CN108714215A - 一种口腔喷剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物技术领域，涉及一种口腔喷剂及其制备方法和应用。本发明中用于制备口腔喷剂的组合物按质量份计包括以下组分：变异链球菌卵黄抗体2～5份，牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体1～5份，幽门螺杆菌卵黄抗体1～4份。本发明将变异链球菌，牙龈卟啉单胞菌和幽门螺杆菌制备为卵黄抗体用于防治口腔疾病中，制备的口腔喷剂有效防治口腔疾病、增加机体抗菌、抵病毒的能力，且不会破坏口腔环境、增加口腔细菌的抗药性。

Description

一种口腔喷剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种口腔喷剂及其制备方法和应用。
背景技术
口腔疾病中龋齿被世界卫生组织WHO列为与肿瘤、心血管疾病并列的三大危害人类最严重的疾病，我国12岁以下青少年龋齿率高达80％。幽门螺杆菌和致龋菌同属微需氧菌，二者相辅相成菌集粘附在牙菌斑上，二者具有感染的普遍性和隐蔽性、发病的家庭性和聚集性，在世界各国都有很高的感染率。
变异链球菌，英文名streptococcus mutans，是龋齿的病原菌。变异链球菌与龋齿的关系主要是：①能在牙面上形成水不溶性的多糖类，牢固地黏着在牙面上；②在同样pH条件下，变异链球菌比血链球菌和乳酸杆菌等能溶出更多的钙；③变异链球菌能使蔗糖变为葡聚糖，并使葡萄糖几乎全部变为乳酸。变异链球菌是龋齿最主要的病原菌，但不是唯一的，其他产酸菌也能参与龋齿的发生。
幽门螺杆菌，英文名Helicobacter pylori，简称Hp。幽门螺杆菌是一种经口传播的感染率、传染性很强的致病菌。Hp是一种经口传播的传染病，口腔Hp是胃Hp的重要贮存库。幽门螺杆菌对人体健康的损害是重大的：是诱发胃癌的第一类致癌；90％的十二指肠溃疡和80％的胃溃疡，由幽门螺杆菌感染导致。现有的医学方法采用大剂量多种抗生素同时服用杀灭幽门螺杆菌。现有技术的缺点是：1.杀灭大量有益菌，易导致疾病反复发作。2.大剂量多种抗生素的服用，增加了幽门螺杆菌的抗药性，细菌产生耐药性使原本有效的抗生素的治疗效果降低或丧失，增加了患者疾病的治疗难度和医疗成本。
慢性牙周炎(CP)也是最为常见的一类牙周病。目前全球分别约有44％～57％和10％的成人患有中度和重度CP，并且已成为成人失牙的主要原因。CP是一种感染性疾病，牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis，P.g)是CP最主要的致病菌之一。
因此，口腔卫生及其重要，而口腔卫生的护理，最主要的就是使用牙膏、漱口水之类的产品，现有的口腔护理产品，大多添加消毒剂来治理口腔疾病，但是经常使用会增加口腔细菌的抗药性，破坏口腔环境。现有技术口腔喷剂和漱口剂是常用的口腔消毒剂，现有的喷剂功能是治疗口腔疾病；现有的漱口剂功能是治疗齿龈、粘膜疾病。有的中药喷剂添加消毒剂，如百里百酚等，缺点是增加了口腔细菌的抗药性，破坏了口腔环境。
因此发明一种不仅仅能有效防治口腔疾病又具有预防胃部疾病和心血管系统性疾病的口腔喷剂是具有十分重要的意义的。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种防治口腔疾病的组合物，该组合物应用在防治口腔疾病的产品中能有效预防和治疗口腔疾病。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
一种防治口腔疾病的组合物，按质量份计包括以下组分：变异链球菌卵黄抗体2～5份，牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体1～5份，幽门螺杆菌卵黄抗体1～4份。
卵黄免疫球蛋白(Yolk Immunoglobulin,IgY)，亦称卵黄抗体，是富集在禽类卵黄中的活性抗体分子，因在抗菌、抗病毒方面的优良特性。
变异链球菌(streptococcus mutans)是龋齿的病原菌。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是一种经口传播的感染率、传染性很强的致病菌。口腔Hp是胃Hp的重要贮存库。幽门螺杆菌对人体健康的损害是重大的：是诱发胃癌的第一类致癌；90％的十二指肠溃疡和80％的胃溃疡，由幽门螺杆菌感染导致。
牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis，P.g)是CP最主要的致病菌之一。慢性牙周炎的危害己不仅仅局限于口腔，还与一些全身系统性疾病密切相关，牙周致病菌P.g入血后黏附和侵入血管内皮所引起的局部炎症反应，可能加速CVD发生发展。
心血管系统疾病(CVD)的病理基础是动脉粥样硬化(AS)以及在A S斑块破裂基础上形成的血栓。目前，AS的发生确切机制尚不清楚，但由各种致病因素所引起的血管内皮功能损害及多种炎性细胞因子过度释放的炎症学说已被广泛接受。所以在有利于口腔患者卫生健康的前提下进行用药，也有益于预防动脉粥样硬化性心血管疾病。
本发明将变异链球菌，牙龈卟啉单胞菌和幽门螺杆菌制备为卵黄抗体用于防治口腔疾病中，在能预防和治疗口腔龋齿、慢性牙周炎、口臭等口腔疾病的同时还能起到预防胃部疾病和心血管系统性疾病的功效。
进一步，所述组合物还包括鱼腥草提取物、山银花提取物、辅料和水介质。
鱼腥草是中国药典收录的草药，鱼腥草味辛，性寒凉，归肺经。能清热解毒、消肿疗疮、利尿除湿、清热止痢、健胃消食，用治实热、热毒、湿邪、疾热为患的肺痈、疮疡肿毒、痔疮便血、脾胃积热等。现代药理实验表明，鱼腥草具有抗菌、抗病毒、提高机体免疫力、利尿等作用。
山银花是忍冬科植物灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬或黄褐毛忍冬的干燥花蕾或带初开的花。其性甘，寒，归肺、心、胃经，功能主治清热解毒，疏散风热。用于痈肿疗疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温病发热。
山银花与鱼腥草一起清热解毒，痈肿疗疮效果更佳，在抗菌、抵病毒同时提高机体免疫力。
进一步，所述鱼腥草提取物、山银花提取物与变异链球菌卵黄抗体的质量比为0.5～5：0.5～3：2～5。
作为一种优选，所述鱼腥草提取物、山银花提取物与变异链球菌卵黄抗体的质量比为0.5～3：0.5～2：2～5。
进一步，所述辅料包括腊梅精油、山梨醇；所述腊梅精油，山梨醇与变异链球菌卵黄抗体的质量比为0.1～1：1～3：2～5。
作为一种优选，所述腊梅精油为腊梅花精油。
腊梅不仅是观赏佳品，而且还具有药用价值。腊梅花性温无毒，能解热生津，舒郁开胃，凉血解毒，可治胸闷、咳嗽、烫伤、咽喉肿痛等。叶可治咳嗽、气喘、胸肋疼痛。根和茎有祛风理气、活血解毒之功，能治跌打损伤、腰酸背痛、镇咳止喘、风湿性关节炎等。
腊梅精油的主要成分是烯径类，却以萜类居多。而萜类化合物通常具有提神、抗菌消炎和镇痛等作用，目前腊梅精油药品主要用于清热解毒、防治感冒、防暑解暑等。而腊梅花精油中具有较多药用成分。如石竹烯、香橙稀等对皮肤炎症及消化系统溃疡有较好的疗效，石竹烯还有一定平喘作用，挥发性醇类化合物一般具有令人兴奋和调和性的气味，也具有抗腐败、抗滤过性病毒等特性，如芳樟醇、香叶醇和橙花叔醇都具有玫瑰花香，杉木醇具有温和淡甜的木香香气，杜松醇在促进人体荷尔蒙分泌、提高甲状腺的渗透等方面起着重要作用。此外，β-榄香烯具有较好的抗肿瘤活性，并能增强宿主免疫功能。
作为一种优选，所述腊梅精油，山梨醇与变异链球菌卵黄抗体的质量比为0.1～1：1～2：2～5。
本发明的目的之二在于提供一种利用上述的组合物制备的防治口腔疾病的产品，所述产品包括口腔喷剂、漱口液、含片、口香糖和牙膏。
本发明的目的之三在于提供一种防治口腔疾病的口腔喷剂，按质量份计包括以下组分：变异链球菌卵黄抗体2～5份，牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体1～5份，幽门螺杆菌卵黄抗体1～4份，鱼腥草提取物0.5～5份，山银花提取物0.5～3份，腊梅精油0.1～1份，山梨醇1～3份和水介质。
本发明提供的口腔喷剂变异链球菌卵黄抗体，牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体和幽门螺杆菌卵黄抗体与鱼腥草提取物、山银花提取物和腊梅精油一起能起到有效防治口腔疾病、增加机体抗菌、抵病毒的能力，且不会破坏口腔环境、增加口腔细菌的抗药性。
进一步，所述口腔喷剂按质量份计包括以下组分：变异链球菌卵黄抗体2～4份，牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体1～4份，幽门螺杆菌卵黄抗体2～4份，鱼腥草提取物0.5～3份，山银花提取物0.5～2份，腊梅精油0.1～1份，山梨醇1～3份和水介质。
作为一种优选，所述口腔喷剂按质量份计包括以下组分：变异链球菌卵黄抗体2份，牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体1.5份，幽门螺杆菌卵黄抗体2.5份，鱼腥草提取物1.5份，山银花提取物1份，腊梅精油0.3份，山梨醇2份和水介质。
本发明的目的还在于提供一种上述口腔喷剂的制备方法，包括以下步骤：
1)卵黄抗体的制备：分别以变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和幽门螺杆菌作为免疫原免疫产蛋鸡，三次免疫后取产蛋鸡的鸡蛋中卵黄液，分别提取卵黄液中卵黄抗体，得变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和幽门螺杆菌的卵黄抗体；
2)按质量份将变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和幽门螺杆菌的卵黄抗体混合，得卵黄抗体混合液；
3)将按质量份将鱼腥草提取物、山银花提取物、腊梅精油和山梨醇加入到灭菌水中充分混合，得混合物；
4)将步骤2)制备的卵黄抗体混合液与步骤3)制备的混合物充分混合，经过滤除菌得口腔喷剂。
进一步，步骤3)中混合的温度为20～40℃。
具体的一种制备方法，包括以下步骤：
1.免疫原的制备：
1)菌体的选择和培养：分别取三种菌经肉汤培养基分离培养和扩增培养，并经鉴定确认为该菌株；
2)免疫原制备：分别收集步骤1)中培养的菌体，用生理盐水稀释并调节菌体浓度至108-1012CFU/mL，灭活经无菌检验合格后分别加入等量弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂，充分乳化后制成免疫原；
2.卵黄抗体的制备
1)分别以三种菌制备的免疫原免疫产蛋鸡，初免为弗氏完全佐剂疫苗，二、三免为弗氏不完全佐剂疫苗。初免每只鸡胸肌注射4点，颈部皮下注射1点，初免后2周进行二免，方法同初免，二免后2周进行三免；
2)三免后收集鸡蛋，分离卵黄，去除卵清蛋白和卵黄膜，得卵黄液，加5～7倍于卵黄体积的蒸馏水，通过从水溶性蛋白中分离得到三种菌的卵黄抗体。
3.按质量份将变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和幽门螺杆菌的卵黄抗体混合，得卵黄抗体混合液；将按质量份将鱼腥草提取物、山银花提取物、腊梅精油和山梨醇加入到灭菌水中在20～40℃充分混合，得混合物；制备的卵黄抗体混合液与制备的混合物充分混合，经过滤除菌得口腔喷剂。
本发明的目的还在于提供一种上述的组合物或上述的口腔喷剂在防治口腔疾病、预防胃部疾病和心血管系统性疾病药物中的应用。
本发明的有益效果在于：
1)本发明提供了一种防治口腔疾病的组合物，将变异链球菌，牙龈卟啉单胞菌和幽门螺杆菌制备为卵黄抗体用于防治口腔疾病中，在能预防和治疗口腔龋齿、慢性牙周炎、口臭等口腔疾病的同时还能起到预防胃部疾病和心血管系统性疾病的功效。
2)本发明将所述组合物用于口腔喷剂中，该口腔喷剂将所述组合物与鱼腥草提取物、山银花提取物和腊梅精油一起能起到有效防治口腔疾病、增加机体抗菌、抵病毒的能力，且不会破坏口腔环境、增加口腔细菌的抗药性。
3)本发明口腔喷剂的制备方法简单，适宜于规模化生产，对于口腔疾病的健康和从口部预防胃部疾病和心血管系统性疾病有重要意义。
具体实施方式
以下将对本发明的优选实施例进行详细描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1防治口腔疾病的组合物
防治口腔疾病的组合物按质量份计包括以下组分：变异链球菌卵黄抗体2份，牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体2.5份，幽门螺杆菌卵黄抗体2份。
实施例2防治口腔疾病的组合物
防治口腔疾病的组合物按质量份计包括以下组分：变异链球菌卵黄抗体5份，牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体1份，幽门螺杆菌卵黄抗体4份。
实施例3含片
防治口腔疾病的组合物1份，山梨醇3份，阿斯巴甜0.2份，药用辅料95.8份，将上述药片药物低温制粒，然后压成不同形状的含片，每片2克。
实施例4口香糖
防治口腔疾病的组合物0.6份，山梨醇5份药用辅料94.4份，经微孔滤膜过滤除菌，无菌加入到口香糖生产线中。
实施例5口腔喷剂
防治口腔疾病的口腔喷剂按质量份计包括以下组分：变异链球菌卵黄抗体2份，牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体1.5份，幽门螺杆菌卵黄抗体2.5份，鱼腥草提取物1.5份，山银花提取物1份，腊梅精油0.3份，山梨醇2份和水介质。
实施例6口腔喷剂
防治口腔疾病的口腔喷剂按质量份计包括以下组分：变异链球菌卵黄抗体2.5份，牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体2份，幽门螺杆菌卵黄抗体3份，鱼腥草提取物0.5份，山银花提取物0.5份，腊梅精油0.1～2份，山梨醇3份和水介质。
实施例7口腔喷剂
防治口腔疾病的口腔喷剂按质量份计包括以下组分：变异链球菌卵黄抗体5份，牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体1份，幽门螺杆菌卵黄抗体4份，鱼腥草提取物5份，山银花提取物0.5份，腊梅精油0.1份，山梨醇1份和水介质。
实施例8口腔喷剂
防治口腔疾病的口腔喷剂按质量份计包括以下组分：变异链球菌卵黄抗体2份，牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体5份，幽门螺杆菌卵黄抗体1份，鱼腥草提取物0.5份，山银花提取物3份，腊梅精油1份，山梨醇3份和水介质。
实施例9口腔喷剂的制备方法
变异链球菌：ATCC700610株
牙龈卟啉单胞菌：ATCC33277株
幽门螺杆菌：NCTC11637株
口腔喷剂的制备方法，包括以下步骤：
1.免疫原的制备：
1)菌体的选择和培养：分别取变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和幽门螺杆菌的菌株经肉汤培养基分离培养和扩增培养，并经鉴定各自菌株；
2)免疫原制备：分别收集步骤1)中培养的菌体，用生理盐水稀释并调节菌体浓度至108-1012CFU/mL，灭活经无菌检验合格后分别加入等量弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂，充分乳化后制成免疫原；
2.卵黄抗体的制备
1)分别以三种菌制备的免疫原免疫产蛋鸡，初免为弗氏完全佐剂疫苗，二、三免为弗氏不完全佐剂疫苗。初免每只鸡胸肌注射4点，颈部皮下注射1点，初免后2周进行二免，方法同初免，二免后2周进行三免；
2)三免后收集鸡蛋，分离卵黄，去除卵清蛋白和卵黄膜，得卵黄液，加5～7倍于卵黄体积的蒸馏水，调pH至5.0，搅匀后4℃放置过夜，离心取上清，经滤膜过滤，得水溶性组分，在水溶性组分中加入(NH4)2SO4至饱和度为50％，混匀，待完全溶解后置4℃过夜；再经至少一次离心，弃上清，用去离子水重新悬浮沉淀至原体积，得三种菌的卵黄抗体。
经凝胶过滤纯化，经SDS-PAGE测得卵黄抗体的纯度达90％以上，用单向琼脂扩散法测得卵黄抗体含量超过30％，采用ELISA(酶联免疫吸附实验)测得特异性卵黄抗体效价达1:2000000。
3.按质量份将变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和幽门螺杆菌的卵黄抗体混合，得卵黄抗体混合液；将按质量份将鱼腥草提取物、山银花提取物、腊梅精油和山梨醇加入到灭菌水中在20～40℃充分混合，得混合物；制备的卵黄抗体混合液与制备的混合物充分混合，经过滤除菌得口腔喷剂。
实施例10本发明制备的口腔喷剂效果评价
根据自愿原则选患有口腔问题(口臭20人，溃疡/牙周炎20人)，平均分为两组，每组20人(口臭10人，溃疡/牙周炎10人)，一组为对照组，正常早晚清洁牙齿，不用口腔喷剂；另一组早晚清洁牙齿后使用本发明制备的口腔喷剂，连续使用5天和一个月评价治疗效果。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种防治口腔疾病的组合物，其特征在于，按质量份计包括以下组分：变异链球菌卵黄抗体2～5份，牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体1～5份，幽门螺杆菌卵黄抗体1～4份。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括鱼腥草提取物、山银花提取物、辅料和水介质。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述鱼腥草提取物、山银花提取物与变异链球菌卵黄抗体的质量比为0.5～5：0.5～3：2～5。
4.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述辅料包括腊梅精油、山梨醇；所述腊梅精油，山梨醇与变异链球菌卵黄抗体的质量比为0.1～1：1～3：2～5。
5.利用权利要求1～4任一项所述的组合物制备的防治口腔疾病的产品，其特征在于，所述产品包括口腔喷剂、漱口液、含片、口香糖和牙膏。
6.一种防治口腔疾病的口腔喷剂，其特征在于，按质量份计包括以下组分：变异链球菌卵黄抗体2～5份，牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体1～5份，幽门螺杆菌卵黄抗体1～4份，鱼腥草提取物0.5～5份，山银花提取物0.5～3份，腊梅精油0.1～1份，山梨醇1～3份和水介质。
7.根据权利要求6所述口腔喷剂，其特征在于，按质量份计包括以下组分：变异链球菌卵黄抗体2～4份，牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体1～4份，幽门螺杆菌卵黄抗体2～4份，鱼腥草提取物0.5～3份，山银花提取物0.5～2份，腊梅精油0.1～1份，山梨醇1～3份和水介质。
8.权利要求6或7任一项所述的口腔喷剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)卵黄抗体的制备：分别以变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和幽门螺杆菌作为免疫原免疫产蛋鸡，三次免疫后取产蛋鸡的鸡蛋中卵黄液，分别提取卵黄液中卵黄抗体，得变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和幽门螺杆菌的卵黄抗体；
2)按质量份将变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和幽门螺杆菌的卵黄抗体混合，得卵黄抗体混合液；
3)将按质量份将鱼腥草提取物、山银花提取物、腊梅精油和山梨醇加入到灭菌水中充分混合，得混合物；
4)将步骤2)制备的卵黄抗体混合液与步骤3)制备的混合物充分混合，经过滤除菌得口腔喷剂。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中混合的温度为20～40℃。
10.权利要求1～4任一项所述的组合物或权利要求6～7任一项所述的口腔喷剂在防治口腔疾病、预防胃部疾病和心血管系统性疾病药物中的应用。
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