CN108760871B - 细胞亲和力检测出样装置及其在细胞亲和力测定中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种细胞亲和力检测出样装置及其在细胞亲和力测定中的应用，包括进样器、硬质毛细管和毛细管接头；硬质毛细管为管状结构且其管状结构内填充有细胞固定凝胶，硬质毛细管的一端设有外螺纹，毛细管接头呈管状结构且其一端设有内螺纹并与硬质毛细管的一端螺纹连接，毛细管接头内还设有一滤网，毛细管接头的另一端与检测装置连接，进样器的出料端与硬质毛细管的另一端连接，进样器用于输入工作缓冲液和待检测溶液，由进样器将工作缓冲液或待检测溶液注入硬质毛细管中，使工作缓冲液或待检测溶液经过硬质毛细管内的细胞固定凝胶后，从毛细管接头处推送出并进入检测装置中，该方案成本低、操作简便和能够快速对检测设备进行样品输入。

Description

细胞亲和力检测出样装置及其在细胞亲和力测定中的应用
技术领域
本发明涉及蛋白质与小分子化合物的亲和力检测领域，尤其是涉及一种细胞亲和力检测出样装置及其在细胞亲和力测定中的应用。
背景技术
药物与蛋白质通过相互作用而发挥其治疗作用，这种相互作用具体而言指的是药物通过共价键或者非共价键如氢键结合至蛋白质的特定位点或者区域，改变蛋白质的空间构象或者组织蛋白质发生特定的构象变化，形成化合物-蛋白质复合物（以下简称复合物），从而使蛋白质的某种功能被增强、削弱或者使之丧失。因此，药物与蛋白质的结合是其发挥药理活性的初始关键过程。这里的“药物”指的是已经被证明具有治疗作用的化合物。
对于同一靶点蛋白，不同的化合物因其与蛋白结合的位点或者形成“键”的类型强弱均有所不同，而体现于不同强弱程度的蛋白结合能力。所谓化合物与蛋白质的结合能力，指的是其与蛋白质通过共价键或非共价键发生连接的难易程度及这些键断裂的难易程度，又叫做化合物与蛋白质结合的亲和力（下面简称亲和力）。亲和力主要体现在化合物与蛋白质结合形成复合物的速度及复合物重新解离（即分开）成游离的蛋白质和化合物的速度上。此处的速度，指的是某一时刻有多少物质的量的化合物与受体结合，或者某一时刻有多少物质的量的复合物解离成游离的化合物与蛋白。
化合物与蛋白质的亲和力强，则其在更低的浓度下就能够发挥作用，最终体现出更优异的生物学或者药理学活性。因此测试化合物与蛋白质的亲和力强弱在药物的研发中具有重要的意义。通过检测亲和力的强弱，能够帮助研究者找到化合物活性不佳的原因，并为化合物结构改造提供目标。定量衡量亲和力的大小的指标为平衡解离常数KD。为了解释该常数，首先介绍化合物与蛋白质的结合的动力学过程。化合物同蛋白质在溶液中相遇，因为微观粒子的无规律碰撞而发生结合形成复合物。一旦复合物形成，又会因为各种因素的作用而重新解离成游离的化合物与蛋白质。这两个过程从宏观上是同时发生的：不断有化合物与蛋白质结合形成复合物，同时又不断有复合物解离成游离的化合物与蛋白质。影响这两个反应的速度的因素主要包括溶液中其他粒子的浓度、温度以及反应物浓度。
在反应之初，溶液中游离的化合物与蛋白质含量远大于复合物的含量，因此结合反应的速度远大于复合物解离的速度，于是综合表现为化合物不断与受体结合形成复合物。而随着反应进行，结合反应的反应速度随着游离的化合物和蛋白质的减少而减小，而解离反应的反应速度则随着复合物总浓度的增加而增大，在某一时刻起始，两种反应的速度相等，于是综合起来，游离的化合物与蛋白质的含量以及复合物的含量都不在变化，这种状态叫结合-解离平衡。当达到解离平衡时，溶液中游离的化合物浓度（记作[C]）、蛋白质浓度（记作[P]）和复合物浓度（记作[AP]）满足如下关系：[A]*[P]/[AP]为一常数。这个常数越大，则说明化合物同蛋白质的亲和力越小。
目前常用的测定亲和力常数的方法包括荧光共振能量转移技术，表面等离子共振技术、荧光偏振技术、临近闪烁分析技术、微量热泳动技术等。这些技术，特别是表面等离子共振技术和微量热泳动技术，能够在相当精确的在皮摩尔级别对亲和力进行测定。但这些技术都需要使用纯化的蛋白质进行亲和力的检测，并且无法定性的对亲和力进行简单有效的比较，且设备费用高昂。
另一方面，许多蛋白，特别是细胞表面受体蛋白，想要获得具备天然活性和构象的蛋白相当困难。事实上蛋白质，特别是膜蛋白的表达纯化，是一项具有相当技术要求的工作，必须通过大量的表达条件、纯化方法等的摸索才能得到少量较为纯净的具备天然活性和构象的蛋白质。
因此，寻找一种低成本、简便、快速比较化合物同蛋白质亲和力的方法，对于药物研发工作的顺利推进，具有重要意义。
发明内容
针对现有技术的情况，本发明的目的在于提供一种成本低、操作简便和能够快速对检测设备进行样品输入的细胞亲和力检测出样装置及其在细胞亲和力测定中的应用。
为了实现上述的技术目的，本发明采用的技术方案为：
一种细胞亲和力检测出样装置，与检测装置管连接且用于细胞固定凝胶的固定和待检测溶液的输出；其包括进样器、硬质毛细管和毛细管接头；所述的硬质毛细管为管状结构且其管状结构内填充有细胞固定凝胶，硬质毛细管的一端设有外螺纹，所述的毛细管接头呈管状结构且其一端设有内螺纹并与硬质毛细管的一端螺纹连接，毛细管接头的管状结构内还设有一滤网，毛细管接头的另一端用于与检测装置的进样口连接，所述进样器的出料端与硬质毛细管的另一端可拆卸连接，所述的进样器用于输入工作缓冲液和待检测溶液，由进样器将工作缓冲液或待检测溶液注入硬质毛细管中，使工作缓冲液或待检测溶液经过硬质毛细管内的细胞固定凝胶后，从毛细管接头处推送出并进入检测装置中。
进一步，其还包括进样器连接头，所述硬质毛细管的另一端还设有外螺纹，所述的进样器连接头呈管状结构，其一端设有内螺纹并用于与硬质毛细管的另一端连接，进样器连接头的另一端与进样器的出料端插接配合。
优选的，所述进样器的出料端呈中空锥台形结构，所述进样器连接头与进样器的出料端配合的端部结构与其相适应并连接。
优选的，所述进样器连接头与进样器连接端内还嵌设有密封胶圈。
进一步，所述滤网的网孔呈圆形或方形。
优选的，所述滤网的网孔大小为0.5 mm。
进一步，所述的硬质毛细管为聚碳酸酯、聚醚砜树脂、聚丙烯、聚乙烯或聚苯乙烯材料成型。
一种细胞亲和力检测出样装置在细胞亲和力测定中的应用，其包括如下步骤：
（1）用具消毒：将硬质毛细管进行紫外消毒处理；
（2）凝胶制备：取一凝胶材料，将其用1 mL灭菌水溶解，制得1%凝胶含量的溶液，再从中取0.5 mL溶液与1 mL无菌的20%蔗糖溶液及0.5 mL灭菌水混合，制得0.25%的凝胶溶液；
（3）细胞预处理：将稳定表达的待检测细胞表面受体的工具细胞用0.25%胰蛋白酶消化并离心收集，弃去上层培养基再用10%无菌蔗糖溶液重新将细胞悬浮并混合均匀；然后再次离心收集细胞并用10%无菌蔗糖溶液重新将细胞悬浮并混合均匀，制得最终细胞密度为20000个/mL的细胞悬浮液；
（4）初步固定：将步骤（3）制得的细胞悬浮液与步骤（2）制得的凝胶溶液混合均匀后，得到凝胶-细胞混合液；
（5）取一封口接头可拆卸封堵在经步骤（1）处理的硬质毛细管一端，并令其朝下，然后往硬质毛细管中加入温度为4℃的含10%蔗糖的细胞培养基，再把步骤（4）制得的凝胶-细胞混合液装入硬质毛细管中，然后再加入温度为4℃的含10%蔗糖的细胞培养基，期间，保证两次加入的含10%蔗糖的细胞培养基与注入的凝胶-细胞混合液分层，并且硬质毛细管注满，最后再取一封口接头将硬质毛细管另一端封堵；
（6）将步骤（5）注满的硬质毛细管固定置于垂直旋转仪上，然后在37℃条件下，以4～6转分的转速进行垂直旋转硬质毛细管,直至硬质毛细管中的凝胶-细胞混合液凝固成型；
（7）将经过步骤（6）处理的硬质毛细管取下，并分别拆去其两端的封口接头，然后将硬质毛细管的一端与毛细管接头连接，另一端与进样器的出料端连接，进样器中加入有工作缓冲液；
（8）取部分步骤（7）制得的工作缓冲液，然后将受试小分子化合物溶解至工作缓冲液中，得到化合物溶液；
（9）将毛细管接头的出料端与检测设备的进样口连接，然后往进样器内加入步骤（7）制得的工作缓冲液且将其推送入硬质毛细管中，并使工作缓冲液透过硬质毛细管内凝固成型的凝胶-细胞并从毛细管接头的出料端流出并进入检测设备的进样口；
（10）当检测设备检测到缓冲液成分的信号时，将加样器中的工作缓冲液替换成步骤（8）制得的化合物溶液，然后将化合物溶液推送入硬质毛细管中并最终进入检测设备的进样口，化合物溶液加入期间进行计时，并观察化合物加入浓度随时间的变化和记录最大检测峰的出现时间，将其定义为“结合时间”；待最大检测峰出现后，将化合物溶液更换为工作缓冲液，然后重新推送入硬质毛细管中并最终进入检测设备的进样口，加入期间进行计时，并观察所加入化合物浓度的信号值减弱至初始状态时的经过时间，将其定义为“洗脱时间”，然后计算亲和力大小。
进一步，所述工作缓冲液的成分为：含有100 mg/L无水氯化钙、47 mg/L无水氯化镁、200 mg/L氯化钾、200 mg/L磷酸二氢钾、8g/L氯化钠和1.15 g/L磷酸氢二钠的水溶液。
进一步，所述的检测设备为质谱仪或蒸发光散射检测器。
本发明方案通过将蛋白质或者细胞直接用特殊的凝胶材料进行固定，利用蛋白或者细胞表面受体对化合物的亲和能力，使得化合物在凝胶中运动被阻滞，从而比较化合物与蛋白质亲和力的大小，是一种简便有效的亲和力检测和比较方法。故而，基于这一方法开发出一套检测化合物与蛋白质或者细胞表面受体的装置，能够帮助减少药物研发过程中对于初步的、不要求高精度的亲和力检测和比较工作所花费的投入和时间。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步的阐述：
图1为本发明出样装置的简要实施结构示意图；
图2为图1所示示意图中进样器的简要结构示意图；
图3为图1所示示意图中硬质毛细管的简要结构示意图；
图4为图1所示示意图中毛细管接头的简要结构示意图；
图5为图4所示毛细管接头的俯视结构示意图；
图6为图1所示示意图中进样器连接头的简要剖面结构示意图；
图7为硬质毛细管采用封口接头进行两端封堵时的示意图；
图8为本发明采用的垂直旋转之一的简要示意图；
图9为本发明采用的质谱仪之一的简要示意图。
具体实施方式
如图1至6之一所示，本发明装置与检测装置管连接且用于细胞固定凝胶6的固定和待检测溶液的输出；其包括进样器1、硬质毛细管2和毛细管接头3；所述的硬质毛细管2为管状结构且其管状结构内填充有细胞固定凝胶6，硬质毛细管2的一端设有外螺纹21，所述的毛细管接头3呈管状结构且其一端设有内螺纹并与硬质毛细管2的一端螺纹连接，毛细管接头3的管状结构内还设有一滤网31，进一步，所述滤网31的网孔呈圆形或方形，优选的，所述滤网31的网孔大小为0.5 mm，毛细管接头3的另一端用于与检测装置（未示出）的进样口连接，所述进样器1的出料端与硬质毛细管2的另一端可拆卸连接，所述的进样器1用于输入工作缓冲液和待检测溶液，由进样器1将工作缓冲液或待检测溶液注入硬质毛细管2中，使工作缓冲液或待检测溶液经过硬质毛细管2内的细胞固定凝胶6后，从毛细管接头3处推送出并进入检测装置中。
其中，为了便于进样器1的连接，其还包括进样器连接头5，所述硬质毛细管2的另一端还设有外螺纹21，所述的进样器连接头5呈管状结构，其一端设有内螺纹并用于与硬质毛细管2的另一端连接，进样器连接头5的另一端与进样器1的出料端插接配合，优选的，所述进样器1的出料端呈中空锥台形结构，所述进样器连接头5与进样器1的出料端配合的端部结构与其相适应为锥台形结构51并连接，优选的，所述进样器连接头5与进样器1连接端内还嵌设有密封胶圈。
进一步，所述的硬质毛细管2可以为聚碳酸酯、聚醚砜树脂、聚丙烯、聚乙烯或聚苯乙烯材料成型。
本发明出样装置的实施结构并不局限于前述所示，而其配合结构亦可进行适配。如下大致介绍了本发明出样装置各部件的简要尺寸，但不应作为本发明方案的具体尺寸范围限定。
其中进样器1内用于容置工作缓冲液或待检测溶液的容置空间规格与普通注射器规格可近似相同，可以包括但不局限于1mL、2.5 mL、5mL、20 mL、50 mL。
为了便于实施使用，硬质毛细管2的外径可以为4 mm，内直径可以为0.8～2 mm；长度可根据需要定制，主要包括100 mm、250 mm和500 mm三种规格，而毛细管两端具有螺纹用于与接头进行连接和固定，螺纹区的宽度为5mm。
毛细管接头用于连接硬质毛细管与检测装置的进料口，该接头可以包括上下两段，上段外直径为6mm，上段内直径为4mm，下段外直径为2mm，内直径为0.8-1.6mm。该接头的上段高5mm，内具有螺纹用于与毛细管连接。该接头下段长度为5-10 mm。该接头上端和下端连接处具有滤网结构，该滤网的网孔为方形或原型，孔径为0.5 mm。
进样器连接头用于连接硬质毛细管与进样器1，该接头包括上下两段。该接头上段用于连接进样器，为倒置梯台结构，其上底外直径7mm，内直径5mm，下底外直径6mm，内直径4mm，高度为8mm。该接头下段用于连接毛细管，为空心圆台结构，外直径为6mm，内直径为4mm，高度6 mm。该接头下段内有螺纹，螺纹宽5mm。该接头上下两段间内置宽1mm，直径4mm的密封胶圈，用于避免连接时漏液。
而硬质毛细管在装填细胞固定凝胶时所使用的封口接头用于封闭毛细管。该接头外径为6mm，内径为4mm。该接头上端开口，下端封闭，涂有弹性密封胶，用于封闭毛细管防止液体渗漏。该接头内有螺纹，螺纹区域宽度为5mm。
检测设备用于检测从毛细管接头3从流出溶液中的化合物含量，检测设备与毛细管接头3间用普通硅胶或者聚四氟乙烯毛细软管连接，毛细软管内径为1.8-2 mm。检测设备可以使用质谱仪或者蒸发光散射检测器。
仪器在使用时还需要自备细胞培养用人工水凝胶基质或者保外基质或者其他可以用于细胞3D培养的凝胶材料。该材料应当具备可以自发组装形成围观结构为三维网状结构的透水凝胶材料，且不与蛋白发生化学连接的特性。
一种细胞亲和力检测出样装置在细胞亲和力测定中的应用，其包括如下步骤：
（1）用具消毒：将硬质毛细管进行紫外消毒处理；这里的术语“生物安全柜”指普通细胞生物学实验所使用的，为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的装置，该实施例中使用的两端带螺纹的硬质毛细管长度规格为250 mm，材料为聚苯乙烯；
（2）凝胶制备：取一凝胶材料，将其用1 mL灭菌水溶解，制得1%凝胶含量的溶液，再从中取0.5 mL溶液与1 mL无菌的20%蔗糖溶液及0.5 mL灭菌水混合，制得0.25%的凝胶溶液；其中，所述的凝胶材料为美国Sigma-Aldrich公司的HydroMatrix Peptide CellCulture Scaffold凝胶材料（货号A6982-1ML）；
（3）细胞预处理：将稳定表达的待检测细胞表面受体的工具细胞用0.25%胰蛋白酶消化并离心收集，弃去上层培养基再用10%无菌蔗糖溶液重新将细胞悬浮并混合均匀；然后再次离心收集细胞并用10%无菌蔗糖溶液重新将细胞悬浮并混合均匀，制得最终细胞密度为20000个/mL的细胞悬浮液；
（4）初步固定：将步骤（3）制得的细胞悬浮液与步骤（2）制得的凝胶溶液混合均匀后，得到凝胶-细胞混合液；
（5）取一封口接头可拆卸封堵在经步骤（1）处理的硬质毛细管一端，并令其朝下，然后往硬质毛细管中加入80 μL温度为4℃的含10%蔗糖的细胞培养基，再把步骤（4）制得的凝胶-细胞混合液装入硬质毛细管中，注入体积约为2.98 mL，然后再加入80μL温度为4℃的含10%蔗糖的细胞培养基，期间，保证两次加入的含10%蔗糖的细胞培养基与注入的凝胶-细胞混合液分层，并且硬质毛细管注满，最后再取一封口接头将硬质毛细管另一端封堵（如图7所示）；其中，步骤（2）-（4）的操作环境温度最佳为5℃；
（6）将步骤（5）注满的硬质毛细管固定置于垂直旋转仪上（如图8所示），然后在37℃条件下，以4～6转分的转速进行垂直旋转硬质毛细管,直至硬质毛细管中的凝胶-细胞混合液凝固成型；
（7）将经过步骤（6）处理的硬质毛细管取下，并分别拆去其两端的封口接头，然后将硬质毛细管的一端与毛细管接头连接，另一端与进样器的出料端连接，进样器中加入有工作缓冲液；另外，原装入硬质毛细管中的含10%蔗糖的培养基溶液更换为工作缓冲液；所述工作缓冲液的成分为：含有100 mg/L无水氯化钙、47 mg/L无水氯化镁、200 mg/L氯化钾、200 mg/L磷酸二氢钾、8g/L氯化钠和1.15 g/L磷酸氢二钠的水溶液；
（8）取部分步骤（7）制得的工作缓冲液，然后将受试小分子化合物溶解至工作缓冲液中，得到化合物溶液；化合物溶解过程中可以添加溶解助剂如DMSO帮助溶解化合物；
（9）将毛细管接头的出料端与检测设备的进样口连接，然后往进样器内加入步骤（7）制得的工作缓冲液且将其推送入硬质毛细管中，并使工作缓冲液缓慢透过硬质毛细管内凝固成型的凝胶-细胞并从毛细管接头的出料端流出并进入检测设备（如：质谱仪或蒸发光散射检测器）的进样口；
（10）继续加入工作缓冲液直至质谱仪中检测到缓冲液成分的信号，当检测设备检测到缓冲液成分的信号时，将加样器中的工作缓冲液替换成步骤（8）制得的化合物溶液，然后将化合物溶液推送入硬质毛细管中并最终进入检测设备的进样口，化合物溶液加入期间进行计时，并观察化合物加入浓度随时间的变化和记录最大检测峰的出现时间，将其定义为“结合时间”；待最大检测峰出现后，将化合物溶液更换为工作缓冲液，然后重新推送入硬质毛细管中并最终进入检测设备的进样口，加入期间进行计时，并观察所加入化合物浓度的信号值减弱至初始状态时的经过时间，将其定义为“洗脱时间”，然后计算亲和力大小。
根据上述的操作（1）～（10）可以同时制备足量凝胶-细胞混合液，并灌注和组装多根毛细管，检测不同化合物的结合时间和洗脱时间，比较其亲和力大小。
本发明的具体实施并不只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，做出若干等同替代或明显的结构或者组装方式的改变，而且性能或用途相同，都应当视为属于本发明的保护范围。例如：进样器可以与蠕动泵相配合，通过蠕动泵将含有化合物的工作缓冲液自动泵入进样器，避免手动操作。再例如：进样器可以直接用内置螺纹的具网毛细管接头与蠕动泵连接，而不是用进样器直接通过蠕动泵与毛细管的组合进行进样。再例如：工作缓冲液的成分可根据需要改变。再例如：装置可以直接与其他检测设备进行组合而不是单独与检测设备连接。再例如：进样器的规格可以与普通注射器规格有所不同。再例如，将活细胞更换为细胞裂解物或者纯化的蛋白质等包含某种需要进行亲和力检测的蛋白的其他物质，同样通过凝胶进行固定后检测亲和力。

Claims (9)

1.一种细胞亲和力检测出样装置在细胞亲和力测定中的应用，所述装置 与检测装置管连接且用于细胞固定凝胶的固定和待检测溶液的输出；其特征在于：其包括进样器、硬质毛细管和毛细管接头；所述的硬质毛细管为管状结构且其管状结构内填充有细胞固定凝胶，硬质毛细管的一端设有外螺纹，所述的毛细管接头呈管状结构且其一端设有内螺纹并与硬质毛细管的一端螺纹连接，毛细管接头的管状结构内还设有一滤网，毛细管接头的另一端用于与检测装置的进样口连接，所述进样器的出料端与硬质毛细管的另一端可拆卸连接，所述的进样器用于输入工作缓冲液和待检测溶液，由进样器将工作缓冲液或待检测溶液注入硬质毛细管中，使工作缓冲液或待检测溶液经过硬质毛细管内的细胞固定凝胶后，从毛细管接头处推送出并进入检测装置中，其操作方法包括如下步骤：
（1）用具消毒：将硬质毛细管进行紫外消毒处理；
（2）凝胶制备：取一凝胶材料，将其用1 mL灭菌水溶解，制得1%凝胶含量的溶液，再从中取0.5 mL溶液与1 mL无菌的20%蔗糖溶液及0.5 mL灭菌水混合，制得0.25%的凝胶溶液；
（3）细胞预处理：将稳定表达的待检测细胞表面受体的工具细胞用0.25%胰蛋白酶消化并离心收集，弃去上层培养基再用10%无菌蔗糖溶液重新将细胞悬浮并混合均匀；然后再次离心收集细胞并用10%无菌蔗糖溶液重新将细胞悬浮并混合均匀，制得最终细胞密度为20000个/mL的细胞悬浮液；
（4）初步固定：将步骤（3）制得的细胞悬浮液与步骤（2）制得的凝胶溶液混合均匀后，得到凝胶-细胞混合液；
（5）取一封口接头可拆卸封堵在经步骤（1）处理的硬质毛细管一端，并令其朝下，然后往硬质毛细管中加入温度为4℃的含10%蔗糖的细胞培养基，再把步骤（4）制得的凝胶-细胞混合液装入硬质毛细管中，然后再加入温度为4℃的含10%蔗糖的细胞培养基，期间，保证两次加入的含10%蔗糖的细胞培养基与注入的凝胶-细胞混合液分层，并且硬质毛细管注满，最后再取一封口接头将硬质毛细管另一端封堵；
（6）将步骤（5）注满的硬质毛细管固定置于垂直旋转仪上，然后在37℃条件下，以4～6转分的转速进行垂直旋转硬质毛细管,直至硬质毛细管中的凝胶-细胞混合液凝固成型；
（7）将经过步骤（6）处理的硬质毛细管取下，并分别拆去其两端的封口接头，然后将硬质毛细管的一端与毛细管接头连接，另一端与进样器的出料端连接，进样器中加入有工作缓冲液；
（8）取部分步骤（7）制得的工作缓冲液，然后将受试小分子化合物溶解至工作缓冲液中，得到化合物溶液；
（9）将毛细管接头的出料端与检测设备的进样口连接，然后往进样器内加入步骤（7）制得的工作缓冲液且将其推送入硬质毛细管中，并使工作缓冲液透过硬质毛细管内凝固成型的凝胶-细胞并从毛细管接头的出料端流出并进入检测设备的进样口；
（10）当检测设备检测到缓冲液成分的信号时，将加样器中的工作缓冲液替换成步骤（8）制得的化合物溶液，然后将化合物溶液推送入硬质毛细管中并最终进入检测设备的进样口，化合物溶液加入期间进行计时，并观察化合物加入浓度随时间的变化和记录最大检测峰的出现时间，将其定义为“结合时间”；待最大检测峰出现后，将化合物溶液更换为工作缓冲液，然后重新推送入硬质毛细管中并最终进入检测设备的进样口，加入期间进行计时，并观察所加入化合物浓度的信号值减弱至初始状态时的经过时间，将其定义为“洗脱时间”，然后计算亲和力大小。
2.根据权利要求1所述的一种细胞亲和力检测出样装置在细胞亲和力测定中的应用，其特征在于：其还包括进样器连接头，所述硬质毛细管的另一端还设有外螺纹，所述的进样器连接头呈管状结构，其一端设有内螺纹并用于与硬质毛细管的另一端连接，进样器连接头的另一端与进样器的出料端插接配合。
3.根据权利要求2所述的一种细胞亲和力检测出样装置在细胞亲和力测定中的应用，其特征在于：所述进样器的出料端呈中空锥台形结构，所述进样器连接头与进样器的出料端配合的端部结构与其相适应并连接。
4.根据权利要求3所述的一种细胞亲和力检测出样装置在细胞亲和力测定中的应用，其特征在于：所述进样器连接头与进样器的连接端内还嵌设有密封胶圈。
5.根据权利要求1所述的一种细胞亲和力检测出样装置在细胞亲和力测定中的应用，其特征在于：所述滤网的网孔呈圆形或方形。
6.根据权利要求5所述的一种细胞亲和力检测出样装置在细胞亲和力测定中的应用，其特征在于：所述滤网的网孔大小为0.5 mm。
7.根据权利要求1所述的一种细胞亲和力检测出样装置在细胞亲和力测定中的应用，其特征在于：所述的硬质毛细管为聚碳酸酯、聚醚砜树脂、聚丙烯、聚乙烯或聚苯乙烯材料成型。
8.根据权利要求1所述的一种细胞亲和力检测出样装置在细胞亲和力测定中的应用，其特征在于：所述工作缓冲液的成分为：含有100 mg/L无水氯化钙、47 mg/L无水氯化镁、200 mg/L氯化钾、200 mg/L磷酸二氢钾、8g/L氯化钠和1.15 g/L磷酸氢二钠的水溶液。
9.根据权利要求1所述的一种细胞亲和力检测出样装置在细胞亲和力测定中的应用，其特征在于：所述的检测设备为质谱仪或蒸发光散射检测器。
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