CN108333020A - 一种称重法配制多系统线性验证样品的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种称重法配制多系统线性验证样品的方法。本发明所提供的配制多系统线性验证样品的方法，其中所述线性验证样品共包含N份样本，一份是待测物的低浓度液体样本，一份是所述待测物的高浓度液体样本，另外N‑2份是由所述低浓度液体样本和所述高浓度液体样本按照不同体积比混合而成的系列混合样本；所述方法包括如下步骤：在配制所述线性验证样品的过程中，针对所述系列混合样本中的每个混合样本测量密度，还需要对组成所述混合样本的所述低浓度液体样本和所述高浓度液体样本分别进行称重和测量密度；所述N为3以上的自然数。本发明方法因为排除了高浓度和低浓度样本混合后体积的变化以及加样枪吸样的误差，所以更加科学严谨。
Description
技术领域
本发明涉及临床实验方法学领域，具体涉及一种称重法配制多系统线性验证样品的方法。
背景技术
临床实验室方法学评价包括精密度，正确度，参考区间和线性等。线性评价是评价某一被测物在某一浓度范围内，其测定值与实际浓度或活性在数学上有明确直线关系的能力。线性是临床实验室测定方法的重要特性，某种检测方法线性范围的宽窄决定为临床服务能力的大小，例如线性上限的不足就不能很好的对患者病情进行预后评估和监测，线性下限不足会影响患者根治手术的效果评估。
目前，临床常用的方法学线性评估方法分别为目测法，改良Doumas法，《临床化学设备线性评价指南》(卫生行业标准)以及美国临床实验室标准化研究所(CLSI)EP6-A法。目测法简单直观，但是不能对线性做出精确的判断，故一般只作为初步评估线性的一种手段。改良Doumas法首先拟合成一条直线，然后基于统计学原理判断斜率(b)是否与1无差异，截距(a)是否与0无差异。这种判断方法过于严格，得到的线性范围往往较窄，且不能判断具体哪个点偏离了线性。《临床化学设备线性评价指南》和EP6-A都是采用多项式回归分析，但当出现非线性时，前者不能很好的判断此非线性是否能为临床接受。EP6则能运用“差值法”直观显示非线性程度和非线性位置。EP6采用多项式模型，若非线性系数与0比较差异有统计学意义，仅表示检测到了非线性。若此非线性引入的误差不超过临床允许误差时，则称为临床可接受线性。EP6法更具有临床实用性。
除了对单个检测系统进行线性评价外，还需要对多系统或多个实验室进行线性验证，如美国病理学会(CAP)的能力验证计划(PT)中包含多个线性计划，如LN-2，LN-6，LN-30等。线性评价的科学性在于样本的配制，传统方法是采用加样枪的方法，但是容易受到吸样量不准的影响，并且没有评估高低值的样本混合之后的混合液体积的变化。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种称重法配制多系统的线性验证样品，采用CAP方法进行多系统的线性评价，以增加线性验证的科学性和严谨性。
本发明所提供的配制多系统线性验证样品的方法，其中所述线性验证样品共包含N份样本，一份是待测物的低浓度液体样本，一份是所述待测物的高浓度液体样本，另外N-2份是由所述低浓度液体样本和所述高浓度液体样本按照不同体积比混合而成的系列混合样本(所述系列混合样本中所述待测物的浓度介于所述低浓度液体样本中所述待测物的浓度和所述高浓度液体样本中所述待测物的浓度之间)；所述方法具体包括如下步骤：在配制所述线性验证样品的过程中，针对所述系列混合样本中的每个混合样本，均对组成所述混合样本的所述低浓度液体样本和所述高浓度液体样本分别进行称重；所述N为3以上的自然数，如N为5-11的自然数，更加具体如N为5、6、9或11。
其中，所述低浓度液体样本中所述待测物的浓度相对较低；所述高浓度液体样本中所述待测物的浓度相对较高。
这里的“系统”包括用于定量检测所述待测物的仪器和所使用的试剂。如临床实验室检测系统。
本发明所提供的配制多系统线性验证样品的方法在对多种或一种定量检测系统进行线性性能验证中的应用也属于本发明的保护范围。
其中，所述定量检测系统包括用于定量检测的仪器和所使用的试剂。如临床实验室检测系统。
进一步地，本发明还提供了一种对定量检测系统进行线性性能验证的方法。
本发明所提供的对定量检测系统进行线性性能验证的方法，具体可包括如下步骤：
(A)配制线性验证样品：共N份样本，一份是待测物的低浓度液体样本，一份是所述待测物的高浓度液体样本，另外N-2份是由所述低浓度液体样本和所述高浓度液体样本按照不同体积比混合而成的系列混合样本；在配制所述线性验证样品的过程中，针对所述系列混合样本中的每个混合样本，均对组成所述混合样本的所述低浓度液体样本和所述高浓度液体样本分别进行称重。
其中，所述低浓度液体样本中所述待测物的浓度相对较低；所述高浓度液体样本中所述待测物的浓度相对较高。
(B)线性验证样品的密度测定：测量步骤(A)中配制的N份样本各自的密度。
(C)获得线性验证样品中所述待测物的理论浓度：按照如下公式计算所述系列混合样本中的每个混合样本中所述待测物的理论浓度。
式中，C1表示所述高浓度液体样本的理论浓度；ρ1表示所述高浓度液体样本的密度；M1表示所述混合样本中所述高浓度液体样本的质量；C2表示所述低浓度液体样本的理论浓度；ρ2表示所述低浓度液体样本的密度；M2表示所述混合样本中所述低浓度液体样本的质量；ρ3表示所述混合样本的密度；C表示所述混合样本的浓度。其中，C1表示的所述高浓度液体样本的理论浓度和C2所示的所述低浓度液体样本的理论浓度，可为已知浓度(如所述高浓度液体样本和所述低浓度液体样本是采用所述待测物的标准品自行配制而成的)，也可为经进行线性性能验证的定量检测系统所测量所得浓度(如所述高浓度液体样本和所述低浓度液体样本是病人的混合血清样本，其中待测物的具体浓度未知，则需对其中待测物的具体浓度进行测定)。
(D)采用待验证的定量检测系统对所述N份样本分别进行浓度测定。
(E)将步骤(D)测得的所述N份样本的实测浓度与步骤(C)得到的所述N份样本的理论浓度根据线性分析方法进行评价。
该方法中的所述N为3以上的自然数，如N为5-11的自然数，更加具体如N为5、6、9或11。
在所述方法的步骤(B)中，具体可按照包括如下步骤的方法测定所述N份样本各自的密度：
(b1)称出容器和加样枪枪头的质量，记为m1；
(b2)用(b1)中的所述加样枪枪头吸取体积为常数v的待测样本，然后将装有所述待测样本的所述加样枪枪头置于(b1)的所述容器中(之前包括“擦去所述加样枪枪头外面粘附的所述待测样本”的步骤)，并整体称重，记为m2；
(b3)按照如下公式计算所述待测样本的密度：ρ待测＝(m2-m1)/v。
其中，步骤(b1)和(b2)根据需要可进行3-5次重复。相应的，步骤(b3)中的公式等号右边的参数m1和m2取3-5次重复的平均值。
在所述方法的步骤(E)中，所述线性评价方法为CAP线性验证分析方法，即全球最大的室间质量评价(EQA)提供者美国病理学家协会(CAP)所采用的方法。
在本发明的具体实施例中，所述待测物为促甲状腺激素(TSH)、C反应蛋白(CRP)或肌酐(CR)。所述低浓度液体样本和所述高浓度液体样本均为含有所述待测物的人血清混合样本。
其中，所述系统的定量检测原理为化学发光法、免疫比浊法或比色法。所述系统为临床实验室检测系统。
线性评估为临床实验室检测系统性能验证的重要指标之一，线性范围决定其为患者的服务能力。通过线性评估同时也反映检测系统检测的准确性和精密度。所以科学配制线性样本尤其重要。本发明采用称重法配制线性验证样本。首先测量高低浓度液体的密度，之后分别称出其质量，得到总质量，混合后测量其密度，按照密度和总质量得到其体积，从而算出各个稀释系列的理论浓度，进行线性拟合。这种线性配制方法因为排除了高值和低值样本混合后体积的变化以及加样枪吸样的误差，所以更加科学严谨。
本发明实验所选的项目分别为TSH，CRP和CR，这些项目的检测原理分别为化学发光法，免疫比浊法和比色法。这3种检测原理皆为临床实验室常规检测方法，具有代表性。实验结果证明这3个临床常规检测项目均能满足其线性要求。本发明不仅可以同时做多个系统的线性评估，也适用于能力验证提供者能力验证线性验证样本的配制。
附图说明
图1为利德曼CI1000-157配原厂试剂TSH最佳拟合线。
图2为利德曼CI1000-157配原厂试剂TSH不精密度控制限(--表示评价限L)。
图3为罗氏e602配原厂试剂TSH最佳拟合线。
图4为罗氏e602配原厂试剂TSH不精密度控制限(--表示评价限L)。
图5为新产业Maglumin2000plus配原厂试剂TSH最佳拟合线。
图6为新产业Maglumin2000plus配原厂试剂TSH不精密度控制限(--表示评价限L)。
图7为贝克曼IMMAGE800配原厂试剂CRP最佳拟合线。
图8为贝克曼IMMAGE800配原厂试剂CRP不精密度控制限(--表示评价限L)。
图9为贝克曼AU5811配原厂试剂CRP最佳拟合线。
图10为贝克曼AU5811配原厂试剂CRP不精密度控制限(--表示评价限L)。
图11为贝克曼AU5821配积水试剂CRP最佳拟合线。
图12为贝克曼AU5821配积水试剂CRP不精密度控制限(--表示评价限L)。
图13为贝克曼AU680配利德曼试剂CRP最佳拟合线。
图14为贝克曼AU680配利德曼试剂CRP不精密度控制限(--表示评价限L)。
图15为罗氏c502配原厂试剂CRP最佳拟合线。
图16为罗氏c502配原厂试剂CRP不精密度控制限(--表示评价限L)。
图17为贝克曼AU5811配原厂试剂CR最佳拟合线。
图18为贝克曼AU5811配原厂试剂CR不精密度控制限(--表示评价限L)。
图19为贝克曼AU680配利德曼试剂CR最佳拟合线。
图20为贝克曼AU680配利德曼试剂CR不精密度控制限(--表示评价限L)。
图21为罗氏c702配原厂试剂CR最佳拟合线。
图22为罗氏c702配原厂试剂CR不精密度控制限(--表示评价限L)。
图23为西门子ADVIA 2400配原厂试剂CR最佳拟合线。
图24为西门子ADVIA 2400配原厂试剂CR不精密度控制限(--表示评价限L)。
图25为贝克曼AU5821配九强试剂CR最佳拟合线。
图26为贝克曼AU5821配九强试剂CR不精密度控制限(--表示评价限L)。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、称重法配制多系统的线性验证物质，以CAP方法进行多系统线性评价
一、实验材料
1、鉴定合格的天平
2、经过校准的加样枪
3、检测系统
(1)3厂家促甲状腺激素(TSH)项目
A利德曼CI1000-157配原厂试剂；
B罗氏e602配原厂试剂；
C新产业Maglumin2000plus配原厂试剂；
(2)5厂家C反应蛋白(CRP)项目
A贝克曼IMMAGE800配原厂试剂
B贝克曼AU5811配原厂试剂；
C贝克曼AU5821配积水试剂；
D贝克曼AU680配利德曼试剂；
E罗氏c502配原厂试剂；
(3)5厂家肌酐(CR)项目
A贝克曼AU5811配原厂试剂；
B贝克曼AU680配利德曼试剂
C罗氏c702配原厂试剂；
D西门子ADVIA 2400配原厂试剂
E贝克曼AU5821配九强试剂；
二、实验步骤
1、血清收集
(1)分别收集初始检测值CRP、TSH和CR高浓度人验后血清，混合后，得到预期高值混合物(H)，均达到7.5ml以上，混匀。
(2)同样方法收集初始检测值CRP、TSH和CR低浓度人验后血清，混合后，得到低值混合物(L)，调配成预期低浓度血清(L)，要求达到22.5ml以上，混匀。
2、线性物质配制
将高值(H)和低值(L)混和血清样本按照如下比例(体积比)配制1:Low(L)；2:0.8L+0.2H；3:0.6L+0.4H；4:0.4L+0.6H；5:0.2L+0.8H；6:High(H)。需要说明的是所有配制均采用称重法记录其准确的质量(见表1)。
表1 三项目线性样本配制
3、线性物质密度测量
(1)采用鉴定合格的天平，先称出小瓶和加样枪枪头的质量，记为m1。
(2)采用无菌橡胶手套，从小瓶中小心拿出加样枪枪头。
(3)采用经校准的加样枪，准确吸取100μl以上各线性物质，然后擦去加样枪外面的液体后将装有线性物质的加样枪枪头置于小瓶中，整体称重，记质量为m2。
(4)如此反复称量3次，并作详细记录。
(5)根据液体的密度计算公式为ρ＝(m2-m1)/v1，求得密度的平均值。
(6)按照(1)～(5)的步骤，算出所有线性物质的密度(见表2)。
表2 三项目线性样本密度测定(体积v1＝100μl)
4、线性物质理论浓度计算
低值和高值样本的理论值即为其检测值。对于其他样本，根据低值和高值样本的检测值，利用实际称取的质量和密度进行计算。例如，对于某管某一被测量，高值的浓度为C1mg/L，密度为ρ1，称取的质量为M1，低值的浓度为C2mg/L，密度为ρ2，称取的质量为M2，某管本身的密度为ρ3，利用公式得到其理论浓度：
三、统计学处理
将得到的理论浓度和实际检测到的浓度根据美国病理学家协会(CAP)所采用的方法进行评价。根据CAP标准，TSH，CRP和CR的允许总误差(TEa)分别为25％、20％和15％；评价限L根据如下公式计算：
其中N为所有检测结果个数，为所有检测结果的均值。
四、实验结果
所有检测系统3项目线性均满足线性要求，但新产业Maglumin2000plus配原厂试剂(TSH)、贝克曼IMMAGE800配原厂试剂(CRP)、贝克曼AU680配利德曼试剂(CRP)和罗氏c502配原厂试剂(CRP)均不能满足精密度要求。
详细结果见表3至表15以及图1至图26。
表3 TSH线性评估表(利德曼CI1000-157配原厂)
表4 TSH线性评估表(罗氏e602配原厂)
表5 TSH线性评估表(新产业Maglumin2000plus配原厂)
表6 CRP线性评估表(贝克曼Immage 800配原厂)
表7 CRP线性评估表(贝克曼配原厂)
表8 CRP线性评估表(贝克曼AU5821配积水)
表9 CRP线性评估表(贝克曼AU680配利德曼)
表10 CRP线性评估表(罗氏c502配原厂)
表11 CR线性评估表(贝克曼AU5811配原厂)
表12 CR线性评估表(贝克曼AU680配利德曼)
表13 CR线性评估表(罗氏c702配原厂)
表14 CR线性评估表(西门子ADVIA 2400配原厂)
表15 CR线性评估表(贝克曼AU5821配九强)
本发明实验所选的项目分别为TSH，CRP和CR，这些项目的检测原理分别为化学发光法，免疫比浊法和比色法。这3种检测原理皆为临床实验室常规检测方法，具有代表性。实验结果证明这3个临床常规检测项目均能满足其线性要求，但是某些项目的线性拟合的精密度略差，可能与样本的复溶，混匀等处理过程有关，也可能为仪器的随机误差造成(注：这与本发明评估方法本身无关，本发明方法既能评价精密度好的仪器的线性，也能评价精密度略差的仪器的线性)。总之，本发明不仅可以同时做多个系统的线性评估，也适用于能力验证提供者能力验证线性验证样本的配制。
Claims (9)
1.一种配制多系统线性验证样品的方法，其中所述线性验证样品共包含N份样本，一份是待测物的低浓度液体样本，一份是所述待测物的高浓度液体样本，另外N-2份是由所述低浓度液体样本和所述高浓度液体样本按照不同体积比混合而成的系列混合样本；所述方法包括如下步骤：在配制所述线性验证样品的过程中，针对所述系列混合样本中的每个混合样本，均对组成所述混合样本的所述低浓度液体样本和所述高浓度液体样本分别进行称重；
所述N为3以上的自然数。
2.权利要求1所述的方法在对多种或一种定量检测系统进行线性性能验证中的应用。
3.一种对定量检测系统进行线性性能验证的方法，包括如下步骤：
(A)配制线性验证样品：共N份样本，一份是待测物的低浓度液体样本，一份是所述待测物的高浓度液体样本，另外N-2份是由所述低浓度液体样本和所述高浓度液体样本按照不同体积比混合而成的系列混合样本；在配制所述线性验证样品的过程中，针对所述系列混合样本中的每个混合样本，均对组成所述混合样本的所述低浓度液体样本和所述高浓度液体样本分别进行称重；
(B)线性验证样品的密度测定：测量步骤(A)中配制的N份样本各自的密度；
(C)获得线性验证样品中所述待测物的理论浓度：按照如下公式计算所述系列混合样本中的每个混合样本中所述待测物的理论浓度，
式中，C1表示所述高浓度液体样本的理论浓度；ρ1表示所述高浓度液体样本的密度；M1表示所述混合样本中所述高浓度液体样本的质量；C2表示所述低浓度液体样本的理论浓度；ρ2表示所述低浓度液体样本的密度；M2表示所述混合样本中所述低浓度液体样本的质量；ρ3表示所述混合样本的密度；C表示所述混合样本的浓度；
(D)采用待验证的定量检测系统对所述N份样本分别进行浓度测定；
(E)将步骤(D)测得的所述N份样本的实测浓度与步骤(C)得到的所述N份样本的理论浓度根据线性分析方法进行评价；
所述N为3以上的自然数。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(B)中，是按照包括如下步骤的方法测定所述N份样本各自的密度的：
(b1)称出容器和加样枪枪头的质量，记为m1；
(b2)用(b1)中的所述加样枪枪头吸取体积为常数v的待测样本，然后置于(b1)的所述容器中，并整体称重，记为m2；
(b3)按照如下公式计算所述待测样本的密度：ρ待测＝(m2-m1)/v。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(b1)和(b2)进行3-5次重复，步骤(b3)中的公式等号右边的参数m1和m2取3-5次重复的平均值。
6.根据权利要求3-5中任一所述的方法，其特征在于：步骤(E)中，所述线性分析方法为CAP线性验证分析方法。
7.根据权利要求1-6中任一所述方法或应用，其特征在于：所述待测物为促甲状腺激素、C反应蛋白或肌酐。
8.根据权利要求1-8中任一所述方法或应用，其特征在于：所述低浓度液体样本和所述高浓度液体样本均为含有所述待测物的人血清混合样本。
9.根据权利要求1-8中任一所述方法或应用，其特征在于：所述系统的定量检测原理为化学发光法、免疫比浊法或比色法。
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|---|---|
| CN (1) | CN108333020A (zh) |
-
2018
- 2018-02-08 CN CN201810128051.0A patent/CN108333020A/zh active Pending
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
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