CN108344788A - 一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法及应用 - Google Patents
一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法及应用，利用金硫共价键将金纳米笼固定在浸泡过巯基硅烷化试剂的基底导电玻璃片上，依次利用静电吸附力在纳米颗粒表面吸附多巴胺和脂肪酶，进一步修饰所述基底导电玻璃片上的金纳米笼颗粒；所述金纳米笼是在十六烷基三甲基氯化铵作为表面活性剂条件下，利用种子生长法制备金核‑银壳纳米立方结构，最后利用氯金酸转换银壳形成的金纳米笼纳米颗粒。本发明所制备的高性能电化学生物传感器在保留酶的最大生物活性的同时，有效的增加了电极表面积及其电化学性能，所述高性能电化学生物传感器不仅可用于水样中对甘油三酯的高灵敏检测，在人血清样本中同样适用。
Description
技术领域
本发明涉及一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备及应用，属于新型功能材料与生物传感检测技术领域。
背景技术
近年来，贵金属纳米粒子因其合适的尺寸、形貌以及构成展现出了非常完美的物理特性，其比表面积大、电学性能优异、生物兼容性好、催化效率高，因此，利用纳米粒子作为固定生物分子的载体来构建生物传感器的活性界面，可以制备出性能良好的生物传感器。
而在众多的纳米颗粒中金纳米笼以其特有的光、电、催化等性能，又具备良好的导电性能而尤为突出。例如：
中国CN104849454A号专利公开一种基于金纳米笼/氨基化石墨烯构建禽类疱疹病毒抗原免疫传感器的制备方法及应用，属于新型功能材料、生物传感检测技术领域。具体是基于金纳米笼和氨基化石墨烯复合材料制备出夹心型电化学免疫传感器。氨基化石墨烯具有较高的比表面积、金纳米笼具有优良的催化性能，该复合材料生物相容性好，催化效率高，可显著提高免疫传感器的灵敏度和稳定性。
中国CN104483481A号专利公开一种基于碳纳米管/PdPt纳米笼构建的膀胱癌标志物-NMP22免疫传感器的制备方法及应用，属于新型功能材料、生物传感检测技术领域。碳纳米管/PdPt纳米笼复合材料具有比表面积大，生物相容性好，催化效率高等特点，可显著提高了免疫传感器的灵敏度和稳定性，该免疫传感器对膀胱癌的早期诊断及愈后判断具有重要的意义。
冠心病和脂蛋白混乱是近年来不断高发的疾病，严重影响着人类的生命健康，而检测甘油三酯浓度对这些疾病的诊断及治疗提供依据具有十分重要的意义。目前市面上所使用的检测方法选择性差、灵敏度低，成本较高、检测设备体积大，不易于推广。因此，急需设计一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法及应用以解决上述问题。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术存在的问题，提供一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法及应用，本发明所述电化学传感器在保留酶的最大生物活性的同时，有效的增加了电极表面积及其电化学性能，可以对三丁酸甘油酯进行高灵敏度的检测，还可以有效检测人类血清样本中的甘油三酯浓度，快捷方便成本低廉。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
本发明提供一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法，包括以下步骤：
(1)将洁净的基底导电玻璃片浸泡于巯基硅烷化试剂中，氮气吹干；
(2)将浓度为0.1～10nmol/L的金纳米笼溶液滴加到步骤(1)所得基底导电玻璃片上吸附，超纯水冲洗，氮气吹干；
(3)将步骤(2)所得基底导电玻璃片置于1-3mg/mL多巴胺溶液中浸泡，超纯水冲洗，氮气吹干；
(4)继续滴加3-10mg/mL脂肪酶溶液，静置制得电化学传感器。
本发明公开了一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备及应用，采用现有方法制备形貌均一的金纳米笼，利用金硫共价键将所述金纳米笼固定在浸泡过巯基硅烷化试剂的导电玻璃上，依次利用静电吸附力在纳米颗粒表面吸附多巴胺和脂肪酶，进一步修饰金纳米笼颗粒。该结构在保留酶的最大生物活性的同时，有效的增加了电极表面积及其电化学性能，从而制备高性能脂类电化学传感器，本发明所述脂肪酶是一类具有多种催化能力的酶，可以催化三丁酸甘油酯及其他一些水不溶性酯类，包括人类血清中的甘油三酯，使得本发明所述电化学传感器不仅适用于水样中对三丁酸甘油酯的高灵敏检测，同样适用于人血清样本的检测。
优选地，所述金纳米笼的边长40～80nm，其内核球形金纳米颗粒直径为20～30nm。
边长为40-80nm的金纳米笼在制备过程中，成功率较高，产率较大，从而降低生产成本；此外，边长为40-80nm的金纳米笼形貌均一，便于所述多巴胺和脂肪酶修饰到所述金纳米笼颗粒上。
优选地，所述金纳米笼的制备为：首先在十六烷基三甲基氯化铵作为表面活性剂条件下，利用种子生长法制备金核-银壳纳米立方结构，最后利用氯金酸转换银壳形成金纳米笼纳米颗粒。
所述金纳米笼结构具有良好的导电性以及良好的生物相容性和稳定性，将所述金纳米笼作用于电极上，能够显著提高电极的检测性能。
进一步优选地，所述金纳米笼的制备包括以下步骤：
(1)纳米金种子的制备
取30-50μL浓度为1％的氯金酸加入到2-8mL浓度为0.1mol/L的十六烷基三甲基氯化铵溶液中，在高速搅拌条件下，加入200-500μL浓度为0.01mol/L硼氢化钠溶液，继续搅拌，在室温下静置得到纳米金种子溶液；
(2)生长液的制备
取10-30mL浓度为0.1mol/L的十六烷基三甲基氯化铵，与10-30mL浓度为0.5mmol/L的氯金酸溶液、5-15mL浓度为0.1mol/L的丙烯酸溶液充分混合后，作为生长液备用；
(3)金纳米颗粒溶液的制备
取10-30mL所述生长液，并将步骤1中所得纳米金种子溶液稀释4-6倍后，取1～3mL纳米金种子溶液加入所述生长液中，静置制得金纳米颗粒溶液；
(4)金核银壳立方体的制备
取5-10mL浓度为0.1mol/L的十六烷基三甲基氯化铵溶液与1-5mL浓度为0.1mol/L的丙烯酸溶液混合均匀后，加入步骤3中所得金纳米颗粒溶液1-5mL，均匀加入0.01mol/L硝酸银溶液0.1～2mL，静置离心去除上清液，制得金核银壳立方体；
(5)金纳米笼的制备
取所述金银核壳500μL加入到2mL浓度为50mmol/L氯金酸溶液中搅拌，制得金纳米笼结构。
优选地，所述纳米金种子的粒径范围为2～5nm。
优选地，所述十六烷基三甲基氯化铵、氯金酸、丙烯酸体积比为2:2:1
优选地，所述金纳米颗粒的粒径范围为20～30nm。
优选地，所述基底导电玻璃包括ITO玻璃，FTO玻璃，石墨烯玻璃或金/银镀膜玻璃中的一种。
根据本发明所述制备方法制备得到的一种基于金纳米笼的电化学生物传感器在检测三丁酸甘油酯中的应用，所述应用包括以下步骤：
a、采用三电极系统进行测定，以制备的电化学传感器作为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝为对电极，在含有浓度为50mmol/L磷酸盐缓冲液的电解液中，以电化学方法进行扫描，记录电流变化；
b、在含有浓度为50mmol/L磷酸盐缓冲液的电解液中，对含有三丁酸甘油酯的标准溶液进行测试，记录电流变化，根据其催化峰电流的变化值，绘制工作曲线；
c、将待测样品溶液代替标准溶液进行检测。
本发明所述检测方法的原理为：三丁酸甘油酯在脂肪酶的催化作用下会被降解，产生甘油和丁酸，丁酸进一步水解产生的氢离子可引起电极界面微环境中pH值的改变。当界面脂肪酶的量为固定值时，这一pH值的变化程度与溶液中三丁酸甘油酯的浓度成一定的线性关系。通过金纳米笼/多巴胺/脂肪酶复合材料修饰的高性能电化学生物传感器可灵敏的检测pH值变化，并直观表现为催化电流大小变化，可采用循环伏安法、DPV法和i-t曲线法进行有效的高灵敏快速检测。从而实现溶液中微量三丁酸甘油酯的快速电化学检测。
优选地，所述电化学方法为循环伏安法，DPV法或i-t曲线中的一种。
进一步优选地，所述电化学方法为循环伏安法。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)本发明所述金纳米笼具有表面积大、电学性能优异、生物兼容性好、催化效率高等优异性能，利用所述金纳米笼作为固定生物分子的载体构件生物传感器的活性界面，使本发明所制备的电化学传感器具有优异的生物相容性；
(2)本发明采用所述多巴胺、脂肪酶修饰所述金纳米笼，制备得到的所述电化学传感器选择性好、灵敏度高、成本低廉、易于实现微型化；
(3)本发明所述电化学传感器对三丁酸甘油酯可以进行高灵敏度的检测，其检测灵敏度为0.38μAmg-1dL-1cm-2，还可以有效检测人类血清样本中的甘油三酸酯浓度，为疾病的防治、诊断和治疗开辟了新的途径。
附图说明
图1为本发明实施例1所述金纳米笼的TEM图；
图2为本发明实施例1所述高性能电化学生物传感器的TEM图；
图3为本发明实施例1不同浓度三丁酸甘油酯的循环伏安图；
图4为本发明实施例1100～300mg/L三丁酸甘油酯的电化学检测线性范围曲线。
具体实施方式
下面将结合本发明中的附图，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动条件下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例提供一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法，包括以下步骤：
(1)将洁净的基底导电玻璃片浸泡于巯基硅烷化试剂中12h，氮气吹干；
(2)将浓度为5nmol/L的金纳米笼溶液滴加到步骤(1)所得基底导电玻璃片上，吸附4h，超纯水冲洗，氮气吹干；
(3)将步骤(2)所得基底导电玻璃片置于2mg/mL多巴胺溶液中，浸泡4h，超纯水冲洗，氮气吹干；
(4)继续滴加5mg/mL脂肪酶溶液，静置4小时后制得电化学传感器。
优选地，所述金纳米笼的制备包括以下步骤：
(1)纳米金种子的制备
取42.5μL浓度为1％的氯金酸加入到4.7mL浓度为0.1mol/L的十六烷基三甲基氯化铵溶液中，在高速搅拌条件下，加入300μL浓度为0.01mol/L硼氢化钠溶液，继续搅拌2分钟，在室温下静置2小时，得到纳米金种子溶液；
(2)生长液的制备
取20mL浓度为0.1mol/L的十六烷基三甲基氯化铵，与20mL浓度为0.5mmol/L的氯金酸溶液、10mL浓度为0.1mol/L的丙烯酸溶液充分混合后，作为生长液备用；
(3)金纳米颗粒溶液的制备
取19mL所述生长液，并将步骤1中所得纳米金种子溶液稀释5倍后，取2mL纳米金种子溶液加入所述生长液中，静置4小时，制得金纳米颗粒溶液；
(4)金核银壳立方体的制备
取7mL浓度为0.1mol/L的十六烷基三甲基氯化铵溶液与3mL浓度为0.1mol/L的丙烯酸溶液混合均匀后，加入步骤3中所得金纳米颗粒溶液3mL，在10min内均匀加入0.01mol/L硝酸银溶液1mL，静置6小时，离心去除上清液，制得金核银壳立方体；
(5)金纳米笼的制备
取所述金银核壳500μL加入到2mL浓度为50mmol/L氯金酸溶液中搅拌5分钟，制得金纳米笼结构。
采用本实施例所述制备方法制备得到的电化学传感器在检测三丁酸甘油酯中的应用，所述应用包括以下步骤：
(1)采用三电极系统进行测定，以制备的电化学传感器作为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝为对电极，在含有浓度为50mmol/L磷酸盐缓冲液的电解液中，采用循环伏安法进行扫描，记录电流变化；
(2)在含有浓度为50mmol/L磷酸盐缓冲液的电解液中，对含有三丁酸甘油酯的标准溶液进行测试，记录电流变化，根据其催化峰电流的变化值，绘制工作曲线；
(3)将待测样品溶液代替标准溶液进行检测。
优选地，所述纳米金种子的粒径范围为2～5nm；所述金纳米颗粒的粒径范围为20～30nm。
如图1所示，采用本实施例所述金纳米笼的制备方法制备得到的金纳米笼形貌均一；如图2所示，采用本实施例所述的电化学传感器的制备方法，成功的将金纳米笼修饰在所述基底导电玻璃上，所述金纳米笼均匀的覆盖在所述基底导电玻璃表面，不仅保留酶的最大生物活性，而且有效的增加了电极表面积及其电化学性能，使得本实施例所述电化学传感器对三丁酸甘油酯的检测具有较高灵敏度；如图3所示，三丁酸甘油酯在脂肪酶的作用下会被水解，从而改变电解溶液的pH值，电解液pH值的变化会引起电流峰值发生变化；如图4所示，三丁酸甘油酯的浓度与电流峰值成比例，相关系数为0.995，可以通过本发明所述的方法快速检测三丁甘油酯的浓度。
实施例2
本实施例提供一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法，包括以下步骤：
(1)将洁净的基底导电玻璃片浸泡于巯基硅烷化试剂中12h，氮气吹干；
(2)将浓度为0.1nmol/L的金纳米笼溶液滴加到步骤(1)所得基底导电玻璃片上，吸附4h，超纯水冲洗，氮气吹干；
(3)将步骤(2)所得基底导电玻璃片置于1mg/mL多巴胺溶液中，浸泡4h，超纯水冲洗，氮气吹干；
(4)继续滴加3mg/mL脂肪酶溶液，静置4小时后制得电化学传感器。
优选地，所述金纳米笼的制备包括以下步骤：
(1)纳米金种子的制备
取30μL浓度为1％的氯金酸加入到2mL浓度为0.1mol/L的十六烷基三甲基氯化铵溶液中，在高速搅拌条件下，加入200μL浓度为0.01mol/L硼氢化钠溶液，继续搅拌2分钟，在室温下静置2小时，得到纳米金种子溶液；
(2)生长液的制备
取10mL浓度为0.1mol/L的十六烷基三甲基氯化铵，与10mL浓度为0.5mmol/L的氯金酸溶液、5mL浓度为0.1mol/L的丙烯酸溶液充分混合后，作为生长液备用；
(3)金纳米颗粒溶液的制备
取10mL所述生长液，并将步骤1中所得纳米金种子溶液稀释4倍后，取1mL纳米金种子溶液加入所述生长液中，静置4小时，制得金纳米颗粒溶液；
(4)金核银壳立方体的制备
取5mL浓度为0.1mol/L的十六烷基三甲基氯化铵溶液与1mL浓度为0.1mol/L的丙烯酸溶液混合均匀后，加入步骤3中所得金纳米颗粒溶液1mL，在10min内均匀加入0.01mol/L硝酸银溶液0.1mL，静置6小时，离心去除上清液，制得金核银壳立方体；
(5)金纳米笼的制备
取所述金银核壳500μL加入到2mL浓度为50mmol/L氯金酸溶液中搅拌5分钟，制得金纳米笼结构。
采用实施例1所述的检测方法进行检测。
采用本实施例制备方法制备的所述高性能电化学生物传感器对三丁酸甘油酯进行检测，三丁酸甘油酯的浓度与电流峰值成比例，相关系数为0.991，相比现有技术，本实施例对三丁酸甘油酯具有较高的灵敏度，可以通过本发明所述的方法快速检测三丁甘油酯的浓度。
实施例3
本实施例提供一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法，包括以下步骤：
(1)将洁净的基底导电玻璃片浸泡于巯基硅烷化试剂中12h，氮气吹干；
(2)将浓度为10nmol/L的金纳米笼溶液滴加到步骤(1)所得基底导电玻璃片上，吸附4h，超纯水冲洗，氮气吹干；
(3)将步骤(2)所得基底导电玻璃片置于3mg/mL多巴胺溶液中，浸泡4h，超纯水冲洗，氮气吹干；
(4)继续滴加10mg/mL脂肪酶溶液，静置4小时后制得电化学传感器。
优选地，所述金纳米笼的制备包括以下步骤：
(1)纳米金种子的制备
取50μL浓度为1％的氯金酸加入到8mL浓度为0.1mol/L的十六烷基三甲基氯化铵溶液中，在高速搅拌条件下，加入500μL浓度为0.01mol/L硼氢化钠溶液，继续搅拌2分钟，在室温下静置2小时，得到纳米金种子溶液；
(2)生长液的制备
取30mL浓度为0.1mol/L的十六烷基三甲基氯化铵，与30mL浓度为0.5mmol/L的氯金酸溶液、15mL浓度为0.1mol/L的丙烯酸溶液充分混合后，作为生长液备用；
(3)金纳米颗粒溶液的制备
取30mL所述生长液，并将步骤1中所得纳米金种子溶液稀释6倍后，取3mL纳米金种子溶液加入所述生长液中，静置4小时，制得金纳米颗粒溶液；
(4)金核银壳立方体的制备
取10mL浓度为0.1mol/L的十六烷基三甲基氯化铵溶液与5mL浓度为0.1mol/L的丙烯酸溶液混合均匀后，加入步骤3中所得金纳米颗粒溶液5mL，在10min内均匀加入0.01mol/L硝酸银溶液2mL，静置6小时，离心去除上清液，制得金核银壳立方体；
(5)金纳米笼的制备
取所述金银核壳500μL加入到2mL浓度为50mmol/L氯金酸溶液中搅拌5分钟，制得金纳米笼结构。
采用实施例1所述的检测方法进行检测，本实施例所制备的高性能电化学生物传感器对三丁酸甘油酯，三丁酸甘油酯的浓度与电流峰值成比例，相关系数为0.990，可以通过本发明所述的方法快速检测三丁甘油酯的浓度。
实施例4
本实施例提供一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法及应用，与实施例1相比，不同之处在于，所述金纳米笼采用本领域常规技术方案合成，所述金纳米笼的边长40～80nm，其内核球形金纳米颗粒直径为20～30nm。
边长为40～80nm的金纳米笼在制备过程中成功率较高，产率较大，降低生产成本；此外，所述金纳米笼形貌均一，便于所述多巴胺和脂肪酶修饰，进一步使所述高性能电化学生物传感器对三丁甘油酯具有较高的灵敏度。
对比例1
本对比例提供一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法，所述电化学传感器的制备方法为：将洁净的基底导电玻璃片浸泡于巯基硅烷化试剂中12h，氮气吹干；将浓度为5nmol/L的金纳米笼溶液滴加到处理后的基底导电玻璃片上吸附，超纯水冲洗，氮气吹干；得到得电化学传感器；采用实施例1所述的检测方法进行检测。
本对比例与实施例1的区别在于，本对比例所述的电化学传感器上没有多巴胺和脂肪酶，因此本对比例所述的电化学传感器具有比表面积大、电学性能优异的性能，但缺少脂肪酶的催化作用及多巴胺的生物兼容性，导致电化学生物传感器整体失效。
对比例2
本对比例提供一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法，所述高性能电化学生物传感器的制备方法，包括以下步骤：
(1)将洁净的基底导电玻璃片浸泡于巯基硅烷化试剂中12h，氮气吹干；
(2)将浓度为0.05nmol/L的金纳米笼溶液滴加到步骤(1)所得基底导电玻璃片上，吸附4h，超纯水冲洗，氮气吹干；
(3)将步骤(2)所得基底导电玻璃片置于0.5mg/mL多巴胺溶液中，浸泡4h，超纯水冲洗，氮气吹干；
(4)继续滴加1mg/mL脂肪酶溶液，静置4小时后制得电化学传感器。
所述金纳米笼采用本领域常规技术方案合成；采用实施例1所述的检测方法进行检测。
本对比例与实施例1的区别在于，在所述高性能电化学生物传感器的制备过程中，各原料的含量较低，使得附着在所述基底导电玻璃片上的金纳米笼含量降低，本对比例所制得的高性能电化学生物传感器同样具有比表面积大、电化学性能优异、生物兼容性好等性能，但对于三丁酸甘油酯的灵敏度降低，不适用于检测人体血清中的甘油三酸酯。
对比例3
本对比例提供一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法，所述高性能电化学生物传感器的制备方法，包括以下步骤：
(1)将洁净的基底导电玻璃片浸泡于巯基硅烷化试剂中12h，氮气吹干；
(2)将浓度为20nmol/L的金纳米笼溶液滴加到步骤(1)所得基底导电玻璃片上，吸附4h，超纯水冲洗，氮气吹干；
(3)将步骤(2)所得基底导电玻璃片置于5mg/mL多巴胺溶液中，浸泡4h，超纯水冲洗，氮气吹干；
(4)继续滴加20mg/mL脂肪酶溶液，静置4小时后制得电化学传感器。
所述金纳米笼采用本领域常规技术方案合成；采用实施例1所述的检测方法进行检测。
本对比例与实施例1的区别在于，在所述高性能电化学生物传感器的制备过程中，各原料的含量较高，所述金纳米笼堆积在所述基底导电玻璃片上，使得脂肪酶的活性降低，对于三丁酸甘油酯的灵敏度降低，不仅造成成本浪费，而且不适用于检测人体血清中的甘油三酸酯。
综上所述，在本发明所述范围内变化各参数得到的高性能电化学生物传感器具有比表面积大、电学性能优异、生物兼容性好、催化效率高以及最大保留了酶的生物活性的优异性能，不仅可用于水样中对三丁酸甘油酯的高灵敏检测，同样适用于人血清样本的检测。从对比例中可以得到，超出本专利所述范围改变制备方法得到的所述高性能电化学生物传感器均对性能有较大影响，不适用于检测人体血清样本中甘油三酸酯。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (6)
1.一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将洁净的基底导电玻璃片浸泡于巯基硅烷化试剂中，氮气吹干；
(2)将浓度为0.1～10nmol/L的金纳米笼溶液滴加到步骤(1)所得基底导电玻璃片上吸附，超纯水冲洗，氮气吹干；
(3)将步骤(2)所得基底导电玻璃片置于1-3mg/mL多巴胺溶液中浸泡，超纯水冲洗，氮气吹干；
(4)继续滴加3-10mg/mL脂肪酶溶液，静置后制得电化学传感器。
2.根据权利要求1所述的一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，所述金纳米笼的边长为40～80nm，其内核球形金纳米颗粒直径为20～30nm。
3.根据权利要求1所述的一种基于金纳米笼的电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，所述基底导电玻璃包括ITO玻璃，FTO玻璃，石墨烯玻璃或金/银镀膜玻璃中的一种。
4.权利要求1-3任一一项的制备方法制备得到的一种基于金纳米笼的电化学生物传感器在检测三丁酸甘油酯中的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：
a、采用三电极系统进行测定，以制备的电化学传感器作为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝为对电极，在含有浓度为50mmol/L磷酸盐缓冲液的电解液中，以电化学方法进行扫描，记录电流变化；
b、在含有浓度为50mmol/L磷酸盐缓冲液的电解液中，对含有三丁酸甘油酯的标准溶液进行测试，记录电流变化，根据其催化峰电流的变化值，绘制工作曲线；
c、将待测样品溶液代替标准溶液进行检测。
5.根据权利要求4所述的一种基于金纳米笼的电化学生物传感器在检测三丁酸甘油酯中的应用，其特征在于，所述电化学方法为循环伏安法，DPV法或i-t曲线中的一种。
6.根据权利要求5所述的一种基于金纳米笼的电化学生物传感器在检测三丁酸甘油酯中的应用，其特征在于，所述电化学方法为循环伏安法。
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