CN108570408A - 一种hct-8细胞病变病毒分离培养装置及方法 - Google Patents

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管远红
李芙蓉
孟婷
谢静
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程汉
陈长春
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Abstract

本发明公开了一种HCT‑8细胞病变病毒分离培养装置及方法，包括二氧化碳培养箱和底座，所述二氧化碳培养箱顶部安装有箱顶，所述显示屏右侧设置有调节旋钮，所述箱顶下方的二氧化碳培养箱上安装有箱门，所述观察窗下方的箱门上安装有便利贴和小黑板，所述底座上方右侧设置有工作台，所述底座上方左侧安置有试管箱，所述试管箱左侧中部设置有连接缝，且连接缝上安装有合页，所述试管箱内侧底部设置有垫层，且垫层上方设置有试管架。该HCT‑8细胞病变病毒分离培养装置及方法将二氧化碳培养箱与试管箱结合在一起，配合工作台一起使用，提高了使用的灵活性，而且，添加了定时器、便利贴和小黑板的使用，可以为实验操作过程中提供便利。

Description

一种HCT-8细胞病变病毒分离培养装置及方法
技术领域
本发明涉及病毒分离培养技术领域，具体为一种HCT-8细胞病变病毒分离培养装置及方法。
背景技术
牛冠状病毒是引起成年牛冬痢、新生犊牛腹泻和呼吸道疾病的主要病原。成年牛冬季严重水样腹泻，发病率高、死亡率低，而犊牛感染多见于一周龄内，腹泻常发生于7-10日龄，以水样性腹泻为主要表现，严重影响犊牛生长性能。牛冠状病毒与轮状病毒感染相似，且二者容易混合发生，进而导致死亡率升高。感染冠状病毒的患畜可通过粪便向环境排毒，即使症状恢复后18个月的时间里，仍可排出具有侵袭力的病毒，给养牛业可持续健康发展带来严重影响。
近年来，随着江苏苏北养牛业不断发展，犊牛腹泻发病率呈上升趋势，该病已经成为危害养牛业的主要传染病之一。因此，开展犊牛腹泻病原鉴定对疫病防控具有重要意义。本发明采用HCT8细胞系，从江苏苏北某规模牛场疑似感染BCV的犊牛粪便样品中分离到一株病毒，依据冠状病毒基因组中高度保守N基因作为基因分型基础设计特异性引物，利用HCT-8细胞病变进行病毒分离培养，为该病的诊断、防治提供参考。
发明内容
本发明的目的在于提供一种HCT-8细胞病变病毒分离培养装置及方法，以为犊牛腹泻发病的诊断、防治提供参考的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案一种HCT-8细胞病变病毒分离培养装置及方法，包括二氧化碳培养箱和底座，所述二氧化碳培养箱顶部安装有箱顶，且箱顶正面设置有显示屏，所述显示屏右侧设置有调节旋钮，且调节旋钮右侧设置有定时器，所述箱顶下方的二氧化碳培养箱上安装有箱门，且箱门中部安装有观察窗，所述观察窗下方的箱门上安装有便利贴和小黑板，所述底座上方右侧设置有工作台，且底座中部上方安装有二氧化碳培养箱，所述底座上方左侧安置有试管箱，且试管箱后方顶部通过合页与箱盖相连接，所述试管箱左侧中部设置有连接缝，且连接缝上安装有合页，所述试管箱内侧底部设置有垫层，且垫层上方设置有试管架。
优选的，所述试管箱设置为拆卸式结构，且试管箱内部前方和后方设置为对称结构。
优选的，所述箱盖设置为弧形结构。
优选的，所述垫层设置为梯形结构。
优选的，所述试管架设置为透明结构。
优选的，病毒分离培养的方法分为以下步骤：
A、HCT-8细胞复苏并传至形态稳定，且细胞密度约80%左右时弃去营养液，PBS液清洗2次，弃去清洗液；
B、取1.5ml处理后的样品于无菌离心管中加1.5ul胰蛋白酶，二氧化碳培养箱中37℃培养1h，再接种于HCT-8细胞上，二氧化碳培养箱中37℃作用2h，期间每隔20 min 轻轻摇晃一次；
C、最后向细胞瓶加入10 mL 维持液，置于二氧化碳培养箱37℃培养，每隔12h观察一次；
D、72h收获培养液，收获液反复冻融3 次，再接种于HCT-8细胞，连续盲传4-5代，每12h镜检观察细胞病变，待细胞病变后脱落面积达到50%左右收毒，－80℃保存备用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：该HCT-8细胞病变病毒分离培养装置及方法将二氧化碳培养箱与试管箱结合在一起，配合工作台一起使用，提高了使用的灵活性，而且，添加了定时器、便利贴和小黑板的使用，可以为实验操作过程中提供便利，另外，根据病毒分离培养的方法得出的结论，可以为犊牛腹泻发病的诊断、防治提供参考。
附图说明
图1为本发明结构示意图；
图2为本发明试管箱左侧面结构示意图。
图中：1、二氧化碳培养箱，2、箱顶，3、显示屏，4、调节旋钮，5、定时器，6、试管箱，7、底座，8、箱门，9、便利贴，10、小黑板，11、观察窗，12、工作台，13、箱盖，14、合页，15、垫层，16、试管架，17、连接缝，18、合页。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1-2，本发明提供一种技术方案：一种HCT-8细胞病变病毒分离培养装置及方法，包括二氧化碳培养箱1、箱顶2、显示屏3、调节旋钮4、定时器5、试管箱6、底座7、箱门8、便利贴9、小黑板10、观察窗11、工作台12、箱盖13、合页14、垫层15、试管架16、连接缝17和合页18，二氧化碳培养箱1顶部安装有箱顶2，且箱顶2正面设置有显示屏3，显示屏3右侧设置有调节旋钮4，且调节旋钮4右侧设置有定时器5，箱顶2下方的二氧化碳培养箱1上安装有箱门8，且箱门8中部安装有观察窗11，观察窗11下方的箱门8上安装有便利贴9和小黑板10，底座7上方右侧设置有工作台12，且底座7中部上方安装有二氧化碳培养箱1，底座7上方左侧安置有试管箱6，且试管箱6后方顶部通过合页14与箱盖13相连接，箱盖13设置为弧形结构，可以在不使用时，起到防尘的效果，试管箱6左侧中部设置有连接缝17，且连接缝17上安装有合页18，试管箱6内侧底部设置有垫层15，且垫层15上方设置有试管架16，试管箱6设置为拆卸式结构，且试管箱6内部前方和后方设置为对称结构，拆卸式的结构便于清洗，提高清洁度，试管箱6内部前方和后方设置为对称结构，可以使试管箱6的前方在合页18的作用下打开，可以在使用时提高灵活性，同时便于收纳，垫层15设置为梯形结构，试管架16设置为透明结构；病毒分离培养的方法分为以下步骤：
A、HCT-8细胞复苏并传至形态稳定，且细胞密度约80%左右时弃去营养液，PBS液清洗2次，弃去清洗液；
B、取1.5ml处理后的样品于无菌离心管中加1.5ul胰蛋白酶，二氧化碳培养箱1中37℃培养1h，再接种于HCT-8细胞上，二氧化碳培养箱1中37℃作用2h，期间每隔20 min 轻轻摇晃一次；
C、最后向细胞瓶加入10 mL 维持液，置于二氧化碳培养箱1中37℃培养，每隔12h观察一次；
D、72h收获培养液，收获液反复冻融3 次，再接种于HCT-8细胞，连续盲传4-5代，每12h镜检观察细胞病变，待细胞病变后脱落面积达到50%左右收毒，－80℃保存备用。
工作原理：在使用该HCT-8细胞病变病毒分离培养装置及方法之前，需要对整个分离培养装置进行简单的结构了解，整个处理的过程大体上可以进行两个部分的划分，首先当HCT-8细胞复苏并传至形态稳定，且细胞密度约80%左右时弃去营养液，用PBS液清洗2次，弃去清洗液，再取1.5ml处理后的样品于无菌离心管中加1.5ul胰蛋白酶，然后放入二氧化碳培养箱1中，利用调节旋钮4调节至37℃，培养1h，再接种于HCT-8细胞上，接着放入二氧化碳培养箱1中37℃作用2h，期间每隔20 min 轻轻摇晃一次，最后向细胞瓶内加入10 mL 维持液，置于二氧化碳培养箱1中37℃培养，每隔12h观察一次，72h后收获培养液，将收获液反复冻融3 次，再接种于HCT-8细胞，连续盲传4-5代，每12h在工作台12上镜检观察细胞病变，待细胞病变后脱落面积达到50%左右收毒，置于－80℃保存备用。
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种HCT-8细胞病变病毒分离培养装置及方法，包括二氧化碳培养箱（1）和底座（7），其特征在于：所述二氧化碳培养箱（1）顶部安装有箱顶（2），且箱顶（2）正面设置有显示屏（3），所述显示屏（3）右侧设置有调节旋钮（4），且调节旋钮（4）右侧设置有定时器（5），所述箱顶（2）下方的二氧化碳培养箱（1）上安装有箱门（8），且箱门（8）中部安装有观察窗（11），所述观察窗（11）下方的箱门（8）上安装有便利贴（9）和小黑板（10），所述底座（7）上方右侧设置有工作台（12），且底座（7）中部上方安装有二氧化碳培养箱（1），所述底座（7）上方左侧安置有试管箱（6），且试管箱（6）后方顶部通过合页（14）与箱盖（13）相连接，所述试管箱（6）左侧中部设置有连接缝（17），且连接缝（17）上安装有合页（18），所述试管箱（6）内侧底部设置有垫层（15），且垫层（15）上方设置有试管架（16）。
2.根据权利要求1所述的一种HCT-8细胞病变病毒分离培养装置及方法，其特征在于：所述试管箱（6）设置为拆卸式结构，且试管箱（6）内部前方和后方设置为对称结构。
3.根据权利要求1所述的一种HCT-8细胞病变病毒分离培养装置及方法，其特征在于：所述箱盖（13）设置为弧形结构。
4.根据权利要求1所述的一种HCT-8细胞病变病毒分离培养装置及方法，其特征在于：所述垫层（15）设置为梯形结构。
5.根据权利要求1所述的一种HCT-8细胞病变病毒分离培养装置及方法，其特征在于：所述试管架（16）设置为透明结构。
6.根据权利要求1所述的一种HCT-8细胞病变病毒分离培养装置及方法，其特征在于：病毒分离培养的方法分为以下步骤：
A、HCT-8细胞复苏并传至形态稳定，且细胞密度约80%左右时弃去营养液，PBS液清洗2次，弃去清洗液；
B、取1.5ml处理后的样品于无菌离心管中加1.5ul胰蛋白酶，二氧化碳培养箱（1）中37℃培养1h，再接种于HCT-8细胞上，二氧化碳培养箱（1）中37℃作用2h，期间每隔20 min 轻轻摇晃一次；
C、最后向细胞瓶加入10 mL 维持液，置于二氧化碳培养箱（1）37℃培养，每隔12h观察一次；
D、72h收获培养液，收获液反复冻融3 次，再接种于HCT-8细胞，连续盲传4-5代，每12h镜检观察细胞病变，待细胞病变后脱落面积达到50%左右收毒，－80℃保存备用。
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