CN108770755A - 一种适用于黑鲷幼鱼的标记方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种适用于黑鲷幼鱼的标记方法，其步骤如下：（1）准备体长3‑5公分待标记黑鲷幼鱼若干；（2）将荧光标记染料制成2000 mg/L的母液待用；（3）在母液制备过程中，不断添加适量碳酸氢钠以调节溶液pH值至7.5‑7.8；（5）准备大小合适的浸染容器若干；（6）以母液配成100‑400 mg/L的浸染标记液；（7）将黑鲷幼鱼以0.5尾/L的密度放入染液中；（8）浸染结束后，使用清洁海水洗净黑鲷幼鱼周身染液；本发明能解决增殖放流中黑鲷幼鱼放流后的追踪技术问题，使用茜素红作为荧光标记染料在保证标记效果的同时，能高效、快速、安全的对黑鲷幼鱼浸染标记，并能在一段时期内保证标记的质量。
Description
技术领域
本发明属于增殖放流跟踪监测技术领域，特别是涉及一种能有效标记黑鲷幼鱼的标记方法。
背景技术
黑鲷(Acanthopagrus schlegelii)隶属鲈形目，鲷科，棘鲷属，是我国沿海常见暖水性底层经济鱼类，分布于底质为沙泥、水深40-60m的水域，其肉质鲜美，生长迅速，适应能力强，栖息于河口、海湾，不作长距离洄游，是重要的捕捞鱼类和增养殖对象。黑鲷属岛礁性鱼类，其苗种培育技术成熟，为我国沿海各地常见放流对象，也是我国南海海域主要的放流对象之一。
为更好通过增殖放流来恢复保护海洋渔业资源，放流后的跟踪监测与效果评价非常重要，标志技术方法则是放流后跟踪监测与效果评价的重要手段。
传统的标志技术多选择挂牌标志、剪除鳍条等方法，对标志鱼的损伤较大，死亡率高，并且挂牌标记存在脱标问题，而剪除鳍条则可能会由于标志鱼较强的恢复能力再生后难以辨识。荧光标记法利用荧光染料在标记对象硬骨组织上形成标记效果明显，已在斑马鱼(Dmio rerio)、翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)、红鳍笛鲷(Lutjanuserythopterus)、滇池金线鲃(Sinocyclocheilus grahami)、大马哈鱼(Oncorhynchusketa)、刺参(Apostichopus japonicus)等多种放流种类的标记技术中得以使用。对于标记材料的选择，通常需要从其标记成功率、标记成活率、对标记对象生长的影响、标记效果保持率等多方面进行筛选，同时还应综合考虑操作的普及性和标记成本等因素。
由于不同标记对象的对染料的敏感程度不同，荧光浸染标记黑鲷的材料选择和标记方法的选择不尽相同。目前，国内外尚无对黑鲷进行荧光浸染标记的专利报告。因此，急需提供一种适宜于放流种类黑鲷的荧光浸染标记材料和方法。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种适用于黑鲷幼鱼的标记方法，以解决增殖放流中黑鲷幼鱼放流后的追踪技术问题。该标记染料的选择在保证标记效果的同时，高效、快速、安全的对黑鲷幼鱼浸染标记，并能在一段时期内保证标记的质量。
本发明的技术方案如下：
一种适用于黑鲷幼鱼的标记方法，其步骤如下：
(1)准备体长3-5公分待标记黑鲷幼鱼若干，提前3日暂养于室内养殖池，适量投喂饲料，并于第3日停食；
(2)将荧光标记染料碾成细粉，用过滤后的养殖用水，经仔细搅拌，全部溶解，制成2000mg/L的母液待用；
(3)在母液制备过程中，不断添加适量碳酸氢钠以调节溶液pH值，使其保持在6.5-8.0；
(4)充分曝气后，再次添加适量碳酸氢钠调节溶液pH，最终使得溶液pH值稳定在7.5-7.8；
(5)另于遮光安静处，根据待标记黑鲷幼鱼数量准备大小合适的浸染容器若干；
(6)浸染容器中加入过滤后养殖用水，以母液配成100-400mg/L的浸染标记液；
(7)将黑鲷幼鱼以0.5尾/L的密度放入染液中，遮光环境浸染24小时，期间保持充气；
(8)浸染结束后，使用清洁海水洗净黑鲷幼鱼周身染液。
优选的，所述荧光标记染料为茜素红。
本发明的有益效果是：茜素红价格低廉、溶解度高、标记质量好、毒性较低，应用性强；浸染后的黑鲷幼鱼，在鳞片、鳍棘、鳍条上均获得良好标记，全样品荧光检测的总标记率达到100％；经50天暂养试验，标记保持率为99.27％，标记保持效果良好。另外，本标记方法简便易操作，经多次试验摸索，严格按照本方法操作，能获得高质量的标记效果，并保证标记过程中的黑鲷幼鱼成活率。
附图说明
图1为黑鲷幼鱼经ARS荧光染料标记后并养殖0-50d的体长与体重变化数据图；
图2为黑鲷鳞片荧光标志效果观察情况图；
图3为鳍棘荧光标志效果观察情况图；
图4为鳍条荧光标志效果观察情况图。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明技术方案做进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。
以下实施例中，试验鱼来自中国水产科学研究院南海水产研究所深圳实验基地，试验各原料采用市售产品即可。
实施例1
本实施例提供的试验用黑鲷幼鱼体长40-49mm，体重1.3-2.8g，暂养在500L的养殖桶10d，暂养密度为1.6尾/L。在暂养期间，每日早晚投喂2次颗粒饲料(元牌0#浮性颗粒饲料)至饱食。暂养期间保持水温23±2.5℃，盐度33±2.0‰，溶解氧6.22mg/L，pH7.6-7.8，光周期14L/10D。每日换水率占养殖水体的30％。
将茜素红(分子式：C14H7NaO7S·H2O)碾成细粉(茜素红为橙黄色或黄棕色粉末，易溶于水)，用过滤后的养殖用水，经仔细搅拌，全部溶解，制成2000mg/L的母液待用；在母液制备过程中，不断添加适量碳酸氢钠(分子式：NaHCO3)调节溶液pH值，使其保持在6.5-8.0；充分曝气后，再次添加适量碳酸氢钠调节溶液pH，最终使得溶液pH值稳定在7.5-7.8。
浸染容器使用容量60L的暂养桶，置于遮光安静处，浸染容器中加入过滤后养殖用水，以母液配成100mg/L的浸染标记液30L，将pH调节至7.6，自然水温(23±2.3℃)。每个浸染桶随机放入60尾黑鲷幼鱼，利用气泵连续充气，浸染时间24小时。
浸染结束后，用清洁海水浸泡洗净黑鲷幼鱼周身染液，完成标记操作。
实施例2
本实施例提供的黑鲷幼鱼暂养与茜素红染液母液制作见所述实施例1。
浸染容器使用容量60L的暂养桶，置于遮光安静处，浸染容器中加入过滤后养殖用水，以母液配成200mg/L的浸染标记液30L，将pH调节至7.6，自然水温(23±2.3℃)。每个浸染桶随机放入60尾黑鲷幼鱼，利用气泵连续充气，浸染时间24小时。
实施例3
本实施例提供的黑鲷幼鱼暂养与茜素红染液母液制作见所述实施例1。
浸染容器使用容量60L的暂养桶，置于遮光安静处，浸染容器中加入过滤后养殖用水，以母液配成300mg/L的浸染标记液30L，将pH调节至7.6，自然水温(23±2.3℃)。每个浸染桶随机放入60尾黑鲷幼鱼，利用气泵连续充气，浸染时间24小时。
实施例4
本实施例提供的黑鲷幼鱼暂养与茜素红染液母液制作见所述实施例1。
浸染容器使用容量60L的暂养桶，置于遮光安静处，浸染容器中加入过滤后养殖用水，以母液配成400mg/L的浸染标记液30L，将pH调节至7.6，自然水温(23±2.3℃)。每个浸染桶随机放入60尾黑鲷幼鱼，利用气泵连续充气，浸染时间24小时。
浸染试验结束后，取上述4例标记试验黑鲷幼鱼对照同批次黑鲷幼鱼，进行生长试验。每个试验组与对照组各组随机挑选90尾黑鲷幼鱼，设三个平行(每个平行30尾)，每组分养于三个循环水养殖桶。每日早晚投喂2次颗粒饲料(元牌0#浮性颗粒饲料)至饱食，养殖期间连续充气、砂滤海水微流水养殖(水温24-29℃，盐度35±1.0‰，溶氧5.73–6.62mg/L，pH7.6–8.0，光照周期14L/10D，养殖周期50天)。
试验开始前测定全部生长试验黑鲷幼鱼体长、体重，数据分别精确到1mm和0.1g；在试验期间，每10天各平行随机抽取10尾试验鱼测定体长、体重指标(如图1所示)，试验结果表明：试验组与对照组实验鱼在0、10、20、30、40、50d养殖过程中体长、体重无显著差异(p>0.05)。
养殖试验期间，每间隔十天，各平行随机抽取3尾黑鲷幼鱼，取耳石1对、鳞片10枚左右(侧线上方、背鳍基部下方与侧线下方、臀鳍基部上方位置)、全部鳍条(背鳍条、胸鳍条、腹鳍条、臀鳍条、尾鳍条)和全部鳍棘(背鳍棘、胸鳍棘、臀鳍棘)，用以荧光标记检测。全部样品洗净吸干、遮光保存，一个月之内完成检测分析。
如图2所示，荧光显微镜(Olympus BX51)装配数码照相机(Olympus DP70)，观察荧光标记。标记质量评价分级量化，分级标准参照下表(表1)。观察全部样品的荧光标记，记录评价荧光标记染色质量。样品由两位试验人员单独标记质量评价记录，如果有偏差则由第三位试验人员确定。该试验中，如果标记质量≥2，认为标记质量良好。
表1标记清晰度等级及划分标准
统计分析：使用SPSS、Excel处理相关数据，单因素方差分析显著性差异水平，数据用“平均数±标准差”表示。
表2ARS染色黑鲷幼鱼不同取样时间鳍条、鳍棘、鳞片和耳石的标记效果
以上试验结果表明：比较四组试验组的标记质量，100mg/L浓度组与200mg/L浓度组(标记质量较好)存在显著差异(p<0.05)，其它各间无显著性差异(p>0.05)。鳍棘>鳍条>鳞片>耳石(各取样组织标记质量均差异极显著，p<0.01)。
结论：使用本发明公开的标记染料和标记方法，50天后试验黑鲷幼鱼体长、体重与对照组无显著性差异。ARS浸染标记黑鲷幼鱼能取得较好的效果，是黑鲷荧光标记的良好选择对象，其中ARS在鳍棘形成自然光下肉眼看见标记为野外条件下的直接观测提供了便利，可大幅提高检测效率。以浸染浓度最低、效果最佳为原则，综合以上，推荐荧光标记染料ARS200mg/L为标记浓度为最适宜标记条件。同时该标记所用的原料来源稳定，容易获得，标记简单、方便，成功率高。
以上为本发明的较佳实施方式，但实施方式并不是用来限定本发明，在不脱离本发明之精神和范围内，所做的任何等效变化或润饰，同样属于本发明之保护范围，因此本发明的保护范围应当以本申请的权利要求所界定的内容为标准。
Claims (2)
1.一种适用于黑鲷幼鱼的标记方法，其步骤如下：
（1）准备体长3-5公分待标记黑鲷幼鱼若干，提前3日暂养于室内养殖池，适量投喂饲料，并于第3日停食；
（2）将荧光标记染料碾成细粉，用过滤后的养殖用水，经仔细搅拌，全部溶解，制成2000mg/L的母液待用；
（3）在母液制备过程中，不断添加适量碳酸氢钠以调节溶液pH值，使其保持在6.5-8.0；
（4）充分曝气后，再次添加适量碳酸氢钠调节溶液pH，最终使得溶液pH值稳定在7.5-7.8；
（5）另于遮光安静处，根据待标记黑鲷幼鱼数量准备大小合适的浸染容器若干；
（6）浸染容器中加入过滤后养殖用水，以母液配成100-400 mg/L的浸染标记液；
（7）将黑鲷幼鱼以0.5尾/L的密度放入染液中，遮光环境浸染24小时，期间保持充气；
（8）浸染结束后，使用清洁海水洗净黑鲷幼鱼周身染液。
2.根据权利要求1所述的一种适用于黑鲷幼鱼的标记方法，其特征在于：所述荧光标记染料为茜素红。
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