CN108310079A - 一种中药组合提取物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药组合提取物及其应用，所述中药组合提取物的制备原料包含以下重量份的组份：大黄3～4份，黄连2份，黄芩2份。并通过低温干燥粉碎，加水煎煮，过滤，减压浓缩，喷雾干燥后粉碎过筛等步骤制备而成。同时公开了该中药组合提取物在制备预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物中的应用，并且通过建立血管紧张素II所致血管内皮细胞损伤模型和建立AngII联合醋酸脱氧皮质酮所致的血管损伤模型，证明了该中药组合提取物具有恢复内皮细胞功能、抑制NLRP3炎症小体表达、抑制NLRP3炎症小体激活的作用以及恢复血管内连接蛋白的作用，进而表现出保护血管的药效。

Description

一种中药组合提取物及其应用

技术领域

本发明涉及大黄、黄连和黄芩组合提取物在医药技术领域的新用途，更具体地，涉及大黄、黄连和黄芩组合提取物用于预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物的应用。

背景技术

《中国心血管病报告2015》年报中提到，中国现有心血管疾病(包括冠心病，脑卒中，心力衰竭，高血压)患者约2.9亿，且呈快速增长趋势。心血管疾病占居民疾病死亡构成在农村为44.6％，在城市为42.52％。心血管病占居民疾病死亡构成的40％以上，为我国居民的首位死因。相关的治疗药物研发在过去几十年取得了巨大进步，但由于治疗的周期长，往往会带来毒副作用。此外，由于此类疾病成因复杂，疾病通路之间存在互补易出现抗药性，同时长期使用单一的药品也发生基因突变而导致耐药性的概率也会大幅上升。由此因此从中药和天然药物中寻找毒副作用小、更加适合患者长期服用的治疗药物具有十分迫切和重要的意义。

大黄是多种蓼科大黄属的多年生植物的合称，具有攻积滞、清湿热、泻火、凉血、祛瘀、解毒等功效。黄连属多年生草本植物，有清热燥湿，泻火解毒之功效。黄芩是唇形科黄芩属多年生草本植物味苦、性寒，有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效。这三味中药在历代本草典籍中均有记载，中医临床使用频率较高且治疗多种炎症性疾病取得良好的效果。现代研究表明大黄、黄连和黄芩具有抗菌，消炎，杀虫，抗癌，泻下等功效，但对于其预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的作用国内外尚未报道。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种含有大黄、黄连及黄岑的组合提取物在制备预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物中的应用，开辟了大黄、黄连、黄岑作为药物的新用途，也为治疗和预防由高血压诱导形成的血管疾病提供新的途径，从而为由高血压诱导形成的血管疾病的治疗提供一种新的有效、安全、价廉的新型药物。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种中药组合提取物，所述中药组合提取物的制备原料包含以下重量份的组份：大黄3～4份，黄连2份，黄芩2份。

作为本发明所述中药组合提取物的优选实施方式，所述中药组合提取物的制备原料包含以下重量份的组份：大黄4份，黄连2份，黄芩2份。

作为本发明所述中药组合提取物的优选实施方式，所述中药组合提取物的制备方法包含以下步骤：选取大黄、黄连、黄芩，洗净，除杂，低温干燥粉碎，加水煎煮，过滤，减压浓缩，喷雾干燥后粉碎过筛，即得中药组合提取物。

作为本发明所述中药组合提取物的更优选实施方式，所述中药提取物的制备方法包含以下步骤：取大黄、黄连、黄芩，净选，除杂，低温干燥粉碎，加10倍水煎煮1小时，用200目过滤，滤渣再重复加热提取2次，合并三次水提液减压浓缩，喷雾干燥后粉碎过80目筛，即得中药组合提取物。

本发明的另一目的还在于提供一种所述中药组合提取物的新用途，为实现此目的，本发明采取的技术方案为：一种如上所述中药组合提取物在制备预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物中的应用。

作为本发明所述中药组合提取物在制备预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物中的应用的优选实施方式，所述药物为口服制剂、注射制剂或外用搽剂。

作为本发明所述中药组合提取物在制备预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物中的应用优选实施方式，所述口服制剂为片剂、胶囊、颗粒、滴丸、口服溶液剂或悬混剂。

作为本发明所述中药组合提取物在制备预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物中的应用优选实施方式，所述制备预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物中大黄、黄连和黄芩组合提取物的含量不低于10％。

最后，本发明还提供一种用于预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物，为实现此目的，本发明采取的技术方案为：一种用于预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物，所述药物含有上述所述中药组合提取物。

作为本发明用于预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物的优选实施方式，所述药物为口服制剂、注射制剂或外用搽剂；优选地，所述口服制剂为片剂、胶囊、颗粒、滴丸、口服溶液剂或悬混剂。

作为本发明用于预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物的优选实施方式，所述中药组合提取物在所述药物中的含量不低于10％。

本发明通过以下方法研究大黄、黄连及黄岑的中药组合提取物在由高血压诱导形成的血管疾病的作用，寻找其在由高血压诱导形成的血管疾病领域旧药新用的研究依据：

通过高效液相色谱仪对大黄、黄连及黄岑的中药组合提取物进行鉴定成分组成。

建立血管紧张素II(AngII)所致血管内皮细胞损伤模型，分析大黄、黄连和黄芩提取物对离体损伤血管内皮细胞的保护作用及相关的药理作用机制。模型组细胞中一氧化氮含量显著下降，NLRP3炎症小体相关蛋白表达含量和共定位水平明显上升，说明血管内皮细胞功能受损并处于炎症表达状态；而给予大黄、黄连和黄芩提取物治疗之后，细胞中一氧化氮含量恢复，NLRP3炎症小体相关蛋白表达含量和共定位水平明显降低。说明大黄、黄连和黄芩组合提取物具有恢复内皮细胞功能、抑制NLRP3炎症小体表达、NLRP3炎症小体激活的作用。

建立AngII联合醋酸脱氧皮质酮所致的血管损伤模型，分析大黄、黄连和黄芩提取物对在体动物损伤的血管保护作用。模型组血管中ZO-1和ZO-2蛋白表达明显下降，说明血管受损；而给予大黄、黄连和黄芩提取物治疗之后，血管中ZO-1和ZO-2蛋白表达显著回升。说明大黄、黄连和黄芩组合提取物具有恢复血管内连接蛋白的作用，进而表现出保护血管的药效。

本发明的有益效果在于：本发明公开了大黄、黄连及黄岑在制备预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物中的应用，开辟了大黄、黄连、黄岑作为药物的新用途，也为治疗或预防由高血压诱导形成的血管疾病提供新的途径，从而为由高血压诱导形成的血管疾病的治疗提供一种新的有效、安全、价廉的新型药物。并且大黄、黄连及黄岑为祖国传统中药，成本较低，副作用小，为由高血压诱导形成的血管疾病患者带来福音。

附图说明

图1为大黄、黄连和黄芩组合提取物高效液相色谱图。

图2为不同组合的大黄、黄连和黄芩组合提取物对血管内皮细胞中NO含量变化示意图。

图3为大黄、黄连和黄芩组合提取物对血管内皮细胞中Nlrp3蛋白表达示意图。

图4为大黄、黄连和黄芩组合提取物对血管内皮细胞中Caspase-1蛋白表达示图。

图5为大黄、黄连和黄芩组合提取物对血管内皮细胞中NLRP3炎症小体相关蛋白的共定位统计。

图6为大黄、黄连和黄芩组合提取物对动物血管中ZO-1和ZO-2蛋白的表达统计。

具体实施方式

为了更加简洁明了的展示本发明的技术方案、目的和优点，下面结合具体实施例以及附图对本发明做进一步的详细描述。

实施例1

(1)大黄、黄连和黄芩组合提取物的鉴定方法：

供试品溶液制备：取大黄2份，黄连1份，黄芩1份，加超纯水240ml，煎煮至约80ml。两层纱布滤过，滤液定容至100ml，精密移取500μl于10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，超声10min后放置室温，加甲醇补足至刻度，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

标准品溶液制备：对照品溶液的制备取黄芩苷、小檗碱、汉黄芩苷和芦荟大黄素对照品各10mg，精密称定，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得标准品溶液。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％H₃P0₄-甲醇为流动相；流速1.0ml/min；柱温30℃；检测波长为280nm，测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪。高效液相色谱结果如图1所示，其中A表示标准品HPLC图谱(1为黄芩苷；2为小檗碱；3为汉黄芩苷；4为芦荟大黄素)；B表示大黄、黄连和黄芩组合提取物HPLC图谱，说明组合提取物中含有黄芩苷、小檗碱、汉黄芩苷。

(2)制备大黄、黄连和黄芩不同比例组合提取物：

取大黄3份，黄连2份，黄芩2份，净选，除杂，低温干燥粉碎，加10倍水煎煮1小时。用200目过滤，滤渣再重复加热提取2次，合并三次水提液减压浓缩，喷雾干燥后粉碎过80目筛，即得组合提取物1号。

取大黄4份，黄连2份，黄芩2份，净选，除杂，低温干燥粉碎，加10倍水煎煮1小时。用200目过滤，滤渣再重复加热提取2次，合并三次水提液减压浓缩，喷雾干燥后粉碎过80目筛，即得组合提取物2号。

取黄连2份，黄芩2份，净选，除杂，低温干燥粉碎，加10倍水煎煮1小时。用200目过滤，滤渣再重复加热提取2次，合并三次水提液减压浓缩，喷雾干燥后粉碎过80目筛，即得组合提取物3号。

取大黄4份，黄连2份，净选，除杂，低温干燥粉碎，加10倍水煎煮1小时。用200目过滤，滤渣再重复加热提取2次，合并三次水提液减压浓缩，喷雾干燥后粉碎过80目筛，即得组合提取物4号。

取大黄4份，黄芩2份，净选，除杂，低温干燥粉碎，加10倍水煎煮1小时。用200目过滤，滤渣再重复加热提取2次，合并三次水提液减压浓缩，喷雾干燥后粉碎过80目筛，即得组合提取物5号。

(3)比较不同组合提取物(1-5号提取物)对血管内皮细胞中一氧化氮含量变化的影响：

材料和方法：将细胞均匀铺在96孔板内，待细胞的密度接近70-80％时，吸去旧的培养液。正常组加入完全培养基；模型组加入含有AngII的完全培养基；给药组加入AngII、不同组组合提取物；刺激24小时后用试剂盒检测上清液一氧化氮含量。

结果如图2所示，与正常组相比，模型组细胞内NO含量显著降低，在给予组合提取物1号和2号治疗之后，NO含量出现显著上升，其中2号上升幅度显著大于1号，说明大黄、黄连和黄芩4:2:2组合提取物效果更好；3,4,5号组合提取物NO含量变化不明显，说明只有大黄、黄连和黄芩三者组合才具有显著的治疗效果，且大黄、黄连和黄芩组合提取物的重量份为4:2:2效果最佳。

(4)大黄、黄连和黄芩组合提取物对血管内皮细胞中NLRP3炎症小体相关蛋白的影响：

材料和方法：将细胞均匀铺在六孔板内，待细胞的密度接近70-80％时，吸去旧的培养液。第一组加入完全培养基；模型组加入含有AngII的完全培养基；给药组加入AngII、大黄、黄连和黄芩比例为4:2:2的组合提取物；刺激24小时后用于提取细胞蛋白，使用蛋白免疫印迹方法检测Nlrp3和Caspase-1蛋白含量的变化。

结果如图3、4所示，与正常组相比，模型组细胞内Nlrp3和Caspase-1蛋白显著提升，在给予大黄、黄连和黄芩组合提取物治疗之后，Nlrp3和Caspase-1蛋白均显著下降；说明大黄、黄连和黄芩组合提取物具有抑制NLRP3炎症小体表达的作用。

(5)大黄、黄连和黄芩组合提取物对血管内皮细胞中NLRP3炎症小体相关蛋白的共定位影响：

材料和方法：将细胞均匀铺在confocal小皿中，第一组加入完全培养基；模型组加入含有AngII的完全培养基；给药组加入AngII和大黄、黄连和黄芩比例为4:2:2的组合提取物；刺激24小时后用4％多聚甲醛固定，孵育Nlrp3、ASC和Caspase-1的抗体，使用激光共聚焦其检测共定位的变化。

结果如图5所示，与正常组相比，模型组细胞内Nlrp3和ASC(图5A)、Nlrp3和Caspase-1(图5B)的共定位水平显著提升，在给予大黄、黄连和黄芩组合提取物治疗之后，Nlrp3和ASC、Nlrp3和Caspase-1的共定位水平均显著下降；说明大黄、黄连和黄芩组合提取物具有抑制NLRP3炎症小体激活的作用。

(6)大黄、黄连和黄芩组合提取物对动物血管的保护作用：

材料和方法：采用AngII联合醋酸脱氧皮质酮所致的小鼠血管损伤模型，设置假手术组、血管损伤组和给药组；模型成立后给药组灌胃给大黄、黄连和黄芩比例为4:2:2的组合提取物2周，假手术组和血管损伤组分别给予等体积的生理盐水。实验结束后处死动物，取小鼠心脏血管，冷冻包埋后切片，分别孵育ZO-1和VWF，ZO-2和VWF的抗体，使用激光共聚焦方法观察血管中ZO-1，ZO-2的表达。

结果如图6所示，与正常组相比，模型组血管中ZO-1(图6A)和ZO-2(图6B)的蛋白表达出现显著下降，在给予大黄、黄连和黄芩组合提取物治疗之后，ZO-1和ZO-2的蛋白表达量明显升高；说明大黄、黄连和黄芩组合提取物具有恢复血管内连接蛋白的作用，进而表现出保护血管的药效。

实施例2

取大黄，黄连和黄芩组合提取物为原料药，加入医学上可接受的辅料组成，制备成片剂。口服，其中每日用制剂量中大黄含3g，黄连每日用制剂量中含2g，黄芩每日用制剂量中含2g。口服，每日1～3次，每次1～3片。

实施例3

取大黄，黄连和黄芩组合提取物为原料药，加入医学上可接受的辅料组成，制备成片剂。口服，其中每日用制剂量中大黄含12g，黄连每日用制剂量中含6g，黄芩每日用制剂量中含6g。口服，每日3次，每次1片。

实施例4

取大黄，黄连和黄芩组合提取物为原料药，加入医学上可接受的辅料组成，制备成胶囊。口服，其中每日用制剂量中大黄含3g，黄连每日用制剂量中含2g，黄芩每日用制剂量中含2g。

实施例5

取大黄，黄连和黄芩组合提取物为原料药，加入医学上可接受的辅料组成，制备成胶囊。口服，其中每日用制剂量中大黄含12g，黄连每日用制剂量中含6g，黄芩每日用制剂量中含6g。

实施例6

取大黄，黄连和黄芩组合提取物为原料药，加入医学上可接受的辅料组成，制备成滴丸。口服，其中每日用制剂量中大黄含3g，黄连每日用制剂量中含2g，黄芩每日用制剂量中含2g。

实施例7

取大黄，黄连和黄芩组合提取物为原料药，加入医学上可接受的辅料组成，制备成滴丸。口服，其中每日用制剂量中大黄含12g，黄连每日用制剂量中含6g，黄芩每日用制剂量中含6g。

实施例8

取大黄，黄连和黄芩组合提取物为原料药，加入医学上可接受的辅料组成，制备成颗粒剂。口服，其中每日用制剂量中大黄含3g，黄连每日用制剂量中含2g，黄芩每日用制剂量中含2g。

实施例9

取大黄，黄连和黄芩组合提取物为原料药，加入医学上可接受的辅料组成，制备成颗粒剂。口服，其中每日用制剂量中大黄含12g，黄连每日用制剂量中含6g，黄芩每日用制剂量中含6g。

实施例10

取大黄，黄连和黄芩组合提取物为原料药，加入医学上可接受的辅料组成，制备成口服溶液剂。口服，其中每日用制剂量中大黄含3g，黄连每日用制剂量中含2g，黄芩每日用制剂量中含2g。

实施例11

取大黄，黄连和黄芩组合提取物为原料药，加入医学上可接受的辅料组成，制备成口服溶液剂。口服，其中每日用制剂量中大黄含12g，黄连每日用制剂量中含6g，黄芩每日用制剂量中含6g。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种中药组合提取物，其特征在于，所述中药组合提取物的制备原料包含以下重量份的组份：大黄3～4份，黄连2份，黄芩2份。

2.如权利要求1所述的中药组合提取物，其特征在于，所述中药组合提取物的制备原料包含以下重量份的组份：大黄4份，黄连2份，黄芩2份。

3.如权利要求1所述的中药组合提取物，其特征在于，所述中药组合提取物的制备方法包含以下步骤：

选取大黄、黄连、黄芩，洗净，除杂，低温干燥粉碎，加水煎煮，过滤，减压浓缩，喷雾干燥后粉碎过筛，即得中药组合提取物。

4.如权利要求1～3任一项所述的中药组合提取物在制备预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物中的应用。

5.如权利要求4所述的中药组合提取物在制备预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物中的应用，其特征在于，所述药物为口服制剂、注射制剂或外用搽剂。

6.如权利要求5所述的中药组合提取物在制备预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物中的应用，其特征在于，所述口服制剂为片剂、胶囊、颗粒、滴丸、口服溶液剂或悬混剂。

7.如权利要求5或6所述中药组合提取物在制备预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物中的应用，其特征在于，所述中药组合提取物在所述药物中的含量不低于10％。

8.一种用于预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物，其特征在于，所述药物含有如权利要求1～3任一项所述中药组合提取物。

9.如权利要求8所述的用于预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物，其特征在于，所述药物为口服制剂、注射制剂或外用搽剂；优选地，所述口服制剂为片剂、胶囊、颗粒、滴丸、口服溶液剂或悬混剂。

10.如权利要求8或9所述的用于预防或治疗由高血压诱导形成的血管疾病的药物，其特征在于，所述中药组合提取物在所述药物中的含量不低于10％。