CN108721644A - 一种紫杉烷类药物脂质体制备方法 - Google Patents

一种紫杉烷类药物脂质体制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108721644A
CN108721644A CN201810582737.7A CN201810582737A CN108721644A CN 108721644 A CN108721644 A CN 108721644A CN 201810582737 A CN201810582737 A CN 201810582737A CN 108721644 A CN108721644 A CN 108721644A
Authority
CN
China
Prior art keywords
taxone
liposome
solution
blank
positive charge
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810582737.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108721644B (zh
Inventor
周钢
朱瑶俊
符俊
马堰启
倪旭明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
CHANGZHOU KINYOND PHARMACEUTICAL MANUFACTURING Co Ltd
Original Assignee
CHANGZHOU KINYOND PHARMACEUTICAL MANUFACTURING Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by CHANGZHOU KINYOND PHARMACEUTICAL MANUFACTURING Co Ltd filed Critical CHANGZHOU KINYOND PHARMACEUTICAL MANUFACTURING Co Ltd
Priority to CN201810582737.7A priority Critical patent/CN108721644B/zh
Publication of CN108721644A publication Critical patent/CN108721644A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108721644B publication Critical patent/CN108721644B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明公开了一种紫杉烷类药物脂质体制备方法，属于药物制剂工艺领域，旨在提供一种提高载药量的紫杉烷类药物脂质，以解决成本过高的问题，其技术方案要点是，一种紫杉烷类药物脂质体制备方法，所述的方法为：依次制备带有负电荷的空白脂质体、带有正电荷的紫杉烷类药物悬浊液或溶液，将二者混合，混合体系由浑浊状变成透明或半透明状即成。本发明适用于药物制剂工艺领域。

Description

一种紫杉烷类药物脂质体制备方法
技术领域
本发明涉及药物制剂工艺领域，特别涉及一种紫杉烷类药物脂质体制备方法。
背景技术
紫杉烷类是从植物中分离得到的抗肿瘤活性成分，并对已取得的活性成分的化合物进行结构修饰，合成的一系列衍生物。紫杉烷类药物主要包括紫杉醇、多西他赛，以及具有紫杉烷骨架结构的衍生物。因紫杉烷类药物难溶于水，脂质体剂型的紫杉烷药物研究已成为热门研究课题。
脂质体(liposome)是一种人工膜。在水中磷脂分子亲水头部插入水中，脂质体疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体，直径25～1000nm不等。脂质体可用于转基因，或制备的药物，利用脂质体可以和细胞膜融合的特点，将药物送入细胞内部生物学定义:当两性分子如磷脂和鞘脂分散于水相时，分子的疏水尾部倾向于聚集在一起，避开水相，而亲水头部暴露在水相，形成具有双分子层结构的封闭囊泡，称为脂质体。
脂质体作为一种含磷脂组分的微粒，可作为难溶性药物的载体，是一种新型药物制剂。含药脂质体经静脉给药后，主要被网状内皮系统吞噬，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，改变被包封药物的体内分布，从而提高药物的治疗指数，可减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。
国内外研究(专利CN101385715B、CN101507708B、CN1092044C、CN1236771C、CN100356919C)难溶性药物制成脂质体的方法基本是被动载药方式，即都是将难溶性药物与磷脂混合在一起，然后成膜，挤压最终制成脂质体。为了使最终产品的粒径符合质量标准，需要多次挤压，在此过程中容易导致药物的降解、杂质超标。一般来说这种工艺所得到的脂质体载药量都不是太高，造成成本的浪费；而且成膜工艺难以控制，使得工业化成为困难。
发明内容
本发明的目的是提供一种紫杉烷类药物脂质体的制备方法，具有提高脂质体的载药量的优点。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
一种紫杉烷类药物脂质体制备方法，所述的方法为:依次制备带有负电荷的空白脂质体、带有正电荷的紫杉烷类药物悬浊液或溶液，将二者混合，混合体系由浑浊状变成透明或半透明状即成。
通过采用上述技术方案，由于空白脂质体带有负电荷，而紫杉烷类药物的悬浊液或溶液中带有正电荷，在正负电荷的吸引作用下，使得紫杉烷类药物颗粒更容易进入空白脂质体，由于脂质体磷脂膜的流动性，使得紫杉烷类药物颗粒能够更好的进入脂质体膜层或内部，从而实现脂质体对药物的包封作用，同时提高了脂质体的载药量，进而降低了生产成本。
进一步的，所述的方法包括以下步骤：
步骤A、制备带有负电荷的空白脂质体，并将空白脂质体的平均粒径控制在纳米尺寸，粒径均一度控制在0.4以下；
步骤B、制备带有正电荷的紫杉烷类药物溶液或悬浊液；
步骤C、将步骤A中得到的带有负电荷的空白脂质体，与步骤B中得到的带有正电荷的紫杉烷类药物悬浊液或溶液混合，过滤除菌，分装、冻干，制得含药脂质体。
通过采用上述技术方案，将空白脂质体的平均粒径控制在纳米尺寸，粒径均一度控制在0.4以下，从而使得空白脂质体的粒径分布范围较窄，在步骤C的过滤除菌过程中，能够有效减小大颗粒的脂质体对过滤除菌设备造成堵塞的风险，降低了设备维护成本；同时通过控制空白脂质体的粒径和粒径均一度，使得步骤C中载有紫杉烷类药物颗粒的含药脂质体在体内分布效果更加优越，更易被吸收，并且对于抗肿瘤药物脂质体来说，较小粒径的含药脂质体在体内不易被快速清除，从而使得药物更容易到达肿瘤部位，实现更好的抗肿瘤作用。
进一步的，所述步骤A包括：
将磷脂、附加剂、磷脂酰甘油加有机溶剂热熔，制备得到带有负电荷的空白脂质体；将带有负电荷的空白脂质体加缓冲液水化，水化后通过高压均质仪和挤出机作用，控制空白脂质体的粒径和粒径均一度。
通过采用上述技术方案，制得的空白脂质体与缓冲液水化，将水化后的空白脂质体溶液，通过高压均质仪的均质作用控制其粒径在纳米尺寸，然后在挤出机的挤出膜的作用下，控制其粒径均一度在0.4以下。
进一步的，所述水化过程采用冷热交替法，将带有负电荷的空白脂质体与缓冲液混合，并依次在高温和低温条件下完成水化。
通过采用上述技术方案，依次通过高温和低温水化，能够提高脂质体磷脂膜的韧性，进而有效提高脂质体的稳定性，延长了含药脂质体的贮存时间。
进一步的，所述水化过程是在真空度为200-500mbr条件下进行的。
通过采用上述技术方案，有机溶剂过高会导致脂质体产品不稳定，在一定真空度调节下水化能够预先去除一些有机溶剂，减少有机溶剂对空白脂质体的稳定性的影响。
进一步的，所述步骤B包括：
将紫杉烷类药物和正电荷磷脂经有机溶剂溶解；将表面活性剂溶解于水中，注入上述的有机溶剂混合液，搅拌混合，形成带有正电荷的紫杉烷类药物的纳米胶束溶液。
通过采用上述技术方案，表面活性剂用于对紫杉烷类药物进行增溶，用于提高紫杉烷类药物的溶解度，从而能够提高脂质体的载药量；带有正电荷的纳米胶束溶液由于粒径在纳米尺寸，使其在与空白脂质体混合时，更易进入脂质体内形成含药脂质体。
进一步的，所述正电荷磷脂为DOTAP、DOTMP、DOSPA中的一种，所述表面活性剂为带有正电荷的离子表面活性剂。
通过采用上述技术方案，DOTAP、DOTMP、DOSPA均可在市面上购得，从而方便了带正电荷的紫杉烷类药物溶液的制备；带有正电荷的离子表面活性剂能够提高紫杉烷类药物溶解度的同时，为紫杉烷类药物溶液提供正电荷离子，进一步提高了步骤B中正电荷离子的含量，从而有助于提高紫杉烷类药物与空白脂质体的结合，进而提高空白脂质体的载药量。
进一步的，所述紫杉烷类药物为多西他赛、卡巴他赛、紫杉醇中的一种。
通过采用上述技术方案，多西他赛、卡巴他赛、紫杉醇均为常见的紫杉烷类药物，上述的方案适用于这些药物。
进一步的，所述有机溶剂为乙醇、甲醇、丙酮、异丙醇、叔丁醇、氯仿中的一种或几种的混合物。
通过采用上述技术方案，使得有机溶剂的选择范围更加广泛，提高了紫杉烷类药物脂质体制备工艺的适用性。
进一步的，所述缓冲溶液为含有组氨酸、缬氨酸、苏氨酸、甘氨酸、丝氨酸、甘露醇、蔗糖、乳糖、葡萄糖、海藻糖、阿拉伯胶、木糖醇、山梨醇、果糖中的一种或几种的缓冲溶液。
通过采用上述技术方案，缓冲溶液不局限于特定的一类，从而提高了紫杉烷类药物脂质体制备的灵活性，可以根据实际情况作出调整，更加方便。
通过采用上述技术方案，
综上所述，本发明具有以下有益效果：
1.采用了带有负电荷的空白脂质体、带有正电荷的紫杉烷类药物溶液相互混合，从而产生提高空白脂质体载药量的效果；
2.采用了高压均质机和挤出机组合使用，从而产生控制脂质体粒径和粒径均一度的效果；
3.采用了冷热交替水化法，从而产生提高含药脂质体稳定性的效果。
附图说明
图1是本发明的工艺流程图；
图2是实施例1中用于体现空白脂质体的粒径图；
图3是实施例1中用于体现包裹有多西他赛的脂质体的粒径图；
图4是实施例1中用于体现冻干复溶后多西他赛脂质体的粒径图；
图5是对比实施例1中用于体现冻干复溶后多西他赛脂质体的粒径图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明作进一步详细说明。其中，磷脂含量、紫杉烷类药物的含量、溶血磷脂含量是通过高效液相色谱仪检测；粒径采用Nicomp380ZLS纳米粒度仪检测；水化反应采用AIR-5L真空控温反应釜；挤出机采用TBX001型罐体式脂质体挤出器。
一、包封率的测试方法如下：
1、柱活化：取凝胶柱G50轻敲让填料至管底，去红色帽盖并放入2ml离心管中，加入500μl水，30min后以8000转/分钟离心5min，弃滤液后，再加入500μl水，15min后以8000转/分钟离心5min，弃滤液后加0.9％氯化钠溶液500μl以8000转/分钟离心5min，弃滤液，再离心5min，更换离心管备用。
2、取样品适量，加水制成每1ml溶液中含紫杉烷类药物为2mg的悬浮液。
3、精密量取悬浮液200μl至活化好的凝胶柱上，等10分钟后，以8000转/分钟离心5分钟，再加入500μl水于凝胶柱上以8000转/分钟离心5分钟，合并滤液至10ml容量瓶中，用醋酸：甲醇(1：200)洗涤离心管3次并转移至容量瓶中，加用醋酸：甲醇(1：200)溶解后转移溶解并定容至刻度，摇匀，采用HPLC法测定，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，峰面积记为A包封。
4、上述凝胶柱再依次以25％乙醇2ml、50％乙醇2ml、无水乙醇4ml分次离心洗脱，洗脱液全部转移至另一10ml容量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇匀，采用HPLC法测定，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，峰面积记为A游离。
5、按照公式计算包封率：
简化计算公式：
A包封：为柱分离包封样品经醋酸：甲醇(1：200)稀释后样品溶液峰面积；
A游离：为柱分离游离样品经无水乙醇稀释后样品溶液峰面积。
二、溶血磷脂的测试方法如下：
1、应用反相高效液相色谱原理。
试剂采购自TEDIA公司，包括：甲醇(HPLC)、乙醇(HPLC)、乙腈(HPLC)、注射用水。
设备包括高效液相色谱仪-Waterse2695、蒸发光散射检测器-Alltech6000ES。
2、仪器参数及色谱条件：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；氮气流速：2.0ml/min；蒸发温度：80℃；进样量：20μl。
3、流动相制备：
流动相A：乙醇；
流动相B：甲醇：乙腈：水4:4:2；
流动相C：甲醇：乙腈：水5:4:1。
4、操作过程：
精密称取溶血磷脂对照品8mg、12mg、15mg、20mg，分别置于100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释定容，分别作为对照溶液(1)、对照溶液(2)、对照溶液(3)、对照溶液(4)。
供试溶液配制：称取注射用多西他赛脂质体0.2g置于10ml量瓶中，加水0.4ml溶解，加甲醇稀释并定容至刻度，作为供试溶液1。按上述过程，另平行配制1份，作为供试溶液2。
方法要求：稀释液：进样1针，平衡系统；对照溶液2：进样5针，主峰RSD％＜5％；对照溶液1：进样2针；对照溶液3：进样2针；对照溶液4：进样2针；供试溶液1：进样2针；供试溶液2：进样2针。
以对照品溶液的浓度和面积的对数值进行线性回归，其相关系数不小于0.999。
鉴别检查：供试溶液的溶血磷脂峰保留时间与对照溶液的溶血磷脂峰保留时间一致。
5、计算：
以对照溶液配制浓度的对数值与所得溶血磷脂峰面积和的对数值进行线性回归，绘制标准曲线。将供试溶液所得溶血磷脂峰面积和的对数值带入标准曲线，计算溶血磷脂的量。
三、多西他赛含量的测试方法如下：
1、应用反相高效液相色谱原理
试剂采购自TEDIA公司，包括：甲醇(HPLC)、乙腈(HPLC)、乙酸铵(AR)、注射用水。
设备包括高效液相色谱仪-Waterse2695。
2、仪器参数及色谱条件：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；稀释液：甲醇；流速：1.0ml/min；检测波长：232nm；柱温：35℃；进样量：20μl。
3、流动相制备：
0.043mol/L乙酸铵：乙腈＝45:55。
4、操作过程：
精密称取多西他赛对照品20mg置于50ml量瓶中，加甲醇稀释并定容，精密量取1ml上述溶液置于10ml量瓶中，加甲醇稀释并定容，作为对照溶液1；按上述过程，另平行配制1份，作为对照溶液2。供试溶液配制：
精密称取多西他赛脂质体约0.25g置于50ml量瓶中，加1ml水溶解，继续加甲醇稀释并定容至刻度，作为供试溶液1；按上述过程，另平行配制1份，作为供试溶液2。
方法要求：稀释液：进样1针，平衡系统；对照溶液1：进样5针，主峰RSD％＜2％；对照溶液2：进样2针；供试溶液1：进样2针；供试溶液2：进样2针。各谱图中多西他赛主峰的理论塔板数应不低于3000。
鉴别检查：供试溶液的主峰保留时间与对照溶液的主峰保留时间一致。
5、计算：
F＝C对照/A对照C供试＝F*A供试
含量％＝C供试*W平*N稀释/(W供试*B)
C对照：对照品配制浓度；C供试：供试品配制浓度；A对照：对照品主峰面积；A供试：供试品主峰面积；W供试：供试品称样量；N稀释：供试品稀释体积；W平：平均装量；B：标示量。
四、多西他赛磷脂量的测试方法如下：
1、应用正相高效液相色谱原理
试剂采购自TEDIA公司，包括：甲醇(HPLC)、乙腈(HPLC)、异丙醇(HPLC)、注射用水。
设备包括高效液相色谱仪-Waterse2695；蒸发光散射检测器Alltech6000ES。
2、仪器参数及色谱条件：
色谱柱：正相硅胶色谱柱；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；氮气流速：1.8ml/min；蒸发温度：65℃；进样量：10μl。
3、流动相制备：
量取正己烷350ml，异丙醇400ml，甲醇250ml置于烧杯中混合均匀。
4、操作过程：
对照溶液配制：精密称取大豆氢化磷脂对照品5mg,10mg，12.5mg，15mg分别置于50ml量瓶中，加甲醇稀释并定容，作为对照溶液1，对照溶液2，对照溶液3，对照溶液4。
供试溶液配制：称取注射用多西他赛脂质体约0.1g置于100ml量瓶中，加水0.4ml溶解，继续加甲醇稀释并定容至刻度，作为供试溶液1；按上述过程，另平行配制1份，作为供试溶液2。
方法要求：稀释液：进样1针，平衡系统；对照溶液2：进样5针，主峰RSD％＜5％；对照溶液1：进样2针；对照溶液3：进样2针；对照溶液4：进样2针；供试溶液1：进样2针；供试溶液2：进样2针。
鉴别检查：供试溶液的磷脂峰保留时间与对照溶液的磷脂峰保留时间一致。
5、计算：
以对照溶液配制浓度的对数值与所得磷脂峰面积的对数值进行线性回归，绘制标准曲线。将供试溶液所得磷脂峰面积的对数值带入标准曲线，计算磷脂的量。
五、多西他赛脂药比的测试方法如下：
结合多西他赛脂质体测定的磷脂量及含量计算方法，计算公式如下：
六、具体的紫杉烷类药物脂质体的制备方法为：
1、步骤A：
空白脂质体的制备方法，包括薄膜超声法、注入法、逆向蒸发法、熔融法、冷冻干燥法、超声分散法、多相制备法等；具体过程为：将磷脂、附加剂、磷脂酰甘油在热熔条件或加有机溶剂条件下制备带有负电荷的空白脂质体；将带有负电荷的空白脂质体加缓冲液水化，水化方法为冷热交替法，水化后通过高压均质仪(2万psi)和挤出机(100-500nm挤出膜)组合作用，控制空白脂质体的粒径在纳米尺寸(优选平均粒径在130nm以下)，并且粒径均一度小于0.4(优选的粒径均一度在0.1左右)，其中磷脂按重量百分比占体系的1～40％。
步骤A的优选处方为：磷脂13-18g、磷脂酰甘油2g、附加剂2g、有机溶剂30g、缓冲液5.4g、水100g。其中，附加剂包括，胆固醇、维生素E、十八胺、磷酸二鲸蜡脂、大豆油、苋生油或橄榄油等；磷脂包括天然磷脂、半合成磷脂、合成磷脂或其混合物，例如磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、二油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、卵磷脂、大豆磷脂、心磷脂等。磷脂酰甘油的作用是为空白脂质体提供负电荷，在空白脂质体的制备过程中，可以综合考虑成本等因素选择适当的磷脂种类，然后在其内加入部分带有负电荷的磷脂酰甘油，从而使得生成的空白脂质体带负电荷。
冷热交替水化法过程为：将带有负电荷的空白脂质体与缓冲液于水化釜内混合，在真空度为200-500mbr条件下，控制水化釜的温度，使其依次在高温65-70℃下水化半小时，然后降温至低温0-10℃水化半小时，然后在室温25℃条件下静置保持半小时。空白脂质体依次经过高温、低温和室温的过程，有利于提升脂质体磷脂膜的韧性，进而提高脂质体的稳定性。而真空条件下水化，使其能够预先去除空白脂质体内的一些有机溶剂，减少有机溶剂过高会导致脂质体产品不稳定的现象。
2、步骤B：
具体操作过程为：将紫杉烷类药物和正电荷磷脂经有机溶剂溶解；将表面活性剂溶解于水中，注入上述的有机溶剂混合液，搅拌混合，形成带有正电荷的紫杉烷类药物的纳米胶束溶液。
步骤B的优选处方为：紫杉烷类药物1g、正电荷磷脂0.1-0.3g、有机溶剂3-5g、表面活性剂0.01-0.03g、水20-50g。其中，紫杉烷类药物为多西他赛、卡巴他赛、紫杉醇中的一种；正电荷磷脂为DOTA、DOTMP、DOSPA中的一种；表面活性剂为带有正电荷的离子表面活性剂，如十二烷基二甲基溴化铵。带有正电荷的离子表面活性剂能够提高紫杉烷类药物溶解度的同时，为紫杉烷类药物溶液提供正电荷离子，进一步提高了步骤B中正电荷离子的含量，从而有助于提高紫杉烷类药物与空白脂质体的结合，进而提高空白脂质体的载药量。
步骤A或步骤B中，缓冲液可用单糖、双糖、多糖或其混合物配制来保护脂质体，同时还可以添加其他缓冲离子对、抗氧剂、表面活性剂来增强紫杉烷类药物分散性和脂质体的稳定性，如含有组氨酸、缬氨酸、苏氨酸、甘氨酸、丝氨酸、甘露醇、蔗糖、乳糖、葡萄糖、海藻糖、阿拉伯胶、木糖醇、山梨醇、果糖中的一种或几种的缓冲溶液；有机溶剂选自，乙醇、甲醇、丙酮、异丙醇、叔丁醇、氯仿中的一种或几种的混合物。
3、步骤C：
具体操作过程为：将步骤A中得到的带有负电荷的空白脂质体，与步骤B中得到的带有正电荷的紫杉烷类药物悬浊液或溶液，在50-70℃下，100-500rmp下搅拌，体系由浑浊变为透明装液体，经交叉切向流设备进行缓冲液置换后，成品中乙醇的残留量控制在2％(重量分数)以下，经过经0.22μm滤膜过滤除菌，分装、冻干，制得含药脂质体。
本发明中由于步骤A中采用高压均质仪(2万psi)控制空白脂质体的粒径在150nm以下，然后通过挤出机的100-500nm挤出膜作用实现了对粒径均一度的控制，使得粒径均一度降低至0.1，从而使得步骤C中的含药脂质体在经过滤膜过滤除菌操作时，含药脂质体不易造成滤膜堵塞，有效的维护的滤膜设备的持续生产，进而减小了设备维护成本。另外，通过控制空白脂质体的粒径和粒径均一度，使得含药脂质体在体内分布效果更加优越，更易被吸收，并且对于抗肿瘤药物脂质体来说，较小粒径的含药脂质体在体内不易被快速清除，从而使得药物更容易到达肿瘤部位，实现更好的抗肿瘤作用。
实施例1：
步骤A：空白脂质体的处方如下表1所示。
表1空白脂质体处方
将磷脂、磷脂酰甘油、胆固醇加乙醇60℃加热溶解；将海藻糖，甘氨酸溶于水中，用盐酸调ph为6.5，加热至65℃，将上述乙醇溶液注入，经冷热交替法水化后，经高压均质仪和挤出机，将平均粒径控制在150nm以下，粒径均一度控制在0.1左右，得到空白脂质体溶液。空白脂质体的粒径图如图2所示。
步骤B：多西他赛溶液处方如下表2所示。
表2多西他赛溶液处方
多西他赛 1.0g
DOTMP 0.2g
乙醇 3.0g
十二烷基二甲基溴化铵 0.02g
水 30g
将多西他赛和DOTMP溶解于乙醇中；将十二烷基二甲基溴化铵溶解于水中，然后将上述的乙醇溶液注入，在65℃下，100-500rpm下搅拌混合，形成纳米胶束溶液。
步骤C：在步骤B中加入步骤A中制得的空白脂质体溶液，在50℃下，100-500rpm下搅拌，体系由浑浊变透明状液体，经交叉切向流设备进行缓冲液置换后，乙醇的残留量控制在2％以下，经0.22μm滤膜过滤除菌，分装、冻干，制得含药脂质体。含药脂质体的载药量和加速稳定性数据如下表3所示。包裹有多西他赛的脂质体粒径图如图3所示；冻干复融后，含多西他赛的脂质体粒径图如图4所示。
表3含药脂质体载药量和加速稳定性数据
本实施例中，空白脂质体采用高压均质机和挤出机共同作用，使得空白脂质体的粒径在100以下，粒径的均一度在0.1左右，分别测试空白脂质体、含多西他赛药物脂质体及含多西他赛药物脂质体复溶的粒径和粒径均一度，结果如下表4所示。
表4粒径和粒径均一度
试样 粒径(nm) P.I
空白脂质体 82.5 0.108
多西他赛药物脂质体 90.6 0.119
多西他赛药物脂质体复溶 104.2 0.147
P.I：即为脂质体粒径均一度指标。此指标越小，说明均一度越好，粒径分布越窄。
实施例2：
步骤A：空白脂质体的处方如下表5所示。
表5空白脂质体处方
将大豆氢化磷脂、磷脂酰甘油、胆固醇加乙醇60℃加热溶解，得到有机相溶液；将海藻糖，甘氨酸溶于水中，用盐酸调ph为6.5，得到水相溶液；将水相溶液加热至65℃，注入有机相溶液，经冷热交替法水化后，并经高压均质仪和挤出机作用，将平均粒径控制在150nm以下，粒径均一度控制在0.1左右，得到空白脂质体溶液。
步骤B：卡巴他赛溶液处方如下表6所示。
表6卡巴他赛溶液处方
卡巴他赛 1.0g
DOTAP 0.15g
乙醇 3.0g
十二烷基二甲基溴化铵 0.01g
水 20g
将卡巴他赛和DOTAP溶解于乙醇中；将十二烷基二甲基溴化铵溶解于水中，然后将上述的乙醇溶液注入，在65℃下，100-500rpm下搅拌混合，形成纳米胶束溶液。
步骤C：在步骤B中加入步骤A中制得的空白脂质体溶液，在50℃下，100-500rpm下搅拌，体系由浑浊变透明状液体，经交叉切向流设备进行缓冲液置换后，乙醇的残留量控制在2％以下，经0.22μm滤膜过滤除菌，分装、冻干，制得含药脂质体。含药脂质体的载药量和加速稳定性数据如下表7所示。
表7含药脂质体载药量和加速稳定性数据
实施例3：
步骤A：空白脂质体的处方如下表8所示。
表8空白脂质体处方
大豆氢化磷脂 18g
磷脂酰甘油 2g
胆固醇 2g
乙醇 30g
甘氨酸 0.4g
海藻糖 5g
水 100g
将磷脂、磷脂酰甘油、胆固醇加乙醇60℃加热溶解；将海藻糖，甘氨酸溶于水中，用盐酸调ph为6.5，加热至65℃，将上述乙醇溶液注入，经冷热交替法水化后，经高压均质仪和挤出机，将平均粒径控制在150nm以下，粒径均一度控制在0.1左右，得到空白脂质体溶液。
步骤B：紫杉醇溶液处方如下表9所示。
表9紫杉醇溶液处方
紫杉醇 1.0g
DOSPA 0.25g
乙醇 3.0g
十二烷基二甲基溴化铵 0.03g
水 50g
将紫杉醇和DOSPA溶解于乙醇中；将十二烷基二甲基溴化铵溶解于水中，然后将上述的乙醇溶液注入，在65℃下，100-500rpm下搅拌混合，形成纳米胶束溶液。
步骤C：在步骤B中加入步骤A中制得的空白脂质体溶液，在50℃下，100-500rpm下搅拌，体系由浑浊变透明状液体，经交叉切向流设备进行缓冲液置换后，乙醇的残留量控制在2％以下，经0.22μm滤膜过滤除菌，分装、冻干，制得含药脂质体。含药脂质体的载药量和加速稳定性数据如下表10所示。
表10含药脂质体载药量和加速稳定性数据
对比实施例1：
步骤A：空白脂质体的处方如下表11所示。
表11空白脂质体处方
大豆氢化磷脂 16g
胆固醇 2g
乙醇 30g
甘氨酸 0.4g
海藻糖 5g
水 100g
将磷脂、胆固醇加乙醇60℃加热溶解；将海藻糖，甘氨酸溶于水中，用盐酸调ph为6.5，加热至65℃，将上述乙醇溶液注入，经冷热交替法水化后，经高压均质仪均质，将平均粒径控制在150nm以下，得到空白脂质体溶液。
步骤B：多西他赛溶液处方如下表12所示。
表12多西他赛溶液处方
多西他赛 0.6g
乙醇 3.0g
将多西他赛溶解于乙醇中。
步骤C：在步骤B中加入步骤A中制得的空白脂质体溶液，在50℃下，100-500rpm下搅拌，体系由浑浊变透明状液体，经交叉切向流设备进行缓冲液置换后，乙醇的残留量控制在2％以下，经0.22μm滤膜过滤除菌，分装、冻干，制得含药脂质体。含药脂质体的载药量和加速稳定性数据如下表13所示。含多西他赛脂质体冻干复溶粒径图如图5所示。
表13含药脂质体载药量和加速稳定性数据
本实施例中，在保证包封率在95％以上的条件下，多西他赛不能过量，主药过多将会造成包封率下降，既不能满足良好的包封效果，又不能实现载药量的降低，实验所得多西他赛应当在0.6左右，能够实现其包封率大于95％，符合生产要求。通过高压均质方式，多西他赛脂质体复溶的粒径和粒径均一度，结果如下表14所示。
表14多西他赛脂质体复溶粒径和粒径均一度
高压均质方式 粒径(nm) P.I
多西他赛脂质体复溶 110.0 0.370
通过对比表4和表14可知，采用高压均质仪和挤出机组合作用，能够有效降低空白脂质体的粒径均一度，并且多西他赛脂质体复溶的粒径和粒径均一度保持在较窄的范围内，提高了含多西他赛脂质体进入体内后的靶向性，减少了药物进入体内未产生药性作用就被清理的可能，从而提高了紫杉烷类药物在体内的作用稳定性。
通过对比表3和表13可知，在正负电荷的作用下，载药量(脂药比)有明显的下降，单位体积的空白脂质体内包封的紫杉烷类药物体积显著提高，从而达到降低成本的目的，提高了单位体积含药脂质体的药性。同时，在冷热交替水化的作用下，磷脂膜更加稳定，从而使得含药磷脂不易降解，溶血磷脂值显著降低，提高了脂质体的稳定性。
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (10)

1.一种紫杉烷类药物脂质体制备方法，其特征是,所述的方法为：依次制备带有负电荷的空白脂质体、带有正电荷的紫杉烷类药物悬浊液或溶液，将二者混合，混合体系由浑浊状变成透明或半透明状即成。
2.根据权利要求1所述的一种紫杉烷类药物脂质体制备方法，其特征是，所述的方法包括以下步骤：
步骤A、制备带有负电荷的空白脂质体，并将空白脂质体的平均粒径控制在纳米尺寸，粒径均一度控制在0.4以下；
步骤B、制备带有正电荷的紫杉烷类药物溶液或悬浊液；
步骤C、将步骤A中得到的带有负电荷的空白脂质体，与步骤B中得到的带有正电荷的紫杉烷类药物悬浊液或溶液混合，过滤除菌，分装、冻干，制得含药脂质体。
3.根据权利要求2所述的一种紫杉烷类药物脂质体制备方法，其特征是，所述步骤A包括：
将磷脂、附加剂、磷脂酰甘油加有机溶剂热熔，制备得到带有负电荷的空白脂质体；将带有负电荷的空白脂质体加缓冲液水化，水化后通过高压均质仪和挤出机作用，控制空白脂质体的粒径和粒径均一度。
4.根据权利要求3所述的一种紫杉烷类药物脂质体制备方法，其特征是，所述水化过程采用冷热交替法，将带有负电荷的空白脂质体与缓冲液混合，并依次在高温和低温条件下完成水化。
5.根据权利要求4所述的一种紫杉烷类药物脂质体制备方法，其特征是，所述水化过程是在真空度为200-500mbr条件下进行的。
6.根据权利要求2所述的一种紫杉烷类药物脂质体制备方法，其特征是，所述步骤B包括：
将紫杉烷类药物和正电荷磷脂经有机溶剂溶解；将表面活性剂溶解于水中，注入上述的有机溶剂混合液，搅拌混合，形成带有正电荷的紫杉烷类药物的纳米胶束溶液。
7.根据权利要求6所述的一种紫杉烷类药物脂质体制备方法，其特征是，所述正电荷磷脂为DOTAP、DOTMP、DOSPA中的一种，所述表面活性剂为带有正电荷的离子表面活性剂。
8.根据权利要求1至7任意一项所述的一种紫杉烷类药物脂质体制备方法，其特征是，所述紫杉烷类药物为多西他赛、卡巴他赛、紫杉醇中的一种。
9.根据权利要求3至5任意一项所述的一种紫杉烷类药物脂质体制备方法，其特征是，所述有机溶剂为乙醇、甲醇、丙酮、异丙醇、叔丁醇、氯仿中的一种或几种的混合物。
10.根据权利要求3至5任意一项所述的一种紫杉烷类药物脂质体制备方法，其特征是，所述缓冲溶液为含有组氨酸、缬氨酸、苏氨酸、甘氨酸、丝氨酸、甘露醇、蔗糖、乳糖、葡萄糖、海藻糖、阿拉伯胶、木糖醇、山梨醇、果糖中的一种或几种的缓冲溶液。
CN201810582737.7A 2018-06-05 2018-06-05 一种紫杉烷类药物脂质体制备方法 Active CN108721644B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810582737.7A CN108721644B (zh) 2018-06-05 2018-06-05 一种紫杉烷类药物脂质体制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810582737.7A CN108721644B (zh) 2018-06-05 2018-06-05 一种紫杉烷类药物脂质体制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108721644A true CN108721644A (zh) 2018-11-02
CN108721644B CN108721644B (zh) 2021-06-08

Family

ID=63932363

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810582737.7A Active CN108721644B (zh) 2018-06-05 2018-06-05 一种紫杉烷类药物脂质体制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108721644B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112129871A (zh) * 2020-09-04 2020-12-25 斯微(上海)生物科技有限公司 复合磷脂脂质体中dope和m5两种磷脂含量的检测方法

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5415869A (en) * 1993-11-12 1995-05-16 The Research Foundation Of State University Of New York Taxol formulation
US6143321A (en) * 1997-02-06 2000-11-07 Duke University Liposomes containing active agents
CN101209243A (zh) * 2006-12-29 2008-07-02 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 一种脂质体药物及其制备方法
CN101244039A (zh) * 2008-03-20 2008-08-20 江苏先声药物研究有限公司 一种制备难溶性药物脂质体制剂的新方法
CN101933905A (zh) * 2006-08-31 2011-01-05 台湾微脂体股份有限公司 一种运送治疗眼睛药剂的脂质体组合物
CN103622912A (zh) * 2013-12-05 2014-03-12 常州金远药业制造有限公司 盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂及其制备方法
CN103622911A (zh) * 2013-11-19 2014-03-12 常州金远药业制造有限公司 一种难溶性药物脂质体制备方法
CN104447365A (zh) * 2014-11-07 2015-03-25 中国科学院过程工程研究所 一种阳离子脂质分子及其制备方法和用途
CN104814928A (zh) * 2015-04-29 2015-08-05 江西省科学院应用化学研究所 一种载二氢杨梅素三元复合脂质体的制备方法
CN107998372A (zh) * 2017-11-27 2018-05-08 东南大学 一种抗耐药菌的复合纳米制剂及其制备方法

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5415869A (en) * 1993-11-12 1995-05-16 The Research Foundation Of State University Of New York Taxol formulation
US6143321A (en) * 1997-02-06 2000-11-07 Duke University Liposomes containing active agents
CN101933905A (zh) * 2006-08-31 2011-01-05 台湾微脂体股份有限公司 一种运送治疗眼睛药剂的脂质体组合物
CN101209243A (zh) * 2006-12-29 2008-07-02 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 一种脂质体药物及其制备方法
CN101244039A (zh) * 2008-03-20 2008-08-20 江苏先声药物研究有限公司 一种制备难溶性药物脂质体制剂的新方法
CN103622911A (zh) * 2013-11-19 2014-03-12 常州金远药业制造有限公司 一种难溶性药物脂质体制备方法
CN103622912A (zh) * 2013-12-05 2014-03-12 常州金远药业制造有限公司 盐酸多柔比星-多西他赛或紫杉醇脂质体制剂及其制备方法
CN104447365A (zh) * 2014-11-07 2015-03-25 中国科学院过程工程研究所 一种阳离子脂质分子及其制备方法和用途
CN104814928A (zh) * 2015-04-29 2015-08-05 江西省科学院应用化学研究所 一种载二氢杨梅素三元复合脂质体的制备方法
CN107998372A (zh) * 2017-11-27 2018-05-08 东南大学 一种抗耐药菌的复合纳米制剂及其制备方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ŠTĚPÁN KOUDELKA等: "Liposomal paclitaxel formulations", 《JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE》 *
YOGITA P. PATIL等: "Novel methods for liposome preparation", 《CHEMISTRY AND PHYSICS OF LIPIDS》 *
孙霁，等: "阴离子脂质体-阳离子脂质体复合物介导的基因转染", 《药学实践杂志》 *
杨艳芳，等: "粒径与表面电荷影响脂质体体内药物靶向递送的研究进展", 《药学学报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112129871A (zh) * 2020-09-04 2020-12-25 斯微(上海)生物科技有限公司 复合磷脂脂质体中dope和m5两种磷脂含量的检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108721644B (zh) 2021-06-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102271659B (zh) 伊立替康或盐酸伊立替康脂质体及其制备方法
CN111973557B (zh) 一种多西他赛脂质体、其制备方法及应用
EP1838286B1 (de) Herstellung von lipidbasierten nanopartikeln unter einsatz einer dualen asymmetrischen zentrifuge
CN103120645B (zh) 伊立替康或盐酸伊立替康脂质体及其制备方法
JP2002505307A (ja) 薬学的組成物およびその使用
CN112773766B (zh) 一种用于肿瘤治疗的脂质体递送系统及其制备方法与应用
CN104800171B (zh) 一种灯盏花素内相凝胶化多囊脂质体冻干粉及其制备方法
CN107551277A (zh) 用于包载抗肿瘤药物的pH敏感靶向磷脂聚组氨酸纳米粒
Dwivedi et al. Review on preparation and characterization of liposomes with application
CN106798725A (zh) 一种虫草素纳米脂质体及其制备方法与抗肿瘤活性应用
CN103622911B (zh) 一种难溶性药物脂质体制备方法
CN105030692B (zh) 一种硫酸头孢喹诺的肺靶向plga微球制剂及其制备方法
CN107137353A (zh) 一种注射用卡巴他赛脂质体剂型及其制备方法
CN104587446A (zh) 温度敏感性脂肽、含该脂肽的脂质体及其应用
CN108721644A (zh) 一种紫杉烷类药物脂质体制备方法
Bangale et al. Stealth liposomes: a novel approach of targeted drug delivery in cancer therapy
CN101874781A (zh) 疏水改性葡聚糖修饰的长循环脂质体及其制备方法
Goswami et al. A brief review on liposomal drug delivery system
Zhang et al. Contrastive Studies of Cytarabine/Daunorubicin Dual-Loaded Liposomes Prepared by pH Gradient and Cu 2+ Gradient Method
CN106491559B (zh) 一种表面迭层自组装盐酸多柔比星共聚物纳米粒的制备方法
CN105267147B (zh) 一种注射用奥沙利铂前体脂质体的制备方法
CN111329838A (zh) 一种紫杉醇脂质体药物组合物及其制备方法
CN103536533A (zh) 一种水溶性药物脂质体制备方法
CN114652682B (zh) 新鱼腥草素钠与顺铂共载药酸性敏感脂质体制剂及其制备方法
CN108338973B (zh) 一种脂质体的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant