CN108410752A - 一种经蔗糖废液发酵的复合微生态制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种经蔗糖废液发酵的复合微生态制剂，以质量百分比为1:10的枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌作为活菌原料经接种发酵制备而成：首先将冷冻保藏管中的乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌分别在斜面中活化，单克隆之后得纯化菌种；然后利用各斜面菌种制备相应的原菌液；其次将各原菌液按1：10的菌量比接种培养，得微生物菌剂的一级种子；再将一级种子按 5% 的接种量接种培养，得微生物菌剂的二级种子；最后将二级种子按5%的接种量接种至已灭菌的采用蔗糖废液制备的发酵培养基中培养制得所述复合微生态制剂成品。采用本发明复合微生态制剂既能够提高水体中的溶氧量，又能降低水体中的 COD，从而起到改善、优化池塘水质的作用。
Description
技术领域
本发明涉及水产养殖领域用的复合微生态制剂，具体是一种经蔗糖废液发酵的复合微生态制剂及其制备方法。
背景技术
随着养殖技术的不断进步，我国的水产养殖业取得了突飞猛进的发展，成为世界上唯一养殖产量超过捕捞产量的渔业大国。在我国的水产养殖业中，高密度养殖造成已经是一种常态，水体富营养化非常严重。为了提高单位水体的养殖产量，片面追求高产，往往过分的增加水体营养，过度投饵、施肥和加大放养密度，致使水中有害微生物、有害藻类的过快繁殖，及出现排泄物和残饵污染，破坏养殖水体的生态尤其是微生态环境，从而直接或间接地危害水体中的养殖生物，进而使得优质水产品种的养殖受到水质的限制。水体生态环境被破坏，池塘中水产动物的病害发生频繁，渔业蒙受巨大损失。为了预防或防止病害，目前在整个养殖周期中均在使用鱼药，鱼药的使用虽然取得应急治疗的效果，但更多地带来了诸如抗药性、在水产品和环境中蓄积残留等问题。因此，从生态学角度来看，尽管养殖池塘是一个极为复杂的水生生态系统，但不论其多复杂，归根到底是一个环境的问题。养殖池塘水体生态环境的控制已成为发展我国池塘水产养殖的关键问题，又能够充分利用蔗糖废液，变废为宝，培养微生物进行池塘水质改良更显得十分重要。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种经蔗糖废液发酵的复合微生态制剂，能有效地改善池塘水质。
本发明的技术方案为：
一种经蔗糖废液发酵的复合微生态制剂，以质量百分比为1:10的枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌作为活菌原料经接种发酵制备而成，接种发酵过程所采用的发酵培养基由蔗糖废液配置而成。
所述发酵培养基的组分为：蔗糖废液100克、蛋白胨 10 克、牛肉膏 10 克、酵母粉5 克、葡萄糖 5 克、乙酸钠 5 克、柠檬酸二胺 2 克、磷酸氢二钾 2 克、硫酸镁 0.58 克、硫酸锰 0.28 克、水1000ml、PH7.0 。
所述经蔗糖废液发酵的复合微生态制剂的具体制备方法包括如下的步骤：
(1) 原菌种斜面培养 ：将冷冻保藏管中的枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌分别在斜面中活化，之后分别置于 90mm 培养皿中进行单克隆纯化，得枯草芽孢杆菌菌种和乳酸杆菌斜面菌种，备用 ；
(2) 原菌种液体培养 ：将枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅰ中，之后于 36℃ -39℃恒温培养24小时得枯草芽孢杆菌原菌液；将乳酸杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅱ中，接着于 37℃下厌氧培养 1-2 天得乳酸杆菌原菌液；
(3) 一级种子培养 ：乳酸杆菌原菌液和枯草芽孢杆菌原菌液按 1：10 的菌量比分别接种于已灭菌的液体培养基Ⅰ中进行培养，得一级菌种；
(4) 二级种子培养：将所得的一级种子按 5％的接种量接种于已灭菌的液体培养基Ⅰ中，并于 36℃ -38℃下培养24小时得的二级种子；
(5) 成品培养：将所得的两种二级种子按5％的接种量接种至已灭菌的发酵培养基中，并于 36℃ -38℃下培养24小时，获得所述复合微生态制剂的成品；
其中，液体培养基Ⅰ的组分：牛肉浸粉 10 克、蛋白胨5克，磷酸氢二钾 1 克、硫酸镁0.5 克、琼脂 20 克、水 1000ml、PH7.0-7.2 ；
液体培养基Ⅱ的组分 ：酵母粉 10 克、葡萄糖 10 克、乙酸钠 2克、磷酸氢二钾 1 克、硫酸镁 0.5 克、水 1000ml、PH7.0-7.2 。
进一步地，所述步骤 (1) 枯草芽孢杆菌在斜面中活化的具体操作为：首先制备斜面培养基Ⅰ，并将斜面培养基Ⅰ置于121℃下灭菌30min；然后用接种环将枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于已灭菌的斜面培养基Ⅰ中，并在36℃ -39℃恒温培养24小时获得枯草芽孢杆菌原菌液；
所述斜面培养基Ⅰ的组分为：牛肉浸粉 10 克、蛋白胨5克，磷酸氢二钾 1 克、硫酸镁0.5 克、琼脂 20 克、 水 1000ml、PH7.0-7.2。
进一步地，所述步骤 (1) 中乳酸菌在斜面中活化的具体操作为：首先制备斜面培养基Ⅱ，并将斜面培养基Ⅱ置于 121℃下灭菌 30min；然后用接种环将乳酸菌接种于斜面培养基Ⅱ上，然后于 36℃ -39℃下培养24小时获得乳酸菌原菌液；
所述斜面培养基Ⅱ的组分为：酵母粉 10 克、葡萄糖 10 克、乙酸钠 2克、磷酸氢二钾1 克、硫酸镁 0.5 克、水 1000ml、PH7.0-7.2。
更进一步地，所述步骤 (5) 中所述发酵培养基的灭菌条件为121℃，灭菌时间为30min。
本发明的有益效果为：
本发明采用蔗糖废液制备发酵培养基，实现了废料高效的利用，更重要的是本发明提供的复合微生态制剂既能够提高水体中的溶氧量，促进养殖生态系中的正常菌群和有益藻类活化生 长，保持养殖水体的生态平衡 ；又能使池塘中的排泄物和残饵污染得到净化，稳定和改善水质，从而降低了水体中的 COD，具有良好的改善、优化池塘水质的作用。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方案作进一步说明：
一种经蔗糖废液发酵的复合微生态制剂，以质量百分比为1:10的枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌作为活菌原料配置而成：首先将冷冻保藏管中的乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌分别在斜面中活化，单克隆之后得纯化菌种；然后利用各斜面菌种制备相应的原菌液；其次将各原菌液按1：10的菌量比接种于已灭菌的发酵培养基Ⅰ中进行培养，得微生物菌剂的一级种子；将一级种子按 5% 的接种量接种于已灭菌的发酵培养基Ⅱ中培养得微生物菌剂的二级种子；最后将二级种子按 5% 的接种量接种至已灭菌的采用蔗糖废液制备的发酵培养基中培养制得所述复合微生态制剂成品。
所述具体制备方法包括如下的步骤：
(1) 原菌种斜面培养 ：将冷冻保藏管中的枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌分别在斜面中活化，之后分别置于 90mm 培养皿中进行单克隆纯化，得枯草芽孢杆菌菌种和乳酸杆菌斜面菌种，备用；
(2) 原菌种液体培养 ：将枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅰ中，之后于 36℃ -39℃恒温培养24小时得枯草芽孢杆菌原菌液；将乳酸杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅱ中，接着于 37℃下厌氧培养 1-2 天得乳酸杆菌原菌液；
(3) 一级种子培养 ：乳酸杆菌原菌液和枯草芽孢杆菌原菌液按 1：10 的菌量比分别接种于已灭菌的液体培养基Ⅰ中进行培养，得一级菌种；
(4) 二级种子培养：将所得的一级种子按 5％的接种量接种于已灭菌的液体培养基Ⅰ中，并于 36℃ -38℃下培养24小时得的二级种子；
(5) 成品培养：首先制备发酵培养基，并将发酵培养基置于121℃下灭菌30min；然后将所得的两种二级种子按5％的接种量接种至已灭菌的发酵培养基中，并于 36℃ -38℃下培养24小时，获得所述复合微生态制剂的成品；
其中，液体培养基Ⅰ的组分：牛肉浸粉 10 克、蛋白胨5克，磷酸氢二钾 1 克、硫酸镁0.5 克、琼脂 20 克、水 1000ml、PH7.0-7.2 ；
液体培养基Ⅱ的组分 ：酵母粉 10 克、葡萄糖 10 克、乙酸钠 2克、磷酸氢二钾 1 克、硫酸镁 0.5 克、水 1000ml、PH7.0-7.2 。
发酵培养基的组分：蔗糖废液100克、蛋白胨 10 克、牛肉膏 10 克、酵母粉 5 克、葡萄糖 5 克、乙酸钠 5 克、柠檬酸二胺 2 克、磷酸氢二钾 2 克、硫酸镁 0.58 克、硫酸锰0.28 克、水1000ml、PH7.0 。
进一步地，所述步骤 (1) 枯草芽孢杆菌在斜面中活化的具体操作为：首先制备斜面培养基Ⅰ，并将斜面培养基Ⅰ置于121℃下灭菌30min；然后用接种环将枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于已灭菌的斜面培养基Ⅰ中，并在36℃ -39℃恒温培养24小时获得枯草芽孢杆菌原菌液；
所述斜面培养基Ⅰ的组分为：牛肉浸粉 10 克、蛋白胨5克，磷酸氢二钾 1 克、硫酸镁0.5 克、琼脂 20 克、 水 1000ml、PH7.0-7.2。
进一步地，所述步骤 (1) 中乳酸菌在斜面中活化的具体操作为：首先制备斜面培养基Ⅱ，并将斜面培养基Ⅱ置于 121℃下灭菌 30min；然后用接种环将乳酸菌接种于斜面培养基Ⅱ上，然后于 36℃ -39℃下培养24小时获得乳酸菌原菌液；
所述斜面培养基Ⅱ的组分为：酵母粉 10 克、葡萄糖 10 克、乙酸钠 2克、磷酸氢二钾1 克、硫酸镁 0.5 克、水 1000ml、PH7.0-7.2。
将本实施例制备的复合微生态制剂进行如下对比试验：在某水产养殖场中，取两池塘，该两池塘的面积、水深、养殖模式、放养量、配套设备、及饲养管理条件等配置均相同，且两池塘一个设置为试验池，另一个设置为对照池；在试验池中施用本发明的复合微生态制剂，施用量为 500ml/ 亩；对照池为空白对照池即未施用本发明复合微生态制剂；试验时间6月16日到6月23日。
试验结果：经检测，相对于对照池，试验池中，水体中的溶氧量提高了从 3.4mg/L提高到 5.6mg/L，即提高64.7％；COD 从 2600mg/ L 下降到 1500mg/L，降低了 42.3％；同时水质变得清爽嫩绿。可见，采用本发明复合微生态制剂能够优化池塘中水体的水质，既可以分解水中的有机物质，降低水体的污染，促进有益藻类的生长，平衡养殖水体的生态环境，从而促进池塘中养殖生物的健康生长。
Claims (6)
1.一种经蔗糖废液发酵的复合微生态制剂，其特征在于：活菌原料包括质量百分比为1:10的枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌，接种发酵过程所采用的发酵培养基由蔗糖废液配置而成。
2.根据权利要求1所述的经蔗糖废液发酵的复合微生态制剂，其特征在于：所述发酵培养基的组分为：蔗糖废液100克、蛋白胨 10 克、牛肉膏 10 克、酵母粉 5 克、葡萄糖 5 克、乙酸钠 5 克、柠檬酸二胺 2 克、磷酸氢二钾 2 克、硫酸镁 0.58 克、硫酸锰 0.28 克、水1000ml、PH7.0 。
3.根据权利要求1或者2所述的经蔗糖废液发酵的复合微生态制剂的制备方法，其特征在于，包括如下的步骤：
(1) 原菌种斜面培养 ：将冷冻保藏管中的枯草芽孢杆菌和乳酸杆菌分别在斜面中活化，之后分别置于 90mm 培养皿中进行单克隆纯化，得枯草芽孢杆菌菌种和乳酸杆菌斜面菌种，备用 ；
(2) 原菌种液体培养 ：将枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅰ中，之后于 36℃ -39℃恒温培养24小时得枯草芽孢杆菌原菌液；将乳酸杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅱ中，接着于 37℃下厌氧培养 1-2 天得乳酸杆菌原菌液；
(3) 一级种子培养 ：乳酸杆菌原菌液和枯草芽孢杆菌原菌液按 1：10 的菌量比分别接种于已灭菌的液体培养基Ⅰ中进行培养，得一级菌种；
(4) 二级种子培养：将所得的一级种子按 5％的接种量接种于已灭菌的液体培养基Ⅰ中，并于 36℃ -38℃下培养24小时得的二级种子；
(5) 成品培养：将所得的两种二级种子按5％的接种量接种至已灭菌的发酵培养基中，并于 36℃ -38℃下培养24小时，获得所述复合微生态制剂的成品；
其中，液体培养基Ⅰ的组分：牛肉浸粉 10 克、蛋白胨5克，磷酸氢二钾 1 克、硫酸镁0.5 克、琼脂 20 克、水 1000ml、PH7.0-7.2 ；
液体培养基Ⅱ的组分 ：酵母粉 10 克、葡萄糖 10 克、乙酸钠 2克、磷酸氢二钾 1 克、硫酸镁 0.5 克、水 1000ml、PH7.0-7.2 。
4.根据权利要求3所述的经蔗糖废液发酵的复合微生态制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤 (1) 枯草芽孢杆菌在斜面中活化的具体操作为：首先制备斜面培养基Ⅰ，并将斜面培养基Ⅰ置于121℃下灭菌30min；然后用接种环将枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于已灭菌的斜面培养基Ⅰ中，并在36℃ -39℃恒温培养24小时获得枯草芽孢杆菌原菌液；
所述斜面培养基Ⅰ的组分为：牛肉浸粉 10 克、蛋白胨5克，磷酸氢二钾 1 克、硫酸镁0.5 克、琼脂 20 克、 水 1000ml、PH7.0-7.2。
5.根据权利要求3所述的经蔗糖废液发酵的复合微生态制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤 (1) 中乳酸菌在斜面中活化的具体操作为：首先制备斜面培养基Ⅱ，并将斜面培养基Ⅱ置于 121℃下灭菌 30min；然后用接种环将乳酸菌接种于斜面培养基Ⅱ上，然后于36℃ -39℃下培养24小时获得乳酸菌原菌液；
所述斜面培养基Ⅱ的组分为：酵母粉 10 克、葡萄糖 10 克、乙酸钠 2克、磷酸氢二钾1 克、硫酸镁 0.5 克、水 1000ml、PH7.0-7.2。
6.根据权利要求3所述的经蔗糖废液发酵的复合微生态制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤 (5) 中所述发酵培养基的灭菌条件为121℃，灭菌时间为30min。
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