CN108685907B - 防治肾损伤的化合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及防治肾损伤的化合物，属于医药领域。本发明所要解决的技术问题是现有技术中缺乏针对肾损伤的有效治疗药物，其技术方案是提供了式Ⅰ所示化合物、其药学上可接受的盐或可药用的酯在制备防治肾损伤的药物中的用途。实验结果表明，本发明化合物对肾损伤具有确切的治疗作用，能够显著改善受损肾组织的病理表现，降低肾损伤评分及肌酐值，为临床防治肾损伤提供了一种新的用药选择。

Description

防治肾损伤的化合物

技术领域

本发明涉及防治肾损伤的化合物，属于医药领域。

背景技术

肾损伤是常见的肾病内科综合征，病理表现为肾小管上皮细胞死亡、刷状缘消失、小管阻塞以及内皮细胞损伤等，可导致多器官功能衰竭，是具有高死亡风险的危重症。目前认为，肾损伤发病及进展的病理生理机制包括氧化应激反应、内质网应激反应、自身免疫反应等，免疫炎症、缺血、氧化应激、中毒、自身免疫间互相关联、促进或制约，形成一个十分复杂的网络关系，多方面参与肾损伤的形成和进展。

肾损伤的治疗主要以支持治疗以及肾脏替代治疗为主，尚无有效的治疗药物。虽然针对肾损伤的发病机制，例如内皮细胞功能失调、血管收缩、免疫调节因子异常等的药物研究从未停止，然而这些药物不是疗效欠佳，就是副反应大，距离治疗成功的目标仍有一段距离。

因此，提供一种能够有效治疗肾损伤的药物，具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供防治肾损伤的化合物，以解决现有技术中缺乏针对肾损伤有效治疗药物的问题。

本发明提供了式Ⅰ所示化合物、其药学上可接受的盐或可药用的酯在制备防治肾损伤的药物中的用途：

进一步地，所述肾损伤为缺血再灌注急性肾损伤。

进一步地，所述药物抑制肾小管上皮细胞凋亡。

进一步地，所述药物抑制凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3表达。

进一步地，所述药物抑制内质网应激。

进一步地，所述药物抑制内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP、Caspase-12表达。

进一步地，所述药物是以式Ⅰ所示化合物、其药学上可接受的盐或可药用的酯为活性成分，加入药学上可接受的辅料或者辅助性成分，制备而成的制剂。

进一步地，所述制剂为口服制剂。

进一步地，每单位制剂含有式Ⅰ所示化合物88mg～154mg。

动物实验证明，本发明化合物BMS309403在给药剂量为20mg/kg/d时能对小鼠肾损伤发挥显著的治疗作用。换算成人用剂量即为2.2mg/kg/d。按成人体重40～70kg计算，成人每天给药剂量范围为88mg～154mg。本发明所述每单位制剂对应成人每天给药剂量。

本发明提供了防治肾损伤的药物组合物，是式Ⅰ所示化合物、其药学上可接受的盐或可药用的酯为活性成分，加入药学上可接受的辅料或者辅助性成分，制备而成的制剂。

术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。

术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。本发明中所述盐可以是化合物的盐酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、草酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。

术语“可药用的酯”是指本发明化合物中-COOH发生酯化反应得到的化合物。

本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

本发明所述药学上可接受的辅料，是指除活性成分以外包含在剂型中的物质。

本发明所述药学上可接受的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述药物组合物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。若将上述辅助性成分与本发明药物组合物配合使用，仍然应属于本发明保护的范围。

本发明提供了防治肾损伤的化合物。实验结果表明，本发明化合物对肾损伤具有确切的治疗作用，能够显著改善受损肾组织的病理表现，降低肾损伤评分及肌酐值，为临床防治肾损伤提供了一种新的用药选择。

附图说明

图1为实施例1中小鼠缺血再灌注急性肾损伤评价图；

图2为实施例1中小鼠缺血再灌注急性肾损伤肾脏FABP4表达图；

图3为实施例1中免疫荧光染色图；

图4为实施例1中BMS309403减轻缺血再灌注急性肾损伤图；

图5为实施例1中BMS309403减少肾小管上皮细胞凋亡图；

图6为实施例1中BMS309403抑制凋亡相关蛋白表达图；

图7为实施例1中BMS309403抑制内质网应激相关蛋白表达图；

图8为实施例1中BMS309403治疗缺血再灌注急性肾损伤作用机制图。

具体实施方式

本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。

本发明提供了式Ⅰ所示化合物、其药学上可接受的盐或可药用的酯在制备防治肾损伤的药物中的用途：

本发明所述BMS309403即上述式Ⅰ所示的化合物。

BMS309403是一种联苯唑类小分子化合物，研究表明，它能有效改善瘦素缺乏的ob/ob小鼠的胰岛素抵抗和apoE^－/－老鼠的动脉粥样硬化，提高ob/ob和食源性肥胖小鼠的糖耐量，减少肝脂肪浸润和总肝脏三酰甘油水平(参见：Furuhashi M，Tuncman G，GorgünC，et al.Treatment ofdiabetesand atherosclerosis by inhibiting fatty-acid-binding protein aP2[J].Nature，2007，447(7147):959-965.)。

目前，本领域认为BMS309403是一种针对糖尿病的潜在治疗药物，但尚未见其治疗肾损伤作用的相关报道。

本发明提供了BMS309403的第二医药用途——防治肾损伤，并通过实验验证了其确能对肾损伤发挥显著的治疗作用。

实施例1本发明化合物对肾损伤的治疗作用

一、缺血再灌注急性肾损伤的小鼠造模

实验方法：

1.25-30g左右C57BL/6(10-12周龄)小鼠，术前禁食12h，自由饮水。

2.腹腔麻醉，小鼠背部去毛，消毒备皮。

3.在背部脊椎旁0.5cm、肋骨下缘0.5cm处剪开皮肤及肌肉，可见到肾脏,小心分离出两侧肾脏的肾动脉，迅速用动脉夹夹闭两侧肾动脉。

4.缺血30min后松开动脉夹，恢复血流，观察肾脏恢复情况。

5.分两层缝合开口,待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察小鼠状态及死亡情况并做好记录。

6.假手术组不做缺血处理，其他操作相同。

7.再灌注24h后取材。麻醉小鼠，心脏取血，3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。同时取双肾组织留作标本。

8.肾脏损伤评分：将小鼠肾脏组织于10％的中性福尔马林中固定，石蜡包埋、切片、染色后，采用盲法，显微镜高倍镜(400倍)视野下观察肾脏组织损伤情况，每只小鼠一张片子，随机选取10个皮髓质区域，根据肾小管坏死(包括肾小管扩张、肾小管上皮细胞坏死及管型形成等)的面积进行评分：0:无；1分：<25％；2分：25–50％；3分：50–75％；4分：>75％。

9.肌酐值检测方法为：HPLC-MS/MS。

实验结果：

从图1可以看出，小鼠肾脏缺血30分钟再灌注24小时后，肾脏损伤评分及血清肌酐值较假手术组均明显升高。另外，HE/PAS染色结果也显示出造模组小鼠肾脏的病理表现。

从图2可以看出(A为实时PCR；B为Western Blot；C为FABP4的免疫组织化学染色)，缺血再灌注急性肾损伤中小鼠肾脏FABP4表达上调。

图3免疫荧光染色提示，FABP4在肾小管上皮细胞中表达上调(红色为FABP4，绿色为肾小管上皮细胞标记物E-cadherin，蓝色为细胞核)。

二、本发明化合物减轻缺血再灌注急性肾损伤的作用

1、实验方法：

从手术前四天开始，BMS给药组小鼠以20mg/kg/天的给药剂量灌胃BMS309403，造模组给予等体积的溶剂(30％的PEG400)，连续四天后手术造模，手术当天不予给药。假手术组不做手术处理，但灌胃等体积的溶剂(30％的PEG400)。

2、实验结果：

从图4可以看出，和假手术组相比，造模组小鼠的肾脏出现了明显的损伤表现：肾小管扩张、肾小管上皮细胞的坏死及管型的形成，而BMS给药组肾脏损伤明显减轻，肾脏损伤评分降低(肾脏损伤评分：造模组：3.7±0.2；BMS给药组：2.4±0.4)，肌酐值也降低(肌酐值：造模组：1.28±0.12mg/dL；BMS给药组：0.48±0.08mg/dL)。

从图5可以看出，BMS309403能够减少肾小管上皮细胞的凋亡(*为损伤的肾小管，箭头为TUNEL染色阳性的凋亡细胞)。

从图6可以看出，BMS309403能够抑制凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2及cleaved-caspase-3的表达。

从图7可以看出，BMS309403能够抑制内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP及Caspase-12的表达。

以上实验结果表明，本发明化合物BMS309403对肾损伤具有确切的治疗作用，它可能是通过抑制肾小管上皮细胞的凋亡和内质网应激来发挥作用的，作用机制见图8。

Claims (8)

1.式Ⅰ所示化合物、其药学上可接受的盐或可药用的酯在制备治疗缺血再灌注急性肾损伤的药物中的用途：

2.如权利要求1所述的用途，其特征是：所述药物抑制肾小管上皮细胞凋亡。

3.如权利要求2所述的用途，其特征是：所述药物抑制凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3表达。

4.如权利要求1所述的用途，其特征是：所述药物抑制内质网应激。

5.如权利要求4所述的用途，其特征是：所述药物抑制内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP、Caspase-12表达。

6.如权利要求1～5任意一项所述的用途，其特征是：所述药物是以式Ⅰ所示化合物、其药学上可接受的盐或可药用的酯为活性成分，加入药学上可接受的辅料或者辅助性成分，制备而成的制剂。

7.如权利要求6所述的用途，其特征是：所述制剂为口服制剂。

8.如权利要求7所述的用途，其特征是：每单位制剂含有式Ⅰ所示化合物88mg～154mg。

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