CN108721252A

CN108721252A - 一种阿戈美拉汀长效注射缓释微球及制备方法和应用

Info

Publication number: CN108721252A
Application number: CN201810785207.2A
Authority: CN
Inventors: 唐星; 何海冰; 张宇; 尹恬; 苟靖欣; 张红娟; 张倩颖
Original assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Current assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Priority date: 2018-07-17
Filing date: 2018-07-17
Publication date: 2018-11-02

Abstract

本发明提供了一种阿戈美拉汀长效注射缓释微球及制备方法和应用。所述的缓释微球含有阿戈美拉汀和生物可降解聚合物PLGA。本发明采用乳化溶剂挥发法制备了阿戈美拉汀缓释微球，获得的微球粒径为20～100μm，载药量为10%～40%，包封率在80%以上；初步稳定性试验证明本制剂在4℃储存稳定性良好；同时，动物实验证明，该制剂可以实现体内释放无突释、血药浓度平稳，并且可以维持血药浓度在5ng/mL以上30天以上。

Description

一种阿戈美拉汀长效注射缓释微球及制备方法和应用

技术领域：

本发明涉及药品及其制备领域，具体涉及一种可生物降解的阿戈美拉汀长效注射缓释微球及其制备方法和应用。

背景技术：

抑郁症是一种常见的精神类疾病，具有高患病率、高复发率、高致残率、高自杀率的特点。由于经济社会的迅速发展，人们生活节奏的加快以及社会竞争日趋激烈，抑郁症的患病率逐渐增高。根据WHO的最新报告，预计到2020年，抑郁症将成为导致人类死亡和致残的第二大疾病。据统计，全球约有3.5亿人目前正遭受着抑郁症的困扰，其中有10％～15％的患者具有自杀的危险。研究表明抑郁症的一些临床症状与患者紊乱的生物节律有关。许多抑郁症患者的昼夜节律减弱，表现为24小时内的体温和褪黑素水平异常。此外，还有研究表明有40％～60％的MDD患者存在睡眠障碍。

阿戈美拉汀(Agomelatine，AGM)是全球首个褪黑素受体激动剂类抗抑郁药物，于2009年由法国施维雅公司研发上市，是抗精神病类又一个重磅炸弹级药物。该药是褪黑素受体(MT1和MT2)激动剂和5-羟色胺2C(5-HT_2C)受体拮抗剂，主要通过两者的协同作用使抑郁症患者紊乱的生物节律恢复同步化，从而实现抗抑郁的效果。阿戈美拉汀起效快，具有抗抑郁、抗焦虑、调整睡眠节律以及调节生物钟的作用，可在不影响白天生物节律的情况下改善夜间睡眠状况，该药较其他抗抑郁药物不良反应更少，安全性更高，没有撤药反应，为临床治疗MDD提供了新方法。

阿戈美拉汀目前上市的品种只有普通片剂，规格为25mg/d。临床疗效确切，不良反应少，但是阿戈美拉汀片剂仍然具有一些缺陷严重地限制了它的临床应用。第一、由于阿戈美拉汀具有严重的首过效应，阿戈美拉汀口服片剂生物利用度很低，仅为3％-4％。同时，阿戈美拉汀表现为不同区域人群个体差异较大。第二、在临床上会导致部分患者可逆性的转氨酶增高，即肝毒性较大，临床使用时需要进行肝功能监测。第三、市售片剂处方中含有乳糖，这使得有罕见的遗传性半乳糖不耐受、Lapp乳糖酶缺乏或者葡萄糖半乳糖吸收不良的患者不能使用本品。第四、阿戈美拉汀片剂需要每天服用，但是对于抑郁症患者而言，能够按时有规律地服药较为困难，因此，在治疗过程中，依从性低，经常漏服拒服药物甚至中断治疗，这对患者会产生较大的安全隐患。

为了提高阿戈美拉汀的生物利用度，专利CN106420597A提出了阿戈美拉汀环糊精水溶液，专利CN102824327A和CN102949376A提出了阿戈美拉汀肠溶片和肠溶胶囊的专利，但是以上专利虽然提出了与原研制剂不同的剂型，但是生物利用度改进程度不足，且在制剂稳定性、患者依存性等方面并没有显著的改善。

为了减小制剂的肝毒性等不良反应，专利US2005013107A1,US20070134331A1提出了阿戈美拉汀口腔分散片和舌下给药。但是，口腔黏膜给药会对患者的口腔黏膜产生刺激性，因此依从性不好。专利CN105194514A和CN105213938A提出了含有中药提取物成分的阿戈美拉汀缓释胶囊和缓释片，以上专利虽然对阿戈美拉汀的肝毒性等不良反应具有一定程度的缓解，但是在药物生物利用度，制剂稳定性以及患者依存性等方面并没有显著的改善。

为了延长药物的作用时间，实现缓释的效果，提高患者的依存性，专利CN103830206A提出了阿戈美拉汀透皮制剂的构想，但是该制剂患者依存性较差，且在生物利用度改进并不明显；CN103040750A提出了阿戈美拉汀脂质体固体制剂，但是基于脂质体技术本身难以放大等因素，可行性不足。

研究显示作为一种常见的慢性疾病，抑郁症的推荐治疗周期一般至少是一年才能防止复发。但是，由于心理问题和耐受性问题的影响，有40％的抑郁症患者在接受治疗的一个月之内就停止了治疗，有56％的患者在接受治疗的4个月之内就中断了治疗。因此，开发一种新的耐受性和顺应性更好的制剂是很有必要的。

发明内容：

发明目的：

本发明的目的在于提供一种肌肉注射型阿戈美拉汀长效注射缓释微球及制备方法和应用，以克服阿戈美拉汀市售制剂首过效应强、生物利用度低、肝毒性大以及依存性差的问题。该制剂外观均一，表面光滑圆整，粒度分布均匀，载药量和包封率高，体内外持续释放30天以上，累计释放达90％以上，体内释放均一稳定，可较长时间维持有效血药浓度，给药一次可以维持一个月治疗之久，注射无刺激性，不需要临床肝功能监测，安全性好，给药频率大大降低，患者顺应性好。

技术方案：

为了实现本发明的目的，提供了如下实施方案。

一种阿戈美拉汀长效注射缓释微球，该缓释微球包含阿戈美拉汀和丙交酯-乙交酯共聚物，阿戈美拉汀与PLGA的投料重量比为1:1.5～6。

PLGA是生物可降解的聚合物，PLGA的分子量为30000～150000道尔顿。

PLGA中乳酸和羟基乙酸摩尔比例为15:85～85:15。

PLGA是羧基封端、酯封端、羟基封端。

缓释微球粒径控制在20～100μm。

一种阿戈美拉汀长效注射缓释微球的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)阿戈美拉汀和PLGA重量比为1:1.5～6的混合物溶于有机溶剂中，得到阿戈美拉汀与PLGA有机溶液；有机相中PLGA浓度在50mg/ml～250mg/ml；

(2)将步骤(1)中的阿戈美拉汀与PLGA有机溶液迅速倒入聚乙烯醇溶液中经高速剪切乳化得到o/w乳液，将o/w乳液用4倍体积蒸馏水稀释后，常压搅拌挥去有机溶剂固化成微球或者减压蒸馏除去有机溶剂固化成微球；

(3)将步骤(2)所得微球用去离子水反复洗涤多次除去多余的聚乙烯醇，收集缓释微球，冷冻干燥后进行收集，即得阿戈美拉汀-PLGA缓释微球。

步骤(1)中的有机溶剂选择二氯甲烷、乙酸乙酯或三氯甲烷。

步骤(2)中所用聚乙烯醇溶液浓度为0.5％～2％；步骤(2)中高速剪切转速为2000～8000rpm，剪切时间1～2min；

步骤(3)中缓释微球的收集方式可选自离心收集方式或过筛收集方式。

所述的阿戈美拉汀长效注射缓释微球用于制备抗抑郁制剂的应用。

优点及效果：

本发明具有以下优点和有益效果：

本发明的阿戈美拉汀缓释微球型长效注射剂采用乳化溶剂挥发法制备。采用生物可降解的高分材料包裹药物制成注射用缓释微球制剂。给药后通过微球内药物的扩散和聚合物的降解来控制药物的释放，达到长效平稳缓释的目的。实验表明所得制剂具有较高的载药量，注射后药物可立即释放，在体内无明显的突释，血药浓度平稳，可以维持30天以上，减少了给药次数，提高了患者的顺应性，不需要临床用药监测，提高了制剂的安全性和临床疗效。同时，该制剂的生物利用度是等剂量口服制剂的3-5倍，即该制剂显著提高了药物的生物利用度具重要的药剂学意义。

本发明采用乳化溶剂挥发法制备了阿戈美拉汀缓释微球，获得的微球粒径为20～100μm，载药量为10％～40％，包封率在80％以上；初步稳定性试验证明本制剂在4℃储存稳定性良好；同时，动物实验证明，该制剂可以实现体内释放无突释、血药浓度平稳，并且可以维持血药浓度在5ng/mL以上30天以上。

附图说明：

图1是阿戈美拉汀缓释微球给药0-35d药时曲线；

图2是阿戈美拉汀口服溶液剂的药时曲线；

图3是阿戈美拉汀缓释微球扫描电镜图片；

图4是阿戈美拉汀缓释微球粒径测定结果；

图5是实施例1的阿戈美拉汀缓释微球的体外释放曲线；

图6是实施例12、13和14的阿戈美拉汀缓释微球的体外释放曲线。

具体实施方式：

下面结合附图对本发明做进一步的说明：

为了满足抑郁症的临床治疗需求，解决阿戈美拉汀临床应用剂型上的不足，本发明人经过大量的研究发明了阿戈美拉汀肌肉注射缓释微球，将药物包埋于生物可降解、组织相容性良好的聚合物内，在体内可以实现30天以上的缓释效果，减少了给药次数，提高了患者的顺应性；同时，该制剂降低了药物的肝毒性，增加了患者的安全性；此外，肌注型缓释微球首过效应大大降低，提高了制剂的生物利用度减小了个体差异。总的来说，阿戈美拉汀缓释微球具有重大的临床意义和经济学意义。

所述的阿戈美拉汀长效注射缓释微球，PLGA是生物可降解的聚合物，PLGA的分子量为30000～150000道尔顿。

所述的阿戈美拉汀长效注射缓释微球，PLGA中乳酸和羟基乙酸摩尔比例为15:85～85:15。

所述的阿戈美拉汀长效注射缓释微球，PLGA是羧基封端、酯封端、羟基封端。

所述的阿戈美拉汀长效注射缓释微球，缓释微球粒径控制在20～100μm。

(1)阿戈美拉汀和PLGA重量比为1:1.5～6的混合物溶于有机溶剂中，得到阿戈美拉汀与PLGA有机溶液；所述的有机溶剂一般选择二氯甲烷、乙酸乙酯或三氯甲烷。有机相中PLGA浓度范围在50mg/ml～250mg/ml之间。

(3)将步骤(2)所得微球用去离子水反复洗涤多次除去多余的聚乙烯醇，收集缓释微球，冷冻干燥即得。

发明将结合下述实施例或试验例做进一步详细阐述，但应当理解，下述实施例仅用于阐述和解释本发明，而并不限制本发明的范围。

应当理解，对于本发明中提及但没有详细说明的方法、步骤、材料等，普通技术人员可以采用本领域中熟知的相应方法、步骤、材料等，或者按照本领域的常规知识和技术获得。

实施例1：阿戈美拉汀微球的制备；

称取300mg PLGA，分子量70000道尔顿，129mg阿戈美拉汀，溶于1.5mL二氯甲烷中形成有机相。PLGA的乳酸和羟基乙酸的摩尔比例为75:25，所述PLGA为羧基封端，有机相中PLGA浓度在200mg/ml；将有机相迅速倒入至30mL的1％聚乙烯醇(PVA)溶液中，4000rpm高速剪切2min形成o/w乳液。用4倍体积水稀释后，常压搅拌4小时挥去有机溶剂固化微球。用去离子水洗涤多次出去PVA后，离心收集微球，冷冻干燥即得阿戈美拉汀-PLGA缓释微球。

表1实施例1处方

实施例2～6不同理论载药量微球的制备：

表2实施例2～6理论载药量

实施例2～6具体实施方式为：称300mgPLGA，分子量50000道尔顿，PLGA的乳酸和羟基乙酸的摩尔比例为85:15，所述PLGA为酯封端，阿戈美拉汀的称量量分别为50mg、75mg、100mg、129mg、162mg，溶于1.5mL乙酸乙酯中形成有机相，有机相中PLGA浓度在200mg/ml。将有机相迅速倒入30mL的0.5％PVA溶液中，8000rpm高速剪切1min形成o/w乳液。用4倍体积水稀释后，常压搅拌4小时挥去有机溶剂固化微球。用去离子水洗涤多次除去PVA后，过筛收集微球，冷冻干燥即得阿戈美拉汀-PLGA缓释微球。最后得到微球的粒径、载药量和包封率情况如下表：

表3实施例2～6所得实验结果

有以上结果可知投药量不同其载药量不同，但是微球的粒径影响不显著。

实施例7～11不同分子量PLGA制备微球：

表4实施例7～11的PLGA分子量

实施例7～11的具体实施方式为：称取75mgPLGA，PLGA的乳酸和羟基乙酸的摩尔比例为50:50，所述PLGA为羟基封端，分子量分别为30000、50000、70000、100000、134000道尔顿的PLGA，阿戈美拉汀称取129mg，溶于1.5mL乙酸乙酯中形成有机相，有机相中PLGA浓度在50mg/ml。将有机相迅速倒入30mL的2％PVA溶液中，2000rpm高速剪切2min形成o/w乳液。用4倍体积水稀释后，常压搅拌4小时，挥去有机溶剂固化微球。用去离子水洗涤多次除去PVA后，离心收集微球，冷冻干燥即得阿戈美拉汀-PLGA缓释微球。最后得到微球的粒径、载药量和包封率情况如下表：

表5实施例7～11所得实验结果

其中，D10：10％的粒径大小是在这个数量以下；D50：50％的粒径大小在这个数值以下；D90：90％的粒径大小在这个数值以下；span表示跨距。

有以上结果可知，PLGA的分子量对其粒径、载药量和包封率影响较大。分子量越大，粒径越大，载药量和包封率越大。

实施例12-14不同粒径微球的制备：

微球的粒径对微球的体内外释放，具有重要的影响。本发明采用控制乳化速度的方法来获得不同粒径的微球，通过微球的粒径来控制微球的体内外释放速率。

表6实施例12～14剪切转速

例12～14具体实施方式为：称取300mgPLGA，PLGA的乳酸和羟基乙酸的摩尔比例为15:85，200mg阿戈美拉汀，所述PLGA为羧基封端，PLGA的分子量为100000道尔顿，溶于1.2mL三氯甲烷中形成有机相，有机相中PLGA浓度在250mg/ml。将有机相迅速倒入30mL的1％PVA溶液中，分别以4000rpm、5000rpm、6000rpm高速剪切2min形成o/w乳液。用4倍体积水稀释后，常压搅拌4小时挥去有机溶剂固化微球。用去离子水洗涤多次除去PVA后，离心收集微球，冷冻干燥即得。最后得到微球的粒径、载药量和包封率情况如下表：

表7实施例12-14所得实验结果

由试验结果可知，转速不同，所得微球粒径不同，但是载药量和包封率变化不大。

实施例15～17药动试验微球的制备：

除搅拌转速和投药量不同外，其他制备方式按照实施例1的制备方法制备微球，得微球制备参数和所得微球参数如表8：

表8实施例15～17处方

实施例18本发明制备的阿戈美拉汀缓释微球的药动学分析；

对实施例15-17的处方进行药动实验，以10mg/kg的剂量(以阿戈美拉汀计)对SD大鼠(体重大约是200g)的后腿股二头肌进行肌肉注射。对受试大鼠按照预定的时间点眼后静脉丛取血，用LC-MS/MS法测定大鼠血浆汇总阿戈美拉汀的血药浓度。

药动学实验结果如图1所示。图1为阿戈美拉汀缓释微球给药0-35d药时曲线；由图1的药时曲线可以看出，本发明的实施例16和实施例17的阿戈美拉汀缓释微球在体内基本上没有突释，可以缓慢维持血药浓度达30天以上。

自制阿戈美拉汀口服溶液剂，以2.6mg/kg的剂量口服给药，对受试大鼠按照预定的时间点眼后静脉丛取血，用LC-MS/MS法测定大鼠血浆汇总阿戈美拉汀的血药浓度。得药时如图2。表9为药动学实验结果。

表9药动参数结果

其中，AUC(0-t)：0到t时刻的药时曲线面积；AUC(0-∞)：0到∞时的药时曲线面积；

AUC(0-24h)：0到24h的药时曲线面积；T1/2：药物半衰期；Cmax：峰浓度；Tmax：达峰时间。

由药动参数结果可知，肌肉注射阿戈美拉汀PLGA微球后，血药浓度迅速达到峰浓度(实施例15，实施例16和实施例17分别为109.5，37.4和20.3ng/mL)，然后血药浓度缓慢下降，30d后血药浓度下降至5ng/mL以下，表明阿戈美拉汀PLGA微球可以在体内缓释达30天；同时，阿戈美拉汀PLGA微球的半衰期分别为96.5，99.6和178.4h，是口服制剂的6.3，6.6和11.8倍，生物利用度分别是同等剂量口服混悬剂的4.1，4.3和3.1倍，表明阿戈美拉汀PLGA微球可以显著延长药物的半衰期，提高药物的生物利用度。

阿戈美拉汀缓释微球的特性测试：

初步稳定性试验证明本制剂在4℃储存稳定性良好；将上述实施例制备出的阿戈美拉汀缓释微球进行扫描电镜分析，如图3所示，可见微球表面光滑圆整，粒径分布均匀。

如图4所示，本发明实施例1的微球粒径主要分布在20～100μm，而且根据表10可以看出，大部分主要分布在45～75微米之间，中位粒径(D50)是50.36微米，体积平均径为52.50微米，面积平均径是19.08微米，遮光率是1.64％，长跨度1.370，度平均径0.880微米比表面积116.4m2/kg，拟合残差1.108％。

表10实施例1的阿戈美拉汀缓释微球粒径含量分布

载药量和包封率：

精密称取上述实施例制备出的阿戈美拉汀缓释微球制剂10mg置于50mL的容量瓶中，加入1mL乙腈超声30s溶解微球，加入乙腈定容至刻度，混匀，再取2mL至10mL的容量瓶中用乙腈定容至刻度，混匀，过0.45μm的有机膜，用高效液相色谱法HPLC测定含量。按照下式计算载药量(DL)和包封率(FE)。

体外释放考察：

本发明采用微球类制剂最常用的直接释放法，即将微球制剂放在释放介质中测定其体外释放情况。释放度测定条件为：37℃，100rpm，水浴摇床，释放介质为0.5％SDS+0.02％NaN₃，将10mg的微球放入10mL的释放介质中，在预定的时间点，离心取上清，过0.45μm的膜，HPLC测定含量，并补充等体积的释放介质。计算微球的累计释放量。

测定结果：如图5所示，对实施例1的微球进行了体外释放试验，可知在开始的24h阿戈美拉汀释放了7.35％，在之后的时间，药物释放缓慢，在3个月的时间内累计释放量量为88.33％。

实施例12～14的体外释放结果：如图6所示，实验结果可知粒径对微球的体外释放具有重要的影响，粒径越大，突释越小，释放越缓慢。

综上所述，本发明的阿戈美拉汀缓释微球长效注射剂可以显著提高药物的半衰期，并且可以实现体内缓释30天的效果，释放过程平稳，无明显的突释现象，实现了临床上一月给药一次的治疗方案。

Claims

1.一种阿戈美拉汀长效注射缓释微球，其特征在于：该缓释微球包含阿戈美拉汀和丙交酯-乙交酯共聚物，阿戈美拉汀与PLGA的投料重量比为1:1.5～6。

2.根据权利要求1所述的阿戈美拉汀长效注射缓释微球，其特征在于：PLGA是生物可降解的聚合物，PLGA的分子量为30000～150000道尔顿。

3.根据权利要求1或2所述的阿戈美拉汀长效注射缓释微球，其特征在于：PLGA中乳酸和羟基乙酸摩尔比例为15:85~85:15。

4.根据权利要求1或2所述的阿戈美拉汀长效注射缓释微球，其特征在于：PLGA是羧基封端、酯封端、羟基封端。

5.根据权利要求1或2所述的阿戈美拉汀长效注射缓释微球，其特征在于：缓释微球粒径控制在20～100μm。

6.一种阿戈美拉汀长效注射缓释微球的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：

（1）阿戈美拉汀和PLGA重量比为1:1.5～6的混合物溶于有机溶剂中，得到阿戈美拉汀与PLGA有机溶液；有机相中PLGA浓度在50mg/ml~250mg/ml；

（2）将步骤（1）中的阿戈美拉汀与PLGA有机溶液迅速倒入聚乙烯醇溶液中经高速剪切乳化得到o/w乳液，将o/w乳液用4倍体积蒸馏水稀释后，常压搅拌挥去有机溶剂固化成微球或者减压蒸馏除去有机溶剂固化成微球；

（3）将步骤（2）所得微球用去离子水反复洗涤多次除去多余的聚乙烯醇，收集缓释微球，冷冻干燥后进行收集，即得阿戈美拉汀-PLGA缓释微球。

7.根据权利要求6所述的阿戈美拉汀长效注射缓释微球的制备方法，其特征在于：步骤（1）中的有机溶剂选择二氯甲烷、乙酸乙酯或三氯甲烷。

8.根据权利要求6所述的阿戈美拉汀长效注射缓释微球的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所用聚乙烯醇溶液浓度为0.5%～2%；步骤（2）中高速剪切转速为2000～8000 rpm，剪切时间1～2 min。

9.根据权利要求6所述的阿戈美拉汀长效注射缓释微球的制备方法，其特征在于：步骤（3）中缓释微球的收集方式可选自离心收集方式或过筛收集方式。

10.如权利要求1~5任一所述的阿戈美拉汀长效注射缓释微球用于制备抗抑郁制剂的应用。