CN108646029A - 人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒及其制备方法和用途 - Google Patents
人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒及其制备方法和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108646029A CN108646029A CN201810453821.9A CN201810453821A CN108646029A CN 108646029 A CN108646029 A CN 108646029A CN 201810453821 A CN201810453821 A CN 201810453821A CN 108646029 A CN108646029 A CN 108646029A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gal
- people
- igg antibody
- neoglycoproteins
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 title claims description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 15
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 45
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 35
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims abstract description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 36
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 36
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 36
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 35
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 24
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 16
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 14
- YGEHCIVVZVBCLE-FSYGUOKUSA-N 3alpha-galactobiose Chemical class OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]([C@@H](O)C=O)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O YGEHCIVVZVBCLE-FSYGUOKUSA-N 0.000 claims description 13
- 239000006210 lotion Substances 0.000 claims description 12
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 10
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 7
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 7
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 6
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 5
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 claims description 5
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 4
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 4
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 claims description 3
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims description 3
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 3
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 206010016825 Flushing Diseases 0.000 claims description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 8
- FHIVAFMUCKRCQO-UHFFFAOYSA-N diazinon Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=CC(C)=NC(C(C)C)=N1 FHIVAFMUCKRCQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 26
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 8
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 7
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 5
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 108010005493 bovine serum albumin-galactose (39) Proteins 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 125000002519 galactosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 17-β-hydroxy-5-α-Androstan-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000248349 Citrus limon Species 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 206010053159 Organ failure Diseases 0.000 description 1
- 101000718529 Saccharolobus solfataricus (strain ATCC 35092 / DSM 1617 / JCM 11322 / P2) Alpha-galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- NNISLDGFPWIBDF-MPRBLYSKSA-N alpha-D-Gal-(1->3)-beta-D-Gal-(1->4)-D-GlcNAc Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC(=O)C)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 NNISLDGFPWIBDF-MPRBLYSKSA-N 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012372 quality testing Methods 0.000 description 1
- 238000011155 quantitative monitoring Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000037314 wound repair Effects 0.000 description 1
- -1 α-galactosyl Chemical group 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
- G01N21/33—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry using ultraviolet light
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种人抗‑Gal‑IgG抗体检测试剂盒，属于医药检测技术领域。所述试剂盒中含有特异性人抗‑Gal‑IgG抗体标准品，所述人抗‑Gal‑IgG抗体对于Galα1‑3Gal系列拟糖蛋白和Galα1‑3Gal类似物拟糖蛋白呈现特异性反应；对单糖拟糖蛋白及核心结构拟糖蛋白不反应。采用该试剂盒，能够对人体血清中抗‑Gal‑IgG抗体进行定量检测。可广泛用于临床病人手术后，人体内抗‑Gal抗体的定量检测，以及临床上异种器官移植或者应用了动物源性生物材料治疗后病人血液样本的检测。
Description
技术领域
本发明涉及医药检测技术领域，特别是涉及一种人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒及其制备方法和用途。
背景技术
近20年来，器官移植技术得到了飞跃的发展，成为治疗各种终末期器官衰竭的最有效途径。然而，器官来源短缺让众多病人在等待器官移植的过程中死去。据悉，我国每年至少有100万人需要接受器官移植，但大约只有1万人做了移植手术。因此，异种器官移植成为科学界研究的热点。在异种器官移植中最大的障碍是供器官异种抗原产生的超急性免疫排斥反应，为解决异种器官组织的免疫排斥反应，脱细胞去除免疫原的动物源性材料被广泛用于外科的创伤修复。然而，动物源性生物材料应用于人体仍面临着慢性免疫排斥反应问题，直接影响着材料应用的安全性和有效性。
目前，科学研究已经明确了α-半乳糖基抗原(α-1，3-galactosyle，α-Gal，简称Gal抗原)是异种器官移植超急性免疫排斥反应的主要靶抗原。当含有Gal抗原的器官移植到人体内时，会在短时间内引起超急性免疫排斥反应。即使是脱细胞去除抗原的动物源性生物材料，残留的抗原仍然有刺激体内产生更高的抗-Gal抗体，引起慢性的免疫排斥反应，影响组织的修复。
因此，如果通过检测临床上器官移植或者应用了动物源性生物材料植入后病人体内抗-Gal抗体的水平，可以客观的反映出移植的效果，评价手术后的免疫排斥反应风险。
然而目前国内外市场上均未见人抗Gal-IgG抗体定量检测的试剂盒或相关产品，为了便于临床科学准确地对异种器官移植或者应用了动物源性生物材料治疗(植入)后病人体内抗-Gal-IgG抗体进行定量监测，亟需开发一种能够对人抗Gal-IgG抗体进行定量检测的方法和产品。
发明内容
基于此，有必要针对上述问题，提供一种人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒，采用该试剂盒，能够对人体血清中抗-Gal-IgG抗体进行定量检测。
一种人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒，所述试剂盒中含有特异性人抗-Gal-IgG抗体标准品，所述人抗-Gal-IgG抗体对于Galα1-3Gal系列拟糖蛋白和Galα1-3Gal类似物拟糖蛋白呈现特异性反应；对单糖拟糖蛋白及核心结构拟糖蛋白不反应。
上述试剂盒，含有特异性人抗-Gal-IgG抗体标准品，具有非常好的特异性，能够对人体血清中抗-Gal-IgG抗体进行准确的定量检测。
在其中一个实施例中，所述Galα1-3Gal系列拟糖蛋白为NGP 0334拟糖蛋白和NGP0203拟糖蛋白；所述Galα1-3Gal类似物拟糖蛋白为NGP 0330拟糖蛋白和NGP 0333拟糖蛋白；所述单糖拟糖蛋白为NGP 0105拟糖蛋白；所述核心结构拟糖蛋白为NGP 0202拟糖蛋白。
上述NGP 0334拟糖蛋白可为Galα1-3Galβ1-4GlcNAc-BSA，NGP 0203拟糖蛋白可为Galα1-3Gal-BSA，NGP 0330拟糖蛋白可为Galα1-3Galβ1-4Glc-BSA，NGP 0333拟糖蛋白可为Galα1-3Galβ1-3GlcNAc-BSA；NGP 0105拟糖蛋白可为L-Fucose-BSA，NGP 0202拟糖蛋白可为Galα1-2Gal-BSA。
在其中一个实施例中，所述人抗-Gal-IgG抗体通过以下方法制备得到：
免疫亲和纯化：以人工合成的α-Gal-BSA抗原制备免疫亲和柱，将人血清过柱纯化得到免疫亲和纯化抗体；
Protein A纯化：将上述得到的免疫亲和纯化抗体以Protein A进行纯化，得到纯化的人抗-Gal-IgG抗体。
在其中一个实施例中，所述Protein A纯化步骤中，包括如下步骤：
柱平衡：以以8～12倍柱体积的PBS冲洗进行Protein A柱平衡；
上样：室温下将人血清过柱3～5次；
清洗：以8～12倍柱体积的PBS冲洗进行清洗；
洗脱：先以4～6个柱体积的pH2.7 Gly-Cl洗脱液洗脱，以278-282nm为目标抗体吸收波长进行监测，收集目标抗体所在洗脱液，，以PH 9.0 Tris-Cl中和液中和，即得；
保存：保存于50mM Glycine，100mM Tris-Cl，150mM NaCl，0.1mM EDTA PH 7.4～8的溶液中。
采用上述方法制备纯化人抗-Gal-IgG抗体，所得人抗-Gal-IgG抗体具有较好的纯度和特异性。
在其中一个实施例中，该试剂盒还包括：固相Gal抗原包被板、样品稀释液、浓缩洗液、酶标二抗、显色液A、显色液B和终止液。
在其中一个实施例中，所述样品稀释液为含有甘油抗体保护剂的PBS溶液；
所述浓缩洗液为10～50倍浓缩的0.05％吐温-20；
所述酶标二抗为羊抗人IgG-HRP；
所述显色液A通过以下方法制备：取醋酸钠13.6g，柠檬酸1.6g，30％双氧水0.3mL，蒸馏水加至500mL，即得；
所述显色液B通过以下方法制备：取乙二胺四乙酸二钠0.2g，柠檬酸0.95g，甘油50mL，溶于3mL DMSO中的0.15g TMB，蒸馏水加至500mL，即得；
所述终止液为10％浓硫酸。
本发明还公开了上述的人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒的制备方法，所述固相Gal抗原包被板的制备方法如下：配制1～5μg/mL的Gal-BSA溶液，取96孔板，每孔加入100μL上述溶液，室温低速摇动1～2h，然后转4℃静置过夜，用PBS配制0.05％的吐温-20溶液作为洗液，每孔加入200～300μL洗液，浸泡后甩干，重复3次，之后加入1％的BSA每孔200μL，放入37℃，100rpm震摇，封闭1～2h，最后洗板3～5次，即得到固相Gal抗原包被板；
所述人抗-Gal-IgG抗体标准品制备方法如下：
免疫亲和纯化：以人工合成的α-Gal-BSA抗原制备免疫亲和柱，将人血清过柱纯化得到免疫亲和纯化抗体；
Protein A纯化：将上述得到的免疫亲和纯化抗体以Protein A进行纯化，得到纯化的人抗-Gal-IgG抗体。
本发明还公开了上述的人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒在人源性生物材料中人抗-Gal-IgG抗体的检测中的用途。
在其中一个实施例中，所述人源性生物材料为人血清。
在其中一个实施例中，所述检测为定量测定。
本发明的人抗-Gal-IgG抗体检测原理为：采用酶联免疫吸附法，利用人工合成的α-Gal-BSA抗原作为固相抗原，以此捕获人血清中的特异性抗-Gal-IgG抗体，再用酶标二抗进行检测，并通过人抗-Gal-IgG抗体标准品制备标准曲线，从而实现定量检测。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明的人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒，其中含有特异性人抗-Gal-IgG抗体标准品，具有非常好的特异性，能够对人体血清中抗-Gal-IgG抗体进行准确的定量检测，能够检测浓度范围为1～0.015625μg/mL的标准品，检测结果R2值大于0.99，回收率均满足80％～120％范围，检测结果可信度高。
该试剂盒可用于人体内抗-Gal抗体的定量检测，特别是临床上异种器官移植或者应用了动物源性生物材料治疗后病人血液样本中抗-Gal抗体的检测。
附图说明
图1为实施例1中得到的抗体SDS-PAGE检测结果图；
图2为由标准品浓度和吸光度拟合得到的标准曲线。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
以下实施例中所用试剂和原料，除特别说明外，均为市售获得。
实施例1
人抗-Gal-IgG抗体，以人工合成的Gal抗原(α-Gal-BSA)制备免疫亲和柱，取新鲜人血清上柱，进行免疫亲和纯化得到。具体的方法为：
一、免疫亲和制备抗体。
1、以2mg的α-Gal-BSA(市售品，以BSA蛋白为骨架，接枝了半乳糖基的糖抗原，Galα-1,3-Gal-BSA，NPG0203,Dextra Laboratories Ltd)按照常规方法制备免疫亲和柱，取20mL人血清上柱，进行免疫亲和纯化，得到0.84mg纯化抗体。对收集的纯化抗体进行OD280(280nm吸光度值)测定浓度，ELISA检测纯化抗体。
包被α-Gal-BSA 1μg/孔，采用间接ELISA检测所产生的抗体活性，检测步骤如下：
1.1用PBS将抗原稀释抗原到10μg/mL；
1.2将稀释好的抗原按照100μL/well加到96孔板中；
1.3加盖，4℃过夜，或37℃2h；
1.4甩去孔内液体，用PBS洗三次，200μL/well，拍干；
1.5用5％milk 200μL/well封闭；
1.6封闭1h，每15min轻拍；
1.7甩去孔内液体，用PBS洗一次，200μL/well，拍干；
1.8加一抗，5％milk稀释，100μL/well；
1.9孵育1h，每15min轻拍；
1.10甩去孔内液体，用PBS洗三次，200μL/well，拍干；
1.11加二抗，5％milk稀释，100μL/well；
1.12孵育1h，每15min轻拍；
1.13预热TMB底物于室温，同时开启酶标仪预热；
1.14 PBS洗5次，250μL/well，前三次5min，后两次10min，拍干；
1.15 TMB底物AB各加50μL/well，室温显色20min；
1.16使用扫描仪将图片扫描记录，加入终止液50μL/well，使用酶标仪读取OD450，存档，结果如下表所示。
表1 20mL血清免疫亲和纯化抗体ELISA检测结果
注：PC positive control，阳性对照；NC negative control，空白对照。
上述ELISA检测结果显示，针对α-Gal-BSA，亲和纯化抗体滴度达到0.5μg/mL时检测到明显的信号值(OD值：0.165)，背景值(OD值)为：0.061。
2、按照上述方法，分别多次将余下80mL人血清进行免疫亲和纯化；将多次免疫亲和纯化的抗体进行混合，得到亲和纯化抗体。
二、IgG抗体纯化。
将上述得到的亲和纯化抗体用Protein A进行纯化，洗脱的纯化抗体为IgG抗体，并保留流过液。
具体如下：
1、柱平衡：从冰箱取亲和柱，本实施例中选用Protein A柱(柱体积为1mL，市售品)，加入10倍柱体积的PBS冲洗；
2、上样：室温将处理后的样品过柱，3～5次；
3、清洗：加入10倍柱体积室温的PBS冲洗；
4、洗脱：用5mL pH 2.7 Gly-Cl(制备方法：1.9g的甘氨酸加入500mL水中，用HCl调节pH值到2.7)洗脱液洗脱，5管收集，编号为1～5，再用3mL pH1.9 Gly-Cl(制备方法：1.9g的甘氨酸加入500mL水中，用HCl调节pH值到1.9)洗脱液依次洗脱，3管收集，编号为6～8，以278-282nm为目标抗体吸收波长进行监测，收集目标抗体所在洗脱液，并用PH9.0 Tris-Cl中和液进行中和，最终抗体缓冲液为：50mM Glycine，100mM Tris-Cl，150mM NaCl，0.1mMEDTA，PH 7.4～8；
5、测定：紫外分光光度计测定样品在280nm波长下的吸光值，最终留下编号为3的收集管中洗脱峰的抗体。IgG抗体浓度为1mg/mL，即：每毫升抗体缓冲液中含1mg抗体蛋白。
6、质检：进行ELISA检测和质量检测。
6.1、ELISA检测。
按照上述方法检测，结果如下。
表2 亲和纯化抗体进行ProteinA纯化后ELISA检测结果
注：PC：positive control,阳性对照(血浆亲和纯化抗体)，NC negativecontrol，空白对照。
上述结果显示分离的IgG抗体滴度能达到0.005μg/mL时检测到明显的信号值(OD值：0.38)，背景值为：0.086。FT(非IgG抗体)呈现阴性反应，证实了IgG抗体的特异性。
6.2对洗脱抗体和流过液分别进行SDS-PAGE纯度验证，方法如下：
6.2.1抗体还原方法：取抗体样品，往其中加5×还原上样buffer(250mM Tris-HCl(pH 6.8)、10％(W/V)SDS、0.5％(W/V)BPB(溴酚兰)、50％(V/V)甘油、5％(W/V)β-巯基乙醇。配制量：5mL)，煮沸10min。
6.2.2跑胶确定抗体的浓度和纯度，上样后考马斯亮蓝染色，结果如图1所示。图1中，M为Mark，1为亲和纯化抗体，2为流过液，3为Protein A洗脱IgG抗体，图中可看出，上述分离出IgG抗体纯度大于90％。
即，100mL人血清通过免疫亲和纯化，纯化出抗体针对α-Gal-BSA滴度达到0.5μg/ml，进一步分离纯化的获得IgG抗体总量1mg，浓度为1mg/mL，体积1.0mL，ELISA抗体滴度能达到0.005μg/mL，SDS-PAGE检测纯度大于90％。
6.3将上述得到的人抗-Gal-IgG抗体进行特异性评价，即：用Galα1-3Gal系列拟糖蛋白(NGP 0334和NGP 0203)、Galα1-3Gal类似物拟糖蛋白(NGP 0330和NGP 0333)、单糖拟糖蛋白(NGP 0105)及核心结构拟糖蛋白(NGP 0202)作为固相抗原进行包被酶标板。考察上述得到的人抗-Gal-IgG抗体与这些抗原反应的特异性。
上述NGP 0334拟糖蛋白为Galα1-3Galβ1-4GlcNAc-BSA，NGP 0203拟糖蛋白为Galα1-3Gal-BSA，NGP 0330拟糖蛋白为Galα1-3Galβ1-4Glc-BSA，NGP 0333拟糖蛋白为Galα1-3Galβ1-3GlcNAc-BSA；NGP 0105拟糖蛋白为L-Fucose-BSA，NGP 0202拟糖蛋白为Galα1-2Gal-BSA。结果如下：
表3 人抗-Gal-IgG抗体特异性评价结果
| 包被抗原(货号代号) | OD值(均值±SD) | 空白对照 |
| NGP 0203 | 1.789±0.078 | 0.018 |
| NGP 0334 | 1.608±0.0045 | 0.069 |
| NGP 0330 | 0.506±0.0063 | 0.136 |
| NGP 0333 | 1.884±0.171 | 0.091 |
| NGP 0105 | 0.082±0.0028 | 0.015 |
| NGP 0202 | 0.061±0.0009 | 0.059 |
| BSA | 0.057±0.0015 | 0.064 |
注：糖蛋白包被浓度：2μg/mL；人抗-Gal-IgG抗体浓度：2μg/mL，二抗：羊抗人IgG-HRP，稀释比例为1:1500。
结果显示上述纯化的人抗-Gal-IgG抗体与NGP 0333、NGP 0334及NGP 0203呈现强阳性反应；对NGP 0330呈现弱阳性反应；对NGP 0105、NGP 0202不反应；对BSA呈现阴性反应，证实了其具有良好的特异性。
实施例2
本实施例所述的人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒，可对临床上进行异种器官移植或者动物源性生物材料植入治疗后，检测患者体内抗-Gal-IgG抗体水平，包括：固相Gal抗原包被板、特异性人抗-Gal-IgG抗体标准品、样品稀释液、浓缩洗液、酶标二抗、显色液A、显色液B、终止液、酶标板贴膜和说明书。
其中：
(1)固相Gal抗原包被板，为Gal抗原包被板，包被原材料为α-Gal-BSA(市售品，以BSA蛋白为骨架，接枝了半乳糖基的糖抗原)。通过以下方法制备得到：配制1～5μg/mL的α-Gal-BSA溶液，其中优选2～3μg/mL的α-Gal-BSA溶液，取96孔板，每孔加入100μL上述溶液，室温低速摇动1～2h，然后转4℃静置过夜，用PBS配制0.05％的吐温-20溶液作为洗液，每孔加入200～300μL洗液，浸泡后甩干，重复3次，之后加入1％的BSA每孔200μL，放入37℃，100rpm震摇，封闭1～2h，最后洗板3～5次，即得到固相Gal抗原包被板。
(2)特异性人抗-Gal-IgG抗体标准品，按照实施例1的方法制备得到。
(3)样品稀释液，为含甘油作为抗体保护剂的PBS溶液。
(4)浓缩洗液，为10～50倍浓缩的0.05％吐温-20。
(5)酶标二抗，为市售的羊抗人IgG-HRP。
(6)显色液A，为含有过氧化氢的缓冲液底物显色A液，配方为：醋酸钠13.6g，柠檬酸1.6g，30％双氧水0.3mL，蒸馏水加至500mL。
(7)显色液B，为含有TMB的缓冲液，配方为：乙二胺四乙酸二钠0.2g，柠檬酸0.95g，甘油50mL，取0.15g TMB溶于3mL DMSO中，蒸馏水加至500mL。
(8)终止液，为10％浓硫酸。
(9)酶标板贴膜，市售。
(10)说明书，记载了本实施例的试剂盒使用方法如下：
1)将待测样品通过离心弃去沉底，吸取上清，根据样品中含有的人抗-Gal-IgG抗体的量，使用样品稀释液进行稀释；
2)标准曲线样品制备：将特异性人抗-Gal-IgG抗体标准品，用样品稀释液进行梯度稀释，初始浓度一般为0.5～10μg/mL，优选1～3μg/mL，依次倍比稀释6～8个浓度；
3)样品抗原-抗体反应：取上述待测样品和标准曲线样品各100μL，加入到固相Gal抗原包被板的小孔内，使样品中的抗体与固相抗原充分反应，于37℃伴随轻度摇动温育1～2小时；用洗液洗板3～5次；
4)酶标二抗反应和显色：每孔加入酶标二抗100μL，置37℃轻度摇动下温育0.5～1小时；洗液洗板3～5次，甩干；将显色液A和显色液B等体积混合均匀，分别在每个孔中加入100μL混合好的显色液，避光显色0.5小时，之后立即加入50μL终止液并使用酶标仪测定450nm的光吸收值；
5)计算检测结果。
实施例3
使用上述实施例的试剂盒，进行标准品的检测，对该试剂盒进行评价。
1、评价方法：
首选取特异性人抗-Gal-IgG抗体标准品，使用样品稀释液稀释到1μg/mL的浓度。再依次进行倍比稀释7个梯度，制备的标注品浓度分别为1μg/mL、0.5μg/mL、0.25μg/mL、0.125μg/mL、0.0625μg/mL、0.03125μg/mL、0.015625μg/mL，同时设不加抗体的样品作为空白对照。
分别将每个浓度标准品加入制备好的Gal抗原包被板孔中，每孔加100μL，做2～3个复孔。将加好样品的包被板放入37℃孵育1h，并伴随温和摇动。随后洗板5次，加入稀释好的酶标二抗，每孔100μL，于37℃孵育0.5h，并伴随温和摇动。随后洗板5次，将显色液A液和显色液B液等体积混合，每孔加入100μL混合好的显色液，于37℃避光孵育0.5h，并伴随温和摇动。随后加入终止液，每孔50μL，并在三分钟内读取450nm处的吸光度值。
2、评价结果：
使用本发明所述试剂盒检测本试剂盒内配套的人抗-Gal-IgG标准品的结果如表2所示。
表4 检测人抗-Gal-IgG标准品结果
以标准品的浓度为横坐标，450nm吸光度值为纵坐标做标准曲线，做标准曲线，如图2所示。
从上述结果可以看出，本发明所述试剂盒能够检测浓度范围为1～0.015625μg/mL的标准品，检测结果R2值大于0.99，回收率均满足80％～120％范围，检测结果可信度高。
实施例4
检测人血清中人抗-Gal-IgG抗体的含量，具体方法如下：
1、采集健康志愿者血液，并分离血清。
2、将血清用样品稀释液进行100倍稀释，之后再进行倍比稀释，做4个梯度稀释倍数分别为100倍、200倍、400倍和800倍，得到待测样品。同时，将人抗-Gal-IgG抗体标准品从1μg/mL的浓度开始，倍比稀释7个梯度，同时设不加抗体的样品作为空白。
3、将上述标准品和待测样品按照顺序加入固相Gal抗原包被板中，每孔100μL，做2～3个复孔。将加好样品的包被板放入37℃孵育1h，并伴随温和摇动。随后洗板5次，加入稀释好的酶标二抗，每孔100μL，于37℃孵育0.5h，并伴随温和摇动。随后洗板5次，将显色液A液和显色液B液等体积混合，每孔加入100μL混合好的显色液，于37℃避光孵育0.5h，并伴随温和摇动。随后加入终止液，每孔50μL，并在三分钟内读取450nm处的吸光度值。
3、根据标准品的吸光度值和浓度做出标准曲线，计算出标注曲线公式，根据公式和每个样品检测的吸光度值，再根据稀释倍数，计算样品的抗-Gal-IgG的浓度。将数据统计如表5。
表5 检测人血清样品中人抗-Gal-IgG抗体的量
从上述结果可以看出，本发明所述试剂盒能够检测出血清样品的人抗-Gal-IgG，通过不同的稀释比例计算，得到的数据之间方差小于20％。对于不同的样品，本发明所述的试剂盒能够检测出样品之间抗-Gal-IgG抗体的差异。
本发明所述试剂盒用于检测人血清中抗Gal-IgG抗体的水平，检测灵敏性好，结果可信度高。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有特异性人抗-Gal-IgG抗体标准品，所述人抗-Gal-IgG抗体对于Gal α 1-3Gal系列拟糖蛋白和Gal α 1-3Gal类似物拟糖蛋白呈现特异性反应；对单糖拟糖蛋白及核心结构拟糖蛋白不反应。
2.根据权利要求1所述的人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，所述Gal α 1-3Gal系列拟糖蛋白为NGP 0334拟糖蛋白和NGP 0203拟糖蛋白；所述Gal α 1-3Gal类似物拟糖蛋白为NGP 0330拟糖蛋白和NGP 0333拟糖蛋白；所述单糖拟糖蛋白为NGP 0105拟糖蛋白；所述核心结构拟糖蛋白为NGP 0202拟糖蛋白。
3.根据权利要求2所述的人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，所述人抗-Gal-IgG抗体通过以下方法制备得到：
免疫亲和纯化：以人工合成的α-Gal-BSA抗原制备免疫亲和柱，将人血清过柱纯化得到免疫亲和纯化抗体；
Protein A纯化：将上述得到的免疫亲和纯化抗体以Protein A进行纯化，得到纯化的人抗-Gal-IgG抗体。
4.根据权利要求3所述的人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，所述Protein A纯化步骤中，包括如下步骤：
柱平衡：以以8～12倍柱体积的PBS冲洗进行Protein A柱平衡；
上样：室温下将人血清过柱3～5次；
清洗：以8～12倍柱体积的PBS冲洗进行清洗；
洗脱：先以4～6个柱体积的pH2.7 Gly-Cl洗脱液洗脱，以278-282nm为目标抗体吸收波长进行监测，收集目标抗体所在洗脱液，以PH 9.0 Tris-Cl中和液中和，即得；
保存：保存于50mM Glycine，100mM Tris-Cl，150mM NaCl，0.1mM EDTA PH 7.4～8的溶液中。
5.根据权利要求1～4任一项所述的人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒还包括：固相Gal抗原包被板、样品稀释液、浓缩洗液、酶标二抗、显色液A、显色液B和终止液。
6.根据权利要求5所述的人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒，其特征在于，
所述样品稀释液为含有甘油抗体保护剂的PBS溶液；
所述浓缩洗液为10～50倍浓缩的0.05％吐温-20；
所述酶标二抗为羊抗人IgG-HRP；
所述显色液A通过以下方法制备：取醋酸钠13.6g，柠檬酸1.6g，30％双氧水0.3mL，蒸馏水加至500mL，即得；
所述显色液B通过以下方法制备：取乙二胺四乙酸二钠0.2g，柠檬酸0.95g，甘油50mL，溶于3mL DMSO中的0.15g TMB，蒸馏水加至500mL，即得；
所述终止液为10％浓硫酸。
7.权利要求1～6任一项所述的人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于：
所述固相Gal抗原包被板的制备方法如下：配制1～5μg/mL的α-Gal-BSA溶液，取96孔板，每孔加入100μL上述溶液，室温低速摇动1～2h，然后转4℃静置过夜，用PBS配制0.05％的吐温-20溶液作为洗液，每孔加入200～300μL洗液，浸泡后甩干，重复3次，之后加入1％的BSA每孔200μL，放入37℃，100rpm震摇，封闭1～2h，最后洗板3～5次，即得到固相Gal抗原包被板；
所述人抗-Gal-IgG抗体标准品制备方法如下：
免疫亲和纯化：以人工合成的α-Gal-BSA抗原制备免疫亲和柱，将人血清过柱纯化得到免疫亲和纯化抗体；
Protein A纯化：将上述得到的免疫亲和纯化抗体以Protein A进行纯化，得到纯化的人抗-Gal-IgG抗体。
8.权利要求1～6任一项所述的人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒在人源性生物材料中人抗-Gal-IgG抗体的检测中的用途。
9.根据权利要求8所述的人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒在人源性生物材料中人抗-Gal-IgG抗体的检测中的用途，其特征在于，所述人源性生物材料为人血清。
10.根据权利要求8所述的人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒在人源性生物材料中人抗-Gal-IgG抗体的检测中的用途，其特征在于，所述检测为定量测定。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810453821.9A CN108646029B (zh) | 2018-05-14 | 2018-05-14 | 人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒及其制备方法和用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810453821.9A CN108646029B (zh) | 2018-05-14 | 2018-05-14 | 人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒及其制备方法和用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108646029A true CN108646029A (zh) | 2018-10-12 |
| CN108646029B CN108646029B (zh) | 2021-07-02 |
Family
ID=63755098
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810453821.9A Active CN108646029B (zh) | 2018-05-14 | 2018-05-14 | 人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒及其制备方法和用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108646029B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109470849A (zh) * | 2018-10-24 | 2019-03-15 | 四川农业大学 | 一种副猪嗜血杆菌抗体检测试剂盒及其使用方法 |
| CN113702482A (zh) * | 2021-08-30 | 2021-11-26 | 中国医学科学院北京协和医院 | 一种IgG N-糖链特征组合及其应用 |
| CN114235781A (zh) * | 2021-12-22 | 2022-03-25 | 上海海洋大学 | 基于表面增强拉曼光谱技术定量检测海水中β-半乳糖苷酶的方法 |
| CN115902204A (zh) * | 2022-09-23 | 2023-04-04 | 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） | 一种外泌体形式半乳糖凝集素9的检测方法与试剂盒 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006091515A2 (en) * | 2005-02-22 | 2006-08-31 | University Of Massachusetts Medical School | Tumour vaccines |
| US20140220052A1 (en) * | 2009-08-17 | 2014-08-07 | University Of Massachusetts | Compositions and methods for wound healing, and for recruitment and activation of macrophages in injured tissues and in implanted biomaterials used for tissue engineering |
| CN103983767A (zh) * | 2014-05-06 | 2014-08-13 | 中国食品药品检定研究院 | 一种检测α-1,3Gal抗原的试剂盒及其应用 |
| WO2015007326A1 (en) * | 2013-07-18 | 2015-01-22 | Institut D'investigació Biomèdica De Bellvitge (Idibell) | Agents comprising a terminal alpha-galactosyl moiety for use in prevention and/or treatment of inflammatory diseases |
| KR101555030B1 (ko) * | 2014-09-04 | 2015-09-22 | 한림대학교 산학협력단 | 장기 이식 거부반응 검사용 키트 |
| CN107073020A (zh) * | 2014-08-22 | 2017-08-18 | 贝尔维特格生物医学研究所（Idibell） | 预防和/或治疗感染的方法和试剂 |
-
2018
- 2018-05-14 CN CN201810453821.9A patent/CN108646029B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006091515A2 (en) * | 2005-02-22 | 2006-08-31 | University Of Massachusetts Medical School | Tumour vaccines |
| US20140220052A1 (en) * | 2009-08-17 | 2014-08-07 | University Of Massachusetts | Compositions and methods for wound healing, and for recruitment and activation of macrophages in injured tissues and in implanted biomaterials used for tissue engineering |
| WO2015007326A1 (en) * | 2013-07-18 | 2015-01-22 | Institut D'investigació Biomèdica De Bellvitge (Idibell) | Agents comprising a terminal alpha-galactosyl moiety for use in prevention and/or treatment of inflammatory diseases |
| CN103983767A (zh) * | 2014-05-06 | 2014-08-13 | 中国食品药品检定研究院 | 一种检测α-1,3Gal抗原的试剂盒及其应用 |
| CN107073020A (zh) * | 2014-08-22 | 2017-08-18 | 贝尔维特格生物医学研究所（Idibell） | 预防和/或治疗感染的方法和试剂 |
| KR101555030B1 (ko) * | 2014-09-04 | 2015-09-22 | 한림대학교 산학협력단 | 장기 이식 거부반응 검사용 키트 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BIOVENDOR: "Quantitative Determination of Human Anti-alpha-galactosyl IgG,IgM,IgA "Natural Antibodies"", 《HTTPS://WWW.BIOVENDOR.COM/FILE/9127/HUMAN%20ANTI-ALPHA-GALACTOSYL%20ELISAS.PDF?VERSION=201812071502》 * |
| URI GALILI, ET AL: "Human Natural Anti-α-Galactosyl IgG II. The Specific Recognition of α(1-3)-linked Galactose Residues", 《J.EXP.MED.》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109470849A (zh) * | 2018-10-24 | 2019-03-15 | 四川农业大学 | 一种副猪嗜血杆菌抗体检测试剂盒及其使用方法 |
| CN113702482A (zh) * | 2021-08-30 | 2021-11-26 | 中国医学科学院北京协和医院 | 一种IgG N-糖链特征组合及其应用 |
| CN114235781A (zh) * | 2021-12-22 | 2022-03-25 | 上海海洋大学 | 基于表面增强拉曼光谱技术定量检测海水中β-半乳糖苷酶的方法 |
| CN115902204A (zh) * | 2022-09-23 | 2023-04-04 | 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） | 一种外泌体形式半乳糖凝集素9的检测方法与试剂盒 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108646029B (zh) | 2021-07-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108646029A (zh) | 人抗-Gal-IgG抗体检测试剂盒及其制备方法和用途 | |
| Chapman et al. | Monoclonal immunoassay for major dust mite (Dermatophageides) allergens, Der p I and Der f I, and quantitative analysis of the allergen content of mite and house dust extracts | |
| ES2194782T5 (es) | Procedimiento mejorado de detección de bacterias acidorresistentes del género Helicobacter en las heces | |
| AU2009271411B2 (en) | Cancer diagnosis based on levels of antibodies against Globo H and its fragments | |
| CN102062777B (zh) | 胶体金层析法原发性胆汁肝硬化检测试纸及其制备方法 | |
| Holt et al. | Screening of blood donors for IgA deficiency: a study of the donor population of south-west England. | |
| EP2631649A1 (en) | Method and device for the rapid diagnosis of diseases in faecal samples | |
| CN103173420B (zh) | 可分泌抗心肌肌钙蛋白i单抗的杂交瘤细胞及应用 | |
| CN102159591A (zh) | 单克隆抗体和使用所述单克隆抗体的免疫测定法 | |
| CN107709995A (zh) | 肺炎支原体检测用免疫层析分析装置 | |
| CN108196054A (zh) | 一种检测甘草酸的试纸条及其制备方法和应用 | |
| CN109212200A (zh) | 一种尼卡巴嗪半抗原、人工抗原及其制备方法与应用 | |
| DE102005057920A1 (de) | Immunoassay zur simultanen immunchemischen Bestimmung eines Analyten (Antigen) und eines gegen den Analyten gerichteten Therapieantikörpers in Proben | |
| DE69731845T2 (de) | Verfahren zum nachweis von protein s | |
| CN1979169A (zh) | 腹泻性贝毒竞争酶联免疫定量检测试剂盒及其制备和应用 | |
| Ingerslev et al. | Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) for the measurement of factor VIII coagulant antigen (CAg) using haemophilic antibodies | |
| EP0554458B1 (en) | Immunoassay and monoclonal antibody for determining diarrheal shellfish poisons | |
| Ylönen et al. | Quantification of a major bovine allergen by a two‐site immunometric assay based on monoclonal antibodies | |
| KR101062437B1 (ko) | 간흡충 특이 항원을 포함하는 간흡충증 진단 키트 및 상기간흡충 특이 항원의 생산을 위한 단클론 항체 | |
| EP0554657B1 (de) | Verfahren zur Bestimmung von Antigenen oder Antikörpern in Gegenwart eines Immunkomplexes | |
| CN102936584A (zh) | 氨基脲衍生物的单克隆抗体及其应用 | |
| US20060275849A1 (en) | Monoclonal antibody reagents | |
| CN104945507A (zh) | 一种卵类黏蛋白兔多克隆抗体的制备方法及免疫分析方法 | |
| Hosoi et al. | Monoclonal anti-human IgG antibodies for quantitation of allergen-specific IgG in human sera | |
| DE60011776T2 (de) | Immunoassay und test-vorrichtung mit integrierter referenz |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 102629 Beijing Daxing District biological medicine industry base No. 31 Hua Tuo road. Applicant after: National Institutes of Food and Drug Control Address before: 100176 8 Hongda Middle Road, Yizhuang, Daxing District, Beijing. Applicant before: National Institutes of Food and Drug Control |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |