CN108383767A - 25-羟基胆钙化醇一水合物晶体及其制备方法以及使用其的微乳液 - Google Patents

25-羟基胆钙化醇一水合物晶体及其制备方法以及使用其的微乳液 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种25‑羟基胆钙化醇一水合物晶体及其制备方法以及使用其的微乳液，本发明的25‑羟基胆钙化醇一水合物晶体的X‑射线粉末衍射图谱在2θ为10.035°、11.623°、14.631°、15.054°、15.551°、16.471°、17.198°、19.002°、19.628°、20.109°、21.886°、23.113°、23.661°、24.701°、25.220°、25.440°、28.527°出显示有特征峰。本发明的25‑羟基胆钙化醇一水合物晶体能够有效增强25‑羟基胆钙化醇的稳定性，更利于相关制剂的生产、存储，使25‑羟基胆钙化醇的生物特性得到有效利用。

Description

25-羟基胆钙化醇一水合物晶体及其制备方法以及使用其的 微乳液
技术领域
本发明涉及一种25-羟基胆钙化醇一水合物晶体，尤其涉及一种具有良好稳定性的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体及其制备方法以及使用其的微乳液。
背景技术
维生素D3本身无生理作用(H.F.De Luca等，1971)。用H3标记的维生素D3进行研究，在肠道被吸收的维生素D3首先在肝脏里发生25-碳原子的羟基化作用，生成25-羟基胆钙化醇，后者在肾脏线粒体中变为1,25-二羟基D3后被送至小肠粘膜和肾脏，促进钙和磷两种矿物质的吸收与重吸收，同时产生动物体代谢所需的其他功能。已经有研究显示，25-羟基胆钙化醇的吸收原理不同于酯溶性维生素，其利用效率更高。
25-羟基胆钙化醇，又称25-羟基维生素D3，是体内维生素D3的活性的表现型式，其结构式如式1所示。
<式1>
25-羟基胆钙化醇可以通过任何方式获得，例如，US4310467报道了一种分离纯化25-羟基胆钙化醇的方法，CN10344301B报到用光化学反应制备25- 羟基胆钙化醇的方法，CN103898004A报道用发酵的方法制备25-羟基胆钙化醇，US3565924报道了25-羟基胆钙化醇的生产方法。并且相关研究报道，25- 羟基胆钙化醇可以作为饲料中有效成分进行利用。但是，通过对25-羟基胆钙化醇的稳定性实验可知，25-羟基胆钙化醇的稳定性较低，含量为99.23％的 25-羟基胆钙化醇在25℃放置一月后，25-羟基胆钙化醇的含量降为65.03％。因此如何能够增强25-羟基胆钙化醇的稳定性，从而便于相关制剂的生产、存储和使用，使其生物功效加以利用，是本领域亟待解决的问题。
但是现阶段并未见对25-羟基胆钙化醇一水合物有报道，也没有相关文献记载以游离的25-羟基胆钙化醇为原料制备25-羟基胆钙化醇一水合物的方法。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了一种25-羟基胆钙化醇一水合物晶体及其制备方法以及使用其的微乳液，能够有效增强25-羟基胆钙化醇的稳定性，更利于相关制剂的生产、存储，使25-羟基胆钙化醇的生物特性得到有效利用。
本发明提供一种25-羟基胆钙化醇一水合物晶体，所述25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的X-射线粉末衍射图谱包含下述峰：
应当理解的是，一般的，当通过X-射线粉末衍射测定晶体时，由于测定仪器、测定条件等存在不同，谱图中的峰可能会出现一些较小的误差，因此本发明的晶体还可以包括上述峰以外的峰。其中，本发明的测定条件：Cu Kα线，管电压40kV，管电流40mA。图1为本发明实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物的XRPD谱图。图1的X-射线衍射仪(BrukerD8advance)的工作参数如下：
Cu Kα；线管电压：40kV；管电流：40mA；扫描类型：固定耦合；增长量：0.02°；扫描范围：3°-40°；扫描速度：1s/步。
经过稳定性实验可知，本发明的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体在25℃敞口放置六个月后，25-羟基胆钙化醇一水合物晶体中25-羟基胆钙化醇的质量含量为96.59％，因此本发明的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体性质稳定，能够有效提高25-羟基胆钙化醇的稳定性。
进一步地，本发明提供的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体，由25-羟基胆钙化醇溶液与水反应得到；其中，所述25-羟基胆钙化醇溶液通过将25-羟基胆钙化醇溶解于有机溶剂中获得。
该25-羟基胆钙化醇一水合物晶体是25-羟基胆钙化醇溶液经水和反应得到的产物。其中，25-羟基胆钙化醇溶液是将25-羟基胆钙化醇溶于有机溶剂中获得的。本发明不限制25-羟基胆钙化醇原料的来源，可以为市售或者自行制备。
上述的用于制备25-羟基胆钙化醇溶液的有机溶剂可以选自醚类溶剂、醇类溶剂、酮类溶剂以及氯代烃类溶剂中的一种或多种。其中，醚类溶剂包括但不限定于四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃；醇类溶剂包括但不限定于甲醇、乙醇、异丙醇；酮类溶剂包括但不限定于丙酮、丁酮；氯代烃类溶剂包括但不限定于二氯甲烷、氯仿等。当有机溶剂为以上溶剂的混合溶剂时，本发明对各种溶剂之间的比例不做限定。同时，在制备25-羟基胆钙化醇溶液时，25- 羟基胆钙化醇与有机溶剂的质量体积比为1g:100ml，优选的为1g:5～40ml，更优选的为1g:5～20ml。
当将25-羟基胆钙化醇溶液与水反应制备25-羟基胆钙化醇一水合物晶体时，本发明不限制25-羟基胆钙化醇与水的反应摩尔比，可以为1： (0.6～2000)，优选为1：(0.8～1.5)，更优选为1：(1～1.2)。当25- 羟基胆钙化醇的摩尔量大于水的摩尔量时，25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的产率过低；当25-羟基胆钙化醇的摩尔量小于于水的摩尔量时，会显著提高25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的产率，值得注意的是，由于25-羟基胆钙化醇只有一个和水结合的位点，因此即使25-羟基胆钙化醇的摩尔量小于水的摩尔量时，产物依旧是25-羟基胆钙化醇一水合物晶体而不可能得到25-羟基胆钙化醇的多水合物。
本发明还提供一种上述任一所述的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的制备方法，包括如下步骤：
1)将25-羟基胆钙化醇在有机溶剂中加热回流直至所述25-羟基胆钙化醇溶解，得到25-羟基胆钙化醇溶液；
2)向所述25-羟基胆钙化醇溶液中加水直至析出固体，制得所述25-羟基胆钙化醇一水合物晶体。
具体地，将25-羟基胆钙化醇加入有机溶剂中后，加热反应体系，使有机溶剂回流溶解25-羟基胆钙化醇，该有机溶剂可以选择上述的醚类溶剂、醇类溶剂、酮类溶剂以及氯代烃类溶剂中的一种或多种。当25-羟基胆钙化醇溶解后，可以在停止加热的情况下继续搅拌，并缓慢的向25-羟基胆钙化醇溶液中加水直至有白色固体析出，当水加入完毕且体系温度降至室温后，继续搅拌 2-5小时。
待搅拌完成后，对体系进行固液分离，具体地可以采用离心或者过滤的手段收集滤饼，并且对滤饼进行干燥，为了避免25-羟基胆钙化醇一水合物晶体中结晶水的脱离，可以设置干燥温度低于100℃，优选为20～90℃，更优选为30～80℃，干燥方式可以为常压干燥，当干燥温度较低时为了增强干燥效果可以选用减压干燥。本发明对干燥程度无过高要求，通常控制水分为小于 20wt％，优选控制水分为小于10wt％，更优选控制水分为小于5wt％。
本发明的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的制备方法简单、可操作性高，通过该方法制备得到的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体稳定性高，经稳定性实验可知，本发明制备方法制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体在25℃敞口放置六个月后，25-羟基胆钙化醇一水合物晶体中25-羟基胆钙化醇的质量含量为96.59％。
本发明还提供一种微乳液，该微乳液包括上述任一所述的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体。由于25-羟基胆钙化醇在甲醇、乙醇、二甲亚砜中易溶，在乙醚中略微溶，在水中几乎不溶，因此包含25-羟基胆钙化醇的微乳液与水的溶解度非常低，因此需要对其溶解性进行改善才能在体内进行有效吸收。因此，本发明提供了一种稳定性佳水溶性良好的包含25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的微乳液。
进一步地，按照重量百分含量，微乳液包括如下组分：上述任一所述的 25-羟基胆钙化醇一水合物晶体0.05～1.25％、吐温-60 10～15％、硬酯酰乳酸钠6～12％、司盘-80 3～5％、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚1～2.5％、山梨酸0.2～ 1％、丙二醇4～7％、水56.25～75.75％。
更进一步地，按照重量百分含量，微乳液包括如下组分：任一所述的25- 羟基胆钙化醇一水合物晶体0.125％、吐温-65 12％、硬酯酰乳酸钠8％、司盘 -80 4％、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚2.5％、山梨酸1％、丙二醇7％、水65.375％。
本发明提供的微乳液可达纳米级，具体地，其平均粒径可达84～91nm，包封率可达85～89％，包封率是指指被包裹物质(如某游离药物)在脂质体悬液中占药物总量的百分量。它是脂质体和纳米粒质量控制的一个重要的指标，反映了药物被载体包封的程度。包封率包括百分包封率和包裹容积的测定，一般的包封率(EN％)的计算公式如式1所示：
EN％＝(1－Cf/Ct)×100％ 式1
式1中，Cf为被包裹物质(游离药物)的量；Ct为纳米粒或脂质体悬液中药物的总量。
本发明还提供一种上述任一所述微乳液的制备方法，包括如下步骤：
1)按照重量百分含量，将0.05～1.25％上述任一所述的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体、10～15％吐温-60、6～12％硬酯酰乳酸钠、3～5％司盘-80以及1～2.5％2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚混合后，加热至45～55℃使溶解完全并使用涡流振荡器直至震荡均匀，生成第一反应液；
2)室温下，按照重量百分含量，将4～7％丙二醇与0.2～1％山梨酸溶于 56.25～75.75％水中并搅拌均匀，生成第二反应液；
3)将所述第一反应液与所述第二反应液混合，使用涡流振荡器直至震荡均匀，制得所述微乳液。
一般的，涡流振荡器振荡10-15min就能保证各个组份之间混合均匀。
本发明还提供上述任一所述的微乳液在饲料添加剂的应用，该微乳液作为饲料添加剂能够缩短维生素D3在畜禽体内的代谢时间，促进钙磷元素的吸收与重吸收，填补了国内将25-羟基胆钙化醇作为饲料添加剂的空白。
本发明还提供一种饲料，包括上述任一所述的微乳液，该饲料能够有效促进钙磷元素在禽畜体内的吸收，为禽畜的健康生长奠定基础。
本发明的实施，至少具备以下优势：
1、本发明的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体是一种新的25-羟基胆钙化醇一水合物晶型；
2、本发明的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体稳定性佳，在一定程度上改善了的25-羟基胆钙化醇的稳定性，有利于相关制剂的生产、存储以及使用，综合使用性好，应用前景广阔。
3、本发明的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的制备方法操作简单、易于控制、反应条件温和、工艺稳定、重现性好、产品质量稳定，适合于工业化大生产25-羟基胆钙化醇一水合物晶体。
4、本发明的微乳液包含稳定性佳的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体，水溶性良好，适用范围广阔。
5、本发明创新的将包含25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的微乳液用于饲料生产领域中，从而有助于钙磷元素在禽畜体内的吸收，为禽畜的健康生长奠定了基础。
附图说明
图1为本发明实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的XRPD谱图；
图2为本发明实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的原子结构图；
图3为本发明实施例2制备的微乳液与对照例的微乳液的稳定性试验曲线图；
图4为本发明实施例3制备的微乳液与对照例的微乳液的稳定性试验曲线图；
图5为本发明实施例4制备的微乳液与对照例的微乳液的稳定性试验曲线图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的附图和实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的制备
具体制备方法包括如下步骤：
将1kg 25-羟基胆钙化醇加入200mL的丙酮中，搅拌加热回流直至25-羟基胆钙化醇溶解完全，缓慢滴加200mL水，直至有白色固体析出，停止加热并继续搅拌3，常压过滤收集滤饼，对滤饼在60℃干燥10h，得到25-羟基胆钙化醇一水合物晶体。发明人对该实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体进行了以下测定：
1、经卡尔费歇尔滴定法得到，本实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的水分为4.5％。
2、通过Bruker D8Advance X-射线衍射仪对本实施的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体进行典型X-射线粉末衍射(XRPD)，其中，测定条件为：Cu Kα线，管电压40kV，管电流40mA。图1为本发明实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的XRPD谱图，表1为为本发明实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的XRPD谱图的相关数据。
表1 25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的XRPD谱数据
图1和表1验证了本发明实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的组成，并且对25-羟基胆钙化醇进行了清晰的晶型表征。
3、同时，还对本发明实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体进行了原子结构分析，结果如图2所示，图2为本发明实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的原子结构图，由图2可知，本发明实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体中，与3-羟基连接的六元环为椅式构象并且3-羟基与六元环的连接键为平键。
4、使用元素分析仪对本实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体进行了元素分析，其中，C元素含量为77.22％，氢元素含量为11.10％，而通过 25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的分子式计算得到C元素含量为77.46％，氢元素含量为11.08％。
因此，通过元素分析结果可知，本实施例制备的产物即为25-羟基胆钙化醇一水合物晶体。
5、对本实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体分别做了核磁共振氢谱、核磁共振碳谱以及电喷雾质谱，数据如下：
1H NMR(CDCl3)δ：6.22(d,J＝11.3Hz,1H,6-CH),6.05(d,J＝11.2Hz,1H, 7-CH),5.08(s,1H,19-CH),4.81(d,J＝1.6Hz,1H,19-CH),3.96(m,1H,3-CH), 2.80-2.85(m,1H),2.55-2.58(m,1H),2.39-2.43(m,1H),2.29(dd,J＝7.6,13.0Hz, 1H),2.15-2.23(m,1H),1.22-2.02(m,22H),1.23(s,6H),0.94(d,J＝6.4Hz,3H, 21-CH3),0.55(s,3H,18-CH3)。
13C NMR(CDCl3)δ：144.95,142.39,134.99,122.40,117.40,112.51,71.18,69.15,56.33,56.23,45.81,45.78,44.30,40.40,36.28,36.09,35.05,31.88,29.31,29.14,28.95,27.66,23.52,22.19,20.71,18.76,11.96。
ESI-MS(m/z):423.37[M+Na]+,823.78[2M+Na]+。
6、稳定性试验
将本实施例制备的25-羟基胆化钙醇一水合物晶体在25℃敞口放置，分别在一个月、三个月以及六个月后，对其中的25-羟基胆化钙醇含量进行测定，同时将25-羟基胆化钙醇作为对照例，结果见表2。
25-羟基胆化钙醇含量的检测方法为：取样配制成约10微克/毫升溶液，进20μL用HPLC分析，按外标法计算其含量。
HPLC的检测条件如下所述：
色谱柱：C18型柱；内径：4.6mm,长度：150mm,粒度：5μm。
检测波长：265nm。
温度：柱子：30℃；
流速：1.5mL/min(可根据获得理想的保留时间及25-羟基胆钙化醇和25- 羟基胆钙化醇前体分离度来调整)。
进样量：20uL。
记录时间：主峰保留时间的2倍。
表2 25-羟基胆钙化醇稳定性试验数据
由表2可知：本实施例制备的25-羟基胆化钙醇一水合物晶体稳定性佳，在25℃敞口放置六个月后，其中的25-羟基胆化钙醇基本没有损失。
实施例2
25-羟基胆钙化醇一水合物微乳液的制备
具体制备方法包括如下步骤：
1)备料
取实施例1制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体为0.055kg、吐温-60 10kg、硬脂酰乳酸钠10kg、司盘-80 5kg、BHT 1kg、丙二醇4kg、山梨酸 0.2kg以及水69.75kg。
2)第一反应液的制备
将25-羟基胆钙化醇一水合物晶体与吐温-65、硬脂酰乳酸钠、司班80 以及BHT混合，加热至50℃使溶解完全，涡流振荡器进行涡流震荡10min，生成第一反应液。
3)第二反应液的制备
室温下，将丙二醇与山梨酸溶于水中，搅拌均匀，生成第二反应液。
4)混合
将第一反应液与第二反应液混合，使用涡流振荡器涡流震荡10min, 制得25-羟基胆钙化醇一水合物微乳液。其中，该微乳液中25-羟基胆钙化醇一水合物的质量百分含量为0.055％。
经检测，该实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物微乳液的粒径为 84nm，包封率为89％。
在25℃下对本实施例制备的微乳液进行密封保存，并在一个月、两个月、三个月以及六个月时，对其中的25-羟基胆钙化醇一水合物进行含量测定，同时采用以无水的25-羟基胆钙化醇按照实施例同样的操作配制的微乳液做对照例，具体结果见图3。图3为本发明实施例2制备的微乳液与对照例的微乳液的稳定性试验曲线图。结果如图3所示，本实施例制备的微乳液稳定性明显优于先有技术制备的微乳液。
25-羟基胆化钙醇一水合物含量的检测方法为：当稳定性日期到后，取样约10微克/毫升溶液，进20μL用HPLC分析，按外标法计算其含量。
HPLC的检测条件如下所述：
色谱柱：C18型柱；内径：4.6mm,长度：150mm,粒度：5μm。
检测波长：265nm。
温度：柱子：30℃；
流速：1.5mL/min(可根据获得理想的保留时间及25-羟基胆钙化醇和25- 羟基胆钙化醇前体分离度来调整)。
进样量：20uL。
记录时间：主峰保留时间的2倍。
实施例3
25-羟基胆钙化醇一水合物微乳液的制备
具体制备方法包括如下步骤：
1)备料
取实施例1制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体为0.135kg(有效质量为0.125kg)、吐温-60 12kg、硬脂酰乳酸钠8kg、司盘-80 4kg、BHT 2.5kg、丙二醇7kg、山梨酸1kg以及水65.375kg。
2)第一反应液的制备
将25-羟基胆钙化醇一水合物晶体与吐温-65、硬脂酰乳酸钠、司班80 以及BHT混合，加热至45℃使溶解完全，涡流振荡器进行涡流震荡15min，生成第一反应液。
3)第二反应液的制备
室温下，将丙二醇与山梨酸溶于水中，搅拌均匀，生成第二反应液。
4)混合
将第一反应液与第二反应液混合，使用涡流振荡器涡流震荡10min, 制得25-羟基胆钙化醇一水合物微乳液。其中，该微乳液中25-羟基胆钙化醇一水合物的质量百分含量为0.125％。
经检测，该实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物微乳液的粒径为 86nm，包封率为88％。
在25℃下对本实施例制备的微乳液进行密封保存，并在一个月、两个月、三个月以及六个月时，对其中的25-羟基胆钙化醇一水合物进行含量测定，同时采用以无水的25-羟基胆钙化醇按照实施例同样的操作配制的微乳液做对照例，具体结果见图4。图4为本发明实施例3制备的微乳液与对照例的微乳液的稳定性试验曲线图。结果如图4所示，本实施例制备的微乳液稳定性明显优于先有技术制备的微乳液。
实施例4
25-羟基胆钙化醇一水合物微乳液的制备
具体制备方法包括如下步骤：
1)备料
取实施例1制备的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体为1.30kg(有效质量为1.25kg)、吐温-60 15kg、硬脂酰乳酸钠12kg、司盘-80 5kg、BHT 2.5kg、丙二醇7kg、山梨酸1kg以及水56.25kg。
2)第一反应液的制备
将25-羟基胆钙化醇一水合物晶体与吐温-65、硬脂酰乳酸钠、司班80 以及BHT混合，加热至55℃使溶解完全，涡流振荡器进行涡流震荡10min，生成第一反应液。
3)第二反应液的制备
室温下，将丙二醇与山梨酸溶于水中，搅拌均匀，生成第二反应液。
4)混合
将第一反应液与第二反应液混合，使用涡流振荡器涡流震荡15min, 制得25-羟基胆钙化醇一水合物微乳液。其中，该微乳液中25-羟基胆钙化醇一水合物的质量百分含量为1.25％。
经检测，该实施例制备的25-羟基胆钙化醇一水合物微乳液的粒径为 91nm，包封率为85％。
在25℃下对本实施例制备的微乳液进行密封保存，并在一个月、两个月、三个月以及六个月时，对其中的25-羟基胆钙化醇进行含量测定，同时采用以无水的25-羟基胆钙化醇按照实施例同样的操作配制的微乳液做对照例，具体结果见图5。图5为本发明实施例4制备的微乳液与对照例的微乳液的稳定性试验曲线图。结果如图5所示，本实施例制备的微乳液稳定性明显优于先有技术制备的微乳液。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (16)

1.一种25-羟基胆钙化醇一水合物晶体，其特征在于，所述25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的X-射线粉末衍射图谱包含下述峰：
2.根据权利要求1所述的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体，其特征在于，由25-羟基胆钙化醇溶液与水反应得到；其中，所述25-羟基胆钙化醇溶液通过将25-羟基胆钙化醇溶解于有机溶剂中获得。
3.根据权利要求2所述的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体，其特征在于，所述有机溶剂选自醚类溶剂、醇类溶剂、酮类溶剂以及氯代烃类溶剂中的一种或多种。
4.根据权利要求3所述的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体，其特征在于，所述25-羟基胆钙化醇与水的摩尔比为1:(0.6～2000)。
5.根据权利要求4所述的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体，其特征在于，所述25-羟基胆钙化醇与水的摩尔比为1:(0.8～1.5)。
6.权利要求1-5任一所述的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将25-羟基胆钙化醇在有机溶剂中加热回流直至所述25-羟基胆钙化醇溶解，得到25-羟基胆钙化醇溶液；
2)向所述25-羟基胆钙化醇溶液中加水直至析出固体，制得所述25-羟基胆钙化醇一水合物晶体。
7.根据权利要求6所述的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂选自醚类溶剂、醇类溶剂、酮类溶剂以及氯代烃类溶剂中的一种或多种。
8.根据权利要求7所述的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体的制备方法，其特征在于，步骤2)包括：
搅拌下，向所述25-羟基胆钙化醇溶液中加水直至析出固体，持续搅拌并冷却至室温后，过滤并对滤饼进行干燥直至滤饼的水分小于20wt％，制得所述25-羟基胆钙化醇一水合物晶体。
9.一种微乳液，其特征在于，包括权利要求1-5任一所述的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体。
10.根据权利要求9所述的微乳液，其特征在于，按照重量百分含量包括如下组分：权利要求1-5任一所述的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体0.05～1.25％、吐温-60 10～15％、硬酯酰乳酸钠6～12％、司盘-80 3～5％、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚1～2.5％、山梨酸0.2～1％、丙二醇4～7％、水56.25～75.75％。
11.根据权利要求10所述的微乳液，其特征在于，按照重量百分含量包括如下组分：权利要求1-5任一所述的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体0.125％、吐温-60 12％、硬酯酰乳酸钠8％、司盘-80 4％、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚2.5％、山梨酸1％、丙二醇7％、水65.375％。
12.根据权利要求9-11任一所述的微乳液，其特征在于，所述微乳液为纳米微乳液。
13.根据权利要求12所述的微乳液，其特征在于，所述微乳液的平均粒径为84～91nm，包封率为85～89％。
14.权利要求9-13任一所述的微乳液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)按照重量百分含量，将0.05～1.25％权利要求1-5任一所述的25-羟基胆钙化醇一水合物晶体、10～15％吐温-60、6～12％硬酯酰乳酸钠、3～5％司盘-80以及1～2.5％2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚混合后，加热至45～55℃使溶解完全并使用涡流振荡器直至震荡均匀，生成第一反应液；
2)25±5℃，按照重量百分含量，将4～7％丙二醇与0.2～1％山梨酸溶于56.25～75.75％水中并搅拌均匀，生成第二反应液；
3)将所述第一反应液与所述第二反应液混合，使用涡流振荡器直至震荡均匀，制得所述微乳液。
15.权利要求9-13任一所述的微乳液在饲料添加剂中的应用。
16.一种饲料，其特征在于，包括权利要求9-13任一所述的微乳液。
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Denomination of invention: 25- hydroxygallate calcified alcohol hydrate crystal and its preparation method and microemulsion used thereof

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Pledgor: SHANDONG HAINENG BIOENGINEERING Co.,Ltd.

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