CN102805836A - 一种治疗原发性肝癌的中药组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗原发性肝癌的中药组合物,该中药组合物所含的有效成分是选用半枝莲、蛇莓、龙葵、炙鳖甲、制半夏、猫爪草、郁金、虎杖、槲寄生、白术、茯苓、佛手、泽漆、女贞子制成。本发明的中药组合物可以是颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂或口服液,具有抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞衰老、凋亡和失巢凋亡的作用,可以用于原发性肝癌的治疗。本发明还公开了该中药组合物的制备方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种治疗原发性肝癌的中药组合物及其制备方法。
背景技术
原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,其起病隐匿,进展迅速,治疗效果欠佳,预后极差,素有“癌中之王”之称。当前原发性肝癌的治疗手段以早期手术为主,然而大多数肝癌患者就诊时已届中晚期,已无法手术;同时由于化疗与放疗效对肝癌不甚敏感,且有一定禁忌,而且肝癌靶向治疗疗效也有待提高,使得中医药治疗本病的方法受到关注。以辨证论治为基础的中医药治疗已广泛应用于肝癌手术、放疗、介入以及射频治疗等综合治疗中的各个环节,以及晚期肝癌的姑息治疗。由于肝癌的特殊性与复杂性,中医药治疗肝癌疗效在相当长一段时间内并没有实质性的突破,深化中医对肝癌的认识,研究具有明确疗效及作用特点的中药复方已成为当前之急。
肝癌临床表现虽然错综复杂,但不同患者的肝癌细胞都具有肿瘤细胞的基本生物学特性:无限增殖、生长信号自给自足、抗生长信号耐受、凋亡逃逸、自主血管生成、以及侵袭与转移等,肝癌细胞异常生命活动是抗癌药物研发的基础,以中药肿瘤生物学作用为基础进行配伍可以提高中药肝癌治疗疗效。本发明人从肿瘤生物学的角度出发,应用国外公认肿瘤模型,以肝癌细胞关键生命活动为靶点,经多年研究,发现了一种治疗原发性肝癌的药物,该药物具有抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞衰老、凋亡和失巢凋亡的作用,可以用于原发性肝癌的治疗。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于为原发性肝癌患者提供一种具有抑制肝癌增殖、促进肝癌细胞衰老、凋亡和失巢凋亡的治疗原发性肝癌的中药组合物,并提出该中药组合物的制备方法。
本发明为解决其技术问题而采用的技术方案是:一种治疗原发性肝癌的中药组合物,其创新点在于,它是由有效成分和药学上可以接受的载体组成,有效成分是由下列重量百分比的原料药制成的:半枝莲12-20%、蛇莓5-9%、龙葵5-8%、炙鳖甲9-15%、制半夏3-7%、猫爪草4-8%、郁金4-8%、虎杖5-15%、槲寄生4-8%、白术4-6%、茯苓5-8%、佛手3-6%、泽漆3-8%、女贞子4-8%。
优选地,本发明上述治疗原发性肝癌的中药组合物中,制备有效成分的原料药及其用量分别为:半枝莲13.1%、蛇莓6.5%、龙葵6.5%、炙鳖甲13.1%、制半夏5.2%、猫爪草6.5%、郁金6.5%、虎杖7.5%、槲寄生6.5%、白术5.2%、茯苓6.5%、佛手5.2%、泽漆6.5%、女贞子5.2%。
本发明中药组合物有效成分的制备具有如下三种方法:一是将全部原料药一起水煎,过滤,得到水提液。二是将全部原料药用60-95%的乙醇回流提取,回收乙醇制得醇提物。三是将炙鳖甲和茯苓研成细粉,过80目筛;将佛手和郁金提取挥发油和水煎液;将虎杖和槲寄生粉碎成粗粉,60-80%乙醇渗漉法提取;其余药材水提后浓缩至1-2g/ml,加95%乙醇,沉淀,取上清液;上清液与渗漉法合并,回收乙醇后再与佛手和郁金的水煎液合并,浓缩成浸膏,然后混合上述细粉和挥发油。
本发明中药组合物的制备过程并无特别之处,只需将前述有效成分和药学上可以接受的辅料按照通常方法制成各种常用剂型即可,如颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂或口服液等。
随后的试验例将证明,本发明中药组合物(以下称莲莓方)具有清热解毒、软坚散结、疏肝健脾的功效,这一类药物的合理应用切中了肝癌发病的关键病理环节,具有抑制肝癌增殖、促进肝癌细胞衰老、凋亡和失巢凋亡的作用,充分发挥了传统中医药的优势,从而达到治疗原发性肝癌的目的。
附图说明
图1莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞增殖作用效果效果图(A为莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞增殖的作用,B为莲莓方对人肝正常细胞HL-7702细胞增殖的作用)。
图2莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞悬浮生长作用效果图。
图3莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞凋亡和失巢凋亡作用效果图(A为流式细胞仪检测代表性图片,a-d为贴壁生长Bel-7402细胞,e-h为悬浮生长Bel-7402细胞,a、e为对照组,b、f为50μg/ml莲莓方组,c、g为100μg/ml莲莓方组,d、h为200μg/ml莲莓方组;B为细胞凋亡率统计)。
图4莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞衰老作用效果图(A、B为相差显微镜图片(×200倍),C、D为细胞衰老相关半乳糖苷酶染色图片(×400倍),A、C为对照组,B、D为莲莓方组)。
图5莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞p21表达作用效果图。
图6莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞裸鼠移植瘤生长作用效果图。
图7莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞裸鼠移植瘤细胞凋亡和细胞衰老作用效果图〔A中a-c为采用细胞衰老相关半乳糖苷酶染色染色法检测细胞衰老图片(×1000倍),d-f为采用TUNNEL法检测细胞凋亡图片(×200倍),a、d为对照组,b、e为阿霉素组,c、f为莲莓方组;B为高倍视野下细胞衰老数统计;C为高倍视野下细胞凋亡数统计〕。
具体实施方式
下面通过试验例进一步阐述本发明所述药物(以下简称“莲莓方,LMF”)的有益效果。
试验例1(莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞增殖作用)
实验结果如图1所示,图1A表示采用CCK-8法检测莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞增殖的作用,图1B表示采用CCK-8法检测莲莓方对人肝正常细胞HL-7702细胞增殖的作用;结果表明终浓度25μg/ml-400μg/ml莲莓方可以抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖,呈剂量依赖性和时间依赖性,与对照组比较差异显著;终浓度25μg/ml-400μg/ml莲莓方不影响人肝正常细胞HL-7702细胞增殖。
试验例2(莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞悬浮生长作用)
实验结果如图2所示,采用poly-HEMA包被细胞培养板,CCK-8法检测莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞贴壁及悬浮生长的作用;结果表明终浓度50μg/ml-200μg/ml莲莓方作用24小时可以抑制人肝癌Bel-7402细胞贴壁及悬浮生长,呈剂量依赖性和时间依赖性,与对照组比较差异显著。
试验例3(莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞凋亡和失巢凋亡作用)
实验结果如图3所示,采用poly-HEMA包被细胞培养板,流式细胞仪检测莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞凋亡(贴壁)及失巢凋亡(悬浮)作用,图3A表示流式细胞仪检测代表性图片,a-d为贴壁生长Bel-7402细胞检测,e-h为悬浮生长Bel-7402细胞检测,a、e为对照组,b、f为50μg/ml莲莓方组,c、g为100μg/ml莲莓方组,d、h为200μg/ml莲莓方组;图3B表示细胞凋亡率统计。结果表明终浓度50μg/ml-200μg/ml莲莓方作用24小时可以促人肝癌Bel-7402细胞凋亡和失巢凋亡,呈剂量依赖性和时间依赖性,与对照组比较差异显著。
试验例4(莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞衰老作用)
实验结果如图4所示,图4A、B表示相差显微镜图片(×200倍),图4C、D表示细胞衰老相关半乳糖苷酶染色图片(×400倍),A、C为对照组,B、D为莲莓方组;结果表明终浓度100μg/ml莲莓方作用120小时后,人肝癌Bel-7402细胞部分死亡、脱落,细胞形态变得大而扁平,细胞衰老相关半乳糖苷酶染色阳性,提示莲莓方可以促人肝癌Bel-7402细胞衰老。
试验例5(莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞p21表达作用)
实验结果如图5所示,采用western blot方法检测莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞p21表达作用;结果表明终浓度50μg/ml-200μg/ml莲莓方作用作用24小时后,人肝癌Bel-7402细胞p21蛋白表达上调,提示莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞凋亡、失巢凋亡、细胞衰老作用可能与上调p21蛋白表达相关。
试验例6(莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞裸鼠移植瘤生长作用)
实验结果如图6所示,采用BALB/c裸鼠移植瘤模型观察莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞裸鼠移植瘤生长作用;结果表明人鼠等效剂量莲莓方治疗21天可以抑制人肝癌Bel-7402细胞裸鼠移植瘤生长,莲莓方组肿瘤体积、质量与对照组相比差异显著,与1mg/kg阿霉素比较无显著差异。
试验例7(莲莓方对人肝癌Bel-7402细胞裸鼠移植瘤细胞衰老和凋亡作用)
实验结果如图7所示,图A中a-c是采用细胞衰老相关半乳糖苷酶染色染色法检测细胞(×1000倍),图A中d-f是采用TUNNEL法检测细胞凋亡(×200倍),a、d为对照组,b、e为阿霉素组,c、f为莲莓方组;图7B表示高倍视野下细胞衰老数统计,图7C表示高倍视野下细胞凋亡数统计。结果表明莲莓方在体内可以促人肝癌Bel-7402细胞衰老、细胞凋亡,与对照组比较差异显著;莲莓方促人肝癌Bel-7402细胞衰老作用较阿霉素作用强,莲莓方促人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用较阿霉素作用弱,统计比较差异显著。
实施例1(颗粒剂的制备)
称取下列重量的原料:半枝莲90克、蛇莓45克、龙葵45克、炙鳖甲90克、制半夏36克、猫爪草45克、郁金45克、虎杖45克、槲寄生45克、白术36克、茯苓45克、佛手36克、泽漆45克、女贞子36克;将上述原料中炙鳖甲和茯苓研成细粉,过80目筛;将佛手和郁金提取挥发油和水煎液;将虎杖和槲寄生粉碎成粗粉,60-80%乙醇渗漉法提取;其余药材水提后浓缩至1-2g/ml,加95%乙醇,沉淀,取上清液;上清液与渗漉法合并,回收乙醇后再与佛手和郁金的水煎液合并,浓缩成浸膏,干燥,粉碎得浸膏粉,浸膏粉与上述细粉,适量淀粉浆,混合,湿法制粒,喷入挥发油,低温干燥,整粒,成颗粒剂。
实施例2(胶囊剂的制备)
称取下列重量的原料药:半枝莲120克、蛇莓45克、龙葵45克、炙鳖甲90克、制半夏30克、猫爪草30克、郁金45克、虎杖45克、槲寄生45克、白术36克、茯苓45克、佛手27克、泽漆45克、女贞子36克;将上述原料中炙鳖甲和茯苓研成细粉,过80目筛;将佛手和郁金提取挥发油和水煎液;将虎杖和槲寄生粉碎成粗粉,60-80%乙醇渗漉法提取;其余药材水提后浓缩至1-2g/ml,加95%乙醇,沉淀,取上清液;上清液与渗漉法合并,回收乙醇后再与佛手和郁金的水煎液合并,浓缩成浸膏,干燥,粉碎得浸膏粉,浸膏粉与上述细粉,适量淀粉浆,混合,湿法制粒,喷入挥发油,低温干燥,整粒,装入胶囊,制成。
实施例3(片剂的制备)
称取下列重量的原料药:半枝莲90克、蛇莓45克、龙葵45克、炙鳖甲60克、制半夏30克、猫爪草30克、郁金45克、虎杖45克、槲寄生45克、白术36克、茯苓45克、佛手27克、泽漆27克、女贞子45克;将上述原料中炙鳖甲和茯苓研成细粉,过80目筛;将佛手和郁金提取挥发油和水煎液;将虎杖和槲寄生粉碎成粗粉,60-80%乙醇渗漉法提取;其余药材水提后浓缩至1-2g/ml,加95%乙醇,沉淀,取上清液;上清液与渗漉法合并,回收乙醇后再与佛手和郁金的水煎液合并,浓缩成浸膏,然后混合上述细粉、挥发油得,加微晶纤维素,乳糖,硬脂酸镁,制成颗粒,压片,包衣,即得。
实施例4(丸剂的制备)
称取下列重量的原料药:半枝莲90克、蛇莓45克、龙葵45克、炙鳖甲90克、制半夏36克、猫爪草45克、郁金45克、虎杖45克、槲寄生45克、白术36克、茯苓45克、佛手36克、泽漆45克、女贞子36克;将上述原料中炙鳖甲和茯苓研成细粉,过80目筛;将佛手和郁金提取挥发油和水煎液;将虎杖和槲寄生粉碎成粗粉,60-80%乙醇渗漉法提取;其余药材水提后浓缩至1-2g/ml,加95%乙醇,沉淀,取上清液;上清液与渗漉法合并,回收乙醇后再与佛手和郁金的水煎液合并,浓缩成浸膏,然后混合上述细粉、挥发油后,再加入适量淀粉混合,制成湿度适宜、粘性适中的可塑性软材,通过螺旋推进的挤压方式将物料挤出成软硬适度的丸条,再进入制丸刀具中,经过快速切搓制成大小均匀、直径约3mm的药丸,即得。
实施例5(口服液的制备)
称取下列重量的原料药:半枝莲105克、蛇莓45克、龙葵45克、炙鳖甲105克、制半夏45克、猫爪草30克、郁金45克、虎杖90克、槲寄生45克、白术36克、茯苓45克、佛手27克、泽漆27克、女贞子45克;将上述原料水煎两次,过滤,合并滤液,浓缩,加入乳化剂、甜味剂和稀释剂水制成口服液。
Claims (4)
1.一种治疗原发性肝癌的中药组合物,其特征在于,它是由有效成分和药学上可以接受的载体组成,有效成分是由下列重量百分比的原料药制成的:半枝莲12-20%、蛇莓5-9%、龙葵5-8%、炙鳖甲9-15%、制半夏3-7%、猫爪草4-8%、郁金4-8%、虎杖5-15%、槲寄生4-8%、白术4-6%、茯苓5-8%、佛手3-6%、泽漆3-8%、女贞子4-8%。
2.按照权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,原料药及其用量为:半枝莲13.1%、蛇莓6.5%、龙葵6.5%、炙鳖甲13.1%、制半夏5.2%、猫爪草6.5%、郁金6.5%、虎杖7.5%、槲寄生6.5%、白术5.2%、茯苓6.5%、佛手5.2%、泽漆6.5%、女贞子5.2%。
3.按照权利要求1或2所述的中药组合物,其特征在于,它是颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂或口服液。
4.权利要求3所述的中药组合物的制备方法,其特征是,包括如下步骤:将炙鳖甲和茯苓研成细粉,过80目筛;将佛手和郁金提取挥发油和水煎液;将虎杖和槲寄生粉碎成粗粉,60-80%乙醇渗漉法提取;其余原料药水提后浓缩至1-2g/ml,加95%乙醇,沉淀,取上清液;上清液与渗漉法合并,回收乙醇后再与佛手和郁金的水煎液合并,浓缩成浸膏,然后混合上述细粉和挥发油得到有效成分;有效成分和药学上可以接受的辅料按照通常方法制成颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂或口服液。
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