JP5719228B2 - 老化防止用皮膚外用剤 - Google Patents

Description

本発明は、皮膚真皮内の線維芽細胞を活性化することにより、皮膚の加齢に伴う変化を防止し得る老化防止用皮膚外用剤に関するものである。

線維芽細胞は真皮内に存在し、真皮成分であるコラーゲンやヒアルロン酸を生成し、真皮の構造の基盤となっている。生体において重要な役割を持つ線維芽細胞も加齢による新陳代謝の低下に伴い減少し、老化の進行などの要因となり、改善する対応策が望まれている。皮膚の老化は進行しやすく、老化の兆候も観察されやすい。皮膚の老化症状として代表的なシワやタルミは、皮膚の弾力性や柔軟性の低下が原因とされ、コラーゲンの減少つまり、線維芽細胞の活性の低下により引き起こされている。

現在までのところ、特許文献１、２に示すように、細胞培養時に細胞賦活剤として添加されるウシ胎仔血清の代替品などは開発されている。しかしながら、皮膚外用剤においては、血清に替わる細胞賦活剤は開発されていない。また、皮膚外用剤にはウシ胎仔血清そのものを配合することも不可能である。

特開平７−２６５０６８号公報 特開２００７−１３５５９１号公報

本発明の目的は、皮膚真皮の線維芽細胞を活性化することができ、皮膚の老化防止効果に優れる皮膚外用剤を提供することにある。

本発明者らは、ホエイタンパクが優れた線維芽細胞活性化効果を有し、これを皮膚外用剤基剤に含有させることにより、皮膚の老化防止効果に優れる皮膚外用剤が得られることを見出し、上記課題を解決した。さらに、ワサビノキまたはその抽出物、アセチルテトラペプチドについても、線維芽細胞活性化効果を有すること、およびこれらの２種以上を併用することにより、相乗的な線維芽細胞活性化効果が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、次の［１］〜［６］に関する。
［１］ホエイタンパクを含有する、老化防止用皮膚外用剤。
［２］ホエイタンパクと、ワサビノキ（Moringa pterygosperma）およびその抽出物、ならびにアセチルテトラペプチドよりなる群から選択される１種または２種以上とを含有する、老化防止用皮膚外用剤。
［３］ホエイタンパクが脱脂乳より得られたものである、上記［１］または［２］に記載の老化防止用皮膚外用剤。
［４］ホエイタンパクが粉末である、上記［１］〜［３］のいずれかに記載の老化防止用皮膚外用剤。
［５］ワサビノキ（Moringa pterygosperma）およびその抽出物が、該植物の種子およびその抽出物である、上記［２］に記載の老化防止用皮膚外用剤。
［６］アセチルテトラペプチドが、フェニルアラニン、プロリンおよびチロシンよりなるテトラペプチドのアセチル化物である、上記［２］に記載の老化防止用皮膚外用剤。

また、本発明は、次の［７］〜［９］をも包含する。
［７］ワサビノキ（Moringa pterygosperma）およびその抽出物より選択される１種または２種以上を含有する、老化防止用皮膚外用剤。
［８］アセチルテトラペプチドの１種または２種以上を含有する、老化防止用皮膚外用剤。
［９］ワサビノキ（Moringa pterygosperma）およびその抽出物より選択される１種または２種以上と、アセチルテトラペプチドの１種または２種以上とを含有する、老化防止用皮膚外用剤。

本発明に係る老化防止用皮膚外用剤は、皮膚真皮内の線維芽細胞を活性化し、加齢変化に伴うシワ、タルミ等、皮膚の老化症状の発現または進行を防止することができる。また、動物の乳由来または植物由来のものを有効成分としているため、副作用が比較的少なく、安全性にも優れる。

本発明の老化防止用皮膚外用剤は、ホエイタンパクを含有する。また、ホエイタンパクと、ワサビノキ（Moringa pterygosperma）およびその抽出物、ならびにアセチルテトラペプチドよりなる群から選択される１種または２種以上とを含有してなる。

ホエイタンパクは、ウシ、ヒツジ、ヤギ等の哺乳動物の乳より乳脂肪分やカゼイン等を除いて得られるホエイの主成分である。本発明の目的には、ウシのホエイより得られるタンパク質が好ましく、また脱脂乳より分離して得られるものが好ましい。本発明においては、前記動物の乳より分離したホエイをそのまま用いてもよく、ホエイのタンパク質画分を常法により分画、精製して用いてもよい。また、ホエイタンパクは、凍結乾燥等により粉末として用いてもよい。本発明においては、ホエイタンパクとして、医薬品、医薬部外品、化粧品原料として市販されている製品を好適に用いることができる。なお、かかる市販製品として、ホエイタンパク画分乾燥粉末（タンパク質含有量の規格値＝１０重量％〜２５重量％）が提供されている。本発明の老化防止用皮膚外用剤には、ホエイタンパクとして、前記したものから１種または２種以上を選択して用いることができる。

ワサビノキ（Moringa pterygosperma）は、ワサビノキ科（Moringaceae）に属する落葉高木である。本発明の老化防止用皮膚外用剤には、該植物の植物体およびその抽出物のいずれをも用いることができる。また、本発明の目的には、該植物の花、葉、樹皮、果実、種子等の各部位を用いることができるが、特に種子の使用が好ましい。ワサビノキの植物体を用いる場合は、常法により細切、乾燥、粉砕等を行うことにより、スラリー状、細粒状、顆粒状、粉末状といった形態として用いることが好ましい。また、ワサビノキの抽出も、常法に従って行えばよい。抽出は、たとえばワサビノキの植物体を乾燥して刻み、または粉末状にして抽出溶媒を加え、冷浸または加熱することによって行うことができる。抽出溶媒としては、水、エタノール、１，３−ブタンジオール、イソプロパノール等の１種、または２種以上の混合溶媒を使用することができる。

本発明においては、ワサビノキの抽出物は、上記溶媒による抽出液をそのまま用いてもよく、該抽出液を希釈もしくは濃縮し、または乾燥して用いてもよく、粗精製または精製して用いてもよい。前記抽出物の粗精製および精製は常法に従って行えばよく、たとえばＭＣＩゲル（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）等の吸着剤による吸着および溶出、クロマトグラフィー等を適宜組み合わせて実施することができる。
本発明においては、ワサビノキまたはその抽出物として、医薬品、医薬部外品、化粧品原料として市販されている製品を好適に用いることができる。なお、かかる市販製品として、ワサビノキ種子抽出物の乾燥粉末の倍散品（タンパク質含有量の分析値＝２５重量％）が提供されている。
なお、本発明の老化防止用皮膚外用剤には、上記したワサビノキおよびその抽出物から１種または２種以上を選択して含有させることができる。

アセチルテトラペプチドは、４個のアミノ酸よりなるペプチドのアセチル化物であるが、本発明の目的には、フェニルアラニン、プロリンおよびチロシンからなるテトラペプチドのアセチル化物が好ましく用いられ、アセチルテトラペプチド−１５（Ｎ−アセチル−Ｌ−チロシル−Ｌ−プロリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニンアミド）が特に好ましく用いられる。アセチルテトラペプチドとしては種々のペプチドが、水溶液の形態等で市販されており、本発明においては、かかる市販製品を用いることができる。
なお、本発明の老化防止用皮膚外用剤には、上記したアセチルテトラペプチドの１種または２種以上を含有させることができる。

上記したホエイタンパク、ワサビノキまたはその抽出物、アセチルテトラペプチドは、後述するように、それぞれ線維芽細胞活性化作用を有するため、これらをそれぞれ有効成分として含有する皮膚外用剤は、皮膚真皮内の線維芽細胞を活性化し、加齢に伴うシワ、タルミ等、皮膚の老化症状の発現または進行を防止することができる。また、前記の各成分は、動物の乳または植物由来であるため、副作用が比較的少なく、安全性にも優れる。

なお、本発明の老化防止用皮膚外用剤において、十分な線維芽細胞活性化効果を得るためには、ホエイタンパクについては、上記したホエイタンパクの総量で、乾燥重量として、０．０１重量％〜１重量％含有させることが好ましく、０．０５重量％〜０．２重量％含有させることがより好ましい。ワサビノキおよびその抽出物より選択される１種または２種以上については、これらの総量で、乾燥重量として、０．０００５重量％〜０．５重量％含有させることが好ましく、０．００５重量％〜０．１重量％含有させることがより好ましい。アセチルテトラペプチドの１種または２種以上については、これらの総量で、１×１０^−６（ｗ／ｖ）％〜０．００１（ｗ／ｖ）％含有させることが好ましく、５×１０^−６（ｗ／ｖ）％〜１×１０^−４（ｗ／ｖ）％含有させることがより好ましい。

本発明においては、上記したホエイタンパク、ワサビノキおよび／またはその抽出物、ならびにアセチルテトラペプチドは、それぞれ別個に老化防止用皮膚外用剤に含有させてもよいが、これらの２種以上を併用して含有させることにより、より優れた線維芽細胞活性化効果を発揮させることができる。その際、ホエイタンパクと、ワサビノキおよびその抽出物、ならびにアセチルテトラペプチドよりなる群から選択した１種または２種以上とを含有させることが好ましく、ホエイタンパク、ワサビノキおよび／またはその抽出物、ならびにアセチルテトラペプチドの３種をすべて含有させることがより好ましい。前記成分の２種以上を併用する場合には、併用する各成分は、それぞれ別個に用いる場合よりも低含有量とすることができる。

なお、本発明の老化防止用皮膚外用剤には、本発明の特徴を損なわない範囲で、インドールアセチルグルタミン酸、ブナ抽出物、オランダセンニチバナ抽出物、ペルシアグルミ種子抽出物等の他の線維芽細胞賦活剤や、コエンザイムＱ_１０、デオキシリボ核酸ナトリウム、アシタバ抽出物、クロレラ抽出物、酵母抽出物、オタネニンジン抽出物、ヒバマタ抽出物、ロイヤルゼリー抽出物等の一般的な細胞賦活剤を含有させることができる。また、アスコルビルリン酸ナトリウム、アスコルビルリン酸マグネシウム、アルブチン、コウジ酸、ソウハクヒ抽出物、プラセンタ抽出物等の美白剤；加水分解シルク、カッコン抽出物、シャクヤク抽出物、卵殻膜タンパク質、レチノール等の抗シワ・抗老化剤；アズレン、アラントイン、カミツレ抽出物、カンゾウ抽出物、γ−オリザノール、キダチアロエ抽出物、グリチルリチン酸等の抗炎症・肌荒れ防止剤；グルコシルルチン、コメヌカ油、シソ抽出物、タンニン酸、ｄ−δ−トコフェロール、ｄｌ−α−トコフェロール、ルイボス抽出物等の抗酸化剤；シコン抽出物、セージ抽出物、ビサボロール、ヒノキチオール等の抗菌剤；塩化セチルピリジニウム、グルコン酸亜鉛、オウバク抽出物等の抗ざ瘡剤；ＤＬ−アラニン、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、コンドロイチン、スフィンゴ脂質、セラミド、ヒアルロン酸等の保湿剤；塩化カプロニウム、センブリ抽出物、ハトムギ抽出物等の血行促進剤なども含有させることができる。

本発明の老化防止用皮膚外用剤は、医薬部外品および化粧品としても提供することができる。皮膚外用剤としては、水等の液状担体や粉状担体、ゲル、エマルション、油脂性軟膏、乳剤性軟膏等の各種基剤を用いて、ローション剤、粉末剤、ゲル剤、乳剤、クリーム剤、軟膏剤、硬膏剤、リニメント剤等、種々の形態で提供することができる。また、医薬部外品または化粧品としては、化粧水、美容液、乳液、クリーム、パック等の形態で提供することができる。

本発明に係る皮膚外用剤には、上記ホエイタンパク等の安定性および効果に影響を与えない範囲で、動植物性油脂、ロウ、脂肪酸、脂肪族アルコール、エステル油、炭化水素油、シリコーン油といった油性成分；非イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤といった界面活性剤；エタノール等の低級アルコール；グリセリン、１，３−ブタンジオール等の多価アルコール；カルボキシビニルポリマー、ヒドロキシセルロース等の増粘剤；乳酸およびその塩、クエン酸およびその塩等のｐＨ調整剤；水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、Ｌ−アルギニン等の塩基；紫外線吸収剤；防菌防黴剤；香料；色素；タルク、酸化亜鉛等の顔料など、皮膚外用剤に一般的に配合される成分を含有させることができる。

以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、以下において、「％」は特に断らない限り重量％を意味する。

［実施例１］
本発明の実施例１として、老化防止用皮膚クリームの処方を表１に示す。表１中、（１）〜（５）を混合後、加熱溶解して７５℃とし、これに混合、加熱溶解し７５℃とした（６）〜（９）および（１４）を添加して乳化し、攪拌冷却後４５℃にて（１０）〜（１３）を添加、混合する。表１中（１０）のホエイタンパクとしては、牛乳のホエイより得たタンパク質画分の乾燥粉末を用いた。（１１）のワサビノキ種子抽出物としては、ワサビノキの種子をエタノールにより抽出して得た抽出物の乾燥粉末をデキストリンにより倍散したものを用いた。また、（１２）のアセチルテトラペプチド−１５としては、該ペプチドの０．０４７（ｗ／ｖ）％水溶液を用いた。なお、表１中（１０）、（１１）、（１２）の替わりにエタノールを配合したものを比較例１の皮膚クリームとした。

［試験例１］ 線維芽細胞活性化効果の評価
本発明の実施例１の老化防止用皮膚クリームに含有させたホエイタンパク、ワサビノキ種子抽出物およびアセチルテトラプチド−１５について、線維芽細胞活性化効果を、以下の通り、ヒト正常新生児皮膚線維芽細胞を用いて評価した。

まず、次の（１）０．５容量％牛胎仔血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコ修正基礎培地（ＤＭＥＭ）、（２）ＭＴＴ試薬を調製する。
（１）０．５容量％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ：ＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ社製）に、終濃度０．５容量％となるようにＦＢＳを添加、溶解して調製する。
（２）ＭＴＴ試薬：ＭＴＴ（３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−３Ｈ−テトラゾール−２−イウム・ブロミド）１０ｍｇ をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）１ｍＬに溶解して調製する。

次いで、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞株（ＮＨＤＦ）を０．５容量％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭにて２×１０^４個／ｍＬに調製し、９６穴プレートに１００μＬずつ播種して、５％炭酸ガス、飽和水蒸気下、３７℃で培養した。
２４時間培養後、培養液を吸引除去し、ホエイタンパク（タンパク質画分乾燥粉末）およびワサビノキ種子抽出物（デキストリンによる倍散品）の各試料については、５０容量％エタノール水溶液に溶解して、終濃度が最高２ｍｇ／ｍＬ（ワサビノキ種子抽出物の最高濃度＝１ｍｇ／ｍＬ）となるようにＦＢＳ非含有ＤＭＥＭに添加し、また、アセチルテトラペプチド−１５水溶液については終濃度が最高１０容量％（アセチルテトラペプチド−１５の最高濃度＝１．１７５×１０^−５（ｗ／ｖ）％）となるようにＦＢＳ非含有ＤＭＥＭに添加して、５％炭酸ガス、飽和水蒸気下、３７℃で培養した。
４８時間経過後、培養上清を捨て、ＦＢＳ非含有ＤＭＥＭ：ＭＴＴ試薬＝１０：１になるよう調製したＭＴＴ試薬含有ＤＭＥＭを１００μＬ添加し、５％炭酸ガス、飽和水蒸気下、３７℃で２時間反応させた。その後、上清を捨て、イソプロパノール１５０μＬを添加してミキシングし、生成されたホルマザン色素を抽出して、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍで測定した。

線維芽細胞活性化効果は、生成されたホルマザン色素量により、ホエイタンパク等の試料を含有しないＦＢＳ非含有ＤＭＥＭ培地を添加した場合の線維芽細胞の活性を１００％として算出した。なお、５容量％ＦＢＳをＤＭＥＭに添加した場合を陽性対照として、同時に評価を行った。ホエイタンパク、ワサビノキ種子抽出物、アセチルテトラペプチド−１５のそれぞれを単独で添加した場合の結果を表２〜４に示した。

表２〜４より明らかなように、ホエイタンパク、ワサビノキ種子抽出物およびアセチルテトラペプチド−１５は、それぞれ濃度依存的に線維芽細胞活性化効果を示した。

次に、ホエイタンパクと、ワサビノキ種子抽出物またはアセチルテトラペプチド−１５を併用した場合の評価結果を表５および６に示した。

表５および６において、ホエイタンパクと、ワサビノキ種子抽出物またはアセチルテトラペプチド−１５を併用して添加した場合、各成分を単独で添加した場合に比べて、それぞれの含有濃度が低濃度である場合においても、線維芽細胞の顕著な活性化が見られ、５容量％ＦＢＳと遜色ない線維芽細胞の活性化が認められた。

続いて、ホエイタンパク、ワサビノキ種子抽出物およびアセチルテトラペプチド−１５をすべて含有する場合の評価結果を表７に示した。

表７より明らかなように、ホエイタンパク、ワサビノキ種子抽出物およびアセチルテトラペプチド−１５をすべて添加した場合には、各成分をそれぞれ単独で含有する場合には有意な活性化効果の見られなかった濃度においても線維芽細胞の活性化が見られ、ホエイタンパク１ｍｇ／ｍＬ以上、ワサビノキ種子抽出物０．０６２５ｍｇ／ｍＬ以上（すなわちワサビノキ種子抽出物の倍散品にして０．１２５ｍｇ／ｍＬ以上）、およびアセチルテトラペプチド−１５ ５．８７５×１０^−６（ｗ／ｖ）％（すなわちアセチルテトラペプチド−１５水溶液にして０．０１２５容量％）以上の併用により、５容量％ＦＢＳを超える線維芽細胞活性化効果が認められた。

続いて、本発明の実施例１の老化防止用皮膚クリームおよび比較例１の皮膚クリームについて使用試験を行った。線維芽細胞が活性化されると、肌に弾力が戻り、シワができにくくなることが推察されるため、以下の試験を行った。日常戸外で作業するパネラー２０名を１群とし、各群にそれぞれ実施例および比較例の各皮膚クリームをブラインドにて顔面および手に使用させ、シワおよび皮膚弾性の変化を観察し、評価した。使用期間は１月から１２月の１年間とした。シワについては「減少」、「変化なし」、「微小なシワが増加」、「明確なシワが増加」の４段階、皮膚弾性については「上昇」、「変化なし」、「やや低下」、「低下」の４段階で評価し、各評価を得たパネラー数を表８に示した。

表８より明らかなように、ホエイタンパク等を含有しない比較例１の皮膚クリーム使用群に比べ、ホエイタンパク、ワサビノキ種子抽出物およびアセチルテトラペプチド−１５を含有する実施例１の老化防止用皮膚クリーム使用群においては、シワの減少および皮膚弾性の上昇が顕著に認められた。

以上詳述したように、本発明により、皮膚真皮の線維芽細胞活性化効果により、加齢変化に伴うシワ、タルミ等、皮膚の老化症状の発現または進行を防止することができ、安全性にも優れる老化防止用皮膚外用剤を提供することができる。

Claims (4)

1. ホエイタンパクと、ワサビノキ(Moringa pterygosperma)の抽出物、およびアセチルテトラペプチドよりなる群から選択される１種または２種以上とを含有する、老化防止用皮膚外用剤であって、
   ワサビノキ(Moringa pterygosperma)の抽出物が、水、エタノール、１，３−ブタンジオールおよびイソプロパノールよりなる群から選択される１種または２種以上の抽出溶媒により抽出した抽出物であり、
   アセチルテトラペプチドが、フェニルアラニン、プロリンおよびチロシンよりなるテトラペプチドのアセチル化物である、老化防止用皮膚外用剤。
2. ホエイタンパクが脱脂乳より得られたものである、請求項１に記載の老化防止用皮膚外用剤。
3. ホエイタンパクが粉末である、請求項１または２に記載の老化防止用皮膚外用剤。
4. ワサビノキ（Moringa pterygosperma）の抽出物が、該植物の種子の抽出物である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の老化防止用皮膚外用剤。