CN108192870A - 人结肠癌原代细胞及其应用 - Google Patents

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姜霞
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Abstract

本发明公开了人结肠癌原代细胞及其应用，所述人结肠癌原代细胞为人结肠癌原代细胞CBZ，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2017149，所述人结肠癌原代细胞CBZ能够完成各类分子生物学实验，并且由于原代细胞实验结果较细胞株实验结果更可靠，且更接近临床个体实验结果，因此CBZ细胞的建立，对研究蒙古人种(黄种人)结肠癌的发病和治疗具有重要意义。

Description

人结肠癌原代细胞及其应用
技术领域
本发明涉及大肠癌肿瘤细胞领域，特别涉及人结肠癌原代细胞及其应用。
背景技术
结肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤，全球知名的结肠癌细胞株有SW480、SW620和HCT116三细胞株，但目前这三株细胞株涉及到了分子生物学实验结果与临床个体结果的差异大等问题，因此，亟需研发出一种实验结果更可靠，且更接近临床个体实验结果的结肠癌细胞株。
蒙古人种主要分布于中国、朝鲜、日本、西伯利亚、中南半岛、美洲和北极地区，是四大人种中分布范围最广、人数最多的人种，因此，蒙古人种(黄种人)结肠癌原代细胞的建立将对研究人结肠癌的发病和治疗具有重要意义。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
本发明的目的在于提供人结肠癌原代细胞及其应用，从而克服现有的结肠癌细胞株分子生物学实验结果与临床个体结果的差异大的缺陷。
为实现上述目的，本发明提供了一种人结肠癌原代细胞，所述人结肠癌原代细胞为人结肠癌原代细胞CBZ，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2017149。
优选地，上述技术方案中，所述人结肠癌原代细胞CBZ的癌胚抗原(CEA)的产量是0-0.06ng/106细胞/10天。
优选地，上述技术方案中，所述人结肠癌原代细胞CBZ的癌胚抗原的产量是0.01-0.04ng/106细胞/10天。
优选地，上述技术方案中，所述人结肠癌原代细胞CBZ的肿瘤相关抗原CA199的表达量为5-21U/106细胞/10天。
优选地，上述技术方案中，所述人结肠癌原代细胞CBZ的肿瘤相关抗原CA199的表达量为15-19U/106细胞/10天。
优选地，上述技术方案中，所述人结肠癌原代细胞CBZ的倍增时间为34-38小时。
优选地，上述技术方案中，所述人结肠癌原代细胞CBZ的倍增时间为36小时。
本发明还提供了上述人结肠癌原代细胞在炎症相关分析中的应用。
本发明还提供了上述人结肠癌原代细胞在制备抗肿瘤药物中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本申请所涉及的人结肠癌原代细胞CBZ是蒙古人种(黄种人)由来的结肠癌原代细胞，并且人结肠癌原代细胞CBZ能在5％CO2的培养条件下生长，且使用培养基为常见基础培养基RPMI-1640，也能够完成各类分子生物学实验，原代细胞CBZ具有白介素4,白介素17的表达量较SW480、SW620和HCT116三株细胞株表达量低等特点，因此人结肠癌原代细胞CBZ细胞的建立，对研究蒙古人种(黄种人)结肠癌的发病和治疗具有重要意义，特别是在炎症介导肿瘤相关研究领域有重要价值。
保藏信息
本发明所涉及的人结肠癌原代细胞CBZ(即保藏证明上所体现的“人结肠癌细胞CBZ”)已于2017年8月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072，保藏编号为CCTCC NO：C2017149。
附图说明
图1是根据本发明的人结肠癌原代细胞CBZ培养状态下在倒置显微镜下放大400倍的照片；
图2是根据本发明的人结肠癌原代细胞CBZ的HE染色后在倒置显微镜下放大400倍的照片；
图3是根据本发明的人结肠癌原代细胞CBZ的STR鉴定结果。
具体实施方式
下面结合附图，对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径可购得。
实施例1细胞培养
(1)组织前处理：选取0.5-1cm3结肠癌组织(结肠癌组织来源：签署知情同意书的河北医科大学第一医院就诊患者)，无菌生理盐水冲洗30s以上，清洗结肠癌组织表面的粪便成分，迅速置于含有高浓度抗生素(500U/mL青霉素，500μg/mL链霉素，1.25μg/mL两性霉素B，80μg/mL庆大霉素)的无血清RPMI-1640培养基中，浸泡5-10分钟后，更换新鲜含高浓度抗生素的无血清RPMI-1640培养基后再浸泡5-10分钟，浸泡过程中，不时颠倒摇晃，摇晃，6-10次/分钟，以更好地清洁；
(2)切块：将癌组织用手术刀切成1-3mm3的组织块；
(3)培养：将切好的组织块放入含抗生素的培养基中进行初期培养和正常培养，至细胞贴壁：
初期培养：用2ml含有抗生素(100-200U/mL青霉素，100-200μg/mL链霉素，0.25-0.5μg/mL两性霉素B)以及体积分数为20％胎牛血清的RPMI-1640培养基(完全培养基)培养组织24-72小时；
正常培养：初期培养结束后，用5ml RPMI-1640完全培养基培养组织，细胞完全贴壁生长后，继续培养传代至第2-5代时，将组织块去除，仅剩贴壁细胞。
本发明的RPMI-1640培养基为本领域常见的培养基。
实施例2形态学观察
通过在倒置显微镜下观察可以发现，实施例1培养出的人结肠癌原代细胞的细胞形态为类上皮样，与大肠上皮细胞FHC(CRL-1831TM,https://www.atcc.org/Products/All/CRL-1831.aspx#characteristics)形态相似，命名为人结肠癌原代细胞CBZ，并已于2017年8月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2017149，具体形状详见附图1；
将人结肠癌原代细胞CBZ进行HE染色后发现，其具有恶性肿瘤细胞的形态特征，细胞排列紊乱，失去正常的排列结构，细胞形状大小不一，详见附图2；
将人结肠癌原代细胞CBZ通过中国典型培养物保藏中心进行STR鉴定，结果证实其为单一人类来源，且无交叉污染的细胞，具体结果详见附图3。
实施例3生物学鉴定
将上述实施例培养出的人结肠癌原代细胞CBZ通过癌胚抗原检测试剂盒-酶联免疫法(上海晶都生物技术有限公司)进行三次检测，检测出的癌胚抗原的产量分别为0.01ng/106细胞/10天，0.03ng/106细胞/10天和0.04ng/106细胞/10天。
将上述实施例培养出的人结肠癌原代细胞CBZ通过CA199检测试剂盒-酶联免疫法(生工生物工程(上海)股份有限公司)进行三次检测，检测出的肿瘤相关抗原CA199的表达量分别为15U/106细胞/10天，17U/106细胞/10天和19U/106细胞/10天。
上述实施例培养出的人结肠癌原代细胞CBZ的倍增时间为36小时。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

Claims (9)

1.一种人结肠癌原代细胞，其特征在于，所述人结肠癌原代细胞为人结肠癌原代细胞CBZ，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2017149。
2.根据权利要求1所述的人结肠癌原代细胞，其特征在于，所述人结肠癌原代细胞CBZ的癌胚抗原的产量是0-0.06ng/106细胞/10天。
3.根据权利要求2所述的人结肠癌原代细胞，其特征在于，所述人结肠癌原代细胞CBZ的癌胚抗原的产量是0.01-0.04ng/106细胞/10天。
4.根据权利要求1所述的人结肠癌原代细胞，其特征在于，所述人结肠癌原代细胞CBZ的肿瘤相关抗原CA199的表达量为5-21U/106细胞/10天。
5.根据权利要求4所述的人结肠癌原代细胞，其特征在于，所述人结肠癌原代细胞CBZ的肿瘤相关抗原CA199的表达量为15-19U/106细胞/10天。
6.根据权利要求1所述的人结肠癌原代细胞，其特征在于，所述人结肠癌原代细胞CBZ的倍增时间为34-38小时。
7.根据权利要求6所述的人结肠癌原代细胞，其特征在于，所述人结肠癌原代细胞CBZ的倍增时间为36小时。
8.权利要求1所述的人结肠癌原代细胞在炎症相关分析中的应用。
9.权利要求1所述的人结肠癌原代细胞在制备抗肿瘤药物中的应用。
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