CN108712905A - 抗肝肿瘤病毒剂 - Google Patents

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Abstract

本发明的目的在于提供一种针对肝肿瘤病毒的新型治疗剂，具体而言,涉及一种抗肝肿瘤病毒剂，其含有的有效成分为下述通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：[化1] 式中，R1为氟或氢。

Description

抗肝肿瘤病毒剂
技术领域
本发明涉及一种针对例如肝肿瘤病毒的新型治疗剂。
背景技术
对于病毒感染症，在发现詹纳创建的天花疫苗治疗法后，才可以进行预防感染。但是，对于没有疫苗的病毒，当感染病毒时，所能选择的则只有通过个体免疫和对症治疗来清除病毒。针对病毒开发抗病毒剂的历史，始于1977年埃利恩等人研制的单纯疱疹病毒治疗剂阿昔洛韦。1985年，满屋等人发现了人类免疫缺陷病毒1(HIV-1)的治疗剂叠氮胸苷。抗病毒剂开发在HIV-1、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、流感病毒等部分病毒上有所进展，但现状为在大多数病毒中仍没有抗病毒剂。
HCV和HBV是引起慢性肝炎、肝硬化、肝癌的肝肿瘤病毒。据推测，HCV感染者在日本国内约有200万人，在世界上约有2亿人。经推测，HBV感染者在日本国内约有150万人，在世界上约有3.5亿人。HCV和HBV的感染者约占世界人口的8％，这两种疾病已成为亟待攻克的最重要的感染症之一。
HCV是一种基因组为单股正链RNA的病毒，属于黄病毒科瘟病毒属。病毒基因组约有9600个核苷酸，病毒的复制增殖全部在细胞质中进行。当病毒侵入细胞时，首先产生约由3000个氨基酸残基组成的前体蛋白。接着，由宿主的蛋白酶和病毒的蛋白酶产生10种成熟的病毒蛋白。在这10种蛋白中，E1、E2、核心(Core)、p7是产生病毒粒子所需的结构蛋白。NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B则是病毒复制所需的非结构蛋白。图1表示HCV的生命周期。
HCV的生命周期如下：
1)感染
在感染的步骤中，病毒与受体接触并侵入细胞内。目前已知有CD81、SR-B1、密封蛋白1(Claudin1)和闭合蛋白(Occludin)等HCV受体。
2)翻译
在翻译时，大多数宿主蛋白都需要在mRNA的5’末端的帽状结构。而HCV则不需要帽状结构。在HCV的5’侧的被称为内部核糖体进入位点(Internal Ribosomal Entry Site，IRES)区域的二级结构与核糖体直接结合，由非依赖帽状结构的翻译来翻译病毒的前体蛋白(约3000个氨基酸)。来自前体蛋白的10种病毒蛋白，由宿主的蛋白酶和病毒本身的蛋白酶(NS3-4A)产生。
3)复制
HCV的复制通过由非结构蛋白组成的复制复合体进行复制。首先，以病毒的正链为模板，通过RNA依赖性RNA聚合酶(NS5B)的作用合成复制中间体即负链RNA。接着，以负链RNA为模板，通过NS5B复制正链RNA的病毒基因组。
4)粒子形成
病毒粒子的形成是以内质网和脂滴为支架，集合结构蛋白核心、E1、E2和病毒基因组而完成的。已知此时NS5A起重要作用。
5)释放
已知病毒粒子释放到细胞外，但此时需要载脂蛋白。
上述HCV的增殖仅发生在细胞质中。
临床应用的直接作用于病毒的直接作用抗病毒药物(Direct-ActingAntivirals，DAA)是将病毒的蛋白酶NS3-4A、病毒的复制和粒子形成所需的NS5A，以及RNA依赖性RNA聚合酶NS5B作为靶标。在慢性丙型肝炎起初进行的是干扰素(IFN)单独疗法，但那时的有效率约为10％。2015年，NS5B抑制剂和NS5A抑制剂的联合疗法获得批准，据报道有效率达到90％以上。
另一方面，图2表示HBV的生命周期。HBV是一种不完全双链DNA病毒，属于肝去氧核糖核酸病毒科正肝病毒属。当HBV侵入细胞内后，在核中形成完全双链DNA，变成cccDNA。以DNA为模板，转录3.6kb、2.4kb、2.1kb、0.7kb的mRNA，翻译成聚合酶、HBcAg(核心)、HBsAg、X蛋白。3.6kb前基因组RNA(pregenomic RNA，pgRNA)与核心、聚合酶一起被包装。pgRNA被逆转录为DNA后，病毒粒子被释放到细胞外。虽然HBV不是逆转录酶病毒，但聚合酶具有逆转录活性，因此可以使用针对HIV-1的逆转录酶抑制剂来治疗HBV。
另外，例如专利文献1公开了将2’-氟-6’-亚甲基碳环核苷类用于治疗HBV和HCV感染症。但是，专利文献1仅公开了抗HBV试验作为实际进行的抗病毒试验，没有记载能够使用2’-氟-6’-亚甲基碳环核苷类来治疗HBV和HCV这两种病毒的感染症。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特表2013-510904号公报
发明概述
发明所要解决的问题
难治性病毒感染症多具有迁延性。作为在病毒中进行药剂开发的HIV-1、HBV、HCV所要解决的问题，可举出：1)因病毒变异而获得耐药性；2)药价非常高；3)开发费时等。
宿主来源的生理活性物质IFN可以消除各种病毒。另一方面，DAA仅对特定病毒起作用，或者将具有类似病毒酶(例如逆转录酶)的组的病毒作为靶标。作为前者的示例，由于DNA病毒HBV和RNA病毒HCV的病毒生命周期不同，因此使用不同的抗病毒剂。作为后者的示例，虽然HBV和HIV-1存在DNA病毒与RNA病毒的区别，但由于这两种病毒具有由RNA合成DNA的逆转录酶，因此相同的逆转录酶抑制剂有可能有效。
如此，在DAA中，除了具有相同酶的病毒组之外，使用病毒特异性药物，所起的作用不跨越生命周期不同的DNA病毒和RNA病毒的界限，这是现有技术的常识。
因此，本发明所要解决的问题是开发能跨越具有不同生命周期的病毒界限的多功能DAA(multifunctional DAAs，mDAA)。如果将不能跨越生命周期界限的现有DAA作为第一代，则本发明的具有多功能抗病毒活性的mDAA可称为第二代抗病毒剂。
本发明鉴于上述情况而做出的，目的在于提供一种抗病毒剂，其将5种肝炎病毒(甲型、乙型、丙型、丁型和戊型)中引起肝癌的肝肿瘤病毒HBV和HCV作为靶标，并预防肝癌。
解决问题的技术方案
为解决上述问题而进行了潜心研究，结果如下：抗病毒剂筛选通常针对一种病毒进行筛选，而本发明则是在对引起肝癌的病毒HBV和HCV同时进行筛选时，发现了对HBV和HCV增殖均可抑制的药物氯法拉滨(clofarabine)。另外还发现了抑制HCV增殖的药物克拉屈滨(Cladribine)，从而完成了本发明。
即，本发明包含如下内容：
(1)一种抗肝肿瘤病毒剂，其含有的有效成分为下述通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
[化1]
式中，R1为氟或氢。
(2)根据(1)所述的抗肝肿瘤病毒剂，其中，通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐为2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤(相当于“氯法拉滨”)或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒为HBV和/或HCV。
(3)根据(1)所述的抗肝肿瘤病毒剂，其中，通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐为2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒为HBV或HCV。
(4)根据(1)所述的抗肝肿瘤病毒剂，其中，通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐为2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒为HBV。
(5)根据(1)所述的抗肝肿瘤病毒剂，其中，通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐为2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒为HCV。
(6)根据(1)所述的抗肝肿瘤病毒剂，其中，通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐为2-氯-9-(2-脱氧-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤(相当于“克拉屈滨”)或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒为HCV。
(7)一种肝肿瘤病毒相关疾病的预防或治疗剂，其含有(1)所述的抗肝肿瘤病毒剂，所述相关疾病选自由慢性肝炎、肝硬化和肝癌所组成的组。
(8)根据(7)所述的预防或治疗剂，其含有抗肝肿瘤病毒剂，所述抗肝肿瘤病毒剂是2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒相关疾病为HBV和/或HCV相关疾病。
(9)根据(7)所述的预防或治疗剂，其含有抗肝肿瘤病毒剂，所述抗肝肿瘤病毒剂是2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒相关疾病为HBV或HCV相关疾病。
(10)根据(7)所述的预防或治疗剂，其含有抗肝肿瘤病毒剂，所述抗肝肿瘤病毒剂是2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒相关疾病为HBV相关疾病。
(11)根据(7)所述的预防或治疗剂，其含有抗肝肿瘤病毒剂，所述抗肝肿瘤病毒剂是2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒相关疾病为HCV相关疾病。
(12)根据(7)所述的预防或治疗剂，其含有抗肝肿瘤病毒剂，所述抗肝肿瘤病毒剂是2-氯-9-(2-脱氧-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒相关疾病为HCV相关疾病。
本说明书包含了作为本发明的优先权基础的日本专利申请号2016-048664号的公开内容。
发明效果
根据本发明，可以提供将肝肿瘤病毒HBV和HCV作为靶标的抗病毒剂，以及肝癌等与HBV和HCV相关的疾病的预防或治疗剂。另外，根据本发明，可以提供将HCV作为靶标的抗病毒剂，以及肝癌等与HCV相关的疾病的预防或治疗剂。
附图说明
图1是表示HCV生命周期的示意图；
图2是表示HBV生命周期的示意图；
图3是表示嘌呤代谢拮抗剂的抗HBV活性的图表。接种HepG2.2.15细胞为1×105细胞/孔。24小时后向细胞中加入嘌呤代谢拮抗剂(氯法拉滨(Clofarabine)、克拉屈滨(Cladribine)、氟达拉滨(Fludarabine))和ETV(恩替卡韦(Entecavir))并将各自稀释成最终浓度为1μM。培养7天后，回收细胞质组分，用苯酚氯仿提取法纯化DNA。使用20ng经纯化的DNA，用定量PCR法评价细胞内HBV DNA的量；
图4是表示嘌呤代谢拮抗剂的抗HCV活性的图表。接种OR6细胞为1.5×104细胞/孔。24小时后向细胞中加入嘌呤代谢拮抗剂并将其稀释成最终浓度为1μM。培养3天后，回收细胞并测定海肾萤光素酶(Renilla Luciferase)活性；
图5是表示氯法拉滨的抗HBV活性的图表。接种HepG2.2.15细胞为1×105细胞/孔。24小时后向细胞中加入氯法拉滨并将其稀释成0nM、0.97nM、1.95nM、3.90nM、7.81nM、15.6nM、31.3nM、62.5nM、125nM、250nM、500nM、1000nM。培养7天后，回收细胞质组分，用苯酚氯仿提取法纯化DNA。使用20ng经纯化的DNA，用定量PCR法评价细胞内HBVDNA的量；
图6是表示氯法拉滨的细胞毒性(HepG2)的图表。接种HepG2NTCP-myc细胞为2×104细胞/孔。24小时后向细胞中加入氯法拉滨并将其稀释成0μM、0.49μM、0.98μM、1.95μM、3.90μM、7.81μM、15.6μM、31.3μM、62.5μM、125μM、250μM、500μM、1000μM。培养7天后，加入10μl的Premix WST-1细胞增殖检测系统(Premix WST-1Cell Proliferation Assay System)(日本宝生物株式会社)，在37℃下培养2小时后，使用酶标仪测定450nm处吸光度；
图7是表示氯法拉滨的抗HCV活性的图表。接种OR6细胞为1.5×104细胞/孔。24小时后向细胞中加入氯法拉滨并将其稀释成0nM、15.6nM、31.3nM、62.5nM、125nM、250nM、500nM、1000nM。培养3天后，回收细胞并测定海肾萤光素酶活性；
图8是表示氯法拉滨的细胞毒性(OR6)的图表。接种OR6细胞为3×103细胞/孔。24小时后向细胞中加入氯法拉滨并将其稀释成0μM、15.6μM、31.3μM、62.5μM、125μM、250μM、500μM、1000μM。培养3天后，加入10μl的Premix WST-1细胞增殖检测系统(日本宝生物株式会社)，在37℃下培养2小时后，使用酶标仪测定450nm处吸光度。
具体实施方式
下面详细地说明本发明。
本发明的抗肝肿瘤病毒剂，其含有的有效成分为下述通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
[化2]
(式中，R1为氟或氢。)
根据本发明的抗肝肿瘤病毒剂，可以预防或治疗肝肿瘤病毒(HBV和/或HCV)感染症。
另外，根据本发明的抗肝肿瘤病毒剂，可以预防或治疗肝肿瘤病毒感染症，进而也可以预防或治疗肝肿瘤病毒相关疾病。因此，本发明的抗肝肿瘤病毒剂，也可以称为肝肿瘤病毒相关疾病的预防或治疗剂。本文中，肝肿瘤病毒相关疾病是指因感染肝肿瘤病毒引起发病的疾病，可举出：慢性肝炎、肝硬化和肝癌。
本发明还涉及一种预防或治疗肝肿瘤病毒感染的方法，或者预防或治疗肝肿瘤病毒相关疾病的方法，包括向人和动物等受试对象(患者)给予上述通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐。
作为本发明的第一实施方式，本发明针对HBV和HCV两者的抗肝肿瘤病毒剂(以下称作“本发明第一实施方式的抗肝肿瘤病毒剂”)含有的有效成分为被称为氯法拉滨的2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤(在上述通式(I)的化合物中，R1为氟)或其药学上可接受的盐。
氯法拉滨和下述实施例所使用的克拉屈滨和氟达拉滨的化学结构式如下所示：
[化3]
如下述实施例所示，本发明人根据将氯法拉滨在核糖第2位的F替换为H而形成的克拉屈滨没有抗HBV活性，从而发现在氯法拉滨的抗HBV活性中，氯法拉滨在核糖第2位的F非常重要。另外，克拉屈滨虽然没有抗HBV活性，但具有抗HCV活性，因此发现氯法拉滨和克拉屈滨相同的碱基2-氯腺嘌呤对抗HCV活性而言非常重要。
另外，根据本发明第一实施方式的抗肝肿瘤病毒剂，可以预防或治疗HBV和HCV两者的感染症，进而也可以预防或治疗HBV和/或HCV相关疾病。因此，本发明第一实施方式的抗肝肿瘤病毒剂，也可以称为HBV和/或HCV相关疾病的预防或治疗剂。本文中，HBV和/或HCV相关疾病是指因感染HBV和/或HCV引起发病的疾病，可举出：慢性肝炎、肝硬化和肝癌。
本发明中使用的氯法拉滨例如可以按照Bauta W.E.等人，Organic ProcessResearch&Development 2004，第8卷，第6期，第889-896页中记载的方法来制造。另外，也可使用氯法拉滨(C2500)(东京化成工业株式会社生产)等市售品。
另外，作为氯法拉滨的药学上可接受的盐，例如可举出：与盐酸、硫酸、磷酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、焦硫酸、偏磷酸等无机酸的盐；与柠檬酸、苯甲酸、乙酸、丙酸、富马酸、马来酸、磺酸(例如甲磺酸、对甲苯磺酸、萘磺酸)等有机酸的盐；钠盐、钾盐等碱金属盐。
本发明第一实施方式的抗肝肿瘤病毒剂，可根据其剂型利用其本身已知的各种方法进行给药，其给药量、给药部位、给药间隔、给药时间等可考虑患者的年龄和体重、病情或与其他药物和疗法同时使用的情况等来适当确定。给药方法没有特别限制，例如可举出：口服给药、注射和静脉滴注等。
本发明第一实施方式的抗肝肿瘤病毒剂的给药量根据其剂型、给药方法或要治疗的症状而不同，例如，有效成分(氯法拉滨或其药学上可接受的盐)换算为单位体表面积(m2)的给药量为3mg～5.2mg，优选设为30mg～52mg，可以根据每日1次或多次，或者连续点滴等，甚至每隔几日1次等适当的给药频率进行给药。
本发明第一实施方式的抗肝肿瘤病毒剂的剂型例如可举出：滴剂、片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、栓剂、注射剂等，没有特别限制。另外，本发明第一实施方式的抗肝肿瘤病毒剂例如也可以含有制剂载体、赋形剂、稳定剂等成分。
另外，本发明涉及一种预防或治疗HBV和/或HCV感染的方法，或者预防或治疗HBV和/或HCV相关疾病的方法，包括向人和动物等受试对象(患者)给予氯法拉滨或其药学上可接受的盐。氯法拉滨或其药学上可接受的盐的剂型、给药方式、给药量等，可根据上述本发明第一实施方式的抗肝肿瘤病毒剂来确定。
另一方面，本发明的效果可举出以下几点。
1)以HCV和HBV感染者为对象
本发明中发现氯法拉滨具有抗HBV活性和抗HCV活性。由于现有的抗HBV剂对HCV无效，因此药物的对象为HBV感染者(全世界约3.5亿人)。另外，由于现有的抗HCV剂对HBV无效，因此药物的对象为HCV感染者(全世界约2亿人)。与此相对，由于氯法拉滨对HCV和HBV这两种病毒均有效，因此对象扩大到全世界共计约5.5亿人。药物开发需要巨额开发费用，但由于一种药物可以涵盖两种感染症，因此可以预期减少开发费用的效果。此外，氯法拉滨药物目前在临床上用于白血病，因此可以预期减少开发费用的效果。
2)降低对于安全性的风险
由于氯法拉滨药物目前在临床上用于白血病，因此对于安全性的评价得以确保。另外，氯法拉滨以针对白血病的血液中有效浓度(约2μM)的百分之一浓度(约20nM)显示出抗HBV活性，因此在对肝炎使用时，与治疗白血病相比，可以预期大幅减轻副作用。
3)应用于其他病毒
除了生理活性物质之外，氯法拉滨是首个对生命周期不同的DNA病毒和RNA病毒有效的抗病毒剂。这表明氯法拉滨是具有广谱性的抗病毒剂。目前，针对病毒感染症开发抗病毒剂很少，目前对于绝大部分的病毒没有抗病毒剂。可以预期氯法拉滨也可用于没有抗病毒剂的致病病毒。此外，氯法拉滨是首个mDAA，因此认为其有潜力成为对威胁人类的未知病毒爆发有效的抗病毒剂。在出现致病性非常高的病毒，没有足够时间开发新型抗病毒剂的状况下，可以预想mDAA的存在对人类的存亡非常重要。另外，在受到恐怖主义威胁的当今，认为mDAA对于使用未知病毒的生物恐怖主义也有用。
另一方面，作为本发明的第二实施方式，本发明针对HCV的抗肝肿瘤病毒剂(以下称作“本发明第二实施方式的抗肝肿瘤病毒剂”)含有的有效成分为被称为克拉屈滨的2-氯-9-(2-脱氧-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤(在上述通式(I)的化合物中，R1为氢)或其药学上可接受的盐。
另外，根据本发明第二实施方式的抗肝肿瘤病毒剂，可以预防或治疗HCV感染症，进而也可以预防或治疗HCV相关疾病。因此，本发明第二实施方式的抗肝肿瘤病毒剂，也可以称为HCV相关疾病的预防或治疗剂。本文中，HCV相关疾病是指因感染HCV引起发病的疾病，可举出：慢性肝炎、肝硬化和肝癌。本发明还涉及一种预防或治疗HCV感染的方法，或者预防或治疗HCV相关疾病的方法，包括向人和动物等受试对象(患者)给予克拉屈滨或其药学上可接受的盐。
本发明中使用的克拉屈滨例如可以按照Lioux T.等人，Eur.J.Org.Chem.，2003年，第2003卷，第20期，第3997-4002页中记载的方法来制造。另外，也可使用克拉屈滨(C2499)(东京化成工业株式会社生产)等市售品。
另外，作为克拉屈滨的药学上可接受的盐，例如可举出：与盐酸、硫酸、磷酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、焦硫酸、偏磷酸等无机酸的盐；与柠檬酸、苯甲酸、乙酸、丙酸、富马酸、马来酸、磺酸(例如甲磺酸、对甲苯磺酸、萘磺酸)等有机酸的盐；钠盐、钾盐等碱金属盐。
克拉屈滨或其药学上可接受的盐的剂型、给药方式、给药量等，可根据上述本发明第一实施方式的抗肝肿瘤病毒剂中的氯法拉滨或其药学上可接受的盐的剂型、给药方式、给药量等来确定。
实施例
下面利用实施例更详细地说明本发明，但本发明的技术范围并不限于这些实施例。
氯法拉滨的抗HBV活性和抗HCV活性，以及克拉屈滨的抗HCV活性
1.材料和方法
1-1.抗HBV活性的测定
抗HBV活性的评价是将2倍HBV基因组长度的基因导入人肝癌细胞株HepG2而形成HBV产生细胞HepG2.2.15细胞株，使用该细胞株并通过定量PCR法评价加入药物后第7天的细胞内HBV DNA的量或培养上清液中的HBV DNA的量。HBV DNA的PCR使用正向引物(HBV-S190F；5’-GCT CGT GTT ACA GGC GGG-3’：SEQ ID NO:1)和反向引物(HBV-S703R；5’-GAACCA CTG AAC AAA TGG CAC TAG TA-3’：SEQ ID NO:2)。将“95℃10秒-62℃10秒-72℃30秒”作为一次PCR反应，进行35个循环。
1-2.抗HCV活性的评价
抗HCV活性的评价使用人肝癌细胞株HuH-7来源的OR6细胞和人肝癌细胞株Li23来源的ORL8细胞进行评价。OR6细胞和ORL8细胞由于将海肾萤光素酶基因整合到基因型1b型的O株基因组中，因此可以通过测定海肾萤光素酶活性来简便且准确地评价HCV RNA复制的水平。向OR6细胞或ORL8细胞中加入药物，在第3天回收细胞并测定海肾萤光素酶活性。
1-3.细胞毒性的测定
接种OR6细胞为3×103细胞/孔，接种HepG2NTCP-myc细胞为2×104细胞/孔。在24小时后加入药物，将OR6细胞培养3天，将HepG2NTCP-myc细胞培养7天。培养后，加入10μl的Premix WST-1细胞增殖检测系统(日本宝生物株式会社)，在37℃下培养2小时后，使用酶标仪测定450nm处吸光度。
2.结果和讨论
抗HBV剂的筛选使用将HBV基因导入人癌细胞株HepG2细胞中而形成的HepG2.2.15细胞株(Production of hepatitis B virus particles in HepG2cells transfectedwith cloned hepatitis B virus DNA.Sells MA,Chen ML,and Acs G.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84:1005-1009(1987))。抗HCV剂的筛选使用将HCV基因导入世界标准的人肝癌细胞株HuH-7细胞中而形成的OR6细胞(Efficient replication of a full-length hepatitis C virus genome,strain O,in cell culture,and development of aluciferase reporter system.Ikeda M,Abe K,Dansako H,Nakamura T,Naka K,Kato N.,Biochem.Biophys.Res.Commun.,329(4):1350-9(2005))。除此以外，本发明人等也使用了将HCV基因导入此前独立开发的人肝癌细胞株Li23细胞中而形成的ORL8细胞株(Efficientreplication systems for hepatitis C virus using a new human hepatoma cellline.Kato N,Mori K,Abe K,Dansako H,Kuroki M,Ariumi Y,Wakita T,Ikeda M.,VirusRes.,146(1-2):41-50(2009))。除了本发明人之外，抗HCV剂的筛选在世界上仅使用HuH-7细胞株进行筛选。由于HuH-7细胞和Li23细胞的细胞内环境不同，因此通过使用Li23细胞，可以挽救仅使用HuH-7细胞进行的筛选中漏掉的药物。
另外，本实施例中对被批准为药物的药剂进行了重新评价的药物重定位(DrugRepositioning)，以缩短针对肝肿瘤病毒药物的开发周期，确保安全性并实现低药价。
本实施例中如图3～8所示，同时进行抗HBV活性和抗HCV活性的筛选，发现了对HBV和HCV增殖均可抑制的药物氯法拉滨。氯法拉滨显示出与临床上使用的最强抗HBV剂恩替卡韦具有同等的抗HBV活性(图3)。另外，氯法拉滨显示出与临床上使用的最强抗HCV剂索非布韦具有同等的抗HCV活性。除了IFN等生理活性物质之外，氯法拉滨是对HBV和HCV增殖均可抑制的首个抗病毒剂。
氯法拉滨在核糖第2位的F替换为H而形成的克拉屈滨没有抗HBV活性(图3)，由此可知在氯法拉滨的抗HBV活性中，氯法拉滨在核糖第2位的F非常重要。这表明在开发具有抗HBV活性的核酸类似物中，核糖第2位的F非常重要。
另外，克拉屈滨虽然没有抗HBV活性，但具有抗HCV活性(图4)，由此可知氯法拉滨和克拉屈滨相同的碱基2-氯腺嘌呤对抗HCV活性而言非常重要。这表明在开发具有抗HCV活性的核酸类似物中，碱基为2-氯腺嘌呤非常重要。
氯法拉滨是赛诺菲公司在2013年作为针对难治性白血病的治疗剂而销售的高安全性药物。本实施例中发现了与白血病完全不同的氯法拉滨新功效，即针对HCV和HBV的抗病毒活性。从零开发抗病毒剂需要巨额的开发费用和期间，但本实施例中由于通过药物重定位对安全性得到确认的药物进行评价，因此具有很高的工业实用性。在已有抗HCV剂和抗HBV剂的当今仍然进行开发新型抗病毒剂的理由之一是单药给予针对HCV和HBV的DAA时会导致获得耐药性变异，但通过给予多种DAA使得难以出现耐药性变异。关于HIV-1也基于同样的理由，也是多种药物联合给药，而不是单药给药。从这点来看，氯法拉滨增加新的DAA选项，对患者而言，有利于减少药物耐药性导致治疗失败的风险
很多抗癌剂都有很强的副作用，因此可能会阻碍氯法拉滨用于慢性肝炎。但是，当使用氯法拉滨作为抗病毒剂时，在HBV中以治疗白血病有效浓度的约百分之一的浓度显示出抗HBV活性，因此认为副作用可以得到减轻(图5～8)。此外，其作为抗癌剂，根据思路或许会成为优点。即，抗HBV剂、抗HCV剂的最终目的不是消除病毒，而是通过消除或抑制病毒来抑制对DNA造成损伤的炎症，从而抑制肝癌。目前，虽然在慢性丙型肝炎中消除了HCV，但肝癌发生已成为一个大问题。可以预期，抗癌剂氯法拉滨不仅通过消除病毒，还通过消除肝癌的源头来预防肝癌。
另外，氯法拉滨具有对DNA病毒和RNA病毒均有效的广谱性，因此可以考虑将其应用于当前没有治疗剂的病毒，以及作为针对未知病毒爆发的储备等。
本说明书所引用的全部出版物、专利以及专利申请均通过直接引用而并入本说明书。
序列表
<110> 国立大学法人鹿儿岛大学
国立大学法人冈山大学
<120> 抗肝肿瘤病毒剂
<130> PH-6881-PCT
<150> JP 2016-048664
<151> 2016-03-11
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 引物
<400> 1
gctcgtgtta caggcggg 18
<210> 2
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 引物
<400> 2
gaaccactga acaaatggca ctagta 26

Claims (12)

1.一种抗肝肿瘤病毒剂，其含有的有效成分为下述通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
[化1]
式中，R1为氟或氢。
2.根据权利要求1所述的抗肝肿瘤病毒剂，其中，通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐为2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒为乙型肝炎病毒和/或丙型肝炎病毒。
3.根据权利要求1所述的抗肝肿瘤病毒剂，其中，通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐为2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒为乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒。
4.根据权利要求1所述的抗肝肿瘤病毒剂，其中，通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐为2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒为乙型肝炎病毒。
5.根据权利要求1所述的抗肝肿瘤病毒剂，其中，通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐为2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒为丙型肝炎病毒。
6.根据权利要求1所述的抗肝肿瘤病毒剂，其中，通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐为2-氯-9-(2-脱氧-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒为丙型肝炎病毒。
7.一种肝肿瘤病毒相关疾病的预防或治疗剂，其含有权利要求1所述的抗肝肿瘤病毒剂，所述相关疾病选自由慢性肝炎、肝硬化和肝癌所组成的组。
8.根据权利要求7所述的预防或治疗剂，其含有抗肝肿瘤病毒剂，所述抗肝肿瘤病毒剂是2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒相关疾病为乙型肝炎病毒和/或丙型肝炎病毒相关疾病。
9.根据权利要求7所述的预防或治疗剂，其含有抗肝肿瘤病毒剂，所述抗肝肿瘤病毒剂是2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒相关疾病为乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒相关疾病。
10.根据权利要求7所述的预防或治疗剂，其含有抗肝肿瘤病毒剂，所述抗肝肿瘤病毒剂是2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒相关疾病为乙型肝炎病毒相关疾病。
11.根据权利要求7所述的预防或治疗剂，其含有抗肝肿瘤病毒剂，所述抗肝肿瘤病毒剂是2-氯-9-(2-脱氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒相关疾病为丙型肝炎病毒相关疾病。
12.根据权利要求7所述的预防或治疗剂，其含有抗肝肿瘤病毒剂，所述抗肝肿瘤病毒剂是2-氯-9-(2-脱氧-β-D-阿拉伯呋喃糖基)腺嘌呤或其药学上可接受的盐，且肝肿瘤病毒相关疾病为丙型肝炎病毒相关疾病。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020045628A1 (ja) * 2018-08-31 2020-03-05 ダイキン工業株式会社 核酸アナログ及び抗ｂ型肝炎ウイルス剤
US20220008450A1 (en) * 2018-10-04 2022-01-13 Daikin Industries, Ltd. Anti-hepatitis b virus agent
JP7378764B2 (ja) * 2018-10-04 2023-11-14 国立大学法人 鹿児島大学 抗ｂ型肝炎ウイルス剤
JP7378760B2 (ja) * 2019-03-14 2023-11-14 国立大学法人 鹿児島大学 抗ｂ型肝炎ウイルス剤
JP2020176082A (ja) * 2019-04-17 2020-10-29 ダイキン工業株式会社 核酸アナログ及び抗ｂ型肝炎ウイルス剤
WO2020241814A1 (ja) * 2019-05-29 2020-12-03 国立大学法人東京大学 抗ウイルス剤又はウイルスｃｃｃＤＮＡ形成阻害剤

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101686673A (zh) * 2007-04-14 2010-03-31 南方研究所 用化学治疗药剂与放射的组合治疗瘤形成的方法
WO2015013352A2 (en) * 2013-07-25 2015-01-29 Patel Hasmukh B Nucleoside phosphoramidates and phosphoramidites
CN104640444A (zh) * 2012-06-16 2015-05-20 南京迈勒克生物技术研究中心 双肝脏靶向氨基磷酸酯和氨基膦酸酯前药

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030008841A1 (en) 2000-08-30 2003-01-09 Rene Devos Anti-HCV nucleoside derivatives
GB0112617D0 (en) 2001-05-23 2001-07-18 Hoffmann La Roche Antiviral nucleoside derivatives
WO2004035043A1 (en) * 2002-10-16 2004-04-29 Ilex Products, Inc. Clofarabine and platinum chemotherapy combination
WO2005018330A1 (en) 2003-08-18 2005-03-03 Pharmasset, Inc. Dosing regimen for flaviviridae therapy
WO2008033466A2 (en) * 2006-09-14 2008-03-20 Combinatorx (Singapore) Pre. Ltd. Compositions and methods for treatment of viral diseases
US20100009970A1 (en) * 2008-03-19 2010-01-14 Combinatorx (Singapore) Pte. Ltd. Compositions and methods for treatment of viral diseases
EP2501709A4 (en) 2009-11-16 2013-11-13 Univ Georgia 2'-FLUOR-6'-METHYLENE CARBOXYCLIC NUCLEOSIDES AND METHOD FOR THE TREATMENT OF VIRUS INFECTIONS THEREWITH
US9156874B2 (en) * 2011-01-03 2015-10-13 Nanjing Molecular Research, Inc. Double-liver-targeting phosphoramidate and phosphonoamidate prodrugs
WO2012136851A1 (en) * 2011-04-08 2012-10-11 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods and pharmaceutical compositions for inhibiting influenza viruses replication

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101686673A (zh) * 2007-04-14 2010-03-31 南方研究所 用化学治疗药剂与放射的组合治疗瘤形成的方法
CN104640444A (zh) * 2012-06-16 2015-05-20 南京迈勒克生物技术研究中心 双肝脏靶向氨基磷酸酯和氨基膦酸酯前药
WO2015013352A2 (en) * 2013-07-25 2015-01-29 Patel Hasmukh B Nucleoside phosphoramidates and phosphoramidites

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Publication number Publication date
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