CN108642108A - 一种高效的重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法 - Google Patents
一种高效的重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108642108A CN108642108A CN201810478952.2A CN201810478952A CN108642108A CN 108642108 A CN108642108 A CN 108642108A CN 201810478952 A CN201810478952 A CN 201810478952A CN 108642108 A CN108642108 A CN 108642108A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- albumen
- alexin
- recombination
- duck beta
- efficient
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4723—Cationic antimicrobial peptides, e.g. defensins
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种高效的重组鸭β‑防御素‑2蛋白的生产方法，其选用含有1％酵母浸出物、2％蛋白胨、1％甘油的YPG发酵培养基和选用含有1％酵母浸出物、2％蛋白胨、1％甲醇的YPM诱导表达培养基分别进行摇瓶培养，装载量为10％，接种量为10％，生长期控温30℃，诱导表达期控温25℃，24h甲醇浓度为1％，培养周期为96h。本发明针对现有技术中重组鸭β‑防御素‑2蛋白的摇瓶培养进行培养条件优化，具体地优化了培养基成分、温度、装液量和甲醇浓度几个培养条件，从而有效获得更多的重组鸭β‑防御素‑2蛋白，大大提高了摇瓶培养生产重组鸭β‑防御素‑2蛋白的效率，进而为日后大规模发酵生产打下基础。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法。
背景技术
防御素(defensin)是脊椎动物PMN(polymorphonuclear，多形核白细胞)细胞颗粒中的重要的阳离子抗菌肽，属于抗菌肽的一种，其具有广谱抗菌活性，能有效的杀灭包括细菌和真菌在内的许多病原微生物。在禽类动物体内，只发现β-防御素。自Evans等(1994)从鸡与火鸡异嗜性白细胞中发现β-防御素后，已陆续从鸡、鸭、鸵鸟、鹅和企鹅等体内分离发现到30多个禽β-防御素基因(Lynn等，2004；Soman等，2009；廖文艳等，2009；江龙海等，2008；王瑞琴等；2009)。根据Lynn等(2007)的建议，国际上对禽防御素命名进行了统一规定，所有禽来源的防御素都命名为AvBDs(Avian β-defensins)。
自Soman(2009)最早对鸭β-防御素-2(rDAvBD2)的序列进行了详细的鉴定和功能研究后，近几年开始出现重组AvBD2的基因工程体外表达。Ma等(2009)报道了鸭AvBD2在大肠杆菌中的表达研究，发现其表达产物具有抗菌活性，并对温度和酸碱度有较好的抗逆性。王瑞琴(2009)等也将鸭AvBD2基因在大肠杆菌中高效表达，检测到重组鸭AvBD2对多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、大肠杆菌及猪霍乱沙门氏菌均具有抗菌活性。罗艳娜(2010)证明了鸭AvBD2具有免疫反应活性及促免疫增强作用。韩小凤(2011)等成功克隆鸭AvBD2基因，并在毕赤酵母系统中高效表达，并在体内体外验证了其表达产物的广谱抗菌活性。另有动物试验表明，在饲料中添加适量的鸭AvBD2制剂能促进提高断奶仔猪的生长性能(张辉华等，2011)，促进肉鸭生长性能提高(朱锦兰等，2012)，并对多重耐药性大肠杆菌及沙门氏菌感染肉鸡具有很好的治疗效果(严霞等，2016；严霞等，2017)。
现多采用摇瓶培养的方式实现重组鸭β-防御素-2蛋白的生产，然而其受培养条件的限制而未能有效获得更大量的重组鸭β-防御素-2蛋白。因此如何高效地实现重组鸭β-防御素-2蛋白的大量生产，对重组鸭β-防御素-2蛋白在饲料中的应用具有重大意义。
发明内容
本发明的目的在于针对上述现有摇瓶生产技术的不足，提供一种高效的重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法，旨在为下一步大规模发酵生产奠定基础。
本发明所采取的技术方案是：
一种高效的重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法，其选用含有1％酵母浸出物、2％蛋白胨、1％甘油的YPG发酵培养基和选用含有1％酵母浸出物、2％蛋白胨、1％甲醇的YPM诱导表达培养基分别进行摇瓶培养，培养周期为96h。
其中YPG发酵培养基培养为生长期，装载量为10％，接种量为10％，选用500mL摇瓶装入50mL YPG发酵培养基，同时控温30℃、转速230r/min摇瓶培养24h，加入100％甲醇至终浓度为1％(v/v)；YPM诱导表达培养基培养为诱导期，于生长期结束后离心弃上清再加入YPM诱导表达培养基继续摇瓶培养72h，控温25℃、转速为230r/min，并于48h和72h加入100％甲醇至终浓度为1％(v/v)。
本发明所述酵母浸出物是采用纯化培养的高蛋白面包酵母，经过自溶酶解、分离、真空浓缩、喷雾干燥等工序精制而成，其富含蛋白质、多肽、氨基酸、核苷酸、维生素、微量元素等营养成分，可为微生物培养提供全面均衡的营养，是微生物优质培养基的重要组成部分。
本发明的有益效果是：
本发明针对现有技术中重组鸭β-防御素-2蛋白的摇瓶培养进行培养条件优化，具体地优化了培养基成分、温度、装液量和甲醇浓度几个培养条件，从而有效获得更多的重组鸭β-防御素-2蛋白，大大提高了摇瓶培养生产重组鸭β-防御素-2蛋白的效率，进而为日后大规模发酵生产打下基础。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行具体描述，以便于所属技术领域的人员对本发明的理解。有必要在此特别指出的是，实施例只是用于对本发明做进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，所属领域技术熟练人员，根据上述发明内容对本发明作出的非本质性的改进和调整，应仍属于本发明的保护范围。同时下述所提及的原料未详细说明的，均为市售产品；未详细提及的工艺步骤或制备方法为均为本领域技术人员所知晓的工艺步骤或制备方法。
对比例
一种高效的重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法，其选用含有1％酵母抽提物、2％蛋白胨、1mol/L磷酸钾缓冲液(pH6.0)、1.34％YNB、4×10-5％生物素、1％甘油的BMGY发酵培养基和选用含有1％酵母抽提物、2％蛋白胨、1mol/L磷酸钾缓冲液(pH6.0)、1.34％YNB、4×10-5％生物素、1％甲醇的BMMY诱导表达培养基分别进行摇瓶培养，培养周期为96h。其中BMGY发酵培养基培养为生长期，控制接种量为10％，选用500mL摇瓶装入100mL BMGY发酵培养基，同时控温30℃、转速230r/min摇瓶培养24h，加入100％甲醇至终浓度为1％(v/v)；BMMY诱导表达培养基培养为诱导期，于生长期结束后离心弃上清再加入BMMY诱导表达培养基继续摇瓶培养72h，控温30℃、转速为230r/min，并于48h和72h加入100％甲醇至终浓度为1％(v/v)。
培养周期结束后对重组鸭β-防御素-2蛋白量进行检测，检测得重组鸭β-防御素-2蛋白量为0.1652g/L。
实施例
一种高效的重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法，其选用含有1％酵母浸出物、2％蛋白胨、1％甘油的YPG发酵培养基和选用含有1％酵母浸出物、2％蛋白胨、1％甲醇的YPM诱导表达培养基分别进行摇瓶培养，培养周期为96h。其中YPG发酵培养基培养为生长期，控制接种量为10％，选用500mL摇瓶装入50mL YPG发酵培养基，同时控温30℃、转速230r/min摇瓶培养24h，加入100％甲醇至终浓度为1％(v/v)；YPM诱导表达培养基培养为诱导期，于生长期结束后离心弃上清再加入YPM诱导表达培养基继续摇瓶培养72h，控温25℃、转速为230r/min，并于48h和72h加入100％甲醇至终浓度为1％(v/v)。
培养周期结束后对重组鸭β-防御素-2蛋白量进行检测，检测得重组鸭β-防御素-2蛋白量为0.23g/L，比上述摇瓶培养条件优化前，即对比例所得的重组鸭β-防御素-2蛋白量提升了39.39％。
上述实施例为本发明的优选实施例，凡与本发明类似的工艺及所作的等效变化，均应属于本发明的保护范畴。
Claims (4)
1.一种高效的重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法，其特征在于：
选用含有1％酵母浸出物、2％蛋白胨、1％甘油的YPG发酵培养基和选用含有1％酵母浸出物、2％蛋白胨、1％甲醇的YPM诱导表达培养基分别进行摇瓶培养，装载量为10％，接种量为10％，生长期控温30℃，诱导表达期控温25℃，24h甲醇浓度为1％，培养周期为96h。
2.根据权利要求1所述的一种高效的重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法，其特征在于：培养过程中于24h、48h和72h加入100％甲醇至终浓度为1％。
3.根据权利要求1所述的一种高效的重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法，其特征在于：采用500mL摇瓶、50mL装液量进行培养。
4.根据权利要求1所述的一种高效的重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法，其特征在于：所述摇瓶培养过程中控制转速为230r/min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810478952.2A CN108642108A (zh) | 2018-05-16 | 2018-05-16 | 一种高效的重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810478952.2A CN108642108A (zh) | 2018-05-16 | 2018-05-16 | 一种高效的重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108642108A true CN108642108A (zh) | 2018-10-12 |
Family
ID=63756767
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810478952.2A Pending CN108642108A (zh) | 2018-05-16 | 2018-05-16 | 一种高效的重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108642108A (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103205477A (zh) * | 2011-12-06 | 2013-07-17 | 佛山科学技术学院 | 一种重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法 |
| CN107365374A (zh) * | 2017-06-15 | 2017-11-21 | 佛山科学技术学院 | 在毕赤酵母中高效表达重组猪表皮生长因子的方法 |
-
2018
- 2018-05-16 CN CN201810478952.2A patent/CN108642108A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103205477A (zh) * | 2011-12-06 | 2013-07-17 | 佛山科学技术学院 | 一种重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法 |
| CN107365374A (zh) * | 2017-06-15 | 2017-11-21 | 佛山科学技术学院 | 在毕赤酵母中高效表达重组猪表皮生长因子的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 李辰: "鸭β--防御素2重组毕赤酵母发酵工艺的优化及对断奶仔猪生长性能的影响", 《豆丁网》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wei et al. | Molecular cloning and characterization of c-type lysozyme gene in orange-spotted grouper, Epinephelus coioides | |
| CN105968214A (zh) | 抗菌抗病毒杂合多肽及其制备方法与应用 | |
| CN104017791A (zh) | 一种热稳定性提高的角蛋白酶突变体及其制备方法 | |
| CN102524518A (zh) | 一种利用侧芽孢杆菌生产抗菌肽的方法 | |
| CN103789317A (zh) | 拟穴青蟹抗菌肽hyastatin基因克隆及编码蛋白重组和用途 | |
| CN105238809A (zh) | 抗菌肽cc31在枯草芽孢杆菌中的表达方法 | |
| Mai et al. | Molecular cloning, characterization, expression and antibacterial analysis of a lysozyme homologue from Fenneropenaeus merguiensis | |
| Ma et al. | Discovery and characterization of Coturnix chinensis avian β‐defensin 10, with broad antibacterial activity | |
| CN104017084A (zh) | 杂合抗菌抗病毒多肽、其制备方法及应用 | |
| CN100485036C (zh) | 一种中国明对虾抗菌蛋白基因及重组表达和应用 | |
| CN101020916A (zh) | 一种抗果蔬病原菌活性肽的制备方法 | |
| CN105255935A (zh) | 抗菌肽cc34在枯草芽孢杆菌中的表达方法 | |
| CN106046173B (zh) | 一种n端融合多聚六肽提高猪溶菌酶抗菌性能的方法 | |
| CN101423840B (zh) | 重组海参溶菌酶的生产方法及由其制得的重组海参溶菌酶 | |
| CN108486085B (zh) | 一种假结核耶尔森氏菌抗真菌蛋白及其编码基因和应用 | |
| CN104356222B (zh) | 一种猪源抗菌肽pr‑39突变体及其制备方法和应用 | |
| CN102295694B (zh) | 一种抗菌多肽及其制备方法和应用 | |
| CN108642108A (zh) | 一种高效的重组鸭β-防御素-2蛋白的生产方法 | |
| CN104961811A (zh) | 嗜水气单胞菌外膜蛋白基因原核表达蛋白及其应用 | |
| CN103555739A (zh) | 一种重组微生物谷氨酰胺转氨酶基因及其制备方法 | |
| KR102004153B1 (ko) | 갯지렁이 유래의 신규한 더로마신 펩티드 및 이의 용도 | |
| CN104686804B (zh) | 一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法 | |
| CN114891678B (zh) | 多粘芽孢杆菌cpl258及其筛选和应用 | |
| CN102241756B (zh) | 黄粉虫抗菌肽TmAMP3m在大肠杆菌中的高效表达及其应用 | |
| CN102276729A (zh) | 抗菌肽lf-th及其大肠杆菌重组制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |