CN108641964A - 一种利用渗透压破碎繁殖绿色杜氏藻的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种利用渗透压破碎繁殖绿色杜氏藻的方法，步骤为：取绿色杜氏藻细胞在高盐度条件下培养；然后放入灭菌的蒸馏水中将藻细胞瞬间吸水涨破；经多次取样在显微镜下观察到细胞膜碎片并无活体藻细胞存在后调节蒸馏水盐度，加微量元素培养液；取试样于凹玻片中，盖上载玻片密封好，在自然光照，25—28℃条件下培养；显微镜观察首先发现有活体藻细胞出现，持续培养后再取样发现细胞形态完整；继续观察藻细胞内部装配完全，且肉眼观察到透明的藻液变为绿色时，说明经渗透压破碎后形成的藻细胞具有繁殖能力。本发明的有益效果是：弥补了繁殖方式中生命均由活体生命产生的理论的缺失；对生命起源和进化的研究有很重要的意义。

Description

一种利用渗透压破碎繁殖绿色杜氏藻的方法
技术领域
本发明涉及一种不同于有性繁殖、无性繁殖的繁殖方式，特别涉及一种利用渗透压破碎繁殖绿色杜氏藻的方法。
背景技术
生物基本的繁殖方式为无性繁殖和有性繁殖。无性繁殖又分为孢子繁殖，分裂繁殖，出芽繁殖，营养繁殖。而雌雄两个亲体的性细胞(配子)结合而发育成一个新个体为有性繁殖。不论有性繁殖还是无性繁殖，都是基于完整的活细胞产生下一代细胞。
在地球形成初期，地球上没有生命的存在，有诸多关于生命起源的假说，但是却没有实例佐证最简单的生命系统细胞是如何从无到有的。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种活体细胞破碎死亡后释放到自然环境中，在一定的环境条件下可以自发重建新的细胞进行繁殖生命从无到有的过程。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种利用渗透压破碎繁殖绿色杜氏藻的方法，包括如下步骤：
S1，取绿色杜氏藻细胞在高盐度条件下培养；S2，将实验耗材进行高压灭菌处理，实验操作在超净工作台中进行；S3，取S1的绿色杜氏藻细胞0.1ml，放入到90ml灭菌的蒸馏水中，将藻细胞瞬间吸水涨破；S4，对S3的涨破藻细胞多次取样，在显微镜下观察到细胞膜碎片，并无活体藻细胞存在后根据盐度配方调节蒸馏水盐度，按1000:1加入微量元素培养液；S5，取步骤S4试样于凹玻片中，盖上载玻片，将玻片用胶带密封好，在自然光照，25—28℃条件下培养；S6，显微镜观察，首先发现有活体藻细胞出现，持续培养后再取样发现细胞形态完整；S7，继续观察：藻细胞内部装配逐步完全，且经过一个时期后，肉眼观察到透明的藻液变为绿色时，经渗透压破碎后形成的藻细胞具有繁殖能力。
S1所述高盐度条件为高于23波美度的培养液，S4所述蒸馏水盐度为3—23波美度的培养液。
S4所述盐度配方成分为：MgSO4 3.5-24g/l、CaCl2 1.1-4.1g/l、MgCl2 2.5-46g/l、KCl0.6-8.8g/l、NaCl 7.8-197.9g/l、NaNO30.085g/l和NaH2PO4 0.003g/l。
所述S5的试样密封过程中避免气泡出现。
本发明的有益效果是：弥补了繁殖方式中生命均由活体生命产生的理论的缺失；绿色杜氏藻是一种低等植物，生命进化过程从低等到高等，从单细胞到多细胞，而绿色杜氏藻中的这个新的繁殖方式可能是生命的起源，对生命起源和进化的研究有很重要的意义。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明：
一种利用渗透压破碎繁殖绿色杜氏藻的方法，步骤为：S1.在高盐度23波美度条件下培养绿色杜氏藻细胞；S2.将实验需要用的耗材进行高压灭菌处理，实验操作在超净工作台中进行；S3.取0.1ml的绿色杜氏藻细胞，放入到90ml灭菌的蒸馏水中，由于比例为1:900.所以藻液的盐度对蒸馏水的影响可以忽略，极大的渗透压力差，超过了绿色杜氏藻的自我调节能力范围，所以藻细胞瞬间吸水涨破；S4，对S3的涨破藻细胞多次取样，在显微镜下观察到细胞膜碎片，并无活体藻细胞存在后根据盐度配方调节蒸馏水盐度，按1000:1加入微量元素培养液；S5.取样于凹玻片中，盖上载玻片，将玻片用胶带密封好，密封过程中避免气泡出现，以便于原位观察。在自然光照，25—28℃条件下培养；S6.显微镜观察发现，有活体藻细胞出现，运动能力强，但是藻细胞内部装配并不完整。持续培养再取样发现，细胞形态完整，装配完全。且经过一个月后，可以肉眼观察到透明的藻液变为绿色，说明这种经渗透压破碎后形成的藻细胞，具有繁殖能力。
上述绿色杜氏藻培养的盐度如下表
绿色杜氏藻是在盐卤水中分离出来的，为了给其最自然地生长环境，培养液的盐度为3—23波美度，成分如下：
实施例1
绿色杜氏藻细胞经过渗透压破碎后，调节盐度到3波美度，即加入硫酸镁3.413g/l，氯化钙1.11g/l，氯化镁2.484g/l，氯化钾0.648g/l，氯化钠27.775g/l，硝酸钠0.085g/l，磷酸二氢钠0.003g/l，加入Walne培养液90μL，摇匀后制成密封玻片，光照条件下培养，玻片进行显微镜观察，在15—20天后发现有可运动的藻细胞产生。
实施例2
绿色杜氏藻细胞经过渗透压破碎后，调节盐度到6波美度，即加入硫酸镁5.438g/l，氯化钙2.07g/l，氯化镁3.62g/l，氯化钾1.22g/l，氯化钠42.418g/l，硝酸钠0.085g/l，磷酸二氢钠0.003g/l，加入Walne培养液90μL，摇匀后制成密封玻片，光照条件下培养，玻片进行显微镜观察，在15—20天后发现有可运动的藻细胞产生。
实施例3
绿色杜氏藻细胞经过渗透压破碎后，调节盐度到8波美度，即加入硫酸镁8.038g/l，氯化钙2.672g/l，氯化镁6.316g/l，氯化钾1.622g/l，氯化钠62.078g/l，硝酸钠0.085g/l，磷酸二氢钠0.003g/l，加入Walne培养液90μL，摇匀后制成密封玻片，光照条件下培养，玻片进行显微镜观察，在15—20天后发现有可运动的藻细胞产生。
实施例4
绿色杜氏藻细胞经过渗透压破碎后，调节盐度到23波美度，即加入硫酸镁24g/l，氯化钙1.429g/l，氯化镁45.98g/l，氯化钾8.802g/l，氯化钠197.913g/l，硝酸钠0.085g/l，磷酸二氢钠0.003g/l，加入Walne培养液90μL，摇匀后制成密封玻片，光照条件下培养，玻片进行显微镜观察，在15—20天后发现有可运动的藻细胞产生。

Claims (4)

1.一种利用渗透压破碎繁殖绿色杜氏藻的方法，其特征是：包括如下步骤：
S1，取绿色杜氏藻细胞在高盐度条件下培养；
S2，将实验耗材进行高压灭菌处理，实验操作在超净工作台中进行；
S3，取S1的绿色杜氏藻细胞0.1ml，放入到90ml灭菌的蒸馏水中，将藻细胞瞬间吸水涨破；
S4，对S3的涨破藻细胞多次取样，在显微镜下观察到细胞膜碎片，并无活体藻细胞存在后根据盐度配方调节蒸馏水盐度，按1000:1加入微量元素培养液；
S5，取步骤S4试样于凹玻片中，盖上载玻片，将玻片用胶带密封好，在自然光照，25—28℃条件下培养；
S6，显微镜观察，首先发现有活体藻细胞出现，持续培养后再取样发现细胞形态完整；
S7，继续观察：藻细胞内部装配逐步完全，且经过一个时期后，肉眼观察到透明的藻液变为绿色时，经渗透压破碎后形成的藻细胞具有繁殖能力。
2.根据权利要求1上述的一种利用渗透压破碎繁殖绿色杜氏藻的方法，其特征是：S1所述高盐度条件为高于23波美度的培养液，S4所述蒸馏水盐度为3—23波美度的培养液。
3.根据权利要求1上述的一种利用渗透压破碎繁殖绿色杜氏藻的方法，其特征是：S4所述盐度配方成分为：MgSO4 3.5-24g/l、CaCl2 1.1-4.1g/l、MgCl2 2.5-46g/l、KCl 0.6-8.8g/l、NaCl 7.8-197.9g/l、NaNO3 0.085g/l和NaH2PO4 0.003g/l。
4.根据权利要求1上述的一种利用渗透压破碎繁殖绿色杜氏藻的方法，其特征是：所述S5的试样密封过程中避免气泡出现。
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