CN108403492A - 一种用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液及其制备方法与应用 - Google Patents

一种用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液及其制备方法与应用。所述方法包括如下步骤：将原料洋甘菊、忍冬花和草木犀预处理得到混合植物片；将制得的混合植物片置于20～45℃的浸泡液中浸泡15～30分钟，所述浸泡液包括5～10份的第一酶制剂、1～5份醇类物质及40～100份水；将浸泡液和浸泡后的植物片在预设温度下超声处理1～2小时，静止分层后分离得到上清液；将上清液加热再冷却至室温后并利用超声波将其与第二酶制剂复配得到混合液；混合液采用装填有树脂填料的色谱层析柱纯水洗脱，去除杂质，获得的洗脱液即抗过敏植物提取液。本发明提供的抗过敏植物提取液温和无刺激，抗过敏能力强，具天然防腐性能。

Description

一种用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液及其制备方法 与应用
【技术领域】
本发明涉及酶法提取活性物质技术领域，尤其涉及一种用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液及其制备方法与应用。
【背景技术】
洋甘菊(Matricaria chamomillaL.)又称母菊，为菊科母菊属(Matricaria)的一年生或多年生草本，全草香气，含有挥发性芳香油，具有抗过敏、杀菌、保湿美白等功能，是一种极具开发价值的香料植物。
忍冬花(金银花)为忍冬科多年生常绿缠绕植物的干燥花蕾或初开的花。其味苦、性寒，具有清热解毒、凉散风热、保肝利胆等功效，是传统的药食同源植物。具有对人体有利的植物活性成分，如绿原酸、异绿原酸、木犀草素等黄酮类化合物。黄酮类化合物具有较高的生物活性，如抗菌、抗病毒，增强机体免疫力，抗氧化及抗自由基、抗癌防癌，并且无毒无害。金银花的提取物可清热祛痘、促进细胞代谢，为肌肤提供营养，帮助肌肤排出毒素，令肌肤光滑润白。同时具有光谱防晒作用，对自由基有很强的清除作用、抗衰老，是理想的天然防晒剂。
草木犀为豆科植物草木犀的干燥全草、果及根。草木犀现收录于《藏药部颁标准》，其性味苦、凉，具有清热解毒、消炎、干四肢浓水的功效，用于脾脏病、绞肠痧、白喉、乳蛾等治疗。草木犀作为药用植物，草木犀的花、叶中的提取物能有效抑制炎性因子合成与释放，缓解炎症反应的程度。
目前抗过敏提取物种类较多，但绝大部分为单一植物提取物，且大都为有机溶剂方法提取，存在提取物中有机溶剂过敏等风险，导致提取物抗过敏性不强。
【发明内容】
本发明的目的在于提供一种用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液的方法，以克服现有技术有机溶剂提取法导致的提取物抗过敏性不强及安全性和功效性不高的技术缺陷。
为达到上述目的，本发明提供一种用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
(1)将原料10～80份洋甘菊、10～80份忍冬花和10～80份草木犀预处理得到长度小于预设值的混合植物片；
(2)将步骤(1)制得的混合植物片置于20～45℃的浸泡液中浸泡15～30分钟，所述浸泡液包括5～10份的第一酶制剂、1～5份醇类物质及40～100份水，其中，所述第一酶制剂为纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和半纤维素酶中的一种或两种以上的混合物，所述醇类物质为1,2-己二醇、丁二醇、丙二醇、辛甘醇中的一种或两种以上的混合物；
(3)将浸泡液和浸泡后的混合植物片转移至超声波处理器中，在20～45℃下超声处理1～2小时，静止分层后分离得到上清液；
(4)将所述上清液在85～100℃下加热5～15分钟，待冷却至室温后，再加入5～10份的第二酶制剂，并在20～45℃下超声处理1～2小时得到混合液，其中，所述第二酶制剂包括葡糖氧化酶和/或溶菌酶；
(5)所述混合液采用装填有树脂填料的色谱层析柱纯水洗脱，去除杂质，获得的洗脱液即抗过敏植物提取液。
在本发明提供的抗过敏植物提取液的制备方法一较佳实施例中，所述洋甘菊、所述忍冬花和所述草木犀的重量之比为(0.25～2)：(0.5～8)：1。
在本发明提供的抗过敏植物提取液的制备方法一较佳实施例中，所述第二酶制剂还包括辅酶Q10或蛋白酶。
本发明同时提供一种用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液，所述抗过敏植物提取液采用上文所述的抗过敏植物提取液的制备方法制备得到。
本发明还提供上文所述的用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液在制备化妆品、个人洗护用品和洗涤剂中的应用。
本发明还提供一种抗过敏护臀霜，以其总重量为100％计，其包括0.1～15％的上文所述的制备方法制备得到的抗过敏植物提取液。
本发明还提供一种抗过敏沐浴露，以其总重量为100％计，其包括0.1～15％的上文所述的制备方法制备得到的抗过敏植物提取液。
本发明还提供一种抗过敏化妆水，以其总重量为100％计，其包括0.5～18％的上文所述的制备方法制备得到的抗过敏植物提取液。
本发明还提供一种抗过敏餐具洗涤剂，以其总重量为100％计，其包括0.1～12％的上文所述的制备方法制备得到的抗过敏植物提取液。
本发明还提供一种抗过敏重油污洗涤剂，以其总重量为100％计，其包括0.2～15％的上文所述的制备方法制备得到的抗过敏植物提取液。
与相关技术相比，本发明提供的用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液及其制备方法与应用具有以下有益效果：
一、本发明提供的抗过敏植物提取液以洋甘菊、忍冬花和草木犀为原料，利用复合生物酶特有技术提取活性物质，在第一酶制剂和醇类物质的共同作用下，全面破解植物细胞壁及细胞间质的密闭结构，高效提取原料中的活性物质，并避免了使用有毒性的有机溶剂，提高了抗过敏植物提取液的安全性。
二、利用超声波有效复配第二酶制剂和从原料中提取的活性物质，使制备的抗过敏植物提取液自身具防腐性能，无需再添加防腐剂，一方面可以避免添加防腐剂带来的刺激等负面作用，提高产品体系的抗过敏能力，另一方面还能延长产品自身的使用寿命。
三、本发明提供的抗过敏植物提取液为可溶性液体，克服了粉末状抗过敏提取物在各类产品体系中的兼容应用的局限性，且本发明提供的抗过敏植物提取液温和无刺激，抗过敏能力强(透明质酸酶抑制率在90％以上)。
【具体实施方式】
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供一种用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液的制备方法，所述方法包括如下步骤：
步骤一、将原料10～80份洋甘菊、10～80份忍冬花和10～80份草木犀预处理得到长度小于预设值的混合植物片；
具体地，所述洋甘菊选自罗马洋甘菊(CHAMAEMELUM NOBILE)、德国洋甘菊(MATRICARIA RECUTICA)、摩洛哥洋甘菊(ORMENIS MULTICAULIS)的一种或两种混合物。优选地，所述洋甘菊为罗马洋甘菊。所述忍冬花选自广东区域忍冬花、湖北区域忍冬花、海南区域忍冬花、江苏区域忍冬花中的一种或两种以上。优选地，所述忍冬花为广东区域忍冬花。所述草木犀为白花草木犀、细草木犀、细齿草木犀中的一种或两种以上。优选地，所述草木犀为白花草木犀。
将洋甘菊、忍冬花和草木犀清洗干净，剪成小片块，然后再使用榨汁机破碎，破碎后的各原料的长度小于8mm，即通过榨汁机破碎后的混合植物片的长度小于8mm。需要说明的是，洋甘菊、忍冬花和草木犀可以分别用榨汁机破碎再混合，或者在破碎前将洋甘菊、忍冬花和草木犀混合，然后再一起破碎。使用不同型号的榨汁机对原料的破碎程度也不一样，8mm为优选值。
优选地，所述洋甘菊、所述忍冬花和所述草木犀的重量之比为(0.25～2)：(0.5～8)：1。
优选地，所述洋甘菊、所述忍冬花和所述草木犀的重量之比为1:1:1、1:2:1、1:4:1、1:6:1、1:8:1、2:1:1、4:1:2、6:1:2和8:1:2。
更为优选地，所述洋甘菊、所述忍冬花和所述草木犀的重量之比为2：1：1。
步骤二、将步骤一制得的混合植物片置于20～45℃的浸泡液中浸泡15～30分钟，所述浸泡液包括5～10份的第一酶制剂、1～5份醇类物质及40～100份水，其中，所述第一酶制剂为纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和半纤维素酶中的一种或多种混合物；所述醇类物质为1,2-己二醇、丁二醇、丙二醇、辛甘醇中的一种或多种混合物。
本发明利用复合生物酶特有技术提取活性物质，在第一酶制剂和醇类物质的共同作用下，全面破解植物细胞壁及细胞间质的密闭结构，高效提取洋甘菊、忍冬花和草木犀中的活性物质，并避免了使用有毒性的有机溶剂，提高了抗过敏植物提取液的安全性。
优选地，所述第一酶制剂为所述纤维素酶、所述果胶酶和所述木聚糖酶的混合物，且所述木聚糖酶、所述纤维素酶和所述果胶酶和的重量比组成为1：(2～8)：(1～6)。
其中，纤维素酶与果胶酶能够使细胞壁或细胞间质中的纤维素、果胶等物质降解，破坏细胞壁的致密结构，引起细胞壁及细胞间质结构产生局部疏松、膨胀、崩溃等变化，减小细胞壁、细胞间质等传质屏障对有效成分从胞内向提取介质扩散的传质阻力，从传质角度促使有效成分提取率提高。
木聚糖是植物半纤维素的重要组分，木聚糖结构复杂，完全降解需要多种酶的参与，而木聚糖酶是参与降解酶系中最重要的一种。木聚糖是指可将木聚糖降解成低聚糖和木糖的一组酶的总称，木聚糖酶可以破碎植物细胞壁，提高养分的木聚糖降解为聚合度较低的小分子片段，破坏细胞壁的结构，将细胞壁束缚的营养物质释放出来。
半纤维素酶是一种能使构成植物细胞膜的多糖类(纤维素和果胶物质除外)水解的酶类。
其中，1,2-己二醇、丁二醇、丙二醇和辛甘醇均能够溶解一定的植物体成分，同时安全性好，具有各自的优良特性。如1,2-己二醇，能够高效长久保湿，还有着防腐杀菌的功效；丁二醇触感滑爽，性质稳定，可以获得更柔软的肤感；丙二醇的粘性和吸湿性好，无毒；辛甘醇具有一定的保湿与抗菌活性。优选地，所述醇类物质为丙二醇。
步骤三、将浸泡液和浸泡后的混合植物片转移至超声波处理器中，在20～45℃下超声处理1～2小时，静止分层后分离得到上清液；其中，分离方法可以为离心或过滤。
一般情况下，为了减少制备工艺时间，超声处理的温度和浸泡的温度相同。
步骤四、将所述上清液在85～100℃下加热5～15分钟，待冷却至室温后，再加入5～10份的第二酶制剂，并在20～45℃下超声处理1～2小时得到混合液，其中，所述第二酶制剂包括葡糖氧化酶和/或溶菌酶；
优选地，所述第二酶制剂还包括辅酶Q10或蛋白酶。
第二酶制剂为功效性酶制剂，葡糖氧化酶和溶菌酶能抑制菌斑形成，能够有效去除菌落种群，使提取的抗过敏植物提取液自身具防腐性能，延长了产品的使用寿命，且避免加入其他防腐剂使产生过敏现象。辅酶Q10和蛋白酶可提高其在应用时的功效。
具体地：
葡糖氧化酶能有效快速分解葡聚糖，溶解菌斑，抑制菌斑形成，能够有效去除菌落种群。
溶菌酶是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活，因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。溶菌酶作为防腐剂安全性高。溶菌酶是一种天然蛋白质，性质很稳定。
辅酶Q10是一种脂溶性抗氧化剂，能激活人体细胞和细胞能量的营养，具有提高人体免疫力、增强抗氧化、延缓衰老和增强人体活力等功能。同时能深入细胞，强化细胞新成代谢功能，活络细胞间紧实结合能力，另一方面在表皮层形成弹性的网状结构，确实修补因失水性造成的皱纹，并进而达到真正的保湿功效。
步骤五、所述混合液采用装填有树脂填料的色谱层析柱纯水洗脱，去除杂质，获得的洗脱液即抗过敏植物提取液。
本发明还提供采用上文所述的抗过敏植物提取液的制备方法制备得到的用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液，该抗过敏植物提取液可以在制备化妆品、个人洗护用品和洗涤剂中应用。
本发明还具体公开了抗过敏植物提取液在护臀霜、沐浴露、化妆水、餐具洗涤剂和重油污洗涤剂中的具体应用。具体实现的技术方案如下：
一种抗过敏护臀霜，以其总重量为100％计，其包括0.1～15％的上文所述的制备方法制备得到的抗过敏植物提取液。
优选地，所述抗过敏护臀霜包括以重量百分比计的如下组份：甘油4.5～6.5％、丁二醇2.0％～3.0％、尿囊素0.15％～0.20％、葡糖酸钠0.005％～0.01％、辛酸/癸酸甘油三酯2.0％～3.5％、氢化聚异丁烯2.0％～3.0％、异壬酸异壬酯0.5％～1.5％、鲸蜡硬脂醇0.1％～0.8％、聚丙烯酸酯交联聚合物-6 0.2％～0.8％、聚山梨醇酯-60 0.015％～0.07％、叔丁醇0.0025％～0.01％、抗过敏植物提取液0.1％～15％、柠檬酸0.01％～0.05％、余量为去离子水，以所述抗过敏护臀霜总重量为100％计。
更为优选地，所述抗过敏护臀霜包括以重量百分比计的如下组份：甘油4.5％、丁二醇2.3％、尿囊素0.20％、葡糖酸钠0.005％、辛酸/癸酸甘油三酯2.5％、氢化聚异丁烯2.5％、异壬酸异壬酯1.5％、鲸蜡硬脂醇0.5％、聚丙烯酸酯交联聚合物-6 0.8％、聚山梨醇酯-60 0.032％、叔丁醇0.0065％、抗过敏植物提取液5.0％、柠檬酸0.01％、去离子水80.1465％。
一种抗过敏沐浴露，以其总重量为100％计，其包括0.1～15％的上文所述的制备方法制备得到的抗过敏植物提取液。
优选地，所述抗过敏沐浴露包括以重量百分比计的如下组份：椰油酰胺丙基甜菜碱4.5％～6.5％、月桂基葡糖苷2.0％～3.0％、癸基葡糖苷0.15％～0.2％、椰油酰两性基二乙酸二钠0.005％～0.01％、PEG-150二硬脂酸酯2.0％～3.5％、PEG-7甘油椰油酸酯2.0％～3.0％、抗过敏植物提取液0.1％～15.0％、柠檬酸0.01％～0.05％、余量为去离子水。
更为优选地，所述抗过敏沐浴露包括以重量百分比计的如下组份：椰油酰胺丙基甜菜碱5.0％、月桂基葡糖苷2.0％、癸基葡糖苷0.15％、椰油酰两性基二乙酸二钠0.01％、PEG-150二硬脂酸酯2.0％、PEG-7甘油椰油酸酯2.0％、抗过敏植物提取液5.0％、柠檬酸0.01％、去离子水83.83％。
一种抗过敏化妆水，以其总重量为100％计，其包括0.5～18％的上文所述的制备方法制备得到的抗过敏植物提取液。
优选地，所述抗过敏化妆水包括以重量百分比计的如下组份：甘油4.5％～6.5％、抗过敏植物提取液0.5％～18％、丁二醇0.8％～2％、PEG-60氢化蓖麻油0.2％～1.0％、香精0.05％～0.2％、柠檬酸0.01％～0.05％、余量为去离子水。
更为优选地，所述抗过敏化妆水包括以重量百分比计的如下组份：甘油6.5％、抗过敏植物提取液3.0％、丁二醇1.0％、PEG-60氢化蓖麻油1.0％、香精0.05％、柠檬酸0.03％、去离子水88.42％。
一种抗过敏餐具洗涤剂，以其总重量为100％计，其包括0.1～12％的上文所述的制备方法制备得到的抗过敏植物提取液。
优选地，所述抗过敏餐具洗涤剂包括以重量百分比计的如下组份：葡糖糖酸钠0.15％～0.3％、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠12％～15％、脂肪醇聚氧乙烯醚9％～12％、烷基糖苷2％～3.5％、抗过敏植物提取液0.1％～12％、食用酒精0.05％～0.5％、柠檬酸0.01％～0.05％、氯化钠0.8％～1.5％、余量为去离子水。
更为优选地，所述抗过敏餐具洗涤剂包括以重量百分比计的如下组份：葡糖糖酸钠0.15％、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠15％、脂肪醇聚氧乙烯醚10％、烷基糖苷2％、抗过敏植物提取液0.5％、食用酒精0.05％、柠檬0.03％、氯化钠1.5％、去离子水70.77％。
一种抗过敏重油污洗涤剂，以其总重量为100％计，其包括0.2～15％的上文所述的制备方法制备得到的抗过敏植物提取液。
优选地，所述抗过敏重油污洗涤剂包括以重量百分比计的如下组份：月桂基聚氧乙烯醚1.0％～3.0％、聚氧乙烯醚硫酸盐12％～30％、月桂基二甲基氧化胺6％～12％、烷基糖苷2％～6.5％、抗过敏植物提取液0.2％～15％、硼砂0.01％～0.05％、余量为去离子水。
更为优选地，所述抗过敏重油污洗涤剂包括以重量百分比计的如下组份：月桂基聚氧乙烯醚2.0％、聚氧乙烯醚硫酸盐12％、月桂基二甲基氧化胺9％、烷基糖苷2.5％、抗过敏植物提取液10％、硼砂0.03％、去离子水64.47％。
一、制备抗过敏植物提取液(实施例1-9)
实施例1
将20份洋甘菊、10份忍冬花、10份草木犀清洗干净，剪成小片块后，混匀，使用榨汁机破碎；然后加入50份水、9.5份的第一酶制剂(纤维素酶3.5份、果胶酶3.5份、木聚糖酶2.5份)、1份醇类物质(丙二醇1份)，置于25℃温度恒温水浴锅内浸泡30min；浸泡后转移至超声波处理器中，在25℃温度下以继续超声1h；然后静置分层，离心或过滤得到上清液；再将上清液在90℃下加热10min，待上清液冷却至室温后，加入5.5份第二酶制剂(葡糖氧化酶2份、溶菌酶3.5份)，在25℃下继续超声1h得到混合液；最后将所述混合液通过装填有树脂填料的色谱层析柱，用水洗涤，以除去杂质，收集洗脱液，即得到抗过敏植物提取液。
实施例1中，洋甘菊、忍冬花和草木犀的重量之比为2：1：1，实施例2～9除将洋甘菊、忍冬花和草木犀的重量之比如表1所示那样进行变更以外，其他都和实施例1同样的条件下进行制备得到抗过敏植物提取液，实施例2～9中各原料的重量比如下：
表1
二、为了进一步说明本发明实施例提供的抗过敏植物提取液的安全性及功效性，以下通过试验例进一步说明本发明实施例提供的抗过敏植物提取液的有益效果：
试验一：过敏性实验(透明质酸酶体外抑制试验)
实验样品：本发明实施例1～9提供的抗过敏植物提取液
实验方法：取0.1mL 0.25mmol/L CaCl2溶液和0.5mL透明质酸酶液于37℃恒温水浴锅内培养20min；随后加入样品液0.5mL，恒温培养20min；再加入0.5mL透明质酸钠液37℃恒温30min。随后置于常温放置5min后，加入0.1mL 0.4mol/L NaOH溶液和0.5mL乙酰丙酮溶液，置沸水浴中加热15min后，立即用冰水冷却5min；最后加入埃尔利希试剂1.0mL并用3.0mL无水乙醇进行稀释，放置20min显色，用分光光度计测定其吸光度(A)。
透明质酸酶抑制率＝[(A-B)-(C-D)]×100％/(A-B)；A为对照溶液吸光度(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液)，B为对照空白溶液吸光度(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液)，C为试样溶液吸光度值，D为试样空白溶液吸光度(用醋酸缓冲溶液代替酶液)
表2
透明质酸酶是过敏反应参与者，其与过敏有强相关性，许多抗过敏药物有强抑制透明质酸酶活性的作用。本实验采用透明质酸酶体外抑制试验对本发明中的抗过敏植物提取液进行过敏性功效测试，本发明的抗过敏植物提取液由洋甘菊、忍冬花、草木犀在多种酶的作用下复配而成，将三者体内的有效抗过敏成分发挥到极致。通过实验发现本发明的抗过敏植物提取液对于透明质酸酶抑制率均在90％以上，具有极好的抗过敏效果。本发明的实施例1提供的抗过敏植物提取液对于透明质酸酶的抑制率最高，洋甘菊、忍冬花、草木犀的份数之比为2:1:1，结果见表2。
试验二：防腐效果测试
1、试验样品：本发明实施例1提供的抗过敏植物提取液样品；实验菌为大肠杆菌ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC 6538、铜绿假单胞菌ATCC 9027、白色念珠菌ATCC10231。
2、试验方法：微生物挑战性实验方法。
3、试验结果评定：采用《欧洲药典》的结果评定标准对本次试验结果进行评定，具体详见下表3。
表3
从上表3的测试结果可知，4种实验菌于第7天时(1周)菌落总数均下降100％，至第28天时无增长，判定通过挑战性实验，防腐效能良好，即本发明实施例1提供的抗过敏植物提取液采用溶菌酶、葡糖氧化酶及多元醇复配构建的防腐体系的防腐效果良好。
试验三：眼部刺激性/腐蚀性测试
1、试验样品：本发明实施例1～9提供的抗过敏植物提取液。
2、试验方法：SN/T 2329-2009化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验。
3、试验结果评价标准：刺激评分标准分为以下等级：IS＜1为无刺激性；1≤IS＜5为轻刺激性；5≤IS＜9为中度刺激性；IS≥10为强刺激性/腐蚀性。
4、试验结果：经过试验，本发明的抗过敏植物提取液的刺激评分均为IS＜1，即本发明实施例提供的抗过敏植物提取液对眼部温和无刺激性。
试验4：皮肤刺激性试验
(一)皮肤封闭型斑贴试验
1、试验样品：本发明实施例1～9提供的抗过敏植物提取液。
2、试验方法：从某一区域选择20名志愿者，志愿者的年龄在20～45岁之间，身体健康，近期未服用药物，非哺乳妇女或妊娠妇女，非体质敏感者。随机将志愿者平均分成10组，每组两个人。其中，组1为空白对照组，斑试器小室内不放置任何物质，将斑试器用低致敏胶带贴敷于志愿者的背部或者前臂屈侧，用手掌轻压使之均匀地贴敷在皮肤上；组2～组10与组1的处理方法相同，不同的是：分别将加有0.025mL本发明提供的抗过敏植物提取液放入斑试器小室内；即组2对应的是实施例1提供的抗过敏植物提取液，组3对应的是本发明实施例2提供的抗过敏植物提取液，组4对应的是本发明实施例3提供的抗过敏植物提取液……以此类推，组10对应的是本发明实施例9提供的抗过敏植物提取液。各组试验持续24小时、48小时后，去除斑试器后30min，待压痕消失后，观察贴敷处皮肤的反应情况并记录。
其中，皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准见下表4。
表4
在整个试验过程中，组1～组10的受试者的受势部位皮肤反应均呈阴性反应。由此可以看出，本发明实施例提供的抗过敏植物提取液不会引起皮肤的过敏和刺激反应，安全性好。
(二)重复性开放型涂抹试验
1、试验样品：本发明实施例1～9提供的抗过敏植物提取液。
2、从某一区域中选择20名志愿者，志愿者的年龄在20-45岁之间，身体健康，近期未服用药物，非哺乳妇女或妊娠妇女，非体质敏感者。随机将志愿者平均分成10组，每组两个人。其中，组1为空白对照组，以前臂屈作为受试部位，面积3×3cm2，受试部位保持干燥，受试前和受势期间避免接触其他外用制剂，用超纯水0.05±0.005g/次，均匀地涂抹受试部位；组2～组10分别为试验组，与组1不同的是：采用本发明实施例1～9提供的抗过敏植物提取液0.05±0.005g/次均匀地涂抹受试部位；其中，即组2对应的是实施例1提供的抗过敏植物提取液，组3对应的是本发明实施例2提供的抗过敏植物提取液，组4对应的是本发明实施例3提供的抗过敏植物提取液……以此类推，组10对应的是本发明实施例9提供的抗过敏植物提取液。各组每天进行2次均匀地涂抹受试部位，连续试验7天后完成试验，每天观察受试者的受试部位的皮肤反应情况并记录。在试验的过程中，如果出现如下表5中的3分以上的皮肤反应情况时，可停止继续试验并记录结果。
其中，表5为皮肤重复性开放型涂抹试验皮肤反应评判标准表。
表5
在整个试验过程中，组1～组10的受试者的受势部位的皮肤反应均呈阴性反应。由此可以看出，本发明实施例提供的抗过敏植物提取液不会引起皮肤的过敏和刺激反应，安全性好。
三、应用实施例10
实施例1制备的抗过敏植物提取液在抗过敏护臀霜中的应用
表6
表7
表6为本发明的抗过敏植物提取液在护臀霜中的应用。抗过敏植物提取液具有天然的防腐性能，添加在配方体系中，能够替代防腐剂起到防腐作用，配方体系中无需添加防腐剂。通过表7的结果可知，护臀霜配方1～5均通过防腐挑战性实验；同时，护臀霜配方1～5对于透明质酸酶抑制率均在70％以上，最高达91.87％，体现护臀霜产品具有较好的抗过敏性能，呵护宝宝娇嫩肌肤。
四、应用实施例11
实施例1制备的抗过敏植物提取液在抗过敏沐浴露中的应用
表8
表9
配方1 配方2 配方3 配方4 配方5
透明质酸酶抑制率/％ 90.97 74.65 81.22 86.73 89.69
是否通过防腐挑战性实验 通过 通过 通过 通过 通过
表8为本发明的抗过敏植物提取液在沐浴露中的应用。抗过敏植物提取液具有天然的防腐性能，添加在配方体系中，能够替代防腐剂起到防腐作用，通过表9的结果可知，沐浴露配方1～5均通过防腐挑战性实验；同时，沐浴露配方1～5对于透明质酸酶抑制率均在70％以上，最高达90.97％，体现沐浴露具有较好的抗过敏性能，给予肌肤安全保护。
五、应用实施例12
实施例1制备的抗过敏植物提取液在抗过敏化妆水中的应用
表10
表11
配方1 配方2 配方3 配方4 配方5
透明质酸酶抑制率/％ 90.11 84.23 80.35 92.04 78.51
是否通过防腐挑战性实验 通过 通过 通过 通过 通过
表10为本发明的抗过敏植物提取液在化妆水中的应用。抗过敏植物提取液具有天然的防腐性能，添加在配方体系中，能够替代防腐剂起到防腐作用，通过表11的结果可知，化妆水配方1～5均通过防腐挑战性实验；同时，化妆水配方1～5对于透明质酸酶抑制率均在75％以上，最高达92.04％，体现化妆水产品具有较好的抗过敏性能。
六、应用实施例13
实施例1制备的抗过敏植物提取液在抗过敏餐具清洗剂中的应用
表12
表13
配方1 配方2 配方3 配方4 配方5
透明质酸酶抑制率/％ 90.23 73.23 80.59 87.04 90.01
是否通过防腐挑战性实验 通过 通过 通过 通过 通过
表12为本发明的抗过敏性复合提取液在餐具清洗剂中的应用。抗过敏性复合提取液具有天然的防腐性能，添加在配方体系中，能够替代防腐剂起到防腐作用，无须在产品体系中添加防腐剂。通过表13的结果可知，化妆水配方1～5均通过防腐挑战性实验；同时，餐具清洗剂配方1～5对于透明质酸酶抑制率均在72％以上，最高达90.23％，体现餐具清洗剂产品具有较好的抗过敏性能。
七、应用实施例14
实施例1制备的抗过敏提取液在抗过敏重油污清洗剂中的应用
表14
表15
配方1 配方2 配方3 配方4 配方5
透明质酸酶抑制率/％ 92.15 81.21 75.05 88.12 89.97
是否通过防腐挑战性实验 通过 通过 通过 通过 通过
表14为本发明的抗过敏性植物提取液在厨房重油污清洗剂中的应用。抗过敏性植物提取液具有天然的防腐性能，添加在配方体系中，能够替代防腐剂起到防腐作用，无须在产品体系中添加防腐剂。通过表15的结果可知，厨房重油污清洗剂配方1～5均通过防腐挑战性实验；同时，厨房重油污清洗剂配方1～5对于透明质酸酶抑制率均在75％以上，最高达92.15％，体现餐具清洗剂产品具有较好的抗过敏性能。
本发明提供的用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液及其制备方法与应用具有以下有益效果：
一、本发明提供的抗过敏植物提取液以洋甘菊、忍冬花和草木犀为原料，利用复合生物酶特有技术提取活性物质，在第一酶制剂和醇类物质的共同作用下，全面破解植物细胞壁及细胞间质的密闭结构，高效提取原料中的活性物质，并避免了使用有毒性的有机溶剂，提高了抗过敏植物提取液的安全性。
二、利用超声波有效复配第二酶制剂和从原料中提取的活性物质，使制备的抗过敏植物提取液自身具防腐性能，无需再添加防腐剂，一方面可以避免添加防腐剂带来的刺激等负面作用，提高产品体系的抗过敏能力，另一方面还能延长产品自身的使用寿命。
三、本发明提供的抗过敏植物提取液为可溶性液体，克服了粉末状抗过敏提取物在各类产品体系中的兼容应用的局限性，且本发明提供的抗过敏植物提取液温和无刺激，抗过敏能力强(透明质酸酶抑制率在90％以上)。
以上所述的仅是本发明的实施方式，在此应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出改进，但这些均属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
(1)将原料10～80份洋甘菊、10～80份忍冬花和10～80份草木犀预处理得到长度小于预设值的混合植物片；
(2)将步骤(1)制得的混合植物片置于20～45℃的浸泡液中浸泡15～30分钟，所述浸泡液包括5～10份的第一酶制剂、1～5份醇类物质及40～100份水，其中，所述第一酶制剂为纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和半纤维素酶中的一种或两种以上的混合物，所述醇类物质为1,2-己二醇、丁二醇、丙二醇、辛甘醇中的一种或两种以上的混合物；
(3)将浸泡液和浸泡后的混合植物片转移至超声波处理器中，在20～45℃下超声处理1～2小时，静止分层后分离得到上清液；
(4)将所述上清液在85～100℃下加热5～15分钟，待冷却至室温后，再加入5～10份的第二酶制剂，并在20～45℃下超声处理1～2小时得到混合液，其中，所述第二酶制剂包括葡糖氧化酶和/或溶菌酶；
(5)所述混合液采用装填有树脂填料的色谱层析柱纯水洗脱，去除杂质，获得的洗脱液即抗过敏植物提取液。
2.根据权利要求1所述的用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液的制备方法，其特征在于，所述洋甘菊、所述忍冬花和所述草木犀的重量之比为(0.25～2)：(0.5～8)：1。
3.根据权利要求1所述的用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液的制备方法，其特征在于，所述第二酶制剂还包括辅酶Q10或蛋白酶。
4.一种用生物酶加工和防腐的抗过敏植物提取液，其特征在于，所述抗过敏植物提取液采用权利要求1至3中任一项所述的抗过敏植物提取液的制备方法制备得到。
5.权利要求4所述的抗过敏植物提取液在制备化妆品、个人洗护用品和洗涤剂中的应用。
6.一种抗过敏护臀霜，其特征在于，以其总重量为100％计，其包括0.1～15％的权利要求1至3中任一项所述的制备方法制备得到的抗过敏植物提取液。
7.一种抗过敏沐浴露，其特征在于，以其总重量为100％计，其包括0.1～15％的权利要求1至3中任一项所述的制备方法制备得到的抗过敏植物提取液。
8.一种抗过敏化妆水，其特征在于，以其总重量为100％计，其包括0.5～18％的权利要求1至3中任一项所述的制备方法制备得到的抗过敏植物提取液。
9.一种抗过敏餐具洗涤剂，其特征在于，以其总重量为100％计，其包括0.1～12％的权利要求1至3中任一项所述的制备方法制备得到的抗过敏植物提取液。
10.一种抗过敏重油污洗涤剂，其特征在于，以其总重量为100％计，其包括0.2～15％的权利要求1至3中任一项所述的制备方法制备得到的抗过敏植物提取液。
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