CN108290892A - 一种取代的黄嘌呤及其药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种取代的黄嘌呤及其药物组合物，所述取代的黄嘌呤如为式（1）所示的化合物，或其多晶型、药学上可接受的盐、前药、立体异构体、同位素变体、水合物或溶剂化合物。本发明的化合物具有更好的二肽基肽酶抑制活性，具有更好药效学/药代动力学性能，化合物的适用性好、安全性高，可用于制备治疗与二肽基肽酶‑IV相关疾病的药物。

Description

一种取代的黄嘌呤及其药物组合物 技术领域
本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种取代的黄嘌呤及其药物组合物，其可用于治疗二肽基肽酶介导的相关疾病。
背景技术
二肽基肽酶IV(DPP-IV)是一种II型膜蛋白，作为一种非经典丝氨酸氨基二肽酶，它从多肽和蛋白质的氨基末端(N-末端)除去Xaa-Pro二肽。有些天然存在的肽也已报道有X-Gly或X-Ser型二肽的DPP-IV依赖性缓慢释放。
DPP-IV在多种不同组织(肠、肝、肾和胎盘)的上皮与内皮细胞上被组成型表达，也见于体液中。DPP-IV也在循环中的T-淋巴细胞上被表达，已经显示与细胞-表面抗原CD-26是同义的。DPP-IV负责体内某些内源性肽(GLP-1(7-36)，高血糖素)的代谢性裂解，并且已经证明有体外对抗多种其他肽(GHRH，NPY，GLP-2，VIP)的蛋白分解活性。
GLP-1(7-36)是一种29个氨基酸的肽，由前高血糖素在小肠中的翻译后加工衍生而来。GLP-1(7-36)具有多种体内作用，包括胰岛素分泌的刺激、高血糖素分泌的抑制、饱满感的促进和胃排空的延缓。基于它的生理学行为，相信GLP-1(7-36)的作用有益于预防和治疗II型糖尿病，可能还有肥胖。例如，已经发现GLP-1(7-36)在糖尿病患者中的外源性给药(连续输注)对这种患者群是有效的。不幸地，GLP-1(7-36)体内迅速降解，已经显示具有很短的体内半衰期(t1/2)。
基于遗传培育DPP-IV剔除小鼠的研究和选择性DPP-IV抑制剂的体内/体外研究，已经显示DPP-IV是体内GLP-1(7-36)的主要降解酶。GLP-1(7-36)被DPP-IV高效降解为GLP-1(9-36)，后者被推测充当GLP-1(7-36)的生理拮抗剂。因此相信体内抑制DPP-IV可用于加强内源性GLP-1(7-36)水平和减弱其拮抗剂GLP-1(9-36)的生成。因而，相信DPP-IV抑制剂是可用于预防、延迟其进展和/或治疗由DPP-IV介导的病症的药物，具体的说是糖尿病，更具体的说是II型糖尿病、糖尿病性脂血异常、葡萄糖耐量减低(IGT)症、禁食血浆葡萄糖减低(IFG)症、代谢性酸中毒、酮症、食欲调节和肥胖。
因此，本领域仍需要开发对二肽基肽酶有抑制活性或更好药效学性能的DPP-IV抑制剂。
发明内容
针对以上技术问题，本发明公开了一种二肽基肽酶抑制剂、药物组合物及其应用，其具有更好的二肽基肽酶抑制活性和/或具有更好药效学/药代动力学性能。
对此，本发明采用的技术方案为：
一种二肽基肽酶抑制剂，如式(1)所示取代的黄嘌呤，或其多晶型、药学上可接受的盐、前药、立体异构体、同位素变体、水合物或溶剂化合物，
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25和R26各自独立地为氢、氘、卤素或三氟甲基；
附加条件是R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26中至少一个是氘代的或氘。
作为本发明的进一步改进，R1、R2和R3各自独立地为氘或氢。
作为本发明的进一步改进，R4和R5各自独立地为氘或氢。
作为本发明的进一步改进，R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14各自独立地为氘或氢。
作为本发明的进一步改进，R15、R16、R17和R18为氘。
作为本发明的进一步改进，R19、R20和R21各自独立地为氘或氢。
作为本发明的进一步改进，R22和R23各自独立地为氘或氢。
作为本发明的进一步改进，R24、R25和R26各自独立地为氘或氢。
作为本发明的进一步改进，所述化合物可选自下述化合物或其药学上可接受的盐， 但不局限于下列化合物：
采用此技术方案，氘在药物分子中的形状和体积与氢基本上相同，如果药物分子中氢被选择性替换为氘，氘代药物一般还会保留原来的生物活性和选择性。同时发明人经过实验证实，碳氘键的结合比碳氢键的结合更稳定，可直接影响一些药物的吸收、分布、代谢和排泄等属性，从而提高药物的疗效、安全性和耐受性。
优选的，氘在氘代位置的氘同位素含量至少是大于天然氘同位素含量(0.015％)，较佳地大于30％，更佳地大于50％，更佳地大于75％，更佳地大于95％，更佳地大于99％。
具体地说，在本发明中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25和R26各氘代位置中氘同位素含量至少是5％，较佳地大于10％，更佳地大于15％，更佳地大于20％，更佳地大于25％，更佳地大于30％，更佳地大于35％，更佳地大于40％，更佳地大于45％，更佳地大于50％，更佳地大于55％，更佳地大于60％，更佳地大于65％，更佳地大于70％，更佳地大于75％，更佳地大于80％，更佳地大于85％，更佳地大于90％，更佳地大于95％，更佳地大于99％。
在另一优选例中，所述化合物不包括非氘代化合物。
本发明还公开了一种药物组合物，其含有药学上可接受的载体和如上所述的所述的二肽基肽酶抑制剂，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物、立体异构体、前药或同位素变体的药物组合物。
作为本发明的进一步改进，所述药学上可接受的载体包括助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、矫味增强剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、崩解剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂中的至少一种。
作为本发明的进一步改进，所述药物组合物为片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球或气溶胶。
给予本发明药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、透黏膜、经肠给药，或者局部、经皮、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。优选口服给药或注射给药。
本发明的药物组合物可以采用本领域周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等。
本发明还提供了一种制备药物组合物的方法，包括步骤：将药学上可接受的载体与如上所述的二肽基肽酶抑制剂，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物进行混合，形成药物组合物。
本发明化合物具有二肽基肽酶酶抑制活性，因此预期其适用作治疗罹患通过抑制二肽基肽酶或通过增加其肽底物含量而得以治疗的疾病或病症的患者的治疗剂。因此，本发明的一个方面涉及一种治疗罹患通过抑制二肽基肽酶而得以治疗的疾病或病症的患者的方法，其包含向患者投与治疗有效量的本发明化合物。本发明的另一方面涉及一种治疗心血管疾病的方法，其包含向患者投与治疗有效量的本发明化合物。本发明的另一方面涉及一种治疗高血方面涉及一种抑制哺乳动物中的二肽基肽酶的方法，其包含向所述哺乳动物投与二肽基肽酶抑制量的本发明化合物。
本发明还公开了一种如上所述的取代的黄嘌呤作为二肽基肽酶抑制剂的用途，即本发明化合物可有利地适用作治疗如II型糖尿病的病状的治疗剂。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
本文中，如无特别说明，“卤素”指F、Cl、Br、和I。更佳地，卤原子选自F、Cl和Br。
本文中，如无特别说明，“氘代”指化合物或基团中的一个或多个氢被氘所取代；氘代可以是一取代、二取代、多取代或全取代。术语“一个或多个氘代的”与“一次或多次氘代”可互换使用。
本文中，如无特别说明，“非氘代的化合物”是指含氘原子比例不高于天然氘同位素含量(0.015％)的化合物。
本发明还包括同位素标记的化合物(也称为“同位素变体”)，等同于原始化合物在此公开。可以列为本发明的化合物同位素的例子包括氢，碳，氮，氧，磷，硫，氟和氯同位素，分别如2H，3H，13C，14C，15N，17O，18O，31P，32P，35S，18F以及36Cl。其中含有上述同位素或其他同位素原子的本发明的式(I)的化合物或其多晶型、药学上可接受的盐、前药、立体异构体、同位素变体、水合物或溶剂合物都在本发明的范围之内。本发明中某些同位素标记化合物，例如3H和14C的放射性同位素也在其中，在药物和底物的组织分布实验中是有用的。氚，即3H和碳-14，即14C，它们的制备和检测比较容易，是同位素中的首选。此外，较重同位素取代如氘，即2H，由于其很好的代谢稳定性在某些疗法中有优势，例如在体内增加半衰期或减少用量，因此，在某些情况下可以优先考虑。同位素标记的化合物可以用一般的方法，通过用易得的同位素标记试剂替换为非同位素的试剂，用示例中的方案可以制备。
药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸；甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸等有机酸；以及脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸。另一类优选的盐是本发明化合物与碱形成的盐，例如碱金属盐(例如钠盐或钾盐)、碱土金属盐(例如镁盐或钙盐)、铵盐(如低级的烷醇铵盐以及其它药学上可接受的胺盐)，例如甲胺盐、乙胺盐、丙胺盐、二甲基胺盐、三甲基胺盐、二乙基胺盐、三乙基胺盐、叔丁基胺盐、乙二胺盐、羟乙胺盐、二羟乙胺盐、三羟乙胺盐，以及分别由吗啉、哌嗪、赖氨酸形成的胺盐。
术语“多晶型”是指化学药物分子的不同排列方式，一般表现为药物原料在固体状态下的存在形式。一种药物可以多种晶型物质状态存在，同一种药物的不同晶型，在体内的溶解和吸收可能不同，从而会对制剂的溶出和释放产生影响。
术语“溶剂合物”指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。“水合物”是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。
术语“前药”是指在体内通过例如在血液中水解转变成其具有医学效应的活性形式的化合物。前药为任何共价键合的载体，当将这种前药给予患者时，其在体内释放本发明化合物。通常通过修饰官能团来制备前药，该修饰使得前药在体内裂解产生母体 化合物。前药包括，例如，其中羟基、氨基或巯基与任意基团键合的本发明化合物，当将其给予患者时，可以裂解形成羟基、氨基或巯基。因此，前药的代表性实例包括但不限于，本发明化合物通过其中的羟基、氨基或巯基官能团与乙酸、甲酸或苯甲酸形成的共价衍生物。另外，在羧酸(-COOH)的情况下，可以使用酯，例如甲酯、乙酯等。酯本身可以是有活性的和/或可以在人体体内条件下水解。合适的药学上可接受的体内可水解的酯包括容易在人体中分解而释放母体酸或其盐的那些。
本发明化合物可包括一个或多个不对称中心，且因此可以存在多种“立体异构体”形式，例如，对映异构体和/或非对映异构体形式。例如，本发明化合物可为单独的对映异构体、非对映异构体或几何异构体(例如顺式和反式异构体)，或者可为立体异构体的混合物的形式，包括外消旋混合物和富含一种或多种立体异构体的混合物。异构体可通过本领域技术人员已知的方法从混合物中分离，所述方法包括：手性高压液相色谱法(HPLC)以及手性盐的形成和结晶；或者优选的异构体可通过不对称合成来制备。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明的化合物对二肽基肽酶具有优异的抑制性；通过氘化这一技术改变化合物在生物体中的代谢，使化合物具有更好的药代动力学参数特性。在这种情况下，可以改变剂量并形成长效制剂，改善适用性；用氘取代化合物中的氢原子，由于其氘同位素效应，提高化合物在动物体内的药物浓度，提高了药物疗效；用氘取代化合物中的氢原子，可以抑制某些代谢产物，提高了化合物的安全性。
具体实施方式
下面更具体地描述本发明式(1)结构化合物的制备方法，但这些具体方法不对本发明构成任何限制。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便地制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易地进行。
实施例1 制备(R)-8-(3-氨基哌啶-1-基)-3-甲基-1-[(4-甲基-6,8-d2-喹唑啉-2-基)甲 基]-7-(2-丁炔-1-基)黄嘌呤(化合物L-1)
具体合成步骤如下：
步骤一：3,5-d2-2-氨基苯乙酮(化合物2)的合成。
向反应瓶中加入化合物邻氨基苯乙酮(500mg，3.7mmol)，氘代盐酸(0.3mL，3.7mmol，12mmol)，加入重水14mL，微波加热至180℃反应1小时，冷却至室温，有白色固体析出，过滤，滤饼用少量水和乙醇洗涤，真空干燥得到240mg化合物2，收率46.3％。
步骤二：2-氯甲基-4-甲基-6,8-d2-喹唑啉(化合物3)的合成。
向反应瓶中加入化合物2(240mg，1.71mmol)，加入氯乙腈(133mg，1.76mmol)加入二氧六环30mL溶解，室温下通入HCl气体1小时，然后室温反应18小时，薄层色谱(TLC)检测原料反应完全，浓缩反应液，柱层析纯化后得到450mg化合物3的粗品，直接用于下一步反应，不进一步纯化，LC-MS(APCI):m/z＝195(M+1)+。
步骤三：8-溴-7-(2-丁炔-1-基)-3-甲基黄嘌呤(化合物6)的合成。
向反应瓶中加入8-溴-3-甲基黄嘌呤(2.4g，10mmol)，N，N-二异丙基乙胺(DIPEA，2.77mL，13mmol)加入DMF 40mL，加入1-溴-2-丁炔(1mL，12mmol)，室温反应18小时，有白色固体生成，TLC检测原料反应完全，过滤，滤饼用水和乙醇洗涤，真空干燥得到2.13g化合物6，收率78％，LC-MS(APCI):m/z＝297(M+1)+，1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.32(s,1H),5.03(d,J＝2.4Hz,2H),3.29(s,3H),1.78(t,J＝2.3Hz,3H)。
步骤四：8-溴-7-(2-丁炔-1-基)-3-甲基-1-[(4-甲基-6,8-d2-喹唑啉-2-基)甲基]黄嘌呤(化合物7)的合成。
向反应瓶中加入化合物6(534mg，1.8mmol)，碳酸钠(228mg，2.16mmol)，加入化合物3的粗品(450mg，2.34mmol)，加入DMF(40mL)。升温至80℃反应18小时，TLC检测原料反应完全，向反应瓶中加入水80mL，用二氯甲烷萃取2次，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析纯化后得到330mg化合物7，收率72.8％，LC-MS(APCI):m/z＝454(M+1)+。
步骤五：(R)-8-(3-叔丁氧羰基氨基哌啶-1-基)-3-甲基-1-[(4-甲基-6,8-d2-喹唑啉-2-基)甲基]-7-(2-丁炔-1-基)黄嘌呤(化合物9)的合成。
向反应瓶中加入化合物7(330mg，724mmol)，化合物8(348mg，1.74mmol)，碳酸氢钠(170mg，2.03mmol)加入乙醇20mL，升温至100℃，反应4小时，TLC检测TLC检测原料反应完全，浓缩除去乙醇，加入水和乙酸乙酯，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和氯化钠洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析纯化后得到370mg化合物9，收率88.9％，LC-MS(APCI):m/z＝475(M-100)+。
步骤六：(R)-8-(3-氨基哌啶-1-基)-3-甲基-1-[(4-甲基-6,8-d2-喹唑啉-2-基)甲基]-7-(2-丁炔-1-基)黄嘌呤(L-1)的合成。
向反应瓶中加入化合物9(370mg，0.644mmol)，加入5mL乙醇溶解，向反应瓶中加入盐酸-二氧六环8mL，室温反应5小时，TLC检测原料反应完全，柱层析纯化后得到136mg目标化合物，收率37.7％，LC-MS(APCI):m/z＝475(M+1)+，1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.03(s,1H),7.78(s,1H),5.58(s,2H),4.92(s,2H),3.71(d,J＝11.9Hz,1H),3.58(s,4H),3.19-3.09(m,2H),3.02-2.96(m,1H),2.91(s,3H),2.03(d,J＝19.2Hz,1H),1.90(s,1H),1.76(s,4H),1.43(d,J＝9.7Hz,1H)。
实施例2
对以上实施例的化合物进行生物活性评价。
(1)蛋白酶抑制活性测试
借助本领域普通技术人员已知的方法可以容易地测定DPP-IV抑制剂的蛋白酶抑制活性，因为适合于测量蛋白酶活性和供试化合物的抑制作用的体外测定法是已知的。可以用于测量蛋白酶抑制活性和选择性的测定法实例如下所述。
①DPP-IV测定法。
在二甲基亚砜中制备不同浓度(最终浓度≤10mM)的供试化合物溶液，然后稀释在测定缓冲液中，其中包含：20mM Tris，pH 7.4、20mM KCl和0.1mg/mL BSA。向 稀释液加入人DPP-IV(最终浓度0.1nM)，在环境温度下预温育10分钟，然后用A-P-7-羧酰氨基-4-三氟甲基香豆素(AP-AFC；最终浓度10μM)引发反应。反应混合物的总体积为10-100μL，这依赖于所使用的测定格式(384或96孔平板)。动态监测反应(激发λ＝400nm；发射λ＝505nm)达5-10分钟，或者10分钟后测量终点。利用标准数学模型，从酶过程曲线计算抑制常数。
②FAPα测定法。
在二甲基亚砜中制备不同浓度(最终浓度≤10mM)的供试化合物溶液，然后稀释在测定缓冲液中，其中包含：20mM Tris，pH 7.4；20mM KCl和0.1mg/mL BSA。向稀释液加入人FAPα(最终浓度2nM)，在环境温度下预温育10分钟，然后用A-P-7-羧酰氨基-4-三氟甲基香豆素(AP-AFC；最终浓度40μM)引发反应。反应混合物的总体积为10-100μL，这依赖于所使用的测定格式(384或96孔平板)。动态监测反应(激发λ＝400nm；发射λ＝505nm)达5-10分钟，或者10分钟后测量终点。利用标准数学模型，从酶过程曲线计算抑制常数。
③PREP测定法。
在二甲基亚砜中制备不同浓度(最终浓度≤10mM)的供试化合物溶液，然后稀释在测定缓冲液中，其中包含：20mM磷酸钠，pH7.4、0.5mM EDTA、0.5mM DTT和0.1mg/mL BSA。向稀释液加入PREP(EC 3.4.21.26，来自脑膜脓毒性金黄杆菌，最终浓度0.2nM)。将PRE和化合物在环境温度下预温育10分钟，然后用Z-G-P-AMC(最终浓度10μM)引发反应。反应混合物的总体积为10-100μL，这依赖于所使用的测定格式(384或96孔平板)。动态监测反应(激发λ＝375发射λ＝460达5-10分钟，或者10分钟后测量终点。用标准数学模型，从酶过程曲线计算抑制常数。
④类胰蛋白酶测定法。
在二甲基亚砜中制备不同浓度(最终浓度≤10mM)的供试化合物溶液，然后稀释在测定缓冲液中，其中包含：100mM Hepes，pH7.4、0.01％Brij35和10％甘油。向稀释液加入类胰蛋白酶(rhLungβ，最终浓度0.1nM)，与化合物在环境温度下预温育10分钟。用25μMZ-lys-SBzl和400μM DTNB引发酶反应。反应混合物的总体积为100μL，在Costar A/296孔平板中进行。比色监测反应(λ＝405nm)达10分钟。用标准数学模型，从酶过程曲线计算抑制常数。
按照上述测定法测试本发明化合物的蛋白酶抑制作用，观察到表现出选择性 DPP-IV抑制活性。本发明化合物对DPP-IV的表观抑制常数(Ki)在约10-9M至约10-5M的范围内。
(2)代谢稳定性评价。
微粒体实验：人肝微粒体：0.5mg/mL，Xenotech；大鼠肝微粒体：0.5mg/mL，Xenotech；辅酶(NADPH/NADH)：1mM，Sigma Life Science；氯化镁：5mM，100mM磷酸盐缓冲剂(pH为7.4)。
储备液的配制：精密称取一定量的实施例化合物粉末，并用DMSO分别溶解至5mM。
磷酸盐缓冲液(100mM，pH7.4)的配制：取预先配好的0.5M磷酸二氢钾150mL和700mL的0.5M磷酸氢二钾溶液混合，再用0.5M磷酸氢二钾溶液调节混合液pH值至7.4，使用前用超纯水稀释5倍，加入氯化镁，得到磷酸盐缓冲液(100mM)，其中含100mM磷酸钾，3.3mM氯化镁，pH为7.4。
配制NADPH再生系统溶液(含有6.5mM NADP，16.5mM G-6-P，3U/mL G-6-P D，3.3mM氯化镁)，使用前置于湿冰上。
配制终止液：含有50ng/mL盐酸普萘洛尔和200ng/mL甲苯磺丁脲(内标)的乙腈溶液。取25057.5μL磷酸盐缓冲液(pH7.4)至50mL离心管中，分别加入812.5μL人肝微粒体，混匀，得到蛋白浓度为0.625mg/mL的肝微粒体稀释液。取25057.5μL磷酸盐缓冲液(pH7.4)至50mL离心管中，分别加入812.5μL SD大鼠肝微粒体，混匀，得到蛋白浓度为0.625mg/mL的肝微粒体稀释液。
样品的孵育：用含70％乙腈的水溶液将相应化合物的储备液分别稀释至0.25mM，作为工作液，备用。分别取398μL的人肝微粒体或者大鼠肝微粒体稀释液加入96孔孵育板中(N＝2)，分别加入2μL 0.25mM的的工作液中，混匀。
代谢稳定性的测定：在96孔深孔板的每孔中加入300μL预冷的终止液，并置于冰上，作为终止板。将96孔孵育板和NADPH再生系统置于37℃水浴箱中，100转/分钟震荡，预孵5min。从孵育板每孔取出80μL孵育液加入终止板，混匀，补充20μL NADPH再生系统溶液，作为0min样品。再向孵育板每孔加入80μL的NADPH再生系统溶液，启动反应，开始计时。相应化合物的反应浓度为1μM，蛋白浓度为0.5mg/mL。分别于反应10、30、90min时，各取100μL反应液，加入终止板中，涡旋3min终止反应。将终止板于5000×g，4℃条件下离心10min。取100μL上清液至预 先加入100μL蒸馏水的96孔板中，混匀，采用LC-MS/MS进行样品分析。
数据分析：通过LC-MS/MS系统检测相应化合物及内标的峰面积，计算化合物与内标峰面积比值。通过化合物剩余量的百分率的自然对数与时间作图测得斜率，并根据以下公式计算t1/2和CLint，其中V/M即等于1/蛋白浓度。
对本发明化合物及其没有氘代的化合物同时测验比较，评价其在人、大鼠和小鼠肝微粒体的代谢稳定性。作为代谢稳定性的指标的半衰期及肝固有清除率如表1所示。表1中采用未经氘代的化合物Linagliptin作为对照样品。如表1所示，通过与未经氘代的化合物Linagliptin对照，本发明化合物可以具有优异的代谢稳定性。
表1 实施例1的化合物L-1与Linagliptin对照样的代谢稳定性对比表
(3)大鼠药代动力学实验
实验目的：研究大鼠给予Linaglipitin、实施例化合物后，考察本发明化合物的药代动力学行为。
实验动物：
种类及品系：SD大鼠等级：SPF级
性别及数量：雄性，6只
体重范围：180～220g(实际体重范围为187～197g)
来源：上海西普尔必凯实验动物有限公司
实验及动物合格证号：SCXK(沪)2013-0016。
实验过程：
在血样采集之前，预先在EDTA-K2抗凝管中加入20L的2M氟化钠溶液(酯酶抑制剂)，于80度烘箱内烘干后，置于4度冰箱存放。
大鼠，雄性，体重187～197g，随机分为2组，于实验前一天下午开始禁食过 夜但可自由饮水，给药后4h给食物。A组给予Linaglipitin 3mg/kg，B组给予实施例化合物3mg/kg，分别于给药后15min、30min、1、2、3、5、8、10h从大鼠眼眶静脉取血100-200L左右，置于经EDTA-K2抗凝的0.5mL的Eppendorf管中，立即混匀，抗凝后，尽快将试管轻轻颠倒混匀5-6次后,血取好后放置在冰盒中，30min内把血样本在4000rpm，10min，4℃条件下离心分离血浆，收集全部血浆后立即于-20℃保存。所有时间点样品采集后测定每个时间点的血浆中的血药浓度。
根据上述所得的给药后平均血药浓度-时间数据，采用Winnonin软件，按非房室统计矩理论求算雄性SD大鼠分别i.g给予Linaglipitin(3mg/kg)、实施例化合物(3mg/kg)后的药代动力学相关参数。
实验表明，与Linaglipitin相比，本发明化合物具有比Linaglipitin更优的活性，并且具有优异的药代动力学性质，因此更适合作为抑制二肽基肽酶的化合物，进而适合制备治疗II型糖尿病的药物。
应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则份数和百分比为重量份和重量百分比。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (11)

  1. 一种二肽基肽酶抑制剂，其特征在于：如式(1)所示的黄嘌呤，或其多晶型、药学上可接受的盐、前药、立体异构体、同位素变体、水合物或溶剂化合物，
    其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25和R26各自独立地为氢、氘、卤素或三氟甲基；
    附加条件是R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26中至少一个是氘代的或氘。
  2. 根据权利要求1所述的二肽基肽酶抑制剂，其特征在于：R1、R2和R3各自独立地为氘或氢。
  3. 根据权利要求1所述的二肽基肽酶抑制剂，其特征在于：R4和R5各自独立地为氘或氢。
  4. 根据权利要求1所述的二肽基肽酶抑制剂，其特征在于：R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14各自独立地为氘或氢。
  5. 根据权利要求1所述的二肽基肽酶抑制剂，其特征在于：R15、R16、R17和R18为氘或氢。
  6. 根据权利要求1所述的二肽基肽酶抑制剂，其特征在于：R19、R20和R21各自独立地为氘或氢。
  7. 根据权利要求1所述的二肽基肽酶抑制剂，其特征在于：R22和R23各自独立地为氘 或氢。
  8. 根据权利要求1所述的二肽基肽酶抑制剂，其特征在于：R24、R25和R26各自独立地为氘或氢。
  9. 根据权利要求1所述的二肽基肽酶抑制剂，其特征在于：所述化合物可选自下述化合物或其药学上可接受的盐：
  10. 一种药物组合物，其特征在于：其含有药学上可接受的载体和如权利要求1～9任意一项所述的二肽基肽酶抑制剂，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物、立体异构体、前药或同位素变体的药物组合物。
  11. 一种如权利要求1～9任意一项所述的二肽基肽酶抑制剂的用途，其特征在于：用于制备治疗二肽基肽酶介导的疾病的药物，如II型糖尿病。
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