CN108456677A - 一种血浆分离及dna提取方法 - Google Patents
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Abstract
本申请的目的是公开一种血浆分离及DNA提取方法，包括：步骤一：做处理表单、试剂耗材准备和离心机预冷降温的实验准备；步骤二：标本接收后根据清单和打印的提取表核对样本；低速离心的采血管需放置在预冷的蓝冰上吸取血浆，血浆吸取时需从上往下，分装2个2.mL离心管中；分完后血浆立即放入高速离心机离心；高速离心完成的血浆样本需放置在预冷的蓝冰上吸取血浆,分装的2个2.mL离心管中；分离完成的血浆进行下一步实验或保存；步骤三：DNA提取包括自动提取和手动提取步骤，所述自动提取步骤包括：对照DNA提取流程表,核对样本编号；对照流程表,在深孔板各列加入提取试剂；流程科学，标准明确，实践操作效果好。
Description
技术领域
本发明属于血浆分离及DNA提取领域，具体是指一种血浆分离及DNA 提取方法。
背景技术
在基因检测实验室，血浆分离及DNA提取是很多检测步骤的前序步骤，但是由于操作复杂，标准不统一，而且由于操作人员的经验和水平限制，由于操作失误造成的实验重复和试剂损耗,耽误时间和人力财力。
因此，如何研发一种血浆分离及DNA提取方法，能够解决上述问题，便成为亟待解决的技术问题。
发明内容
本申请解决的主要问题是提供一种血浆分离及DNA提取方法，操作简单、流程科学，标准明确，实践操作效果好，以解决一种血浆分离及DNA 提取方法成本高、流程不科学，标准不明确，实践操作效果不佳、操作难度高、难以复制操作的技术问题。
为了解决上述技术问题，本发明公开了一种血浆分离及DNA提取方法，其特征在于，包括：
步骤一：做处理表单、试剂耗材准备和离心机预冷降温的实验准备；
步骤二：标本接收后根据清单和打印的提取表核对样本,检查样本是否存在样本管破裂、凝血等异常情况,如存在异常样本须填写血液标本质量监控表；实验样本按顺序放进低速离心机,进行第一次低速离心,离心后的样本用试管架分装拿出,检查样本是否存在溶血、脂血情况,如存在异常样本须填写血液标本质量监控表,其中溶血样本根据等级确定是否进行下一步实验；低速离心的采血管需放置在预冷的蓝冰上吸取血浆，血浆吸取时需从上往下，分装2个2.mL离心管中；分完后血浆立即放入高速离心机离心；高速离心完成的血浆样本需放置在预冷的蓝冰上吸取血浆,分装的2个2.mL离心管中；分离完成的血浆进行下一步实验或保存；
步骤三：DNA提取包括自动提取和手动提取步骤，所述自动提取步骤包括：对照DNA提取流程表,核对样本编号；对照流程表,在深孔板各列加入提取试剂；对照流程表,在深孔板的第1和第7列的各孔加入不同的样本；深孔板小心安装到仪器的工作台,插入搅拌棒,选择程序运行开始DNA提取，得到提取完成的DNA。
进一步的，所述步骤一中具体包括：处理表单:导出岗位清单,打印DNA 提取表；
试剂耗材准备:准备垃圾桶、移液枪、枪头、离心管、蓝冰板等实验中需要的仪器和耗材；
将离心机预冷降温至4度。
进一步的，所述步骤三还包括：得到提取完成的DNA按照顺序转4uL 到浅孔板，放置-2℃保存,开启仪器的紫外灯,进行自净。
进一步的，所述手动提取步骤包括：血浆加PK加磁珠经过旋涡离心，加MLK经过旋涡离心后，37℃恒温混匀仪中放置混匀，通过微离心,上磁力架,静置待澄清，弃上清,加MW1,涡旋微离心,上磁力架,静置待澄清弃上清,加入MW2,涡旋，微离心后上磁力架,静置待澄清后弃上清,加入MW2,涡旋后微离心,上磁力架,静置待澄清，微离心,去残留液,室温晾干磁珠，提前预热AE，加入buffer AE,涡旋打散磁珠，提前调好恒温混匀仪程序，恒温混匀仪中放置，转速，微离心,上磁力架,静置待澄清，澄清后转到EP管中,保存。
进一步的，所述步骤三在DNA提取前还包括：
试剂耗材准备:根据样本数量选择是否使用自动化提取仪,准备实验用到的试剂和耗材，试剂盒第一次打开写上“:开盒日期,姓名首字母MW2配制后需要在瓶盖加酒精处打钩,并在瓶身写上“加酒精x-mL,日期,姓名首字母”；配置PK,需要在瓶身上写上“已配PK,日期,姓名首字母”；提取磁珠需提前3 分钟放置室温温,配制制的磁珠GMX写上“G磁珠MIX,日期,姓名首字母”；仪器准备:预先开启自动提取仪。
进一步的，所述步骤二中，吸取时从液面开始吸,枪头不要插得太深,吸取血浆时,至少保证采血管中剩余1厘米的血浆,如遇血浆量过少,可适当减少吸取血浆的体积；离心时,所有的EP管保持一致的朝向,开口方向面对离心机的中心，分离血浆时要在冰盒上操作,如等待离心机,应将血浆放4度冰箱，完成分离的血浆,需要立即进行下一步的提取或放在-2度保存。
本申请提供的血浆分离及DNA提取方法操作简单便利并且灵活、降低测序成本，减少测序流程，提高劳动效率，流程科学，标准明确，实践操作效果好。
具体实施方式
如在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领域技术人员应可理解，硬件制造商可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名称的差异来作为区分组件的方式，而是以组件在功能上的差异来作为区分的准则。说明书后续描述为实施本申请的较佳实施方式，然所述描述乃以说明本申请的一般原则为目的，并非用以限定本申请的范围。本申请的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
实施例一：
一种血浆分离及DNA提取方法，其特征在于，包括：
步骤一：做处理表单、试剂耗材准备和离心机预冷降温的实验准备；
步骤二：标本接收后根据清单和打印的提取表核对样本,检查样本是否存在样本管破裂、凝血等异常情况,如存在异常样本须填写血液标本质量监控表；实验样本按顺序放进低速离心机,进行第一次低速离心:1600g(RCF),10分钟, 离心后的样本用试管架分装拿出,检查样本是否存在溶血、脂血情况,如存在异常样本须填写血液标本质量监控表,其中溶血样本根据等级确定是否进行下一步实验，D级和E级需退单重抽血；低速离心的采血管需放置在预冷的蓝冰上吸取血浆，血浆吸取时需从上往下，分装2个2.0mL离心管中，每管1800uL；分完后血浆立即放入高速离心机离心，1600g(RCF),10分钟；高速离心完成的血浆样本需放置在预冷的蓝冰上吸取血浆,分装的2个2.0mL离心管中,1管400(600)uL和1管1800uL；分离完成的血浆进行下一步实验或保存；
步骤三：DNA提取包括自动提取和手动提取步骤，所述自动提取步骤包括：对照DNA提取流程表,核对样本编号；对照流程表,在深孔板各列加入提取试剂；对照流程表,在深孔板的第1和第7列的各孔加入不同的样本；深孔板小心安装到仪器的工作台,插入搅拌棒,选择程序运行开始DNA提取，得到提取完成的DNA。
所述步骤一中具体包括：处理表单:导出岗位清单,打印DNA提取表；
试剂耗材准备:准备垃圾桶、移液枪、枪头、离心管、蓝冰板等实验中需要的仪器和耗材；
将离心机预冷降温至4度。
所述步骤三还包括：得到提取完成的DNA按照顺序转40uL到浅孔板, 标记(格式样本首位编号+日期+姓名首字母)后放置-20℃保存,开启仪器的紫外灯,进行自净(1小时)。
所述手动提取步骤包括：400uL血浆加20uLPK加30uL磁珠经过旋涡离心，加500mlMLK经过旋涡离心后，37℃恒温混匀仪中放置混匀15min,转速 1000rpm，通过微离心,上磁力架,静置3min待澄清，弃上清,加500u1MW1, 涡旋15S微离心,上磁力架,静置1min待澄清弃上清,加入500u1MW2,涡旋 15S，微离心后上磁力架,静置1min待澄清后弃上清,加入500u1MW2,涡旋15S 后微离心,上磁力架,静置1min待澄清，微离心,去残留液,室温5-10min晾干磁珠，37度提前预热AE。加入41ul buffer AE,涡旋1min打散磁珠，提前调好恒温混匀仪程序。37℃恒温混匀仪中放置5min,转速1000rpm，微离心,上磁力架,静置1min待澄清，澄清后转40ul到EP管中,-20℃保存。
所述步骤三在DNA提取前还包括：
试剂耗材准备:根据样本数量选择是否使用自动化提取仪,准备实验用到的试剂和耗材，试剂盒第一次打开写上“0:开盒日期,姓名首字母MW2配制后需要在瓶盖加酒精处打钩,并在瓶身写上“加酒精x-mL,日期,姓名首字母”；配置PK,需要在瓶身上写上“已配PK,日期,姓名首字母”；提取磁珠需提前30 分钟放置室温温,配制制的磁珠GMX写上“G磁珠MIX,日期,姓名首字母”；仪器准备:预先开启自动提取仪。
所述步骤二中，吸取时从液面开始吸,枪头不要插得太深,吸取血浆时,至少保证采血管中剩余1厘米的血浆,如遇血浆量过少,可适当减少吸取血浆的体积；离心时,所有的EP管保持一致的朝向,开口方向面对离心机的中心，分离血浆时要在冰盒上操作,如等待离心机,应将血浆放4度冰箱，完成分离的血浆, 需要立即进行下一步的提取或放在-20度保存。
上述说明示出并描述了本申请的若干优选实施例，但如前所述，应当理解本申请并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述申请构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本申请的精神和范围，则都应在本申请所附权利要求的保护范围内。
Claims (6)
1.一种血浆分离及DNA提取方法，其特征在于，包括：
步骤一：做处理表单、试剂耗材准备和离心机预冷降温的实验准备；
步骤二：标本接收后根据清单和打印的提取表核对样本,检查样本是否存在样本管破裂、凝血等异常情况,如存在异常样本须填写血液标本质量监控表；实验样本按顺序放进低速离心机,进行第一次低速离心,离心后的样本用试管架分装拿出,检查样本是否存在溶血、脂血情况,如存在异常样本须填写血液标本质量监控表,其中溶血样本根据等级确定是否进行下一步实验；低速离心的采血管需放置在预冷的蓝冰上吸取血浆，血浆吸取时需从上往下，分装2个2.mL离心管中；分完后血浆立即放入高速离心机离心；高速离心完成的血浆样本需放置在预冷的蓝冰上吸取血浆,分装的2个2.mL离心管中；分离完成的血浆进行下一步实验或保存；
步骤三：DNA提取包括自动提取和手动提取步骤，所述自动提取步骤包括：对照DNA提取流程表,核对样本编号；对照流程表,在深孔板各列加入提取试剂；对照流程表,在深孔板的第1和第7列的各孔加入不同的样本；深孔板小心安装到仪器的工作台,插入搅拌棒,选择程序运行开始DNA提取，得到提取完成的DNA。
2.根据权利要求1所述的血浆分离及DNA提取方法，其特征在于，所述步骤一中具体包括：处理表单:导出岗位清单,打印DNA提取表；
试剂耗材准备:准备垃圾桶、移液枪、枪头、离心管、蓝冰板等实验中需要的仪器和耗材；
将离心机预冷降温至4度。
3.根据权利要求2所述的血浆分离及DNA提取方法，其特征在于，所述步骤三还包括：得到提取完成的DNA按照顺序转4uL到浅孔板，放置-2℃保存,开启仪器的紫外灯,进行自净。
4.根据权利要求3所述的血浆分离及DNA提取方法，其特征在于，所述手动提取步骤包括：血浆加PK加磁珠经过旋涡离心，加MLK经过旋涡离心后，37℃恒温混匀仪中放置混匀，通过微离心,上磁力架,静置待澄清，弃上清,加MW1,涡旋微离心,上磁力架,静置待澄清弃上清,加入MW2,涡旋，微离心后上磁力架,静置待澄清后弃上清,加入MW2,涡旋后微离心,上磁力架,静置待澄清，微离心,去残留液,室温晾干磁珠，提前预热AE，加入buffer AE,涡旋打散磁珠，提前调好恒温混匀仪程序，恒温混匀仪中放置，转速，微离心,上磁力架,静置待澄清，澄清后转到EP管中,保存。
5.根据权利要求1所述的血浆分离及DNA提取方法，其特征在于，所述步骤三在DNA提取前还包括：
试剂耗材准备:根据样本数量选择是否使用自动化提取仪,准备实验用到的试剂和耗材，试剂盒第一次打开写上“:开盒日期,姓名首字母MW2配制后需要在瓶盖加酒精处打钩,并在瓶身写上“加酒精x-mL,日期,姓名首字母”；配置PK,需要在瓶身上写上“已配PK,日期,姓名首字母”；提取磁珠需提前3分钟放置室温温,配制制的磁珠GMX写上“G磁珠MIX,日期,姓名首字母”；仪器准备:预先开启自动提取仪。
6.根据权利要求1所述的血浆分离及DNA提取方法，其特征在于，所述步骤二中，吸取时从液面开始吸,枪头不要插得太深,吸取血浆时,至少保证采血管中剩余1厘米的血浆,如遇血浆量过少,可适当减少吸取血浆的体积；离心时,所有的EP管保持一致的朝向,开口方向面对离心机的中心，分离血浆时要在冰盒上操作,如等待离心机,应将血浆放4度冰箱，完成分离的血浆,需要立即进行下一步的提取或放在-2度保存。
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