CN108267441B

CN108267441B - 一种基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器及其应用

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Publication number: CN108267441B
Application number: CN201711468321.4A
Authority: CN
Inventors: 张国文; 杜佳炜; 潘军辉; 胡兴
Original assignee: Nanchang University
Current assignee: Nanchang University
Priority date: 2017-12-29
Filing date: 2017-12-29
Publication date: 2021-01-01
Anticipated expiration: 2037-12-29
Also published as: CN108267441A

Abstract

本发明提供了一种基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器及其应用，该技术方案以柠檬酸根同时作为还原剂和保护剂，采用化学还原法通过冷凝回流实验，同时还原HAuCl₄和AgNO₃，制备了粒径为50nm的金银合金纳米粒子并对其进行了表征。通过在合金纳米粒子表面修饰对氨基苯磺酸作为识别分子，建立了一种快速检测莱克多巴胺的比色传感分析方法。在优化的实验条件下，该方法对莱克多巴胺有较好的选择性，检测莱克多巴胺浓度范围为15.0～105.0nM，最低检测限为5.0nM。该方法选择性好、操作简单、检测时间短、费用低，能够用于猪肉、猪饲料和猪尿等实际样品中的莱克多巴胺检测，方法有良好的应用前景。

Description

一种基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器及其应用

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，进一步涉及基于纳米材料的比色检测技术，具体涉及一种基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器及其应用。

背景技术

比色检测是以生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。近年来，基于纳米材料特殊的尺寸效应、体积效应、宏观量子隧道效应及表面效应等，基于纳米材料的比色检测方法受到了广泛关注。纳米材料比色检测是基于其在可见光下有很强的表面等离子共振、在分散和聚集状态下会呈现出不同的颜色的性质。

比色传感器又称为比色型化学传感器，是通过传感器系统与目标物质特异性识别后，产生吸收光谱的变化，从而实现对被检测物的可视化识别和表征。在比色检测中，显色反应的灵敏性和准确性直接影响检测效果，因此比色传感器的性能至关重要。在研制比色传感器的过程中，最大的挑战在于如何将传感系统与被检测分子结合的过程转化为传感器的吸收光谱变化，而这一目标需要密切为围绕待测物的性质在分子水平上进行设计。

现有技术中常用的比色传感器类型包括金纳米颗粒、银纳米颗粒、氧化铈纳米颗粒、碳纳米管、氧化石墨烯、磁性纳米颗粒等。合金纳米粒子具有不同于单组分金属的催化性能、表面等离子共振及表面增强拉曼散射(SERS)等特性，其综合性能远超于各单组分金属，金和银由于具有十分相似的晶格常数，易形成金银合金材料。尽管具有上述分类，但具体到某一特定物质的检测，仍需要针对该物质的性质进行探索实验，才可能获得与之相匹配的具体传感器产品。

瘦肉精，是指那些能促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质的统称。莱克多巴胺是一种比较常见的且使用较为广泛的瘦肉精，可以提高饲料利用率和动物体的瘦肉率，并在动物组织和肌肉中蓄积，当人们食用含有瘦肉精的动物肌肉后会对心脏及生殖功能造成严重的危害，因此，许多国家已经禁止莱克多巴胺在畜牧业中的使用，我国也明确禁止莱克多巴胺在食品动物中的使用，然而，在我国非法使用瘦肉精的现象依然存在，瘦肉精中毒事件时有发生。因此，研究开发检测莱克多巴胺的方法有重要的现实意义。

目前用于检测莱克多巴胺的方法主要有：气相色谱法、液相色谱-质谱联用法、酶联免疫法等。这些方法实现对于莱克多巴胺进行较为精确的分析检测，但同时也存在检测时间较长、检测费用较高、需要专业的仪器设备和专业技术人员操作等不足之处。比色法检测莱克多巴胺，尽管从理论上可行，但由于现有技术中缺乏一种灵敏且准确的比色传感器，因而相关方法仍未取得理想的检测效果。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器及其应用，以解决现有技术中用于通过比色法检测莱克多巴胺的比色传感器性能不佳的技术问题。

本发明要解决的另一技术问题是现有技术中针对莱克多巴胺的常规检测方法操作不便、准确性较低。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器，是由以下方法制备的：取48μL浓度为1.0％(w/w)的AgNO₃溶液和47μL浓度为1.0％(w/w)的 HAuCl₄溶液，各加入到15mL超纯水中，冷凝回流加热5min，各向其中加入 0.4mM的柠檬酸三钠溶液250μL，继续加热2min，而后混合并在搅拌条件下继续加热15min，而后向其中加入1mL浓度为1mM的对氨基苯磺酸溶液匀速搅拌2h，得到对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液，即为所述基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器。

作为优选，所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液中含有30μM的对氨基苯磺酸。

作为优选，所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液其pH值为4.3。

同时，本发明提供了以上任一项所述比色传感器用于通过比色法检测莱克多巴胺的应用。

作为优选，该应用包括以下步骤：取所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液，向其中加入NaCl至NaCl终浓度为1mM，取2mL该溶液，与待测样品混合，静置反应15min。

作为优选，静置反应15min后继续执行以下步骤：检测溶液的吸光度比值 A₆₀₀/A₄₃₅。

作为优选，该应用还包括以下步骤：取所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液，向其中加入NaCl至NaCl终浓度为1mM，得到反应液；配制浓度分别为15nM、25nM、35nM、45nM、55nM、65nM、75nM、85nM、95nM、105 nM的一组莱克多巴胺标准溶液，向每一标准溶液中各加入2mL所述反应液，静置反应15min，而后分别检测吸光度比值A₆₀₀/A₄₃₅，以溶液吸光度比值A₆₀₀/A₄₃₅为纵坐标、以莱克多巴胺浓度为横坐标制得标准曲线。

作为优选，该应用还包括以下步骤：取所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液，向其中加入NaCl至NaCl终浓度为1mM，得到反应液；配制浓度分别为15nM、25nM、35nM、45nM、55nM、65nM、75nM、85nM、95nM、105 nM的一组莱克多巴胺标准溶液，向每一标准溶液中各加入2mL所述反应液，静置反应15min，而后分别拍摄溶液颜色照片，制得以上各莱克多巴胺浓度的标准比色卡。

作为优选，所述待测样品是猪肉或猪饲料，所述待测样品先依次经过提取、离心、浓缩、复溶处理再执行检测。

作为优选，所述待测样品是猪尿，所述样品先依次经过过滤、离心、稀释处理再执行检测。

本发明提供了一种基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器及其应用，该技术方案以柠檬酸根同时作为还原剂和保护剂，采用化学还原法通过冷凝回流实验，同时还原HAuCl₄和AgNO₃，制备了粒径为50nm的金银合金纳米粒子并对其进行了表征。通过在合金纳米粒子表面修饰对氨基苯磺酸作为识别分子，建立了一种快速检测莱克多巴胺的比色传感分析方法。在优化的实验条件下，该方法对莱克多巴胺有较好的选择性，检测莱克多巴胺浓度范围为 15.0～105.0nM，最低检测限为5.0nM。该方法选择性好、操作简单、检测时间短、费用低，能够用于猪肉、猪饲料和猪尿等实际样品中的莱克多巴胺检测，方法有良好的应用前景。该方法基于不仅可通过吸光度比值A₆₀₀/A₄₃₅实现准确定量，而且，可结合标准比色卡通过肉眼进行半定量分析。

附图说明

图1是本发明具体实施方式中纳米金(a)、纳米银(b)及金银合金纳米粒子(c) 紫外可见吸收光谱图。

图2是本发明具体实施方式中加入50.0nM莱克多巴胺前后对氨基苯磺酸修饰金银合金纳米粒子紫外-可见吸收光谱的变化。

图3是本发明具体实施方式中加入50nM莱克多巴胺前(A)后(B)对氨基苯磺酸修饰金银合金纳米粒子透射电镜图及粒径分布图(内插图)。

图4是本发明具体实施方式中对氨基苯磺酸浓度(A)、pH(B)、检测时间(C) 及NaCl浓度(D)对检测的影响。

图5是本发明具体实施方式中不同浓度莱克多巴胺存在下对氨基苯磺酸修饰金银合金纳米粒子溶液的紫外-可见吸收光谱图(A)和金银合金纳米粒子溶液吸光度比值(A₆₀₀/A₄₃₅)与莱克多巴胺浓度关系图(B)。

图6是本发明具体实施方式中不同干扰物存在下对氨基苯磺酸修饰金银合金纳米粒子溶液吸光度比值(A₆₀₀/A₄₃₅)的变化图。

具体实施方式

以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。

以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。因此，用“大约”、“左右”等语言所修正的数值不限于该准确数值本身。在一些实施例中，“大约”表示允许其修正的数值在正负百分之十(10％)的范围内变化，比如，“大约100”表示的可以是90 到110之间的任何数值。此外，在“大约第一数值到第二数值”的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近似性语言可能与测量仪器的精度有关。

除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。

以下实施例中所用的试验试剂耗材，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值；以下实施例中的％，如无特别说明，均为质量百分含量。

实施例1

一种基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器，是由以下方法制备的：准确移取48μL 1.0％(w/w)的AgNO₃溶液和47μL 1.0％(w/w)的HAuCl₄溶液分别加入到装有15mL超纯水的烧瓶中，冷凝回流加热5min后同时加入 0.4mM柠檬酸三钠溶液250μL，再加热2min，然后立即混合并继续搅拌加热 15min，得到橘黄色澄清且稳定均匀的溶液，即为金银合金纳米粒子溶液；

在上述新合成的金银合金溶液中加入1mL1.0mM对氨基苯磺酸溶液匀速搅拌2h，得到对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液。所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液中对氨基苯磺酸浓度浓度为30.0μM；所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液的pH为4.3。

一种利用上述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液检测莱克多巴胺的方法，包括以下步骤：向对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子溶液中加入NaCl，使其浓度为1.0mM，分别将浓度为15.0、25.0、35.0、45.0、55.0、65.0、75.0、 85.0、95.0、105.0nM莱克多巴胺标准溶液加入到2mL上述含有NaCl的对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子溶液中，孵化15min，待反应完全后，可以观察到明显的颜色变化，用数码相机拍摄溶液的颜色，制作标准比色卡。同时，采用紫外-可见分光光度法测定溶液的紫外-可见吸收光谱，以溶液吸光度比值 (A₆₀₀/A₄₃₅)为纵坐标，莱克多巴胺浓度为横坐标，绘制工作曲线，线性拟合得到一个一元一次方程。取10μL经提取、离心、浓缩、复溶等前处理后的猪肉、猪饲料样品溶液和经过过滤、离心、稀释处理后的猪尿样品溶液，加入到2mL 上述含有NaCl的对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液中，孵化15min，待反应完全后，用数码相机拍摄溶液的颜色，将拍摄的照片中溶液的颜色与标准比色卡对比，即对猪饲料样品中莱克多巴胺含量进行半定量检测。同时，测定溶液的紫外-可见吸收光谱并计算溶液吸光度比值(A₆₀₀/A₄₃₅)，代入线性方程中，即可求得样品中莱克多巴胺含量。

以下通过实验上述方法的效果进行详细，，并结合说明书附图进行说明，具体步骤如下：

1.1仪器及试剂

UV–2450紫外–可见分光光度计(日本岛津公司)，仪器工作参数：扫描波长300～800nm；JEM–2100高分辨率透射电子显微镜(日本电子株式会社)； Nicomp 380ZLS纳米粒度仪(美国PSS粒度仪公司)；pHS–3C型酸度计(上海雷磁仪器厂)；双向磁力搅拌器(常州国华电器有限公司)；Millipore Simplicity 水纯化系统。

HAuCl₄(纯度≥99.9％)，上海源叶生物科技有限公司)和AgNO₃(纯度≥ 99.8％)，上海试剂一厂)用超纯水配制成1.0％储备液；对氨基苯磺酸用超纯水配置成1.0mM溶液，柠檬酸三钠用超纯水溶解，配制成0.4mM溶液；莱克多巴胺标准溶液用莱克多巴胺(Fluka公司)配置成1.0mM的标准溶液；盐酸克仑特罗(中国食品药品鉴定所)，沙丁胺醇(中国食品药品鉴定所)，呋喃唑酮 (Sigma公司)，甘氨酸(中国科学院上海生物化学研究所)，谷氨酸(上海蓝季科技发展有限公司)，葡萄糖(上海试一化学试剂有限公司)及其他金属离子用超纯水配置成相应浓度的溶液。

1.2试验方法

1.2.1对氨基苯磺酸修饰金银合金纳米粒子的制备

准确移取48μL 1.0％AgNO₃溶液和47μL 1.0％HAuCl₄溶液分别加入到装有 15mL超纯水的烧瓶中，冷凝回流加热5min后同时加入0.4mM柠檬酸三钠溶液250μL，再加热2min，然后立即混合并继续搅拌加热15min，得到橘黄色澄清且稳定均匀的溶液，即为金银合金纳米粒子溶液；

在上述新合成的金银合金溶液中加入1mL1.0mM对氨基苯磺酸溶液匀速搅拌2h，得到对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液。

1.2.2检测条件的优化

在使用对氨基苯磺酸修饰合金纳米粒子探针比色检测莱克多巴胺的过程中，检测条件的不同会对最终的检测结果产生明显的影响。为了获得更高的灵敏度和准确性，采用控制变量法，依次考察了对氨基苯磺酸浓度、检测时间、pH、NaCl 浓度对检测结果的影响。

1.2.3比色检测莱克多巴胺

向对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子溶液中加入NaCl，使其浓度为1.0 mM，分别将浓度为15.0、25.0、35.0、45.0、55.0、65.0、75.0、85.0、95.0、105.0 nM莱克多巴胺标准溶液加入到2mL上述含有NaCl的对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子溶液中，孵化15min，待反应完全后，可以观察到明显的颜色变化，使用紫外-可见光谱测定溶液的吸光度。

1.2.4实际样品的检测

猪肉、猪饲料样品经过破碎或研磨后，分别加入盐酸-正己烷和磷酸-甲醇缓冲提取液超声提取，再通过离心、浓缩蒸发处理后，最后溶解于PBS缓冲溶液中；猪尿样品经过滤、离心、稀释及pH调节等预处理，按照试验方法测定样品中莱克多巴胺含量，并采用标准加入法测定3种样品的加标回收率，最终与液相色谱法测得的数值相比较，以检验本方法的可靠性。

2结果与讨论

2.1对氨基苯磺酸修饰金银合金纳米粒子的形成

图1为纳米金(a)、纳米银(b)及金银合金纳米粒子(c)的紫外-可见吸收光谱。从图中可以看出金银合金纳米粒子的最大吸收峰位于435nm，该吸收峰位于纳米金的最大吸收峰520nm及纳米银的最大吸收峰400nm之间，表明成功合成出了金银合金纳米粒子。

2.2金银合金纳米粒子的表征

2.2.1合金纳米粒子的光谱表征

如图2所示，对氨基苯磺酸修饰金银合金纳米粒子在检测范围内仅有一个吸收峰位于435nm处，峰形较窄，说明合成出的对氨基苯磺酸修饰金银合金纳米粒子粒径分布较均匀。当加入50.0nM莱克多巴胺后，合金纳米粒子溶液在600 nm处出现一个新的吸收峰，说明在莱克多巴胺存在下对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子产生聚集。

2.2.2合金纳米粒子的电镜及粒径的表征

透射电镜(TEM)图像(图3)显示，合金纳米粒子粒径较小，呈规则的球形，粒径分布较均匀(图3A)；加入莱克多巴胺后金银合金纳米粒子发生明显的聚集(图3B)。粒径表征显示，合金纳米粒子的粒径约为50nm(图3A插图)，加入50.0nM莱克多巴胺后粒径增大为500nm(图3B插图)，表明莱克多巴胺的加入引起了对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子的聚集，使得其粒径增大，并导致溶液颜色发生变化。

2.3实验条件的优化

2.3.1对氨基苯磺酸浓度的优化

水溶液中对氨基苯磺酸修饰金银合金纳米粒子的聚集是通过莱克多巴胺与修饰在合金表面的对氨基苯磺酸特异性结合而实现的，因此对氨基苯磺酸的浓度对该检测方法的灵敏度有较大的影响。对氨基苯磺酸的浓度越高合金纳米粒子就越容易产生聚集，但是对氨基苯磺酸浓度过高也容易引起合金纳米粒子之间的自聚集，进而导致检测灵敏度的降低。由图4A可见，在50.0nM莱克多巴胺存在下，随着对氨基苯磺酸浓度的增加，吸收峰比值增大，检测灵敏度越高，但当对氨基苯磺酸浓度超过30.0μM时，检测灵敏度下降，因此，选择30.0μM作为最佳的对氨基苯磺酸浓度。

2.3.2溶液pH的优化

考察了溶液pH(3–12)对检测莱克多巴胺灵敏度的影响。图4B显示，在 50.0nM的莱克多巴胺浓度下，当pH为4.3时，吸光度比值最大，即可获得最大的检测灵敏度，因此，选择pH＝4.3进行检测。

2.3.3检测时间的优化

图4C为在常温(25℃)条件下检测时间对吸光度比值的影响。从图中可以看出，对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子对莱克多巴胺的检测在15min内反应完成，吸光度比值最大且稳定，因此，选择反应时间为15min。

2.3.4NaCl浓度的优化

合金纳米溶液中的离子强度对检测有较大的影响，为使获得更高的检测灵敏度，研究了NaCl浓度对检测结果的影响(图4D)。从图中可以看出，随着溶液中NaCl浓度的增加，检测灵敏度不断提高，但当NaCl浓度为1.0mM时，溶液开始产生聚集，因此，1.0mM的NaCl为最适浓度。

2.4比色检测莱克多巴胺

在优化条件下，绘制了检测莱克多巴胺的工作曲线。如图5A所示，随着莱克多巴胺浓度的增大，溶液在435nm处的吸收峰不断减小，而600nm处出现的新的吸收峰不断增强。得到莱克多巴胺检测的工作曲线(图5B)和线性方程Y＝ 0.00612C－0.08951(R²＝0.9912)，检测莱克多巴胺的浓度范围为15.0～105.0nM 时，最低检测限为5.0nM，检测方法的灵敏度较高。

2.5选择性实验

在优化的实验条件下，分别测定了50.0nM莱克多巴胺(Rac)、沙丁胺醇 (Sal)、呋喃唑酮(Ful)、L-谷氨酸(L-Glu)、克仑特罗(Cle)、葡萄糖(Glu)、甘氨酸(Gly)、维生素(Vc)、Mg²⁺、Cu²⁺、K⁺、Ca²⁺、Na⁺、Zn²⁺等存在下金银合金纳米粒子溶液紫外-可见光谱的变化，如图6所示，仅在加入莱克多巴胺后溶液吸光度的比值(A₆₀₀/A₄₃₅)产生显著的变化，而其他干扰物变化很小，表明该检测方法对于检测莱克多巴胺具有很好的选择性。

2.6实际样品的测定及加标回收实验

分别取10μL预处理过后的猪肉、猪饲料和猪尿样品，按照上述方法进行莱克多巴胺检测，并进行25.0nM、55.0nM、95.0nM三个水平莱克多巴胺的加标回收实验，记录光谱数据进行相应的数据处理，计算得到3种样品加标回收率分别为103.1％～109.2％，98.4％～112.5％和97.1％～110.0％，相对标准偏差分别为1.3～1.9％、1.3～2.3％和0.9～1.7％，并且与液相色谱法的检测结果十分接近 (表1)，本研究建立的比色传感检测方法应用于实际样品检测，结果令人满意。

表1样品分析结果与回收率

3实验结论

本发明采用化学还原法同时还原HAuCl₄和AgNO₃，成功合成了稳定的金银合金纳米粒子。基于莱克多巴胺能引起对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子发生聚集而导致溶液颜色发生变化，建立了一种对莱克多巴胺快速的比色传感检测的方法，该方法选择性好、灵敏度较高、操作简单、仪器价廉、检测时间短、费用低，能够满足莱克多巴胺的实际检测，方法有良好的应用前景。

实施例2

一种基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器，是由以下方法制备的：取48μL浓度为1.0％(w/w)的AgNO₃溶液和47μL浓度为1.0％(w/w)的 HAuCl₄溶液，各加入到15mL超纯水中，冷凝回流加热5min，再各向其中加入 0.4mM的柠檬酸三钠溶液250μL，继续加热2min，而后混合并在搅拌条件下继续加热15min，而后向其中加入1mL浓度为1mM的对氨基苯磺酸溶液匀速搅拌2h，得到对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液，即为所述基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器。所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液中含有30μM的对氨基苯磺酸。所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液其pH值为4.3。

上述比色传感器用于通过比色法检测莱克多巴胺的应用，具体包括以下步骤：取所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液，向其中加入NaCl至NaCl 终浓度为1mM，取2mL该溶液，与待测样品混合，静置反应15min。静置反应 15min后继续执行以下步骤：检测溶液的吸光度比值A₆₀₀/A₄₃₅。

该应用还包括以下步骤：取所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液，向其中加入NaCl至NaCl终浓度为1mM，得到反应液；配制浓度分别为15nM、 25nM、35nM、45nM、55nM、65nM、75nM、85nM、95nM、105nM的一组莱克多巴胺标准溶液，向每一标准溶液中各加入2mL所述反应液，静置反应 15min，而后分别检测吸光度比值A₆₀₀/A₄₃₅，以溶液吸光度比值A₆₀₀/A₄₃₅为纵坐标、以莱克多巴胺浓度为横坐标制得标准曲线。

所述待测样品是猪肉或猪饲料，所述待测样品先依次经过提取、离心、浓缩、复溶处理再执行检测。

实施例3

一种基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器，是由以下方法制备的：取48μL浓度为1.0％(w/w)的AgNO₃溶液和47μL浓度为1.0％(w/w)的 HAuCl₄溶液，各加入到15mL超纯水中，冷凝回流加热5min，各向其中加入 0.4mM的柠檬酸三钠溶液250μL，继续加热2min，而后混合并在搅拌条件下继续加热15min，而后向其中加入1mL浓度为1mM的对氨基苯磺酸溶液匀速搅拌2h，得到对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液，即为所述基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器。所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液中含有30μM的对氨基苯磺酸。

上述比色传感器用于通过比色法检测莱克多巴胺的应用，具体包括以下步骤：取所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液，向其中加入NaCl至NaCl 终浓度为1mM，取2mL该溶液，与待测样品混合，静置反应15min，拍摄产物溶液的色彩图像。

该应用还包括以下步骤：取所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液，向其中加入NaCl至NaCl终浓度为1mM，得到反应液；配制浓度分别为15nM、 25nM、35nM、45nM、55nM、65nM、75nM、85nM、95nM、105nM的一组莱克多巴胺标准溶液，向每一标准溶液中各加入2mL所述反应液，静置反应 15min，而后分别拍摄溶液颜色照片，制得以上各莱克多巴胺浓度的标准比色卡。将待测样品的色彩图像与上述标准比色卡对比，实现办定量分析。

所述待测样品是猪尿，所述样品先依次经过过滤、离心、稀释处理再执行检测。

实施例4

一种基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器，是由以下方法制备的：取48μL浓度为1.0％(w/w)的AgNO₃溶液和47μL浓度为1.0％(w/w)的 HAuCl₄溶液，各加入到15mL超纯水中，冷凝回流加热5min，再各向其中加入 0.4mM的柠檬酸三钠溶液250μL，继续加热2min，而后立即混合并在搅拌条件下继续加热15min，而后向其中加入1mL浓度为1mM的对氨基苯磺酸溶液匀速搅拌2h，得到对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液，即为所述基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器。

上述述比色传感器用于通过比色法检测莱克多巴胺的应用。

以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器，其特征在于是由以下方法制备的：取48μL浓度为1.0％(w/w)的AgNO₃溶液和47μL浓度为1.0％(w/w)的HAuCl₄溶液，各加入到15mL超纯水中，冷凝回流加热5min，各向其中加入0.4mM的柠檬酸三钠溶液250μL，继续加热2min，而后混合并在搅拌条件下继续加热15min，而后向其中加入1mL浓度为1mM的对氨基苯磺酸溶液匀速搅拌2h，得到对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液，即为所述基于对氨基苯磺酸修饰的金银合金纳米粒子比色传感器；所述比色传感器用于通过比色法检测莱克多巴胺。

2.根据权利要求1所述的比色传感器，其特征在于所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液中含有30μM的对氨基苯磺酸。

3.根据权利要求1所述的比色传感器，其特征在于所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液其pH值为4.3。

4.权利要求1～3任一项所述比色传感器用于通过比色法检测莱克多巴胺的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于包括以下步骤：取所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液，向其中加入NaCl至NaCl终浓度为1mM，取2mL该溶液，与待测样品混合，静置反应15min。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于静置反应15min后继续执行以下步骤：检测溶液的吸光度比值A₆₀₀/A₄₃₅。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于该应用还包括以下步骤：取所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液，向其中加入NaCl至NaCl终浓度为1mM，得到反应液；配制浓度分别为15nM、25nM、35nM、45nM、55nM、65nM、75nM、85nM、95nM、105nM的一组莱克多巴胺标准溶液，向每一标准溶液中各加入2mL所述反应液，静置反应15min，而后分别检测吸光度比值A₆₀₀/A₄₃₅，以溶液吸光度比值A₆₀₀/A₄₃₅为纵坐标、以莱克多巴胺浓度为横坐标制得标准曲线。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于该应用还包括以下步骤：取所述对氨基苯磺酸修饰的金银纳米合金溶液，向其中加入NaCl至NaCl终浓度为1mM，得到反应液；配制浓度分别为15nM、25nM、35nM、45nM、55nM、65nM、75nM、85nM、95nM、105nM的一组莱克多巴胺标准溶液，向每一标准溶液中各加入2mL所述反应液，静置反应15min，而后分别拍摄溶液颜色照片，制得以上各莱克多巴胺浓度的标准比色卡。

9.根据权利要求5～8任一项所述的应用，其特征在于所述待测样品是猪肉或猪饲料，所述待测样品先依次经过提取、离心、浓缩、复溶处理再执行检测。

10.根据权利要求5～8任一项所述的应用，其特征在于所述待测样品是猪尿，所述样品先依次经过过滤、离心、稀释处理再执行检测。