CN108727322A - 苯乙基色酮二聚体、及其制法和药物组合物与用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开一类从沉香中提取分离的苯乙基色酮二聚体，这类化合物的制备方法，含有这类化合物的药物组合物，这类化合物及其药物组合物在预防或治疗炎症性疾病、自身免疫性疾病、过敏性疾病、器官移植排斥和移植物抗宿主病中的应用，特别是预防或治疗系统性炎症反应、肺炎、类风湿性关节炎、多发性硬化、过敏性哮喘。

Description

苯乙基色酮二聚体、及其制法和药物组合物与用途

技术领域

本发明涉及一类苯乙基色酮二聚体，这类化合物的制备方法，含有它们的药物组合物以及这类化合物在制备预防或治疗炎症性疾病、自身免疫性疾病、器官移植排斥和移植物抗宿主病的药物中的应用，属于医药技术领域。

背景技术

人体免疫系统包括天然免疫和适应性免疫，在防御各种内外源因素导致的机体损伤中起重要作用。但是免疫功能过度激活也会导致严重的组织损伤。与免疫功能过度激活相关的的疾病主要有炎症性疾病、自身免疫性疾病、过敏性疾病、器官移植排斥和移植物抗宿主病。天然免疫过度激活主要导致炎症性疾病。适应性免疫过度激活导致自身免疫性疾病、过敏性疾病、器官移植排斥和移植物抗宿主病。

目前预防或治疗炎症性疾病的药物主要有糖皮质激素和环氧化酶抑制剂为代表的非甾体抗炎药。虽然糖皮质激素和非甾体抗炎药具有较好的抗炎作用，但是药物不良反应严重限制了它们的应用。糖皮质激素长期应用会导致代谢功能紊乱，非甾体抗炎药长期应用会导致胃溃疡。预防或治疗自身免疫性疾病、过敏性疾病、器官移植排斥和移植物抗宿主病的药物主要有糖皮质激素和环孢素、他克莫司等适应性免疫抑制剂。糖皮质激素长期使用会导致代谢功能紊乱，而环孢素和他克莫司等适应性免疫抑制剂又具有较高的肾毒性(Hironori Matsushima et al.，Blood，114(1)，64-73(2009))。因此，开发新的结构和作用机制的天然免疫和适应性免疫抑制剂对于预防或治疗炎症性疾病、自身免疫性疾病、过敏性疾病、器官移植排斥和移植物抗宿主病具有重要意义。

近年来，随着基因组学技术在生物医学基础研究中的广泛应用，天然免疫和适应性免疫的调控机制及上述多种免疫失调相关疾病的发病机制研究获得了快速的进展。特别是在适应性免疫调控方面，发现辅助性T细胞可以分化为Th17细胞。进一步研究发现Th17细胞在类风湿性关节炎、多发性硬化、溃疡性结肠炎等自身免疫性疾病发病过程中发挥重要的作用(El-Behi et al.，Nature Immunology，12(6)，568-575(2011))。开发具有抑制Th17细胞诱导分化及其致病细胞因子分泌的药物成为治疗这类自身免疫性疾病的重要方向。

沉香是瑞香科植物白木香含有树脂的木材。中国药典记载沉香具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘的功效，用于治疗胸腹胀闷疼痛、胃寒呕吐呃逆、肾虚气逆喘急。这些功效和治疗作用与现代医学的抗炎免疫抑制作用十分相似。本发明人在前期研究中发现沉香中多个具有天然免疫和适应性免疫抑制作用的倍半萜和苯乙基色酮衍生物(专利申请号：201510332393.0、201510396970.2、201610876605.6)。在此基础上，本发明人通过进一步提取分离和结构鉴定，发现多种含量极低的苯乙基色酮二聚体。通过对这类化合物的天然免疫和适应性免疫抑制作用筛选，发现它们具有很强的天然免疫和适应性免疫抑制作用，部分化合物还具有良好的抑制Th17细胞分化的作用，具有治疗上述免疫失调相关的炎症性疾病、自身免疫性疾病、过敏性疾病、器官移植排斥和移植物抗宿主病的重大潜力。

发明内容

本发明解决的技术问题在于提供了28个新的苯乙基色酮二聚体(L1-L28)。

本发明解决的另一技术问题在于提供了28个新的苯乙基色酮二聚体的制备方法。

本发明解决的又一技术问题在于提供一种药物组合物，其含有28个新的苯乙基色酮二聚体中的至少一种。

本发明的再一技术问题在于提供28个新的苯乙基色酮二聚体及含有至少一种新的苯乙基色酮二聚体的药物组合物通过天然免疫和适应性免疫抑制在预防或治疗炎症性疾病、自身免疫性疾病、过敏性疾病、器官移植排斥和移植物抗宿主病中的应用。

具体讲，本发明涉及的化合物L1-L28的结构式如下所示：

本发明提供的28个新的苯乙基色酮二聚体制备方法如下：

沉香药材6.9kg，95％乙醇加热回流提取3次，每次2.5小时，合并醇提液，减压浓缩至浸膏状(3.39kg)，加水混悬，分别用石油醚、醋酸乙酯萃取。得醋酸乙酯部位600g。取醋酸乙酯部位浸膏(400g)，经多次柱色谱和高效液相色谱分离和纯化，得到28个新的苯乙基色酮二聚体。

本发明涉及的一种含有有效剂量上述表格中化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。所述的药物组合物可以是片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂或微粒给药系统。

本发明化合物的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。

本发明通过小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞和BV-2细胞筛选，证明本发明涉及的化合物具有抑制细菌脂多糖刺激RAW264.7细胞和BV-2细胞分泌一氧化氮的作用。

本发明通过酶联免疫测定，证明本发明涉及化合物具有抑制巨噬细胞分泌炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的作用。

本发明通过流式细胞测定，证明本发明涉及化合物具有抑制小鼠中性粒细胞活化的作用。

本发明通过流式细胞法、比色法和酶联免疫测定，证明本发明涉及化合物具有抑制小鼠脾脏CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞和B细胞的活化、增殖和分泌细胞因子或抗体的作用。

本发明通过流式细胞测定，证明本发明涉及化合物具有抑制CD4⁺T细胞分化为Th1、Th2和Th17细胞的作用，并且不同化合物具有不同的选择性。

本发明通过小鼠脑脊髓膜炎模型模拟人类多发性硬化疾病，证明本发明涉及化合物能够治疗多发性硬化。

本发明通过以上药理学实验证明了所涉及化合物及其药物组合物可以通过天然免疫和适应性免疫抑制在预防或治疗炎症性疾病、自身免疫性疾病、过敏性疾病、器官移植排斥和移植物抗宿主病中的应用。

本发明的化合物或含有它们的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为口服、静脉注射、肌肉注射、鼻腔、口腔粘膜、皮肤或直肠等。

本发明的化合物或含有它们的药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数、治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明化合物的每天的合适剂量范围：本发明涉及的化合物的用量为0.1～10mg/Kg体重，可一次服用或分2～4次服用。本发明的化合物或含有它们的药物组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。

本发明的化合物预防或治疗的炎症性疾病可以是系统性炎症反应、肺炎、支气管炎、肝炎、肾炎、胃炎、肠炎、神经炎症、皮肤炎症等。

本发明的化合物预防或治疗的自身免疫性疾病可以是类风湿性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、克罗恩病、银屑病、系统性血管炎、硬皮病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性再生障碍性贫血、桥本甲状腺炎等。

本发明的化合物预防或治疗的过敏性疾病可以是过敏性哮喘、过敏性休克、过敏性紫癜、过敏性鼻炎、过敏性皮炎。

本发明的化合物预防或治疗的器官移植排斥可以是肾移植排斥、肝移植排斥、皮肤移植排斥、心脏移植排斥、造血干细胞移植排斥。

术语与简称

HPLC高效液相色谱

HRESIMS高分辨电喷雾质谱

UV紫外光谱

IR红外光谱

NMR核磁共振

IC₅₀半数抑制浓度

TNF-α肿瘤坏死因子-α

IL-6白细胞介素-6

IL-1β白细胞介素-1β

IFN-γ干扰素-γ

IL-4白细胞介素-4

IL-17A白细胞介素-17A

附图说明

图1为苯乙基色酮二聚体的制备流程图。

具体实施方式

以下将结合实施例对发明作进一步说明，但并不限制本发明的范围。

化学实验

实施例1：化合物的提取分离

(1)实验材料

药材：沉香。经北京中医药大学中药现代研究中心屠鹏飞教授鉴定为瑞香科植物白木香Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg含有树脂的木材。标本(CX2012029)存放于北京中医药大学中药现代研究中心标本库。

试剂：乙醇、石油醚、醋酸乙酯、氯仿、甲醇、二氯甲烷、乙腈等化学试剂均为分析纯，购自北京化工厂。

仪器：美国Rudolph Autopol IV自动旋光计；日本岛津公司UV-2450分光光度计；美国Thermo Nicolet Nexus 470FT-IR傅立叶变换红外光谱仪；美国Varian Inova-500型核磁共振仪；日本岛津离子阱飞行时间质谱仪(IT-TOF-MS)；美国Waters2535半制备型高效液相色谱仪；JA50002精密电子天平；DHG-9070B鼓风干燥箱；DZF-6090真空干燥箱；薄层色谱用GF₂₅₄硅胶预制板和柱色谱用硅胶(200～300目)，购自青岛海洋化工厂；德国Merck公司ODS C18色谱柱；瑞典Amersham Biosciences公司Sephadex LH-20色谱柱；分析型HPLC色谱柱：Diamonsil C₁₈色谱柱(4.6×250mm，5μm)；半制备反相色谱柱：Water XTerra Prep C₁₈色谱柱(10×250mm，5μm)和Shiseido Capcell PAK MG Prep C₁₈色谱柱(10×250mm，5μm)。

(2)实验方法

取沉香药材6.9kg，95％乙醇加热回流提取3次，每次2.5h，合并醇提液，减压浓缩至浸膏状(3.39kg)，加水混悬，分别用石油醚、醋酸乙酯萃取。得石油醚部位150g，醋酸乙酯部位600g。取醋酸乙酯部位浸膏(400g)，加硅胶拌样，上样于硅胶柱(200～300目)，依次用石油醚-醋酸乙酯(8∶1→1∶1)、氯仿-甲醇(20∶1→1∶3)梯度洗脱，得到7个流份(附图A)。

取第5个流份GYF-I-15-05(86g)经硅胶(200～300目)柱色谱分离，甲醇-二氯甲烷(1∶80→1∶0)梯度洗脱，TLC检测，合并得到4个流份。GYF-II-05-02(18g)经硅胶(200～300目)柱色谱分离，甲醇-二氯甲烷(1∶8)洗脱，将流份GYF-II-06-03经ODS反相柱(甲醇-水40∶60)洗脱。流份GYF-II-09经硅胶(200～300目)柱色谱分离，丙酮-二氯甲烷(1∶10)洗脱，得到流份Fr.B～E。流份Fr.B经半制备液相(乙腈-水40∶60)分离得到化合物L1(6mg)。流份Fr.C经半制备液相(乙腈-水40∶60)分离得到化合物L2(5mg)，化合物L11(6mg)，化合物L10(6mg)，化合物L9(5mg)。流份Fr.D经半制备液相(乙腈-水40∶60)分离得到化合物L4(3mg)，化合物L13(6mg)，化合物L3(6mg)，化合物L12(5mg)，化合物L6(4mg)，化合物L5(6mg)，化合物L7(6mg)。流份Fr.E经半制备液相(乙腈-水40∶60)分离得到化合物L8(5mg)(附图B)。

将第5个流份GYF-I-15-05以外各流份合并后重新经硅胶(200～300目)柱色谱分离，甲醇-二氯甲烷(1∶80→1∶0)梯度洗脱，TLC检测，合并得到10个流份Fr.A～J。Fr.H(1.16g)经硅胶柱色谱二氯甲烷-甲醇(20∶1→1∶1)梯度洗脱得到4个流份(H1～H4)。H1(400mg)经反相C₁₈色谱柱，40％～100％甲醇梯度洗脱得5个流份(H1a～H1e)。H1a(37mg)经制备HPLC纯化，42％乙腈等度洗脱，得到化合物L17(2.2mg)和L19(2.8mg)。H1c(140mg)经制备HPLC纯化，42％乙腈等度洗脱，得到化合物L18(2.0mg)和3个流份(H1c1～H1c3)。H1c1(30mg)经制备HPLC纯化，53％甲醇等度洗脱，得到化合物L27(4.0mg)和L28(2.0mg)。H1c2(20mg)经制备HPLC纯化，38％乙腈等度洗脱，得到化合物L24(4.0mg)和L25(3.0mg)。H1d(40mg)经制备HPLC纯化，42％乙腈等度洗脱，得到化合物L14(8.0mg)和1个流份(H1d1)。H1d1(10mg)经制备HPLC纯化，78％乙腈等度洗脱，得到化合物L26(5.5mg)。H1e(120mg)经制备HPLC纯化，58％乙腈等度洗脱，得到3个流份(H1e1～H1e3)。H1e2(35mg)经制备HPLC纯化，70％乙腈等度洗脱，得到化合物L15(4.5mg)。H4(300mg)经制备HPLC纯化，48％乙腈等度洗脱，得到3个流份(H4a～H4c)。H4b(38mg)经制备HPLC纯化，63％甲醇等度洗脱，得到化合物L16(4.2mg)、L20(2.0mg)和L21(2.2mg)。H4c(11mg)经制备HPLC纯化，67％甲醇等度洗脱，得到化合物L22(2.5mg)和L23(1.6mg)(附图C)。

利用熔点检测、旋光检测、紫外吸收光谱、红外吸收光谱、核磁共振、离子阱飞行质谱定性检测化合物和鉴定化合物结构。

(3)实验结果

化合物L1的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，HRES1MS给出准分子离子峰m/z 561.1908[M+H]⁺(计算值561.1897)，分子式为C₃₅H₂₈O₇。(logε)：331(4.05)，231(4.75)，209(4.72)；IR(KBr)v_max 3440，1638，1597，1577，1465，1398，1312，1177，1141，1029，826，701cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表1和表2。

化合物L2的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 621.2119[M+H]⁺(计算值621.2091)，分子式为C₃₇H₃₂O₉。(logε)：326(3.97)，226(4.64)；IR(KBr)v_max 3441，1641，1513，1456，1385，1246，1177，1098，1033cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表1和表2。

表1：化合物L1和L2的¹H NMR数据(500MHz，δin ppm，J in Hz)

a：在DMSO-d₆中测定；b：在CD₃OD中测定

表2：化合物L1和L2的¹³C NMR数据(125MHz)

a：在DMSO-d₆中测定；b：在CD₃OD中测定

化合物L3的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，HRESIMS给出准分子离子峰m/z579.2013[M+H]⁺(计算值579.2005)，分子式为C₃₅H₃₀O₈.(logε)：320(3.54)，225(4.41)，204(4.42)；IR(KBr)v_max 3418，1668，1639，1594，1451，1398，1291，1207，1189，1096，1020，1007，953，896cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表3和表4.

表3：化合物L3和L4的¹H NMR数据(500MHz in DMSO-d₆，δin ppm，J in Hz)

化合物L4的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，HRESIMS给出准分子离子峰m/z609.2101[M+H]⁺(计算值609.2119)，分子式为C₃₆H₃₂O₉。(logε)：296(3.87)，224(4.42)，204(4.40)；IR(KBr)v_max 3427，1666，1639，1601，1501，1512，1449，1393，1247，1246，1094，1029，955，820cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表3和表4.

表4：化合物L3和L4的¹³C NMR数据(125MHz in DMSO-d₆)

化合物L5的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 549.1908[M+H]⁺(计算值549.1932)，推断其分子式为C₃₄H₂₈O₇。(logε)：321(2.99)，229(3.80).205(3.79)；IR(KBr)v_max 3423，1663，1640，1606，1477，1453，1412，1382，1242，1181，1095，1028，971，862，844，706cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表5和表6。

表5：化合物L5、L6、L7和L8的¹H NMR数据(500MHz in DMSO-d₆，δin ppm，J in Hz)

化合物L6的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，HRESIMS给出准分子离子峰m/z579.2013[M+H]⁺(计算值579.2021)，分子式为C₃₅H₃₀O₈.(logε)：320(3.63)，225(4.42)，207(4.44)；IR(KBr)v_max 3424，1667，1635，1585，1455，1438，1398，1273，1190，1067，1011，988，972，962，868cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表5和表6.

化合物L7的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 609.2100[M+H]⁺(计算值609.2119)，分子式为C₃₆H₃₂O₉。(logε)：312(3.71)，268(3.90)，228(4.31)，209(4.36)；IR(KBr)v_max 3440，1661，1636，1513，1454，1384，1270，1247.1181，1107，1083，1034，823，701cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表5和表6。

表6：化合物L5、L6、L7和L8的¹³C NMR数据(125MHz in DMSO-d₆)

化合物L8的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 639.2203[M+H]⁺(计算值639.2225)，分子式为C₃₇H₃₄O₁₀。(logε)：313(3.86)，226(4.54)，211(4.50)；IR(KBr)v_max 3441，1662，1636，1513，1452，1384，1246，1179，1078，1033cm^-1；¹H和¹³CNMR数据见表5和表6.

化合物L9的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，HRESIMS给出准分子离子峰m/z583.1963[M+H]⁺(计算值583.1937)，分子式为C₃₄H₃₀O₉.(logε)：252(4.10)，206(4.30)；IR(KBr)v_max 3431，1665，1634，1512，1485，1450，1434，1254，1223，1135，1022，1002，964，880，844cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表7和表8.

表7：化合物L9、L10和L11的¹H NMR数据(500MHz in CD₃OD，δin ppm，J in Hz)

化合物L10的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 613.2068[M+H]⁺(计算值613.2072)，分子式为C₃₅H₃₂O₁₀.(logε)：251(4.24)，203(4.44)；IR(KBr)v_max 3425，1660，1617，1600，1455，1410，1326，1231，1190，1127，1092，1062，969，858，758，703cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表7和表8.

化合物L11的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，HRESIMS给出准分子离子峰m/z 643.2174[M+H]⁺(计算值643.2149)，分子式为C₃₆H₃₄O₁₁.(logε)：252(4.30)，223(4.52)，204(4.47)；IR(KBr)v_max 3431，1660，1617，1600，1454，1410，1324，1190，1127，1092，1070，989，859，759，703cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表7和表8。

表8：化合物L9、L10和L11的¹³C NMR数据(125MHz in CD₃OD)

化合物L12的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，HRESIMS给出准分子离子峰m/z609.2119[M+H]⁺(计算值609.2106)，分子式为C₃₆H₃₂O₉.(logε)：314(3.77)，233(4.34)，207(4.46)；IR(KBr)v_max 3423，1669，1635，1511，1485，1453，1225，1138，1020，999，852cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表9和表10.

表9：化合物L12和L13的¹H NMR数据(500MHz，δin ppm，J in Hz)

a：在DMSO-d₆中测定；b：在CD₃OD中测定

表10：化合物L12和L13的¹³C NMR数据(125MHz)

a：在DMSO-d₆中测定；b：在CD₃OD中测定

化合物L13的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，HRESIMS给出准分子离子峰m/z639.2225[M+H]⁺(计算值639.2195)，分子式为C₃₇H₃₄O₁₀.(logε)：320(3.62)，225(4.49)，205(4.51)；IR(KBr)v_max 3447，1665，1635，1512，1485，1451，1385，1254，1223，1135，1022，1002，880，865，823，711cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表9和表10.

化合物L14的理化、波谱数据如下：

白色无定型粉末，比旋光度正离子模式HRESIMS给出准分子离子峰m/z 549.1912[M+H]⁺(计算值C₃₄H₂₉O₇，549.1908)。(logε)：331(3.62)，235(4.38).207(4.44)；IR(KBr)v_max 3423，1656，1603，1496，1462，1427，1377，1197，1175，1041.1004cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表11和表12。

表11：化合物L14和L15的¹H NMR数据(500MHz in DMSO-d₆，δin ppm，J in Hz)

化合物L15的理化、波谱数据如下：

白色无定型粉末，比旋光度ECD(c 0.001，MeOH)：220(Δε+27.51)，248(Δε-50.03)，336(Δε+12.40)；正离子模式HRESIMS给出准分子离子峰m/z579.2029[M+H]⁺(计算值C₃₅H₃₁O₈，579.2013)。(logε)：329(3.74)，230(4.53)，206(4.52)；IR(KBr)v_max 3422，1654，1583，1512，1462，1377，1244，1177，1037，821，700cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表11和表12。

表12：化合物L14和L15的¹³C NMR数据(125MHz in DMSO-d₆，δin ppm)

化合物L16的理化、波谱数据如下：

白色无定型粉末，比旋光度正离子模式HRESIMS给出准分子离子峰m/z 549.1897[M+H]⁺(计算值C₃₄H₂₉O₇，549.1908)。306(3.56)，237(4.40)，206(4.45)；IR(KBr)v_max 3305，1711，1655，1570，1494，1451，1388，1362，1218，1052，859，700cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表13和表14。

表13：化合物L16、L17和L18的¹H NMR数据(500MHz，δin ppm，J in Hz)

a：在DMSO-d₆中测定；b：在CD₃OD中测定

化合物L17的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，比旋光度正离子模式HRESIMS给出准分子离子峰m/z 565.1838[M+H]⁺(计算值C₃₄H₂₉O₈，565.1857)。(logε)：333(3.52)，245(4.28)，206(4.44)；IR(KBr)v_max 3306，1652，1597，1456，1393，1245，1178，1055，1026，855，750，700cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表13和表14。

表14：化合物L16、L17和L18的¹³C NMR数据(125MHz，δin ppm)

a：在DMSO-d₆中测定；b：在CD₃OD中测定

化合物L18的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，比旋光度正离子模式HRESIMS给出准分子离子峰m/z 625.2041[M+H]⁺(计算值C₃₆H₃₃O₁₀，625.2068)。(logε)：333(3.52)，243(4.28)，224(4.40)，204(4.40)；IR(KBr)v_max 3249，1711，1653，1597，1512，1454，1391，1246，1178，1081，1032，850，824cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表13和表14。

化合物L19的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，比旋光度正离子模式HRESIMS给出准分子离子峰m/z 565.1837[M+H]⁺(计算值C₃₄H₂₉O₈，565.1857)。(logε)：350(3.38)，250(4.34)，207(4.45)，IR(KBr)v_max 3292，1711，1658，1621，1454，1412，1176，1071，1028，699cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表15。

表15：化合L19的¹H(500MHz)和¹³C(125MHz)NMR数据(in DMSO-d₆，δin ppm；J inHz)

化合物L20的理化、波谱数据：

白色无定形粉末，比旋光度正离子模式HRESIMS给出准分子离子峰m/z 579.1997[M+H]⁺(计算值C₃₅H₃₁O₈，578.2013)。(logε)：322(3.66)，224(4.51)，207(4.55)；IR(KBr)v_max 3306，1711，1654，1575，1484，1434，1362，1245，1204，1080，1030cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表16和表17。

表16：化合物L20和L23的¹H NMR数据(500MHz in CD₃OD，δin ppm，J in Hz)

化合物L21的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，比旋光度正离子模式HRESIMS给出准分子离子峰m/z 639.2199[M+H]⁺(计算值C₃₇H₃₅O₁₀，639.2225)。(logε)：324(3.64)，225(4.59)，207(4.58)；IR(KBr)v_max 3305，1711，1654，1613，1513，1485，1436，1362，1274，1245，1205，1177，1085，1033，999，825cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表18和表19。

表17：化合物L20和L23的¹³C NMR数据(125MHz in CD₃OD，δin ppm)

化合物L22的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，比旋光度正离子模式HRESIMS给出准分子离子峰m/z 609.2091[M+H]⁺(计算值C₃₆H₃₃O₉，609.2119)。(logε)：324(3.64)，225(4.53)，207(4.58)；IR(KBr)v_max 3270，1713，1689，1653，1485，1436，1274，1205，1084，1048cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表18和表19。

表18：化合物L21和L22的¹H NMR数据(500MHz in CD₃OD，δin ppm，J in Hz)

化合物L23的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，比旋光度正离子模式HRESIMS给出准分子离子峰m/z 609.2091[M+H]⁺(计算值C₃₆H₃₃O₉，609.2119)。(logε)：321(3.58)，224(4.50)，205(4.49)；IR(KBr)v_max 3341，1712，1654，1611，1512，1485，1437，1362，1079，1028，823cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表16和表17。

表19：化合物L21和L22的的¹³C NMR数据(125MHz in CD₃OD，δin ppm)

化合物L24的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，比旋光度ECD(c 0.001，MeOH)：206(Δε+35.30)，220(Δε-36.98)，250(Δε-30.50)，276(Δε+21.33)，314(Δε-5.87)；正离子模式HRESIMS给出准分子离子峰m/z 565.1831[M+H]⁺(calcd for C₃₄H₂₉O₈，565.1857)。(logε)：312(3.78)，234(4.38)，206(4.50)；IR(KBr)v_max 3375，1662，1483，1450，1377，1267，1173，1079，1028，1003，848，750，699cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表20和表21。

表20：化合物L24和L25的¹H NMR数据(500MHz，δin ppm，J in Hz)

a：在DMSO-d₆中测定；b：在CD₃OD中测定

化合物L25的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，比旋光度ECD(c 0.001，MeOH)：206(Δε-37.17)，222(Δε+56.00)，248(Δε+61.73)，276(Δε-42.50)，314(Aε+10.96)；正离子模式HRESIMS给出准分子离子峰m/z 595.1941[M+H]⁺(计算值C₃₅H₃₁O₉，595.1963)。(logε)：314(3.73)，225(4.40)，205(4.43)；IR(KBr)v_max 3270，1711，1662，1631，1512，1449，1375，1247，1176，1028，1004，823，700cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表20和表21。

表21：化合物L24和L25的¹³C NMR数据(125MHz，δin ppm)

a：在DMSO-d₆中测定；b：在CD₃OD中测定

化合物L26的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，比旋光度正离子模式HRESIMS给出准分子离子峰m/z 585.1676[M+H]⁺(计算值C₃₄H₂₉O₇Cl，585.1675)。(logε)：319(3.63)，238(4.44)，208(4.45)；IR(KBr)v_max 3306，1662，1631，1478，1453，1376，1188，1002，846，827，699cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表22和表23。

表22：化合物L26、L27和L28的¹H NMR数据(500MHz，δin ppm，J in Hz)

a：在DMSO-d₆中测定；b：在CD₃OD中测定

化合物L27的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，比旋光度正离子模式HRESIMS给出准分子离子峰m/z 673.2294[M+H]⁺(计算值C₃₇H₃₇O₁₂，673.2280)。(logε)：314(3.80)，278(4.01)，227(4.44)，205(4.57)；IR(KBr)v_max 3371，1710，1660，1637，1599，1511，1451，1369，1272，1245，1214，1030，853，825cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表22和表23。

化合物L28的理化、波谱数据如下：

白色无定形粉末，比旋光度正离子模式HRESIMS给出准分子离子峰m/z 673.2267[M+H]⁺(计算值C₃₇H₃₇O₁₂，673.2280)。(logε)：316(3.93)，278(4.07)，227(4.50)，206(4.63)；IR(KBr)v_max 3390，1737，1711，1661，1637，1601，1512，1470，1432，1374，1246，1215，1181，1029，956，853，761cm^-1；¹H和¹³C NMR数据见表22和表23。

表23：化合物L26、L27和L28的的¹³C NMR数据(125MHz，δin ppm)

a：在DMSO-d₆中测定；b：在CD₃OD中测定

药理实验

实施例2：化合物L1-L28体外抑制小鼠巨噬细胞一氧化氮(NO)分泌作用测定

(1)实验材料

细胞株：RAW264.7细胞购自中国医学科学院基础医学研究所细胞中心。

试剂：化合物L1-L28由北京中医药大学中药现代研究中心从沉香中提取分离；DMEM高糖培养基购自康宁公司；细菌脂多糖购自北京拜尔迪生物技术有限责任公司(货号：L2880)；一氧化氮测定试剂盒(Griess试剂)购自普利莱基因技术有限公司(货号：E1030)；噻唑兰购自Amresco公司(货号：0793)；分析纯二甲基亚砜，购自北京化工厂。

仪器：Enspire Multimode Plate Reader购自德国铂金爱尔默公司。

(注：所有描述过的实验材料在后续实施例中不再重复描述。)

(2)实验方法

将处于对数生长期的RAW264.7细胞(DMEM高糖培养基)接种到96孔板中，接种浓度均为20000细胞/孔，体积100μl，37℃和5％CO₂孵育24小时后，加入化合物L1-L28，每个化合物设置7个浓度(无细胞毒作用)，各浓度设3个复孔，0.5小时后，加入细菌脂多糖(LPS)至终浓度1μg/ml，继续孵育24小时。取100μl细胞上清，加入Griess试剂100μl，反应10分钟后，测定540nm波长的吸光度，并计算各个化合物对RAW264.7细胞分泌NO的半数抑制浓度(IC₅₀)。另将细胞培养板中培养基弃去，加入100μl MTT试剂(PBS配制的0.5mg/ml噻唑兰溶液)，细胞培养箱继续孵育4h，然后弃去MTT试剂，各孔加入150μl的二甲基亚砜溶解甲瓒，测定570nm波长的吸光度，并计算各浓度化合物对RAW264.7细胞的生长抑制率。

(3)实验结果

通过分泌一氧化氮模型筛选，发现化合物L1-L28均能在无细胞毒剂量下显著抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7在脂多糖刺激后的一氧化氮分泌，其半数抑制浓度(IC₅₀)如表24所示。

表24：化合物L1-L28体外抑制巨噬细胞NO分泌作用测定

实施例3：化合物L6和L26体外抑制小鼠巨噬细胞炎症因子分泌作用测定

(1)实验材料

试剂：小鼠TNF-α、IL-6和IL-1β的ELISA试剂盒购自美国R&D System公司(货号：DY410、DY406和DY401)。

(2)实验方法

将处于对数生长期的RAW264.7细胞接种到96孔板中，接种浓度为20000细胞/孔，体积100μl，37℃和5％CO₂孵育24小时后，加入化合物L6和L26处理处理，各化合物各浓度设3个复孔，0.5小时后，加入细菌脂多糖(LPS)至终浓度1μg/ml，继续孵育12小时。取细胞上清，利用ELISA试剂盒测定细胞上清中TNF-α、IL-6和IL-1β的浓度。

(3)实验结果

通过分泌炎症因子测定，发现化合物L6和L26处理组细胞上清TNF-α、IL-6和IL-1β浓度显著低于LPS处理组，如表25所示(*P＜0.05vs LPS)。表明化合物L6和L26能够以剂量依赖性抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌TNF-α、IL-6和IL-1β。

表25：化合物L6和L26体外抑制巨噬细胞分泌炎症因子作用测定

实施例4：化合物L6和L26体外抑制中性粒细胞活化作用测定

(1)实验材料

动物：Balb/c小鼠购自北京维通利华实验动物有限公司。

试剂：PE标记大鼠抗小鼠CD11b抗体、FITC标记大鼠抗小鼠CD62L抗体和APC标记的大鼠抗小鼠Ly6G抗体，购自美国BD Biosciences公司(货号：557397、553152、560599)。

仪器：FACSCanto^TM II流式细胞仪购自美国BD Biosciences公司。

(2)实验方法

颈椎脱臼处死1只Balb/c小鼠，75％酒精浸泡5分钟，然后超净工作台内无菌去小鼠两侧股骨，剪开股骨膝关节端，利用1ml注射器吸取IMDM培养基(含2％胎牛血清)将股骨中骨髓细胞冲洗到离心管中。经40μm孔径无菌滤网过滤细胞和白细胞计数。然后将细胞接种到24孔板中，保持白细胞浓度1×10⁶个/孔，加入IMDM培养基(含2％胎牛血清)至每孔培养基总体积1ml。再加入化合物L6和L26，各化合物各浓度设3个复孔，37℃和5％CO₂孵育1小时后，加入250μl条件培养基(利用DMEM高糖培养基培养的RAW264.7细胞，经1μg/ml的LPS刺激24小时，TNF-α浓度30ng/ml)，37℃和5％CO₂继续孵育1.5h。然后将细胞收集到离心管中，4℃，200g离心5分钟，倒去上清，250μl含1％牛血清白蛋白(BSA)的冰冷PBS重悬细胞，加入PE-CD11b抗体、FITC-CD62L抗体和APC-Ly6G抗体，冰上孵育0.5小时。然后加入1ml含1％BSA的PBS，4℃，200g离心5分钟，倒去上清，再加入1ml含1％BSA的PBS，4℃，200g离心5分钟，倒去上清。最后加入300μl含1％BSA的PBS重悬细胞，利用BD FACSCanto^TM II流式细胞仪检测骨髓细胞中Ly6G阳性的中性粒细胞的CD62L和CD11b的平均荧光强度。

(3)实验结果

通过流式细胞测定，发现化合物L6具有较强的抑制中性粒细胞CD62L下调的作用，L26具有较强的抑制中性粒细胞CD11b上调的作用，如表4所示(*P＜0.05vs CM)。表明化合物L6和L26具有较强的抑制小鼠中性粒细胞活化的作用。

表26：化合物L6和L26体外抑制中性粒细胞活化作用测定

注：CM为条件培养基刺激组

实施例5：化合物L6和L26体外抑制CD4⁺T细胞活化、增殖和分泌细胞因子的作用测定

(1)实验材料

试剂：红细胞裂解液(货号：CC051)，购自迈晨科技有限公司；CD4⁺T细胞磁珠分选试剂盒(货号：130-104-454)，购自Miltenyi Biotec公司；仓鼠抗小鼠CD3e和CD28抗体(货号：553058和553295)，大鼠抗小鼠单克隆抗体FITC-CD69、PE-CD25、PE-CY7-CD4(货号：553237、558642、552775)，购自BD Biosciences公司；IFN-γ、IL-4和IL-17A的ELISA试剂盒(货号：BR33113、BR33114和BR33115)，CCK-8细胞增殖检测试剂盒(货号：BR44003)，购自北京佰瑞达生物科技有限公司。

(2)实验方法

颈椎脱臼处死Balb/c小鼠，无菌取小鼠脾脏；将小鼠脾脏放入70μM无菌滤网中，用5mL注射器内芯研磨，并用20mL的PBS冲洗，获得小鼠脾脏细胞悬液；然后200g离心5分钟，弃上清，加入10mL红细胞裂解液裂解红细胞，然后加入20mL RPMI1640培养基终止裂解，200g离心5分钟，弃上清；再利用10mL的含10％胎牛血清的RPMI1640培养基重悬细胞，然后200g离心5分钟，弃上清；最后再利用含10％胎牛血清的RPMI1640培养基重悬细胞；将细胞接种到包被大鼠抗小鼠CD3e抗体(PBS稀释为4μg/ml，4℃包被过夜)的24孔板中，1×10⁶个/孔，加入化合物处理0.5h(对脾脏细胞无细胞毒的剂量)，然后加入大鼠抗小鼠CD28抗体至终浓度为1μg/mL；在37℃，5％CO₂条件下继续培养18小时；然后收集细胞，4℃、200g离心，弃上清，再加入250μL流式染色缓冲液(含0.2％BSA的PBS)重悬细胞；加入PE-CY7-CD4、FITC-CD69和PE-CD25大鼠抗小鼠抗体，冰浴30分钟；4℃、200g离心，弃上清，再加入1mL流式染色缓冲液重悬细胞，4℃、200g离心，弃上清；300μL流式染色缓冲液重悬细胞，利用流式细胞仪检测CD4⁺T细胞表面CD69和CD25的表达。

上述小鼠脾脏白细胞经红细胞裂解和含10％胎牛血清的RPMI1640培养基清洗后(1×10⁸个细胞)，利用1mL的磁珠分选缓冲液(含0.5％BSA和2mM EDTA的PBS)重悬细胞，加入CD4⁺T细胞分选试剂盒中的生物素标记抗体溶液100μl，4℃孵育5分钟，再加入亲和素标记磁珠溶液200μl，4℃孵育10分钟；将磁珠分选LS柱装到磁力架上，加入3mL磁珠分选缓冲液润洗柱子，然后依次加入与抗体和磁珠孵育过的细胞悬液和3mL磁珠分选缓冲液冲洗柱子，收集柱子流出的液体，200g离心5分钟，弃上清，用RPMI1640完全培养基重悬细胞；将纯化的CD4⁺T细胞接种到包被大鼠抗小鼠CD3e抗体96孔板中，2×10⁵个/孔，加入化合物处理0.5h，然后加入大鼠抗小鼠CD28抗体至终浓度为1μg/mL；在37℃，5％CO₂条件下继续培养72h；然后各孔收集细胞上清100μl，利用ELISA测定上清中IFN-γ、IL-4和IL-17A的浓度，然后各孔加入10μl的CCK-8试剂，孵育4h，通过测定OD_450nm检测细胞增殖。

(3)实验结果

通过流式细胞测定，发现化合物L6和L26对CD4⁺T细胞活化过程中表面标志物CD69和CD25上调具有剂量依赖性抑制作用，如表27所示(*P＜0.05vs Model)，表明化合物L6和L26对CD4⁺T细胞活化具有显著抑制作用。

表27：化合物L6和L26对CD4⁺T细胞活化抑制作用测定

注：Control为未受CD3e/CD28抗体刺激的对照；Model为受抗体刺激但未进行药物处理的对照

通过CCK-8细胞增殖测定，发现化合物L6对CD4⁺T细胞增殖无抑制作用，L26对CD4⁺T细胞增殖具有较强抑制作用，如表28所示(*P＜0.05vs Model)。

表28：化合物L6和L26对CD4⁺T细胞增殖的抑制作用测定

通过ELISA测定，发现化合物L6和L26对CD4⁺T细胞分泌细胞因子具有剂量依赖性的抑制作用，但两个化合物抑制作用的选择性不同。L6选择性抑制CD4⁺T细胞分泌IFN-γ，L26选择性抑制CD4⁺T细胞分泌IL-4和IL-17A，如表29所示(*P＜0.05vs Model)。

表29：化合物L6和L26对CD4⁺T细胞分泌细胞因子的抑制作用测定

实施例6：化合物L6和L26体外抑制CD8⁺T细胞活化、增殖和分泌细胞因子的作用测定

(1)实验材料

试剂：CD8⁺T细胞磁珠分选试剂盒(货号：130-104-075)，购自Miltenyi Biotec公司；Alexa Fluor647标记的大鼠抗小鼠CD8a抗体(货号：557682)，购自BD Biosciences公司。

(2)实验方法

颈椎脱臼处死Balb/c小鼠，无菌取小鼠脾脏；将小鼠脾脏放入70μM无菌滤网中，用5mL注射器内芯研磨，并用20mL的PBS冲洗，获得小鼠脾脏细胞悬液；然后200g离心5分钟，弃上清，加入10mL红细胞裂解液裂解红细胞，然后加入20mL RPMI1640培养基终止裂解，200g离心5分钟，弃上清；再利用10mL的含10％胎牛血清的RPMI1640培养基重悬细胞，然后200g离心5分钟，弃上清；最后再利用含10％胎牛血清的RPMI1640培养基重悬细胞；将细胞接种到包被大鼠抗小鼠CD3e抗体(PBS稀释为4μg/ml，4℃包被过夜)的24孔板中，1×10⁶个/孔，加入化合物处理0.5h，然后加入大鼠抗小鼠CD28抗体至终浓度为1μg/mL；在37℃，5％CO₂条件下继续培养18小时；然后收集细胞，4℃、200g离心，弃上清，再加入250μL流式染色缓冲液(含0.2％BSA的PBS)重悬细胞；加入Alexa Fluor647-CD8a、FITC-CD69和PE-CD25大鼠抗小鼠抗体，冰浴30分钟；4℃、200g离心，弃上清，再加入1mL流式染色缓冲液重悬细胞，4℃、200g离心，弃上清；300μL流式染色缓冲液重悬细胞，利用流式细胞仪检测CD8⁺T细胞表面CD69和CD25的表达。

上述小鼠脾脏白细胞经红细胞裂解和含10％胎牛血清的RPMI1640培养基清洗后(1×10⁸个细胞)，利用1mL的磁珠分选缓冲液(含0.5％BSA和2mM EDTA的PBS)重悬细胞，加入CD8⁺T细胞分选试剂盒中的生物素标记抗体溶液100μl，4℃孵育5分钟，再加入亲和素标记磁珠溶液200μl，4℃孵育10分钟；将磁珠分选LS柱装到磁力架上，加入3mL磁珠分选缓冲液润洗柱子，然后依次加入与抗体和磁珠孵育过的细胞悬液和3mL磁珠分选缓冲液冲洗柱子，收集柱子流出的液体，200g离心5分钟，弃上清，用RPMI1640完全培养基重悬细胞；将纯化的CD8⁺T细胞接种到包被大鼠抗小鼠CD3e抗体96孔板中，3×10⁵个/孔，加入化合物处理0.5h，然后加入大鼠抗小鼠CD28抗体至终浓度为1μg/mL；在37℃，5％CO₂条件下继续培养48h；然后各孔收集细胞上清100μl，利用ELISA测定上清中IFN-γ的浓度，然后各孔加入10μl的CCK-8试剂，孵育4h，通过测定OD_450nm检测细胞增殖。

(3)实验结果

通过流式细胞测定，发现化合物L6和L26对CD8⁺T细胞活化过程中表面标志物CD69和CD25上调具有剂量依赖性抑制作用，如表30所示(*P＜0.05vs Model)，表明化合物L6和L26对CD8⁺T细胞活化具有显著抑制作用。

表30：化合物L6和L26对CD8⁺T细胞活化抑制作用测定

注：Control为未受CD3e/CD28抗体刺激的对照；Model为受抗体刺激但未进行药物处理的对照

通过CCK-8细胞增殖测定，发现化合物L6对CD8⁺T细胞增殖很强的剂量依赖性抑制作用，L26对CD8⁺T细胞增殖具有轻微抑制作用，如表31所示(*P＜0.05vs Model)。

表31：化合物L6和L26对CD8⁺T细胞增殖的抑制作用测定

通过ELISA测定，发现化合物L6和L26对CD8⁺T细胞分泌IFN-γ具有抑制作用，但两个化合物抑制作用的强度不同。L6对CD8⁺T细胞分泌IFN-γ具有很强的抑制作用，L26对CD8⁺T细胞分泌IFN-γ具有较弱的抑制作用，与它们对CD4⁺T细胞分泌IFN-γ具有的抑制作用保持一致，如表32所示(*P＜0.05vs Model)。

表32：化合物L6和L26对CD8⁺T细胞分泌细胞因子的抑制作用测定

实施例7：化合物L6和L26体外抑制B细胞活化、增殖和分泌抗体的作用测定

(1)实验材料

试剂：B细胞磁珠分选试剂盒(货号：130-095-813)，购自Miltenyi Biotec公司；APC标记的大鼠抗小鼠B220抗体(货号：553092)，FITC标记的大鼠抗小鼠CD86抗体(货号：553691)购自BD Biosciences公司；小鼠IgG ELISA试剂盒(货号：BR33117)，购自北京佰瑞达生物科技有限公司。

(2)实验方法

颈椎脱臼处死Balb/c小鼠，无菌取小鼠脾脏；将小鼠脾脏放入70μM无菌滤网中，用5mL注射器内芯研磨，并用20mL的PBS冲洗，获得小鼠脾脏细胞悬液；然后200g离心5分钟，弃上清，加入10mL红细胞裂解液裂解红细胞，然后加入20mLRPMI1640培养基终止裂解，200g离心5分钟，弃上清；再利用10mL的含10％胎牛血清的RPMI1640培养基重悬细胞，然后200g离心5分钟，弃上清；最后再利用含10％胎牛血清的RPMI1640培养基重悬细胞；将细胞接种到24孔板中，1×10⁶个/孔，加入化合物处理0.5h，然后加入LPS至终浓度为10μg/mL；在37℃，5％CO₂条件下继续培养18小时；然后收集细胞，4℃、200g离心，弃上清，再加入250μL流式染色缓冲液(含0.2％BSA的PBS)重悬细胞；加入APC-B220、FITC-CD86和PE-CD69大鼠抗小鼠抗体，冰浴30分钟；4℃、200g离心，弃上清，再加入1mL流式染色缓冲液重悬细胞，4℃、200g离心，弃上清；300μL流式染色缓冲液重悬细胞，利用流式细胞仪检测B细胞表面CD69和CD86的表达。

上述小鼠脾脏白细胞经红细胞裂解和含10％胎牛血清的RPMI1640培养基清洗后(1×10⁸个细胞)，利用1mL的磁珠分选缓冲液(含0.5％BSA和2mM EDTA的PBS)重悬细胞，加入B细胞分选试剂盒中的生物素标记抗体溶液100μl，4℃孵育5分钟，再加入亲和素标记磁珠溶液200μl，4℃孵育10分钟；将磁珠分选LS柱装到磁力架上，加入3mL磁珠分选缓冲液润洗柱子，然后依次加入与抗体和磁珠孵育过的细胞悬液和3mL磁珠分选缓冲液冲洗柱子，收集柱子流出的液体，200g离心5分钟，弃上清，用RPMI1640完全培养基重悬细胞；将纯化的B细胞接种到96孔板中，2×10⁵个/孔，加入化合物处理0.5h，然后加入LPS至终浓度为10μg/mL；在37℃，5％CO₂条件下继续培养72h；然后各孔收集细胞上清100μl，利用ELISA测定上清中IgG的浓度，然后各孔加入10μl的CCK-8试剂，孵育4h，通过测定OD_450nm检测细胞增殖。

(3)实验结果

通过流式细胞测定，发现化合物L6和L26对B细胞活化过程中表面标志物CD69和CD86上调具有剂量依赖性抑制作用，如表33所示(*P＜0.05vs LPS)，表明化合物L6和L26对B细胞活化具有显著抑制作用。

表33：化合物L6和L26对B细胞活化抑制作用测定

注：Control为未受LPS刺激的对照；Model为受LPS刺激但未进行药物处理的对照

通过CCK-8细胞增殖测定，发现化合物L6对B细胞增殖具有轻度抑制作用，L26对B细胞增殖具有很强的剂量依赖性抑制作用，如表34所示(*P＜0.05vs LPS)。

表34：化合物L6和L26对B细胞增殖的抑制作用测定

通过ELISA测定，发现化合物L6和L26对B细胞分泌IgG均具有抑制作用，但两个化合物抑制作用的强度不同。L6对B细胞分泌IgG具有轻微抑制作用，L26对B细胞分泌IgG具有中等强度的抑制作用，与它们对CD4⁺T细胞分泌IL-4具有的抑制作用保持一致，如表35所示(*P＜0.05vs LPS)。

表35：化合物L6和L26对B细胞分泌IgG的抑制作用测定

注：药理实验所有定量数据均用平均数±标准偏差表示，统计分析中多组数据比较采用One-way ANOVA分析，然后两组之间比较采用Dunnett检验，P值小于0.05表示具有显著性差异。

Claims (9)

1.选自如下表格的化合物

2.权利要求1中化合物的制备方法，其特征在于，利用乙醇和乙酸乙酯从沉香中提取，利用柱色谱和高效液相色谱分离。

3.一种药物组合物，其特征在于，含有权利要求1中任一化合物的药物组合物。

4.权利要求1中任一化合物及权利要求3中药物组合物在预防或治疗炎症性疾病、自身免疫性疾病、过敏性疾病、器官移植排斥和移植物抗宿主病中的应用。

5.根据权利要求4的应用，其特征在于，所述的炎症性疾病包括系统性炎症反应、肺炎、支气管炎、肝炎、肾炎、胃炎、肠炎、神经炎症、皮肤炎症。

6.根据权利要求4的应用，其特征在于，所述的自身免疫性疾病包括类风湿性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、克罗恩病、银屑病。

7.根据权利要求4的应用，其特征在于，所述的过敏性疾病包括过敏性哮喘、过敏性休克、过敏性紫癜、过敏性鼻炎、过敏性皮炎。

8.根据权利要求4的应用，其特征在于，所述的器官移植包括肾移植、肝移植、造血干细胞移植、皮肤移植。

9.根据权利要求4的应用，其特征在于，所述的预防或治疗炎症性疾病、自身免疫性疾病、过敏性疾病、器官移植排斥和移植物抗宿主病的机制是抑制天然免疫和适应性免疫功能。