CN108823141A - 一种油烟垃圾微生物处理剂的制备方法 - Google Patents

一种油烟垃圾微生物处理剂的制备方法 Download PDF

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庄文琴
李莉
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Abstract

本发明公开了一种油烟垃圾微生物处理剂的制备方法，属于生物技术领域。本发明通过筛选油烟垃圾中的优势菌种，加入地沟油对其进行驯化，加入耶氏酵母菌，在油污垃圾作为营养物质诱导的过程中，会产生大量的脂肪酶，在酶的催化下将其降解，加入光合红螺菌，保持自身菌种活性；通过十六胺、3‑氨基‑2,2二甲基丙酰胺进行反应，得到一类表面活性剂，再通过活性菌对其降解，提高降解率；聚乙烯醇、海藻酸钠对处理剂活性物质进行包裹、固定化，固定后使得降解菌达到较高的细胞密度，同时延长微生物菌剂的分解有效时间，增强降解效果。本发明解决了针对传统的油烟垃圾处理方法处理效率低，容易造成二次污染的问题。

Description

一种油烟垃圾微生物处理剂的制备方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种油烟垃圾微生物处理剂的制备方法。
背景技术
随着城市化水平的提高，城市中产生的垃圾及油污日益增加，造成环境的污染，产生不良的气味影响了人们的正常生活。城市油污垃圾微生物降解制剂是由微生物生命活动而使油污得到降解一类制品，是将有效菌类与吸附材料混合在一起制成的复合生物制剂，油污微生物降解制剂的使用可以有效的降解污染物当中的碳水化合物，蛋白质，氨基酸，脂类，纤维素等有机物质，使环境得到净化。微生物对单一有机化合物的降解过程是一个复杂的生物化学反应过程，在反应过程中微生物首先分泌细胞外酶把不溶性的大分子有机物分解成可溶性小分子有机物，然后穿过细胞膜进入细胞内，在各种细胞内酶作用下，或被利用合成新的细胞，或被氧化，为细菌的生命活动提供能量。由于这些反应都是在生物酶的作用下进行的，因此又称为“酶促反应”。油烟是食物高温加工过程中产生的油烟废气物的冷凝物，含有大量以固态或是液态存在的油脂、脂肪酸、甘油、食物蛋白质等多种成分。对于这种包含多种化合物的目标污染物的生物降解必须依靠混合微生物群落的分工、协同作用来完成。对油烟中不同化合物的生物降解，微生物需要通过一系列的中间反应来完成，而这些反应间相互联系、相互配合与协同方式是靠微生物的调节功能来实现的，而微生物的驯化是使微生物具有这种调节功能的重要手段。
发明内容
本发明所要解决的技术问题：针对传统的油烟垃圾处理方法处理效率低，容易造成二次污染的问题，提供一种油污垃圾微生物处理剂的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：
一种油污垃圾微生物处理剂的制备方法包括如下步骤：
（1）取地沟油按质量比1：1000加入筛选液体培养基中混合，得一级筛选培养基，取油污垃圾按8~10%的接种量接种至一级筛选液体培养基，于150r/min、25~30℃培养，得一级培养物，取地沟油按质量比1：500加入筛选液体培养基中混合，得二级筛选液体培养基，将一级培养物按8~10%的接种量接种至二级液体筛选培养基中，重复培养过程，得二级培养物，依次取地沟油由3~8：1000加入筛选液体培养基，制成三级至八级筛选液体培养基，取二级培养物按8~10%的接种量接种至三级筛选液体培养基中，重复培养过程，得三级培养物，重复一级至三级筛选培养过程至八级筛选，得最终培养物；
（2）取最终培养物涂布接种至筛选固体培养基中，于25~30℃培养18~24h，取菌径最大的菌落重复划线2~3次，接种至筛选固体培养基培养，取培养物作为种子菌，取种子菌按3~5%的接种量接种至富集培养基中，于120r/min、25~30℃好氧培养，离心，取沉淀冷冻干燥，得冷冻干燥物，取冷冻干燥物按质量比5~8：2~4加入辅助菌种混合，得处理剂基体物；
（3）取聚乙烯醇按质量比2~5：3~7：10~15加入海藻酸钠、水，升温至75~85℃搅拌混合，冷却至室温，得冷却物，取表面活性剂、处理剂基体物、冷却物按质量比1~3：10~15：6~8混合，得混合物，取混合物按质量比8~10：2~5滴入质量分数为5%的硝酸钙溶液中，搅拌混合，于-25~-20℃保温，解冻，重复保温解冻过程3~5次，得解冻物，用生理盐水洗涤，冷冻干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒，得微生物处理剂。
所述步骤（1）中筛选液体培养基：按质量份数计，取2~5份磷酸氢二钾、0.2~0.6份磷酸二氢钾、0.3~0.7份氯化钠、0.2~0.6份氯化铵、0.3~0.5份硫酸铁、0.1~0.3份硫酸镁、0.001~0.004份氯化钙、2~4份营养添加液、水1000份，121℃灭菌20min。
所述营养添加液：按质量份数计，取0.01~0.04份硫胺素、04~0.7份VB6、0.3~0.6份核黄素、0.3~0.5份VB5、0.03~0.05份对氨基苯甲酸、0.02~0.04份叶酸、0.2~0.5份卵磷脂、0.03~0.06份烟碱、0.1~0.3份肌醇、1000份水，121℃灭菌20min。
所述步骤（2）中筛选固体培养基：其他组分与筛选液体培养基相同，再添加20~25份琼脂，即得；富集培养基：按质量份数计，取15~20份葡萄糖、3~6份蛋白胨、3~6份酵母提取物、5~8份氯化钠、1000份水，pH7.5，121℃灭菌20min。
所述步骤（2）中辅助菌种：耶氏酵母菌按质量比1~3：2~5加入红螺菌混合，即得。
所述步骤（3）中表面活性剂：取十六胺按质量比1~3：9~13加入氯仿，搅拌混合20~30min，再加入十六胺质量1~3倍的3-氨基-2,2二甲基丙酰胺，于65~70℃搅拌混合10~12h，得搅拌混合物，取搅拌混合物按质量比8~15：1~3加入三氯氧磷，搅拌混合10~15h，减压蒸馏，得减压蒸馏物，取减压蒸馏物按质量比1：4~6加入无水乙醇，升温至60~70℃搅拌混合30~40min，冷却至室温，抽滤，取抽滤液旋转蒸发，得旋转蒸发物，取旋转蒸发物按质量比2~5：1~3加入槐糖脂混合，即得表面活性剂。
所述步骤（3）中保温、解冻的条件为：于-25~-20℃保温18~24h，再于3~5℃解冻10~12h。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）本发明通过筛选油烟垃圾中的优势菌种，加入地沟油对其进行驯化，得到活性较高能耐受油烟垃圾的种子菌种，其将油污垃圾作为碳源和氮源，使得种子菌种活性增强，加入耶氏酵母菌，在油污垃圾作为营养物质诱导的过程中，会产生大量的脂肪酶，通过末端氧化，通过吸收胞外油脂垃圾进入细胞体内，储存在体内形成大的脂肪粒作为自身生长所需的碳源和能源，进一步诱导脂肪酶的产生，在酶的催化下将其降解，加入光合红螺菌，在油烟垃圾中没有有机物的条件下，它可以利用光能，固定二氧化碳固定有机物，供给给活性菌种的营养物质，保持油污降解活性菌的活性，在有有机物的条件下，它又可以利用有机物进行生长，保持自身菌种活性；
（2）本发明通过十六胺、3-氨基-2,2二甲基丙酰胺进行反应，得到一类表面活性剂，其在油烟垃圾的油水界面形成胶束，同时具有亲水基和疏水基，一方面其亲水基直指亲水性物质，疏水基吸附油脂基团，吸附油脂，再通过活性菌对其降解，提高降解率，垃圾中的微生物在呼吸作用中产生的二氧化碳加入表面活性剂，会使其形成季铵盐，具有杀菌效果，加入槐糖脂亲水性的槐糖和疏水性的饱和或不饱和的长链ω-(或ω-1) 羟基脂肪酸两部分构成有助于分离疏水性物质和促进其被微生物降解；
（3）本发明聚乙烯醇、海藻酸钠对处理剂活性物质进行包裹、固定化，固定后使得降解菌达到较高的细胞密度，同时污染物和氧气能进入载体内，提高对高浓度的污染物耐受性，同时延长微生物菌剂的分解有效时间，增强降解效果。
具体实施方式
油污垃圾：取自垃圾回收中转站；地沟油：取自餐厨油脂回收厂，经121℃灭菌20min所得。
筛选液体培养基：按质量份数计，取2~5份磷酸氢二钾、0.2~0.6份磷酸二氢钾、0.3~0.7份氯化钠、0.2~0.6份氯化铵、0.3~0.5份硫酸铁、0.1~0.3份硫酸镁、0.001~0.004份氯化钙、2~4份营养添加液、水1000份，121℃灭菌20min。
筛选固体培养基：其他组分与筛选液体培养基相同，再添加20~25份琼脂，即得。
营养添加液：按质量份数计，取0.01~0.04份硫胺素、0.4~0.7份VB6、0.3~0.6份核黄素、0.3~0.5份VB5、0.03~0.05份对氨基苯甲酸、0.02~0.04份叶酸、0.2~0.5份卵磷脂、0.03~0.06份烟碱、0.1~0.3份肌醇、1000份水，121℃灭菌20min。
富集培养基：按质量份数计，取15~20份葡萄糖、3~6份蛋白胨、3~6份酵母提取物、5~8份氯化钠、1000份水，pH7.5，121℃灭菌20min。
辅助菌种：耶氏酵母菌按质量比1~3：2~5加入红螺菌混合，即得。
表面活性剂：取十六胺按质量比1~3：9~13加入氯仿，搅拌混合20~30min，再加入十六胺质量1~3倍的3-氨基-2,2二甲基丙酰胺，于65~70℃搅拌混合10~12h，得搅拌混合物，取搅拌混合物按质量比8~15：1~3加入三氯氧磷，搅拌混合10~15h，减压蒸馏，得减压蒸馏物，取减压蒸馏物按质量比1：4~6加入无水乙醇，升温至60~70℃搅拌混合30~40min，冷却至室温，抽滤，取抽滤液旋转蒸发，得旋转蒸发物，取旋转蒸发物按质量比2~5：1~3加入槐糖脂混合，即得表面活性剂。
一种油污垃圾微生物处理剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）取地沟油按质量比1：1000加入筛选液体培养基中混合，得一级筛选培养基，取油污垃圾按8~10%的接种量接种至一级筛选液体培养基，于150r/min、25~30℃培养2~4天，得一级培养物，取地沟油按质量比1：500加入筛选液体培养基中混合，得二级筛选液体培养基，将一级培养物按8~10%的接种量接种至二级液体筛选培养基中，重复培养过程，得二级培养物，依次取地沟油由3~8：1000加入筛选液体培养基，制成三级至八级筛选液体培养基，取二级培养物按8~10%的接种量接种至三级筛选液体培养基中，重复培养过程，得三级培养物，重复一级至三级筛选培养过程至八级筛选，得最终培养物；
（2）取最终培养物涂布接种至筛选固体培养基中，于25~30℃培养18~24h，取菌径最大的菌落重复划线2~4次，接种至筛选固体培养基培养，取培养物作为种子菌，取种子菌按3~5%的接种量接种至富集培养基中，于120r/min、25~30℃好氧培养18~24h，离心，取沉淀冷冻干燥，得冷冻干燥物，取冷冻干燥物按质量比5~8：2~4加入辅助菌种混合，得处理剂基体物；
（3）取聚乙烯醇按质量比2~5：3~7：10~15加入海藻酸钠、水，升温至75~85℃搅拌混合30~40min，冷却至室温，得冷却物，取表面活性剂、处理剂基体物、冷却物按质量比1~3：10~15：6~8混合，得混合物，取混合物按质量比8~10：2~5滴入质量分数为5%的硝酸钙溶液中，搅拌混合2~3h，于-25~-20℃保温18~24h，再于3~5℃解冻10~12h，重复保温解冻过程3~5次，得解冻物，用生理盐水洗涤，冷冻干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒，得微生物处理剂。
油污垃圾：取自垃圾回收中转站；地沟油：取自餐厨油脂回收厂，经121℃灭菌20min所得。
筛选液体培养基：按质量份数计，取2份磷酸氢二钾、0.2份磷酸二氢钾、0.3份氯化钠、0.2份氯化铵、0.3份硫酸铁、0.1份硫酸镁、0.001份氯化钙、2份营养添加液、水1000份，121℃灭菌20min。
筛选固体培养基：其他组分与筛选液体培养基相同，再添加20份琼脂，即得。
营养添加液：按质量份数计，取0.01份硫胺素、0.4份VB6、0.3份核黄素、0.3份VB5、0.03份对氨基苯甲酸、0.02份叶酸、0.2份卵磷脂、0.03份烟碱、0.1份肌醇、1000份水，121℃灭菌20min。
富集培养基：按质量份数计，取15份葡萄糖、3份蛋白胨、3份酵母提取物、5份氯化钠、1000份水，pH7.5，121℃灭菌20min。
辅助菌种：耶氏酵母菌按质量比1：2加入红螺菌混合，即得。
表面活性剂：取十六胺按质量比1：9加入氯仿，搅拌混合20min，再加入十六胺质量1倍的3-氨基-2,2二甲基丙酰胺，于65℃搅拌混合10h，得搅拌混合物，取搅拌混合物按质量比8：1加入三氯氧磷，搅拌混合10h，减压蒸馏，得减压蒸馏物，取减压蒸馏物按质量比1：4加入无水乙醇，升温至60℃搅拌混合30min，冷却至室温，抽滤，取抽滤液旋转蒸发，得旋转蒸发物，取旋转蒸发物按质量比2：1加入槐糖脂混合，即得表面活性剂。
一种油污垃圾微生物处理剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）取地沟油按质量比1：1000加入筛选液体培养基中混合，得一级筛选培养基，取油污垃圾按8%的接种量接种至一级筛选液体培养基，于150r/min、25℃培养2天，得一级培养物，取地沟油按质量比1：500加入筛选液体培养基中混合，得二级筛选液体培养基，将一级培养物按8%的接种量接种至二级液体筛选培养基中，重复培养过程，得二级培养物，依次取地沟油由3：1000加入筛选液体培养基，制成三级至八级筛选液体培养基，取二级培养物按8%的接种量接种至三级筛选液体培养基中，重复培养过程，得三级培养物，重复一级至三级筛选培养过程至八级筛选，得最终培养物；
（2）取最终培养物涂布接种至筛选固体培养基中，于25℃培养18h，取菌径最大的菌落重复划线2次，接种至筛选固体培养基培养，取培养物作为种子菌，取种子菌按3%的接种量接种至富集培养基中，于120r/min、25℃好氧培养18h，离心，取沉淀冷冻干燥，得冷冻干燥物，取冷冻干燥物按质量比5：2加入辅助菌种混合，得处理剂基体物；
（3）取聚乙烯醇按质量比2：3：10加入海藻酸钠、水，升温至75℃搅拌混合30min，冷却至室温，得冷却物，取表面活性剂、处理剂基体物、冷却物按质量比1：10：6混合，得混合物，取混合物按质量比8：2滴入质量分数为5%的硝酸钙溶液中，搅拌混合2h，于-25℃保温18h，再于3℃解冻10h，重复保温解冻过程3次，得解冻物，用生理盐水洗涤，冷冻干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒，得微生物处理剂。
油污垃圾：取自垃圾回收中转站；地沟油：取自餐厨油脂回收厂，经121℃灭菌20min所得。
筛选液体培养基：按质量份数计，取4份磷酸氢二钾、0.4份磷酸二氢钾、0.5份氯化钠、0.4份氯化铵、0.4份硫酸铁、0.2份硫酸镁、0.002份氯化钙、3份营养添加液、水1000份，121℃灭菌20min。
筛选固体培养基：其他组分与筛选液体培养基相同，再添加23份琼脂，即得。
营养添加液：按质量份数计，取0.03份硫胺素、0.6份VB6、0.5份核黄素、0.4份VB5、0.04份对氨基苯甲酸、0.03份叶酸、0.4份卵磷脂、0.05份烟碱、0.2份肌醇、1000份水，121℃灭菌20min。
富集培养基：按质量份数计，取18份葡萄糖、5份蛋白胨、5份酵母提取物、7份氯化钠、1000份水，pH7.5，121℃灭菌20min。
辅助菌种：耶氏酵母菌按质量比2：4加入红螺菌混合，即得。
表面活性剂：取十六胺按质量比2：11加入氯仿，搅拌混合25min，再加入十六胺质量2倍的3-氨基-2,2二甲基丙酰胺，于68℃搅拌混合11h，得搅拌混合物，取搅拌混合物按质量比12：2加入三氯氧磷，搅拌混合13h，减压蒸馏，得减压蒸馏物，取减压蒸馏物按质量比1：5加入无水乙醇，升温至65℃搅拌混合35min，冷却至室温，抽滤，取抽滤液旋转蒸发，得旋转蒸发物，取旋转蒸发物按质量比4：2加入槐糖脂混合，即得表面活性剂。
一种油污垃圾微生物处理剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）取地沟油按质量比1：1000加入筛选液体培养基中混合，得一级筛选培养基，取油污垃圾按9%的接种量接种至一级筛选液体培养基，于150r/min、28℃培养3天，得一级培养物，取地沟油按质量比1：500加入筛选液体培养基中混合，得二级筛选液体培养基，将一级培养物按9%的接种量接种至二级液体筛选培养基中，重复培养过程，得二级培养物，依次取地沟油由6：1000加入筛选液体培养基，制成三级至八级筛选液体培养基，取二级培养物按9%的接种量接种至三级筛选液体培养基中，重复培养过程，得三级培养物，重复一级至三级筛选培养过程至八级筛选，得最终培养物；
（2）取最终培养物涂布接种至筛选固体培养基中，于28℃培养21h，取菌径最大的菌落重复划线3次，接种至筛选固体培养基培养，取培养物作为种子菌，取种子菌按4%的接种量接种至富集培养基中，于120r/min、28℃好氧培养21h，离心，取沉淀冷冻干燥，得冷冻干燥物，取冷冻干燥物按质量比7：3加入辅助菌种混合，得处理剂基体物；
（3）取聚乙烯醇按质量比4：5：13加入海藻酸钠、水，升温至80℃搅拌混合35min，冷却至室温，得冷却物，取表面活性剂、处理剂基体物、冷却物按质量比2：13：7混合，得混合物，取混合物按质量比9：4滴入质量分数为5%的硝酸钙溶液中，搅拌混合2.5h，于-23℃保温21h，再于4℃解冻11h，重复保温解冻过程4次，得解冻物，用生理盐水洗涤，冷冻干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒，得微生物处理剂。
油污垃圾：取自垃圾回收中转站；地沟油：取自餐厨油脂回收厂，经121℃灭菌20min所得。
筛选液体培养基：按质量份数计，取5份磷酸氢二钾、0.6份磷酸二氢钾、0.7份氯化钠、0.6份氯化铵、0.5份硫酸铁、0.3份硫酸镁、0.004份氯化钙、4份营养添加液、水1000份，121℃灭菌20min。
筛选固体培养基：其他组分与筛选液体培养基相同，再添加25份琼脂，即得。
营养添加液：按质量份数计，取0.04份硫胺素、0.7份VB6、0.6份核黄素、0.5份VB5、0.05份对氨基苯甲酸、0.04份叶酸、0.5份卵磷脂、0.06份烟碱、0.3份肌醇、1000份水，121℃灭菌20min。
富集培养基：按质量份数计，取20份葡萄糖、6份蛋白胨、6份酵母提取物、8份氯化钠、1000份水，pH7.5，121℃灭菌20min。
辅助菌种：耶氏酵母菌按质量比3：5加入红螺菌混合，即得。
表面活性剂：取十六胺按质量比3：13加入氯仿，搅拌混合30min，再加入十六胺质量3倍的3-氨基-2,2二甲基丙酰胺，于70℃搅拌混合12h，得搅拌混合物，取搅拌混合物按质量比15：3加入三氯氧磷，搅拌混合15h，减压蒸馏，得减压蒸馏物，取减压蒸馏物按质量比1：6加入无水乙醇，升温至70℃搅拌混合40min，冷却至室温，抽滤，取抽滤液旋转蒸发，得旋转蒸发物，取旋转蒸发物按质量比5：3加入槐糖脂混合，即得表面活性剂。
一种油污垃圾微生物处理剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）取地沟油按质量比1：1000加入筛选液体培养基中混合，得一级筛选培养基，取油污垃圾按10%的接种量接种至一级筛选液体培养基，于150r/min、30℃培养4天，得一级培养物，取地沟油按质量比1：500加入筛选液体培养基中混合，得二级筛选液体培养基，将一级培养物按10%的接种量接种至二级液体筛选培养基中，重复培养过程，得二级培养物，依次取地沟油由8：1000加入筛选液体培养基，制成三级至八级筛选液体培养基，取二级培养物按10%的接种量接种至三级筛选液体培养基中，重复培养过程，得三级培养物，重复一级至三级筛选培养过程至八级筛选，得最终培养物；
（2）取最终培养物涂布接种至筛选固体培养基中，于30℃培养24h，取菌径最大的菌落重复划线4次，接种至筛选固体培养基培养，取培养物作为种子菌，取种子菌按5%的接种量接种至富集培养基中，于120r/min、30℃好氧培养24h，离心，取沉淀冷冻干燥，得冷冻干燥物，取冷冻干燥物按质量比8：4加入辅助菌种混合，得处理剂基体物；
（3）取聚乙烯醇按质量比5：7：15加入海藻酸钠、水，升温至85℃搅拌混合40min，冷却至室温，得冷却物，取表面活性剂、处理剂基体物、冷却物按质量比3：15：8混合，得混合物，取混合物按质量比10：5滴入质量分数为5%的硝酸钙溶液中，搅拌混合3h，于-20℃保温24h，再于5℃解冻12h，重复保温解冻过程5次，得解冻物，用生理盐水洗涤，冷冻干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒，得微生物处理剂。
对比例：邢台市某公司生产的油烟处理剂。
将上述制备方法的实施例1、2、3样品和对比例进行油烟垃圾的处理测试：测试油烟垃圾取市用地沟油，分别按照上述实施例和对比例的方法进行处理，在处理完成后，测量油烟垃圾中的主要成分碳含量，得出降解率，其具体结果见下表 1。
表1
测试项目 实施例1 实施例2 实施例3 对比例
反应时间（min） 30 30 30 30
脱碳率（%） 86.6 88.2 87.5 45.9
油烟降解率（%） 92 95 96 62
综上所述，由表1可知，本发明的油烟垃圾微生物处理剂对油烟的处理效果明显优于市场油烟处理剂，油烟降解率大大提高，有广阔的发展前景。

Claims (7)

1.一种油污垃圾微生物处理剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：
（1）取地沟油按质量比1：1000加入筛选液体培养基中混合，得一级筛选培养基，取油污垃圾按8~10%的接种量接种至一级筛选液体培养基，于150r/min、25~30℃培养，得一级培养物，取地沟油按质量比1：500加入筛选液体培养基中混合，得二级筛选液体培养基，将一级培养物按8~10%的接种量接种至二级液体筛选培养基中，重复培养过程，得二级培养物，依次取地沟油由3~8：1000加入筛选液体培养基，制成三级至八级筛选液体培养基，取二级培养物按8~10%的接种量接种至三级筛选液体培养基中，重复培养过程，得三级培养物，重复一级至三级筛选培养过程至八级筛选，得最终培养物；
（2）取最终培养物涂布接种至筛选固体培养基中，于25~30℃培养18~24h，取菌径最大的菌落重复划线2~3次，接种至筛选固体培养基培养，取培养物作为种子菌，取种子菌按3~5%的接种量接种至富集培养基中，于120r/min、25~30℃好氧培养，离心，取沉淀冷冻干燥，得冷冻干燥物，取冷冻干燥物按质量比5~8：2~4加入辅助菌种混合，得处理剂基体物；
（3）取聚乙烯醇按质量比2~5：3~7：10~15加入海藻酸钠、水，升温至75~85℃搅拌混合，冷却至室温，得冷却物，取表面活性剂、处理剂基体物、冷却物按质量比1~3：10~15：6~8混合，得混合物，取混合物按质量比8~10：2~5滴入质量分数为5%的硝酸钙溶液中，搅拌混合，于-25~-20℃保温，解冻，重复保温解冻过程3~5次，得解冻物，用生理盐水洗涤，冷冻干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒，得微生物处理剂。
2.根据权利要求1所述的油污垃圾微生物处理剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中筛选液体培养基：按质量份数计，取2~5份磷酸氢二钾、0.2~0.6份磷酸二氢钾、0.3~0.7份氯化钠、0.2~0.6份氯化铵、0.3~0.5份硫酸铁、0.1~0.3份硫酸镁、0.001~0.004份氯化钙、2~4份营养添加液、水1000份，121℃灭菌20min。
3.根据权利要求2所述的油污垃圾微生物处理剂的制备方法，其特征在于，所述营养添加液：按质量份数计，取0.01~0.04份硫胺素、04~0.7份VB6、0.3~0.6份核黄素、0.3~0.5份VB5、0.03~0.05份对氨基苯甲酸、0.02~0.04份叶酸、0.2~0.5份卵磷脂、0.03~0.06份烟碱、0.1~0.3份肌醇、1000份水，121℃灭菌20min。
4.根据权利要求1所述的油污垃圾微生物处理剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中筛选固体培养基：其他组分与筛选液体培养基相同，再添加20~25份琼脂，即得；富集培养基：按质量份数计，取15~20份葡萄糖、3~6份蛋白胨、3~6份酵母提取物、5~8份氯化钠、1000份水，pH7.5，121℃灭菌20min。
5.根据权利要求1所述的油污垃圾微生物处理剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中辅助菌种：耶氏酵母菌按质量比1~3：2~5加入红螺菌混合，即得。
6.根据权利要求1所述的油污垃圾微生物处理剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中表面活性剂：取十六胺按质量比1~3：9~13加入氯仿，搅拌混合20~30min，再加入十六胺质量1~3倍的3-氨基-2,2二甲基丙酰胺，于65~70℃搅拌混合10~12h，得搅拌混合物，取搅拌混合物按质量比8~15：1~3加入三氯氧磷，搅拌混合10~15h，减压蒸馏，得减压蒸馏物，取减压蒸馏物按质量比1：4~6加入无水乙醇，升温至60~70℃搅拌混合30~40min，冷却至室温，抽滤，取抽滤液旋转蒸发，得旋转蒸发物，取旋转蒸发物按质量比2~5：1~3加入槐糖脂混合，即得表面活性剂。
7.根据权利要求1所述的油污垃圾微生物处理剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中保温、解冻的条件为：于-25~-20℃保温18~24h，再于3~5℃解冻10~12h。
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