CN108265025A - 一种人类诱导多能干细胞的重编程培养基 - Google Patents

Abstract

本发明属于培养基技术领域，具体涉及一种人类诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cell,hiPSC)的重编程培养基，所述重编程培养基包含用于培养人类体细胞的成体细胞培养基以及添加到成体细胞培养基中的细胞信号通路抑制剂；所述细胞信号通路抑制剂选自糖原合成激酶3抑制剂、丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂和转化生长因子β抑制剂任意一种或者任意多种的组合。本发明的有益效果是：本发明的重编程培养基是在成体细胞培养基的基础上添加了一种或多种小分子化合物进行诱导重编程培养或者诱导分化培养，为无滋养层无动物源性培养基，极大地提高了人类体细胞重编程为人类多能干细胞的速度与效率，尤其是将人类体细胞高效地重编程为表达特异性标记物的hiPSC。

Description

一种人类诱导多能干细胞的重编程培养基

技术领域

本发明属于培养基技术领域，具体涉及一种人类诱导多能干细胞的重编程培养基。

背景技术

干细胞(stem cells)指的是能够自我更新、分裂以及分化成其它细胞类群的一种细胞。从干细胞在发育中的所处的阶段来看，干细胞可以分化为胚胎干细胞(embryonicstem cell，ESC)和成体干细胞(adult stem cell)。胚胎干细胞是一种多能干细胞(pluripotent stem cell)，可以无限增殖并分化成人体两百多种类型细胞、形成机体的组织和器官，即能分化成多种细胞和组织的潜能的干细胞。成体干细胞包括骨髓间充质干细胞、血液干细胞、神经干细胞等成体组织中存在的。

2006年，日本京都大学Yamanaka研究小组利用逆转录病毒载体，将外源性的Pou5f1、Sox2、c-Myc和Klf4四种转录因子在小鼠成纤维细胞中过表达，在小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)的培养条件下获得了Fbx15+的多能干细胞系，该细胞系在细胞形态、生长特征、表面标志物、形成畸胎瘤等方面与小鼠ESC非常相似，而在基因表达谱、DNA甲基化方式及形成嵌合体动物方面却不同于小鼠ES细胞，故将其命名为诱导多能干细胞(induced Pluripotent Stem Cell,iPSC)。

Takahashi K1,Yamanaka S.Induction of pluripotent stem cells frommouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.Cell.2006；126:663-676

2007年7月,Yamanaka研究小组进一步用Nanog代替Fbx15蛋白进行筛选，得到了Nanog+的iPSC，该iPSC不仅在细胞形态、生长特征、标志物表达、移植到小鼠皮下可形成包含3个胚层组织细胞结构的畸胎瘤等方面与小鼠ESC非常相似，而且在DNA甲基化方式、基因表达谱、染色质状态、形成嵌合体动物等方面也与小鼠ESC几乎完全相似。此外，研究还发现重新激活外源致癌基因c-Myc是嵌合体动物出现肿瘤形成的原因；而转染的上述4个基因在iPSC中并没有表达，表明这些基因只在诱导过程中起作用，iPSC保持多潜能性状态的原因是内源性转录因子，如Nanog等基因的表达。

Okita K1,Ichisaka T,Yamanaka S.Generation of germline-competentinduced pluripotent stem cells.Nature.2007；448:313-317.

2007年11月，Yamanaka研究组使用了同样的方法获得了人类诱导多能干细胞hiPSC,同时，威斯康辛大学Thomson研究小组也报道了成功诱导成纤维细胞转化为具有人类胚胎干细胞hESC基本特征的hiPSC，所不同的是他们使用慢病毒作为载体，并在14个候选基因中选择出了POU5F1、SOX2、NANOG、LIN28A等4个基因进行转导。

Yu,J.,et al.，Induced pluripotent stem cell lines derived from humansomatic cells.Science.2007；318:1917-1920

2008年，Park IH.,et al.利用来自胎儿、新生儿及成人的皮肤或肺部的原代成纤维细胞，其中包括来自1名健康男性皮肤活检得到的成纤维细胞，采用Yamanaka研究小组的策略也获得了相同的结果。他们还发现POU5F1和SOX2在hiPSC诱导重编程中是必需的，正是这两个转录因子激活、维持了内源多潜能性因子的表达，而KLF4和c-MYC的作用是改变染色质的结构，从而有利于POU5F1和SOX2的结合，以提高诱导的效率。此外，该项研究的重要意义在于将取自皮肤活检的成纤维细胞诱导为hiPSC。上述研究表明，从活检人类皮肤组织中提取体细胞后进行诱导以制备患者特异性的干细胞是可行的，因而有望克服细胞移植治疗中存在的免疫排斥反应。

Park IH.,et al.，Reprogramming of human somatic cells to pluripotencywith defined factors.Nature.2008；451:141-146

由于向供体细胞转导外源基因使用的病毒/质粒载体会在重编程过程中对其产生一定影响，通过此类方法筛选获得的克隆中存在基因重排、核型异常、表观遗传学异常等现象，甚至具有高危致癌几率。2008年，Okita等人通过多次常规质粒转染的方法获得了小鼠iPSC,但操作麻烦、重编程效率低下。同年，Stadtfeld等人首次使用由腺病毒载体衍生的复制缺陷型载体生成无整合的iPSC。他们成功地在小鼠肝脏细胞中表达此种载体携带的外源OSKM基因，并得到了无外源基因整合的iPSC。但是在重编程小鼠胎儿肝细胞及成体成纤维细胞时，必须在稳定反式表达外源Oct4基因的前提下转染携带SKM基因的载体，才能得到iPSC。2009年，Fusaki团队利用基于仙台病毒(Sendai virus，一个RNA病毒)的载体将不同类型的终末分化细胞重编程为hiPSC。但这种方法的诱导获得的iPSC内仍然含有此病毒载体，并且在多次传代后仍然可能在细胞内存在，不易删除。在多次传代后筛选到的不含此载体的iPSC克隆由于长时间异位表达Myc基因，可能会导致其核型异常。另外Zhou等人于2009年以蛋白质OSKM与一个精氨酸的细胞膜转导结构域融合，在大肠杆菌中表达并提纯了融合蛋白、将这些融合蛋白转导入含Oct4-GFP报告基因的MEF中，获得了绿色荧光蛋白阳性的克隆，这种方法避免将外源性基因材料引入重编程细胞中，但最大缺陷在于效率低下，重编程所需时间长，并且需耗费很大精力用以提纯高剂量的融合蛋白。Jia等人利用Minicircle载体从人类脂肪来源的间充质干细胞获得了非整合iPSC,但需要多次转染，操作比较麻烦，效率提高有限。

Okita,K.,et al.Generation of mouse induced pluripotent stem cellswithout viral vectors.Science 2008；322(5903):949-53；

Stadtfeld,M.,et al.Induced pluripotent stem cells generated withoutviral integration.Science 2008；322(5903):945-9；

Fusaki,N.,et al.Efficient induction of transgene-free humanpluripotent stem cells using a vector based on Sendai virus,an RNA virus thatdoes not integrate into the host genome.Proc Jpn Acad Ser B Phys Biol Sci2009；85(8):348-62.

Zhou,H.,et al.Generation of induced pluripotent stem cells usingrecombinant proteins.Cell Stem Cell 2009；4(5):381-4.

Jia,F.,et al.A nonviral minicircle vector for deriving human iPScells.Nat Methods 2010；7(3):197-9.

2009年，Kaji等人利用脂质体包裹携带DNA的一种特殊载体系统重编程了小鼠成纤维细胞，在这载体两侧插入了loxP位点，在完成诱导后通过瞬时表达Cre重组酶而删除此重编程构件。这一系统的优点在于，在重编程完成后可对外源基因进行删除，其结果可能会提高iPSC的再分化潜能(排除外源基因干扰)，更重要的是可以避免重编程因子的激活，从而降低了肿瘤生成的风险。缺点是使用此系统的重编程因子去除效率极低，并且在删除重编程构件后，在Cre重组酶切除loxP位点后，细胞内仍残留含loxP位点的载体。基于这些原因，Woltjen在内的研究者尝试使用了转座子系统：即同时使用携带目的基因的piggyBac转座子及转座子酶对供体细胞进行了重编程，并成功获得了iPSC。转座子系统不仅能精确切除目的基因，并且在切除后无残留，但重编程因子去除效率低下，同时使用转座子酶具有一个表达时间窗口，需要严格控制其表达时间，否则会因为多轮剪切整合导致非保守删除。

Kaji,K.,et al.Virus-free induction of pluripotency and subsequentexcision of reprogramming factors.Nature 2009；458(7239):771-5；

Woltjen,K.,et al piggyBac transposition reprograms fibroblasts toinduced pluripotent stem cells.Nature.2009；458(7239):766-70.

2009年，Yu等人利用OriP/EBNA1游离载体首次获得了无外源基因污染的人类诱导多能干细胞。此方法只需一次转染，操作简单，而且游离载体在hiPSC扩增时会自动的从细胞内去除。但初始的OriP/EBNA1游离载体重编程方法效率低下，而且需滋养层细胞，不利于hiPSC的规模化制备以及临床级hiPSC的制备。

Yu,J.,et al.Human induced pluripotent stem cells free of vector andtransgene sequences.Science 2009；324(5928):797-801；

hiPSC重编程最初是在hESC培养条件下完成的，经历了使用滋养层细胞培养、无滋养层细胞培养以及无动物源性无滋养层细胞培养的阶段。1998年Thomson JA首次分离并稳定持续传代培养得到人胚胎干细胞(hESC)，当时将hESC培养在包含20％FBS以及其他因子的培养基中，其必须在gelatin包被的滋养层细胞(feeder,丝裂霉素C处理后的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF，失去增殖能力)上进行维持生长，hESC在该条件下传代培养能够长期维持其多能性和自我更新能力)。然而由于血清的成分不确定、质量差异、批间差异大影响hESC稳定传代以及自我更新和分化的机制研究，也影响涉及人体的无动物源性研究，后续CowanCA1等人利用血清替代物(KnockOut Serum Replacement，KSR)替代FBS可以稳定持续的在feeder上进行传代培养。后续Ludwig TE1等人发现TGFB1/Nodal/bFGF等存在条件下可以维持hiPSC的自我更新能力，基于此Thomson实验室于2006年公开无feeder无血清无KSR成分明确的iPSC培养基mTeSR1，该培养基是目前全球科研运用最广泛的。

Thomson JA1.,et al.Embryonic stem cell lines derived from humanblastocysts.Science.1998Nov 6；282(5391):1145-7.

Cowan CA1.,et al.Derivation of embryonic stem-cell lines from humanblastocysts.N Engl J Med.2004Mar 25；350(13):1353-6.

Ludwig TE1.,et al.Feeder-independent culture of human embryonic stemcells.Nat Methods.2006Aug；3(8):637-46.、

然而，在mTeSR1等无滋养层细胞无血清无KSR成分明确的iPSC培养基中，hiPSC重编程效率低下。因此，本发明提供了可以比现有技术更高效快速的在无滋养层细胞的条件下重编程获得诱导多能干细胞的无血清培养基。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种人类诱导多能干细胞的重编程培养基，可以极大地提高了人类体细胞重编程为人类多能干细胞的速度与效率。

本发明提供了如下的技术方案：

一种人类诱导多能干细胞的重编程培养基，所述重编程培养基包含用于培养人类体细胞的成体细胞培养基以及添加到成体细胞培养基中的细胞信号通路抑制剂；

所述细胞信号通路抑制剂选自糖原合成激酶3抑制剂、丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂和转化生长因子β抑制剂任意一种或者任意多种的组合。

优选的，所述成体细胞培养基选自Essential 6培养基、MesenCult间充质干细胞无血清培养基、AdvcellR间充质干细胞无血清培养基、StemProR MSC SFM无血清培养基、Oricell无血清培养基、MSC Basal Medium、AdvCell Hematopoietic Stem Cell BaseMedium、Sciencell干细胞培养基系列、X-VIVO培养基、PC-1TM培养基、UltraMEM ReducedSerum培养基、Insect-XPRESSTM培养基、HL-1TM完全无血清培养基、UltraDOMA-PF无蛋白培养基、UltraCHOTM培养基中的任意一种。

优选的，所述糖原合成激酶3抑制剂为CHIR99021。

优选的，所述丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂为PD0325901。

优选的，所述转化生长因子β抑制剂为A-83-01。

优选的，所述细胞信号通路抑制剂选自糖原合成激酶3抑制剂、丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂和转化生长因子β抑制剂三种的任意组合，其中每升所述重编程培养基包含糖原合成激酶3抑制剂0.01-20μmol、丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂0.01-20μmol和转化生长因子β抑制剂0.01-20μmol。

优选的，所述细胞信号通路抑制剂选自糖原合成激酶3抑制剂、丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂和转化生长因子β抑制剂三种的任意组合，每升所述重编程培养基包含糖原合成激酶3抑制剂0.1-10μmol、丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂0.1-10μmol和转化生长因子β抑制剂0.1-10μmol。

优选的，所述细胞信号通路抑制剂选自CHIR99021、PD0325901和A-83-01三种的组合，其中每升所述重编程培养基包含CHIR990210.01-20μmol、PD0325901 0.01-20μmol和A-83-01 0.01-20μmol；

或者，所述细胞信号通路抑制剂选自CHIR99021和PD0325901两种的组合，其中每升所述重编程培养基包含CHIR99021 0.01-20μmol和PD03259010.01-20μmol；

或者，所述细胞信号通路抑制剂选自CHIR99021和A-83-01两种的组合，其中，其中每升所述重编程培养基包含CHIR99021 0.01-20μmol和A-83-010.01-20μmol。

优选的，所述细胞信号通路抑制剂选自CHIR99021、PD0325901和A-83-01三种的组合，其中每升所述重编程培养基包含CHIR990210.1-10μmol、PD0325901 0.1-10μmol和A-83-01 0.1-10μmol；

或者，所述细胞信号通路抑制剂选自CHIR99021和PD0325901两种的组合，其中每升所述重编程培养基包含CHIR99021 0.1-10μmol和PD03259010.1-10μmol；

或者，所述细胞信号通路抑制剂选自CHIR99021和A-83-01两种的组合，其中，其中每升所述重编程培养基包含CHIR99021 0.1-10μmol和A-83-010.1-10μmol。

优选的，所述人类体细胞选自人类间充质干细胞、人类红细胞祖细胞、人类成纤维细胞、人类神经细胞、人类血液细胞、人类肝细胞、人类肠细胞、人类间充质细胞、人类骨髓前体细胞和人类脾细胞中的任意一种。

本发明的有益效果是：本发明的重编程培养基是在成体细胞培养基的基础上添加了一种或多种小分子化合物进行诱导重编程培养或者诱导分化培养，可为无滋养层无动物源性培养基，极大地提高了人类体细胞重编程为人类多能干细胞的速度与效率，尤其是将人类体细胞高效地重编程为表达特异性标记物的hiPSC。在无滋养层、无小分子添加物的商业化培养基中，用非染色体整合游离型载体重编程方法得到hiPSC的效率极低，无法实现规模化hiPSC制备。因此该发明培养基将适合各基础科研、临床转化应用。

附图说明

图1为红细胞祖细胞来源的hiPSC重编程方法流程图；

图2为红细胞祖细胞hiPSC重编程用含C、P、A组合的培养基培养第10天，再换为hESC培养基E8培养至第14天时的细胞形态图，其中C为CHIR99021、P为PD0325901、A为A-83-01；

图3为红细胞祖细胞hiPSC重编程用含C、P、A组合的培养基培养至第10天时，再换为hESC培养基E8培养至第14天时iPSC克隆数目对比图；

图4为人成纤维细胞hiPSC重编程用含C、P、A组合的培养基培养第10天，再换为hESC培养基E8培养至第15天时的细胞形态图；

图5为人成纤维细胞hiPSC重编程用含C、P、A组合的培养基培养第10天，再换为hESC培养基E8培养至第15天时iPSC克隆数目对比图。

具体实施方式

除非另外说明，本文中所用的术语均具有本领域技术人员常规理解的含义，为了便于理解本发明，将本文中使用的一些术语进行了下述定义。

所有的数字标识，例如浓度范围，都是近似值。要了解，虽然不总是明确的叙述所有的数字标识之前都加上术语“约”。也要了解，虽然不总是明确的叙述，本文中描述的试剂仅仅是示例，其等价物是本领域已知的。

本发明中使用的术语“重编程培养基”是指任何能够支持重编程细胞生长的培养基。本领域的技术人员已知如何选择适用于所培养细胞的成体细胞培养基。

本发明中使用的术语“糖原合成酶激酶-3”(GSK-3)是一种多功能的丝氨酸/苏氨酸类蛋白激酶，“CHIR-99021”是一种高特异性的GSK-3抑制剂，用于抑制GSK-3α和GSK-3β。

本发明中使用的术语“丝裂原激活蛋白激酶激酶1/2”(MEK1/2)是一种苏氨酸/酪氨酸激酶，RAS/RAF/MEK/ERK信号通路的关键组成部分。“PD0325901”是一种选择性的，非ATP竞争性MEK抑制剂。

本发明中使用的“术语转化生长因子β”(TGFβ)由一类结构功能相似的多肽生长因子亚家族组成，“A-83-01”是一种TGF-βI型受体ALK5激酶\I型激活素/节点受体ALK4和I型节点受体ALK7的选择性抑制剂。

通过使用本发明的重编程培养基对成体细胞进行培养，尤其是对表达转录调控因子的体细胞进行培养，能够有效地使得成体细胞重编程为hiPSC，并且培养时间大大缩短，获得的hiPSC具有高度均一性，各细胞信号通路的抑制剂的具体类型也不受特别限制，细胞信号通路抑制剂可以为GSK-3抑制剂CHIR99021、MEK1/2抑制剂PD0325901、TGF-β抑制剂A-83-01的不同组合。这些抑制剂均为市售可得的，并且由此，可以进一步提高将成体细胞重编程为hiPSC的效率与功能的均一性。对于各抑制剂在用于制备hiPSC的培养基中的浓度，并不受特别限制。

下面结合具体实施例对本发明做具体说明。

红细胞祖细胞培养基(成体细胞培养基，中盛溯源生物科技有限公司)、LONZA MSC无血清培养基(成体细胞培养基，Stemcell Technologies)、CHIR99021(APExBIO)、PD0325901(MCE)、A-83-01(MCE)。

实施例1.对人红细胞祖细胞来源的hiPSC重编程

1、重编程培养基的制备：

本发明提供的重编程培养基的配方如表1所示，取红细胞祖细胞培养基，称取其他各成分，分别溶解，过滤，逐一加入该培养基中，充分混匀后4℃保存，采用不加任何小分子的红细胞祖细胞培养基作为对照培养基。

表1重编程培养基不同比例的配方

其中P表示PD0325901；C表示CHIR99021；A表示A-83-01；PC表示PD0325901和CHIR99021组合；CA表示CHIR99021和A-83-01组合；PCA表示PD0325901、CHIR99021和A-83-01组合。

2、检测培养基对红细胞组细胞诱导为hiPSC的重编程效率，采用如下方法：

a、重编程质粒转染：待红细胞祖细胞扩增6～16天后，取0.5～4×10⁶细胞于转染杯中，共为4组，其中3组为试验组，1组为为对照组，按照图1的操作流程图，将携带重编程因子的质粒分别电转染上述4组细胞中，之后将上述4组细胞接种于Matrigel或玻连蛋白或其它细胞基质包被的96,48,24,12或6孔板中进行培养，3组实验组相应添加表1中一种比例的重编程培养基进行培养，对照组添加不加任何小分子的红细胞祖细胞培养基进行培养。

b、3组实验组在48小时后更换相应新鲜的重编程培养基，1组对照组在48小时后更换相应新鲜的不加任何小分子的红细胞祖细胞培养基，隔天将4组培养基进行换液，添加与起始培养基同样体积的新鲜的重编程培养基，即在无滋养层体系上进行重编程，继续培养至第10天。(操作流程图见图1)

c、10天后，观察到贴壁生长的细胞克隆团，将重编程培养基更换为TeSR1、E8或其它多能干细胞维持培养基，继续培养扩增，重编程14天后，挑取形态典型类似于人胚胎干细胞的克隆，或对iPSC克隆进行计数。

3、检测表1中不同比例配方的重编程培养基对红细胞组细胞诱导为hiPSC的重编程效率：

图2给出了CA组成重编程培养基培养人红细胞祖细胞在重编程过程中不同生长阶段的图像，图3给出了培养至14天时表1中各组培养基中hiPSC克隆数目。

实施例2.对人成纤维细胞来源的hiPSC重编程

1、重编程培养基的制备：

本发明提供的重编程培养基的配方如表2所示，取LONZA MSC无血清培养基，称取其他各成分，分别溶解，过滤，逐一加入该培养基中，充分混匀后4℃保存，另外取不加任何小分子的LONZA MSC无血清培养基作为对照培养基。

表2重编程培养基不同比例的配方

2、检测培养基对人成纤维细胞诱导为hiPSC的重编程效率，可采用如下方法：

a、重编程质粒转染：待人成纤维细胞长满后，取细胞0.5～2×10⁶，共为4组，其中3组为试验组，1组为为对照组，将携带重编程因子的质粒分别电转染上述4组细胞，之后将上述4组细胞接种于Matrigel或玻连蛋白或其它细胞基质包被的6孔或10-cm板中进行培养，3组实验组相应添加表2中一种比例的重编程培养基进行培养，对照组添加不加任何小分子的成纤维细胞培养基进行培养。

b、3组实验组在48小时后更换相应新鲜的重编程培养基，1组对照组在48小时后更换相应新鲜的不加任何小分子的成纤维细胞培养基，隔天将4组培养基进行换液，添加与起始培养基同样体积的新鲜的重编程培养基，即在无滋养层体系上进行重编程，继续培养至第10天。

c、10天后，观察到贴壁生长的细胞克隆团，将重编程培养基更换为TeSR1、E8或其它多能干细胞维持培养基，继续培养扩增，重编程15天后，挑取形态典型类似于人胚胎干细胞的克隆，对iPSC克隆进行计数。

3、检测表2中不同比例配方的重编程培养基对人成纤维细胞诱导为hiPSC的重编程效率的实验结果如下：

图4给出了表2中CA组重编程培养基培养hiPSC不同生长阶段的细胞形态图。图5给出了培养至15天后各组培养基中iPSC克隆数目进行计数。

综上，从实施例1和实施例2的结果可以看出，本发明的重编程培养基重编程效率高，重编程细胞谱系广，可以重编程培养人红细胞祖细胞、人成纤维细胞等其它体细胞。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种人类诱导多能干细胞的重编程培养基，其特征在于，所述重编程培养基包含用于培养人类体细胞的成体细胞培养基以及添加到成体细胞培养基中的细胞信号通路抑制剂；

所述细胞信号通路抑制剂选自糖原合成激酶3抑制剂、丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂和转化生长因子β抑制剂任意一种或者任意多种的组合。

2.根据权利要求1所述的一种人类诱导多能干细胞的重编程培养基，其特征在于，所述成体细胞培养基选自Essential 6培养基、MesenCult间充质干细胞无血清培养基、AdvcellR间充质干细胞无血清培养基、StemProR MSC SFM无血清培养基、Oricell无血清培养基、MSC Basal Medium、AdvCellHematopoietic Stem Cell Base Medium、Sciencell干细胞培养基系列、X-VIVO培养基、PC-1TM培养基、UltraMEM Reduced Serum培养基、Insect-XPRESSTM培养基、HL-1TM完全无血清培养基、UltraDOMA-PF无蛋白培养基、UltraCHOTM培养基中的任意一种。

3.根据权利要求1所述的一种人类诱导多能干细胞的重编程培养基，其特征在于，所述糖原合成激酶3抑制剂为CHIR99021。

4.根据权利要求3所述的一种人类诱导多能性干细胞的重编程培养基，其特征在于，所述丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂为PD0325901。

5.根据权利要求4所述的一种人类诱导多能性干细胞的重编程培养基，其特征在于，所述转化生长因子β抑制剂为A-83-01。

6.根据权利要求1所述的一种人类诱导多能干细胞的重编程培养基，其特征在于，所述细胞信号通路抑制剂选自糖原合成激酶3抑制剂、丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂和转化生长因子β抑制剂三种的任意组合，其中每升所述重编程培养基包含糖原合成激酶3抑制剂0.01-20μmol、丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂0.01-20μmol和转化生长因子β抑制剂0.01-20μmol。

7.根据权利要求1所述的一种人类诱导多能干细胞的重编程培养基，其特征在于，所述细胞信号通路抑制剂选自糖原合成激酶3抑制剂、丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂和转化生长因子β抑制剂三种的任意组合，每升所述重编程培养基包含糖原合成激酶3抑制剂0.1-10μmol、丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂0.1-10μmol和转化生长因子β抑制剂0.1-10μmol。

8.根据权利要求5所述的一种人类诱导多能干细胞的重编程培养基，其特征在于，所述细胞信号通路抑制剂选自CHIR99021、PD0325901和A-83-01三种的组合，其中每升所述重编程培养基包含CHIR99021 0.01-20μmol、PD0325901 0.01-20μmol和A-83-01 0.01-20μmol；

或者，所述细胞信号通路抑制剂选自CHIR99021和PD0325901两种的组合，其中每升所述重编程培养基包含CHIR99021 0.01-20μmol和PD0325901 0.01-20μmol；

或者，所述细胞信号通路抑制剂选自CHIR99021和A-83-01两种的组合，其中，其中每升所述重编程培养基包含CHIR99021 0.01-20μmol和A-83-01 0.01-20μmol。

9.根据权利要求5所述的一种人类诱导多能性干细胞的重编程培养基，其特征在于，所述细胞信号通路抑制剂选自CHIR99021、PD0325901和A-83-01三种的组合，其中每升所述重编程培养基包含CHIR99021 0.1-10μmol、PD0325901 0.1-10μmol和A-83-01 0.1-10μmol；

或者，所述细胞信号通路抑制剂选自CHIR99021和PD0325901两种的组合，其中每升所述重编程培养基包含CHIR99021 0.1-10μmol和PD0325901 0.1-10μmol；

或者，所述细胞信号通路抑制剂选自CHIR99021和A-83-01两种的组合，其中，其中每升所述重编程培养基包含CHIR99021 0.1-10μmol和A-83-01 0.1-10μmol。

10.根据权利要求1-9任一项所述的一种人类诱导多能干细胞的重编程培养基，其特征在于，所述人类体细胞选自人类间充质干细胞、人类红细胞祖细胞、人类成纤维细胞、人类神经细胞、人类血液细胞、人类肝细胞、人类肠细胞、人类间充质细胞、人类骨髓前体细胞和人类脾细胞中的任意一种。