CN108603146A - 用于清洁医疗或牙科仪器的方法 - Google Patents

用于清洁医疗或牙科仪器的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108603146A
CN108603146A CN201680080144.XA CN201680080144A CN108603146A CN 108603146 A CN108603146 A CN 108603146A CN 201680080144 A CN201680080144 A CN 201680080144A CN 108603146 A CN108603146 A CN 108603146A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ala
gly
leu
val
cbz
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201680080144.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN108603146B (zh
Inventor
J·科基亚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Novo Nordisk AS
Original Assignee
Novo Nordisk AS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=55310663&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN108603146(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Novo Nordisk AS filed Critical Novo Nordisk AS
Publication of CN108603146A publication Critical patent/CN108603146A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108603146B publication Critical patent/CN108603146B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C11D3/38663—Stabilised liquid enzyme compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B90/00—Instruments, implements or accessories specially adapted for surgery or diagnosis and not covered by any of the groups A61B1/00 - A61B50/00, e.g. for luxation treatment or for protecting wound edges
    • A61B90/70—Cleaning devices specially adapted for surgical instruments
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61C—DENTISTRY; APPARATUS OR METHODS FOR ORAL OR DENTAL HYGIENE
    • A61C19/00—Dental auxiliary appliances
    • A61C19/002—Cleaning devices specially adapted for dental instruments
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B08—CLEANING
    • B08B—CLEANING IN GENERAL; PREVENTION OF FOULING IN GENERAL
    • B08B3/00—Cleaning by methods involving the use or presence of liquid or steam
    • B08B3/04—Cleaning involving contact with liquid
    • B08B3/08—Cleaning involving contact with liquid the liquid having chemical or dissolving effect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D2111/00—Cleaning compositions characterised by the objects to be cleaned; Cleaning compositions characterised by non-standard cleaning or washing processes
    • C11D2111/10—Objects to be cleaned
    • C11D2111/14—Hard surfaces
    • C11D2111/20—Industrial or commercial equipment, e.g. reactors, tubes or engines

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)

Abstract

本发明涉及有效去除医疗和牙科仪器上的污垢的组合物和方法。与用于清洁医疗和牙科仪器的已知酶组合物相比，所披露的组合物提供了改进的清洁。

Description

用于清洁医疗或牙科仪器的方法
技术领域
本发明涉及用于清洁医疗和牙科仪器的方法。
背景技术
在医疗保健行业，医疗仪器在重新使用前必须彻底清洁和消毒。清洁过程包括多个步骤，其中一些步骤可以是自动化的并且一些步骤可以是手动的。清洗过的仪器可能会被生物污垢(特别是基于蛋白质的污垢)严重弄脏；并且仪器本身可能是尖锐的、小的或不规则形状的，因此损害了对污垢的物理接近。
WO 2014/110015涉及用于清洁医疗和牙科仪器的组合物和方法。所披露的组合物优选地是不起泡的或产生低泡沫，以允许目视检查清洁过程以及安全处理仪器。所披露的组合物优选地使用精选的蛋白酶、碳酸盐和非离子表面活性剂。
发明内容
出人意料地，已经发现所披露的组合物和方法提供了表面(如医疗和牙科仪器)上改进的污垢去除。所披露的组合物在一定pH和温度范围内稳定且可操作。
因此，本发明提供了用于清洁医疗或牙科仪器的方法，该方法包括：
a)将医疗或牙科仪器浸泡在水性组合物中，该水性组合物包含
i)从0.001％w/w至1％w/w的蛋白酶、优选枯草杆菌蛋白酶，和
ii)从0.001％w/w至1％w/w的肽醛蛋白酶稳定剂；
b)任选地用液体洗涤剂组合物清洗仪器；和
c)冲洗仪器；
其中肽醛蛋白酶稳定剂具有式P-B2-B1-B0-H或其具有式P-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M的亚硫酸氢盐加合物，其中
i)H是氢；
ii)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的L-或D-构型的单一氨基酸残基；
iii)B1和B2独立地是单一氨基酸残基；
iv)R独立地选自下组，该组由以下组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基；
v)R'独立地选自下组，该组由以下组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；
vi)R”是C1-6烷基基团；
vii)P是N末端保护基团；并且
viii)M是H或碱金属、优选Na或K。
鉴于以下描述和实施例，这些和其他实施例对于本领域技术人员和其他人员将是显而易见的。
具体实施方式
本披露涉及有效去除医疗和牙科仪器上的生物污垢的组合物和方法。与用于清洁医疗和牙科仪器的已知酶组合物相比，所披露的组合物提供了改进的清洁。
诸位发明人已经发现，通过将肽蛋白酶稳定剂包含在用于医疗或牙科仪器的含蛋白酶的清洁组合物中，该组合物表现出改进的清洁效率。其他蛋白酶稳定剂在本领域中是已知的，如硼酸(boric acid或boric acid)；然而，当包含在类似的清洁组合物中时，这些稳定剂不会导致改进的清洁效率。
蛋白酶稳定剂通常用于在浓缩的含蛋白酶的液体产品的储存过程中抑制蛋白酶活性，以减少酶和其他蛋白质的蛋白水解。在浓缩产品中，稳定剂与蛋白酶结合，但在水稀释时，稳定剂从蛋白酶中释放出来。出人意料地，本发明证明了当用于含蛋白酶的清洁组合物中时，所释放的肽衍生的蛋白酶稳定剂改进了医疗和牙科仪器的清洁。
医疗和牙科仪器
根据本发明进行清洁、清洗和/或浸泡的医疗和牙科仪器包括医疗和牙科装置、仪器或设备，包括可以从用酶清洁组合物清洗中受益的各种医疗或牙科仪器或装置中的任一种。示例性的医疗和牙科仪器和装置包括用于医学或牙科的仪器、装置、工具、器具、器械和设备，包括可以冷消毒、浸泡或清洗然后热消毒、或者以其他方式从所披露的组合物的清洁中受益的那些。这些不同的仪器、装置和设备包括但不限于：诊断仪器、托盘、平底锅、夹持器、架子、镊子、剪刀、剪切机、锯子(例如骨锯和它们的刀片)、止血钳、刀子、凿子、咬骨钳、锉刀、钳子、钻头、钎头、粗锉刀、毛刺、涂布器、碎石机、电梯、夹具、持针器、承载架、夹子、钩子、圆凿、刮匙、牵开器、矫直机、冲头、提取器、勺子、角膜刀、药刀、压榨器、套管针、扩张器、笼子、玻璃器皿、管道、导管、插管、塞子、支架、内窥镜、关节镜和相关设备等、或其组合。
清洁
根据本发明，医疗和牙科仪器通过将其浸泡在水性组合物(清洁组合物)中进行清洁，该水性组合物(清洁组合物)包含从约0.001％w/w至1％w/w的蛋白酶和从约0.001％w/w至1％w/w的肽蛋白酶稳定剂(优选肽醛蛋白酶稳定剂或其亚硫酸氢盐加合物)。水性组合物可以进一步包含一种或多种其他酶(非蛋白酶)和其他适合的清洁成分，如一种或多种表面活性剂、一种或多种润湿剂和/或如下在“液体洗涤剂组合物”下描述的其他成分。组合物还可以包含碱度来源。水性组合物的pH通常是碱性的；优选地，pH在从pH 7至pH 10的范围内。可以直接在组合物中或在5％的水溶液中测量pH。
在本发明的上下文中，“浸泡”是指用上述清洁组合物湿润医疗和牙科仪器，或者将这些仪器浸入或部分浸入清洁组合物中一段时间，或者两者的组合。如果只有仪器的一部分需要清洁，则医疗或牙科仪器可以仅部分地用清洁组合物浸泡。例如，可能希望避免使电子电路或其他电子部件与水性清洁组合物接触。
术语“清洁”是指减少蛋白质污垢的量；因此，在本发明上下文中的“污垢”是蛋白酶可降解的蛋白质物质。在一个具体的实施例中，本发明的污垢是血液、血液成分、血液蛋白、纤维蛋白、白蛋白和/或血红蛋白。
将医疗或牙科仪器浸泡在水性组合物中足够的时间以有效减少或去除仪器上的污垢。根据弄脏的程度，可以将仪器在水性组合物中浸泡至少1分钟。甚至清洁完成后，浸泡仍可以继续。例如，为了方便，清洁可能会持续过夜、或甚至长达24小时。时间上限由仪器的稳健性决定，以避免损坏它们。
医疗或牙科仪器可以在室温与90℃之间、优选20℃与90℃之间、更优选30℃与80℃之间、甚至更优选30℃与70℃之间、最优选在30℃与60℃之间的温度下浸泡在水性组合物中。
医疗和牙科仪器的浸泡可以在有或没有机械作用(如振动或搅拌)的情况下在托盘、桶、平底锅或水槽中进行；或者通过诸如通过仪器清洗器等喷涂进行；通过超声波处理进行，在推车(cart)或笼式清洗机中处理；通过用手持瓶将其作为喷雾剂或泡沫剂手动施用进行；或者通过在实验室玻璃清洗机中机械化清洗进行。
在一个实施例中，使用本发明的方法，医疗或牙科装置和/或非医疗类型的设备的清洁根据EN ISO 15883-1(或者如“II类特殊控制指导文件：医用清洗机和医用清洗机-消毒器；医疗器械行业和FDA审查人员指南(Class II Special Controls GuidanceDocument:Medical Washers and Medical Washer-Disinfectors；Guidance for theMedical Device Industry and FDA Review Staff)”，美国食品和药物管理局，2002年2月中所描述的)在(医用)清洗机-消毒器中进行。
在被弄脏的医疗或牙科仪器的浸泡过程中，医疗装置或医疗装置的部分与有效量的包含蛋白酶和肽醛蛋白酶稳定剂的水性组合物接触。所使用的组合物的实际量将基于使用者的判断，并且将取决于诸如组合物的特定产品配方、组合物的浓度、待浸泡的被弄脏的物品的数量以及物品的弄脏程度等因素。随后，物件可以经受手动或机器清洗或冲洗方法，涉及进一步的清洗步骤和使用洗涤剂组合物，和/或经受手动或机器冲洗方法。所披露的组合物和方法通过减少清洁过程中所需的擦洗量来有效去除仪器上的污垢。
包含蛋白酶和肽醛蛋白酶稳定剂的水性组合物可以用于清洗或浸泡仪器(如医疗或牙科仪器或装置)的各种机器中。这些机器可以用液体形式或粉末或其他固体形式的组合物手动填充。这些机器也可以自动分配所披露的组合物。这种分配可以包括溶解清洁组合物以形成第一液体浓缩物组合物，任选地稀释第一液体浓缩物组合物以产生第二液体浓缩物组合物(其浓度较低)，并且将第二液体浓缩物组合物稀释到清洗或浸泡室中以形成使用组合物。使用组合物可以用来清洗或浸泡仪器。这种分配也可以包括一次溶解固体清洁组合物以形成使用溶液。
除了清洁医疗和牙科仪器和装置之外，所披露的水性清洁组合物还可以用于清洁其他表面，包括食品制备设备，如冷冻机、烤箱、传送带、分配器、轧机(slabber)、修剪机、切片机、漏斗、分级机、秤、包装设备、刀片、刀具、肉锯和其他厨房工具。所披露的组合物还可以用于手动和自动餐具洗涤和器皿洗涤应用中、用作餐具和器皿的预浸泡剂、用作作为具有低压射流的开放式清洗装置的powersink应用中的洗涤剂以及用作硬表面清洁剂用于在厨房、熟食店、杂货店、肉店、面包店、餐馆和冷藏区中使用。它还可以用作玻璃(如食品零售空间、排水沟、浴室表面、就地清洁设备、油轮和运输车辆清洁以及洗瓶等中发现的玻璃)的硬表面清洁剂。所披露的组合物可以用于清洁软表面，如窗帘、衣物、地毯和室内装饰品。最后，所披露的组合物可以用于水处理中以帮助去除水处理设备中的蛋白质沉积物和清洁膜。
蛋白酶
用于在本发明中使用的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源(例如植物或微生物来源)的那些。优选的是微生物来源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。
优选地，蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶。在本发明的上下文中，枯草杆菌蛋白酶家族(EC 3.4.21.62)应如以下文献所述来理解：Siezen等人,Protein Engng.[蛋白质工程]4(1991)719-737和Siezen等人Protein Science[蛋白质科学]6(1997)501-523。如其中所描述的，枯草杆菌蛋白酶家族可以划分为3个亚组，即I-S1(“真正的”枯草杆菌蛋白酶)、I-S2(高碱性蛋白酶)以及细胞内枯草杆菌蛋白酶。
枯草杆菌蛋白酶的实例是来源于芽孢杆菌属的那些，如描述于WO 89/06279中的枯草杆菌蛋白酶lentus、迟缓芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及蛋白酶PD138(WO 93/18140)。另外的实例描述于WO 98/020115、WO 01/44452、WO 01/58275、WO 01/58276、WO 03/006602以及WO 04/099401中。
有用的变体的实例描述于WO 92/19729、WO 98/20115、WO 98/20116以及WO 98/34946中，尤其是在一个或多个以下位置中具有取代的变体：3、4、9、15、27、36、57、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、160、167、170、194、195、199、205、206、217、218、222、224、232、235、236、245、248、252以及274，使用BPN’编号。更优选地，这些枯草杆菌酶变体可以包含以下突变：S3T、V4I、S9R、A15T、K27R、*36D、V68A、N76D、N87S,R、*97E、A98S、S99G,D,A、S99AD、S101G,M,R、S103A、V104I,Y,N、S106A、G118V,R、H120D,N、N123S、S128L、P129Q、S130A、G160D、Y167A、R170S、A194P、G195E、V199M、V205I、L217D、N218D、M222S、A232V、K235L、Q236H、Q245R、N252K、T274A(使用BPN’编号)。
可商购的枯草杆菌蛋白酶的实例包括KannaseTM、EverlaseTM、PrimaseTM、DuralaseTM、EsperaseTM、AlcalaseTM、DurazymTM、SavinaseTM、OvozymeTM、LiquanaseTM、CoronaseTM、PolarzymeTM、PyraseTM以及Clear-LensTMPro；BlazeTM(诺维信公司(NovozymesA/S))。其他可商购的蛋白酶包括RonozymeTMPro、MaxataseTM、MaxacalTM、MaxapemTM、OpticleanTM、ProperaseTM、PurafectTM、Purafect OxTM、Purafact PrimeTM、ExcellaseTM、FN2TM、FN3TM以及FN4TM(可从杜邦公司(Dupont)获得)。
在本发明的一个实施例中，该枯草杆菌蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶309或枯草杆菌蛋白酶BPN’、或任何这些的变体。优选地，该枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少70％的序列一致性，优选地至少75％，更优选地至少80％，更优选地至少85％，更优选地至少90％，更优选地至少95％、96％、97％、98％、99％，并且最优选地100％的序列一致性。在一个实施例中，该枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列是SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。
在一个实施例中，引入SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个；或多达5个，例如1、2、3、4或5个。这些氨基酸改变可以具有次要性质，即不显著影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基-或羧基末端延伸，如氨基末端甲硫氨酸残基；至多20-25个残基的小接头肽；或通过改变净电荷或另一功能来促进纯化的小延伸，如多组氨酸序列(poly-histidine tract)、抗原性表位或结合结构域。
保守取代的实例是在下组的范围内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代在本领域中是已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],Academic Press[学术出版社],New York[纽约]中进行了描述。常见取代是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。
可以根据本领域中已知的程序(如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085))来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且测试所得突变分子的枯草杆菌蛋白酶活性以鉴定对分子的活性关键的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。也可以结合假定接触位点氨基酸的突变，通过如核磁共振、结晶学、电子衍射或光亲和标记等技术进行测定，来对结构进行物理学分析，从而确定枯草杆菌蛋白酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见例如，de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生物化学学会联盟通讯]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的一致性。
可以做出单个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入并且使用已知的诱变、重组和/或改组方法进行测试，随后进行有关筛选程序，如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57；Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625所披露的那些。可以使用的其他方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如，Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO 92/06204)和区域定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145；Ner等人，1988，DNA 7:127)。
两个氨基酸序列之间的关联度通过参数“序列一致性”来描述。出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件(The European MolecularBiology Open Software Suite)，Rice等人,2000,Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列一致性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。将标记为“最长一致性”的Needle输出(使用-非简化(–nobrief)选项获得)用作百分比一致性并且计算如下：
(相同的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)。
非枯草杆菌蛋白酶
根据本发明，有待与枯草杆菌蛋白酶稳定剂(和枯草杆菌蛋白酶)结合的非枯草杆菌蛋白酶可以是选自下组的一种或多种非枯草杆菌蛋白酶，该组由以下组成：脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、果胶酸裂解酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、DNA酶、过水解酶、和氧化还原酶(氧化酶、漆酶、过氧化物酶、卤代过氧化物酶)。
本发明的方法和组合物可以包括1、2、3、4、5、6、7、或8种非枯草杆菌蛋白酶。非枯草杆菌蛋白酶是不为枯草杆菌蛋白酶的酶、优选洗涤剂酶。
一般而言，所选的一种或多种酶的特性应与所选的洗涤剂兼容(即，最适pH、与其他酶和非酶成分的兼容性等)，并且该一种或多种酶应以有效量存在。
脂肪酶/角质酶
适合的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。实例包括来自嗜热丝孢菌属的脂肪酶，例如如描述于EP 258068和EP305216中的来自疏绵状嗜热丝孢菌(早先命名为疏棉状腐质霉)；来自腐质霉属的角质酶，例如如描述于WO 96/13580中的特异腐质霉；假单胞菌属脂肪酶，例如来自产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌(EP 218272)、洋葱假单胞菌(EP 331376)、施氏假单胞菌(GB 1372034)、萤光假单胞菌、假单胞菌属物种菌株SD 705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)；芽孢杆菌属脂肪酶，例如来自枯草芽孢杆菌(Dartois等人,Biochemica et Biophysica Acta[生物化学与生物物理学报],(1993),1131,253-360)、嗜热脂肪芽孢杆菌(JP 64/744992)或短小芽孢杆菌(WO 91/16422)；GDSL型链霉菌属脂肪酶(WO 10/065455)；来自稻瘟病菌的角质酶(WO 10/107560)；来自门多萨假单胞菌的角质酶(US 5,389,536)；来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 11/084412)；嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶(WO 11/084417)；来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO 11/084599)；以及来自灰色链霉菌(WO 11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)(WO 12/137147)的脂肪酶。
其他实例是诸如WO 92/05249、WO 94/01541、EP 407225、EP 260105、WO 95/35381、WO 96/00292、WO 95/30744、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/22615、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/060063、WO 07/087508以及WO 09/109500中所描述的那些等脂肪酶变体。
优选的可商购的脂肪酶包括LipolaseTM、Lipolase UltraTM、以及LipexTM；LecitaseTM、LipolexTM；LipocleanTM、LipoprimeTM(诺维信公司)。其他可商购的脂肪酶包括Lumafast(杰能科国际公司(Genencor Int Inc))；Lipomax(吉斯特·布罗卡德斯公司(Gist-Brocades)/杰能科国际公司)和来自苏威(Solvay)的芽孢杆菌属物种脂肪酶。
糖酶
糖酶是裂解碳水化合物的酶的通用术语。一般来说，糖酶以它们所起作用的底物命名，例如淀粉酶对淀粉酶起作用并且纤维素酶对纤维素起作用。许多糖酶已经适用于清洁和洗衣应用中，如淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、果胶酸裂解酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶以及木聚糖酶，并且所有这些糖酶都可以应用于液体清洁组合物中。
淀粉酶
适合的淀粉酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属获得的α-淀粉酶，例如，在GB 1,296,839中更详细描述的地衣芽孢杆菌的特定菌株。
适合的淀粉酶的实例包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQID NO:3具有90％序列一致性的变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO97/43424以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中，如在一个或多个以下位置中具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408以及444。
不同的适合的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是具有在位置181和182处的缺失和在位置193处的取代的那些。其他适合的淀粉酶是包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％序列一致性的变体。这种杂合α-淀粉酶的优选变体是在一个或多个以下位置中具有取代、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209以及Q264。包含示于WO2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ IDNO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选的变体是具有以下取代的那些：
M197T；
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
另外的适合的淀粉酶是具有在WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是在一个或多个以下位置中具有取代、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216以及K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182或位置H183和G184中具有缺失的那些。
可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQID NO:2或SEQ ID NO:7的那些或其与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:7具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选变体是在一个或多个以下位置中具有取代、缺失或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304以及476。更优选的变体是在位置181和182或位置183和184中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304以及476中的一个或多个中具有取代的那些。
可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的淀粉酶或其与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90％序列一致性或与WO01/66712中的SEQ ID NO:10具有90％序列一致性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选变体是在一个或多个以下位置中具有取代、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211和264。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ IDNO:2具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO:2的优选变体是具有C末端截短和/或在一个或多个以下位置中具有取代、缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和G475。SEQ ID NO:2的更优选变体是在一个或多个以下位置中具有取代：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E以及G475K，和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183中具有缺失的那些。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中这些变体是C末端截短的并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
其他的适合的淀粉酶是具有在WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的淀粉酶或与SEQID NO:12具有90％序列一致性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12的一个或多个以下位置中具有取代、缺失或插入的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K及R458K的变体，以及在选自下组的一个或多个位置中另外具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339，最优选的是在所有这些位置中另外具有取代的变体。
其他的实例是淀粉酶变体，如在WO 2011/098531、WO 2013/001078和WO 2013/001087中描述的那些。
可商购的淀粉酶是StainzymeTM、Stainzyme PlusTM、AmplifyTM、ResilienceTM、EverestTM、DuramylTM、TermamylTM、Termamyl UltraTM；NatalaseTM、FungamylTM及BANTM(来自诺维信公司)、RapidaseTM和PurastarTM/EffectenzTM、PoweraseTM和Preferenz S100(来自杰能科国际公司/杜邦公司)。
裂解酶
裂解酶可以是来源于芽孢杆菌属、尤其是地衣芽孢杆菌或粘琼脂芽孢杆菌(B.agaradhaerens)的果胶酸裂解酶，或来源于这些来源中任一种的变体，例如如在US6124127、WO 99/027083、WO 99/027084、WO 02/006442、WO 02/092741、WO 03/095638中所述的，可商购的果胶酸裂解酶是XPectTM、PectawashTM和PectawayTM(诺维信公司)。
甘露聚糖酶
甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性甘露聚糖酶。它可以是来自芽孢杆菌属或腐质霉属的野生型，特别是粘琼脂芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、耐盐嗜碱芽孢杆菌(B.halodurans)、克劳氏芽孢杆菌(B.clausii)或特异腐质霉。适合的甘露聚糖酶描述在WO99/064619中。可商购的甘露聚糖酶是MannawayTM(诺维信公司)。
纤维素酶
适合的纤维素酶可以是细菌或真菌来源的。包括化学或基因修饰的突变体。适合的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳菌属、支顶孢属的纤维素酶，例如披露于US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757以及WO89/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰孢产生的真菌纤维素酶。
尤其适合的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。这类纤维素酶的实例是在EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中描述的纤维素酶。其他实例是诸如在WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US中描述的那些等纤维素酶变体。
可商购的纤维素酶包括CarezymeTM、CelluzymeTM、CellucleanTM、CelluclastTM、EndolaseTM、RenozymeTM、WhitezymeTM(诺维信公司)；ClazinaseTM、Puradax、Puradax HA、和Puradax EG(可从杰能科公司(Genencor)获得)和KAC-500(B)TM(花王公司(KaoCorporation))。
过氧化物酶/氧化酶
适合的过氧化物酶包括由国际生物化学与分子生物学联合会(IUBMB)命名委员会陈述的酶分类EC 1.11.1.7，或源自其中的展示出过氧化物酶活性的任何片段。
适合的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自拟鬼伞属，例如来自灰盖拟鬼伞(C.cinerea)的过氧化物酶(EP 179,486)，及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602以及WO 98/15257中描述的那些。
这些过氧化物酶还包括卤代过氧化物酶，例如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及展示出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶加以分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化从氯根离子形成次氯酸盐。
在一个实施例中，本发明的卤代过氧化物酶是氯过氧化物酶。优选地，该卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶，即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。在本发明的优选方法中，将含钒酸盐的卤代过氧化物酶与氯根离子来源组合。
已经从许多不同真菌，特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycete)真菌组中分离出了卤代过氧化物酶，如卡尔黑霉属(Caldariomyces)(例如，煤卡尔黑霉(C.fumago))、链格孢属、弯孢属(例如，疣枝弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis))、内脐蠕孢属、细基格孢属以及葡萄孢属。
还已经从细菌，如假单胞菌属(例如，吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(例如，金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。
在一个优选的实施例中，该卤代过氧化物酶可源自弯孢属物种，特别是疣枝弯孢或不等弯孢，例如如描述于WO 95/27046中的不等弯孢CBS 102.42或描述于WO 97/04102中的疣枝弯孢CBS 147.63或疣枝弯孢CBS 444.70；或可源自如描述于WO 01/79459中的Drechslera hartlebii、如描述于WO 01/79458中的盐沼小树状霉(Dendryphiellasalina)、如描述于WO 01/79461中的Phaeotrichoconis crotalarie或如描述于WO 01/79460中的Geniculosporium物种。
适合的氧化酶具体包括由酶分类EC 1.10.3.2囊括的任何漆酶或源自其中的展示出漆酶活性的任何片段、或展示出类似活性的化合物，如儿茶酚氧化酶(EC 1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。
优选的漆酶是微生物来源的酶。这些酶可以源自植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。
来自真菌的适合实例包括可源自以下的菌株的漆酶：曲霉属，脉孢菌属(例如，粗糙脉孢菌)，柄孢壳菌属，葡萄孢属，金钱菌属(Collybia)，层孔菌属(Fomes)，香菇属，侧耳属，栓菌属(例如，长绒毛栓菌和变色栓菌)，丝核菌属(例如，立枯丝核菌(R.solani))，拟鬼伞属(例如，灰盖拟鬼伞、毛头拟鬼伞(C.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(C.friesii)及C.plicatilis)，小脆柄菇属(Psathyrella)(例如，白黄小脆柄菇(P.condelleana))，斑褶菇属(例如，蝶形斑褶菇(P.papilionaceus))，毁丝霉属(例如，嗜热毁丝霉)，Schytalidium(例如，S.thermophilum)，多孔菌属(例如，P.pinsitus)，射脉菌属(例如，射脉侧菌(P.radiata))(WO 92/01046)或革盖菌属(例如，毛革盖菌(C.hirsutus))(JP 2238885)。
来自细菌的适合实例包括可源自芽孢杆菌属的菌株的漆酶。优选的是源自拟鬼伞属或毁丝霉属的漆酶；特别是源自灰盖拟鬼伞的漆酶，如披露于WO 97/08325中；或源自嗜热毁丝霉，如披露于WO 95/33836中。
脱氧核糖核酸酶(DNA酶)
适合的脱氧核糖核酸酶(DNA酶)是催化DNA骨架中的磷酸二酯键的水解切割从而降解DNA的任何酶。根据本发明，可获得自细菌的DNA酶是优选的；特别地，可获得自芽孢杆菌属的DNA酶是优选的；特别地，可获得自枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌的DNA酶是优选的。此类DNA酶的实例描述于专利申请WO 2011/098579或PCT/EP2013/075922中。
过水解酶
适合的过水解酶能够催化过水解反应，该反应导致在过氧化物源(例如，过氧化氢)的存在下从羧酸酯(酰)底物产生过酸。虽然许多酶以低水平进行该反应，过水解酶展示出高的过水解:水解比率，通常大于1。适合的过水解酶可以是植物、细菌或真菌来源的。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。
有用的过水解酶的实例包括天然存在的分枝杆菌属过水解酶或其变体。示例性酶来源于耻垢分枝杆菌。这种酶，其酶特性、其结构及其变体描述于WO 2005/056782、WO2008/063400、US 2008/145353以及US2007167344中。
肽醛蛋白酶稳定剂
用于本发明的方法和组合物的肽衍生的蛋白酶稳定剂(“肽蛋白酶稳定剂”)是肽醛或其亚硫酸氢盐加合物。
该肽醛蛋白酶稳定剂具有式P-B3-B2-B1-B0-H或具有式P-B3-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M的加合物，其中
i)H是氢；
ii)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的L-或D-构型的单一氨基酸残基；
iii)B1和B2独立地是单一氨基酸残基；
iv)B3是单一氨基酸残基，或不存在；
v)R独立地选自下组，该组由以下组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基；
vi)R'独立地选自下组，该组由以下组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；
vii)R”是C1-6烷基基团；
viii)P是N末端保护基团、优选甲氧羰基(Moc)或苄氧羰基(Cbz)；并且
ix)M是H或碱金属、优选Na或K。
在一个优选的实施例中，肽醛蛋白酶稳定剂具有式P-B2-B1-B0-H或具有式P-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M的加合物，其中
i)H是氢；
ii)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的L-或D-构型的单一氨基酸残基；
iii)B1和B2独立地是单一氨基酸残基；
iv)R独立地选自下组，该组由以下组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基；
v)R'独立地选自下组，该组由以下组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；
vi)R”是C1-6烷基基团；
vii)P是N末端保护基团、优选甲氧羰基(Moc)或苄氧羰基(Cbz)；并且
viii)M是H或碱金属、优选Na或K。
B0可以是具有L-或D-构型的单一氨基酸残基，它经由氨基酸的C末端连接到H上。B0具有式–NH-CH(R)-C(＝O)-，其中R是C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基侧链，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、苯基或苄基，并且其中R可以任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代。B0的具体实例是D-或L-形式的精氨酸(Arg)、3,4-二羟基苯丙氨酸、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、甲硫氨酸(Met)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、间酪氨酸、对酪氨酸(Tyr)以及缬氨酸(Val)。一个具体实施例是当B0是亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、对酪氨酸以及缬氨酸时。
经由氨基酸的C末端连接到B0上的B1可以是脂肪族、疏水性和/或中性氨基酸。B1的实例是丙氨酸(Ala)、半胱氨酸(Cys)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)以及缬氨酸(Val)。B1的具体实例是丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸以及缬氨酸。一个具体实施例是当B1是丙氨酸、甘氨酸或缬氨酸时。
经由氨基酸的C末端连接到B1上的B2可以是脂肪族、疏水性、中性和/或极性氨基酸。B2的实例是丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、卷须霉啶(capreomycidine，Cpd)、半胱氨酸(Cys)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)以及缬氨酸(Val)。B2的具体实例是丙氨酸、精氨酸、卷须霉啶、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸以及缬氨酸。一个具体实施例是当B2是精氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸时。
经由氨基酸的C末端连接到B2上的B3(如果存在)可以是大型、脂肪族、芳香族、疏水性和/或中性氨基酸。B3的实例是异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、苯基甘氨酸、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)以及缬氨酸(Val)。B3的具体实例是亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸以及色氨酸。
N末端保护基团P可以选自甲酰基、乙酰基(Ac)、苄酰基(Bz)、三氟乙酰基、甲氧基丁二酰基、芳香族和脂肪族氨基甲酸酯保护基团，如芴基甲氧羰基(Fmoc)、甲氧羰基(Moc)、(氟甲氧基)羰基、苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(Boc)以及金刚烷氧羰基；对甲氧基苄基羰基、苄基(Bn)、对甲氧基苄基(PMB)、对甲氧基苯基(PMP)、甲氧基乙酰基、甲氨基羰基、甲基磺酰基、乙基磺酰基、苄基磺酰基、甲基磷酰胺基(MeOP(OH)(＝O))以及苄基磷酰胺基(PhCH2OP(OH)(＝O))。
适合的肽醛描述在WO 2009/118375中。更具体地，该肽醛可以是Cbz-Arg-Ala-Tyr-H、Ac-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-CF3、Cbz-Gly-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-CF3、Moc-Val-Ala-Leu-CF3、Cbz-Gly-Ala-Phe-H、Cbz-Gly-Ala-Phe-CF3、Cbz-Gly-Ala-Val-H、Cbz-Gly-Gly-Tyr-H、Cbz-Gly-Gly-Phe-H、Cbz-Arg-Val-Tyr-H、Cbz-Leu-Val-Tyr-H、Ac-Leu-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Tyr-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Leu-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Phe-H、Ac-Phe-Gly-Val-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Met-H、Ac-Trp-Leu-Val-Tyr-H、MeO-CO-Val-Ala-Leu-H、MeNCO-Val-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Phe-H、MeSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeSO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Val-Ala-Leu-H、EtSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、PhCH2SO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Leu-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Phe-Ala-Leu-H或MeO-P(OH)(O)-Leu-Gly-Ala-Leu-H。用于在本发明的液体组合物中使用的优选的稳定剂是Cbz-Gly-Ala-Tyr-H、或其亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧羰基。
液体洗涤剂组合物
该液体洗涤剂组合物具有物理形式，它不是固体(或气体)。它可以是可倾流的液体、可倾流的凝胶或不可倾流的凝胶。它可以是各向同性的或结构化的、优选各向同性的。它可以是用于在自动洗涤机中洗涤或用于手洗的配制品。
该液体洗涤剂组合物可以是水性的，典型地含有按重量计至少20％并且高达95％的水，例如高达70％的水、高达50％的水、高达40％的水、高达30％的水、或高达20％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包含在水性液体洗涤剂中。水性液体洗涤剂可以含有从0-30％的有机溶剂。液体洗涤剂甚至可以是非水性的，其中水含量低于10％，优选低于5％。
洗涤剂成分可以通过水可溶性小袋中的隔室彼此物理性地分开。因此，可以避免组分间的不良的存储相互作用。在洗涤溶液中，每个隔室的不同溶解曲线还可以引起所选的组分的延迟溶解。
该洗涤剂组合物可以采用单位剂量产品的形式。单位剂量产品是不可重复使用的容器中的单一剂量的包装。它被越来越多地用于洗衣和餐具洗涤的洗涤剂中。洗涤剂单位剂量产品是在单次洗涤中所用的洗涤剂量值的包装(例如，在由水溶性膜制得的袋中)。
袋可以具有适合保存该组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许该组合物从袋中释放出来。该袋由水溶性膜制成，它包含了内部体积。所述内部体积可以分成袋的隔室。优选的膜是高分子材料，优选被制成膜或片的形式的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物，包含可水解降解并且水可溶的聚合物共混物，如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考(Trade reference)M8630下，如由美国Chris Craft In.Prod.Of Gary，Ind.出售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨糖醇及其混合物。袋可以包含固体清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。组合物中，液体组分的隔室可以与含固体的隔室不同(参见例如，US 2009/0011970)。
洗涤剂组分的选择可以包括弄脏的类型和/或程度、进行清洁时的温度、以及洗涤剂产品的配制的考虑。尽管根据具体的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被普通技术人员所理解，组分可以包含另外的功能性。
另外的组分的选择在普通技术人员技术内并且包括常规成分，包括以下列出的示例性、非限制性组分。
表面活性剂
该洗涤剂组合物可以包含一种或多种表面活性剂，它们可以是阴离子的和/或阳离子的和/或非离子的和/或半极性的和/或兼性离子的、或其混合物。在一个具体的实施例中，该洗涤剂组合物包含一种或多种非离子型表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。该一种或多种表面活性剂典型地以按重量计从约0.1％至60％(如约1％至约40％、或约3％至约20％、或约3％至约10％)的水平存在。基于所希望的清洁应用来选择该一种或多种表面活性剂，并且包括本领域中已知的任何一种或多种常规表面活性剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何表面活性剂。
当包含在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约1％至约40％(如从约5％至约30％，包括从约5％至约15％、或从约20％至约25％)的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，具体地，直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸或皂的二酯和单酯及其组合。
当包含在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.1％至约10％的阳离子表面活性剂。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物及其组合。
当包含在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.2％至约40％(例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、或从约8％至约12％)的非离子型表面活性剂。非离子型表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、连同在SPAN和TWEEN商品名下可获得的产品及其组合。
当包含在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.1％至约20％的半极性表面活性剂。半极性表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)(如烷基二甲基氧化胺)、N-(椰油基烷基)-N,N-二甲基氧化胺和N-(牛油-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)氧化胺、脂肪酸链烷醇酰胺和乙氧基化的脂肪酸链烷醇酰胺及其组合。
当包含在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.1％至约10％的兼性离子表面活性剂。兼性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱、烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱及其组合。
助水溶剂
助水溶剂是在水性溶液中溶解疏水化合物(或相反地，在非极性环境中溶解极性物质)的化合物。典型地，助水溶剂同时具有亲水的和疏水的特征(如从表面活性剂已知的所谓两亲特性)；然而助水溶剂的分子结构一般并不有利于自发自聚集，参见例如Hodgdon和Kaler(2007),Current Opinion in Colloid&Interface Science[胶体与界面科学新见]12:121-128的综述。助水溶剂并不显示临界浓度，高于该浓度就会发生如对表面活性剂而言所发现的自聚集以及脂质形成胶束、薄层或其他很好地定义的中间相。相反，许多助水溶剂显示连续类型的聚集过程，在该过程中聚集物的大小随着浓度增加而增长。然而，许多助水溶剂改变了含有极性和非极性特征的物质的系统(包括水、油、表面活性剂、和聚合物的混合物)的相行为、稳定性、和胶体特性。助水溶剂常规地在从药学、个人护理、食品到技术应用的各个产业中应用。助水溶剂在洗涤剂组合物中的使用允许例如更浓的表面活性剂配制品(如在通过去除水而压缩液体洗涤剂的过程中)而不引起不希望的现象，如相分离或高粘度。
该洗涤剂可以含有按重量计0-5％(如约0.5％至约5％、或约3％至约5％)的助水溶剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何助水溶剂。助水溶剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠及其组合。
助洗剂和共助洗剂
该洗涤剂组合物可以含有按重量计约0-65％(如约5％至约50％)的洗涤剂助洗剂或共助洗剂、或其混合物。在餐具清洗洗涤剂中，助洗剂的水平典型地是40％-65％、特别是50％-65％。助洗剂和/或共助洗剂可以具体是形成具有Ca和Mg离子的水溶性复合物的螫合剂。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括柠檬酸盐、沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐如碳酸钠、可溶性硅酸盐如硅酸钠、层状硅酸盐(例如，来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA，也称为亚氨基二乙醇)、三乙醇胺(TEA，也称为2,2’,2”-次氮基三乙醇)、以及羧甲基菊粉(CMI)及其组合。
该洗涤剂组合物还可以含有按重量计0-50％(如约0.5％至约10％)的洗涤剂共助洗剂或其混合物。该洗涤剂组合物可以单独地包含共助洗剂，或与助洗剂(例如柠檬酸助洗剂)的组合。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐、螯合剂(如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和磷酸盐)、以及烷基琥珀酸或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二丁二酸(iminodisuccinic acid)(IDS)、乙二胺-N,N’-二丁二酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二磷酸(HEDP)、乙二胺四-(亚甲基磷酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基磷酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二丁二酸(iminodisuccinic acid)(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)-亚乙基二胺-N,N’,N’-三乙酸盐(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基磷酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基磷酸)(ATMP)及其组合和盐。其他示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 09/102854、US 5977053中。
聚合物
该洗涤剂可以含有按重量计0-10％(如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％或0.2％-1％)的聚合物。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何聚合物。该聚合物可以作为如上文提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油污清洁和/或抑泡特性。一些聚合物可以具有多于一种的上文提到的特性和/或多于一种的下文提到的基序(motif)。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧化物，例如PAA、PAA/PMA、聚天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物、疏水修饰的CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸乙二酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575以及US 5,955,415中。也考虑了以上提到的聚合物的盐。
另外的酶
该液体洗涤剂组合物可以包含另外的酶，使用其他配制技术，如胶囊化(例如，如在WO 1997/024177、WO 2014/177709或WO 2015/144784中所述的)、(基质)颗粒或酶促水溶性膜(例如，如WO 2014/152674、WO 2014/152547或WO 2013/148492中所述的)。
辅料
还可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何洗涤剂组分。
漂白系统
由于这些组分的不相容性，仍然有少数结合漂白剂和酶的液体洗涤剂的实例(例如，US 5,275,753或WO 99/00478)。该洗涤剂可以含有0-50％的漂白系统。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何漂白系统。适合的漂白系统组分包括漂白催化剂、光漂白剂、漂白活化剂、过氧化氢源如过碳酸钠和过硼酸钠、预成型过酸及其混合物。适合的预成型过酸包括但不限于过氧羧酸及盐、过碳酸及盐、过亚氨酸(perimidic acid)及盐、过氧单硫酸及盐(例如，过硫酸氢钾(Oxone(R))、及其混合物。漂白系统的非限制性实例包括与过酸形成漂白活化剂组合的基于过氧化物的漂白系统，其可以包含例如无机盐，包括碱金属盐如过硼酸盐的钠盐(通常为单水合物或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐。术语漂白活化剂在本文意指与过氧化物漂白剂(像过氧化氢)反应以形成过酸的化合物。因此形成的过酸构成活化的漂白剂。本文将使用的适合漂白活化剂包括属于酯酰胺、酰亚胺或酸酐类别的那些。适合的实例是四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰)氧基]苯磺酸钠(ISONOBS)、二过氧月桂酸、4-(十二酰基氧基)苯磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS)、4-(壬酰基氧基)-苯磺酸盐(NOBS)和/或披露于WO 98/17767中的那些。感兴趣的漂白活化剂的具体家族披露于EP624154中并且在那个家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酸酯(像三醋汀)具有以下优点，它是环境友好的，因为它最终降解为柠檬酸和醇。此外，乙酰柠檬酸三乙酯和三醋汀在储存时在产品中具有良好的水解稳定性，并且它是有效的漂白活化剂。可替代地，该漂白系统可以包含例如酰胺、酰亚胺或砜型的过氧酸。该漂白系统还可以包含过酸，如6-(苯二甲酰亚氨基)过己酸(PAP)。该漂白系统还可以包含漂白催化剂。在一些实施例中，漂白组分可以是选自下组的有机催化剂，该组由以下组成：具有下式的有机催化剂：
及其混合物；其中每个R1独立地是包含从9至24个碳的支链烷基基团或包含从11至24个碳的直链烷基基团，优选地，每个R1独立地是包含从9至18个碳的支链烷基基团或包含从11至18个碳的直链烷基基团，更优选地，每个R1独立地选自下组，该组由以下组成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、正十二烷基、正十四烷基、正十六烷基、正十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。其他示例性漂白系统描述于例如WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO 2007/087259以及WO 2007/087242中。适合的光漂白剂可以例如是磺化的酞菁锌。
洗涤剂产品的配制
本发明的液体洗涤剂组合物可以是任何方便的形式，例如，具有一个或多个隔室的袋、凝胶、或规则的、压缩的或浓缩的液体洗涤剂(参见例如，WO 2009/098660或WO 2010/141301)。
袋可以被配置为单个或多个的隔室。它可以具有适合保存该组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许该组合物从袋中释放出来。该袋由水溶性膜制成，它包含了内部体积。所述内部体积可以分成袋的隔室。优选的膜是高分子材料，优选被制成膜或片的形式的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物，包含可水解降解并且水可溶的聚合物共混物，如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考号M8630下，如由美国印第安纳州的MonoSol有限责任公司出售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨糖醇及其混合物。袋可以包含固体清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的隔室在构成上可以与含有固体的隔室不同。
洗涤剂成分可以通过水可溶性小袋中的隔室彼此物理性地分开。因此，可以避免组分间的不良的存储相互作用。在洗涤溶液中，每个隔室的不同溶解曲线还可以引起所选的组分的延迟溶解。
方法和用途
如以上段落中所述，本发明提供了以下实施例：
实施例1.一种用于清洁医疗或牙科仪器的方法，该方法包括：
a)将该医疗或牙科仪器浸泡在水性组合物中，该水性组合物包含
i)从0.001％w/w至1％w/w的蛋白酶，和
ii)从0.001％w/w至1％w/w的肽醛蛋白酶稳定剂；
b)任选地用液体洗涤剂组合物清洗该仪器；和
c)冲洗该仪器；
其中该肽醛蛋白酶稳定剂具有式P-B3-B2-B1-B0-H或其具有式P-B3-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M的亚硫酸氢盐加合物，其中
i)H是氢；
ii)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的L-或D-构型的单一氨基酸残基；
iii)B1和B2独立地是单一氨基酸残基；
iv)B3是单一氨基酸残基，或不存在；
v)R独立地选自下组，该组由以下组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基；
vi)R'独立地选自下组，该组由以下组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；
vii)R”是C1-6烷基基团；
viii)P是N末端保护基团；并且
ix)M是H或碱金属、优选Na或K。
实施例2.如实施例1所述的方法，其中该蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶。
实施例3.如实施例1或2所述的方法，其中将该医疗或牙科仪器在(a)中的该水性组合物中浸泡足够的时间以减少或去除该仪器上的污垢，优选至少1分钟。
实施例4.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中(b)中的该洗涤剂组合物由表面活性剂和用于洗涤剂和清洁组合物中的其他成分组成。
实施例5.如实施例1-4中任一项所述的方法，其中(a)中的该水性组合物进一步包含一种或多种选自下组的酶，该组由以下组成：淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、DNA酶、过水解酶和氧化还原酶。
实施例6.如实施例1-5中任一项所述的方法，其中(a)中的该水性组合物进一步含有表面活性剂或润湿剂。
实施例7.如实施例1-6中任一项所述的方法，其中(a)中的该水性组合物具有碱性pH，优选在pH 7至pH 10范围内的pH。
实施例8.如实施例1-7中任一项所述的方法，其中B0是亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、对酪氨酸或缬氨酸；优选亮氨酸、苯丙氨酸或对酪氨酸。
实施例9.如实施例1-8中任一项所述的方法，其中B1是丙氨酸、甘氨酸或缬氨酸。
实施例10.如实施例1-9中任一项所述的方法，其中B2是精氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸；优选精氨酸、甘氨酸或缬氨酸。
实施例11.如实施例1-10中任一项所述的方法，其中B3是亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸；优选亮氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸。
实施例12.如实施例1-11中任一项所述的方法，其中P是对甲氧羰基(Moc)或苄氧羰基(Cbz)。
实施例13.如实施例1-12中任一项所述的方法，其中该肽醛蛋白酶稳定剂是Cbz-Arg-Ala-Tyr-H、Ac-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-CF3、Cbz-Gly-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-CF3、Moc-Val-Ala-Leu-CF3、Cbz-Gly-Ala-Phe-H、Cbz-Gly-Ala-Phe-CF3、Cbz-Gly-Ala-Val-H、Cbz-Gly-Gly-Tyr-H、Cbz-Gly-Gly-Phe-H、Cbz-Arg-Val-Tyr-H、Cbz-Leu-Val-Tyr-H、Ac-Leu-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Tyr-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Leu-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Phe-H、Ac-Phe-Gly-Val-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Met-H、Ac-Trp-Leu-Val-Tyr-H、MeO-CO-Val-Ala-Leu-H、MeNCO-Val-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Phe-H、MeSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeSO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Val-Ala-Leu-H、EtSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、PhCH2SO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Leu-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Phe-Ala-Leu-H或MeO-P(OH)(O)-Leu-Gly-Ala-Leu-H或任何这些的亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧羰基并且Moc是甲氧羰基。
实施例14.如实施例1-13中任一项所述的方法，其中该肽醛蛋白酶稳定剂是Cbz-Gly-Ala-Tyr-H或Moc-Val-Ala-Leu-H或其亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧羰基并且Moc是甲氧羰基。
实施例15.如实施例1-14中任一项所述的方法，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQID NO:1所示的氨基酸序列具有至少60％一致性。
实施例16.如实施例1-15中任一项所述的方法，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQID NO:1所示的氨基酸序列具有至少70％一致性。
实施例17.如实施例1-16中任一项所述的方法，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQID NO:1所示的氨基酸序列具有至少80％一致性。
实施例18.如实施例1-17中任一项所述的方法，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQID NO:1所示的氨基酸序列具有至少90％一致性。
实施例19.如实施例1-18中任一项所述的方法，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQID NO:1所示的氨基酸序列具有至少95％一致性。
实施例20.如实施例1-19中任一项所述的方法，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQID NO:1所示的氨基酸序列具有至少98％一致性。
实施例21.如实施例1-20中任一项所述的方法，其中浸泡意味着用该水性组合物润湿或部分润湿该医疗或牙科仪器，或者将该医疗或牙科仪器浸入或部分浸入该水性组合物中。
实施例22.如实施例1-21中任一项所述的方法，其中清洁意味着减少蛋白质污垢的量。
实施例23.如实施例1-22中任一项所述的方法，其中该蛋白质污垢是血液、血液成分、血液蛋白、纤维蛋白、白蛋白和/或血红蛋白。
实施例24.包含蛋白酶和肽蛋白酶稳定剂的水性组合物用于清洁医疗或牙科仪器的用途。
实施例25.根据实施例24所述的用途，其中该蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶，并且该肽蛋白酶稳定剂是肽醛蛋白酶稳定剂或其亚硫酸氢盐加合物。
实施例26.根据实施例25所述的用途，其中该肽醛蛋白酶稳定剂具有式P-B2-B1-B0-H，并且其亚硫酸氢盐加合物具有式P-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M，其中
a)H是氢；
b)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的L-或D-构型的单一氨基酸残基；
c)B1和B2独立地是单一氨基酸残基；
d)R独立地选自下组，该组由以下组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基；
e)R’独立地选自下组，该组由以下组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；
f)R”是C1-6烷基基团；
g)P是N末端保护基团、优选对甲氧羰基(Moc)或苄氧羰基(Cbz)；并且
h)M为H或碱金属、优选Na或K。
实施例27.根据实施例26所述的用途，其中B0是亮氨酸、苯丙氨酸或对酪氨酸；B1是丙氨酸、甘氨酸或缬氨酸；并且B2是精氨酸、甘氨酸或缬氨酸。
实施例28.根据实施例24-27中任一项所述的用途，其中该肽醛蛋白酶稳定剂是Cbz-Arg-Ala-Tyr-H、Ac-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-CF3、Cbz-Gly-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-CF3、Moc-Val-Ala-Leu-CF3、Cbz-Gly-Ala-Phe-H、Cbz-Gly-Ala-Phe-CF3、Cbz-Gly-Ala-Val-H、Cbz-Gly-Gly-Tyr-H、Cbz-Gly-Gly-Phe-H、Cbz-Arg-Val-Tyr-H、Cbz-Leu-Val-Tyr-H、MeO-CO-Val-Ala-Leu-H、MeNCO-Val-Ala-Leu-H、MeSO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Val-Ala-Leu-H、PhCH2SO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Leu-Ala-Leu-H或PhCH2O-P(OH)(O)-Phe-Ala-Leu-H或任何这些的亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧羰基并且Moc是甲氧羰基。
实施例29.根据实施例24-28中任一项所述的用途，其中该肽醛蛋白酶稳定剂是Cbz-Gly-Ala-Tyr-H或Moc-Val-Ala-Leu-H或其亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧羰基并且Moc是甲氧羰基。
实施例30.根据实施例24-29中任一项所述的用途，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少60％一致性。
实施例31.根据实施例24-30中任一项所述的用途，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少70％一致性。
实施例32.根据实施例24-31中任一项所述的用途，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少80％一致性。
实施例33.根据实施例24-32中任一项所述的用途，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少90％一致性。
实施例34.根据实施例24-33中任一项所述的用途，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少95％一致性。
实施例35.根据实施例24-34中任一项所述的用途，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少98％一致性。
实施例36.一种用于清洁医疗或牙科仪器的方法，该方法包括：
a)将该医疗或牙科仪器浸泡在水性组合物中，该水性组合物包含
i)从0.001％w/w至1％w/w的枯草杆菌蛋白酶，和
ii)从0.001％w/w至1％w/w的肽醛蛋白酶稳定剂或其亚硫酸氢盐加合物；
b)任选地用液体洗涤剂组合物清洗该仪器；和
c)冲洗该仪器；
其中该肽醛蛋白酶稳定剂具有式P-B2-B1-B0-H或其具有式P-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M的亚硫酸氢盐加合物，其中
i)H是氢；
ii)B0是亮氨酸、苯丙氨酸或对酪氨酸；
iii)B1和B2独立地是单一氨基酸残基；
iv)P是N末端保护基团；并且
v)M是H或碱金属、优选Na或K。
实施例37.如实施例36所述的方法，其中将该医疗或牙科仪器在(a)中的该水性组合物中浸泡足够的时间以减少或去除该仪器上的污垢，优选至少1分钟。
实施例38.如实施例36或37所述的方法，其中(b)中的该洗涤剂组合物由表面活性剂和用于洗涤剂和清洁组合物中的其他成分组成。
实施例39.如实施例36-38中任一项所述的方法，其中(a)中的该水性组合物进一步包含一种或多种选自下组的酶，该组由以下组成：淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、DNA酶、过水解酶和氧化还原酶。
实施例40.如实施例36-39中任一项所述的方法，其中(a)中的该水性组合物进一步含有表面活性剂或润湿剂。
实施例41.如实施例36-40中任一项所述的方法，其中(a)中的该水性组合物具有碱性pH，优选在pH 7至pH 10范围内的pH。
实施例42.如实施例36-41中任一项所述的方法，其中B1是丙氨酸、甘氨酸或缬氨酸。
实施例43.如实施例36-42中任一项所述的方法，其中B2是精氨酸、甘氨酸或缬氨酸。
实施例44.如实施例36-45中任一项所述的方法，其中P是对甲氧羰基(Moc)或苄氧羰基(Cbz)。
实施例45.如实施例36-44中任一项所述的方法，其中该肽醛蛋白酶稳定剂是Cbz-Arg-Ala-Tyr-H、Ac-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-CF3、Cbz-Gly-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-CF3、Moc-Val-Ala-Leu-CF3、Cbz-Gly-Ala-Phe-H、Cbz-Gly-Ala-Phe-CF3、Cbz-Gly-Ala-Val-H、Cbz-Gly-Gly-Tyr-H、Cbz-Gly-Gly-Phe-H、Cbz-Arg-Val-Tyr-H、Cbz-Leu-Val-Tyr-H、MeO-CO-Val-Ala-Leu-H、MeNCO-Val-Ala-Leu-H、MeSO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Val-Ala-Leu-H、PhCH2SO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Leu-Ala-Leu-H或PhCH2O-P(OH)(O)-Phe-Ala-Leu-H或任何这些的亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧羰基并且Moc是甲氧羰基。
实施例46.如实施例36-45中任一项所述的方法，其中该稳定剂是Cbz-Gly-Ala-Tyr-H或Moc-Val-Ala-Leu-H或其亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧羰基并且Moc是甲氧羰基。
实施例47.如实施例36-46中任一项所述的方法，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少60％一致性。
实施例48.如实施例36-47中任一项所述的方法，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少70％一致性。
实施例49.如实施例36-48中任一项所述的方法，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少80％一致性。
实施例50.如实施例36-49中任一项所述的方法，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少90％一致性。
实施例51.如实施例36-50中任一项所述的方法，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少95％一致性。
实施例52.如实施例36-51中任一项所述的方法，其中该蛋白酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少98％一致性。
实施例53.如实施例36-52中任一项所述的方法，其中浸泡意味着用该水性组合物润湿或部分润湿该医疗或牙科仪器，或者将该医疗或牙科仪器浸入或部分浸入该水性组合物中。
实施例54.如实施例36-53中任一项所述的方法，其中清洁意味着减少蛋白质污垢的量。
实施例55.如实施例36-54中任一项所述的方法，其中该蛋白质污垢是血液、血液成分、血液蛋白、纤维蛋白、白蛋白和/或血红蛋白。
实例
用作缓冲液和底物的化学品是至少试剂级的商业产品。蛋白酶1具有如SEQ IDNO:1中所示的氨基酸序列。蛋白酶2具有如SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列。蛋白酶3具有如SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列。所使用的蛋白酶稳定剂是Cbz-Gly-Ala-NHCH(CH2C6H4pOH)C(OH)(SO3)Na，其中Cbz是苄氧羰基(亚硫酸氢盐(hydrosulfite/bisulfite)形式的肽醛)。
通过在1L蒸馏水中混合5g碳酸氢钠和1g碳酸钠并调节至pH 9来制备碳酸盐缓冲液。
本专利申请的实验用以下描述的标准测试试剂盒进行。
这些测试试剂盒最初是为医院用途(为了确保和定期检查清洗机消毒器和清洁溶液的良好性能)以及必须证明安装在医疗中心(牙医诊所、医院…)的医疗仪器后处理设备/材料的良好功效的资质认证公司开发的。
本专利申请中使用的测试试剂盒全部符合与清洗机消毒器相关的ISO15883。
测试试剂盒
SIMICON-RI清洁指示剂
清洗机消毒器的血迹(纤维蛋白+血红蛋白)；来自SIMICON股份有限公司，Sigmund-Riefler-Bogen 19，81829慕尼黑-里姆(MüncheN-Riem)，德国。
应用领域：清洁指示剂SIMICON RI设计用于验证和常规监测标准和微创手术(MIS)仪器的清洗机消毒器中清洁和消毒过程的清洁功效。
特征：根据ISO 15883，清洁指示剂SIMICON RI被测试污垢污染。
一致性：清洁指示剂SIMICON RI的抗力根据ISO 15883进行调整。如果精确校准了诸如时间、温度、水压和洗涤剂浓度等基本参数，则在清洁循环结束时将完全去除测试点。
规格：
-测试污垢：根据ISO 15883
-载体：不锈钢V4A
-有机负荷：羊血和添加剂
“STF负载检查”清洁指示剂
多方向指示剂，每张4个面，具有各种类型的蛋白质/脂质/多糖污垢；来自英国莱斯特LE5 1QZ汉密尔顿工业园水边路190号彰思礼大厦(Chancery House)的阿尔伯特布朗恩有限公司(Albert BROWNE Ltd)。
应用领域：“STF负载检查”指示剂测试是一种稳定、可重复的用于监测清洗机消毒器的清洁功效的方式。指示条已经设计成与诸如ISO 15883-5、HTM2030和HTM01-05等文件中描述的测试污垢等同的方式执行。当放置在“STF负载检查”夹持器中时，它们代表在正常使用可重复使用的手术仪器期间会发生的典型弄脏。这是一个适用于验证的基准性能测试。指示条模拟堵塞的表面，以呈现逼真的清洗清洁挑战。
特征：“STF负载检查”指示条含有两种蛋白质、脂质和多糖来源。
一致性：清洁指示剂“STF负载检查”的抗力根据ISO 15883、HTM2030和HTM01-05进行调整。如果精确校准了诸如时间、温度、水压和洗涤剂浓度等基本参数，则在清洁循环结束时将完全去除测试点。
规格：
-测试污垢：根据ISO 15883-5、HTM2030和HTM01-05
-载体：塑料片
-有机负荷：两种蛋白质、脂质和多糖来源。
TOSI清洁指示剂
不锈钢试片上的血液污垢。不同蛋白质来源(血红蛋白和纤维蛋白)的混合物。可从Healthmark实业公司(Healthmark Industries Company)，33671Doreka，Fraser，密歇根州48026，美国获得。
应用领域：TOSI是一种与手术仪器的清洁挑战直接相关的血液污垢装置。TOSI装置为评估自动化仪器清洗机的清洁效力提供了一致、可重复且可靠的方法。血液污垢每次都按严格的规格制造。当计量到不锈钢板上时，TOSI完全类似于用干血弄脏的不锈钢仪器。放置在透明塑料夹持器中，挑战与典型地隐藏于视野之外的仪器的区域(即，箱锁)相同。常规使用此测试将有助于确保仪器清洗器以一致的水平执行，从而增强对仪器的常规目视检查。
特征：TOSI指示剂包含几种蛋白质来源：血红蛋白、白蛋白和纤维蛋白。
一致性：清洁指示剂TOSI的抗力根据ISO 15883、AAMI和AORN指南以及ASTM指南D7225进行调整。
规格：
-测试污垢：根据ISO 15883-5、AAMI和AORN指南和ASTM指南D7225
-载体：不锈钢
-有机负荷：几种蛋白质来源-纤维蛋白、白蛋白和血红蛋白。
实例1
使用SIMICON-RI清洁指示剂测量的清洗性能
1.通过制备pH 9的碳酸盐缓冲液，添加1％w/w表面活性剂(70％mergital D8和30％Dehydol PO5)，并添加0.1％w/w酶来制备液体酶溶液。将溶液转移到200ml烧杯(足够大以使测试试剂盒可以浸没)中。
在添加酶和表面活性剂之前，将碳酸盐缓冲液在40℃下在加热浴中预热，并且两者都恰在清洗测试之前添加。
2.将磁力搅拌器添加到洗涤溶液中。将烧杯放置在温度和机械作用(搅拌系统)受控的加热板上。将温度设置为40℃，并且将搅拌作用设置为150rpm。
3.将SIMICON RI医用清洁指示剂从包装中取出并放置在带有钳子的夹持器中。将清洁指示剂浸入烧杯的中心，在由磁力搅拌器产生的涡流中。对于整个测试系列始终将指示剂放在相同的区域。在烧杯中改变这个区域可以显著改变清洗性能。
4.通过测量在指示剂表面上达到100％去污所需的时间(目视观察)来确定清洁性能。计算数次重复的平均值以提高结果的准确性。
5.获得100％去污的时间越短，所测试的酶越好且越有效(参见表1)。
表1.SIMICON RI；达到100％去污所需的时间(分钟)。
实例2
使用STF负载检查清洁指示剂测量的清洗性能(方案1)
1.通过制备pH 9的碳酸盐缓冲液并添加0.02％w/w酶来制备不含表面活性剂的液体酶溶液。将溶液转移到200ml烧杯(足够大以使测试试剂盒可以浸没)中。
在添加酶之前，恰在洗涤测试之前，将碳酸盐缓冲液在40℃下在加热浴中预热。
2.将磁力搅拌器添加到洗涤溶液中。将烧杯放置在温度和机械作用(搅拌系统)受控的加热板上。将温度设置为40℃，并且将搅拌作用设置为150rpm。
3.将“STF负载检查”医用清洁指示剂从包装中取出并放置在带有钳子的夹持器中。将清洁指示剂浸入烧杯的中心，在由磁力搅拌器产生的涡流中。对于整个测试系列始终将指示剂放在相同的区域。在烧杯中改变这个区域可以显著改变清洗性能。
4.通过测量在指示剂表面上达到100％去污所需的时间(目视观察)来确定清洁性能。计算数次重复的平均值以提高结果的准确性。
5.获得100％去污的时间越短，所测试的酶越好且越有效(参见表2)。
表2.STF负载检查；达到100％去污所需的时间(分钟)。
实例3
使用STF负载检查清洁指示剂测量的清洗性能(方案2)
从第1步到第5步，遵循方案1(见上文)。
6.在烧杯中清洗4分钟后，取出“STF负载检查”清洁指示剂
7.将清洁指示剂在自来水中冲洗5秒钟而不接触剩余弄脏部分。
8.将清洁指示剂干燥，同时小心不要使指示剂表面接触毛巾/纸巾或其他任何物体，以免从表面上除去残留的污垢。
9.通过使用“STF负载检查”的DIGIeye设备测量460nm处的反射率值来确定清洁性能。计算数次重复的平均值以提高结果的准确性。
10.反射率值越高，酶越好且越有效(参见表3)。
表3.STF负载检查；在搅拌4分钟后，在460nm处测量的反射率。
实例4
浸泡而不搅拌，使用STF负载检查清洁指示剂测量(方案2)
方案2在没有搅拌下进行。在一些情况下，医疗仪器后处理只能通过浸泡完成。机械动作可以是手动清洁或在自动清洁过程中(手动清洁后)。
将“STF负载检查”指示剂放置在烧杯中，不让指示剂的任何一侧与烧杯表面接触。此程序与“搅拌”方案相比的唯一区别在于所需的时间：在取出指示剂并冲洗之前，将“STF负载检查”指示剂浸入酶浸泡溶液中18分钟。
反射率值越高，所测试的酶越好且越有效(参见表4)。
表4.STF负载检查；在浸泡18分钟后，在460nm处测量的反射率。
实例5
商业医用洗涤剂的清洗性能；STF负载检查或TOSI清洁指示剂
1.在烧杯中制备液体酶洗涤剂/洗涤溶液并在40℃下在加热浴中预热。洗涤溶液中的酶浓度为0.0125％。洗涤剂是商业欧洲医用洗涤剂(表5)或商业亚太医用洗涤剂(表6和表7)。pH由所使用的医用洗涤剂决定。
2.将磁力搅拌器添加到洗涤溶液中(总洗涤溶液为200ml)。将烧杯放置在温度和机械作用(搅拌系统)受控的加热板上。将温度设置为40℃，并且将搅拌作用设置为150rpm。
3.将“STF负载检查”医用清洁指示剂或TOSI医用清洁指示剂从包装中取出并放置在带有钳子的夹持器中。将清洁指示剂浸入烧杯的中心，在由磁力搅拌器产生的涡流中。对于整个测试系列始终将指示剂放在相同的区域。在烧杯中改变这个区域可以显著改变清洗性能。
4.通过测量在指示剂表面上达到100％去污所需的时间(目视观察)来确定清洁性能。计算两次重复的平均值以提高结果的准确性。
5.获得100％去污的时间越短，酶越好且越有效(参见表5-7)。
表5.STF负载检查；达到100％去污所需的时间(分钟)。
表6.STF负载检查；达到100％去污所需的时间(分钟)。
表7.TOSI；达到100％去污所需的时间(分钟)。
序列表
<110> 诺维信公司
<120> 医疗和牙科仪器清洁
<130> 13042-WO-PCT
<160> 13
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 1
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 2
<211> 275
<212> PRT
<213> 解淀粉芽孢杆菌
<400> 2
Ala Gln Ser Val Pro Tyr Gly Val Ser Gln Ile Lys Ala Pro Ala Leu
1 5 10 15
His Ser Gln Gly Tyr Thr Gly Ser Asn Val Lys Val Ala Val Ile Asp
20 25 30
Ser Gly Ile Asp Ser Ser His Pro Asp Leu Lys Val Ala Gly Gly Ala
35 40 45
Ser Met Val Pro Ser Glu Thr Asn Pro Phe Gln Asp Asn Asn Ser His
50 55 60
Gly Thr His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly
65 70 75 80
Val Leu Gly Val Ala Pro Ser Ala Ser Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu
85 90 95
Gly Ala Asp Gly Ser Gly Gln Tyr Ser Trp Ile Ile Asn Gly Ile Glu
100 105 110
Trp Ala Ile Ala Asn Asn Met Asp Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Gly
115 120 125
Pro Ser Gly Ser Ala Ala Leu Lys Ala Ala Val Asp Lys Ala Val Ala
130 135 140
Ser Gly Val Val Val Val Ala Ala Ala Gly Asn Glu Gly Thr Ser Gly
145 150 155 160
Ser Ser Ser Thr Val Gly Tyr Pro Gly Lys Tyr Pro Ser Val Ile Ala
165 170 175
Val Gly Ala Val Asp Ser Ser Asn Gln Arg Ala Ser Phe Ser Ser Val
180 185 190
Gly Pro Glu Leu Asp Val Met Ala Pro Gly Val Ser Ile Gln Ser Thr
195 200 205
Leu Pro Gly Asn Lys Tyr Gly Ala Tyr Asn Gly Thr Ser Met Ala Ser
210 215 220
Pro His Val Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ile Leu Ser Lys His Pro Asn
225 230 235 240
Trp Thr Asn Thr Gln Val Arg Ser Ser Leu Glu Asn Thr Thr Thr Lys
245 250 255
Leu Gly Asp Ser Phe Tyr Tyr Gly Lys Gly Leu Ile Asn Val Gln Ala
260 265 270
Ala Ala Gln
275
<210> 3
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> SEQ ID NO: 1的变体
<400> 3
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Ala Pro Ala Ser Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Pro Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 4
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> SEQ ID NO: 1的变体
<400> 4
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Glu Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Arg Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asp Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Ile Leu Ser Thr Trp Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Asp Thr Trp Glu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 5
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Leu
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 5
Leu Gly Ala Tyr
1
<210> 6
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Phe
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 6
Phe Gly Ala Tyr
1
<210> 7
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Tyr
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 7
Tyr Gly Ala Tyr
1
<210> 8
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Phe；MeO-CO-Phe；MeSO2-Phe；或EtSO2-Phe
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Leu-H
<400> 8
Phe Gly Ala Leu
1
<210> 9
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Phe或MeO-CO-Phe
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 9
Phe Gly Ala Phe
1
<210> 10
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Phe
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 10
Phe Gly Val Tyr
1
<210> 11
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Phe
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Met-H
<400> 11
Phe Gly Ala Met
1
<210> 12
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> 乙酰基-Trp
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 12
Trp Leu Val Tyr
1
<210> 13
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> MeO-P(OH)(O)-Leu
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Leu-H
<400> 13
Leu Gly Ala Leu
1

Claims (15)

1.一种用于清洁医疗或牙科仪器的方法，该方法包括：
(a)将该医疗或牙科仪器浸泡在水性组合物中，该水性组合物包含
i)从0.001％w/w至1％w/w的蛋白酶，和
ii)从0.001％w/w至1％w/w的肽醛蛋白酶稳定剂；
(b)任选地用液体洗涤剂组合物清洗该仪器；和
(c)冲洗该仪器；
其中该肽醛蛋白酶稳定剂具有式P-B3-B2-B1-B0-H或其具有式P-B3-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M的亚硫酸氢盐加合物，其中
i)H是氢；
ii)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的L-或D-构型的单一氨基酸残基；
iii)B1和B2独立地是单一氨基酸残基；
iv)B3是单一氨基酸残基，或不存在；
v)R独立地选自下组，该组由以下组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基；
vi)R'独立地选自下组，该组由以下组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；
vii)R”是C1-6烷基基团；
viii)P是N末端保护基团；并且
ix)M是H或碱金属、优选Na或K。
2.如权利要求1所述的方法，其中该蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中将该医疗或牙科仪器在(a)中的该水性组合物中浸泡足够的时间以减少该仪器上的污垢，优选至少1分钟。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中(b)中的该洗涤剂组合物由表面活性剂和用于洗涤剂和清洁组合物中的其他成分组成。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中(a)中的该水性组合物进一步包含一种或多种选自下组的酶，该组由以下组成：淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、DNA酶、过水解酶和氧化还原酶。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中(a)中的该水性组合物进一步含有表面活性剂或润湿剂。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中(a)中的该水性组合物具有碱性pH，优选在pH 7至pH 10范围内的pH。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中B0是亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、对酪氨酸或缬氨酸；优选亮氨酸、苯丙氨酸或对酪氨酸。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中B1是丙氨酸、甘氨酸或缬氨酸。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中B2是精氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸；优选精氨酸、甘氨酸或缬氨酸。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中B3是亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸；优选亮氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中P是对甲氧羰基(Moc)或苄氧羰基(Cbz)。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中该肽醛蛋白酶稳定剂是Cbz-Arg-Ala-Tyr-H、Ac-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-CF3、Cbz-Gly-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-CF3、Moc-Val-Ala-Leu-CF3、Cbz-Gly-Ala-Phe-H、Cbz-Gly-Ala-Phe-CF3、Cbz-Gly-Ala-Val-H、Cbz-Gly-Gly-Tyr-H、Cbz-Gly-Gly-Phe-H、Cbz-Arg-Val-Tyr-H、Cbz-Leu-Val-Tyr-H、Ac-Leu-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Tyr-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Leu-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Phe-H、Ac-Phe-Gly-Val-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Met-H、Ac-Trp-Leu-Val-Tyr-H、MeO-CO-Val-Ala-Leu-H、MeNCO-Val-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Phe-H、MeSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeSO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Val-Ala-Leu-H、EtSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、PhCH2SO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Leu-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Phe-Ala-Leu-H或MeO-P(OH)(O)-Leu-Gly-Ala-Leu-H或任何这些的亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧羰基并且Moc是甲氧羰基。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中该稳定剂是Cbz-Gly-Ala-Tyr-H或Moc-Val-Ala-Leu-H或其亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧羰基并且Moc是甲氧羰基。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中清洁意味着减少血液、血液成分、血液蛋白、纤维蛋白、白蛋白和/或血红蛋白的量。
CN201680080144.XA 2016-01-28 2016-12-21 用于清洁医疗或牙科仪器的方法 Active CN108603146B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16153226 2016-01-28
EP16153226.2 2016-01-28
PCT/EP2016/082139 WO2017129331A1 (en) 2016-01-28 2016-12-21 Method for cleaning a medical or dental instrument

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108603146A true CN108603146A (zh) 2018-09-28
CN108603146B CN108603146B (zh) 2022-08-02

Family

ID=55310663

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680080144.XA Active CN108603146B (zh) 2016-01-28 2016-12-21 用于清洁医疗或牙科仪器的方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20190024022A1 (zh)
EP (1) EP3408366B1 (zh)
CN (1) CN108603146B (zh)
ES (1) ES2906780T3 (zh)
WO (1) WO2017129331A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115605567A (zh) * 2020-05-07 2023-01-13 诺维信公司（Dk） 医疗清洁组合物、用途以及清洁方法

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109563144B (zh) 2016-06-01 2023-03-28 雅斯娜 化合物
WO2019173688A1 (en) * 2018-03-08 2019-09-12 Ecolab Usa Inc. Solid enzymatic detergent compositions and methods of use and manufacture

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040029752A1 (en) * 2000-04-07 2004-02-12 Alex Sava Process and composition for cleaning medical instruments
EP2271660A2 (en) * 2008-03-26 2011-01-12 Novozymes A/S Stabilized liquid enzyme compositions
CN101945988A (zh) * 2008-02-15 2011-01-12 宝洁公司 清洁组合物
US20110061686A1 (en) * 2008-01-28 2011-03-17 Ecolab Usa Inc. Multiple enzyme cleaner for surgical instruments and endoscopes
GB2482164A (en) * 2010-07-22 2012-01-25 Fujifilm Europ Nv Cleaning composition
AU2010299953A1 (en) * 2009-09-25 2012-03-22 Novozymes A/S Detergent composition
WO2013004636A1 (en) * 2011-07-01 2013-01-10 Novozymes A/S Stabilized subtilisin composition
CN103649289A (zh) * 2011-07-01 2014-03-19 诺维信公司 液体洗涤剂组合物
CN104271726A (zh) * 2012-05-01 2015-01-07 诺维信公司 洗涤剂组合物
CN105164147A (zh) * 2013-04-23 2015-12-16 诺维信公司 具有稳定的枯草杆菌蛋白酶的液体自动餐具清洗洗涤剂组合物

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5985629A (en) 1994-09-09 1999-11-16 Novo Nordisk A/S Cleaning and disinfecting contact lenses with a protease and chloramine-T or chloramine-B
CN103589529A (zh) 2008-11-13 2014-02-19 诺维信公司 洗涤剂组合物
US9133420B2 (en) * 2013-01-08 2015-09-15 Ecolab Usa Inc. Methods of using enzyme compositions
WO2014152674A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Novozymes A/S Enzyme and inhibitor containing water-soluble films

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040029752A1 (en) * 2000-04-07 2004-02-12 Alex Sava Process and composition for cleaning medical instruments
US20110061686A1 (en) * 2008-01-28 2011-03-17 Ecolab Usa Inc. Multiple enzyme cleaner for surgical instruments and endoscopes
CN101945988A (zh) * 2008-02-15 2011-01-12 宝洁公司 清洁组合物
EP2271660A2 (en) * 2008-03-26 2011-01-12 Novozymes A/S Stabilized liquid enzyme compositions
AU2010299953A1 (en) * 2009-09-25 2012-03-22 Novozymes A/S Detergent composition
GB2482164A (en) * 2010-07-22 2012-01-25 Fujifilm Europ Nv Cleaning composition
WO2013004636A1 (en) * 2011-07-01 2013-01-10 Novozymes A/S Stabilized subtilisin composition
CN103649289A (zh) * 2011-07-01 2014-03-19 诺维信公司 液体洗涤剂组合物
CN104271726A (zh) * 2012-05-01 2015-01-07 诺维信公司 洗涤剂组合物
CN105164147A (zh) * 2013-04-23 2015-12-16 诺维信公司 具有稳定的枯草杆菌蛋白酶的液体自动餐具清洗洗涤剂组合物

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115605567A (zh) * 2020-05-07 2023-01-13 诺维信公司（Dk） 医疗清洁组合物、用途以及清洁方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP3408366A1 (en) 2018-12-05
CN108603146B (zh) 2022-08-02
WO2017129331A1 (en) 2017-08-03
EP3408366B1 (en) 2021-12-08
US20190024022A1 (en) 2019-01-24
ES2906780T3 (es) 2022-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20200140786A1 (en) Use of enzyme for washing, method for washing and warewashing composition
ES2763561T3 (es) Composiciones de limpieza y sus usos
JP7032430B2 (ja) クリーニング組成物及びその使用
JP6997082B2 (ja) プロテアーゼおよびアミラーゼ変異体を含む洗剤組成物
CN111394202B (zh) 具有稳定的枯草杆菌蛋白酶的液体自动餐具清洗洗涤剂组合物
JP6825911B2 (ja) 洗剤組成物
CN105073971A (zh) 使用多酶组合物的工业洗涤和机构洗涤
JP2016507597A (ja) 細菌の付着防止
CN108026487A (zh) 包含具有黄原胶降解活性的多肽的洗涤剂组合物
JP6615758B2 (ja) 水可溶性フィルム中の酵素粒子の使用
CN113302270A (zh) 低pH粉末洗涤剂组合物
JP7084868B2 (ja) 洗濯方法、ポリペプチドの使用および洗剤組成物
CN108603146A (zh) 用于清洁医疗或牙科仪器的方法
CN106471110A (zh) 改进的非蛋白酶类酶稳定化
CN110268053A (zh) 包封的固体酶产品
CN109563450A (zh) 稳定的液体过氧化物组合物
CN108138093A (zh) 洗衣方法
US20230357674A1 (en) Medical cleaning composition, use and method of cleaning
AU2023210344A1 (en) Cleaning method, use of enzymes and cleaning composition
CN109844085A (zh) 洗涤剂组合物、洗涤剂组合物的用途和洗涤纺织品的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant