CN108165510A

CN108165510A - 一种用于肿瘤靶向治疗的复合益生菌菌剂及其制备方法

Info

Publication number: CN108165510A
Application number: CN201810052473.4A
Authority: CN
Inventors: 陈廷涛; 辛洪波; 孟凡景
Original assignee: Nanchang University
Current assignee: Nanchang University
Priority date: 2018-01-19
Filing date: 2018-01-19
Publication date: 2018-06-15

Abstract

本发明提供了一种用于肿瘤靶向治疗的复合益生菌菌剂及其制备方法，该技术方案基于各类益生菌的生理作用及其协同关系选择了青春双歧杆菌、卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌、阴道乳杆菌、约氏乳杆菌作物菌剂主体，在此基础上从用量配比、活菌数量等角度设计了复配方案，并提供了一种高效的制备方法。本发明菌剂可通过口服给药的方式实现肿瘤的靶向治疗，同时能与其他抗肿瘤药物产生协同作用促进其抗肿瘤效果。本发明安全无毒，无明显副作用，且不受肿瘤体积、类型的局限，对各类肿瘤均表现出量化的治疗效果。

Description

一种用于肿瘤靶向治疗的复合益生菌菌剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，进一步涉及益生菌的生理学应用及肿瘤的治疗，具体涉及一种用于肿瘤靶向治疗的复合益生菌菌剂及其制备方法。

背景技术

益生菌是指能够与宿主共存的且能产生促进宿主肠道微生物平衡效应物质的活性微生物，其作为商用制剂已有1000多年历史，被广泛应用于生物工程、工农业、食品安全以及生命健康领域。迄今为止，科学家已发现的益生菌大体上可分成三大类，其中包括：乳杆菌类、双歧杆菌类、革兰氏阳性球菌，此外，还有一些酵母菌与酶亦可归入益生菌的范畴。益生菌的作用主要可以概括为：预防或改善腹泻、缓解不耐乳糖症状、预防生殖系统感染、增强人体免疫力、促进肠道消化系统健康、降低血清胆固醇、预防骨质疏松症、帮助吸收营养成分等。而近年来，细菌在肿瘤治疗中的应用也已成为国内外研究的热点和难点问题。

肿瘤是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物，其主要特征是癌细胞不受限制、侵入性的倍增，并且可以转移身体的其他部位，是全球高发疾病。对于癌症的传统疗法如手术切除、放疗和化疗虽然广泛应用，但因个体差异，此类方法对多数患者几乎无效，且对身体还会造成一定的伤害，而市面上大多数抗癌药物特异性不强，导致产生系统性毒性。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种用于肿瘤靶向治疗的复合益生菌菌剂及其制备方法，以拓展肿瘤的治疗途径。

本发明要解决的另一技术问题是现有技术中常规治疗方法对肿瘤的治疗效果有待提升。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种用于肿瘤靶向治疗的复合益生菌菌剂及其制备方法，由活菌数比为1:1:1:1:1的青春双歧杆菌、卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌、阴道乳杆菌、约氏乳杆菌组成；所述复合益生菌菌剂中活菌数量为10⁹～10¹⁰个/g。

一种上述复合益生菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：

1)选菌活化：选取五种益生菌分别进行培养基活化；

2)混合离心：将步骤1)所得菌液按1:1:1:1:1的体积比混合后离心取菌体；

3)冻干：向步骤2)所得菌体中加入冻干粉保护剂，在冻干机中冻干。

作为优选，还包括以下步骤4)：加入奶粉并进行分装。

作为优选，步骤1)具体包括以下操作：取青春双歧杆菌、卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌、阴道乳杆菌、约氏乳杆菌的菌种，各自按培养基体积的5％分别接种于5mL MRS培养基中，于37℃恒温培养箱中培养过夜；分别取培养所得的五种菌液，各自按培养基体积的5％分别接种5mL MRS培养基中，二次活化；活化至PH＝4.2时终止。

作为优选，步骤3)中所述的冻干保护剂含有质量分数为10％的脱脂乳、质量分数为6％的海藻糖、质量分数为2％凝胶。

作为优选，步骤3)中加入的冻干保护剂总质量与菌体总质量相等。

作为优选，还包括以下步骤5)：步骤4)所得产物，加生理盐水按10～10⁶比例稀释，取50μL涂平板，过夜培养，进行活菌计数。

本发明基于实验手段发现某些细菌，尤其是益生菌，在癌细胞中选择性复制或者优先在肿瘤微环境中定殖。而当此细菌在肿瘤中大量繁殖后会导致炎症反应以及产生细胞活素，改变癌细胞生理状态，直接或间接杀死癌细胞。因此，可利用益生菌靶向治疗肿瘤。

使用本发明的益生菌菌剂进行肿瘤靶向治疗具有以下优势：

1)大部分细菌都具有一定毒性，在作为治疗剂使用时必须先剔除毒性基因进行减毒才能应用，而益生菌对人体安全无毒，可直接应用；

2)益生菌不仅有抗肿瘤作用，也能减轻抗肿瘤治疗的副反应，如肠道内微生物失调、免疫力下降、吸收不良、腹泻等；

3)抗肿瘤基因治疗的载体大部分传递效率低、时间短、血流动力学不稳定以及肿瘤靶向性不高，而益生菌的肿瘤特异性定殖则克服了上述缺点；

具体实施方式

以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。

实施例1

一种用于肿瘤靶向治疗的复合益生菌菌剂及其制备方法，由活菌数比为1:1:1:1:1的青春双歧杆菌、卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌、阴道乳杆菌、约氏乳杆菌组成；所述复合益生菌菌剂中活菌数量为10⁹个/g。

一种上述复合益生菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：

1)选菌活化：选取五种益生菌分别进行培养基活化；

在以上技术方案的基础上，满足以下条件：

还包括以下步骤4)：加入奶粉并进行分装。

步骤1)具体包括以下操作：取青春双歧杆菌、卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌、阴道乳杆菌、约氏乳杆菌的菌种，各自按培养基体积的5％分别接种于5mL MRS培养基中，于37℃恒温培养箱中培养过夜；分别取培养所得的五种菌液，各自按培养基体积的5％分别接种5mLMRS培养基中，二次活化；活化至PH＝4.2时终止。

步骤3)中所述的冻干保护剂含有质量分数为10％的脱脂乳、质量分数为6％的海藻糖、质量分数为2％凝胶。

步骤3)中加入的冻干保护剂总质量与菌体总质量相等。

还包括以下步骤5)：步骤4)所得产物，加生理盐水按10～10⁶比例稀释，取50μL涂平板，过夜培养，进行活菌计数。

实施例2

以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种用于肿瘤靶向治疗的复合益生菌菌剂及其制备方法，其特征在于由活菌数比为1:1:1:1:1的青春双歧杆菌、卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌、阴道乳杆菌、约氏乳杆菌组成；所述复合益生菌菌剂中活菌数量为10⁹～10¹⁰个/g。

2.权利要求1所述复合益生菌菌剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)选菌活化：选取五种益生菌分别进行培养基活化；

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于还包括以下步骤4)：加入奶粉并进行分装。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤1)具体包括以下操作：取青春双歧杆菌、卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌、阴道乳杆菌、约氏乳杆菌的菌种，各自按培养基体积的5％分别接种于5mL MRS培养基中，于37℃恒温培养箱中培养过夜；分别取培养所得的五种菌液，各自按培养基体积的5％分别接种5mL MRS培养基中，二次活化；活化至PH＝4.2时终止。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤3)中所述的冻干保护剂含有质量分数为10％的脱脂乳、质量分数为6％的海藻糖、质量分数为2％凝胶。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤3)中加入的冻干保护剂总质量与菌体总质量相等。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于还包括以下步骤5)：步骤4)所得产物，加生理盐水按10～10⁶比例稀释，取50μL涂平板，过夜培养，进行活菌计数。