CN108743814A - 一种抗鼻咽癌中药组合物的制备方法 - Google Patents

一种抗鼻咽癌中药组合物的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，包括下述步骤：S1将抗鼻咽癌中药原料分别粉碎，混合，得到中药粗粉；S2将中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠湿法超微粉碎，得到中药浆液；S3将中药浆液在回流提取，分离，蒸发，真空冷冻干燥，得到中药活性粉；S4将中药活性粉加入到正己酰羧甲基壳聚糖水溶液中，透析得到透析液；向透析液中加入氟碳材料和稳定剂搅拌，通氧饱和，超声乳化，离心，取下层乳液灭菌。本发明的所制备得到的抗鼻咽癌中药组合物，稳定性好，直达病灶，具备显著的抑制肿瘤细胞的效果，对鼻咽癌的治疗显著。

Description

一种抗鼻咽癌中药组合物的制备方法
技术领域
本发明属于中药领域，尤其涉及一种抗鼻咽癌中药组合物的制备方法。
背景技术
鼻咽癌是好发于鼻咽部的头颈最常见恶性肿瘤，恶性程度高，起病隐蔽，早期常无明显症状，晚期常有颈淋巴结肿大及全身脏器转移。其病因包括遗传易感性、饮食环境及EB病毒感染等，其癌变过程相对漫长，涉及到多种癌基因、抑癌基因及其相互作用。
基本病因主要有以下几个方面：一、遗传因素方面：1、本病具有种族异感性，黄种人多于白种人，定居外省、国外的广东籍人或其后裔及混血儿鼻咽癌的发病率高于当地居民，国外华人患鼻咽癌比当地居民男性高40倍，女性高50倍。2、有家族聚集现象。鼻咽癌有明显的家族聚集现象，超过10％的鼻咽癌患者有家族史，鼻咽癌的遗传易感性可能是发病的一个重要因素。3、发现有免疫遗传标记，白细胞抗原(HLA)中A位点的HLA-A2位点与鼻咽癌发生有关。
临床症状主要有以下几个方面：1.回吸性涕血：早期可有吸鼻后痰中带血，或擤鼻时涕中带血，或时有时无。晚期可有明显的鼻出血。2.耳部症状：鼻咽癌发生在鼻咽侧壁或咽鼓管开口上唇时，肿瘤压迫咽鼓管可发生单侧性耳鸣或听力下降，还可发生分泌性中耳炎，单侧性耳鸣或听力减退、耳内闭塞感等，可能是早期鼻咽癌症状。3.头痛：头痛为常见症状，可为首发症状或唯一症状，早期头痛部位不固定呈间歇性，晚期则为持续性偏头痛，部位固定。早期的头痛可能是神经血管反射引起，或是对三叉神经第一支末梢神经的刺激所致，晚期患者的头痛常是肿瘤破坏颅底或在颅内蔓延累及颅神经所引起。4.其它症状：如复视、面麻、鼻塞、颈部淋巴结转移症状、舌肌萎缩和伸舌偏斜、眼睑下垂、眼球固定、视力减退或消失等。
目前放射治疗一直是治疗鼻咽癌的首选方法。但中药也是治疗癌症的重要手段。现有技术的中药对于鼻咽癌的治疗效果不佳，也不能较好的配合放射性治疗，产生协同作用，提升鼻咽癌的有效率。本发明提供一种抗鼻咽癌中药纳米乳液，其可以弥补手术治疗、放射治疗、化学治疗的不足，既能巩固放疗、化疗的效果，又能消除放化疗的毒副作用。
发明内容
针对现有技术的不足。本发明目的是通过如下技术实现的：
本发明所要解决的技术问题是提供一种抗鼻咽癌中药组合物的制备方法。
本发明还公开了抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，具体如下：
一种抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，包括下述步骤：
S1将抗鼻咽癌中药原料分别粉碎，混合，得到中药粗粉；
S2将中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠湿法超微粉碎，得到中药浆液；
S3将中药浆液在回流提取，分离，蒸发，真空冷冻干燥，得到中药活性粉；
S4将中药活性粉加入到正己酰羧甲基壳聚糖水溶液中，透析得到透析液；向透析液中加入氟碳材料和稳定剂搅拌，通氧饱和，超声乳化，离心，取下层乳液灭菌。
优选的，一种抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，包括下述步骤：
S1将抗鼻咽癌中药原料分别粉碎至20～100目，混合，得到中药粗粉；
S2将中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠在湿法超微粉碎下处理10～30min，得到中药浆液；
S3将中药浆液在60～80℃回流提取1～3h，离心分离，减压蒸发，真空冷冻干燥，得到中药活性粉；
S4将中药活性粉加入到1.5～3mg/mL浓度的正己酰羧甲基壳聚糖水溶液中，在蒸馏水中透析16～32h，得到透析液；取出透析液，向透析液中加入透析液质量1.5～3.2％的氟碳材料和透析液质量0.8～1.6％的稳定剂搅拌、通氧饱和并维持溶液中氧含量为25～35mg/L，接着在0～4℃的冰浴、通氧维持溶液中氧含量为25～35mg/L的条件下进行超声乳化，离心5～10min，取下层乳液灭菌。
优选的，一种抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，包括下述步骤：
S1将中药原料粉碎至20～100目，按配比称取粉碎后的中药原料混合均匀，得到中药粗粉；
S2将中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠在湿法超微粉碎下处理10～30min，得到中药浆液；所述中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠的质量比为1:(4～6):(12～20):(0.01～0.02)；
S3将中药浆液在60～80℃回流提取1～3h，离心分离，得到的上清液经减压蒸发浓缩至原体积的1/10～1/6时停止蒸发，得到的浓缩液在真空冷冻干燥下得到的中药活性粉；
S4制备浓度为1.5～3mg/mL的正己酰羧甲基壳聚糖水溶液，将中药活性粉加入到正己酰羧甲基壳聚糖水溶液中，搅拌混合均匀，接着装入透析袋，在蒸馏水中透析16～32h，透析袋中的液体即为透析液；透析完后，取出透析液，向透析液中加入透析液质量1.5～3.2％的氟碳材料和透析液质量0.8～1.6％的稳定剂搅拌混合均匀、通氧饱和并维持溶液中氧含量为25～35mg/L，接着在0～4℃的冰浴、通氧维持溶液中氧含量为25～35mg/L的条件下进行超声乳化，超声功率为20～30W，时间为5～15min，超声过程中开3s，关1s，往复循环，在3500～4500转/分的条件下离心5～10min，弃上清液，取下层乳液灭菌，即得抗鼻咽癌中药纳米乳液；所述中药活性粉、正己酰羧甲基壳聚糖水溶液的质量体积比为1:(5～20)g/mL。
优选的，所述减压蒸发浓缩条件为绝对压强0.080～0.09MPa、温度50～60℃。
优选的，所述真空冷冻干燥条件是控制物料厚度6～8mm，设定预冻温度为-28～-22℃，当样品温度降到-28～-22℃后保持1～3h，设定升华温度为5～15℃，解析温度为30～40℃，绝对压强15～35Pa，干燥20～30h。
优选的，所述透析袋的截留分子量为3500Da。
优选的，所述氟碳材料为全氟正戊烷和/或十氟戊烷。
进一步优选的，所述氟碳材料为全氟正戊烷和十氟戊烷按质量比1:(1～3)混合而成。
液态氟碳纳米液滴粒径小于1μm，因此可穿过肿瘤内皮细胞间隙到达肿瘤细胞，同时能逃逸巨噬细胞的吞噬及肝、脾等脏器的清除，在体内的半衰期长达数小时，比微泡在体内的循环时间要长，在体内滞留时间较长。目前用于制备液态氟碳纳米液滴的常见包裹材料有脂质和高分子聚合物。使用脂质和高分子聚制备时需使用有机溶剂对其进行溶解，残留的有机溶剂易在生物体内蓄积产生毒性，因此以脂质和高分子聚合物制备的纳米液滴在实际应用中存在安全风险。
本发明添加的正己酰羧甲基壳聚糖是一种水溶性物质，溶解时不需要使用有机溶剂，无生物毒性。不仅如此，正己酰羧甲基壳聚糖还具有良好的生物相容性，其两亲性结构使其可发生自主装从而包裹如液态氟碳等疏水物质，可作为药物递送载体。
优选的，所述稳定剂为二棕榈酰磷脂酰胆碱和/或棕榈酸。
进一步优选的，所述稳定剂为二棕榈酰磷脂酰胆碱和棕榈酸按质量比(2～4):1混合而成。
本发明添加的稳定剂能够良好的维持纳米乳液的稳定性，防止纳米液滴聚沉，确保抗鼻咽癌中药纳米乳液的存放时间及疗效。
优选的，所述灭菌为在200～280nm波长的紫外光下照射10～30min。
优选的，所述抗鼻咽癌中药纳米乳液中纳米液滴的粒径为200～700nm。
进一步的，
所述抗鼻咽癌中药原料为绞股蓝、石斛、铁包金、凤尾草、五灵脂、干漆、石上柏、山豆根、土贝母、蜈蚣、辛夷、麦冬、法半夏、甘草、白英和白花蛇舌草。
再优选的，所述抗鼻咽癌中药原料，包括以下重量份原料：绞股蓝8～12份、石斛4～15份、铁包金13～17份、凤尾草4～15份、五灵脂8～12份、干漆1～5份、石上柏1～6份、山豆根1～8份、土贝母4～15份、蜈蚣1～5份、辛夷5～20份、麦冬10～20份、法半夏5～20份、甘草5～20份、白英4～15份、白花蛇舌草4～16份。
进一步的，
所述抗鼻咽癌中药原料，包括以下重量份原料：刘寄奴10-20份、红蒜根28-32份、白花蛇舌草8-12份、玄参13-17份、三七8-12份、麦冬10-20份、知母10-15份、黄芪8-12份、白术20-25份、女贞子8-12份、紫草20-25份、苍耳子10-15份、辛夷10-15份、白芷5-15份、莪术10-20份、枳实10-15份、三棱13-17份、防风5-15份、白头翁13-17份、葵树子15-20份、郁金13-17份、杠板归8-12份。
本发明是发明人在对鼻咽癌基本病机全面认识的基础上研究出来的，鼻咽癌以血性鼻涕、颈部肿块为主要临床表现，以肺胃经热毒，燥湿相混为主要病机。本发明是在中医理论指导下，诸药配伍，相得益彰，共奏扶正培本、益气养血、活血化瘀、清热解毒抗癌之功，效果好，见效快，具有效果显著，见效较快的优点。
本发明所选用的中草药各组分符合中华人民共和国药品管理法的规定，利用各味中药的综合作用治疗鼻咽癌，对人体无任何毒副作用，经动物急、慢性，毒性检验未见任何毒性反应，其主要脏器也无明显改变，药物安全可靠。
本发明的所制备得到的抗鼻咽癌中药组合物，稳定性好，直达病灶，具备显著的抑制肿瘤细胞的效果，对鼻咽癌的治疗显著。
具体实施方式
绞股蓝味甘、苦，性微寒，功效是抗癌防癌，抑制杀灭癌细胞，增强人体血液中淋巴细胞的活性，增强人体的免疫功能，消炎、抗肠、胃溃疡和肿疡等；石斛的功效与作用是益胃生津，滋阴清热，治胃热阴虚可与法半夏、麦冬、甘草合用以增强治疗效果。
五灵脂、干漆、石上柏活血化瘀，消肿止痛；山豆根、土贝母、蜈蚣清热解毒抗癌。
麦冬：味甘，微苦，性微寒。归心、肺、胃经。功能养阴生津，润肺清心；用于肺燥干咳。虚痨咳嗽，津伤口渴，心烦失眠，内热消渴，肠燥便秘。
法半夏：味辛，性温。归脾、胃、肺经。功能燥湿化痰。用于痰多咳喘，痰饮眩悸，风痰眩晕，痰厥头痛。
甘草：味甘，性平。归心、肺、脾、胃经。功能补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。
铁包金，微苦，平，无毒，化瘀血，祛风湿，消肿毒；
凤尾草，味淡微苦，性寒，清热利湿，凉血止血，消肿解毒；
辛夷：味辛微苦，性温。归肺、胃经。功能散风寒，通鼻窍。用于风寒头痛，鼻塞，鼻渊，鼻流浊涕。
白英清热利湿，解毒消肿，抗癌；白头翁具有清热解毒，凉血止痢，燥湿杀虫的功效；白花蛇舌草清热散瘀，消痈解毒。
实施例中各原料来源：
绞股蓝、石斛、铁包金、凤尾草、五灵脂、干漆、石上柏、山豆根、土贝母、蜈蚣、辛夷、麦冬、法半夏、甘草、白英、白花蛇舌草均为市售常规中药材。其中绞股蓝原产地陕西，石斛原产地浙江，铁包金原产地四川，凤尾草原产地云南，五灵脂原产地安徽，干漆原产地福建，石上柏原产地安徽，山豆根原产地广西，土贝母原产地山西，蜈蚣原产地湖北，辛夷原产地广西，麦冬原产地湖北，法半夏原产地四川，甘草原产地甘肃，白英原产地湖北，白花蛇舌草原产地江西。
聚丙烯酸钠：CAS号：9003-04-7，分子量2000～3000，食品级，湖南世纪华星生物工程有限公司。
正己酰羧甲基壳聚糖的制备方法为：将0.50g的羧甲基壳聚糖溶于10g水，搅拌12h至完全溶解，加入10mL甲醇搅拌30min，在快速搅拌状态下加入0.33mL正己酸酐反应12h。反应后溶液用质量分数为25％的乙醇水溶液透析24h，再换用纯水透析24h，对透析液进行真空冷冻干燥，最终得到正己酰羧甲基壳聚糖；所述真空冷冻干燥条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-22℃，当样品温度降到-22℃后保持2h，设定升华温度为15℃，解析温度为35℃，绝对压强35Pa，干燥24h；所述透析用的透析袋的截留分子量为3500Da。
羧甲基壳聚糖：CAS:83512-85-0，分子量20万，杭州甫洛生物科技有限公司。
正己酸酐：CAS:2051-49-2，杭州海瑞化工有限公司。
全氟正戊烷：CAS号：678-26-2，杭州杰恒化工有限公司。
十氟戊烷：2，3-二氢十氟戊烷，CAS号：138495-42-8，河南天孚化工有限公司。
二棕榈酰磷脂酰胆碱：CAS号：2797-68-4，杭州海瑞化工有限公司。
棕榈酸：CAS号：57-10-3，杭州海瑞化工有限公司。
乙醇，除对质量分数有特殊说明外，均指无水乙醇。
对照例1
一种抗鼻咽癌中药纳米乳液，包括以下重量份的中药原料：绞股蓝10份、石斛6份、铁包金15份、凤尾草8份、五灵脂10份、干漆3份、石上柏3份、山豆根5份、土贝母7份、蜈蚣4份、辛夷8份、麦冬14份、法半夏9份、甘草11份、白英9份、白花蛇舌草12份。
所述抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，包括下述步骤：
S1将抗鼻咽癌中药原料分别粉碎至40目，按配比称取粉碎后的中药原料并混合均匀，得到中药粗粉；
S2将中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠在湿法超微粉碎机(型号：SWFJ-20，山东双佳农牧机械科技有司)下以7000转/分的转速粉碎处理15min，得到中药浆液；所述中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠的质量比为1:5:14:0.015；
S3将中药浆液在70℃回流提取2h，在5000转/分的条件下离心分离10min，得到的上清液经减压蒸发浓缩至原体积的1/8时停止蒸发，得到的浓缩液在真空冷冻干燥下得到的中药活性粉；所述真空冷冻干燥条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-22℃，当样品温度降到-22℃后保持2h，设定升华温度为15℃，解析温度为35℃，绝对压强35Pa，干燥24h；
S4制备浓度为2.3mg/mL的正己酰羧甲基壳聚糖水溶液，将中药活性粉加入到正己酰羧甲基壳聚糖水溶液中，搅拌混合均匀，接着装入透析袋，在蒸馏水中透析24h，每8h更换一次蒸馏水，透析袋中的液体即为透析液；透析完后，取出透析液，向透析液中加入透析液质量2.1％的氟碳材料搅拌混合均匀、通氧饱和并维持溶液中氧含量为30mg/L，接着在0℃的冰浴、通氧维持溶液中氧含量为30mg/L的条件下进行超声乳化，功率为20W，时间为10min，超声过程中开3s，关1s，往复循环，在4000转/分的条件下离心10min，弃上清液，取下层乳液在220nm波长的紫外光下照射灭菌20min，即得抗鼻咽癌中药纳米乳液；所述中药活性粉、正己酰羧甲基壳聚糖水溶液的质量体积比为1:8g/mL；所述减压蒸发浓缩条件为绝对压强0.085MPa、温度50℃。
通过马尔文粒度仪测得本实施例抗鼻咽癌中药纳米乳液中纳米液滴的粒径为255.3±44.3nm。
所述透析袋的截留分子量为3500Da。
所述氟碳材料为十氟戊烷。
实施例1
抗鼻咽癌中药原料，包括以下重量份原料：绞股蓝10份、石斛6份、铁包金15份、凤尾草8份、五灵脂10份、干漆3份、石上柏3份、山豆根5份、土贝母7份、蜈蚣4份、辛夷8份、麦冬14份、法半夏9份、甘草11份、白英9份、白花蛇舌草12份。
所述抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，包括下述步骤：
S1将抗鼻咽癌中药原料分别粉碎至40目，按配比称取粉碎后的中药原料并混合均匀，得到中药粗粉；
S2将中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠在湿法超微粉碎机(型号：SWFJ-20，山东双佳农牧机械科技有司)下以7000转/分的转速粉碎处理15min，得到中药浆液；所述中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠的质量比为1:5:14:0.015；
S3将中药浆液在70℃回流提取2h，在5000转/分的条件下离心分离10min，得到的上清液经减压蒸发浓缩至原体积的1/8时停止蒸发，得到的浓缩液在真空冷冻干燥下得到的中药活性粉；所述真空冷冻干燥条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-22℃，当样品温度降到-22℃后保持2h，设定升华温度为15℃，解析温度为35℃，绝对压强35Pa，干燥24h；
S4制备浓度为2.3mg/mL的正己酰羧甲基壳聚糖水溶液，将中药活性粉加入到正己酰羧甲基壳聚糖水溶液中，搅拌混合均匀，接着装入透析袋，在蒸馏水中透析24h，每8h更换一次蒸馏水，透析袋中的液体即为透析液；透析完后，取出透析液，向透析液中加入透析液质量2.1％的氟碳材料和透析液质量1.2％的稳定剂搅拌混合均匀、通氧饱和并维持溶液中氧含量为30mg/L，接着在0℃的冰浴、通氧维持溶液中氧含量为30mg/L的条件下进行超声乳化，功率为20W，时间为10min，超声过程中开3s，关1s，往复循环，在4000转/分的条件下离心10min，弃上清液，取下层乳液在220nm波长的紫外光下照射灭菌20min，即得抗鼻咽癌中药纳米乳液；所述中药活性粉、正己酰羧甲基壳聚糖水溶液的质量体积比为1:8g/mL；所述减压蒸发浓缩条件为绝对压强0.085MPa、温度50℃。
通过马尔文粒度仪测得本实施例抗鼻咽癌中药纳米乳液中纳米液滴的粒径为265.3±53.7nm。
所述透析袋的截留分子量为3500Da。
所述氟碳材料为十氟戊烷。
所述稳定剂为棕榈酸。
实施例2
抗鼻咽癌中药原料，包括以下重量份原料：绞股蓝10份、石斛6份、铁包金15份、凤尾草8份、五灵脂10份、干漆3份、石上柏3份、山豆根5份、土贝母7份、蜈蚣4份、辛夷8份、麦冬14份、法半夏9份、甘草11份、白英9份、白花蛇舌草12份。
所述抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，包括下述步骤：
S1将抗鼻咽癌中药原料分别粉碎至40目，按配比称取粉碎后的中药原料并混合均匀，得到中药粗粉；
S2将中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠在湿法超微粉碎机(型号：SWFJ-20，山东双佳农牧机械科技有司)下以7000转/分的转速粉碎处理15min，得到中药浆液；所述中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠的质量比为1:5:14:0.015；
S3将中药浆液在70℃回流提取2h，在5000转/分的条件下离心分离10min，得到的上清液经减压蒸发浓缩至原体积的1/8时停止蒸发，得到的浓缩液在真空冷冻干燥下得到的中药活性粉；所述真空冷冻干燥条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-22℃，当样品温度降到-22℃后保持2h，设定升华温度为15℃，解析温度为35℃，绝对压强35Pa，干燥24h；
S4制备浓度为2.3mg/mL的正己酰羧甲基壳聚糖水溶液，将中药活性粉加入到正己酰羧甲基壳聚糖水溶液中，搅拌混合均匀，接着装入透析袋，在蒸馏水中透析24h，每8h更换一次蒸馏水，透析袋中的液体即为透析液；透析完后，取出透析液，向透析液中加入透析液质量2.1％的氟碳材料和透析液质量1.2％的稳定剂搅拌混合均匀、通氧饱和并维持溶液中氧含量为30mg/L，接着在0℃的冰浴、通氧维持溶液中氧含量为30mg/L的条件下进行超声乳化，功率为20W，时间为10min，超声过程中开3s，关1s，往复循环，在4000转/分的条件下离心10min，弃上清液，取下层乳液在220nm波长的紫外光下照射灭菌20min，即得抗鼻咽癌中药纳米乳液；所述中药活性粉、正己酰羧甲基壳聚糖水溶液的质量体积比为1:8g/mL；所述减压蒸发浓缩条件为绝对压强0.085MPa、温度50℃。
通过马尔文粒度仪测得本实施例抗鼻咽癌中药纳米乳液中纳米液滴的粒径为258.3±46.7nm。
所述透析袋的截留分子量为3500Da。
所述氟碳材料为全氟正戊烷。
所述稳定剂为棕榈酸。
实施例3
抗鼻咽癌中药原料，包括以下重量份原料：绞股蓝10份、石斛6份、铁包金15份、凤尾草8份、五灵脂10份、干漆3份、石上柏3份、山豆根5份、土贝母7份、蜈蚣4份、辛夷8份、麦冬14份、法半夏9份、甘草11份、白英9份、白花蛇舌草12份。
所述抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，包括下述步骤：
S1将抗鼻咽癌中药原料分别粉碎至40目，按配比称取粉碎后的中药原料并混合均匀，得到中药粗粉；
S2将中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠在湿法超微粉碎机(型号：SWFJ-20，山东双佳农牧机械科技有司)下以7000转/分的转速粉碎处理15min，得到中药浆液；所述中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠的质量比为1:5:14:0.015；
S3将中药浆液在70℃回流提取2h，在5000转/分的条件下离心分离10min，得到的上清液经减压蒸发浓缩至原体积的1/8时停止蒸发，得到的浓缩液在真空冷冻干燥下得到的中药活性粉；所述真空冷冻干燥条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-22℃，当样品温度降到-22℃后保持2h，设定升华温度为15℃，解析温度为35℃，绝对压强35Pa，干燥24h；
S4制备浓度为2.3mg/mL的正己酰羧甲基壳聚糖水溶液，将中药活性粉加入到正己酰羧甲基壳聚糖水溶液中，搅拌混合均匀，接着装入透析袋，在蒸馏水中透析24h，每8h更换一次蒸馏水，透析袋中的液体即为透析液；透析完后，取出透析液，向透析液中加入透析液质量2.1％的氟碳材料和透析液质量1.2％的稳定剂搅拌混合均匀、通氧饱和并维持溶液中氧含量为30mg/L，接着在0℃的冰浴、通氧维持溶液中氧含量为30mg/L的条件下进行超声乳化，功率为20W，时间为10min，超声过程中开3s，关1s，往复循环，在4000转/分的条件下离心10min，弃上清液，取下层乳液在220nm波长的紫外光下照射灭菌20min，即得抗鼻咽癌中药纳米乳液；所述中药活性粉、正己酰羧甲基壳聚糖水溶液的质量体积比为1:8g/mL；所述减压蒸发浓缩条件为绝对压强0.085MPa、温度50℃。
通过马尔文粒度仪测得本实施例抗鼻咽癌中药纳米乳液中纳米液滴的粒径为249.1±41.7nm。
所述透析袋的截留分子量为3500Da。
所述氟碳材料为全氟正戊烷和十氟戊烷按质量比1:3混合而成。
所述稳定剂为棕榈酸。
实施例4
抗鼻咽癌中药原料，包括以下重量份原料：绞股蓝10份、石斛6份、铁包金15份、凤尾草8份、五灵脂10份、干漆3份、石上柏3份、山豆根5份、土贝母7份、蜈蚣4份、辛夷8份、麦冬14份、法半夏9份、甘草11份、白英9份、白花蛇舌草12份。
所述抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，包括下述步骤：
S1将抗鼻咽癌中药原料分别粉碎至40目，按配比称取粉碎后的中药原料并混合均匀，得到中药粗粉；
S2将中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠在湿法超微粉碎机(型号：SWFJ-20，山东双佳农牧机械科技有司)下以7000转/分的转速粉碎处理15min，得到中药浆液；所述中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠的质量比为1:5:14:0.015；
S3将中药浆液在70℃回流提取2h，在5000转/分的条件下离心分离10min，得到的上清液经减压蒸发浓缩至原体积的1/8时停止蒸发，得到的浓缩液在真空冷冻干燥下得到的中药活性粉；所述真空冷冻干燥条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-22℃，当样品温度降到-22℃后保持2h，设定升华温度为15℃，解析温度为35℃，绝对压强35Pa，干燥24h；
S4制备浓度为2.3mg/mL的正己酰羧甲基壳聚糖水溶液，将中药活性粉加入到正己酰羧甲基壳聚糖水溶液中，搅拌混合均匀，接着装入透析袋，在蒸馏水中透析24h，每8h更换一次蒸馏水，透析袋中的液体即为透析液；透析完后，取出透析液，向透析液中加入透析液质量2.1％的氟碳材料和透析液质量1.2％的稳定剂搅拌混合均匀、通氧饱和并维持溶液中氧含量为30mg/L，接着在0℃的冰浴、通氧维持溶液中氧含量为30mg/L的条件下进行超声乳化，功率为20W，时间为10min，超声过程中开3s，关1s，往复循环，在4000转/分的条件下离心10min，弃上清液，取下层乳液在220nm波长的紫外光下照射灭菌20min，即得抗鼻咽癌中药纳米乳液；所述中药活性粉、正己酰羧甲基壳聚糖水溶液的质量体积比为1:8g/mL；所述减压蒸发浓缩条件为绝对压强0.085MPa、温度50℃。
通过马尔文粒度仪测得本实施例抗鼻咽癌中药纳米乳液中纳米液滴的粒径为248.3±38.1nm。
所述透析袋的截留分子量为3500Da。
所述氟碳材料为全氟正戊烷和十氟戊烷按质量比1:3混合而成。
所述稳定剂为二棕榈酰磷脂酰胆碱。
实施例5
抗鼻咽癌中药原料，包括以下重量份原料：绞股蓝10份、石斛6份、铁包金15份、凤尾草8份、五灵脂10份、干漆3份、石上柏3份、山豆根5份、土贝母7份、蜈蚣4份、辛夷8份、麦冬14份、法半夏9份、甘草11份、白英9份、白花蛇舌草12份。
所述抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，包括下述步骤：
S1将抗鼻咽癌中药原料分别粉碎至40目，按配比称取粉碎后的中药原料并混合均匀，得到中药粗粉；
S2将中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠在湿法超微粉碎机(型号：SWFJ-20，山东双佳农牧机械科技有司)下以7000转/分的转速粉碎处理15min，得到中药浆液；所述中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠的质量比为1:5:14:0.015；
S3将中药浆液在70℃回流提取2h，在5000转/分的条件下离心分离10min，得到的上清液经减压蒸发浓缩至原体积的1/8时停止蒸发，得到的浓缩液在真空冷冻干燥下得到的中药活性粉；所述真空冷冻干燥条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-22℃，当样品温度降到-22℃后保持2h，设定升华温度为15℃，解析温度为35℃，绝对压强35Pa，干燥24h；
S4制备浓度为2.3mg/mL的正己酰羧甲基壳聚糖水溶液，将中药活性粉加入到正己酰羧甲基壳聚糖水溶液中，搅拌混合均匀，接着装入透析袋，在蒸馏水中透析24h，每8h更换一次蒸馏水，透析袋中的液体即为透析液；透析完后，取出透析液，向透析液中加入透析液质量2.1％的氟碳材料和透析液质量1.2％的稳定剂搅拌混合均匀、通氧饱和并维持溶液中氧含量为30mg/L，接着在0℃的冰浴、通氧维持溶液中氧含量为30mg/L的条件下进行超声乳化，功率为20W，时间为10min，超声过程中开3s，关1s，往复循环，在4000转/分的条件下离心10min，弃上清液，取下层乳液在220nm波长的紫外光下照射灭菌20min，即得抗鼻咽癌中药纳米乳液；所述中药活性粉、正己酰羧甲基壳聚糖水溶液的质量体积比为1:8g/mL；所述减压蒸发浓缩条件为绝对压强0.085MPa、温度50℃。
通过马尔文粒度仪测得本实施例抗鼻咽癌中药纳米乳液中纳米液滴的粒径为250.3±42.1nm。
所述透析袋的截留分子量为3500Da。
所述氟碳材料为全氟正戊烷和十氟戊烷按质量比1:3混合而成。
所述稳定剂为二棕榈酰磷脂酰胆碱和棕榈酸按质量比1.5:1混合而成。
实施例6
抗鼻咽癌中药原料，包括以下重量份原料：刘寄奴15份、红蒜根30份、白花蛇舌草10份、玄参15份、三七10份、麦冬15份、知母12份、黄芪10份、白术22份、女贞子10份、紫草23份、苍耳子13份、辛夷12份、白芷10份、莪术15份、枳实12份、三棱15份、防风10份、白头翁15份、葵树子17份、郁金15份、杠板归10份。
所述抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，包括下述步骤：
S1将抗鼻咽癌中药原料分别粉碎至40目，按配比称取粉碎后的中药原料并混合均匀，得到中药粗粉；
S2将中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠在湿法超微粉碎机(型号：SWFJ-20，山东双佳农牧机械科技有司)下以7000转/分的转速粉碎处理15min，得到中药浆液；所述中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠的质量比为1:5:14:0.015；
S3将中药浆液在70℃回流提取2h，在5000转/分的条件下离心分离10min，得到的上清液经减压蒸发浓缩至原体积的1/8时停止蒸发，得到的浓缩液在真空冷冻干燥下得到的中药活性粉；所述真空冷冻干燥条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-22℃，当样品温度降到-22℃后保持2h，设定升华温度为15℃，解析温度为35℃，绝对压强35Pa，干燥24h；
S4制备浓度为2.3mg/mL的正己酰羧甲基壳聚糖水溶液，将中药活性粉加入到正己酰羧甲基壳聚糖水溶液中，搅拌混合均匀，接着装入透析袋，在蒸馏水中透析24h，每8h更换一次蒸馏水，透析袋中的液体即为透析液；透析完后，取出透析液，向透析液中加入透析液质量2.1％的氟碳材料和透析液质量1.2％的稳定剂搅拌混合均匀、通氧饱和并维持溶液中氧含量为30mg/L，接着在0℃的冰浴、通氧维持溶液中氧含量为30mg/L的条件下进行超声乳化，功率为20W，时间为10min，超声过程中开3s，关1s，往复循环，在4000转/分的条件下离心10min，弃上清液，取下层乳液在220nm波长的紫外光下照射灭菌20min，即得抗鼻咽癌中药纳米乳液；所述中药活性粉、正己酰羧甲基壳聚糖水溶液的质量体积比为1:8g/mL；所述减压蒸发浓缩条件为绝对压强0.085MPa、温度50℃。
通过马尔文粒度仪测得本实施例抗鼻咽癌中药纳米乳液中纳米液滴的粒径为250.3±42.1nm。
所述透析袋的截留分子量为3500Da。
所述氟碳材料为全氟正戊烷和十氟戊烷按质量比1:3混合而成。
所述稳定剂为二棕榈酰磷脂酰胆碱和棕榈酸按质量比1.5:1混合而成。
对照例2
抗鼻咽癌中药原料，包括以下重量份原料：绞股蓝10份、石斛6份、铁包金15份、凤尾草8份、五灵脂10份、干漆3份、石上柏3份、山豆根5份、土贝母7份、蜈蚣4份、辛夷8份、麦冬14份、法半夏9份、甘草11份、白英9份、白花蛇舌草12份。
所述抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，包括下述步骤：
S1按配比称取抗鼻咽癌中药原料，将其放入砂锅中，加入清水浸过药面3cm，并浸泡15min；先用武火将浸泡在砂锅清水中的中药原料煮沸，之后改为文火煎煮25min，用100目网纱过滤，取过滤液备用；
S2将步骤S1过滤剩下的滤渣在依次按照S1中的操作方法，再一次进行处理，用100目网纱过滤，取过滤液备用；
S3将步骤S1和步骤S2中的过滤液混合，在绝对压强0.085MPa、温度50℃的条件下旋转减压蒸发至原体积的1/8，得到的浓缩液在真空冷冻干燥下得到的中药活性粉；所述真空冷冻干燥条件是控制物料厚度8mm，设定预冻温度为-22℃，当样品温度降到-22℃后保持2h，设定升华温度为15℃，解析温度为35℃，绝对压强35Pa，干燥24h；
S4制备浓度为2.3mg/mL的正己酰羧甲基壳聚糖水溶液，将中药活性粉加入到正己酰羧甲基壳聚糖水溶液中，搅拌混合均匀，接着装入透析袋，在蒸馏水中透析24h，每8h更换一次蒸馏水，透析袋中的液体即为透析液；透析完后，取出透析液，向透析液中加入透析液质量2.1％的氟碳材料和透析液质量1.2％的稳定剂搅拌混合均匀、通氧饱和并维持溶液中氧含量为30mg/L，接着在0℃的冰浴、通氧维持溶液中氧含量为30mg/L的条件下进行超声乳化，功率为20W，时间为10min，超声过程中开3s，关1s，往复循环，在4000转/分的条件下离心10min，弃上清液，取下层乳液在220nm波长的紫外光下照射灭菌20min，即得抗鼻咽癌中药纳米乳液；所述中药活性粉、正己酰羧甲基壳聚糖水溶液的质量体积比为1:8g/mL；所述减压蒸发浓缩条件为绝对压强0.085MPa、温度50℃。
通过马尔文粒度仪测得本实施例抗鼻咽癌中药纳米乳液中纳米液滴的粒径为264.3±48.1nm。
所述透析袋的截留分子量为3500Da。
所述氟碳材料为全氟正戊烷和十氟戊烷按质量比1:3混合而成。
所述稳定剂为二棕榈酰磷脂酰胆碱和棕榈酸按质量比1.5:1混合而成。
测试例1
抑瘤作用实验：
试验对象：ICR小鼠180只，体重19～24g，雄性。
试验接种内容：S180实体瘤。
取ICR小鼠，于右腋皮下常规接种S180癌细胞悬液0.2mL(约5×106个细胞/mL)，次日随机分成9组。治疗组分为8个组，分别采用本发明实施例1～6及对照例1～2的抗鼻咽癌中药纳米乳液每日分别灌胃给药0.2mL/10g，每天2次，连续10天；对照组为生理盐水组，生理盐水组每日胃饲0.4mL/10g生理盐水，连续10天；9组均为停药后次日处死动物，剥瘤称重，计算抑瘤率，抑瘤率公式为：抑瘤率(％)＝(生理盐水对照组平均瘤重-用药组平均瘤重)/生理盐水对照组平均瘤重×100％，结果显示，本发明的药物对S180生长有抑制作用，与对照组相比有显著性差异P<0.05。对S180的抑制作用及抑瘤效果见表1。
表1：对S180的抑制作用及抑瘤效果
组别 平均瘤重(g) 抑瘤率(％)
对照例1 2.20±0.51 29.1
实施例1 1.76±0.32 43.3
实施例2 1.68±0.28 45.8
实施例3 1.51±0.41 51.2
实施例4 1.43±0.37 53.8
实施例5 1.30±0.31 58.1
实施例6 1.26±0.27 60.2
对照例2 2.31±0.49 25.4
对照组 3.10±0.81 0
通过表1可知：采用本发明中药组合物的治疗组，与生理盐水组比较，能够抑制瘤体生长，有显著性差异P<0.05。
测试例2
临床实验：
选择140例经临川诊断为中晚期鼻咽癌患者为研究对象，男93例，女57例，平均年龄53岁，年龄范围41～76岁。
纳入标准：(经病理或细胞学)检查确诊为中晚期鼻咽癌患者，以往未经过手术、放化疗，无严重的心血管、肝、肾等其他疾病。
治疗方法：将上述患者随机分为7组，每组20人。每组均接受放射治疗。每周5次，6周为一疗程。中药组在放射治疗期间，每天服用本发明的抗鼻咽癌中药纳米乳液50mL，本发明实施例1～5、对照例1～2中的抗鼻咽癌中药纳米乳液。
效果指标：按照实体瘤疗效评价标准RECIST(治疗恶性肿瘤的标准)评定方法，完全缓解：所有目标病灶消失；部分缓解：基线病灶长径总和缩小大于30％。无明显变化：基线病灶长径总和缩小未达30％或增加未达20％；病变扩展：基线病灶长径总和增大超过20％或新病灶出现。
经过1个疗程的治疗，对两组患者的疗效进行对比。
表2本发明抗鼻咽癌中药纳米乳液的疗效对比
组别 完全缓解 部分缓解 无明显变化 病变扩展 有效率，％
对照例1 4 8 8 0 60％
实施例1 4 10 6 0 70％
实施例2 6 9 5 0 75％
实施例3 8 9 3 0 85％
实施例4 9 9 2 0 90％
实施例5 12 7 1 0 95％
对照例2 3 7 10 0 50％
测试例3
长期毒性实验：
分别将本发明实施例5制备的抗鼻咽癌中药纳米乳液对小鼠按0.2mL/10g的剂量灌胃，连续用药16周(每天2次)及停药4周后观察与检测，结果表明：本发明中药制剂对小鼠的毛发、行为、大小便、体重、脏器重量、血象、肝肾功能、血糖、血脂等指标均无明显影响，脏器肉眼没有发现异样变化和组织学检查结果表明，用药16周及停药4周后，小鼠各脏器均无明显改变。说明本发明抗鼻咽癌中药纳米乳液对小鼠长期用药后毒性小，停药后也没有异样反应，应用安全。
以上对本发明进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

Claims (10)

1.一种抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
S1将抗鼻咽癌中药原料分别粉碎，混合，得到中药粗粉；
S2将中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠湿法超微粉碎，得到中药浆液；
S3将中药浆液在回流提取，分离，蒸发，真空冷冻干燥，得到中药活性粉；
S4将中药活性粉加入到正己酰羧甲基壳聚糖水溶液中，透析得到透析液；向透析液中加入氟碳材料和稳定剂搅拌，通氧饱和，超声乳化，离心，取下层乳液灭菌。
2.如权利要求1所述的抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：S1将抗鼻咽癌中药原料分别粉碎至20～100目，混合，得到中药粗粉；
S2将中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠在湿法超微粉碎下处理10～30min，得到中药浆液；
S3将中药浆液在60～80℃回流提取1～3h，离心分离，减压蒸发，真空冷冻干燥，得到中药活性粉；
S4将中药活性粉加入到1.5～3mg/mL浓度的正己酰羧甲基壳聚糖水溶液中，在蒸馏水中透析16～32h，得到透析液；取出透析液，向透析液中加入透析液质量1.5～3.2％的氟碳材料和透析液质量0.8～1.6％的稳定剂搅拌、通氧饱和并维持溶液中氧含量为25～35mg/L，接着在0～4℃的冰浴、通氧维持溶液中氧含量为25～35mg/L的条件下进行超声乳化，离心5～10min，取下层乳液灭菌。
3.如权利要求2所述的抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
S1将中药原料分别粉碎至20～100目，按配比称取粉碎后的中药原料混合均匀，得到中药粗粉；
S2将中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠在湿法超微粉碎下处理10～30min，得到中药浆液；所述中药粗粉、水、乙醇、聚丙烯酸钠的质量比为1:(4～6):(12～20):(0.01～0.02)；
S3将中药浆液在60～80℃回流提取1～3h，离心分离，得到的上清液经减压蒸发浓缩至原体积的1/10～1/6时停止蒸发，得到的浓缩液在真空冷冻干燥下得到的中药活性粉；
S4制备浓度为1.5～3mg/mL的正己酰羧甲基壳聚糖水溶液，将中药活性粉加入到正己酰羧甲基壳聚糖水溶液中，搅拌混合均匀，接着装入透析袋，在蒸馏水中透析16～32h，透析袋中的液体即为透析液；透析完后，取出透析液，向透析液中加入透析液质量1.5～3.2％的氟碳材料和透析液质量0.8～1.6％的稳定剂搅拌混合均匀、通氧饱和并维持溶液中氧含量为25～35mg/L，接着在0～4℃的冰浴、通氧维持溶液中氧含量为25～35mg/L的条件下进行超声乳化，超声功率为20～30W，时间为5～15min，超声过程中开3s，关1s，往复循环，在3500～4500转/分的条件下离心5～10min，弃上清液，取下层乳液灭菌，即得抗鼻咽癌中药纳米乳液；所述中药活性粉、正己酰羧甲基壳聚糖水溶液的质量体积比为1:(5～20)g/mL。
4.如权利要求3所述的抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，其特征在于：所述减压蒸发浓缩条件为绝对压强0.080～0.09MPa、温度50～60℃。
5.如权利要求3所述的抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，其特征在于：所述真空冷冻干燥条件是控制物料厚度6～8mm，设定预冻温度为-28～-22℃，当样品温度降到-28～-22℃后保持1～3h，设定升华温度为5～15℃，解析温度为30～40℃，绝对压强15～35Pa，干燥20～30h。
6.如权利要求3所述的抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，其特征在于：所述透析袋的截留分子量为3500Da。
7.如权利要求3所述的抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，其特征在于：所述氟碳材料为全氟正戊烷和/或十氟戊烷。
8.如权利要求3所述的抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，其特征在于：所述稳定剂为二棕榈酰磷脂酰胆碱和/或棕榈酸。
9.如权利要求3所述的抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，其特征在于：所述灭菌为在200～280nm波长的紫外光下照射10～30min；所述抗鼻咽癌中药纳米乳液中纳米液滴的粒径为200～700nm。
10.如权利要求1-9任一项所述的抗鼻咽癌中药组合物的制备方法，其特征在于：
所述抗鼻咽癌中药原料，包括以下重量份原料：绞股蓝8～12份、石斛4～15份、铁包金13～17份、凤尾草4～15份、五灵脂8～12份、干漆1～5份、石上柏1～6份、山豆根1～8份、土贝母4～15份、蜈蚣1～5份、辛夷5～20份、麦冬10～20份、法半夏5～20份、甘草5～20份、白英4～15份、白花蛇舌草4～16份；
或，
所述抗鼻咽癌中药原料，包括以下重量份原料：刘寄奴10-20份、红蒜根28-32份、白花蛇舌草8-12份、玄参13-17份、三七8-12份、麦冬10-20份、知母10-15份、黄芪8-12份、白术20-25份、女贞子8-12份、紫草20-25份、苍耳子10-15份、辛夷10-15份、白芷5-15份、莪术10-20份、枳实10-15份、三棱13-17份、防风5-15份、白头翁13-17份、葵树子15-20份、郁金13-17份、杠板归8-12份。
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