng/μL或0.000000716ng/μL的DNA溶液。结果表明，采用引物组SA22应用环介导等温扩增检测金黄色葡萄球菌，灵敏度为0.000716ng/μL。
4、以步骤2得到的DNA溶液为模板DNA，采用序列表的序列1所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成的引物对进行PCR扩增，PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。
结果见图5。图5中，自左至右泳道依次对应：浓度为71.6ng/μL、7.16ng/μL、0.716ng/μL、0.0716ng/μL、0.00716ng/μL、0.000716ng/μL、0.0000716ng/μL、0.00000716ng/μL或0.000000716ng/μL的DNA溶液。结果表明，PCR方法检测的灵敏度为0.00716ng/μL。
结果表明，本发明提供的方法比普通PCR检测方法的灵敏度高10倍。
SEQUENCE LISTING
<110> 吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心
<120> 一种用于鉴定金黄色葡萄球菌的LAMP引物组及其应用
<130> GNCYX170952
<160> 6
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
aacagtatat agtgcaactt caa 23
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ctttgtcaaa ctcgacttca a 21
<210> 3
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
atgtcattgg ttgacctttg tacattttta cataaagaac ctgcgaca 48
<210> 4
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
gttgatacac ctgaaacaaa gcatctttat ttttttcgta aatgcacttg c 51
<210> 5
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
aaaggtgtag agaaatatgg ccctg 25
<210> 6
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
ccgtatcacc atcaatcgct ttaat 25

Claims (10)

1.一种引物组，由引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LF和引物LB组成；
所述引物F3为如下(a1)或(a2)：
(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；
(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；
所述引物B3为如下(a3)或(a4)：
(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；
(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；
所述引物FIP为如下(a5)或(a6)：
(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；
(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；
所述引物BIP为如下(a7)或(a8)：
(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；
(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；
引物LF如下(a9)或(a10)：
(a9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；
(a10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子。
引物LB如下(a11)或(a12)：
(a11)序列表的序列6所示的单链DNA分子；
(a12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子。
2.权利要求1所述引物组在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为如下(b1)或(b2)：(b1)鉴定或辅助鉴定金黄色葡萄球菌；(b2)检测待测样本中是否含有金黄色葡萄球菌。
3.含有权利要求1所述引物组的试剂盒；所述试剂盒的用途为如下(b1)或(b2)：(b1)鉴定或辅助鉴定金黄色葡萄球菌；(b2)检测待测样本中是否含有金黄色葡萄球菌。
4.权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括将所述引物组中的各条引物进行独立包装的步骤。
5.一种鉴定或辅助鉴定金黄色葡萄球菌的方法，包括如下步骤：
(1)提取待测微生物的基因组DNA；
(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，采用权利要求1所述引物组进行环介导等温扩增；如果权利要求1所述引物组可以实现以所述基因组DNA为模板的特异性扩增，待测微生物为或候选为金黄色葡萄球菌；如果权利要求1所述引物组不能实现以所述基因组DNA为模板的特异性扩增，待测微生物为或候选为非金黄色葡萄球菌。
6.一种检测待测样本中是否含有金黄色葡萄球菌的方法，包括如下步骤：
(1)提取待测样本的总DNA；
(2)以步骤(1)提取的总DNA为模板，采用权利要求1所述引物组进行环介导等温扩增；如果权利要求1所述引物组可以实现以所述总DNA为模板的特异性扩增，所述待测样本含有或疑似含有金黄色葡萄球菌；如果权利要求1所述引物组不能实现以所述总DNA为模板的特异性扩增，所述待测样本不含有或疑似不含有金黄色葡萄球菌。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述待测样本为食品样本。
8.一种鉴定或辅助鉴定金黄色葡萄球菌的方法，包括如下步骤：
检测待测微生物的基因组DNA中是否具有特异DNA分子；如果待测微生物的基因组DNA中具有所述特异DNA分子、待测微生物为或候选为金黄色葡萄球菌；如果待测微生物的基因组DNA中不具有所述特异DNA分子、待测微生物为或候选为非金黄色葡萄球菌；所述特异DNA分子为金黄色葡萄球菌基因组DNA中特异引物对的靶序列；所述特异引物对由序列表的序列1所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成。
9.一种检测待测样本中是否含有金黄色葡萄球菌的方法，包括如下步骤：
检测待测样本的总DNA中是否具有特异DNA分子；如果待测样本的总DNA中具有所述特异DNA分子、所述待测样本含有或疑似含有金黄色葡萄球菌；如果待测样本的总DNA中不具有所述特异DNA分子、所述待测样本不含有或疑似不含有金黄色葡萄球菌；所述特异DNA分子为金黄色葡萄球菌基因组DNA中特异引物对的靶序列；所述特异引物对由序列表的序列1所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于：所述待测样本为食品样本。
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