CN108169222A - 一种检测尿液肌酐的试剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医学检测技术领域,公开了一种检测尿液肌酐的试剂及其应用。本发明所述试剂包括A液和B液,述A液包含活性试剂、硅酸钠和甘露醇,所述活性试剂选自氢氧化钠、硼砂和氯化钾中的一种或两种;所述B液以乙醇为溶剂,包含聚乙二醇和3,5‑二硝基苯甲酸。本发明通过调整优化试剂中的组分,降低了尿液样本中各干扰因素对检测的影响,达到了较高的准确度和精密度,且线性关系在大范围内良好,可靠性高,弥补了现有同类产品在准确度和精密度方面不足的缺陷。
Description
技术领域
本发明涉及医学检测技术领域,具体涉及一种检测尿液肌酐的试剂及其应用。
背景技术
肌酐是肌肉在人体内代谢的产物,主要由肾小球滤过排出体外。人体90%的肌酸存在于肌肉中,而且大部分以磷酸肌酸的形式存在。磷酸肌酸脱去磷酸后生成肌酐,后者随尿液排除即为尿肌酐。正常人尿肌酐的日排出量相当稳定。当肾脏在受到各种病因的侵犯后,肾脏发生纤维化造成肾脏损伤,其排泄废物的功能有所降低,就造成了肌酐等毒素在体内的聚集,导致尿肌酐下降。测定尿肌酐就可以了解肾脏浓缩稀释功能以及肾小球滤过功能,省时、准确、经济,为临床诊断提供一种方便快捷的途径。
目前,市场上检测尿肌酐的试纸,大多是半定量的检测方法,只能给出大概的含量范围,而不能给出准确的含量。此外,由于不恰当的试剂选择易导致检测结果的精密度和准确度较差。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种检测尿液肌酐的试剂,使得所述试剂在检测尿液肌酐时具备较高的准确度和精密度;
本发明的另外一个目的在于提供以上述试剂为基础的试纸条,使得所述试纸条在检测尿液肌酐时具备较高的准确度和精密度,同时可以定量和半定量检测;
本发明的另外一个目的在于提供以上述试剂为基础的定量或半定量检测方法,使得所述检测方法在检测尿液肌酐时具备较高的准确度和精密度。
为了实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
一种检测尿液肌酐的试剂,包括A液和B液,所述A液包含活性试剂、硅酸钠和甘露醇,余量为水,所述活性试剂选自氢氧化钠、硼砂和氯化钾中的一种或两种;
所述B液以乙醇为溶剂,包含聚乙二醇和3,5-二硝基苯甲酸。
针对现有的检测尿液肌酐的产品在准确度和精密度方面不足的缺陷,本发明通过调整检测试剂的组成,显著提高了检测时的精密度以及准确度。
作为优选,所述A液包括活性试剂4-18%(w/v)、硅酸钠2.5%-2.6%(w/v)和甘露醇0.5%(w/v);更优选地,所述A液包括活性试剂9-18%(w/v)、硅酸钠2.5%-2.6%(w/v)和甘露醇0.5%(w/v);更优选地,所述A液的pH值为10-13;在本发明具体实施方式中,所述A液包括活性试剂15.95%(w/v)、硅酸钠2.5%(w/v)和甘露醇0.5%(w/v);或包括活性试剂15.85%(w/v)、硅酸钠2.53%(w/v)和甘露醇0.5%(w/v);或包括活性试剂10.85%(w/v)、硅酸钠2.56%(w/v)和甘露醇0.5%(w/v);或包括活性试剂10.2%(w/v)、硅酸钠2.6%(w/v)和甘露醇0.5%(w/v)。
作为优选,所述活性试剂选自氢氧化钠、硼砂和氯化钾三种;氢氧化钠和硼砂两种;或者氢氧化钠和氯化钾两种;在本发明具体实施方式中,所述活性剂中,氢氧化钠浓度一般选择为4-4.5%(w/v),硼砂浓度一般选择为5.2-5.7%(w/v),氯化钾浓度一般选择为6.25-6.55%(w/v);更具体地,所述活性剂中,氢氧化钠浓度选择为4%、4.2%或4.4%(w/v),硼砂浓度选择为5.3%或5.7%(w/v),氯化钾浓度选择为6.25%、6.35%或6.45%(w/v)。
作为优选,所述B液以乙醇为溶剂,包括聚乙二醇4.8%-5.2%(w/v)和3,5-二硝基苯甲酸0.6%-0.8%(w/v);在本发明具体实施方式中,所述B液以乙醇为溶剂,包括聚乙二醇4.2%(w/v)和3,5-二硝基苯甲酸0.6%(w/v);或者以乙醇为溶剂,包括聚乙二醇4.4%(w/v)和3,5-二硝基苯甲酸0.65%(w/v);或者以乙醇为溶剂,包括聚乙二醇4.6%(w/v)和3,5-二硝基苯甲酸0.7%(w/v);或者以乙醇为溶剂,包括聚乙二醇4.8%(w/v)和3,5-二硝基苯甲酸0.8%(w/v);更优选地,所述聚乙二醇为聚乙二醇6000。
同时,本发明还提出了所述试剂在制备检测尿液肌酐试纸条中的应用或在检测尿液肌酐中的应用。
依照应用本发明提供了一种检测尿液肌酐的试纸条,由载体滤纸依次经所述试剂的A液以及B液浸匀后烘干制备获得。更为具体地制备过程如下:
将载体滤纸在A液中浸匀,吸去多余溶液,干燥箱中烘干,烘干温度60℃,烘干时间30min;
将烘干的浸有A液的滤纸在B液中浸匀,吸去多余溶液,干燥箱中烘干,烘干温度60℃,烘干时间30min。
为了方便的操作和携带,所述试纸条可以裁切成条,粘贴在PVC片上,再裁切成合适的小条,所述规格以及最终产品的形状可以任意调整,这取决于实际的需求。
作为优选,所述载体滤纸为3MM或3级色谱层析滤纸。
根据制备的试纸条,本发明还能够对尿液试样进行定量或半定量的检测,其中半定量的检测方法为:
将标准梯度浓度的肌酐溶液分别滴加到所述的试纸条上,获得标准比色卡;
将尿液试样滴加到所述的试纸条上,根据显色结果比对标准比色卡上颜色和浓度的对应关系,获得半定量结果。
更为具体地,配制浓度为320mg/L的肌酐标准溶液,梯度稀释成320mg/dl、160mg/dl、80mg/dl、40mg/dl、20mg/dl、10mg/dl、0mg/dl8个浓度;把上述标准梯度浓度的肌酐溶液加至试纸条上,样本量为25ul,90秒后观察,可肉眼观察出从无色到深绿色的明显色阶,获得标准比色卡;加样本在试纸条上,样本量30ul,与标准比色卡比较,目测与样本卡最接近的标准比色卡所对应的浓度即为待测样本的浓度。
而定量检测尿液中肌酐的方法包括:
将标准梯度浓度的肌酐溶液分别滴加到所述的试纸条上,根据尿液分析仪绘制标准曲线;
将尿液试样滴加到所述的试纸条上,通过尿液分析仪获得检测值,根据标准曲线获得对应的肌酐浓度。
更为具体地,把所述试纸条装入专用卡壳和卡盒中,置于专用全自动尿液分析仪的试剂卡仓中,样本量30ul,反应时间90秒;
把前述标准梯度浓度的肌酐溶液置于全自动尿液分析仪的样本盘中,逐一检测,绘制标准曲线;
把样本置于全自动尿液分析仪的样本盘中,待检测结束后,仪器根据标准曲线自动计算出所测样本浓度。
根据实际检测试验结果,本发明具有较高的准确度,相对偏差小于3%,远低于标准要求的10%;精密度结果显示标准差率为2.7%,远小于标准要求的10%,表明本发明所述方法具有高精密度;线性关系试验结果显示,在0.0mg/dl-320.0mg/dl的范围内具有良好的线性度,R值为0.9999,接近于1。
此外,在本发明试剂组成上替换同类产品中的组分或删减部分组分,组成对照试剂产品进行对比,结果显示,对照产品的准确度和精密度均出现了较大差别,相关性R值为0.9316,CV值超过要求的10%。
由以上技术方案可知,本发明通过调整优化试剂中的组分,降低了尿液样本中各干扰因素对检测的影响,达到了较高的准确度和精密度,且线性关系在大范围内良好,可靠性高,弥补了现有同类产品在准确度和精密度方面不足的缺陷。
附图说明
图1所示为标准比色卡;其中,色块下方为其对应的浓度,单位为mg/dl。
具体实施方式
本发明公开了一种检测尿液肌酐的试剂及其应用,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明所述试剂及其相关应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的试剂及其相关应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
以下就本发明所提供的一种检测尿液肌酐的试剂及其应用做进一步说明。
实施例1:本发明所述试剂及试纸条
1、试剂组成
A液为:40g氢氧化钠(4%)、57.0g硼砂(5.7%)、62.5g氯化钾(6.25%)、25.0g硅酸钠(2.5%)、5g甘露醇(0.5%),纯化水定容至1000mL。
B液为:42g聚乙二醇(4.2%)、6.0g 3,5-二硝基苯甲酸(0.6%),用乙醇定容至1000mL。
2、试纸条的制备
将滤纸在A液中浸匀,吸去多余溶液,干燥箱中烘干,烘干温度60℃,烘干时间30min;
将烘干的浸有A液的滤纸在B液中浸匀,吸去多余溶液,干燥箱中烘干,烘干温度60℃,烘干时间30min。
干燥的滤纸裁切成条,粘贴在PVC片上,再裁切成合适的小条。
实施例2:本发明所述试剂及试纸条
1、试剂组成
A液为:42g氢氧化钠(4.2%)、53.0g硼砂(5.3%)、63.5g氯化钾(6.35%)、25.3g硅酸钠(2.53%)、5g甘露醇(0.5%),纯化水定容至1000mL。
B液为:44g聚乙二醇(4.4%)、6.5g 3,5-二硝基苯甲酸(0.65%),用乙醇定容至1000mL。
2、试纸条的制备
将滤纸在A液中浸匀,吸去多余溶液,干燥箱中烘干,烘干温度60℃,烘干时间30min;
将烘干的浸有A液的滤纸在B液中浸匀,吸去多余溶液,干燥箱中烘干,烘干温度60℃,烘干时间30min。
干燥的滤纸裁切成条,粘贴在PVC片上,再裁切成合适的小条。
实施例3:本发明所述试剂及试纸条
1、试剂组成
A液为:44g氢氧化钠(4.4%)、64.5g氯化钾(6.45%)、25.6g硅酸钠(2.56%)、5g甘露醇(0.5%),纯化水定容至1000mL。
B液为:46g聚乙二醇(4.6%)、7.0g 3,5-二硝基苯甲酸(0.7%),用乙醇定容至1000mL。
2、试纸条的制备
将滤纸在A液中浸匀,吸去多余溶液,干燥箱中烘干,烘干温度60℃,烘干时间30min;
将烘干的浸有A液的滤纸在B液中浸匀,吸去多余溶液,干燥箱中烘干,烘干温度60℃,烘干时间30min。
干燥的滤纸裁切成条,粘贴在PVC片上,再裁切成合适的小条。
实施例4:本发明所述试剂及试纸条
1、试剂组成
A液为:45g氢氧化钠(4.5%)、57.0g硼砂(5.7%)、26.0g硅酸钠(2.6%)、5g甘露醇(0.5%),纯化水定容至1000mL。
B液为:48g聚乙二醇(4.8%)、8.0g 3,5-二硝基苯甲酸(0.8%),用乙醇定容至1000mL。
2、试纸条的制备
将滤纸在A液中浸匀,吸去多余溶液,干燥箱中烘干,烘干温度60℃,烘干时间30min;
将烘干的浸有A液的滤纸在B液中浸匀,吸去多余溶液,干燥箱中烘干,烘干温度60℃,烘干时间30min。
干燥的滤纸裁切成条,粘贴在PVC片上,再裁切成合适的小条。
实施例5:半定量检测方法
(1)配制浓度为320mg/L的肌酐标准溶液,梯度稀释成320mg/dl、160mg/dl、80mg/dl、40mg/dl、20mg/dl、10mg/dl、0mg/dl8个浓度。
(2)把上述标准液加至试纸条上,样本量为30ul,90秒后观察,可肉眼观察出从无色到深绿色的明显色阶。
(3)加样本在试纸条上,样本量30ul,与标准比色卡比较,目测与样本卡最接近的标准比色卡所对应的浓度即为待测样本的浓度。标准比色卡如图1所示。
实施例6:定量检测方法
(1)把所述试纸条装入专用卡壳和卡盒中,置于专用全自动尿液分析仪的试剂卡仓中,样本量30ul,反应时间90秒。
(2)把实施例5中的标准液置于全自动尿液分析仪的样本盘中,逐一检测,绘制定标曲线。
(3)使用时,把样本置于全自动尿液分析仪的样本盘中,待检测结束后,仪器根据定标曲线自动计算出所测样本浓度。
实施例7:准确度分析
采用实施例1-3的试纸条,按照实施例6的方法对浓度分别为40mg/dl、80mg/dl、160mg/dl的肌酐标准品进行检测,其中,实施例1试纸条检测160mg/dl标准品,实施例2试纸条检测80mg/dl标准品,实施例3试纸条检测40mg/dl标准品,结果见表1。
表1
结果显示,本发明各试纸条检测结果相对偏差均小于标准要求的10%,表明本发明所述方法具有高准确度。
实施例8:精密度分析
采用实施例1的试纸条对任意一尿液试样,按照实施例6方法重复检测10次,结果见表2。
表2
结果显示,标准差率为2.7%,远小于标准要求的10%,表明本发明所述方法具有高精密度。此外,按照实施例2-4的试纸条进行检测,标准差分别为2.8%、2.8%和2.9%,均未超过3%。
实施例9:线性关系分析
采用实施例1的试纸条,以320mg/dl的高肌酐尿液试样为检测样品,将肌酐尿液样品稀释成7个不同的浓度,依次为0mg/dl、10mg/dl、20mg/dl、40mg/dl、80mg/dl、160mg/dl、320mg/dl,采用实施例1的试纸条和实施例6的检测方法对上述样品的每个浓度进行2次检测,计算相关系数R值,结果见表3。
表3
结果显示,R值为0.9999,接近于1,表明本发明试剂及其试纸条在0-320.0mg/dl的范围内具有极佳的线性度。此外,采用实施例2-4的试纸条进行线性分析,R值分别为0.9999、0.9997和0.9998。
实施例10:与对照品的对比试验
1、对照品1的对比试验
在实施例1的试纸条基础上,采用常用的甲醇溶剂替换本发明B液中的乙醇试剂,制成对照品1;
采用实施例1的试纸条以及对照品1,通过实施例6的检测方法,对同一个样本检测,每个样本检测10次,检测结果见表4
表4
结果显示,对照品1的CV值已经超过了要求的10%,表明本发明试纸条优选的甲醇溶剂精密度优于氯仿溶剂,表明本发明所述方法精密度好。
2、对照品2的对比试验
在实施例1的试纸条基础上,去掉本发明A液中的硼砂和氯化钾试剂,制成对照品2;
对已定值的20个样本,分别采用实施例1的试纸条以及对照品2,通过实施例6的检测方法检测,每个样本检测1次,检测结果见表5。
表5
结果显示,本发明试纸条与定值样本相关性良好,无论在准确度上还是在精密度上都优于对照品2,表明本发明所述方法准确度和精密度都较高。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种检测尿液肌酐的试剂,其特征在于,包括A液和B液,所述A液包含活性试剂、硅酸钠和甘露醇,所述活性试剂选自氢氧化钠、硼砂和氯化钾中的一种或两种;
所述B液以乙醇为溶剂,包含聚乙二醇和3,5-二硝基苯甲酸。
2.根据权利要求1所述试剂,其特征在于,所述A液包括活性试剂4-18%(w/v)、硅酸钠2.5%-2.6%(w/v)和甘露醇0.5%(w/v)。
3.根据权利要求1或2所述试剂,其特征在于,所述A液pH值为10-13。
4.根据权利要求1所述试剂,其特征在于,所述B液以乙醇为溶剂,包含聚乙二醇4.8%-5.2%(w/v)和3,5-二硝基苯甲酸0.6%-0.8%(w/v)。
5.根据权利要求1或4所述试剂,其特征在于,所述聚乙二醇为聚乙二醇6000。
6.权利要求1-5任意一项所述试剂在制备检测尿液肌酐试纸条中的应用或在检测尿液肌酐中的应用。
7.一种检测尿液肌酐的试纸条,其特征在于,由载体滤纸依次经权利要求1-5任意一项所述试剂的A液以及B液浸匀后烘干制备获得。
8.根据权利要求7所述试纸条,其特征在于,所述载体滤纸为3MM或3级色谱层析滤纸。
9.一种半定量检测尿液中肌酐的方法,其特征在于,包括:
将标准梯度浓度的肌酐溶液分别滴加到权利要求7或8所述的试纸条上,获得标准比色卡;
将尿液试样滴加到权利要求7或8所述的试纸条上,根据显色结果比对标准比色卡上颜色和浓度的对应关系,获得半定量结果。
10.一种定量检测尿液中肌酐的方法,其特征在于,包括:
将标准梯度浓度的肌酐溶液分别滴加到权利要求7或8所述的试纸条上,根据尿液分析仪绘制标准曲线;
将尿液试样滴加到权利要求7或8所述的试纸条上,通过尿液分析仪获得检测值,根据标准曲线获得对应的肌酐浓度。
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Legal Events
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180615 |
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