CN108136055A - 用连接有标记、细胞毒或免疫调节基团的slc6a3配体检测与治疗肾细胞癌 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了用于ccRCC的诊断与治疗的方法和材料。因此，本发明涉及用于诊断或治疗有需要的个体中的透明细胞肾细胞癌(ccRCC)的方法，其中所述方法包括使用连接有放射性标记、细胞毒性部分或免疫调节部分的SLC6A3配体。

Description

用连接有标记、细胞毒或免疫调节基团的SLC6A3配体检测与 治疗肾细胞癌
技术领域
本发明涉及用于检测透明细胞肾细胞癌(ccRCC)的材料和方法。特别地，本发明涉及多巴胺转运蛋白配体用于检测ccRCC的用途。
发明背景
肾细胞癌(RCC)约占成人癌症病例的3％，是第二常见的泌尿系统肿瘤。瑞典每年大约有1000例RCC。RCC的主要类型是ccRCC、乳头状RCC和嫌色细胞型RCC，其预后和治疗指征不同。ccRCC是迄今为止最常见的类型，约占所有RCC的75％。
局部的ccRCC肿瘤具有良好的预后，其中患者进行肾切除术(去除受影响的肾脏)，并且5年存活率约为85-90％。然而，三分之一的患者在诊断时已经出现转移。传播性疾病的患者预后极差，5年生存率约为20％。因此，需要早期检测RCC的方法。
由于常见的抗肿瘤疗法如细胞抑制剂和放射疗法对RCC没有或只有非常有限的作用，目前用于转移性疾病的治疗方案是基于使用小激酶抑制剂如索拉非尼和舒尼替尼或mTOR抑制剂如坦罗莫司抑制血管生成，但是抗性的发展仍然是一个巨大的问题并且临床益处有限。
计算机断层扫描(CT)和磁共振(MR)成像在历史上已经被用于根据形态学标准(RECIST，一种基于病变大小变化的分类)评估肿瘤对治疗的反应。使用18F-FDG-PET(18F与葡萄糖类似物2-氟-2-脱氧-D-葡萄糖组合)的功能成像被广泛用于实体癌症的检测和成像。该方法基于这样的观察，即肿瘤比周围组织更具代谢活性，因此代谢更多的糖。18F-FDG-PET也已经被用于研究RCC，最近的报道表明它可能能够用于预测用TKI治疗的患者的无进展存活。但是，应该指出的是，RCC中18F-FDG的摄取程度相对较低，这限制了可检测病灶的大小。此外，在其他非恶性病症例如慢性炎症和感染期间也可以观察到摄取。此外，18F-FDG-PET不能用于区分RCC的不同亚型。由于RCC的不同亚型对现有的不同治疗方式的反应不同，这变得越来越重要。
发明概述
因此，对ccRCC改进检测和治疗模式的需求仍未得到满足。例如，需要用于检测ccRCC的方法和/或区分局部和转移疾病的方法。
本发明提供了检测ccRCC的新方法。本发明的方法基于出乎意料的发现，即与正常肾细胞和其他RCC亚型相比，ccRCC细胞显示增强的[3H]-多巴胺摄取。在神经元的突触间隙中，多巴胺借助溶质载体家族成员3(SLC6A3，也被称为“多巴胺转运蛋白”)转运进入细胞。本发明证实，ccRCC表达功能性SLC6A3，其可以介导多巴胺的摄取，而正常肾根本不表达SLC6A3。功能性SLC6A3的表达可用于本文所述的诊断和/或治疗方法中。
先前各种基于阵列的关于RCC中差异基因表达的研究已经表明，至少SLC6A3RNA的片段在RCC中以高水平表达(参见例如Skubitz and Skubitz,2002)。然而，如在Skubitz和Skubitz中的基于阵列的平台的结果仅仅指示了转录本的存在，但是没有提供关于功能性蛋白质存在的任何信息。例如，当使用基于阵列的平台时，探针总是具有与其它转录物交叉反应的风险，尤其是在包含超过300个成员的大的同源基因家族(例如溶质载体家族)的情况下。此外，当使用基于阵列的平台时，不可能知道所表达的转录物是否以其功能形式表达，例如，转录物以替代剪接形式表达或者是错误启动缺乏编码蛋白质能力的无功能转录物的后果(Chen and Weiss,Oncogene 2015)。有许多关于这种肿瘤特异性异常转录物的报道。另外，已经广泛确定的是，miRNA能够调节基因翻译而不影响mRNA水平。因此，高mRNA水平不一定与蛋白质水平升高和/或蛋白质功能升高相关。
SLC6A3介导从神经元的突触间隙重摄取多巴胺。SLC6A3的功能高度依赖于具有高细胞外浓度的Na+梯度(Torres et al.,2003)。两个Na+离子和一个Cl-离子结合SLC6A3，并诱导构象变化，其中离子与一分子多巴胺被共同运输到细胞内空间(Sonders et al.,1997)。Na+梯度是通过质膜Na+/K+ATP酶的作用实现的。较低的Na+浓度介导了[3H]-多巴胺摄取的减少以及体外摄取的最大速度的降低(Wheeler et al.,1993)。因此，认为突触间隙的微环境对SLC6A3蛋白作为多巴胺转运蛋白的功能至关重要。
本发明出乎意料地证明，即使在与多巴胺能突触间隙的微环境非常不同的ccRCC肿瘤的微环境中，SLC6A3蛋白也是有功能的。因此，SLC6A3可以用作使用由SLC6A3特异性转运的化合物或与SLC6A3结合的化合物来诊断和治疗ccRCC的靶标。这些化合物可以与细胞毒性部分、免疫调节部分或放射性标记连接，用于ccRCC的高度特异性治疗或成像。
因此，本发明的一个方面是提供药剂，其包含连接有放射性标记、细胞毒性部分或免疫调节部分的SLC6A3配体或由其组成，用于诊断或治疗个体中透明细胞肾细胞癌(ccRCC)的方法中。
本发明的另一个方面是提供用于诊断个体中ccRCC的方法，所述方法包括以下步骤：
a)向个体施用包含连接有放射性标记的SLC6A3配体或由其组成的药剂，
b)检测所述药剂在所述个体的中枢神经系统之外的局部存在，
其中所述药剂在所述个体的中枢神经系统之外的局部存在指示所述个体中存在ccRCC或转移的ccRCC。
本发明的另一个方面是提供治疗有需要的个体中ccRCC的方法，所述方法包括以药物有效量向所述个体施用药剂，所述药剂包含连接有放射性标记、细胞毒性部分或免疫调节部分的SLC6A3配体或由其组成。
附图说明
图1显示了SLC6A3和对照的表达。小图A显示总结了25种不同肿瘤类型的癌症基因组图谱(TCGA)数据集中原始型缺氧诱导的基因CAIX的表达的框形图(log2表达，N＝正常，T＝肿瘤)。小图B显示总结了在TCGA数据集中表示的25种不同肿瘤类型中SLC6A3表达的框形图(log2表达，N＝正常，T＝肿瘤)。
1.肾上腺皮质癌(ACC)，2.膀胱尿路上皮癌(urothelial bladder cancerBLCA)，3.乳腺癌(BRCA)，4.宫颈癌(CESC)，5.结肠腺癌(COAD)，6.多形性胶质母细胞瘤(GBM)；7.头颈部鳞状细胞癌(HNSC)，8.肾嫌色细胞癌(KICH)，9.肾透明细胞癌(KIRC)，10.乳头状肾癌(KIRP)，11.低级别胶质瘤(LGG)，12.肝细胞肝癌(LIHC)，13.肺腺癌(LUAD)，14.肺鳞状细胞癌(LUSC)，15.间皮瘤(MESO)，16.卵巢浆液性囊腺癌(ovarian serouscystadenocarcinoma,OV)，17.胰腺导管腺癌(PAAD)，18.嗜铬细胞瘤和副神经节瘤(PCPG)，19.前列腺癌(PRAD)，20.直肠腺癌(READ)，21.肉瘤(SARC)，22.皮肤黑素瘤(SKCM)，23.乳头状甲状腺癌(THCA)，24.子宫体子宫内膜癌(UCEC,uterine corpus endometrialcarcinoma)和25.子宫癌肉瘤(UCS)。
小图C显示SLC6A3在正常组织样品中的表达，显示该基因在CNS的特定区域中表达，但在正常肾脏中不表达。353个死后样品中的SLC6A3基因表达的框形图(log2表达)，所述样品收集自人类中枢神经系统(CNS)和45个非CNS组织(GSE3526；Roth et al.)的20个解剖学不同位点。样品1和2分别是黑质和腹侧区域。样品33和59分别是肾髓质和肾皮质。小图D显示53种正常组织类型的SLC6A3表达的框形图(线性表达)，20号：脑黑质，34号：正常肾。数据源自GTEx门户版本V6。
图2显示基于531个ccRCC(A)，127个正常肾样品(B)，66个嫌色细RCC(C)和237个乳头状RCC(D)的TCGA队列的分析，通过SLC6A3的15个编码外显子(5'至3')的基因特异性读数的分布。每个外显子的中值读数均匀分布在基因上，表明ccRCC队列中的基因正常起始和读通。
图3显示了来自同一患者的原代肾细胞癌细胞(1)和匹配的原代正常肾细胞(2)随时间(分钟)对[3H]-多巴胺的摄取。通过与每个测定孔的[3H]-多巴胺的pmol有关的放射性评估摄取。
图4：用5.36MBq(123I-Ioflupan)注射的小鼠的SPECT/CT图像。在注射后1h和35分钟取图，在注射KMRC-3细胞的左肾中显示(123I-Ioflupan)的摄取，而在对侧肾中没有检测到信号。
图5显示在16个匹配的原代ccRCC肿瘤(ccrcc)和转移(ccrcc.met)中SLC6A3的表达分析。SLC6A3在原代ccRCC(1)和35个转移(2)中均有表达。来自GSE23629(López-LagoMA，2010)
图6显示SLC6A3表达存在于原代ccRCC、KMRC3和SNU-349中，但在其他常规细胞系中丢失。
小图A显示ccRCC-细胞系和作为对照的乳腺癌细胞系MCF7中的SLC6A3的相对mRNA表达。1.SNU-349，2.KMRC3，3.SKRC10，4.RCC4，5.RCC4+VHL，6.RCB1963，7.SKRC7，8.SKRC17，9.SKRC21，10.786-O，11.WT7，12.MCF7。小图B显示在来自匹配的正常(1)和肿瘤(2)的原代肾细胞(3-6)的短期培养物中SLC6A3的相对mRNA表达，并显示在肿瘤样品p＝0.025(配对的双尾学生t检验)中显示上调的SLC6A3。以平均值±SEM表示数据，并且mRNA水平与看家基因SDHA、UBC和YWHAZ有关。
图7显示原代ccRCC细胞主动摄取多巴胺。
小图A显示在不存在(3)或存在竞争性未标记多巴胺2μM(4)或20μM(5)的情况下，暴露于[3H]多巴胺的匹配肿瘤(1)和正常(2)样品的短期培养的原代肾细胞中[3H]多巴胺的摄取。通过与每个测定孔的[3H]多巴胺的pmol有关的放射性评估摄取。小图B显示如(A)中处理的四个短期培养的原代ccRCC细胞样品(4-7)中的[3H]多巴胺的摄取。对照(1)，2μM竞争性未标记多巴胺(2)或20μM竞争性未标记多巴胺(3)。以平均值±SD表示数据。使用双尾学生t检验计算统计显著性，*p<0.05；**p<0.01；***p<0,001。
图8显示使用特异性SLC6A3抑制剂可以减少ccRCC细胞系中的多巴胺摄取。
小图A显示在通过冰冷的洗涤缓冲液停止摄取前，在不存在(1)或存在(2)30nMGBR12935 5分钟的情况下SKRC10细胞对[3H]多巴胺的摄取。小图B显示在通过冰冷的洗涤缓冲液停止摄取前，在不存在(1)或存在GBR12909 10nM(2)、30nM(3)或90nM(4)5分钟的情况下KMRC3细胞对[3H]多巴胺的摄取。小图C显示在通过冰冷的洗涤缓冲液的停止摄取前，在不存在(1)或存在GBR1290910nM(2)、30nM(3)或90nM(4)5分钟的情况下SNU-349细胞对[3H]多巴胺的摄取。通过与每个测定孔的[3H]多巴胺的pmol(A)和与每μg蛋白质的[3H]多巴胺的pmol(B-C)相关的放射性评估摄取。以平均值±SEM表示数据。使用双尾配对学生t检验计算统计显著性，*p<0.05；**p<0.01；***p<0,001。
发明详述
定义
如本文所用的术语“烷氧基”是指-O-烷基。优选烷氧基为C1-6-烷氧基，例如C1-3-烷氧基。
如本文所用的术语“烷基”是指饱和的直链或支链烃链。该烃链优选含有一至六个碳原子(C1-6-烷基)，包括甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，异戊基，新戊基，叔戊基，己基和异己基。
如本文所用的术语“烯基”是指含有至少一个双键的饱和的直链或支链烃链。所述烃链优选含有2-6个碳原子(C2-6-烯基)。烯基优选可以是含有一个或多个双键的上述烷基(甲基除外)中的任何一种。
如本文所用的术语“苯异丙胺类似物”是指特异性结合SLC6A3并且通过SLC6A3跨细胞膜转运且不以任何显著亲和力与多巴胺受体结合的化合物。因此，苯异丙胺类似物优选以结合多巴胺受体的至少3倍的亲和力例如至少5倍的亲和力结合SLC6A3。因此，苯异丙胺类似物是具有类似于SLC6A3的功能的化合物。
如本文所用的术语“芳基”是指通过从环中的C除去一个-H而从芳烃衍生的取代基。用于本发明的有用的芳基的实例包括苯基，萘基，蒽基，菲基(phenanthrenyl)和芘基。
如本文所用的术语卤素是指选自由以下组成的组的取代基：-F，-Cl，-Br和-I。
如本文所用的术语“杂芳基”是指通过从所述杂芳烃的环结构中的原子除去一个-H而从杂芳烃衍生的取代基。杂芳烃是在环结构中包含一个或多个杂原子的单环或多环芳族化合物。所述杂原子优选选自由以下组成的组：S，N和O。
如本文所用的术语“ccRCC”是指透明细胞肾细胞癌。ccRCC通常以具有透明细胞质的恶性上皮细胞为特征。ccRCC显示肿瘤抑制基因von Hippel Lindau(VHL)几乎全部丢失，并且ccRCC的典型特征在于强烈的血管生成诱导，同时显示基于糖酵解的独特代谢谱。
如本文所用的术语“可卡因类似物”是指特异性结合SLC6A3但不被SLC6A3跨细胞膜转运且不以任何显著亲和力与多巴胺受体结合的化合物。因此，可卡因类似物优选以结合多巴胺受体的至少3倍的亲和力例如至少5倍的亲和力结合SLC6A3。因此，可卡因类似物是具有与可卡因相似的类似于SLC6A3的功能的化合物。
如本文所用的术语“SLC6A3配体”是指特异性结合SLC6A3和/或被SLC6A3特异性跨细胞膜转运的化合物。例如，SLC6A3配体可以是一种化合物，其被SLC6A3从周围环境中跨细胞膜转移到细胞质中。优选SLC6A3配体对SLC6A3具有至多100nM的Ki的亲和力。此外，SLC6A3配体优选对SLC6A3具有的亲和力是对SERT的亲和力的至少10倍。还优选SLC6A3配体对SLC6A3的亲和力高于对多巴胺受体的亲和力。
本文所用的与有机化合物有关的术语“用X取代”是指所述有机化合物的一个氢分子被X取代。
药剂
本发明涉及药剂，其包含连接有放射性标记、细胞毒性部分或免疫调节部分的SLC6A3配体或由其组成。
所述药剂在一个实施方案中可以由连接有放射性标记、细胞毒性部分或免疫调节部分的SLC6A3配体组成。
SLC6A3配体可以是本文以下在“SLC6A3配体”部分中描述的任何SLC6A3配体，例如表1中列出的任何化合物。放射性标记可以是本文以下在“放射性标记”部分中提到的任何标记。细胞毒性部分或免疫调节部分可以是本文以下在“细胞毒性或免疫调节部分”部分中描述的任何细胞毒性或免疫调节部分。
SLC6A3配体可通过任何合适的手段连接有所述放射性标记、细胞毒性部分或免疫调节部分，但在本发明的一个实施方案中，SLC6A3配体与所述放射性标记、细胞毒性部分或免疫调节部分共价连接。SLC6A3配体可以通过一个共价键直接连接至放射性标记、细胞毒性部分或免疫调节部分，但是本发明也包括SLC6A3配体通过接头连接至放射性标记，细胞毒性部分或免疫调节。
通常，当SLC6A3配体连接有放射性标记时，那么这是通过所述SLC6A3配体的至少一个原子用所述原子的放射性同位素取代来实现的。或者，SLC6A3配体可以通过共价键与放射性同位素连接。
在本发明的SLC6A3配体连接至细胞毒性部分或免疫调节部分的实施方案中，这通常可以是通过短接头。
如本文以下在“治疗方法”部分所述的，本发明的药剂可以用于治疗ccRCC。例如本文以下在“诊断方法”部分中描述的，本发明的药物还可以用于诊断ccRCC的诊断方法。
诊断方法
在一个实施方案中，本发明涉及用于诊断ccRCC的方法中的药剂。在这样的实施方案中，所述药剂优选包含连接有放射性标记的SLC6A3配体。
诊断方法通常包括以下步骤：
a)向个体施用包含连接有放射性标记的SLC6A3配体或由其组成的药剂，
b)检测所述药剂在所述个体的中枢神经系统之外的局部存在。
SLC6A3配体可以连接至放射性标记，例如SLC6A3配体可以通过共价键连接至放射性标记。本发明还包括连接有放射性标记的SLC6A3配体是SLC6A3配体，其中至少一个原子已被交换为放射性同位素，例如本文以下在“放射性标记”部分中描述的任何放射性标记。
SLC6A3配体可以是本文以下在“SLC6A3配体”部分中描述的任何SLC6A3配体。用于诊断方法中的SLC6A3配体在一些实施方案中可以是SLC6A3配体，其能够特异性结合SLC6A3，但不通过SLC6A3跨细胞膜转运。因此，用于本发明诊断方法的SLC6A3配体可以是例如可卡因类似物。
用于本发明的诊断方法中的药剂可以例如包含下表1中提及的任何化合物或由其组成。
SLC6A3配体通过任何有用的手段施用。通常，包含SLC6A3配体的药剂被制备用于肠胃外施用。
肠胃外施用是不是口服/肠内途径的任何施用途径，药物由此避免肝脏内的首过降解。因此，肠胃外施用包括任何注射和输注，例如大量注射(bolus injection)或连续输注，例如静脉内施用，肌肉内施用，皮下施用。而且，肠胃外施用包括吸入和局部施用。
在一个实施方案中，制备包含SLC6A3配体的药剂用于静脉内施用。所述静脉内施用可以通过注射一个或多个剂量来施用。连接有放射性标记的一些SLC6A3配体，例如Ioflupane(123I)，以制备用于静脉内施用的剂量单位的形式市售可得。
静脉内施用可以以任何合适的方式进行，例如通过外周静脉内插管。
当使用与放射性碘连接的SLC6A3配体时，可能优选阻断甲状腺对放射性碘的摄取。这可以通过给个体施用碘来实现，例如通过施用碘盐，例如碘化钾。所述碘盐可以通过任何合适的途径施用，例如通过口服施用。典型地，所述碘盐可在连接有放射性碘的SLC6A3配体的施用之前和/或之后施用，例如，在连接有放射性碘的SLC6A3配体的施用之前1至3小时和/或之后12至36小时的范围内。
在将包含SLC6A3配体的药剂施用于个体后，检测到SLC6A3的局部存在。通常，在施用和检测之间必须经过至少一段时间，因为在进行检测之前SLC6A3需要足够的时间定位到表达SLC6A3的组织。因此，例如可以在施用包含SLC6A3配体的药剂后1至24小时，例如1至12小时，例如2至8小时，例如3至6小时进行检测。
检测可以通过任何有用的方法来完成。一些检测方法可能对检测某些放射性同位素更有用，而其他检测方法对于检测其他放射性同位素更有用。
在一个实施方案中，使用γ射线的成像技术来检测药剂的存在。当SLC6A3配体与发射γ的放射性同位素连接时，情况可能如此。使用γ射线的成像技术可以例如是使用γ照相机的常规核医学平面成像，或者可以是单光子发射计算机断层扫描(SPECT)。这样的方法可以例如在SLC6A3连接有123I的实施方案中是有用的。
在另一个实施方案中，使用成像技术检测药剂的存在，所述成像技术检测由发射正电子的放射性核素间接发射的γ射线对。这种成像技术的一个例子是正电子发射断层扫描(PET)。在一些实施方案中，PET可以有利地与CT扫描结合。因此，药剂的存在可以通过PET或PET/CT来确定。这样的方法可以例如在SLC6A3连接至放射性标记例如125I的实施方案中是有用的。
如上所解释的，SLC6A3通常主要在中枢神经系统的多巴胺能神经元中表达。因此，SLC6A3配体可以定位于中枢神经系统，并且特别是脑部。然而，SLC6A3一般不在其他组织中以任意可感知的水平表达，并且特别是SLC6A3在正常肾脏中不表达。
此外，如本文所公开的，ccRCC在原代肿瘤和转移中以高水平表达SLC6A3，而分析的其他恶性肿瘤不以任何可感知的水平表达SLC6A3。
因此，如果SLC6A3配体定位于中枢神经系统之外的组织，则表明个体患有ccRCC。由于原代ccRCC定位于肾脏，因此SLC6A3配体在中枢神经系统之外和肾脏之外的局部存在表明转移的ccRCC。
诊断转移的ccRCC的一种方法是将包含连接有放射性标记的SLC6A3配体的药剂施用于个体，并检测所述SLC6A3配体在所述个体的淋巴结中的局部存在。所述SLC6A3配体在淋巴结中的局部存在指示所述个体中转移的ccRCC。淋巴结可以是任何淋巴结，但是经常可以调查最接近肾脏的淋巴结。
在一个实施方案中，用于诊断ccRCC的方法包括向个体施用包含连接有放射性标记的SLC6A3配体的药剂，并检测药剂在所述个体的肾中的存在。所述药剂在个体肾脏中的存在表明存在ccRCC。
治疗方法
在一个实施方案中，本发明涉及用于治疗ccRCC的方法中的药剂。在此类实施方案中，所述药剂优选包括以药学有效量将包含连接有放射性标记、细胞毒性部分或免疫调节部分的SLC6A3配体或由其组成的药剂施用于有需要的个体。
SLC6A3配体可以连接至放射性标记，例如SLC6A3配体可以通过共价键连接至放射性标记。所述放射性标记优选为放射性同位素，其发出足够的辐射以产生细胞毒性，或者可以被诱导发出足够的辐射以产生细胞毒性。这样的放射性同位素也可以被称为“具有细胞毒性的放射性标记”。例如，放射性标记可以是β发射体，例如131I。有用的放射性标记的例子是本文以下在“放射性标记”部分中描述的。
用于治疗ccRCC的方法中的SLC6A3配体还可以与细胞毒性部分和/或免疫调节部分(例如本文以下在“细胞毒性或免疫调节部分”部分中所述的任何部分)连接。
SLC6A3配体可以是本文以下在“SLC6A3配体”部分中描述的任何SLC6A3配体。
用于治疗方法中的SLC6A3配体在一些实施方案中可以是SLC6A3配体，其能够特异性结合SLC6A3，但不被SLC6A3跨细胞膜转运。因此，用于本发明诊断方法中的SLC6A3配体可以是例如可卡因类似物。这在SLC6A3配体连接至放射性标记的实施方案中可能尤其如此。
用于治疗方法中的SLC6A3配体在一些实施方案中可以是SLC6A3配体，其能够特异性结合SLC6A3并且被SLC6A3跨细胞膜转运。因此，用于本发明诊断方法中的SLC6A3配体可以是例如苯异丙胺类似物。这在SLC6A3配体连接至细胞毒性部分或免疫调节部分的实施方案中可能尤其如此。
SLC6A3配体通过任何有用的手段施用。通常，制备包含SLC6A3配体的药剂用于肠胃外施用。肠胃外施用可以如上文“诊断方法”部分所述。
在一个实施方案中，制备用于治疗ccRCC的包含SLC6A3配体的药剂用于静脉内施用。所述静脉内施用可以通过注射一个或多剂量来施用。通常，所述药剂的多次施用可能是有利的，例如在1至100次施用的范围内，例如在1至50次施用的范围内。
静脉内施用可以以任何合适的方式进行，例如通过外周静脉内插管。
SLC6A3配体
待用于本发明的SLC6A3配体可以是能够与SLC6A3特异性结合的任何化合物。SLC6A3也被称为多巴胺转运蛋白。人类SLC6A3的序列可在UniProt数据库中以登录号Q01959-1获得。有关的序列已于1993年4月1日输入数据库。
多巴胺能够结合几种膜蛋白，包括SLC6A3以及多巴胺受体。在一个实施方案中，优选SLC6A3配体能够以比多巴胺受体高得多的亲和力与SLC6A3结合。因此，SLC6A3配体可以结合多巴胺受体的至少3倍、例如至少5倍的亲和力与SLC6A3结合。
在本发明的一些实施方案中，SLC6A3可以是苯异丙胺类似物。这在涉及其中SLC6A3配体连接至细胞毒性部分或免疫调节部分的用于治疗ccRCC的方法的本发明的实施方案中可能尤其如此。
在本发明的一些实施方案中，SLC6A3可以是可卡因类似物。这在涉及其中SLC6A3配体连接至放射性标记的诊断方法和/或治疗方法的本发明的实施方案中可能尤其如此。
在涉及治疗方法的本发明的实施方案中，进一步优选SLC6A3配体不能通过血脑屏障。不通过血脑屏障的SLC6A3配体的非限制性实例是FMIP(参见例如De Bruyne et al.，2009和2010)
通常优选SLC6A3配体对SLC6A3具有高亲和力。因此，优选SLC6A3配体对SLC6A3具有至多100nM的Ki的高亲和力。Ki是抑制常数，并且可以如例如Boos et al.,2006和其中所述的参考文献中尤其如Greiner et al.,2003中所述进行测定。Ki也可以如Hong et al.,2016以及其中所述的参考文献进行测定。
也可以优选SLC6A3配体对SLC6A3具有Kd至多10,000nM，优选至多1000nM的高亲和力。Kd是解离常数，并且可以如例如Huot et al.,2015中所述和在其中所述的参考文献中所述进行测定。
此外，优选SLC6A3配体对SLC6A3具有高特异性。因此，如上所述，优选的是SLC6A3配体以与多巴胺受体相比更高的亲和力与SLC6A3结合。因此，SLC6A3配体针对多巴胺受体的Kd优选为SLC6A3配体针对SLC6A3的Kd的至少3倍，例如至少5倍。
还优选SLC6A3配体结合SLC6A3的亲和力比远高于结合5-羟色胺受体(SERT)。因此，优选SLC6A3配体针对SERT的Ki是SLC6A3配体针对SLC6A3的Ki的至少5倍，优选至少10倍。还优选SLC6A3配体相对于SERT的Kd是SLC6A3配体相对于SLC6A3的Kd的至少5倍，优选至少10倍。
在本发明的一个实施方案中，SLC6A3配体是莨菪烷(tropane)衍生物或去甲莨菪烷(nortropane)衍生物。莨菪烷是下式的化合物：
本发明的莨菪烷的衍生物是其中莨菪烷的一个或多个氢被另一个取代基取代的化合物。
去甲莨菪烷是下式的化合物：
本发明的去甲莨菪烷的衍生物是其中去甲莨菪烷的一个或多个氢被另一个取代基取代的化合物。
例如，SLC6A3配体可以是在3位用苯基取代的莨菪烷或去甲莨菪烷，其中所述莨菪烷、去甲莨菪烷和苯基任选可以进一步被一个或多个取代基取代。
在本发明的一个实施方案中，SLC6A3配体可以是式I的化合物：
其中，
R1是-H、C1-6-烷基、C2-6-烯基、苯基或苄基，其中所述C1-6-烷基、C2-6-烯基、苯基或苄基可以任选被一个或多个卤素或NH2取代；
R2是CO2-R6，C＝NO-R6或杂芳基-R6，其中R6是C1-6-烷基、C2-6-烯基、苯基或苄基，其中所述C1-6-烷基、C2-6-烯基、苯基或苄基任选可以被一个或多个卤素取代；
R3是C1-3-烷基、卤素或杂芳基，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代；和
R4和R5各自是-H、C1-3-烷基或卤素，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代。
在一个实施方案中，R1可以例如是C1-6-烷基或C2-6-烯基，其中所述C1-6-烷基或C2-6-烯基任选可以被一个或多个卤素取代。
在一个实施方案中，R1可以是C1-6-烷基、C2-6-烯基、苯基或苄基，其中所述C1-6-烷基、C2-6-烯基、苯基或苄基可任选被一个或多个卤素取代。在另一个实施方案中，R1可以是C1-4-烷基或C2-4-烯基，其中所述C1-4-烷基或C2-4-烯基任选可以被卤素取代。
因此，例如，R1可以是C1-4-烷基或C2-4-烯基，其中所述C1-4-烷基或C2-4-烯基被至少一个卤素取代。所述卤素特别可以选自由-F和-I组成的组。
在一个实施方案中，R2可以是CO2-R6，其中R6可以是C1-6烷基或C2-6烯基，其中所述C1-6烷基或C2-6烯基任选可以被一个或多个卤素取代。
在一个实施方案中，R2可以是CO2-R6，其中R6是C1-4烷基，其中所述C1-4烷基任选可以被卤素取代。
因此，例如R2可以是CO2-R6，其中R6可以是C1-4-烷基，其中所述C1-4-烷基被至少一个卤素取代。所述卤素特别可以选自由-F和-I组成的组。
在一个实施方案中，R2是CO2-R6，其中R6是未取代的C1-3-烷基，例如甲基。
在一个实施方案中，R3是C1-3-烷基或卤素，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代。
在一个实施方案中，R3是甲基或卤素。所述卤素可以是任何卤素，即所述卤素可以选自由-F、-Br、-Cl和-I组成的组。
在一个实施方案中，R4和R5各自可以是-H、C1-3-烷基或卤素，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代。
在一个实施方案中，R4和R5均可以是-H，
在一个实施方案中，SLC6A3配体是式I的化合物，其中
R1是C1-6烷基或C2-6烯基，其中所述C1-6烷基或C2-6烯基任选可以被一个或多个卤素取代；
R2是CO2-R6，其中R6是C1-6烷基或C2-6烯基，其中所述C1-6烷基或C2-6烯基任选可以被一个或多个卤素取代；
R3是C1-3-烷基或卤素，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代；和
R4和R5各自是-H、C1-3-烷基或卤素，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代。
在一个实施方案中，SLC6A3配体是式I的化合物，其中
R1是C1-4-烷基或C2-4-烯基，其中所述C1-4-烷基或C2-4-烯基任选可以被卤素取代；
R2是CO2-R6，其中R6是C1-4-烷基，其中所述C1-4-烷基任选可以被卤素取代；
R3是C1-3-烷基或卤素，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代；和
R4和R5各自是-H、C1-3-烷基或卤素，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代。
一般而言，优选上文所述的式I的SLC6A3配体包含至少一个卤素。所述卤素可以是任何卤素，即选自由以下组成的组：-F，-Br，-Cl和-I。优选上文所述的式I的SLC6A3配体包含至少一个选自由-F和-I组成的组的卤素。除了所述-F和-I以外，SLC6A3配体还可以包含一种或多种另外的卤素。
因此，在式I的SLC6A3配体中，则R1，R2，R3，R4或R5中的至少一个可以包含卤素。
优选上文所述的式I的SLC6A3配体包含至少一个卤素，其中所述卤素是所述卤素的放射性同位素。除了所述卤素的放射性同位素之外，SLC6A3配体还可以包含一种或多种另外的卤素。因此，在式I的SLC6A3配体中，则R1、R2、R3、R4或R5中的至少一个可以包含卤素的放射性同位素。放射性同位素可以是本文以下在“放射性标记”部分中提到的任何放射性同位素。
在本发明的另一个实施方案中，SLC6A3配体可以是式(II)的化合物：
其中：
X是-Cl，-Br，-I或基团OSO2Rc；Z是RaC＝CRb或乙炔基；Ra和Rb各自独立地为H、C1-6烷基、C3-10芳基，其中所述烷基或芳基任选被一个至三个Rd基团取代；
-与式II的化合物有关的R3为H或C1-6烷基，其中所述烷基任选被一个至三个Rd基团取代；
-p是1、2或3；
-与式II的化合物有关的R4独立地为H、Cl、Br、I、F或C1-6烷基，其中所述烷基任选被一个至三个Rd基团取代；
-Rc是C1-6烷基，优选C1-4烷基，所述烷基任选被一、多或全卤代，C3-8环烷基或C6-12芳基，其中所述烷基、环烷基和芳基任选被一至三个C1-4烷基或F、Cl、Br、NO2或CN取代；
-Rd是OH，F，Cl，Br，苯基或甲基，
-m和n相同或不同且为1至8的整数。优选m+n<10。更优选m为1、2、3或4，并且n为1、2、3或4。
X可以是OSO2Rc基团，例如选自OSO2-C6H4-CH3,OSO2-C6H4-Br,OSO2-C6H4-NO2,OSO2-CH3,OSO2-CF3,OSO2-C4F9或OSO2-CH2-CF3。其中，OSO2-C6H4-CH3、OSO2-CF3、OSO2-CH3通常分别表示甲苯氧基(tolyloxy，OTs)、甲磺酰氧基(mesyloxy，OMs)和三氟甲磺酰氧基(trifyloxy，OTf)。
X可以是Cl、Br、I，例如X可以是Cl。Z可以是RaC＝CRb或乙炔基。例如，Z可以是RaC＝CRb，例如反式RaC＝CRb。
Ra和Rb可以例如独立地选自H和C1-4烷基，特别是甲基或乙基。例如，Ra和Rb可以是H。
在一个实施方案中，m可以是1。在一个实施方案中，n可以是1。
在一个实施方案中，SLC6A3配体是3β-芳基莨菪烷，例如由Hong et al.，2016描述的任何3β-芳基莨菪烷。例如，SLC6A3配体可以是式IIIa或IIIb的化合物：
涉及式IIIa和IIIb的化合物，X、Y和R可以是任何有用的取代基，例如选自由-H和卤素组成的组的取代基，例如-Cl-。
具体而言，SLC6A3配体可以选自由以下化合物组成的组：LX-10,LX-11,LX-13,LX-12,LX-16,LX-15,LX-19,LX-20,LX-21,LX-22,LX-23和LX-24(例如在Hong et al.，2016中描述)。具体而言，SLC6A3配体可以是2β-Ph2COCH2-3β-4-Cl-Ph。
在本发明的一个实施方案中，SLC6A3配体是选择性DAT抑制剂，例如由Huot etal.2015描述的任何DAT抑制剂。因此SLC6A3配体可以选自由以下组成的组：
SLC6A3配体还可以选自由以下组成的组：
在一个实施方案中，SLC6A3配体可以是由Boos et al.,2006描述的GBR系列的N-苄基哌啶中的任何一种。因此，SLC6A3配体可以是式IV的化合物：
其中
R1，R2和R3分别可以选自由以下组成的组：-H，卤素，C1-3-烷基，被一个或多个卤素取代的C1-3-烷基，-CN和NO2。
通常，R1、R2和R3中的至少两个是-H，而第三个选自由以下组成组：卤素、C1-3烷基、被一个或多个卤素取代的C1-3烷基、-CN和NO2。
具体而言，SLC6A3配体可以是Boos et al.，2006的表1中描述的任何化合物2至35。
在一个实施方案中，R1、R2和R3中的至少一个可以包含卤素的放射性同位素，如本文所述的任何碘的放射性同位素，或由其组成。
在一个实施方案中，SLC6A3配体是式IV的化合物，其中R1和R2是-H，R3是-I。这种化合物也被称为FMIP。特别地，连接有放射性标记的SLC6A3配体可以是连接有放射性标记如123I的FMIP：
在一个实施方案中，SLC6A3配体是式V的化合物：
涉及式V的R可以是任何有用的取代基，例如R可以选自由以下组成的组：-H，卤素，-NH2,-NCS,NO2和马来酰亚胺。
在本发明的一个实施方案中，SLC6A3配体是GBR-结构。例如，SLC6A3配体可以是式VI的化合物：
其中
R1为任选被一个或多个-卤素，-NH2，-NCS，-NO2或马来酰亚胺-1-基取代的芳基；
R2为C1-3-烷基，C1-3烯基，-CH2-环丙基，或-H2C-C≡C-；和
R3是-H，芳基，杂芳基，双环芳环或杂环系统，其可以是部分或完全饱和的，其中任何上述任选可以被卤素、-OH、烷氧基或氧基取代。
在一个实施方案中，涉及式VI化合物的R1是任选被一个或多个-卤素，-NH2,-NCS,-NO2或马来酰亚胺-1-基取代的苯基。
在一个实施方案中，涉及式VI化合物的R3是苯基。
在一个实施方案中，SLC6A3配体是苯托品类似物。例如，SLC6A3配体可以是式VII的化合物：
其中
R1是-H或L-B；其中，
L是C1-6-烷基或-CH2CH2-Y-CH2CH2-，其中
Y是-NH-或-O-；和
B是-OH，卤素，芳基，杂环基，-H，-OR3或NHR2，其中
R2是-CO-芳基或-CO-杂芳基；和
X1和X2独立地为-H，C1-6-烷基，卤素，-OH，-O-C1-6-烷基，-NH2，-NR3R4，其中
R3和R4独立地可以是-H，C1-6-烷基，-CN或NO2。
在一个实施方案中，SLC6A3配体是亚磺酰乙酰胺(sulfinacetamide)类似物。例如，SLC6A3配体可以是式VIII的化合物：
其中
Y是-S-或SO；
X独立地为-H，C1-6-烷基，卤素或CN；和
R为C1-6烷基或环烷基，任选被芳基取代。
式VIII的化合物可以包含多个可以相同或不同的取代基X。
在一个实施方案中，SLC6A3配体是喹唑啉类似物。例如，SLC6A3配体可以是式IX的化合物：
其中
R1可以是C1-3烷基。
在一个实施方案中，SLC6A3配体是1-哌嗪丙胺，4-[2-[4-叠氮基-3-(碘-)-苯基]乙基]-N,N-双(4-氟苯基)-9(Cl)。具体而言，连接有放射性标记的SLC6A3配体可以如前所述连接有放射性标记例如125I：
在一个实施方案中，SLC6A3配体可以是以下化合物之一：
待用于本发明的方法中的SLC6A3配体可以是本文上述的任何化合物，例如本文上述的式I，II，IIIa，IIIb，IV，V，VI，VII，VIII或IX的任何化合物，或其立体异构形式，立体异构形式的混合物，溶剂化物和盐形式。因此，SLC6A3配体可以是本文上述的式I，II，IIIa，IIIb，IV，V，VI，VII，VIII或IX中的任何一种化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明的一个实施方案中，连接有放射性标记的SLC6A3配体可以是Shen etal.，2012中描述的靶向多巴胺转运蛋白的任何放射性示踪剂。
在本发明的一个实施方案中，连接有放射性标记的SLC6A3配体可以是WO2008/059349中描述的任何莨菪烷衍生物。
在本发明的一个实施方案中，SLC6A3配体可以连接有放射性标记，并且在这样的实施方案中，连接有放射性标记的SLC6A3配体可以选自由以下组成的组：β-CFT(WIN 35,428),β-CIT(RTI-55),β-CCT(RTI-31),β-CMT(RTI-32),FECNT,β-CCT-FP(β-FPCT),β–CBT,β–FECT(β-FE-CCT),β-FETT(β-FE-CMT),β-FIPCT(β-FiP-CCT),β-CFT-FE,β-CFT-FP,β-CBT-FE,β-CIT-FP(FP-CIT),β-CMT-FP(FP-CMT),β-CBT-FP(FP-CBT),β–CDCT,β-IP-CIT(RTI-121),NS-2214(BMS-204756),β-C IT-FE,β–CpFMT,β–CmFMT,β-CoFMT(o-FWIN),β–CPPIT,FCT,E-IACFT(Altropane),MCL301,MCL322,FE@CIT,FBCINT,FE-3FPT和PE2I。这在本发明的涉及用于诊断方法的实施方案中可能尤其如此。
在涉及治疗方法的本发明的实施方案中，SLC6A3配体可以例如选自由以下组成的组：β-CFT(WIN 35,428),β-CIT(RTI-55),β-CCT(RTI-31),β-CMT(RTI-32),FECNT,β-CCT-FP(β-FPCT),β–CBT,β–FECT(β-FE-CCT),β-FETT(β-FE-CMT),β-FIPCT(β-FiP-CCT),β-CFT-FE,β-CFT-FP,β-CBT-FE,β-CIT-FP(FP-CIT),β-CMT-FP(FP-CMT),β-CBT-FP(FP-CBT),β–CDCT,β-IP-CIT(RTI-121),NS-2214(BMS-204756),β-C IT-FE,β–CpFMT,β–CmFMT,β-CoFMT(o-FWIN),β–CPPIT,FCT,E-IACFT(Altropane),MCL301,MCL322,FE@CIT,FBCINT,FE-3FPT和PE2I，其中
i)所述化合物的放射性标记已经被交换成具有细胞毒性的放射性标记(参见下面的“放射性标记”部分)；和/或
ii)所述化合物的放射性标记已经被去除或交换成非放射性对应物，并且所述化合物已共价连接至具有细胞毒性的放射性标记(参见以下“放射性标记”部分)；和/或
iii)所述化合物的放射性标记已经被去除或交换为非放射性对应物，并且所述化合物已经共价连接至细胞毒性部分和/或免疫调节部分；和/或
iv)化合物连接至细胞毒性部分和/或免疫调节部分。
在本发明的一个实施方案中，连接有放射性标记的SLC6A3配体可以是本文以下在表1中所示的任何化合物，或者它可以是包含或连接有放射性标记的FMIP，例如123I-FMIP。
表1
在本发明的一个实施方案中，连接有放射性标记的SLC6A3配体可以选自由以下组成的组：123I-FMIP，[11C]-2β-甲酰甲氧基-3β-莨菪烷([11C]-2β-carbomethoxy-3β-ltropane),2β-甲酰甲氧基-3β-(4-氟苯基)-N-((E)-3-碘-丙-2-烯基)莨菪烷,[123I]-(1R)-2-β-甲酰甲氧基-3-β-(4-碘苯基)-莨菪烷,[123I]N-ω-氟丙基-2β-甲酰甲氧基-3β-(4-碘苯基)-去甲莨菪烷,[99mTc]锝[2-[[2-[[[3-(4-氯苯基)-8-甲基-8-氮杂双环-[3.2.1]辛-2-基]-甲基](2-巯基乙基)氨基]-乙基]氨基]乙硫醇基(3-)-N2,N2’,S2,S2’]氧代-[1R-(外外)]([99mTc]technetium[2-[[2-[[[3-(4-chlorophenyl)-8-methyl-8-azabicyclo-[3.2.1]oct-2-yl]-methyl](2-me rcaptoethyl)amino]-ethyl]amino]ethanethiolato(3-)-N2,N2’,S2,S2’]oxo-[1R-(exoe xo)]),[123I]-2β-甲酰甲氧基-3β-(4-氟苯基)-N-(1-碘丙-1-烯-3-基)-去甲莨菪烷([123I]-2β-carbomethoxy-3β-(4-fluorophenyl)-N-(1-iodoprop-1-en-3-yl)-ortropan e),和[123I]-N-(3-碘丙烯-2-基)-2-甲酰甲氧基-3β-(4-氯苯基)-莨菪烷。这在本发明的涉及用于诊断的方法的实施例中可能尤其如此。
在本发明的另一个实施方案中，连接有放射性标记的SLC6A3配体可以选自由以下组成的组：123I-FMIP，[11C]-2β-甲酰甲氧基-3β-莨菪烷,2β-甲酰甲氧基-3β-(4-氟苯基)-N-((E)-3-碘-丙-2-烯基)莨菪烷,[123I]-(1R)-2-β-甲酰甲氧基-3-β-(4-碘苯基)-莨菪烷,[123I]N-ω-氟丙基-2β-甲酰甲氧基-3β-(4-碘苯基)-去甲莨菪烷,[99mTc]锝[2-[[2-[[[3-(4-氯苯基)-8-甲基-8-氮杂双环-[3.2.1]辛-2-基]-甲基](2-巯基乙基)氨基]-乙基]氨基]乙硫醇基(3-)-N2,N2’,S2,S2’]氧代-[1R-(外外)],[123I]-2β-甲酰甲氧基-3β-(4-氟苯基)-N-(1-碘丙-1-烯-3-基)-去甲莨菪烷,和[123I]-N-(3-碘丙烯-2-基)-2-甲酰甲氧基-3β-(4-氯苯基)-莨菪烷。这在本发明的涉及诊断方法的实施方案中可能尤其如此，其中前述SLC6A3配体的至少一个原子已被交换成放射性同位素，例如，选自由以下组成的组的放射性同位素123I，131I，11C，18F，76Br，99mTc，13N，15O，68Ga，89Zr和82Rb。
在涉及治疗方法的本发明的实施方案中，SLC6A3配体可以例如选自由以下组成的组：123I-FMIP，[11C]-2β-甲酰甲氧基-3β-莨菪烷,2β-甲酰甲氧基-3β-(4-氟苯基)-N-((E)-3-碘-丙-2-烯基)莨菪烷,[123I]-(1R)-2-β-甲酰甲氧基-3-β-(4-碘苯基)-莨菪烷,[123I]N-ω-氟丙基-2β-甲酰甲氧基-3β-(4-碘苯基)-去甲莨菪烷,[99mTc]锝[2-[[2-[[[3-(4-氯苯基)-8-甲基-8-氮杂双环-[3.2.1]辛-2-基]-甲基](2-巯基乙基)氨基]-乙基]氨基]乙硫醇基(3-)-N2,N2’,S2,S2’]氧代-[1R-(外外)],[123I]-2β-甲酰甲氧基-3β-(4-氟苯基)-N-(1-碘丙-1-烯-3-基)-去甲莨菪烷,和[123I]-N-(3-碘丙烯-2-基)-2-甲酰甲氧基-3β-(4-氯苯基)-莨菪烷，其中
i)所述化合物的放射性标记已被交换为具有细胞毒性的放射性标记(参见下文“放射性标记”部分)；和/或
ii)所述化合物的放射性标记已经被去除或交换成非放射性对应物，并且所述化合物已共价连接至具有细胞毒性的放射性标记上(参见下面的“放射性标记”部分)；和/或
iii)所述化合物的放射性标记已经被去除或交换为非放射性对应物，并且所述化合物已经共价连接至细胞毒性部分和/或免疫调节部分；和/或
iv)化合物连接至细胞毒性部分和/或免疫调节部分。
在本发明的一个实施方案中，连接有放射性标记的SLC6A3配体是[123I]N-ω-氟丙基-2β-甲酰甲氧基-3β-(4-碘苯基)去甲莨菪碱。
在本发明的一个实施方案中，连接有放射性标记的SLC6A3配体是具有以下结构的碘氟潘(ioflupane)：
碘氟潘的“碘”可能是123I。这在本发明的涉及用于诊断的方法的实施方案中可能尤其如此。
碘氟潘的“碘”也可能是125I。这在本发明的涉及用于诊断或治疗的方法的实施方案中可能尤其如此。
碘氟潘的“碘”也可能是131I。这在本发明的涉及治疗方法的实施方案中可能尤其如此。
碘氟潘(123I)也可以称为FP-CIT或称为123I-FP-CIT，并且可以商品名DaTSCAN市售获得。
在本发明的一个实施方案中，连接有放射性标记的SLC6A3配体是123I-FMIP。以上提供了123I-FMIP的结构，并且123I-FMIP可以在涉及诊断方法的本发明的实施方案中特别有用。SLC6A3配体也可以是适用于例如诊断或治疗的方法的125I-FMIP。SLC6A3配体也可以是适用于例如治疗方法的131I-FMIP。
在本发明的一个实施方案中，SLC6A3配体可以是与SLC6A3特异性结合的抗体。由于SLC6A3是跨膜蛋白质，所以优选这样的抗体能够与SLC6A3的细胞外结构域特异性结合。在本发明的实施方案中，SLC6A3配体可以特别是抗体，其中SLC6A3配体连接至放射性标记。
SLC6A3有时也可以被称为SCL6A3。
放射性标记
用于本发明方法中的药剂可以是连接有标记、优选放射性标记的SLC6A3配体。连接有放射性标记的SLC6A3配体可以是“SLC6A3配体”部分中所述的包含放射性标记或与放射性标记结合的任何SLC6A3配体。因此，在一个实施方案中，连接有放射性标记的SLC6A3配体是在“SLC6A3配体”部分中描述的任何SLC6A3配体，其中一个原子已被交换为放射性同位素，例如，该部分中描述的任何放射性标记。
放射性标记可以是任何有用的放射性标记。例如放射性标记可以选自由以下组成的组：123I，125I，11C，18F，76Br，99mTc，13N，15O，68Ga，89Zr和82Rb。这在本发明的涉及诊断方法的实施方案中可能尤其如此。
因此，在一个实施方案中，放射性标记可以是123I。
一般而言，放射性标记应具有足够的放射性以执行诊断方法。本领域技术人员将能够确定给定的放射性标记是否具有足够的放射性。
例如，施用时的活性可以是至少50MBq，优选至少100MBq，如至少111MBq。对于Ioflupane 123I，施用时的活性通常在150-250MBq的范围内，例如约185MBq。
放射性标记也可以选自由以下组成的组：125I，131I，89Sr，153Sm和223Ra。这在涉及治疗方法的本发明的实施方案中可能尤其如此。
因此，在一个实施方案中，放射性标记可以选自由以下组成的组：125I和131I。
对于治疗方法来说，优选放射性标记具有细胞毒性。因此，优选放射性标记具有足够的放射性以能够杀死紧邻的细胞。因此，优选对ccRCC肿瘤施用至少30Gy，优选至少40Gy，更优选至少50Gy。
细胞毒性和免疫调节部分
用于本发明的ccRCC的治疗方法中的药剂可以是连接有细胞毒性或免疫调节部分的SLC6A3配体。
细胞毒性部分可以是例如用于治疗癌症的细胞毒性药物。类似地，免疫调节部分可以是用于治疗癌症的免疫调节药物。
细胞毒性药物或免疫调节药物是本领域技术人员众所周知的。
细胞毒性药物的非限制性实例包括以下：
烷基化剂
·苯达莫司汀(Bendamustine)
·白消安(Busulfan)
·卡莫司汀(Carmustine)
·苯丁酸氮芥(Chlorambucil)
·环磷酰胺(Cyclophosphamide)
·达卡巴嗪(Dacarbazine)
·异环磷酰胺(Ifosfamide)
·美法仑(Melphalan)
·甲基苄肼(Procarbazine)
·链佐星(Streptozocin)
·替莫唑胺(Temozolomide)
抗代谢物
·天冬酰胺酶(Asparaginase)
·卡培他滨(Capecitabine)
·阿糖胞苷(Cytarabine)
·5-氟尿嘧啶(5-Fluoro Uracil)
·氟达拉滨(Fludarabine)
·吉西他滨(Gemcitabine)
·甲氨蝶呤(Methotrexate)
·培美曲塞(Pemetrexed)
·雷替曲塞(Raltitrexed)
抗肿瘤抗生素
·放线菌素D/更生霉素(Actinomycin D/Dactinomycin)
·博来霉素(Bleomycin)
·柔红霉素(Daunorubicin)
·多柔比星(Doxorubicin)
·多柔比星(聚乙二醇化脂质体)
·表柔比星(Epirubicin)
·伊达比星(Idarubicin)
·丝裂霉素(Mitomycin)
·米托蒽醌(Mitoxantrone)
植物生物碱类/微管抑制剂
·依托泊苷(Etoposide)
·多西他赛(Docetaxel)
·伊立替康(Irinotecan)
·紫杉醇(Paclitaxel)
·拓扑替康(Topotecan)
·长春花碱(Vinblastine)
·长春花新碱(Vincristine)
·长春瑞滨(Vinorelbine)
DNA连接剂
·卡铂(Carboplatin)
·顺铂(Cisplatin)
·奥沙利铂(Oxaliplatin)
免疫调节药物(IMiDs)的非限制性实例是沙利度胺及其类似物，来那度胺，泊马度胺和阿普斯特。
项
本发明还可以涉及以下项：
1.药剂，其包含连接有标记(例如放射性标记)、细胞毒性部分或免疫调节部分的SLC6A3配体或由其组成，用于诊断或治疗个体中透明细胞肾细胞癌(ccRCC)的方法。
2.根据项1所述的药剂，其中所述药剂包含用于诊断ccRCC的方法的放射性标记的SLC6A3配体或由其组成。
3.根据项2所述的药剂，其中所述用于诊断ccRCC的方法包括向所述个体施用所述药剂并检测所述药剂在所述个体的肾脏中的存在，其中所述药剂在所述个体的肾脏中的存在指示存在ccRCC。
4.根据前述项中任一项所述的药剂，其中所述方法用于诊断ccRCC或转移的ccRCC。
5.根据项4所述的药剂，其中所述方法包括向所述个体施用所述药剂并检测所述药剂的存在，其中所述药剂在所述中枢神经系统之外的局部存在指示所述个体中存在所述ccRCC或所述转移的ccRCC。
6.根据项4所述的药剂，其中所述方法包括向所述个体施用所述药剂并检测所述药剂的存在，其中所述药剂在肾之外和中枢神经系统之外的局部存在指示存在转移的ccRCC。
7.根据项2至6中任一项所述的药剂，其中所述药剂在淋巴结中的存在指示转移的ccRCC。
8.根据前述项中任一项所述的药剂，其中所述药剂经制备用于肠胃外施用。
9.用于诊断个体中的ccRCC的方法，所述方法包括以下步骤：
a)向个体施用包含连接有放射性标记的SLC6A3配体或由其组成的药剂，
b)检测所述药剂在所述个体的中枢神经系统外的局部存在，
其中所述药剂在所述个体的中枢神经系统之外的局部存在指示所述个体中存在ccRCC或转移的ccRCC。
10.用于诊断个体中的ccRCC的方法，所述方法包括检测连接有放射性标记的SLC6A3配体在所述个体中枢神经系统外的局部存在。
11.根据项10所述的方法，其中所述SLC6A3配体已经施用于所述个体。
12.用于确定个体中ccRCC存在的风险的方法，所述方法包括以下步骤：
a)向个体施用包含连接有放射性标记的SLC6A3配体或由其组成的药剂，
b)检测所述药剂在所述个体的中枢神经系统外的局部存在，
其中所述药剂在所述个体在中枢神经系统之外的局部存在指示所述个体中存在ccRCC或转移的ccRCC。
13.根据项9至12中任一项所述的方法，其中所述药剂在肾中的存在指示个体中存在ccRCC。
14.根据项9至13中任一项所述的方法，其中所述药剂在所述个体的肾脏和中枢神经系统之外的存在指示存在转移的ccRCC。
15.根据项9至14中任一项所述的方法，其中所述药剂在淋巴结中的存在指示转移的ccRCC。
16.根据前述项中任一项所述的方法，其中所述个体正患有或先前已患有ccRCC。
17.根据项9至16中任一项所述的方法，其中所述方法包括将所述药剂注射到所述个体中。
18.根据项2至17中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是可卡因类似物。
19.根据项2至5中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体含有或连接于放射性标记，所述放射性标记选自由以下组成的组：123I，125I，11C，18F，76Br，99mTc，13N，15O，68Ga，89Zr和82Rb。
20.根据项2至18中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体含有或连接于123I的放射性标记。
21.根据项1所述的药剂，其中所述药剂包含连接有放射性标记、细胞毒性部分或免疫调节部分的SLC6A3配体或由其组成，用于在有需要的个体中治疗透明细胞肾细胞癌(ccRCC)的方法中。
22.在有需要的个体中治疗ccRCC的方法，所述方法包括以药学有效量向所述个体施用包含连接有放射性标记、细胞毒性部分或免疫调节部分的SLC6A3配体或由其组成的药剂。
23.根据项21至22中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是苯异丙胺类似物。
24.根据项21至22中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是可卡因类似物。
25.根据前述项中任一项所述的药剂或方法，其中SLC6A3配体不能通过血脑屏障。
26.根据前述项中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体具有至多100nM的针对SLC6A3的Ki。
27.根据前述项中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体具有至多10,000nM的针对SLC6A3的Kd。
28.根据前述项中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体针对SERT的Ki是针对SLC6A3的Ki的至少10倍。
29.根据项22至28中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体含有选自由125I和131I组成的组的放射性标记或与其连接。
30.根据前述项中任一项所述的药剂或方法，其中所述ccRCC是局部的ccRCC。
31.根据前述项中任一项所述的药剂或方法，其中所述ccRCC是转移的ccRCC。
32.根据前述项中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是莨菪烷衍生物或去甲莨菪烷衍生物。
33.根据前述项中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式I的化合物：
其中
R1为C1-6烷基、C2-6烯基、苯基或苄基，其中所述C1-6烷基、C2-6烯基、苯基或苄基任选可被一个或多个卤素取代；
R2是CO2-R6、C＝NO-R6或杂芳基-R6，其中R6是C1-6-烷基、C2-6-烯基、苯基或苄基，其中所述C1-6-烷基、C2-6-烯基、苯基或苄基任选可以被一个或多个卤素取代；
R3是C1-3-烷基、卤素或杂芳基，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代；和
R4和R5各自是-H、C1-3-烷基或卤素，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代。
34.根据项33所述的药剂或方法，其中
R1是C1-6烷基或C2-6烯基，其中所述C1-6烷基或C2-6烯基任选可以被一个或多个卤素取代；
R2是CO2-R6，其中R6是C1-6烷基或C2-6烯基，其中所述C1-6烷基或C2-6烯基任选可以被一个或多个卤素取代；
R3是C1-3-烷基或卤素，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代；和
R4和R5各自是-H、C1-3-烷基或卤素，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代。
35.根据项33所述的药剂或方法，其中
R1是C1-4-烷基或C2-4-烯基，其中所述C1-4-烷基或C2-4-烯基任选可以被卤素取代；
R2是CO2-R6，其中R6是C1-4-烷基，其中所述C1-4-烷基任选可以被卤素取代；
R3是C1-3-烷基或卤素，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代；和
R4和R5各自是-H、C1-3-烷基或卤素，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代。
36.根据项33至35中任一项所述的药剂或方法，其中R1，R2，R3，R4或R5中的至少一个包含卤素。
37.根据项33至36中任一项所述的药剂或方法，其中R1，R2，R3，R4或R5中的至少一个包含卤素的放射性同位素。
38.根据前述项中任一项所述的药剂或方法，其中连接有放射性标记的SLC6A3配体选自由以下组成的组：I-FMIP,β-CFT(WIN 35,428),β-CIT(RTI-55),β-CCT(RTI-31),β-CMT(RTI-32),FECNT,β-CCT-FP(β-FPCT),β–CBT,β–FECT(β-FE-CCT),β-FETT(β-FE-CMT),β-FIPCT(β-FiP-CCT),β-CFT-FE,β-CFT-FP,β-CBT-FE,β-CIT-FP(FP-CIT),β-CMT-FP(FP-CMT),β-CBT-FP(FP-CBT),β–CDCT,β-IP-CIT(RTI-121),NS-2214(BMS-204756),β-C IT-FE,β–CpFMT,β–CmFMT,β-CoFMT(o-FWIN),β–CPPIT,FCT,E-IACFT(Altropane),MCL301,MCL322,FE@CIT,FBCINT,FE-3FPT和PE2I。
39.根据前述项中任一项所述的药剂或方法，其中连接有放射性标记的SLC6A3配体选自由以下组成的组：123I-FMIP，[11C]-2β-甲酰甲氧基-3β-莨菪烷,2β-甲酰甲氧基-3β-(4-氟苯基)-N-((E)-3-碘-丙-2-烯基)莨菪烷,[123I]-(1R)-2-β-甲酰甲氧基-3-β-(4-碘苯基)-莨菪烷,[123I]N-ω-氟丙基-2β-甲酰甲氧基-3β-(4-碘苯基)-去甲莨菪烷,[99mTc]锝[2-[[2-[[[3-(4-氯苯基)-8-甲基-8-氮杂双环-[3.2.1]辛-2-基]-甲基](2-巯基乙基)氨基]-乙基]氨基]乙硫醇基(3-)-N2,N2’,S2,S2’]氧代-[1R-(外外)],[123I]-2β-甲酰甲氧基-3β-(4-氟苯基)-N-(1-碘丙-1-烯-3-基)-去甲莨菪烷,和[123I]-N-(3-碘丙烯-2-基)-2-甲酰甲氧基-3β-(4-氯苯基)-莨菪烷。
40.根据前述项中任一项所述的药剂或方法，其中连接有放射性标记的SLC6A3配体是[123I]N-ω-氟丙基-2β-甲酰甲氧基-3β-(4-碘苯基)-去甲莨菪烷。
41.根据项1至31中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式IIIa或IIIb的化合物：
42.根据项41所述的药剂或方法，其中X和Y是-H或卤素且R是卤素。
43.根据项1至31中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式IV的化合物：
其中，
R1、R2和R3分别可以选自由以下组成的组：-H，卤素，C1-3-烷基，被一个或多个卤素取代的C1-3-烷基，-CN和NO2。
44.根据项43的药剂或方法，其中R1、R2和R3中的至少两个是-H，并且第三个选自由以下组成的组：卤素、C1-3-烷基、被一个或多个卤素取代的C1-3-烷基、-CN和NO2。
45.根据项43和44中任一项所述的药剂或方法，其中R1、R2和R3中的至少一个是卤素。
46.根据项1至31中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式V的化合物：
47.根据项46所述的药剂或方法，其中R选自由以下组成的组：-H，卤素，-NH2，-NCS，-NO2和马来酰亚胺。
48.根据项1至31中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式VI的化合物：
其中，
R1为任选被一个或多个卤素，-NH2，-NCS，-NO2或马来酰亚胺-1-基取代的芳基；
R2为C1-3-烷基，C1-3烯基，-CH2-环丙基，或-H2C-C≡C-；和
R3是-H，芳基，杂芳基，双环芳环或杂环环系统，其可以是部分或完全饱和的，其中上述任何均可以任选被卤素、-OH、烷氧基或氧基取代。
49.根据项48所述的药剂或方法，其中R1是任选被一个或多个-卤素，-NH2，-NCS，-NO2或马来酰亚胺-1-基取代的苯基。
50.根据项48和49中任一项所述的药剂或方法，其中R3是苯基。
51.根据项1至31中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式VII的化合物：
其中，
R1是-H或L-B；其中，
L是C1-6-烷基或-CH2CH2-Y-CH2CH2-，其中
Y是-NH-或-O-；和
B是-OH，卤素，芳基，杂环基，-H，-OR3或NHR2，其中
R2是-CO-芳基或-CO-杂芳基；和
X1和X2独立地为-H、C1-6-烷基、卤素、-OH、-O-C1-6-烷基、-NH2、-NR3R4、其中
R3和R4独立地是-H、C1-6-烷基、-CN或NO2。
52.根据项1至31中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式VIII的化合物：
其中，
Y是-S-或SO；
X独立地为-H，C1-6-烷基，卤素或CN；和
R为C1-6烷基或环烷基，任选被芳基取代。
53.根据项1至31中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式IX的化合物：
其中
R1可以是C1-3烷基。
54.根据项1至31中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体选自GBR12909、GBR12935、1-哌嗪丙胺、4-[2-[4-叠氮基-3-(碘-)苯基]乙基]-N,N-双(4-氟苯基)-9(Cl)和FMIP。
55.根据项2至20中任一项所述的药剂或方法，其中通过正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)检测所述药剂在所述个体的肾脏中的存在。
56.连接有放射性标记、细胞毒性部分或免疫调节部分的SLC6A3配体用于制备用于诊断或治疗个体的透明细胞肾细胞癌(ccRCC)的药物的用途。
57.根据项56所述的用途，其中SLC6A3配体如前述项中任一项所定义。
实施例
实施例1
功能性SLC6A3的表达
建立了一个全面的生物信息学平台，用于深入分析最近公布的TCGA(癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas))数据集，该数据集中包含超过500个ccRCC和几百个其他肾脏恶性肿瘤。数据集含有临床信息，基因组表征数据和肿瘤基因组的高水平序列分析。我们在这里证明了SLC6A3显示在ccRCC中异常高的mRNA表达(在原发肿瘤和其转移中均如此)，而其他分析的肿瘤类型没有显示该基因的明显表达(见图1和图5)。
该分析基于RNA序列数据，基于癌症基因组图谱队列分析具有SLC6A3的15个外显子的基因特异性读数，并且该分析显示序列读数分布在该基因的所有外显子上(见图2)。这表明整个基因在ccRCC中被转录。
SLC6A3(也称为Dat1)是一种多巴胺转运蛋白，其正常主要在中枢神经系统的多巴胺能神经元中表达(见图1C-D)。它的主要功能是清除来自所释放的多巴胺的突触，用于螯合成囊泡以备后续释放。
使用[3H]-多巴胺对建立的和原发的ccRCC细胞进行一系列实验。摄取实验在37℃、12孔板中培养的细胞中进行。在进行摄取实验前48小时以80,000个细胞/孔接种感兴趣的细胞。在1×PBS中洗涤孔，随后在1ml测定缓冲液(含CaCl2和MgCl2的Hanks平衡盐溶液(HBSS)，无酚红，补充有10mM HEPES，pH 7.4)中于37℃洗涤，然后与0.5ml缓冲液一起孵育5分钟。随后将孔与含有7nM[3H]多巴胺(56.8Ci/mmol)的测定缓冲液在以下时间点1、5、10和20分钟孵育。针对竞争实验，将细胞与含有补充有竞争性未标记多巴胺0uM、2uM或20uM的7nM[3H]多巴胺(56.8Ci/mmol)的分析缓冲液孵育5分钟。对于具体的SLC6A3抑制，将细胞与抑制剂GBR12935(30nM)或GBR12909(10-90nM)预孵育1小时，然后在GBR12935(30nM)或GBR12909(10-90nM)存在下通过与含有7nM[3H]多巴胺(56.8Ci/mmol)的测定缓冲液孵育而进行摄取。通过除去摄取缓冲液并加入1ml冰冷的测定缓冲液至每个孔，并立即抽出缓冲液并用1ml冰冷的缓冲液额外洗涤三次，来终止所有摄取实验。通过用1％Triton-X在室温下溶解细胞1小时来提取掺入的放射性，然后加入6ml闪烁液。放射活性的量用Tri-carb2810TR液体闪烁分析仪(Perkin Elmer)测量。
实验证明，ccRCC细胞系摄取[H3]多巴胺，并且表现出SLC6A3的表达水平与多巴胺摄取之间的强相关性。此外，与原代正常皮质细胞相比，原代ccRCC细胞显示多巴胺摄取增加(参见图3和图7A)。此外，原代ccRCC肿瘤细胞显示响应于竞争性未标记多巴胺的摄取减少(图7A-B)。在所研究的建立的ccRCC细胞系中，除了两个(KMRC-3和SNU-349)外均表达相对较低水平的SLC6A3(参见图6A)。相反，所有研究的原代ccRCC肿瘤和短期原代细胞培养物都表达高水平的转运蛋白(图6B)。
实施例2
SLC6A3的调节和功能已经被广泛研究，涉及其在多巴胺能神经元中的功能及其在帕金森病等神经疾病中的作用。包括可卡因和苯异丙胺在内的几种化合物通过干扰SLC6A3发挥作用，从而影响突触间隙中多巴胺的水平。
测试了批准的放射性药物碘氟潘(123I)(GE Healthcare)是否可用于检测肾脏中的SLC6A3。Ioflupane(123I)用于帕金森病的诊断，其中Ioflupane(123I)用于检测SLC6A3在突触间隙中的功能。SLC6A3的功能高度依赖于Na+梯度，高的细胞外浓度和较低的Na+浓度介导[3H]-多巴胺摄取的减少。因此，由于ccRCC肿瘤与多巴胺能突触间隙之一的微环境不同，Ioflupane(123I)是否可用于肾脏环境尚不清楚。Ioflupane(123I)的化学名称是[123I]N-ω-氟丙基-2β-甲酰甲氧基-3β-(4-碘苯基)去甲莨菪烷，其结构在本文表1中提供。
在小鼠中原位注射ccRCC细胞系KMRC-3细胞，该细胞是在40ul PBS中2×106个细胞。13周后，给小鼠注射5.36MBq的123I-Ioflupan，并在1小时35分钟后通过SPECT/CT成像进行分析。实验分析表明，当使用SPECT/CT分析时，原位注射的肾细胞清楚地显示Ioflupane(123I)的摄取增加，而缺乏所注射的肿瘤细胞的对侧肾未显示Ioflupane(123I)的摄取增强(见图4)。
此外，在GBR12935和GBR12909(其为SLC6A3的特异性抑制剂的可卡因类似物)存在的情况下进行[3H]-多巴胺摄取实验。使用这些低浓度的抑制剂可以明显减少ccRCC细胞摄入的[3H]-多巴胺的量(参见图8A-C)。
因此，GBR12935和GBR12909都可以与表达SLC6A3的ccRCC细胞功能性地相互作用。
实施例3
在16个匹配的原代ccRCC肿瘤和转移中研究SLC6A3的表达分析(Lopez-Lago etal.,Cancer Res 70(23)2010)。
如图5所示，SLC6A3既在原代ccRCC中又在转移中表达。
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Claims (22)

1.药剂，其包含连接有标记物、细胞毒性部分或免疫调节部分的SLC6A3配体或由连接有标记物、细胞毒性部分或免疫调节部分的SLC6A3配体组成，用于诊断或治疗个体中透明细胞肾细胞癌(ccRCC)的方法。
2.根据权利要求1所述的药剂，其中所述药剂包含放射性标记的SLC6A3配体或由放射性标记的SLC6A3配体组成，用于诊断ccRCC的方法。
3.根据权利要求2所述的药剂，其中所述方法包括向所述个体施用所述药剂并检测所述药剂的存在，其中所述药剂在所述中枢神经系统之外的局部存在指示所述个体中存在ccRCC或转移的ccRCC。
4.根据前述权利要求中任一项所述的药剂，其中所述方法包括向所述个体施用所述药剂并检测所述药剂的存在，其中所述药剂在肾之外和中枢神经系统之外的局部存在指示存在转移的ccRCC。
5.诊断个体中ccRCC的方法，所述方法包括以下步骤：
a)向个体施用包含连接有放射性标记的SLC6A3配体的药剂或由连接有放射性标记的SLC6A3配体组成的药剂，
b)检测所述药剂在所述个体的中枢神经系统之外的局部存在，
其中所述药剂在所述个体的中枢神经系统之外的局部存在指示所述个体中存在ccRCC或转移的ccRCC。
6.根据权利要求2至5中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体含有或连接有放射性标记，所述放射性标记选自由以下组成的组：123I,131I,11C,18F,76Br,99mTc,13N,15O68Ga,89Zr和82Rb。
7.根据权利要求2至5中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体含有或连接有放射性标记123I。
8.根据权利要求1所述的药剂，其中所述药剂包括连接有放射性标记、细胞毒性部分或免疫调节部分的SLC6A3配体或由连接有放射性标记、细胞毒性部分或免疫调节部分的SLC6A3配体组成，用于在有需要的个体中治疗透明细胞肾细胞癌(ccRCC)的方法。
9.根据前述权利要求中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是苯异丙胺类似物。
10.根据前述权利要求中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是可卡因类似物。
11.根据前述权利要求中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体针对SLC6A3具有至多100nM的Ki，和/或针对SLC6A3具有至多10,000nM的Kd。
12.根据前述权利要求中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是莨菪烷衍生物或去甲莨菪烷衍生物。
13.根据前述权利要求中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式I的化合物：
其中
R1为C1-6-烷基、C2-6-烯基、苯基或苄基，其中所述C1-6-烷基、C2-6-烯基、苯基或苄基可任选被一个或多个卤素取代；
R2是CO2-R6、C＝N-O-R6或杂芳基-R6，其中R6是C1-6-烷基、C2-6-烯基、苯基或苄基，其中所述C1-6-烷基、C2-6-烯基、苯基或苄基任选可以被一个或多个卤素取代；
R3是C1-3-烷基、卤素或杂芳基，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代；和
R4和R5各自是-H、C1-3-烷基或卤素，其中所述C1-3-烷基任选可以被卤素取代。
14.根据权利要求1至11中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式IIIa或IIIb的化合物：
15.根据权利要求1至11中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式IV的化合物：
其中，
R1、R2和R3各自可以选自由以下组成的组：-H、卤素、C1-3-烷基、被一个或多个卤素取代的C1-3-烷基、-CN和NO2。
16.根据权利要求1至11中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式V的化合物：
17.根据权利要求1至11中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式VI的化合物：
其中，
R1为任选被一个或多个-卤素、-NH2、-NCS、-NO2或马来酰亚胺-1-基取代的芳基；
R2为C1-3-烷基、C1-3烯基、-CH2-环丙基或- 和
R3是-H、芳基、杂芳基、双环芳环或杂环环系统，其可以是部分或完全饱和的，其中任何上述均可以任选被卤素、-OH、烷氧基或氧基取代。
18.根据权利要求1至11中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式VII的化合物：
其中
R1是-H或L-B；其中，
L是C1-6-烷基或-CH2CH2-Y-CH2CH2-，其中
Y是-NH-或-O-；和
B是-OH、卤素、芳基、杂环基、-H、-OR3或NHR2，其中
R2是-CO-芳基或-CO-杂芳基；和
X1和X2独立地为-H、C1-6-烷基、卤素、-OH、-O-C1-6-烷基、-NH2、-NR3R4，
其中
R3和R4独立地是-H、C1-6-烷基、-CN或NO2。
19.根据权利要求1至11中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式VIII的化合物：
其中，
Y是-S-或SO；
X独立地为-H、C1-6-烷基、卤素或CN；和
R为C1-6烷基或环烷基，其任选地被芳基取代。
20.根据权利要求1至11中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体是式IX的化合物：
其中
R1可以是C1-3烷基。
21.根据权利要求1至11中任一项所述的药剂或方法，其中所述SLC6A3配体选自GBR12909,GBR12935,1-哌嗪丙胺,4-[2-[4-叠氮基-3-(碘-)苯基]乙基]-N,N-双(4-氟苯基)-9(Cl)和FMIP。
22.根据前述权利要求中任一项所述的药剂或方法，其中连接有放射性标记的SLC6A3配体选自由以下组成的组：β-CFT(WIN 35,428),β-CIT(RTI-55),β-CCT(RTI-31),β-CMT(RTI-32),FECNT,β-CCT-FP(β-FPCT),β–CBT,β–FECT(β-FE-CCT),β-FETT(β-FE-CMT),β-FIPCT(β-FiP-CCT),β-CFT-FE,β-CFT-FP,β-CBT-FE,β-CIT-FP(FP-CIT),β-CMT-FP(FP-CMT),β-CBT-FP(FP-CBT),β–CDCT,β-IP-CIT(RTI-121),NS-2214(BMS-204756),β-C IT-FE,β–CpFMT,β–CmFMT,β-CoFMT(o-FWIN),β–CPPIT,FCT,E-IACFT(Altropane),MCL301,MCL322,FE@CIT,FBCINT,FE-3FPT,PE2I,[11C]-2β-甲酰甲氧基-3β-莨菪烷,2β-甲酰甲氧基-3β-(4-氟苯基)-N-((E)-3-碘-丙-2-烯基)莨菪烷,[123I]-(1R)-2-β-甲酰甲氧基-3-β-(4-碘苯基)-莨菪烷,[123I]N-ω-氟丙基-2β-甲酰甲氧基-3β-(4-碘苯基)-去甲莨菪烷,[99mTc]锝[2-[[2-[[[3-(4-氯苯基)-8-甲基-8-氮杂双环-[3.2.1]辛-2-基]-甲基](2-巯基乙基)氨基]-乙基]氨基]乙硫醇基(3-)-N2,N2’,S2,S2’]氧代-[1R-(外外)],[123I]-2β-甲酰甲氧基-3β-(4-氟苯基)-N-(1-碘丙-1-烯-3-基)-去甲莨菪烷,和[123I]-N-(3-碘丙烯-2-基)-2-甲酰甲氧基-3β-(4-氯苯基)-莨菪烷。
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