CN108339127A - 用于评价医疗器械免疫原性的试验方法 - Google Patents
用于评价医疗器械免疫原性的试验方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108339127A CN108339127A CN201810087976.5A CN201810087976A CN108339127A CN 108339127 A CN108339127 A CN 108339127A CN 201810087976 A CN201810087976 A CN 201810087976A CN 108339127 A CN108339127 A CN 108339127A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cavy
- sample
- group
- test
- nothing nothing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000036039 immunity Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 238000010998 test method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 57
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims abstract description 35
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 claims abstract description 33
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 32
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000013068 control sample Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims abstract description 10
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 claims description 22
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims description 19
- 241000700198 Cavia Species 0.000 claims description 18
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 13
- 230000005484 gravity Effects 0.000 claims description 12
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 9
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 claims description 5
- 238000009958 sewing Methods 0.000 claims description 5
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 claims description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 claims description 3
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 claims description 3
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 claims description 3
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 claims description 3
- 210000001105 femoral artery Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 claims description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 claims description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 claims description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 abstract description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 3
- 238000013102 re-test Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 27
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 7
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 4
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 241001627955 Tetraodon lineatus Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000013100 final test Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000003118 histopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- HJCCZIABCSDUPE-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[4-[[4-methyl-6-(1-methylbenzimidazol-2-yl)-2-propylbenzimidazol-1-yl]methyl]phenyl]benzoate Chemical compound CCCC1=NC2=C(C)C=C(C=3N(C4=CC=CC=C4N=3)C)C=C2N1CC(C=C1)=CC=C1C1=CC=CC=C1C(=O)OC HJCCZIABCSDUPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
Abstract
本发明涉及一种用于评价医疗器械免疫原性的试验方法，包括以下步骤：（1）样品制备；（2）取多只豚鼠，按体重随机分成3组，分别为试验组、空白组和对照组；（3）每只豚鼠切口，其中，在试验组的豚鼠切口处敷贴试验样品或者浸泡了试验样品浸提液的灭菌纱布，在空白组的豚鼠切口处敷贴灭菌纱布，在对照组的豚鼠切口处敷贴对照样品或者浸泡了对照样品浸提液的灭菌纱布；（4）于切口后8天对豚鼠采血；（5）处死豚鼠，取出豚鼠脾脏、胸腺；（6）称量脾脏、胸腺脏器重量。本发明将医疗器械在动物上造模型，模拟医疗器械在实际使用过程中与人体接触，贴近实际使用环境，再测试动物体内的一系列免疫指标，更好地进行医疗器械的免疫原性评价。
Description
技术领域
本发明涉及一种试验方法，尤其涉及一种用于评价医疗器械免疫原性的试验方法。
背景技术
众所周知，医疗器械中含有的免疫原是导致其免疫病毒的原因，免疫原是可能会刺激机体发生免疫应答的异源性物质，因此，如何对医疗器械中含有的免疫原进行评价是控制相关产品免疫病毒性的关键所在。现有的医疗器械免疫原性试验大多采用体外方法来评价，已有行业标准YY/T 1465.1-2016，提供了体外T淋巴细胞转化试验的方法，为医疗器械/材料特异性激发细胞介导免疫应答潜能提供检测方法。但体外实验无法模拟机体免疫系统的复杂情况，无法模拟医疗器械在实际使用过程中与人体接触，无法贴近实际使用环境。
发明内容
本发明克服了现有技术的不足，提供一种用于评价医疗器械免疫原性的试验方法。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种用于评价医疗器械免疫原性的试验方法，包括以下步骤：
（1）试验样品制备：若试验用医疗器械能够直接敷贴，无需处理，直接以试验用医疗器械作为试验样品；若试验用医疗器械不能直接敷贴，对试验用医疗器械进行浸提，然后以浸泡了试验用医疗器械浸提液的灭菌纱布作为试验样品；
（2）采用灭菌纱布作为空白样品；
（3）对照样品制备：采用与试验用医疗器械同类的上市样品，若上市样品能够直接敷贴，直接以上市样品作为对照样品；若上市样品不能直接敷贴，对上市样品进行浸提，然后以浸泡了上市样品浸提液的灭菌纱布作为对照样品；
（4）取多只豚鼠，按体重随机分成3组，分别为试验组、空白组和对照组；
（5）每只豚鼠背部去毛消毒，用手术刀于背部右下侧切开一个深达脂肪层、长度1cm的切口，以“0”号丝线间断缝合，其中，在试验组的豚鼠切口处敷贴试验样品，在空白组的豚鼠切口处敷贴灭菌纱布，在对照组的豚鼠切口处敷贴对照样品，试验样品、灭菌纱布和对照样品均用医用胶带固定，于切口后2天、4天和6天更换试验样品、灭菌纱布和对照样品；
（6）于切口后8天对豚鼠采血；
（7）采血后脱颈椎处死豚鼠，对豚鼠消毒，将消毒后的豚鼠取出置入超净工作台上的一次性无菌器械盘中，无菌眼科剪剪开豚鼠腹腔，取出豚鼠脾脏、胸腺；
（8）称量脾脏、胸腺脏器重量，计算脏器比重系数。
本发明一个较佳实施例中，用于评价医疗器械免疫原性的试验方法进一步包括所述步骤（6）中，豚鼠麻醉后股动脉采血，收集血液至抗凝管中，另收集血液至1.5mL离心管中，于4℃静置1小时待血清析出，3000rpm离心10min，吸出上层血清至另一1.5mL离心管中，3000rpm离心10min后将血清分装、标记和封口，冻存于-80℃用于后续检测。
本发明一个较佳实施例中，用于评价医疗器械免疫原性的试验方法进一步包括所述后续检测包括IgG检测和IgM检测。
本发明一个较佳实施例中，用于评价医疗器械免疫原性的试验方法进一步包括所述步骤（4）中，取18只豚鼠，按体重随机分成3组，每组包括3只雄性豚鼠和3只雌性豚鼠。
本发明一个较佳实施例中，用于评价医疗器械免疫原性的试验方法进一步包括所述步骤（7）中，将处死的豚鼠浸入75%酒精中浸泡2分钟，消毒后的豚鼠腹部向上放入一次性无菌器械盘中，无菌眼科剪剪开豚鼠腹腔，用无菌镊子剥离并取出豚鼠脾脏、胸腺。
本发明一个较佳实施例中，用于评价医疗器械免疫原性的试验方法进一步包括在所述步骤（8）后还包括取脾脏、胸腺放于福尔马林溶液固定，进行石蜡切片以及HE染色，观察组织形态结构变化。
本发明一个较佳实施例中，用于评价医疗器械免疫原性的试验方法进一步包括所述步骤（1）和步骤（3）中的浸提均按照GB/T 16886.12-2005中第10条执行。
本发明解决了背景技术中存在的缺陷，本发明操作简便、稳定可靠，将医疗器械在动物上造模型，模拟医疗器械在实际使用过程中与人体接触，贴近实际使用环境，再测试动物体内的一系列免疫指标，更好地进行医疗器械的免疫原性评价，把关医疗器械质量，为医疗器械的开发或在临床上更安全的使用提供依据，具有很好的社会效益和经济效益。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。
图1是本发明的优选实施例的试验组的雄性豚鼠脾脏进行染色的病理切片图，放大倍数为100倍；
图2是本发明的优选实施例的试验组的雄性豚鼠脾脏进行染色的病理切片图，放大倍数为400倍；
图3是本发明的优选实施例的空白组的雄性豚鼠脾脏进行染色的病理切片图，放大倍数为100倍；
图4是本发明的优选实施例的空白组的雄性豚鼠脾脏进行染色的病理切片图，放大倍数为400倍；
图5是本发明的优选实施例的对照组的雄性豚鼠脾脏进行染色的病理切片图，放大倍数为100倍；
图6是本发明的优选实施例的对照组的雄性豚鼠脾脏进行染色的病理切片图，放大倍数为400倍；
图7是本发明的优选实施例的试验组的雌性豚鼠脾脏进行染色的病理切片图，放大倍数为100倍；
图8是本发明的优选实施例的试验组的雌性豚鼠脾脏进行染色的病理切片图，放大倍数为400倍；
图9是本发明的优选实施例的空白组的雌性豚鼠脾脏进行染色的病理切片图，放大倍数为100倍；
图10是本发明的优选实施例的空白组的雌性豚鼠脾脏进行染色的病理切片图，放大倍数为400倍；
图11是本发明的优选实施例的对照组的雌性豚鼠脾脏进行染色的病理切片图，放大倍数为100倍；
图12是本发明的优选实施例的对照组的雌性豚鼠脾脏进行染色的病理切片图，放大倍数为400倍；
图13是本发明的优选实施例的试验组的雄性豚鼠胸腺进行染色的病理切片图，放大倍数为100倍；
图14是本发明的优选实施例的试验组的雄性豚鼠胸腺进行染色的病理切片图，放大倍数为400倍；
图15是本发明的优选实施例的空白组的雄性豚鼠胸腺进行染色的病理切片图，放大倍数为100倍；
图16是本发明的优选实施例的空白组的雄性豚鼠胸腺进行染色的病理切片图，放大倍数为400倍；
图17是本发明的优选实施例的对照组的雄性豚鼠脾脏进行染色的病理切片图，放大倍数为100倍；
图18是本发明的优选实施例的对照组的雄性豚鼠胸腺进行染色的病理切片图，放大倍数为400倍；
图19是本发明的优选实施例的试验组的雌性豚鼠胸腺进行染色的病理切片图，放大倍数为100倍；
图20是本发明的优选实施例的试验组的雌性豚鼠胸腺进行染色的病理切片图，放大倍数为400倍；
图21是本发明的优选实施例的空白组的雌性豚鼠胸腺进行染色的病理切片图，放大倍数为100倍；
图22是本发明的优选实施例的空白组的雌性豚鼠胸腺进行染色的病理切片图，放大倍数为400倍；
图23是本发明的优选实施例的对照组的雌性豚鼠胸腺进行染色的病理切片图，放大倍数为100倍；
图24是本发明的优选实施例的对照组的雌性豚鼠胸腺进行染色的病理切片图，放大倍数为400倍。
具体实施方式
现在结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明，这些附图均为简化的示意图，仅以示意方式说明本发明的基本结构，因此其仅显示与本发明有关的构成。
一种用于评价医疗器械免疫原性的试验方法，包括以下步骤：
（1）采用北京鼎瀚恒海生物科技股份有限公司生产的细菌纤维素胶原多肽医用敷料作为试验样品，生产许可证编号：京药监械生产许第20130002号，生产批号：S-02150901，生产日期：20150925，失效日期：2018年9月；采用灭菌纱布作为空白样品；采用北京鼎瀚恒海生物科技股份有限公司生产的细菌纤维素伤口敷料作为对照样品，注册证编号：京械注准20142640018，执行标准：YZB/京0003-2013《细菌纤维素伤口敷料》，生产许可：京药监械生产许20130002号。
（2）取18只豚鼠，按体重随机分成3组，分别为试验组、空白组和对照组，每组包括3只雄性豚鼠和3只雌性豚鼠。
（3）试验组的每只豚鼠背部去毛消毒，用手术刀于背部右下侧切开一个深达脂肪层、长度1cm的切口，以“0”号丝线间断缝合，在切口处敷贴试验样品，用医用胶带固定，于切口后2天、4天和6天更换试验样品；
空白组的每只豚鼠背部去毛消毒，用手术刀于背部右下侧切开一个深达脂肪层、长度1cm的切口，以“0”号丝线间断缝合，在切口处敷贴灭菌纱布，用医用胶带固定，于切口后2天、4天和6天更换灭菌纱布；
对照组的每只豚鼠背部去毛消毒，用手术刀于背部右下侧切开一个深达脂肪层、长度1cm的切口，以“0”号丝线间断缝合，在切口处敷贴对照样品，用医用胶带固定，于切口后2天、4天和6天更换对照样品。
（4）于切口后8天对豚鼠麻醉后股动脉采血，收集血液至抗凝管中，用于血常规检测免疫细胞，检测结果如表1所示，另收集血液至1.5mL离心管中，于4℃静置1小时待血清析出，3000rpm离心10min，吸出上层血清至另一1.5mL离心管中，3000rpm离心10min后将血清分装、标记和封口，冻存于-80℃用于IgG检测和IgM检测。
表1豚鼠血液中免疫细胞（%）
| No. | 组别-性别 | LYM% | MON% | NEUT% | EOS% |
| 1 | 试验组-雄 | 22.9 | 18.2 | 46.1 | 0.2 |
| 2 | 试验组-雄 | 31.3 | 20.7 | 35.0 | 0.1 |
| 3 | 试验组-雄 | 42.6 | 8.5 | 43.4 | 0.5 |
| 4 | 试验组-雌 | 34.9 | 7.9 | 51.9 | 0.3 |
| 5 | 试验组-雌 | 51.8 | 5.5 | 34.5 | 0.1 |
| 6 | 试验组-雌 | 27.7 | 6.4 | 51.9 | 0.4 |
| No. | 组别/性别 | LYM%# | MON%# | NEUT%# | EOS%# |
| 1 | 空白组-雄 | 22.1 | 21.3 | 44.5 | 0.0 |
| 2 | 空白组-雄 | 35.4 | 21.0 | 39.1 | 0.1 |
| 3 | 空白组-雄 | 46.6 | 14.7 | 34.5 | 0.4 |
| 4 | 空白组-雌 | 27.7 | 6.4 | 51.9 | 0.4 |
| 5 | 空白组-雌 | 31 | 12.8 | 42.8 | 0.2 |
| 6 | 空白组-雌 | 47 | 12.7 | 32.6 | 0.2 |
| No. | 组别/性别 | LYM%# | MON%# | NEUT%# | EOS%# |
| 1 | 对照组-雄 | 43.1 | 6.9 | 43.9 | 0.4 |
| 2 | 对照组-雄 | 25.9 | 9.2 | 58.8 | 0.2 |
| 3 | 对照组-雄 | 54.6 | 12.6 | 29.6 | 0.2 |
| 4 | 对照组-雌 | 49.3 | 6.4 | 31.3 | 0.2 |
| 5 | 对照组-雌 | 26.3 | 4.7 | 64.3 | 0.0 |
| 6 | 对照组-雌 | 47.8 | 2.4 | 41.4 | 0.2 |
IgG检测是指：按动物不同组别和性别，取血清摇匀后，严格按照上海酶联生物科技有限公司生产的IgG检测试剂盒的说明书要求，把试剂盒中的原倍标准品稀释到50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml、800ng/ml五个浓度，按说明书步骤建立标准曲线，进行血清中免疫球蛋白IgG含量的测定，具体测定结果如表2、表3所示。
表2雄性豚鼠血清IgG含量（ng/ml）
表3雄性豚鼠血清IgM含量（ng/ml）
IgM检测是指：按动物不同组别和性别，取血清摇匀后，严格按照上海酶联生物科技有限公司生产的IgM检测试剂盒的说明书要求，把试剂盒中的原倍标准品稀释到0.25ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、4ng/ml五个浓度，按说明书步骤建立标准曲线，进行血清中免疫球蛋白IgM含量的测定，具体测定结果如表4、表5所示。
表4雄性豚鼠血清IgM含量（ng/ml）
表5雌性豚鼠血清IgM含量（ng/ml）
（5）采血后脱颈椎处死豚鼠，对豚鼠消毒，将消毒后的豚鼠取出置入超净工作台上的一次性无菌器械盘中，无菌眼科剪剪开豚鼠腹腔，用无菌镊子剥离并取出豚鼠脾脏、胸腺。
为了避免对豚鼠组织的破坏，同时更便捷的处理豚鼠，本发明优选消毒后的豚鼠腹部向上放入一次性无菌器械盘中。具体的，本发明优选对豚鼠的消毒方式是将处死的豚鼠浸入75%酒精中浸泡2分钟。
（6）称量脾脏、胸腺脏器重量，计算脏器比重系数，脏器比重系数=（脏器重量/豚鼠体重）×100%，具体结果见表6。
表6各组体重、脏器重量和脏器比重系数计算结果
| No. | 组别-性别 | 体重(g) | 脾脏(g) | 胸腺(g) | 脾脏比重系数（%） | 胸腺比重系数（%） |
| 1 | 试验组-雄 | 366 | 0.827 | 0.110 | 0.226 | 0.030 |
| 2 | 试验组-雄 | 437 | 0.708 | 0.238 | 0.162 | 0.054 |
| 3 | 试验组-雄 | 340 | 0.733 | 0.214 | 0.216 | 0.062 |
| 4 | 试验组-雌 | 362 | 0.804 | 0.230 | 0.222 | 0.064 |
| 5 | 试验组-雌 | 352 | 0.536 | 0.206 | 0.152 | 0.058 |
| 6 | 试验组-雌 | 358 | 0.612 | 0.235 | 0.171 | 0.066 |
| No. | 组别-性别 | 体重(g) | 脾脏(g) | 胸腺(g) | 脾脏比重系数（%） | 胸腺比重系数（%） |
| 1 | 空白组-雄 | 367 | 0.682 | 0.168 | 0.186 | 0.045 |
| 2 | 空白组-雄 | 396 | 0.681 | 0.254 | 0.172 | 0.064 |
| 3 | 空白组-雄 | 385 | 0.863 | 0.209 | 0.224 | 0.054 |
| 4 | 空白组-雌 | 398 | 1.053 | 0.579 | 0.265 | 0.145 |
| 5 | 空白组-雌 | 402 | 0.486 | 0.242 | 0.121 | 0.060 |
| 6 | 空白组-雌 | 325 | 0.500 | 0.435 | 0.153 | 0.133 |
| No. | 组别-性别 | 体重(g) | 脾脏(g) | 胸腺(g) | 脾脏比重系数（%） | 胸腺比重系数（%） |
| 1 | 对照组-雄 | 443 | 0.739 | 0.242 | 0.167 | 0.054 |
| 2 | 对照组-雄 | 322 | 0.707 | 0.246 | 0.219 | 0.076 |
| 3 | 对照组-雄 | 350 | 0.683 | 0.594 | 0.195 | 0.170 |
| 4 | 对照组-雌 | 318 | 0.486 | 0.202 | 0.153 | 0.064 |
| 5 | 对照组-雌 | 318 | 0.449 | 0.140 | 0.141 | 0.044 |
| 6 | 对照组-雌 | 300 | 0.579 | 0.230 | 0.193 | 0.077 |
（7）取脾脏、胸腺，放于福尔马林溶液固定，进行石蜡切片以及HE染色，观察组织形态结构变化，具体见图1-图24。
镜检结果：
每组切片经显微镜下组织病理学检查，观察到的组织病理学变化见表7和表8。
组织病理学观察结果（雄性）
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| 脾脏 | |||||||||
| 无明显异常 | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ |
| 红髓和白髓分布异常 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 脾小体异常 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 生发中心核分裂象增多 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 生发中心扩大 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 淋巴滤泡反应性增生及萎缩 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 胸腺 | |||||||||
| 无明显异常 | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ |
| 皮质和髓质分布异常 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 皮质增生或萎缩 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 皮质细胞核分裂象增多 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 异常物质沉积 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
注：编号1、2、3为试验组，编号4、5、6为空白组，编号7、8、9为对照组。
表8组织病理学观察结果（雌性）
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| 脾脏 | |||||||||
| 无明显异常 | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ |
| 红髓和白髓分布异常 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 脾小体异常 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 生发中心核分裂象增多 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 生发中心扩大 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 淋巴滤泡反应性增生及萎缩 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 胸腺 | |||||||||
| 无明显异常 | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ | √ |
| 皮质和髓质分布异常 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 皮质增生或萎缩 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 皮质细胞核分裂象增多 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
| 异常物质沉积 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 | 无 |
注：编号1、2、3为试验组，编号4、5、6为空白组，编号7、8、9为对照组。
对以上所有的试验组、空白组与对照组数据通过Microsoft excel 2003的T-test检验进行统计分析，若P值小于0.05，说明样品会引起免疫细胞T细胞或免疫球蛋白IgG、IgM等的数量变化，具有显著性差异；若P值大于0.05，说明样品不会对免疫T细胞或免疫球蛋白IgG、IgM等产生影响，无显著性差异。
试验组和空白组、对照组比较，血液中LYM%，MON%，NEUT%，EOS%无显著性差异；
试验组和空白组、对照组比较，免疫球蛋白IgG、IgM含量无显著性差异；
试验组和空白组、对照组比较，脾脏，胸腺脏器比重系数无显著性差异；
试验组和空白组、对照组比较，未见明显组织病理学差异，试验组、空白组和对照组均未见以上表中所列各种异常组织病理学改变。
综上所述，试验样品的免疫原性与对照样品、空白样品均无显著性差异。
当试验用医疗器械不适合直接敷贴，需先将试验用医疗器械浸提，用浸泡了试验用医疗器械浸提液的灭菌纱布作为最终的试验样品，同时将与试验用医疗器械同类的上市样品浸提，用浸泡了上市样品浸提液的灭菌纱布作为最终的对照样品。
以上依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定技术性范围。
Claims (7)
1.一种用于评价医疗器械免疫原性的试验方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）试验样品制备：若试验用医疗器械能够直接敷贴，无需处理，直接以试验用医疗器械作为试验样品；若试验用医疗器械不能直接敷贴，对试验用医疗器械进行浸提，然后以浸泡了试验用医疗器械浸提液的灭菌纱布作为试验样品；
（2）采用灭菌纱布作为空白样品；
（3）对照样品制备：采用与试验用医疗器械同类的上市样品，若上市样品能够直接敷贴，直接以上市样品作为对照样品；若上市样品不能直接敷贴，对上市样品进行浸提，然后以浸泡了上市样品浸提液的灭菌纱布作为对照样品；
（4）取多只豚鼠，按体重随机分成3组，分别为试验组、空白组和对照组；
（5）每只豚鼠背部去毛消毒，用手术刀于背部右下侧切开一个深达脂肪层、长度1cm的切口，以“0”号丝线间断缝合，其中，在试验组的豚鼠切口处敷贴试验样品，在空白组的豚鼠切口处敷贴灭菌纱布，在对照组的豚鼠切口处敷贴对照样品，试验样品、灭菌纱布和对照样品均用医用胶带固定，于切口后2天、4天和6天更换试验样品、灭菌纱布和对照样品；
（6）于切口后8天对豚鼠采血；
（7）采血后脱颈椎处死豚鼠，对豚鼠消毒，将消毒后的豚鼠取出置入超净工作台上的一次性无菌器械盘中，无菌眼科剪剪开豚鼠腹腔，取出豚鼠脾脏、胸腺；
（8）称量脾脏、胸腺脏器重量，计算脏器比重系数。
2.根据权利要求1所述的用于评价医疗器械免疫原性的试验方法，其特征在于，所述步骤（6）中，豚鼠麻醉后股动脉采血，收集血液至抗凝管中，另收集血液至1.5mL离心管中，于4℃静置1小时待血清析出，3000rpm离心10min，吸出上层血清至另一1.5mL离心管中，3000rpm离心10min后将血清分装、标记和封口，冻存于-80℃用于后续检测。
3.根据权利要求2所述的用于评价医疗器械免疫原性的试验方法，其特征在于，所述后续检测包括IgG检测和IgM检测。
4.根据权利要求1所述的用于评价医疗器械免疫原性的试验方法，其特征在于，所述步骤（4）中，取18只豚鼠，按体重随机分成3组，每组包括3只雄性豚鼠和3只雌性豚鼠。
5.根据权利要求1所述的用于评价医疗器械免疫原性的试验方法，其特征在于，所述步骤（7）中，将处死的豚鼠浸入75%酒精中浸泡2分钟，消毒后的豚鼠腹部向上放入一次性无菌器械盘中，无菌眼科剪剪开豚鼠腹腔，用无菌镊子剥离并取出豚鼠脾脏、胸腺。
6.根据权利要求1所述的用于评价医疗器械免疫原性的试验方法，其特征在于，在所述步骤（8）后还包括取脾脏、胸腺放于福尔马林溶液固定，进行石蜡切片以及HE染色，观察组织形态结构变化。
7. 根据权利要求1所述的用于评价医疗器械免疫原性的试验方法，其特征在于，所述步骤（1）和步骤（3）中的浸提均按照GB/T 16886.12-2005中第10条执行。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810087976.5A CN108339127A (zh) | 2018-01-30 | 2018-01-30 | 用于评价医疗器械免疫原性的试验方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810087976.5A CN108339127A (zh) | 2018-01-30 | 2018-01-30 | 用于评价医疗器械免疫原性的试验方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108339127A true CN108339127A (zh) | 2018-07-31 |
Family
ID=62960789
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810087976.5A Pending CN108339127A (zh) | 2018-01-30 | 2018-01-30 | 用于评价医疗器械免疫原性的试验方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108339127A (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006340695A (ja) * | 2005-06-10 | 2006-12-21 | Kureha Corp | 臓器の一部を切除してなる実験動物を作製するための実験動物臓器切除型 |
| US20120177718A1 (en) * | 2009-06-11 | 2012-07-12 | The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Wound-covering material |
-
2018
- 2018-01-30 CN CN201810087976.5A patent/CN108339127A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006340695A (ja) * | 2005-06-10 | 2006-12-21 | Kureha Corp | 臓器の一部を切除してなる実験動物を作製するための実験動物臓器切除型 |
| US20120177718A1 (en) * | 2009-06-11 | 2012-07-12 | The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Wound-covering material |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 国家食品药品监督管理局组织编写: "《医疗器械监管技术基础》", vol. 1, 中国医药科技出版社, pages: 178 - 179 * |
| 薛旸等: "医用热硫化硅橡胶免疫抑制效应的评价", vol. 12, no. 32, pages 6296 - 6299 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Xie et al. | The effect of centrifugation on viability of fat grafts: an evaluation with the glucose transport test | |
| Kosin | Macro-and microscopic methods of detecting fertility in unincubated hen’s eggs | |
| KR102641616B1 (ko) | 남성 수정능력 상태의 판정 방법 및 시험 키트 | |
| JP6889104B2 (ja) | 精子受精能獲得を判定することによるオスの受精能状態の特定 | |
| Anderson et al. | Single muscle-fiber isolation and culture for cellular, molecular, pharmacological, and evolutionary studies | |
| CN106011072A (zh) | 人膀胱移行细胞癌细胞系及膀胱癌组织重组功能性重建模型的建立方法 | |
| RU2466680C1 (ru) | Способ диагностики состояния кожи пациента (варианты) | |
| Noguchi | Serum diagnosis of syphilis and luetin reaction | |
| CN102712897B (zh) | 心脏组织来源细胞 | |
| Mortimer | Laboratory standards in routine clinical andrology | |
| CN108339127A (zh) | 用于评价医疗器械免疫原性的试验方法 | |
| Mehta et al. | Ex vivo mouse aortic ring angiogenesis assay | |
| EP2460887A1 (en) | Microaggregates including endothelial cells | |
| Pozzobon et al. | Alveolar rhabdomyosarcoma decellularization | |
| Martin et al. | Clinical potential of human amniotic fluid stem cells | |
| CN112574943A (zh) | 一种体外模拟皮肤癣菌感染的模型及其建立方法和应用 | |
| RU2431838C1 (ru) | Способ диагностики гиперагрегации тромбоцитов | |
| US6756194B2 (en) | Control samples for use as standards for evaluating apoptosis in a selected tissue | |
| Lloyd-Lewis et al. | Analysis of the involuting mouse mammary gland: an in vivo model for cell death | |
| Leme et al. | Molecular evaluation of the great vessels of patients with bicuspid aortic valve disease | |
| RU2801049C1 (ru) | Способ установления возрастной принадлежности неизвестного человека при проведении судебно-медицинской экспертизы | |
| CN113945722B (zh) | 一种再生障碍性贫血诊断标志物及其在制备试剂盒中的应用 | |
| Li et al. | Effects of Different Kinds of Hand Sanitizers on Complete Blood Count and Leukocyte Differential Count. | |
| RU2716512C1 (ru) | Способ установления возрастной принадлежности человека при проведении судебно-медицинской экспертизы | |
| Jacoberger-Foissac et al. | Assessing the efficacy of immune checkpoint inhibitors in preclinical tumor models |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180731 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |