CN108601721A - 用于刺激皮肤细胞中的胶原合成的方法和组合物 - Google Patents

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Abstract

包含选自三肽、四肽及其混合物的第一肽；选自五肽、六肽及其混合物的第二肽；来自海带属的提取物和乳清蛋白的组合物，和用于刺激皮肤细胞中的胶原合成的方法。

Description

用于刺激皮肤细胞中的胶原合成的方法和组合物
技术领域
本发明属于用于治疗老化皮肤并且特别有效地刺激皮肤细胞中胶原的合成的组合物的领域。
发明背景
胶原是皮肤中的主要结构蛋白之一。其可以以纤维状或非纤维状形式发现。纤维状形式是最常见的并且包括胶原亚型I、II、III、V和XI。I型、IV型和V型最经常与皮肤和真皮组织相关。皮肤中存在的胶原通常随着年龄而减少，并引起皮肤上的松弛、细纹和皱纹。任何诱导皮肤细胞增加胶原合成的活性成分都是期望的，因为其改善皮肤细胞中胶原缺乏(其引起细纹、皱纹和皮肤松弛)的不利影响。
已经发现，当与至少一种五肽或六肽、至少一种来自海带属的提取物和乳清蛋白的组合组合时，某些三肽或四肽在刺激皮肤细胞中的胶原合成中具有协同效应。
发明概述
本发明涉及局部组合物，其包含选自三肽、四肽或其混合物的第一肽；选自五肽、六肽或其混合物的第二肽，至少一种来自海带属的提取物，和乳清蛋白。
本发明还涉及通过局部施用组合物来刺激皮肤细胞中的胶原合成的方法，所述组合物包含至少一种选自三肽、四肽或其混合物的第一肽；至少一种选自五肽、六肽或其混合物的第二肽，至少一种来自海带属的提取物，和乳清蛋白。
详述
本发明的组合物可以呈液体、半固体或固体形式，并且可以呈乳液、溶液、悬浮液或无水形式。如果呈溶液或悬浮液形式，则所述组合物可以含有约50％至99.9％水。如果呈乳液形式，则所述组合物可以含有约5％-95％水和约5％-95％油。如果呈无水形式，则所述组合物可以包含约10％-99％油和10％-99％固化剂。
I. 三肽或四肽
本发明的组合物含有至少一种三肽或四肽或其混合物。建议的范围是约0.000001%至约10%，优选约0.000005%至5%，更优选约0.00001%至2.5%。
特别优选的三肽具有INCI名称三肽-32并具有以下氨基酸序列：
S–T–P – NH2
Ser-Thr-Pro-NH2
特别优选的四肽具有INCI名称四肽-26，其具有氨基酸序列：
(SEQ ID No. 1 [[7]]) S-P-L-Q-NH2
Ser-Pro-Leu-Gln-NH2
这些肽由ISP-Vinscience制造，在商标Chronolux®下具有INCI名称三肽-32或在商标Chronogen®下具有INCI名称四肽-26。
五肽或六肽
所述组合物含有至少一种五肽或六肽或其混合物，以总组合物的重量计，其量范围为约0.000001%至5％，优选约0.00001%至2％，更优选约0.0005%至1％。
五肽或六肽可以被酰基基团(诸如乙酰基、棕榈酰基、肉豆蔻酰基等)取代。进一步的具体实例包括六肽1-60(所述范围包括1和60之间的每个整数)，乙酰化、棕榈酰化或肉豆蔻酰化的六肽，诸如乙酰基六肽1、7、8、19、20、22、24、30、31、37、38、39或40。特别优选的是乙酰基六肽-8，其通过六肽-8(含有精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺和甲硫氨酸的合成肽)的乙酰化获得。乙酰基六肽-8可以商品名Argireline®购自Lipotec S.A.，其为约0.05份乙酰基六肽-8、99.35份水(剩余为防腐剂)的溶液。
同样合适的是五肽，其可以是乙酰化的、棕榈酰化的或肉豆蔻酰化的。此类五肽的实例包括五肽1-50，其包括其之间的每个整数。特别优选的是棕榈酰基五肽-5。
特别优选的是具有INCI名称乙酰基-六肽-8、棕榈酰基六肽-12、五肽-3、棕榈酰基五肽-5或其组合的寡肽。
这些肽由国际化妆品成分命名法(INCI)定义，并且是本领域已知的术语。
来自海带属的提取物
所述组合物含有至少一种来自海带属的提取物。海带属是含有30多种褐藻Phaeophyceae(经常被称为海藻)的属。此类来自海带属的提取物包括以下种的那些：深海海带(Laminariaabyssalis)、阿氏颤藻(Laminariaagardhii)、appressirhiza、brasiliensis、brongardiana、bulbosa、bullata、complanata、掌状海带(Laminariadigitata)、ephemera、farlowii、groenlandica、hyperborea、inclinitorhiza、multiplicata、nigripes、楔基海带(Laminariaochroleuca)、灰绿隐杆藻(Laminariapallida)、platymeris、rodriguezi、ruprechtii、sachalinensis、setchellii、sinclairii、solidungula或yezoensis。优选的是其中来自海带属的提取物也是Sirtuin 3的活化剂。优选的是其中所述提取物来自掌状海带，且更具体地具有范围为0.5至3重量％或约0.75至2.5重量％或最优选约1重量％或更高、优选约2％的海带多糖含量和/或甘露醇含量的提取物。掌状海带的合适提取物的实例可以以商品名Mitostime Di购自BarnetProducts，其是91份水、8份掌状海带提取物和1份防腐剂的混合物。优选地，掌状海带提取物通过如下而获得：对冻干藻类水性提取和浸出以及对微滤物进行灭菌，随后反渗透来浓缩活性分子。
在本发明的优选实施方案中，海带提取物可以以范围为0.0001%至5%、优选约0.001%至2.5%、更优选约0.01%至1%的量存在于所述组合物中。
乳清蛋白
所述组合物含有乳清蛋白，以总组合物的重量计，其量范围为0.01%至5％，优选约0.05%至3％，更优选约0.1%至2％。
乳清蛋白是在从凝乳中分离后从乳的液体部分获得的多肽。乳清蛋白可以是水解的。最优选的是由Glanbia Foods销售的具有商品名乳清蛋白NXP的乳清蛋白。
在一个实施方案中，五肽或六肽、海带提取物和乳清蛋白可以预混合物的形式提供给组合物，然后可以将其配制成最终产品。在这种情况下，约2-20份五肽或六肽、1-10份海带提取物和0.1-5份乳清蛋白的比率是适当的。最优选的是10份乙酰基六肽-8、5份掌状海带提取物和1份乳清蛋白的比率。
本发明的组合物，其为胶原合成刺激组合物，可以由以下组成：作为三肽或四肽或其混合物的第一肽，作为五肽或六肽或其混合物的第二肽，来自海带属的提取物，和乳清蛋白，且没有其他成分。
本发明的组合物还可以“基本上由以下组成”：作为三肽或四肽的第一肽；作为五肽或六肽的第二肽，来自海带属的提取物，和乳清蛋白，这意指含有四种成分和仅额外成分的组合物，所述额外成分不影响组合物的基本和新型特征，诸如水、防腐剂、抗氧化剂、pH调节剂、溶剂和惰性成分，诸如不影响组合物的胶原刺激活性的硅氧烷。
本发明的组合物还可以“包含”所提及的四种成分并包括其他成分，包括但不限于本文所述的那些。
其他成分
油
合适的油包括硅氧烷、酯、植物油、合成油，包括但不限于本文所述的那些。所述油可以是挥发性的或非挥发性的，并且优选在室温为可流动液体形式。如果存在的话，以总组合物的重量计，所述油可以范围为约0.5%至85%，优选约1%-75%，更优选约5%-65%。
环状和线性挥发性硅氧烷可得自各种商业来源，包括Dow Corning Corporation和General Electric。Dow Corning的线性挥发性硅氧烷以商品名Dow Corning 244、245、344和200流体销售。这些流体包括六甲基二硅氧烷(粘度0.65厘沲(简称cst))、八甲基三硅氧烷(1.0 cst)、十甲基四硅氧烷(1.5 cst)、十二甲基五硅氧烷(2 cst)及其混合物，其中所有粘度测量均在25℃。
合适的支链挥发性硅氧烷包括烷基聚三甲基硅氧烷，诸如甲基聚三甲基硅氧烷，具有如下通式的支链挥发性硅氧烷：
其以商品名TMF-1.5购自Shin-Etsu Silicones，其在25℃具有1.5厘沲的粘度。
还合适的是各种直链或支链的石蜡烃，其具有5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碳原子，更优选8至16个碳原子。合适的烃类包括戊烷、己烷、庚烷、癸烷、十二烷、十四烷、十三烷、和C8-20异链烷烃。合适的C12异链烷烃是由PermethylCorporation以商品名Permethyl 99A制造的。商购可得的各种C16异链烷烃，诸如异十六烷(具有商品名Permethyl R)，也是合适的。
还合适的是通过羧酸和醇的反应形成的酯。醇和羧酸可以均具有脂肪(C6-30)链。实例包括月桂酸己酯、异硬脂酸丁酯、异硬脂酸十六烷基酯、棕榈酸鲸蜡基酯、新戊酸异硬脂基酯、庚酸硬脂基酯、异壬酸异硬脂基酯、乳酸硬脂基酯、辛酸硬脂基酯、硬脂酸硬脂基酯、异壬酸异壬基酯，等等。
所述酯也可以呈二聚体或三聚体形式。此类酯的实例包括苹果酸二异硬脂基酯、新戊二醇二辛酸酯、癸二酸二丁酯、二鲸蜡硬脂基二聚亚油酸酯、己二酸二鲸蜡基酯、己二酸二异鲸蜡基酯、己二酸二异壬基酯、二异硬脂基二聚亚油酸酯、富马酸二异硬脂基酯、苹果酸二异硬脂基酯、苹果酸二辛酯，等等。
其他类型的酯的实例包括来自花生四烯酸、柠檬酸或山嵛酸的酯，诸如甘油三花生酸酯、柠檬酸三丁酯、柠檬酸三异硬脂基酯、柠檬酸三C12-13烷基酯、三辛酸甘油酯、柠檬酸三辛酰基酯、山嵛酸十三烷基酯、柠檬酸三辛基十二烷基酯、山嵛酸十三烷基酯；或椰油酸十三烷基酯、异壬酸十三烷基酯，等等。
合成的或天然存在的脂肪酸的甘油酯或甘油三酯也适用于组合物中使用。植物和动物源均可使用。此类油的实例包括蓖麻油、羊毛脂油、C10-18甘油三酯、辛酸/癸酸/甘油三酯、甜杏仁油、杏仁油、芝麻油、亚麻荠油、琼崖籽油、椰子油、玉米油、棉花籽油、亚麻籽油、油墨油、橄榄油、棕榈油、雾冰草脂、菜籽油、大豆油、葡萄籽油、葵花籽油、核桃油，等等。
还合适的是合成或半合成甘油酯，诸如脂肪酸甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯，其为已被修饰的天然脂肪或油，例如多元醇诸如甘油的单、二或三酯。在一个实例中，脂肪(C12-22)羧酸与以下反应：一个或多个重复甘油基基团，硬脂酸甘油酯、二异硬脂酸二甘油酯、异硬脂酸聚甘油基-3酯、异硬脂酸聚甘油基-4酯、蓖麻醇酸聚甘油基-6酯、二油酸甘油酯、二异硬脂酸甘油酯、四异硬脂酸甘油酯、三辛酸甘油酯、二硬脂酸二甘油酯、亚油酸甘油酯、肉豆蔻酸甘油酯、异硬脂酸甘油酯、PEG蓖麻油、PEG油酸甘油酯、PEG硬脂酸甘油酯、PEG牛脂酸甘油酯，等等。
水溶性和水可溶性的非挥发性硅油两者也适用于组合物中使用。此类硅氧烷优选地在25℃具有范围为约大于5至800,000 cst、优选20至200,000 cst的粘度。合适的水不溶性硅氧烷包括胺官能硅氧烷，诸如氨基封端的聚二甲基硅氧烷(amodimethicone)。实例包括聚二甲基硅氧烷、苯基聚二甲基硅氧烷、二苯基聚二甲基硅氧烷、苯基聚三甲基硅氧烷、或三甲基甲硅烷氧基苯基聚二甲基硅氧烷。其他实例包括烷基聚二甲基硅氧烷，诸如鲸蜡基聚二甲基硅氧烷、硬脂基聚二甲基硅氧烷、山嵛基聚二甲基硅氧烷等。
表面活性剂
所述组合物可以含有一种或多种表面活性剂，尤其是如果呈乳液形式。然而，如果组合物也是无水的，则可使用此类表面活性剂，并且将帮助分散具有极性的成分，例如色素。此类表面活性剂可以是基于硅氧烷或有机的。表面活性剂将帮助油包水或水包油形式的稳定的乳液的形成。如果存在，则该表面活性剂以总组合物的重量计可范围为约0.001％至30％，优选约0.005％至25％，更优选约0.1％至20％。
硅氧烷表面活性剂可以一般称为聚二甲基硅氧烷共聚醇或烷基聚二甲基硅氧烷共聚醇。在一些情况下，聚合物中重复的环氧乙烷或环氧丙烷单元的数目也是指定的，诸如也被称为PEG-15/PPG-10聚二甲基硅氧烷的聚二甲基硅氧烷共聚醇，其是指在硅氧烷主链上具有含有15个乙二醇单元和10个丙二醇单元的取代基的聚二甲基硅氧烷。对于上述通式结构中的一个或多个甲基基团还可能被更长链烷基(例如，乙基、丙基、丁基等)，或醚诸如甲基醚、乙基醚、丙基醚、丁基醚等取代。
硅氧烷表面活性剂的实例是那些由Dow Corning以商标名Dow Corning 3225C制剂助剂销售的CTFA名称为环四硅氧烷(和)环戊硅氧烷(和)PEG/PPG-18聚二甲基硅氧烷；或5225C制剂助剂，其CTFA名称为环戊硅氧烷(和)PEG/PPG-18/18聚二甲基硅氧烷；或DowComing 190表面活性剂，其CTFA名称为PEG/PPG-18/18聚二甲基硅氧烷；或Dow Corning193流体、Dow Corning 5200，其CTFA名称为月桂基PEG/PPG-18/18聚甲基硅氧烷；或者Goldschmidt销售的Abil EM 90，其CTFA名称为鲸蜡基PEG/PPG-14/14聚二甲基硅氧烷；或者Goldschmidt销售的Abil EM 97，其CTFA名称为双-鲸蜡基PEG/PPG-14/14聚二甲基硅氧烷；或Abil WE 09，其CTFA名称为鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷，在混合物中还含有聚甘油基-4异硬脂酸酯和月桂酸己酯；或Shin-Etsu Silicones销售的KF-6011，其CTFA名称为PEG-11甲基醚聚二甲基硅氧烷；Shin-Etsu Silicones销售的KF-6012，其CTFA名称PEG/PPG-20/22丁基醚聚二甲基硅氧烷；或Shin-Etsu Silicones销售的KF-6013，其CTFA名称为PEG-9聚二甲基硅氧烷；或Shin-Etsu Silicones销售的KF-6015，其CTFA名称为PEG-3聚二甲基硅氧烷；或Shin-Etsu Silicones销售的KF-6016，其CTFA名称为PEG-9甲基醚聚二甲基硅氧烷；或Shin-Etsu Silicones销售的KF-6017，其CTFA名称为PEG-10聚二甲基硅氧烷；或Shin-Etsu Silicones销售的KF-6038，其CTFA名称为月桂基PEG-9聚二甲基甲硅烷氧基乙基聚二甲基硅氧烷。
同样合适的是通常被称为乳化弹性体的各种类型的交联的硅氧烷表面活性剂，其含有至少一个亲水部分诸如聚氧亚烷基化基团。可在本发明的至少一个实施方案中使用的聚氧亚烷基化的硅氧烷弹性体包括Shin-Etsu Silicones以以下名称销售的那些：KSG-21、KSG-20、KSG-30、KSG-31、KSG-32、KSG-33；KSG-210，其是分散在聚二甲基硅氧烷中的聚二甲基硅氧烷/PEG-10/15交联聚合物；KSG-310，其是PEG-15月桂基聚二甲基硅氧烷交联聚合物；KSG-320，其是分散在异十二烷中的PEG-15月桂基聚二甲基硅氧烷交联聚合物；KSG-330(分散在三异辛酸甘油酯(triethylhexanoin)中的前体)、KSG-340，其是PEG-10月桂基聚二甲基硅氧烷交联聚合物和PEG-15月桂基聚二甲基硅氧烷交联聚合物的混合物。
同样合适的是聚甘油化的硅氧烷弹性体，如在PCT/WO 2004/024798(其以其整体通过引用并入本文)公开的那些。此类弹性体包括Shin-Etsu的KSG系列，诸如KSG-710，其是分散在聚二甲基硅氧烷中的聚二甲基硅氧烷/聚甘油-3交联聚合物；或分散在各种溶剂诸如异十二烷、聚二甲基硅氧烷、三异辛酸甘油酯中的月桂基聚二甲基硅氧烷/聚甘油-3交联聚合物，其以Shin-Etsu商标名KSG-810、KSG-820、KSG-830或KSG-840销售。同样合适的是通过Dow Corning以商标名9010和DC9011销售的硅氧烷。
所述组合物可包含一种或多种非离子型有机表面活性剂。合适的非离子型表面活性剂包括通过醇与烯化氧(通常是环氧乙烷或环氧丙烷)的反应形成的烷氧基化的醇，或醚。优选地，所述醇是具有6至30个碳原子的脂肪醇。此类成分的实例包括Steareth 2-100，其是通过硬脂醇和环氧乙烷的反应形成的，且环氧乙烷单元的数目范围为2至100；Beheneth 5-30，其是通过山嵛醇和环氧乙烷反应形成的，其中重复的环氧乙烷单元的数目为5至30；Ceteareth2-100，通过鲸蜡醇和硬脂醇的混合物与环氧乙烷反应形成，其中分子中重复的环氧乙烷单元的数目为2至100；Ceteth 1-45，其通过鲸蜡醇与环氧乙烷反应形成，并且重复的环氧乙烷单元的数目为1至45；等等。单元的所有记载都包括范围之间的所有整数。
其他烷氧基化醇是通过脂肪酸和一、二或多元醇与烯化氧反应形成的。例如，C6-30脂肪羧酸和作为单糖诸如葡萄糖、半乳糖、甲基葡萄糖等的多元醇与烷氧基化的醇的反应产物。实例包括与脂肪酸甘油酯反应的聚合亚烷基二醇，诸如PEG油酸甘油酯、PEG硬脂酸甘油酯、或PEG聚羟基烷酸酯，诸如PEG二聚羟基硬脂酸酯，其中重复亚乙基二醇单元的数目范围为3至1000。
其他合适的非离子型表面活性剂包括烷氧基化山梨聚糖和烷氧基化山梨聚糖衍生物。例如，山梨聚糖的烷氧基化，特别是乙氧基化提供聚烷氧基化山梨聚糖衍生物。聚烷氧基化山梨聚糖的酯化提供山梨聚糖酯，诸如聚山梨醇酯。例如，所述聚烷氧基化山梨聚糖可被C6-30、优选C12-22脂肪酸酯化。此类成分的实例包括聚山梨醇酯20-85、山梨聚糖油酸酯、山梨聚糖倍半油酸酯、山梨聚糖棕榈酸酯、山梨聚糖倍半异硬脂酸酯、山梨聚糖硬脂酸酯，等等。
润湿剂
在组合物中包括一种或多种润湿剂也可以是期望的。如果存在，此类润湿剂以总组合物的重量计可范围为约0.001%至25％，优选约0.005%至20％，更优选约0.1%至15％。合适的润湿剂的实例包括二醇、糖等。合适的二醇呈单聚或多聚形式，并且包括聚乙二醇和聚丙二醇，诸如PEG 4-200，其是具有4至200个重复环氧乙烷单元的聚乙二醇；以及C1-6亚烷基二醇，诸如丙二醇、丁二醇、戊二醇等。其中一些也是多元醇的合适的糖也是合适的润湿剂。此类糖的实例包括葡萄糖、果糖、蜂蜜、氢化蜂蜜、肌醇、麦芽糖、甘露醇、麦芽糖醇、山梨糖醇、蔗糖、木糖醇、木糖等等。同样合适的是尿素。优选地，在本发明组合物中使用的润湿剂是C1-6、优选C2-4亚烷基二醇、最具体地是丁二醇。
植物提取物
在组合物中包括一种或多种植物提取物可以是期望的。如果这样，则建议的范围为以总组合物的重量计约0.0001％至10％、优选地约0.0005％至8％、更优选地约0.001％至5％。合适的植物提取物包括来自植物(草、根、花、果实、种子)，诸如花、果实、蔬菜等等的提取物，包括酵母发酵物提取物、粉团扇藻(Padina pavonica)提取物、嗜热栖热菌(thermus Thermophilis)发酵物提取物、亚麻荠(camelina sativa)籽油、齿叶乳香树(boswellia serrata)提取物、橄榄提取物、拟南芥提取物、银荆(Acacia Dealbata)提取物、银槭(Acer Saccharinum)(糖枫)、嗜酸菌(acidopholus)、菖蒲属(acorus)、七叶树属(aesculus)、伞菌属(agaricus)、龙舌兰属(agave)、龙牙草属(agrimonia)、藻类、芦荟属(aloe)、柑桔属(citrus)、芸苔属(brassica)、樟属(cinnamon)、柑橘、苹果、蓝莓、蔓越莓、桃、梨、柠檬、酸橙、豌豆、海草、咖啡因、绿茶、黄春菊(chamomile)、杨柳(willowbark)、桑树(mulberry)、白罂粟(poppy)和CTFA化妆品成分手册(CTFA Cosmetic Ingredient Handbook)，第8版，第2卷的第1646至1660页中记载的那些。进一步特定实例包括，但不限于光果甘草(Glycyrrhiza Glabra)、黑柳(Salix Nigra)、巨藻(Macrocycstis Pyrifera)、苹果(Pyrus Malus)、草莓虎耳草(Saxifraga Sarmentosa)、酿酒葡萄(Vitis Vinifera)、黑桑(Morus Nigra)、黄芩(Scutellaria Baicalensis)、白花春黄菊(Anthemis Nobilis)、鼠尾草(Salvia Sclarea)、迷迭香(Rosmarinus Officianalis)、柠檬(Citrus Medica Limonum)、人参(Panax Ginseng)、豨莶草(Siegesbeckia Orientalis)、乌梅(Fructus Mume)、泡叶藻(Ascophyllum Nodosum)、双歧杆菌发酵物裂解物、野生大豆(Glycine Soja)提取物、甜菜(Beta Vulgaris)、巴尔干苣苔(Haberlea Rhodopensis)、虎杖(Polygonum Cuspidatum)、甜橙(Citrus Aurantium Dulcis)、酿酒葡萄(Vitis Vinifera)、卷柏(Selaginella Tamariscina)、啤酒花(Humulus Lupulus)、柑橘(Citrus Reticulata)皮、石榴(Punica Granatum)、钥形毛藻(Asparagopsis)、姜黄(Curcuma Longa)、睡菜(Menyanthes Trifoliata)、向日葵(Helianthus Annuus)、大麦(Hordeum Vulgare)、黄瓜(Cucumis Sativus)、扁枝衣(Evernia Prunastri)、粉屑扁枝衣(Evernia Furfuracea)及其混合物。
微粒材料
本发明的组合物可含有呈色素、惰性微粒、或其混合物形式的微粒材料。如果存在，建议的范围为以总组合物的重量计约0.01％-75％，优选约0.5％-70％，更优选约0.1％-65％。在组合物可包含色素和粉末的混合物的情况下，合适的范围包括约0.01％-75％的色素和0.1％-75％的粉末，此类重量以总组合物的重量计。
微粒物质可以是有色的或无色的粉末。合适的非色素粉末包括氯氧化铋、钛酸盐云母、热解法二氧化硅、球形二氧化硅、聚甲基丙烯酸甲酯、微粉化特氟纶、氮化硼、丙烯酸共聚物、硅酸铝、铝淀粉琥珀酸辛烯酯、膨润土、硅酸钙、纤维素、白垩、玉米淀粉、硅藻土、漂白土、甘油淀粉、锂蒙脱石、水合二氧化硅、高岭土、硅酸铝镁、三硅酸镁、麦芽糊精、蒙脱石、微晶纤维素、大米淀粉、二氧化硅、滑石、云母、二氧化钛、月桂酸锌、肉豆蔻酸锌、松脂酸锌、氧化铝、绿坡缕石、碳酸钙、硅酸钙、葡聚糖、高岭土、尼龙、甲硅烷基硅石、丝粉、绢云母、大豆粉、氧化锡、氢氧化钛、磷酸三镁、胡桃壳粉、或其混合物。上述粉末可以用卵磷脂、氨基酸、矿物油、硅氧烷或各种其他试剂单独或组合进行表面处理，其包覆粉末表面并使颗粒在性质上更加亲脂。
合适的色素是有机或无机色素。有机色素通常是各种芳香型，包括偶氮、靛类、三苯甲烷、蒽醌、以及黄嘌呤染料，其被指定为D&C和FD&C蓝色、棕色、绿色、橙色、红色、黄色等。有机色素通常由认证的颜色添加剂的不可溶性金属盐组成，称为色淀。无机色素包括氧化铁类、群青、铬、氢氧化铬色、及其混合物。红色、蓝色、黄色、棕色、黑色的氧化铁类、及其混合物是合适的。
维生素和抗氧化剂
本发明的组合物可以含有维生素和/或辅酶，以及抗氧化剂。如果这样，则建议以总组合物的重量计0.001％-10％，优选0.01％-8％，更优选0.05％-5％。合适的维生素包括抗坏血酸及其衍生物，诸如棕榈酸抗坏血酸基酯、抗坏血酸四己基癸基酯等等；B族维生素诸如硫胺素、核黄素、吡哆醇等等，以及辅酶诸如硫胺素焦磷酸盐、黄素腺嘌呤二核苷酸、叶酸、磷酸吡哆醛、四氢叶酸等等。维生素A及其衍生物也是合适的。实例是棕榈酸视黄酯、视黄醇、维甲酸以及β-胡萝卜素形式的维生素A。还合适的是维生素E及其衍生物诸如维生素E乙酸酯、烟酸酯或其其他酯。此外，维生素D和K是合适的。
本发明进一步包括通过局部施用组合物三肽或四肽、至少一种五肽或六肽、至少一种来自海带属的提取物和乳清蛋白来处理皮肤以刺激胶原合成。所述组合物可以以本文提及的形式施用，作为护肤方案的一部分。例如，可以在身体休息诸如打盹儿或睡眠的时段前将所述组合物作为施用于皮肤的晚霜或乳膏而施用于皮肤。所述组合物可以在早晨和晚上在清洁皮肤之后一天施用两次。所述组合物可以在粉底或其他颜色化妆品的形式的皮肤护理产品上施用于皮肤。
本发明将与以下实施例结合进行进一步描述，所述实施例仅为了举例说明的目的而阐述。
实施例1
在各种浓度下测试三肽-32在胶原诱导测定中刺激来自62岁供体的正常人真皮成纤维细胞(“NHDF”)中胶原产生的能力。在补充有10% Hyclone®牛小牛血清和1% Cellgro®青霉素-链霉素溶液的DMEM(“Dulbecco氏改良的Eagle培养基”)(“DMEM”)中稀释的1X(0.2%)、0.5X (0.1%)和0.2X (0.04%)浓度下测试三肽-32。所有百分比均以总组合物的重量计。
细胞生长和维持。老化的NHDF获得自ZenBio。将成纤维细胞在补充有10％牛小牛血清(“BCS”)(Hyclone)和1% PenStrep (“PS”)溶液(Cellgro)的DMEM 1x (Life Tech)中培养。将细胞定期维持；根据需要进行继代培养。
将细胞铺板。将正常人真皮成纤维细胞(NHDF，老化的)铺板于96孔板上补充的DMEM中(如上所示)。将除了行A之外的所有行都用细胞接种(将行A留作空白以允许背景减去)。使板在标准条件(37℃、5% CO2、95％湿度)下孵育过夜。
细胞的制备和处理。在完全培养基(1% P/S和10% BCS补充的)DMEM中产生以下处理物：(1)掌状海带(Laminaria digitata)提取物(0.5％)；乙酰基六肽-8溶液(0.05％乙酰基六肽-8、99.35％水和剩余防腐剂的混合物)(10％)；和乳清蛋白(0.1％，固体)，剩余为DMEM(“混合物”)；(2)混合物+三肽-32：DMEM中的掌状海带提取物(0.5％)、乙酰基六肽-8溶液(10％)、乳清蛋白(0.1％)和三肽-32 (0.2％)，浓度为1X (0.2%)、0.5X (0.1%)和0.2X(0.04%)；(3)单独的三肽-32，浓度为1X (0.2%)、0.5X (0.1%)和0.2X (0.04%)。将每次处理物(200μl/孔)添加至96孔板的相应孔中。使处理的板在标准条件(37℃、5% CO2、95％湿度)下孵育5天。
活力测定。孵育5天后，收集上清液并在胶原分析前储存。在温热的(37℃)完全介质中产生10％阿尔玛蓝(Life Tech)溶液，并且完全按照制造商(Life Tech)方案完成测定。使用读板器测定阿尔玛蓝结果。使用SoftMax Pro软件和Excel分析数据。
胶原产生的评价。按照制造商的方案，完全如所述，使用Pro-胶原I型胶原EIA试剂盒(Takara)评价胶原产生。使用Gemini M2E读板器读板并比较结果。
结果如下所示，并显示单独的三肽-32在0.2X (0.04%)浓度下显示胶原合成减少，并且在0.5X (0.1%)和1X (0.2%)浓度下显示胶原合成几乎不显著增加。乙酰基六肽-8、掌状海带提取物和乳清蛋白的混合物表明胶原合成增加。然而，当三肽-32与混合物组合时，胶原合成存在协同增加。
通常，可见当三肽-32与乙酰基六肽-8、掌状海带提取物和乳清蛋白的混合物组合时，细胞中胶原合成存在协同增加，这是出乎意料的，因为单独的三肽-32引起胶原合成减少，或者胶原合成的至多非常微小的不显著的增加。因此，该组合刺激皮肤细胞中的胶原合成。
实施例2
测试三肽-32和乙酰基六肽-8、掌状海带提取物和乳清蛋白的混合物的组合在来自62岁供体的NHDF中的胶原刺激。将浓度为0.2％的三肽-32与乙酰基六肽-8溶液(0.05％乙酰基六肽-8、99.35％水、剩余防腐剂)(10％)；0.5％掌状海带提取物溶液和0.1％乳清蛋白(在补充的DMEM中)的混合物组合。
根据实施例1中的方法进行测试。结果如下所述：
测试材料： 相比于单独的混合物的胶原合成的增加百分比(％)
0.2X混合物 + 0.2X三肽-32 +8.44
0.5X混合物 + 0.5X三肽-32 +18.67
1.0X混合物 + 1.0X三肽-32 +22.38
上述结果显示，将渐增浓度的三肽-32提取物添加至渐增浓度的混合物中提供了成纤维细胞中胶原合成的剂量响应增加。如实施例1中所示，三肽-32本身在很大程度上引起成纤维细胞中胶原合成减少，并且对渐增的浓度没有表现出剂量响应关系。
实施例3
根据本发明的护肤组合物如下制备：
成分 重量%
水 QS100
异壬酸异壬酯 6.0
C12-20酸PEG-8酯 3.0
甘油 2.6
聚二甲基硅氧烷 1.5
牛油树脂 1.5
鲸蜡醇 1.4
丁二醇 1.2
PEG-100硬脂酸酯 0.75
乙酰基葡糖胺 0.50
蔗糖 0.50
防腐剂 1.0
丙烯酰基二甲基牛磺酸铵 0.35
山梨醇 0.35
戊二醇 0.25
藻类提取物 0.25
咖啡因 0.20
卡波姆 0.20
鲸蜡基磷酸钾 0.20
生育酚乙酸酯 0.20
乙基己基甘油 0.15
Aquacell* 1.00
丙烯酸酯/丙烯酸C10-30烷基酯交联聚合物 0.11
Phytofix** 0.20
乳清蛋白 0.10
葡萄糖 0.10
异鲸蜡醇聚醚-20 0.10
掌状海带提取物 0.04
乙酰基六肽8 0.01
三肽-32 0.20
*Aquacell：水、西瓜(Citrullus lanatus)(西瓜)果实提取物、苹果(Pyrus malus)(苹果)果实提取物、小扁豆(Lens esculenta)(小扁豆)果实提取物、乳酸钠和PCA钠的混合物。
**Phytofix：丙二醇二癸酸酯、向日葵(Helianthus annus)(向日葵)籽饼、大麦(Hordeum vulgare)(大麦)提取物、黄瓜(Cucumis sativus)(黄瓜)果实提取物的混合物。
虽然本发明已与优选实施方案结合进行描述，但不预期使本发明的范围限制于所述特定形式，但是相反，其预期涵盖如可以包括在由所附权利要求限定的本发明的精神和范围内的此类替代方案、改变和等价方案。
序列表
<110> Pernodet, Nadine
Krystle Corallo
<120> 用于刺激皮肤细胞中的胶原合成的方法和组合物
<130> 16.11
<140> US 15/041,602
<141> 2016-02-11
<160> 1
<210> 1
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)
<223> Gln的C端羧基基团被NH2替代
<400> 1
Ser Pro Leu Gln
1

Claims (20)

1.组合物，其包含选自三肽、四肽及其混合物的第一肽；选自五肽、六肽及其混合物的第二肽；至少一种来自海带属的提取物；和乳清蛋白。
2.权利要求1的组合物，其中所述三肽是三肽-32，且所述四肽是四肽-26。
3.权利要求2的组合物，其中所述三肽是三肽-32且以0.000001%至约10%存在。
4.权利要求1的组合物，其中所述第二肽是六肽。
5.权利要求4的组合物，其中所述六肽是乙酰化的。
6.权利要求5的组合物，其中乙酰化的六肽是乙酰基六肽-8且以0.000001%至5%存在。
7.权利要求1的组合物，其中所述第一肽是作为三肽-32的三肽，所述第二肽是作为乙酰基六肽-8的六肽，且来自海带属的提取物来自掌状海带。
8.权利要求7的组合物，其中来自掌状海带的提取物具有以总提取物的重量计0.5%至3％的海带多糖或甘露醇含量。
9.权利要求8的组合物，其中所述掌状海带提取物通过冻干藻类的水性提取和浸出来获得。
10.权利要求8的组合物，其中所述掌状海带提取物以0.0001%至5％存在。
11.组合物，其以总组合物的重量计包含：
0.000001%至10%三肽-32，
0.000001%至5％乙酰基六肽-8，
0.0001%至5％掌状海带提取物，
0.05%至3％乳清蛋白。
12.权利要求11的组合物，其中所述掌状海带提取物具有以总提取物的重量计范围为0.5%至3％的海带多糖或甘露醇含量。
13.权利要求12的组合物，其中所述掌状海带提取物通过冻干藻类的水性提取和浸出来获得。
14.权利要求11的组合物，其呈护肤霜、洗剂、粉底化妆品或凝胶的形式。
15.通过局部施用组合物来刺激皮肤细胞中的胶原合成的方法，所述组合物包含选自三肽、四肽及其混合物的第一肽；选自五肽、六肽及其混合物的第二肽；至少一种来自海带属的提取物；和乳清蛋白。
16.权利要求15的方法，其中所述组合物呈护肤霜或洗剂的形式。
17.权利要求16的方法，其中所述组合物每天施用一次或两次。
18.权利要求16的方法，其中所述第一肽是作为三肽-32的三肽，所述第二肽是作为四肽-26的肽，且来自海带属的提取物来自掌状海带。
19.权利要求18的方法，其中所述三肽-32以0.000001%至10％存在，所述乙酰基六肽-8以0.000001%至5％存在，所述掌状海带提取物以0.0001%至5％存在，且所述乳清蛋白以0.05%至3％存在。
20.权利要求19的方法，其中所述组合物在晚上就寝前施用。
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