CN108129542A - C-3,28,29-三取代齐墩果烷三萜皂苷及其药物组合物 - Google Patents

C-3,28,29-三取代齐墩果烷三萜皂苷及其药物组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN108129542A
CN108129542A CN201810006581.8A CN201810006581A CN108129542A CN 108129542 A CN108129542 A CN 108129542A CN 201810006581 A CN201810006581 A CN 201810006581A CN 108129542 A CN108129542 A CN 108129542A
Authority
CN
China
Prior art keywords
base
compound
glucopyanosyls
oleanane
pharmaceutical composition
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810006581.8A
Other languages
English (en)
Inventor
张颖君
朱宏涛
魏鑫
高大方
王东
杨崇仁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kunming Institute of Botany of CAS
Original Assignee
Kunming Institute of Botany of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kunming Institute of Botany of CAS filed Critical Kunming Institute of Botany of CAS
Priority to CN201810006581.8A priority Critical patent/CN108129542A/zh
Publication of CN108129542A publication Critical patent/CN108129542A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J63/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by expansion of only one ring by one or two atoms
    • C07J63/008—Expansion of ring D by one atom, e.g. D homo steroids

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

提供通式I所示的齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物，以其为活性成分的药物组合物，其在制备治疗肝损伤疾病的药物中的应用，以及其在制备治疗或预防非病毒性肝炎的药物中的应用。通式I中R1为糖基或乙酰化糖基，R2为氢、糖基，R3为羧基或甲基。

Description

C-3,28,29-三取代齐墩果烷三萜皂苷及其药物组合物
技术领域：
本发明属于医药领域，具体地，涉及一种C-3,28,29三取代齐墩果烷型五环三萜皂苷类衍生物及其保肝药物组合物和其在制药中的应用。
背景技术：
肝病是世界三大消化系统疾病之一，我国每年新增肝癌患者约39万例，约占世界肝癌患者的50％。肝癌的诱因除病毒性肝炎的进一步癌变外，酒精性肝损伤是肝硬化、肝癌等严重型肝病的另一诱因。
乙醇又名酒精，属全球性的饮料及食品添加剂。每年因过量饮酒导致的死亡人数高达250万。肝脏是人体代谢乙醇的主要器官，酒精的过量摄入致使肝功能有不同程度的损害，从而使肝脏的解毒、排泄功能及贮备和再生能力降低，肝血流量减少，代谢负荷加重，从而发生内环境紊乱，肝细胞坏死和凋亡，进而造成肝损伤。并且，酒精性肝损伤通常是导致酒精性脂肪肝、肝炎、肝硬化的元凶，严重威胁着乙醇接触者的健康。尽管现代医学高速发展，肝病的治疗仍然是一个没有解决的世界难题。预防和治疗肝细胞损伤是临床上肝病治疗的重要环节之一，是抑制肝纤维化、肝坏死、肝硬化以及肝癌等疾病发生和发展的基础。目前临床常用的保肝药物，或因为价格昂贵，或因使用不便，或具有较大副作用，使用受到限制。因此，具有保肝活性天然产物的开发应用，对预防和减轻肝细胞损伤及其诱发的脂肪肝、肝硬化甚至肝癌具有重要的意义。
梁王茶为五加科异参属(Metapanax)植物，主要分布于云、贵、川三省，其叶及嫩茎是当地普遍食用的野生蔬菜和代茶用植物，同时梁王茶也被用作民间草药，其茎皮和叶有清热消炎、生津止泻、安神镇痛之功效，主治咽喉肿痛、目赤、消化不良、风湿腰腿痛等。梁王茶含有丰富的齐墩果烷型三萜皂苷和黄酮苷，进一步的药理研究显示，梁王茶中的五环三萜类化合物具有很强的抗癌和抗肿瘤作用、调节免疫作用、消炎镇痛作用、抗病毒抑菌作用以及防治心脑血管疾病等作用。
然而，迄今为止，现有技术中未见有梁王茶次生代谢物齐墩果烷型三萜皂苷及衍生物在预防和治疗肝细胞损伤及肝病相关的药理活性研究报道，也未见其具有预防和治疗肝细胞损伤及肝病的报道。
发明内容：
本发明的目的旨在提供齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物及其药学上可接受的配糖体，以其为活性成分的药物组合物，它们在制备治疗肝损伤和肝病的药物中的应用，特别是在制备治疗或预防肝损伤和肝病的药物中的应用。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
如下结构式所示的3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28,29-二烯酸(1)，及其药学上可接受的配糖体，
根据所述的3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28,29-二烯酸，及其药学上可接受的配糖体，其中所述的药学上可接受的配糖体是指葡萄糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖。
本发明同时提供一种药物组合物，其含有如下结构式(I)所示的齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物及其药学上可接受的配糖体作为有效成分，至少还包含一种药学上可接受的载体，
通式I中R1为糖基或乙酰化糖基，R2为氢、糖基，R3为羧基或甲基。
根据所述的药物组合物，其中所述的齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物为：
化合物1：R1为-α-L-阿拉伯吡喃糖基，R2为-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基，R3为羧基；
化合物2：R1为-α-L-阿拉伯吡喃糖基，R2为氢，R3为羧基；
化合物3：R1为-β-D-木吡喃糖基，R2为氢，R3为羧基；
化合物4：R1为-α-L-阿拉伯吡喃糖基，R2为氢，R3为甲基；
化合物5：R1为-(2'-O-乙酰基)-α-L-阿拉伯吡喃糖基，R2为氢，R3为羧基；
化合物6：R1为-(4'-O-乙酰基)-α-L-阿拉伯吡喃糖基，R2为-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基(4→1)-α-L-鼠李糖基，R3为羧基；
化合物7：R1为-(2'-O-乙酰基)-α-L-阿拉伯吡喃糖基，R2为-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基(4→1)-α-L-鼠李糖基，R3为羧基；
根据所述的药物组合物，其中所述的药学上可接受的配糖体是指葡萄糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖。
本发明还提供了齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物及其药学上可接受的配糖体在制备预防或治疗肝损伤疾病的药物中的应用。
以及，齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物及其药学上可接受的配糖体在制备治疗或预防非病毒性肝炎的药物中的应用。
本发明此外还提供了所述的药物组合物在制备预防或治疗肝损伤疾病的药物中的应用。
以及，所述的药物组合物在制备治疗或预防非病毒性肝炎的药物中的应用。
本发明的齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物的制备方法包括下述步骤：新鲜的梁王茶叶片粉碎，用5倍样品重量的工业甲醇70℃回流提取3次、每次3h。过滤，滤液减压浓缩去除甲醇，剩余物水溶解后用氯仿萃取4次，氯仿/样品水溶液的体积比为2/3，水层提取物经Diaion 101柱(250×30cm)进行柱层析，先用水冲洗除去多糖，然后用甲醇/水体积比为3:7，5:5，8:2和1:0的溶液洗脱得到4个部分Fractions A-D；Fraction C和D分别经硅胶柱、Rp-18柱和Sephadex LH-20凝胶柱，用体积比MeOH：H2O(30-100)∶(70-0)、CHCl3∶MeOH∶H2O(7:3:0.5)和CHCl3∶MeOH∶H2O(8:2:0.2)的溶液进行层析分离、纯化，得到化合物1-7；对化合物1-7进行保肝活性评价，并进一步用常规药物制备方法得所述的药物组合物。
所述的化合物保肝活性评价，是指分别将化合物1-7配制成浓度为1
μg/mL的溶液，取对数生长期的HepG2细胞8x104cells/100μL.well接种于96孔细胞板中，37℃、5％CO2条件培养44小时，取10μL浓度为1μg/mL的化合物溶液至于孔内，同时设有以姜黄素25μM，每孔μL，为阳性对照，于37℃、5％CO2条件培养4小时，每孔加入100μl含有8％乙醇的培养基，相同培养条件下继续培养24小时，控干培养基，加入200μl 10％ALamar blue的培养溶液，充分混匀，相同条件下继续培养3小时，测定570nm的OD值，并按下述公式计算细胞存活率：细胞成活率(％)＝[(实验组OD值–对照组OD值)/(模型组OD值–对照组OD值)]*100％。
本发明的式(I)化合物或其盐可经口或不经过口给药，给药量因药物不同而各有不同，对成人来说，每天1-1000mg比较合适。
经口服给药时，首先使化合物与常规的药用辅剂如赋形剂、崩解剂、黏合剂、润滑剂、抗氧化剂、包衣剂、着色剂、芳香剂、表面活性剂等混合，将其制成颗粒剂、胶囊、片剂等形式给药；非经口给药时可以注射液、输液剂或栓剂等形式给药。制备上述制剂时，可使用常规的制剂技术。
附图说明：
图1评价HepG2细胞存活的显微图；
图2为本发明通式I的齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物结构式，其中：R1为糖基或乙酰化糖基，R2为氢或糖基，R3为羧基或甲基。
具体实施方式：
下面结合附图，以本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，这些实例仅是对本发明优选方案的说明，而并不以任何方式限制本发明的保护范围。
实施例1：
3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28,29-二烯酸，[3-O-α-L-arabinopyrano-syl-28-O-β-D-glucopyranosyl(6→1)-O-β-D-glucopyranosyl-3β-hydroxyolean-12-ene-28,29-dioicacid](1)的肝细胞(HepG2cells)保护作用：
步骤一：化合物3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28,29-二烯酸的制备：
梁王茶(Metapanax delavayi)鲜叶(30公斤)粉碎后用75L工业甲醇于70℃下回流提取3次，每次三小时。减压蒸馏去除有机溶剂后，提取液用水溶解至3L，用氯仿萃取四次(氯仿/样品溶液，v/v，2/3)。水层上样于D-101大孔树脂柱(250×30cm)，用甲醇/水洗脱(3:7、5:5，8:2和1:0，v/v)得到四个部分(Fr.A-D)。
Fr.C(126g)进行硅胶柱色谱法得到六个组分(Fr.1-6)。Fr.2(8g)在氯仿/甲醇(1:1)条件下结晶得到化合物1(20mg)
化合物1经鉴定为3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28,29-二烯酸，即[3-O-α-L-arabinopyrano-syl-28-O-β-D-glucopyranosyl(6→1)-O-β-D-glucopyranosyl-3β-hydroxyolean-12-ene-28,29-dioic acid]，为一新化合物。
其理化数据如下：白色无定型粉末；*α+24 D-18.5°(c 0.25,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)202nm(3.66)；IR(KBr)νmax 3427,2929,2879,1931,1632 and 1548cm-1；negativeFABMS:m/z 941[M–H]–；HR-TOF-MS:m/z 977.4515[M+Cl]–(calcd for C47H74O19Cl,977.4512)；1H NMR(C5D5N,500MHz)和13C NMR(C5D5N,125MHz)数据见表1.
表1.化合物1的氢谱和碳谱数据
步骤二：化合物3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28,29-二烯酸的保肝活性评价。
将化合物1配制成浓度为1μg/mL的溶液，取对数生长期的HepG2细胞8x104cells/100μL well接种于96孔细胞板中，37℃、5％CO2条件培养44小时，取10μL浓度为1μg/mL的化合物溶液至于孔内，同时设有以姜黄素25μM，每孔μL为阳性对照，于37℃、5％CO2条件培养4小时，每孔加入100μL含有8％乙醇的培养基，相同培养条件下继续培养24小时，控干培养基，加入200μL 10％ALamar blue的培养溶液，充分混匀，相同条件下继续培养3小时，测定570nm的OD值，并按下述公式计算细胞存活率：细胞成活率(％)＝[(实验组OD值–对照组OD值)/(模型组OD值–对照组OD值)]*100％。
表1 化合物1保肝活性评价结果
实施例2
3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28,29-二羧酸(3-O-α-L-arabinopyranosyl-3β-hydroxyolean-12-ene-28,29-dioic acid)(2)的肝细胞(HepG2cells)保护作用：
步骤一、化合物3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28,29-二羧酸的制备：
梁王茶(Metapanax delavayi)鲜叶(30公斤)粉碎后用75L工业甲醇于70℃下回流提取3次，每次三小时。减压蒸馏去除有机溶剂后，提取液用水溶解至3L，用氯仿萃取四次(氯仿/样品溶液，v/v，2/3)。水层上样于D-101大孔树脂柱(250×30cm)，用甲醇/水洗脱(3:7、5:5，8:2和1:0，v/v)得到四个部分(Fr.A-D)。
Fr.C(126g)进行硅胶柱色谱法得到六个组分(Fr.1-6)。Fr.6(45g)进行硅胶色谱柱分离，用氯仿/甲醇/水(8:2:0.2，v/v/v)，进一步进行Rp-18反相色谱柱层析，用甲醇/水(30％-100％)梯度洗脱，洗脱液体减压浓缩得到化合物(2)3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28,29-二羧酸(23mg)
步骤二、化合物3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28,29-二羧酸的保肝活性评价。
将化合物2配制成浓度为1μg/mL的溶液，取对数生长期的HepG2细胞8x104cells/100μL well接种于96孔细胞板中，37℃、5％CO2条件培养44小时，取10μL浓度为1μg/mL的化合物溶液至于孔内，同时设有以姜黄素25μM，每孔μL，为阳性对照，于37℃、5％CO2条件培养4小时，每孔加入100μL含有8％乙醇的培养基，相同培养条件下继续培养24小时，控干培养基，加入200μL 10％ALamar blue的培养溶液，充分混匀，相同条件下继续培养3小时，测定570nm的OD值，并按下述公式计算细胞存活率：细胞成活率(％)＝[(实验组OD值–对照组OD值)/(模型组OD值–对照组OD值)]*100％。
表2 化合物2的保肝活性评价结果
实施例3
3-O-β-D-木吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28，29-二羧酸(3-O-β-D-xylopyranosyl-3β-hydroxyolean-12-ene-28,29-dioic acid)(3)的肝细胞(HepG2cells)保护作用：
步骤一、化合物3-O-β-D-木吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28，29-二羧酸(3)的制备。梁王茶(Metapanax delavayi)鲜叶(30公斤)粉碎后用75L工业甲醇于70℃下回流提取3次，每次三小时。减压蒸馏去除有机溶剂后，提取液用水溶解至3L，用氯仿萃取四次(氯仿/样品溶液，v/v，2/3)。水层上样于D-101大孔树脂柱(250×30cm)，用甲醇/水洗脱(3:7、5:5，8:2和1:0，v/v)得到四个部分(Fr.A-D)。
Fr.C(126g)进行硅胶柱色谱法得到六个组分(Fr.1-6)。Fr.6(45g)进行硅胶色谱柱分离，用氯仿/甲醇/水(8∶2∶0.2，v/v/v)，进一步进行Rp-18反相色谱柱层析，用甲醇/水(30％-100％)梯度洗脱，洗脱液体减压浓缩得到化合物(3)3-O-β-D-木吡喃糖基-3β羟基齐墩果烷-12-烯-28,29-二羧酸(25mg)。
步骤二、化合物3-O-β-D-木吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28，29-二羧酸保肝活性评价。
将化合物3配制成浓度为1μg/mL的溶液，取对数生长期的HepG2细胞8x104cells/100μL well接种于96孔细胞板中，37℃、5％CO2条件培养44小时，取10μL浓度为1μg/mL的化合物溶液至于孔内，同时设有以姜黄素25μM，每孔μL，为阳性对照，于37℃、5％CO2条件培养4小时，每孔加入100μL含有8％乙醇的培养基，相同培养条件下继续培养24小时，控干培养基，加入200μL 10％ALamar blue的培养溶液，充分混匀，相同条件下继续培养3小时，测定570nm的OD值，并按下述公式计算细胞存活率：细胞成活率(％)＝[(实验组OD值–对照组OD值)/(模型组OD值–对照组OD值)]*100％。
表3 化合物3的保肝活性评价结果
实施例4
3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28-羧酸(3-O-α-L-arabinopyranosyl-3β-hydroxyolean-12-ene-28-oic acid)(4)的肝细胞(HepG2cells)保护作用：
步骤一、化合物3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28-羧酸(4)的制备。梁王茶(Metapanax delavayi)鲜叶(30公斤)粉碎后用75L工业甲醇于70℃下回流提取3次，每次三小时。减压蒸馏去除有机溶剂后，提取液用水溶解至3L，用氯仿萃取四次(氯仿/样品溶液，v/v，2/3)。水层上样于D-101大孔树脂柱(250×30cm)，用甲醇/水洗脱(3:7、5:5，8:2和1:0，v/v)得到四个部分(Fr.A-D)。
Fr.D(50g)进行硅胶柱色谱法分离，用氯仿/甲醇/水(8∶2∶0.2，v/v/v)洗脱，洗脱液减压浓缩除去有机溶剂，进一步进行Rp-18反相色谱柱层析，用甲醇/水(30％-100％)梯度洗脱，洗脱液体减压浓缩得到化合物(4)3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28-羧酸(35mg)。
步骤二、化合物3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28-羧酸的保肝活性评价。
将化合物4配制成浓度为1μg/mL的溶液，取对数生长期的HepG2细胞8x104cells/100μL well接种于96孔细胞板中，37℃、5％CO2条件培养44小时，取10μL浓度为1μg/mL的化合物溶液至于孔内，同时设有以姜黄素25μM，每孔μL，为阳性对照，于37℃、5％CO2条件培养4小时，每孔加入100μL含有8％乙醇的培养基，相同培养条件下继续培养24小时，控干培养基，加入200μL 10％ALamar blue的培养溶液，充分混匀，相同条件下继续培养3小时，测定570nm的OD值，并按下述公式计算细胞存活率：细胞成活率(％)＝[(实验组OD值–对照组OD值)/(模型组OD值–对照组OD值)]*100％。
表4 化合物4的保肝活性评价结果
实施例5
3-O-α-(2'-O-乙酰基)-L-阿拉伯吡喃糖基-3β-羟基齐墩果-12-烯-28,29–二羧酸(异叶梁王茶苷IV)3-O-α-(2′-O-acetyl)-L-arabinopyranosyl-3β-hydroxyolean-12-ene-28,29-dioic acid,(yiye-liangwanoside IV)(5)的肝细胞(HepG2cells)保护作用：
步骤一、化合物3-O-α-(2'-O-乙酰基)-L-阿拉伯吡喃糖基-3β-羟基齐墩果-12-烯-28,29–二羧酸(异叶梁王茶苷IV)的制备。
梁王茶(Metapanax delavayi)鲜叶(30公斤)粉碎后用75L工业甲醇于70℃下回流提取3次，每次三小时。减压蒸馏去除有机溶剂后，提取液用水溶解至3L，用氯仿萃取四次(氯仿/样品溶液，v/v，2/3)。水层上样于D-101大孔树脂柱(250×30cm)，用甲醇/水洗脱(3:7、5:5，8:2和1:0，v/v)得到四个部分(Fr.A-D)。
Fr.C(126g)进行硅胶柱色谱法得到六个组分(Fr.1-6)。Fr.6(45g)进行硅胶色谱柱分离，用氯仿/甲醇/水(8∶2∶0.2，v/v/v)，进一步进行Rp-18反相色谱柱层析，用甲醇/水(30％-100％)梯度洗脱，洗脱液体减压浓缩得到化合物(5)3-O-α-(2'-O-乙酰基)-L-阿拉伯吡喃糖基-3β-羟基齐墩果-12-烯-28,29–二羧酸(异叶梁王茶苷IV)(18mg)。
步骤二、化合物3-O-α-(2'-O-乙酰基)-L-阿拉伯吡喃糖基-3β-羟基齐墩果-12-烯-28,29–二羧酸(异叶梁王茶苷IV)的保肝活性评价。
将化合物5配制成浓度为1μg/mL的溶液，取对数生长期的HepG2细胞8x104cells/100μL well接种于96孔细胞板中，37℃、5％CO2条件培养44小时，取10μL浓度为1μg/mL的化合物溶液至于孔内，同时设有以姜黄素25μM，每孔μL，为阳性对照，于37℃、5％CO2条件培养4小时，每孔加入100μL含有8％乙醇的培养基，相同培养条件下继续培养24小时，控干培养基，加入200μL 10％ALamar blue的培养溶液，充分混匀，相同条件下继续培养3小时，测定570nm的OD值，并按下述公式计算细胞存活率：细胞成活率(％)＝[(实验组OD值–对照组OD值)/(模型组OD值–对照组OD值)]*100％。
表5 化合物5的保肝活性价结果
实施例6
3-O-α-(4'-O-乙酰基)-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-α-L鼠李糖基(4→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果-12-烯-28,29-二羧酸,(异叶梁王茶苷X)3-O-α-(4′-O-acetyl)-L-arabinopyranosyl-28-O-α-L-rhamnopyranosyl(4→1)-O-β-D-glucopyranosyl(6→1)-O-β-D-glucopyranosyl-3β-hydroxyolean-12-ene-28,29-dioic acid(yiyeliangwanoside X)(6)的肝细胞(HepG2cells)保护作用：
步骤一、化合物3-O-α-(4'-O-乙酰基)-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-α-L鼠李糖基(4→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果-12-烯-28,29-二羧酸,(异叶梁王茶苷X)的制备：
梁王茶(Metapanax delavayi)鲜叶(30公斤)粉碎后用75L工业甲醇于70℃下回流提取3次，每次三小时。减压蒸馏去除有机溶剂后，提取液用水溶解至3L，用氯仿萃取四次(氯仿/样品溶液，v/v，2/3)。水层上样于D-101大孔树脂柱(250×30cm)，用甲醇/水洗脱(3:7、5:5，8:2和1:0，v/v)得到四个部分(Fr.A-D)。
Fr.D(50g)进行硅胶柱色谱法分离，用氯仿/甲醇/水(8∶2∶0.2，v/v/v)洗脱，洗脱液减压浓缩除去有机溶剂，进一步进行Rp-18反相色谱柱层析，用甲醇/水(30％-100％)梯度洗脱，洗脱液体减压浓缩得到化合物(6)3-O-α-(4'-O-乙酰基)-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-α-L鼠李糖基(4→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果-12-烯-28,29-二羧酸,(异叶梁王茶苷X)(72mg)。
步骤二、化合物3-O-α-(4'-O-乙酰基)-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-α-L鼠李糖基(4→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果-12-烯-28,29-二羧酸,(异叶梁王茶苷X)的保肝活性评价。
将化合物6配制成浓度为1μg/mL的溶液，取对数生长期的HepG2细胞8x104cells/100μL well接种于96孔细胞板中，37℃、5％CO2条件培养44小时，取10μL浓度为1μg/mL的化合物溶液至于孔内，同时设有以姜黄素25μM，每孔μL，为阳性对照，于37℃、5％CO2条件培养4小时，每孔加入100μL含有8％乙醇的培养基，相同培养条件下继续培养24小时，控干培养基，加入200μL 10％ALamar blue的培养溶液，充分混匀，相同条件下继续培养3小时，测定570nm的OD值，并按下述公式计算细胞存活率：细胞成活率(％)＝[(实验组OD值–对照组OD值)/(模型组OD值–对照组OD值)]*100％。
表6 化合物6的保肝活性评价结果
实施例7
3-O-α-(2'-O-乙酰基)-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-α-L鼠李糖基(4→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果-12-烯-28,29-二羧酸(异叶梁王茶苷IX)3-O-α-(2′-O-acetyl)-L-arabinopyranosyl-28-O-α-L-rhamnopyranosyl(4→1)-O-β-D-glucopyranosyl(6→1)-O-β-D-glucopyranosyl-3β-hydroxyolean-12-ene-28,29-dioic acid(yiyeliangwanoside IX)(7)的肝细胞(HepG2cells)保护作用：
步骤一、化合物3-O-α-(2'-O-乙酰基)-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-α-L鼠李糖基(4→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果-12-烯-28,29-二羧酸(异叶梁王茶苷IX)的制备。
梁王茶(Metapanax delavayi)鲜叶(30公斤)粉碎后用75L工业甲醇于70℃下回流提取3次，每次三小时。减压蒸馏去除有机溶剂后，提取液用水溶解至3L，用氯仿萃取四次(氯仿/样品溶液，v/v，2/3)。水层上样于D-101大孔树脂柱(250×30cm)，用甲醇/水洗脱(3:7、5:5，8:2和1:0，v/v)得到四个部分(Fr.A-D)。
Fr.C(126g)进行硅胶柱色谱法得到六个组分(Fr.1-6)。Fr.6(45g)进行硅胶色谱柱分离，用氯仿/甲醇/水(8∶2∶0.2，v/v/v)，进一步进行Rp-18反相色谱柱层析，用甲醇/水(30％-100％)梯度洗脱，洗脱液体减压浓缩得到化合物(7)3-O-α-(2'-O-乙酰基)-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-α-L鼠李糖基(4→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果-12-烯-28,29-二羧酸(异叶梁王茶苷IX)(100mg)。
步骤二、化合物3-O-α-(2'-O-乙酰基)-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-α-L鼠李糖基(4→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果-12-烯-28,29-二羧酸(异叶梁王茶苷IX)的保肝活性评价。
将化合物7配制成浓度为1μg/mL的溶液，取对数生长期的HepG2细胞8x104cells/100μL well接种于96孔细胞板中，37℃、5％CO2条件培养44小时，取10μL浓度为1μg/mL的化合物溶液至于孔内，同时设有以姜黄素25μM，每孔μL，为阳性对照，于37℃、5％CO2条件培养4小时，每孔加入100μL含有8％乙醇的培养基，相同培养条件下继续培养24小时，控干培养基，加入200μL 10％ALamar blue的培养溶液，充分混匀，相同条件下继续培养3小时，测定570nm的OD值，并按下述公式计算细胞存活率：细胞成活率(％)＝[(实验组OD值–对照组OD值)/(模型组OD值–对照组OD值)]*100％。
表7 化合物7的保肝活性评价结果
制剂实施例1：
按实施例1-7的方法，新鲜的梁王茶叶片粉碎，用5倍样品重量的工业甲醇70℃回流提取3次、每次3h。过滤，滤液减压浓缩去除甲醇，剩余物水溶解后用氯仿萃取4次，氯仿/样品水溶液的体积比为2/3，水层提取物经Diaion101柱(250×30cm)进行柱层析，先用水冲洗除去多糖，然后用甲醇/水体积比为3:7，5:5，8:2和1:0的甲醇水溶液洗脱得到4个部分Fractions A-D；Fraction C和D分别经硅胶柱、Rp-18柱和Sephadex LH-20凝胶柱，用体积比MeOH：H2O(30-100)：(70-0)、CHCl3∶MeOH∶H2O(7:3:0.5)和CHCl3∶MeOH∶H2O(8:2:0.2)的溶液进行层析分离、纯化，得到化合物1-7，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。
制剂实施例2：
按实施例1-7的方法先制得齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物及其药学上可接受的配糖体,将其溶于无菌注射用水中，搅拌使其充分溶解，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于2安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。
制剂实施例3：
将按实施例1-7的方法所得到齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物及其药学上可接受的配糖体，与赋形剂重量比为9:1的比例加入赋形剂，制成粉剂。
制剂实施例4：
按实施例1-7的方法先制得齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物及其药学上可接受的配糖体，按其与赋形剂重量比为1:5-1:10的比例加入赋形剂，制粒压片。
制剂实施例5：
按实施例1-7的方法先制得齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物，或按常规口服液制法制成口服液。
制剂实施例6：
按实施例1-7的方法先制得齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物及其药学上可接受的配糖体，按其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。
制剂实施例7：
按实施例1-7的方法先制得齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物及其药学上可接受的配糖体，按其与赋形剂重量比为3:1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。

Claims (10)

1.如下结构式所示的3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28,29-二烯酸(1)，及其药学上可接受的配糖体，
2.根据权利要求1所述的3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-28-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基-3β-羟基齐墩果烷-12-烯-28,29-二烯酸，及其药学上可接受的配糖体，其特征在于所述的药学上可接受的配糖体是指葡萄糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖。
3.药物组合物，其含有如下结构式(I)所示的齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物及其药学上可接受的配糖体作为有效成分，至少还包含一种药学上可接受的载体，
通式I中R1为糖基或乙酰化糖基，R2为氢、糖基，R3为羧基或甲基。
4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于其中所述的齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物为：
化合物1：R1为-α-L-阿拉伯吡喃糖基，R2为-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基，R3为羧基；
化合物2：R1为-α-L-阿拉伯吡喃糖基，R2为氢，R3为羧基；
化合物3：R1为-β-D-木吡喃糖基，R2为氢，R3为羧基；
化合物4：R1为-α-L-阿拉伯吡喃糖基，R2为氢，R3为甲基；
化合物5：R1为-(2'-O-乙酰基)-α-L-阿拉伯吡喃糖基，R2为氢，R3为羧基；
化合物6：R1为-(4'-O-乙酰基)-α-L-阿拉伯吡喃糖基，R2为-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基(4→1)-α-L-鼠李糖基，R3为羧基；
化合物7：R1为-(2'-O-乙酰基)-α-L-阿拉伯吡喃糖基，R2为-O-β-D-葡萄吡喃糖基(6→1)-O-β-D-葡萄吡喃糖基(4→1)-α-L-鼠李糖基，R3为羧基；
5.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于所述的药学上可接受的配糖体是指葡萄糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖。
6.权利要求4所述的药物组合物中的齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物的制备方法，其特征在于将新鲜的梁王茶叶片粉碎，用5倍样品重量的工业甲醇70℃下回流提取3次、每次3h，过滤，滤液减压浓缩去除甲醇，剩余物水溶解后用氯仿萃取4次，氯仿/样品水溶液的体积比为2/3，水层提取物经规格为250×30cm的Diaion 101柱进行柱层析，先用水冲洗除去多糖，然后用甲醇/水体积比为3:7，5:5，8:2和1:0的溶液洗脱得到4个部分Fractions A-D；Fraction C和D分别经硅胶柱、Rp-18柱和Sephadex LH-20凝胶柱，用MeOH/H2O 30％-100％、CHCl3∶MeOH∶H2O体积比为7:3:0.5和CHCl3∶MeOH∶H2O体积比8:2:0.2的溶液进行层析分离、纯化，得到化合物1-7。
7.权利要求3或4所述的药物组合物中的齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物及其药学上可接受的配糖体在制备预防或治疗肝损伤疾病的药物中的应用。
8.权利要求3或4所述的药物组合物中的齐墩果烷型三萜皂苷类衍生物及其药学上可接受的配糖体在制备治疗或预防非病毒性肝炎的药物中的应用。
9.权利要求3或4所述的药物组合物在制备预防或治疗肝损伤疾病的药物中的应用。
10.权利要求3或4所述的药物组合物在制备治疗或预防非病毒性肝炎的药物中的应用。
CN201810006581.8A 2018-01-04 2018-01-04 C-3,28,29-三取代齐墩果烷三萜皂苷及其药物组合物 Pending CN108129542A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810006581.8A CN108129542A (zh) 2018-01-04 2018-01-04 C-3,28,29-三取代齐墩果烷三萜皂苷及其药物组合物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810006581.8A CN108129542A (zh) 2018-01-04 2018-01-04 C-3,28,29-三取代齐墩果烷三萜皂苷及其药物组合物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108129542A true CN108129542A (zh) 2018-06-08

Family

ID=62399325

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810006581.8A Pending CN108129542A (zh) 2018-01-04 2018-01-04 C-3,28,29-三取代齐墩果烷三萜皂苷及其药物组合物

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108129542A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109820883A (zh) * 2019-04-09 2019-05-31 大理大学 梁王茶属植物提取物及其药物组合物制备方法及其抗溃疡用途
CN114057825A (zh) * 2021-12-09 2022-02-18 江西中医药大学 一种齐墩果烷型三萜酸与其组合物及其制备方法和应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101190937A (zh) * 2006-12-01 2008-06-04 黄振华 具有保肝活性的化合物

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101190937A (zh) * 2006-12-01 2008-06-04 黄振华 具有保肝活性的化合物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
杨青: "《掌叶梁王茶茎皮的化学成分研究》", 《中国中药杂志 》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109820883A (zh) * 2019-04-09 2019-05-31 大理大学 梁王茶属植物提取物及其药物组合物制备方法及其抗溃疡用途
CN114057825A (zh) * 2021-12-09 2022-02-18 江西中医药大学 一种齐墩果烷型三萜酸与其组合物及其制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Fu et al. Cistanches Herba: an overview of its chemistry, pharmacology, and pharmacokinetics property
Xing et al. Chemical constituents, biological functions and pharmacological effects for comprehensive utilization of Eucommia ulmoides Oliver
CN101693730B (zh) 芒果叶苷及其制备方法与应用
CN102114102B (zh) 一种具有保肝利胆作用的中药提取物混合制剂及其应用
EP3789032A1 (en) Composition for preventing or treating cancer comprising extracts of anemone raddeana, lonicera species, and aralia elata containing high concentration of antitumor saponins, and method for preparing same
CN108129542A (zh) C-3,28,29-三取代齐墩果烷三萜皂苷及其药物组合物
WO2017148414A1 (zh) 褐藻多糖及其制备方法和用途
CN105878803B (zh) 一种具有防治酒精性肝损伤的人参竹叶组合物
CN101880306A (zh) 黄腊果皂苷类成分及其制备方法和应用
CN102462727A (zh) 玉郎伞总黄酮及其单体成分在制备抗肿瘤药物中的作用
CN101342186B (zh) 五环三萜皂苷化合物的用途
CN102898322B (zh) 一种化合物及其制法和用途
CN108815207A (zh) 蜈蚣草提取物在制备治疗早老性痴呆症药物中的应用
CN102988525A (zh) 山楂核中总木脂素的制备方法及新用途
CN103751269B (zh) 冬凌草提取物在α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用
CN109276637B (zh) 韭菜子提取物及其制备方法和在制备保肝护肝药物方面的应用
US20230404946A1 (en) Use of (5r,7r,10r)-12,15-dioxo-alpha-selinene in the preparation of drugs
CN102379889B (zh) 万年蒿提取物在制备抗肝损伤药物中的应用
CN108143754B (zh) 锡叶藤及其提取物在制备治疗和/或预防肿瘤药物方面的应用
CN112618560A (zh) 一种包含人参皂苷的药物组合物及其降血脂和抑制脂肪肝的用途
CN105198954A (zh) 通关藤中c21甾类化合物及其制备方法和应用
CN102093380B (zh) 环淫羊藿素苷元及其制备方法和应用
CN104958582A (zh) 一种淡竹叶提取物、含其制剂及用途
CN101195645B (zh) 抗乙肝病毒的鹊肾树提取物及其提取工艺
CN110559307A (zh) 一种合欢皮新木脂体化合物及其新用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20180608

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication