CN108703091A - 一种鉴定草鱼种内杂交组合有效亲本数目的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种鉴定草鱼种内杂交组合有效亲本数量的方法，包括以下步骤：1)选择亲鱼，对亲鱼进行标记，第一年将所需杂交用的不同群体或品系亲鱼放置在同一亲本池中进行产前培育；2)第二年人工注射激素溶液催熟，人工授精获得受精卵，等量混合同一组合不同家系受精卵放置于同一孵化环道中孵化；3)采用亲子鉴定方法对步骤2)获得的不同组合进行后裔鉴定，确定每个组合子代来源于杂交亲本的具体数量，留取有效亲本数量较多的组合。其优点表现在：本发明将分子标记辅助选择与杂交选择相结合，减小母本效应，减小由于亲本怀卵量不同导致的杂交亲本贡献率不同，然后确定每个组合后代有效亲本数量，确保每个组合发挥出杂交优势。
Description
技术领域
本发明涉及水产种质资源技术领域，具体地说，是一种鉴定草鱼种内杂交组合有效亲本数量的方法。
背景技术
草鱼是草食性鱼类，是世界上养殖产量最高的鱼类，我国养殖产量占世界总产量的95％以上。草鱼养殖历史悠久，最早可追溯到我国唐代。马来西亚最早从中国引进草鱼，先后被引种到40多个国家。由于草鱼性成熟时间长，保种难度大，到目前为止仍然没有培育出新品种。因此，种质问题已成为制约草鱼养殖业高质量发展的主要瓶颈。
杂交是开展种质创新的重要方法，能迅速和显著提高杂交后代的生活力。对于草鱼来说早期的科研人员把杂交主要应用于种间以上的远缘杂交，而对草鱼种内杂交研究鲜有报道。相比远缘杂交，种内杂交降低了生殖隔离对杂种生活力的影响。但在构建杂交组合的过程中，由于亲本本身性腺发育或环境条件等方面的影响，每个亲本对组合后代的贡献率是不一样的，经常引起组合来自于少量杂交亲本的后代。为了获取更多的遗传变异使得组合后代更具有代表性，让杂种优势能够在两个群体或品系间真正得到反应，需要组合后代来自于足够多的杂交亲本。因此，通过人工建立杂交组合，并对组合后代进行亲子鉴定，从而确定组合后代具体来源于杂交亲本的数量，从而解决草鱼种内杂交组合有效亲本数量少的问题。
中国专利文献CN102047851A公开了一种养殖草鱼家系的构建和良种选育方法，包括：选出行动活泼、遗传性能好，体重大于平均体重15～20％的草鱼作为亲鱼；采用PIT电子标记，性腺成熟后，激素溶液催熟，雌雄亲鱼采用人工授精获得受精卵，自孵化至育苗、鱼种培育和1龄鱼培育，分别饲养，建立家系；自2龄至养成，不同家系草鱼注射PIT电子标记，同一池塘中混养，通过淘汰，剩余家系为下一代选育的基本家系；夏花、1龄鱼、2龄鱼、3龄鱼、4龄鱼是家系选育的关键时期，优选、构建家系作为后备亲鱼；然后配组、育苗，继续进行选育。对养殖草鱼不同家系的建立，选育出优质、高产、稳产的新品种；通过草鱼家系间的交配和家系内雌雄鱼的近交，用于研究遗传学特性和品种分化状况。但是关于本发明的鉴定草鱼种内杂交组合有效亲本数量的方法目前还未见报道。
发明内容
本发明的第一个目的是，针对现有技术中构建草鱼种内杂交组合经常出现有效亲本数量少的问题，提供一种鉴定草鱼种内杂交组合有效亲本数量的方法。
为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：一种鉴定草鱼种内杂交组合有效亲本数量的方法，所述的方法包括以下步骤：
1)选择亲鱼，对亲鱼进行标记，第一年将所需杂交用的不同群体或品系亲鱼放置在同一亲本池中进行产前培育；
2)第二年人工注射激素溶液催熟，人工授精获得受精卵，等量混合同一组合不同家系受精卵放置于同一孵化环道中孵化；
3)采用亲子鉴定方法对步骤2)获得的不同组合进行后裔鉴定，确定每个组合子代来源于杂交亲本的具体数量，留取有效亲本数量较多的组合。
步骤1)中所述对亲鱼进行标记是对亲鱼进行PIT电子标记。
步骤2)中所述人工授精是利用人工挤压雄鱼和雌鱼腹部，分别收集精子和卵，立即混合成熟的精子和卵，用羽毛搅拌，然后加入少量清水，稍加搅拌即可。
步骤2)中所述激素是绒毛膜促性腺激素类似物LRH-A和地欧酮DOM的混合物。
LRH-A的剂量为25μg/Kg，DOM的剂量为3mg/Kg。
步骤2)中所述等量混合是采用烧杯量取人工授精的每个家系500ml受精卵混合在同一孵化环道中。
步骤3)中所述有效亲本数量较多是指对杂交后代有贡献的亲本数量达到20组以上。
本发明优点在于：
本发明充分认识到杂交亲本和环境等条件对组合后代的重要影响，将分子标记辅助选择与杂交选择相结合，在同一环境下进行亲本产前培育减小母本效应，采用等量混合每个家系受精卵人为减小由于亲本怀卵量不同导致的杂交亲本贡献率不同，然后采用亲子鉴定的方法确定每个组合后代有效亲本数量，确保每个组合能够真正发挥出杂交群体间的杂交优势。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
以长江、珠江和黑龙江水系草鱼种内杂交为例
1)从农业部草鱼遗传育种中心保存的长江水系邗江群体、珠江水系肇庆群体和黑龙江水系嫩江群体分别挑选出90组亲鱼，采用从广东洪腾购买的PIT电子标记，给每尾亲鱼注射电子标记，扫描后获得一个标记号，以便配对繁殖时识别亲鱼来源，另外剪取每条鱼的鳍条。在第一年的冬天亲本翻池时将三个水系3个群体270组按照每个群体30组亲鱼分别放置于3个亲本池中进行产前培育。
2)经过一整个冬天的培育，抽样检查发现亲本性腺发育良好。人工注射激素溶液(促黄体素释放激素类似物LRH-A和地欧酮DOM的混合物，其使用剂量为LRH-A25μg/Kg+DOM3mg/Kg)催熟。将所有繁殖亲鱼分成3组放置在3个产卵池中，采用人工授精的方法，建立了9个组合，每个组合重复3次，将每个组合放置于同一孵化环道中进行孵化。
3)采用亲子鉴定方法，对27个组合后代进行微卫星标记遗传分析(具体方法参考文献：Jianjun Fu,et al.Multiplex microsatellite PCR sets for parentageassignment of grass carp(Ctenopharyngodon idella).Aquaculture international,2013,21:1195-1207)后，结果见表1，发现每个组合3个重复有效亲本数量不等，不同组合间也存在显著差异，然后从每个组合3个重复中筛选出有效亲本数量23组以上，家系数有40个以上9个组合进行留存。
表1每个组合雌雄亲本及家系数
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种鉴定草鱼种内杂交组合有效亲本数量的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：
1)选择亲鱼，对亲鱼进行标记，第一年将所需杂交用的不同群体或品系亲鱼放置在同一亲本池中进行产前培育；
2)第二年人工注射激素溶液催熟，人工授精获得受精卵，等量混合同一组合不同家系受精卵放置于同一孵化环道中孵化；
3)采用亲子鉴定方法对步骤2)获得的不同组合进行后裔鉴定，确定每个组合子代来源于杂交亲本的具体数量，留取有效亲本数量较多的组合。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述对亲鱼进行标记是对亲鱼进行PIT电子标记。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述人工授精是利用人工挤压雄鱼和雌鱼腹部，分别收集精子和卵，立即混合成熟的精子和卵，用羽毛搅拌，然后加入少量清水，稍加搅拌即可。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述激素是绒毛膜促性腺激素类似物LRH-A和地欧酮DOM的混合物。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，LRH-A的剂量为25μg/Kg，DOM的剂量为3mg/Kg。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述等量混合是采用烧杯量取人工授精的每个家系500ml受精卵混合在同一孵化环道中。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述有效亲本数量较多是指对杂交后代有贡献的亲本数量达到20组以上。
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