CN108094313A - 一种可保护猪肝脏的饲养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及猪饲养技术领域，特别涉及一种可保护猪肝脏的饲养方法，本申请的饲养方法主要是采用基础日粮进行饲喂，基础日粮由粗饲料、预混料和饲料添加剂组成；其中，粗饲料由麦麸、玉米胚芽、发酵苜蓿、豆渣、菜粕和米糠组成；预混料由啤酒渣、茶渣、食盐、叶酸和氯化胆碱组成；饲料添加剂由洋葱花青素、亚硫酸硒、火龙果皮提取物、芒果皮提取物核桃仁提取物组成；饲料中起主要保肝护肝作用的是饲料添加剂成分，添加剂中含有大量的洋葱花青素，还含有火龙果多糖、火龙果花色苷、黄酮类物质、单萜烯类物质和亚油酸等成分，配合花青素使用能有效起到保肝、护肝效果。
Description
【技术领域】
本发明涉及猪饲养技术领域，特别涉及一种可保护猪肝脏的饲养方法。
【背景技术】
肝脏对来自体内和体外的许多非营养性物质如各种药物、毒物以及体内某些代谢产物，具有生物转化作用。通过新陈代谢将它们彻底分解或以原形排出体外。这种作用也被称作“解毒功能”,某些毒物经过生物转化,可以转变为无毒或毒性较小,易于排泄的物质；但也有一些物质恰巧相反，毒性增强，溶解度降低。肝脏的生物转化方式很多，一般水溶性物质，常以原形从尿和胆汁排出；脂溶性物质则易在体内积聚，并影响细胞代谢，必须通过肝脏一系列酶系统作用将其灭活，或转化为水溶性物质，再予排出，肝脏是最主要的药物代谢器官。具有氧化作用：如乙醇在肝内氧化为乙醚、乙酸，再氧化为二氧化碳和水。这种类型又称氧化解毒；还原作用：如某些药物或毒物如氯霉素、硝基苯等可通过还原作用产生转化,三氯乙醛在体内还原为三氯乙醇,失去催眠作用；水解作用：如肝细胞含有多种水解酶，可将多种药物或毒物如普鲁卡因、普鲁卡因酰胺等水解；结合作用：如使药物或毒物与葡萄糖醛酸、乙酰辅酶A(乙酰化)、甘氨酸、3'-磷酸腺苷-5'-磷酸硫酸(PASA)、谷胱甘肽等结合。
然而，在肉猪在饲养过程中，由于肉猪生长过快，代谢能力增强，体内毒素过多，肝脏的负荷会加大将会有损动物体的肝脏，达不到有效的解毒功能而妨碍动物生长，然而目前并没有关于针对保护动物肝脏而研究的饲料添加剂，临床上也常用化学类药物进行保肝护肝，为此，有必要研究一种安全、有效、无毒易分解的饲料添加剂，能有效保护动物肝脏。
【发明内容】
鉴于上述内容，有必要研究一种安全、有效、无毒易分解的饲料添加剂，能有效保护动物肝脏。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种可保护猪肝脏的饲养方法，所述方法采用基础日粮进行饲喂，饲养的猪舍平均温度为15-20℃，相对湿度为60％-70％；所述基础日粮由粗饲料、预混料和饲料添加剂按照质量比为15-21:3-7：1组成；
所述粗饲料由如下重量份的成分组成：23份-37份的麦麸、13份-23份的玉米胚芽、35份-40份的发酵苜蓿、17份-27份的豆渣、6份-16份的菜粕和7份-18份的米糠；
所述预混料由如下重量份的成分组成：23份-33份的啤酒渣、13份-18份的茶渣、2份-5份的食盐、5份-9份的叶酸和3份-7份的氯化胆碱。
进一步的，所述饲料添加剂由如下重量份的成分组成：35份-45份的洋葱花青素、13份-23份的亚硫酸硒、11份-23份的火龙果皮提取物、7份-16份的芒果皮提取物和5份-16份的核桃仁提取物。
进一步的，所述洋葱花青素的制备方法包括如下步骤：
(1)将成熟洋葱清洗、除杂后切碎，然后按照固液质量比为1:2-4与水进行混合，放入打浆机中打成浆液，过滤后取滤液得到洋葱汁；
(2)按照0.1g/ml-0.5g/ml的添加酶溶液在35-40℃的温度条件下进行酶解，酶解8h-12h后一次离心分离取上清液用益生菌溶液进行益生菌处理、再进行二次离心取上清液得到洋葱清液；所述离心分离的离心转速为2000r/min-2500r/min；离心时间为15min-20min；所述益生菌的添加量为0.2g/ml-0.6g/ml，益生菌处理温度为23-27℃，处理时间为18h-20h；所述二次离心的的离心转速为4000r/min-5000r/min；离心时间为20min-30min；
(3)将步骤(2)得到的洋葱清液进行旋转蒸发浓缩得到密度为3.26g/cm3-4.15g/cm3的膏状物，然后将膏状物置于萃取釜中，在压力为4-5MPa时，用1，1，1，2-四氟乙烷对膏状物进行静态萃取60-80min，然后逐步释放压力，进行动态萃取，所述动态萃取时间为50min-60min；动态萃取的1，1，1，2-四氟乙烷出口流量为0.7-0.9L/min，溶有产物的1，1，1，2-四氟乙烷离开萃取釜后通过一段缠有加热带的钢管，由减压阀减压后排出得到洋葱花青素粗提液；
(4)真空浓缩去除步骤(3)内的1，1，1，2-四氟乙烷得到洋葱花青素清液，将花青素清液用大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附时，花青素清液上柱流速为0.5-1倍柱体积/小时，上柱温度为30-40℃，吸附完成后用体积百分数为80％的乙醇溶液进行洗脱，得到花青素洗脱液，将洗脱液进行真空浓缩、冷冻干燥得到所述洋葱花青素；所述洗脱时乙醇溶液的上柱流速为1-1.5倍柱体积/小时。
进一步的，所述步骤(2)酶溶液由果胶酶、纤维素酶和洋葱假单胞菌脂肪酶按照质量比为1:1-2:2-3混合制得；所述果胶酶的酶活力为1000u/g-1200u/g，纤维素酶的酶活力为800u/g-1000u/g，洋葱假单胞菌脂肪酶的酶活力为1200u/g-1500u/g。
进一步的，所述步骤(2)益生菌溶液由筛选后的酵母菌、枯草芽孢杆菌和乳球菌按照质量比为1:2-3:2-4混合制得；所述酵母菌液的有效活菌数为2.6×108～8.9×108CFU/g、所述枯草芽孢杆菌液的有效活菌数为4.5×109～9.1×109CFU/g、所述乳球菌液的有效活菌数为2.6×107～6.4×107CFU/g。
其中，所述酵母菌的筛选方法为：将酵母菌菌株接种到筛选培养基I上，在温度为37℃的条件下培养36h得到筛选后的酵母菌；其中，筛选培养基I成分为：壳聚糖15g、牛肉膏15g、酵母膏6g，蛋白胨15g，琼脂15g，芦荟甙5g，秋葵多糖5g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，洋葱汁30ml，纤维素10g，pH值7.1-7.9。
其中，所述枯草芽孢杆菌的筛选方法为：将枯草芽孢杆菌菌株接种到筛选培养基II上，在温度为35℃的条件下培养24h得到筛选后的枯草芽孢杆菌；其中，筛选培养基II成分为：蛋白胨15g、牛肉膏15g、酵母膏6g，琼脂15g，葡萄糖15g，火龙果多糖5g，水杨甙5g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，洋葱汁30ml，纤维素10g，pH值6.8-7.5。
其中，所述乳球菌的筛选方法为：将乳球菌菌株接种到筛选培养基III上，在温度为37℃的条件下培养36h得到筛选后的乳球菌；其中，筛选培养基III成分为：琼脂15g、水牛乳30ml、牛肉膏15g，酵母膏15g，红糖15g，葛根素15g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，洋葱汁30ml，纤维素10g，pH值5.6-6.3。
进一步的，所述步骤(3)1，1，1，2-四氟乙烷的体积百分数为25％。
本发明具有如下有益效果：
1、本申请使用生物酶对洋葱进行预处理，生物酶由果胶酶、纤维素酶和洋葱假单胞菌脂肪酶混合制得，其中，果胶酶能有效分解洋葱的果胶成分，纤维素酶能有效分解洋葱的细胞壁成分，洋葱假单胞菌脂肪酶能有效针对洋葱的细胞壁进行破壁，加快洋葱细胞内溶物质的析出，本申请还使用筛选后的益生菌溶液对洋葱进行预处理，微生物能加快对洋葱细胞的利用，加强细胞花青素的析出，但是，由于洋葱中含有较多的硫化物、维生素E和黄酮类物质物质，能起到抑菌作用，从而抑制微生物活性，对此，申请人研制出了筛选培养基，培养基中含有洋葱汁和芦荟甙、水杨甙、火龙果多糖等活性成分，能有一定的抑菌效果，经其筛选之后得到的益生菌具有较强的抗菌能力，能有效分解洋葱细胞，促进花青素的析出；本申请还采用了亚临界1，1，1，2-四氟乙烷流体进行萃取，以破坏臭氧潜能值为0的1，1，1，2-四氟乙烷(萃取剂，具有环境友好的特性。1，1，1，2-四氟乙烷的临界温度为，和较低的临界压力、较大的偶极距，对极性物质的溶解能力强、扩散系数大、黏度系数小的特点，而且在液态和临界点附近具有良好的溶剂性能，配合本申请的生物酶、益生菌处理能有效提高洋葱的花青素提取率和提取量，但其中还会有大量杂质，为了对花青素进行进一步净化、富集，本申请还使用大孔树脂对提取物进行进一步纯化。
2、本申请的饲养方法主要是采用基础日粮进行饲喂，基础日粮由粗饲料、预混料和饲料添加剂组成；其中，粗饲料由麦麸、玉米胚芽、发酵苜蓿、豆渣、菜粕和米糠组成；预混料由啤酒渣、茶渣、食盐、叶酸和氯化胆碱组成；饲料添加剂由洋葱花青素、亚硫酸硒、火龙果皮提取物、芒果皮提取物核桃仁提取物组成；饲料中起主要保肝护肝作用的是饲料添加剂成分，添加剂中含有大量的洋葱花青素可抑制乙醇和四氯化碳诱导的肝细胞损伤和刺激正常肝细胞增殖，可直接抑制肝细胞中自由基引起的脂质过氧化，也可刺激肝细胞中抗氧化酶系统的抗氧化能力，还可调节肝细胞内外钙离子浓度，从而起到保护肝脏的作用，其对本试验中，12－氧－14－烷酰佛波醇－13－乙酸酯诱导的小鼠肝脏组织中脂质过氧化的保护作用均要优于维生素C、维生素E及β－胡萝卜素；除了含有洋葱花青素外，添加剂中还含有火龙果多糖、火龙果花色苷、黄酮类物质、单萜烯类物质和亚油酸等成分，配合花青素使用能有效降低丙转氨酶和谷草转氨酶活性提高碱性磷酸酶活性，起到保护动物的肝脏、促进动物生长的效果。
【具体实施方式】
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
本说明书(包括任何附加权利要求、摘要)中公开的任一特征，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
实施例1：
本实施例提供了一种可保护猪肝脏的饲养方法，所述方法采用基础日粮进行饲喂，饲养的猪舍平均温度为15℃，相对湿度为60％；所述基础日粮由粗饲料、预混料和饲料添加剂按照质量比为15:3：1组成；
其中，粗饲料由如下重量份的成分组成：23份的麦麸、13份的玉米胚芽、35份的发酵苜蓿、17份的豆渣、6份的菜粕和7份的米糠；
其中，预混料由如下重量份的成分组成：23份的啤酒渣、13份的茶渣、2份的食盐、5份的叶酸和3份的氯化胆碱。
其中，饲料添加剂由如下重量份的成分组成：35份的洋葱花青素、13份的亚硫酸硒、11份的火龙果皮提取物、7份的芒果皮提取物和5份的核桃仁提取物。
①本实施例饲料添加剂中火龙果皮提取物的提取方法为：将新鲜火龙果皮剪碎，与体积百分数为75％的乙醇按照质量比为1:2进行混合，然后在回流提取器中进行回流提取，提取温度为105℃，提取时间为2h，过滤取滤液进行旋转蒸发浓缩，直至浓缩液为原液的1/5得到所述火龙果皮提取物，提取物中火龙果多糖含量为123.54mg/g、火龙果花色苷42.16mg/g、花青素13.64mg/g。
②本实施例饲料添加剂中芒果皮提取物的提取方法为：将新鲜芒果皮捣碎，与有机溶剂混合液按照质量比为1:1进行混合，有机溶剂混合液由体积百分数为20％的乙酸乙酯和75％的乙醇按照质量比为1:1进行混合，然后在回流提取器中进行回流提取，提取温度为105℃，提取时间为2h，过滤取滤液进行旋转蒸发浓缩去除有机溶剂，然后将浓缩液为原液的1/4得到所述芒果皮提取物，提取物中黄酮类物质含量为106.54mg/g、单萜烯类物质含量为74.15mg/g、糖苷类物质含量为94.18mg/g。
③本实施例饲料添加剂中核桃仁提取物的提取方法为：将含水率为5％的核桃仁粉碎后与体积百分数为75％的乙醇按照固液质量比1:2进行混合，在温度为100℃的水浴中搅拌温浸3次，每次40min，过滤，合并滤液进行减压蒸馏浓缩直至浓缩液为原液的1/5，得到所述核桃粉提取物，提取物中亚麻酸含量为161.17mg/g、亚油酸含量为105.08mg/g、维生素E含量为62.34mg/g、鞣质含量为89.42mg/g。
其中，洋葱花青素的制备方法包括如下步骤：
(1)将成熟洋葱清洗、除杂后切碎，然后按照固液质量比为1:2与水进行混合，放入打浆机中打成浆液，过滤后取滤液得到洋葱汁；
(2)按照0.1g/ml的添加酶溶液在35℃的温度条件下进行酶解，酶解8h后一次离心分离取上清液用益生菌溶液进行益生菌处理、再进行二次离心取上清液得到洋葱清液；所述离心分离的离心转速为2000r/min；离心时间为15min；所述益生菌的添加量为0.2g/ml，益生菌处理温度为23℃，处理时间为18h；所述二次离心的的离心转速为4000r/min；离心时间为20min；
(3)将步骤(2)得到的洋葱清液进行旋转蒸发浓缩得到密度为3.26g/cm3的膏状物，然后将膏状物置于萃取釜中，在压力为4MPa时，用1，1，1，2-四氟乙烷对膏状物进行静态萃取60min，然后逐步释放压力，进行动态萃取，所述动态萃取时间为50min；动态萃取的1，1，1，2-四氟乙烷出口流量为0.7L/min，溶有产物的1，1，1，2-四氟乙烷离开萃取釜后通过一段缠有加热带的钢管，由减压阀减压后排出得到洋葱花青素粗提液；
(4)真空浓缩去除步骤(3)内的1，1，1，2-四氟乙烷得到洋葱花青素清液，将花青素清液用大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附时，花青素清液上柱流速为0.5倍柱体积/小时，上柱温度为30℃，吸附完成后用体积百分数为80％的乙醇溶液进行洗脱，得到花青素洗脱液，将洗脱液进行真空浓缩、冷冻干燥得到所述洋葱花青素；所述洗脱时乙醇溶液的上柱流速为1倍柱体积/小时。
其中，步骤(2)酶溶液由果胶酶、纤维素酶和洋葱假单胞菌脂肪酶按照质量比为1:1:2混合制得；所述果胶酶的酶活力为1000u/g，纤维素酶的酶活力为800u/g，洋葱假单胞菌脂肪酶的酶活力为1200u/g。
其中，步骤(2)益生菌溶液由酵母菌、枯草芽孢杆菌和乳球菌经过筛选后按照质量比为1:2:2混合制得；所述酵母菌液的有效活菌数为2.6×108CFU/g、所述枯草芽孢杆菌液的有效活菌数为4.5×109CFU/g、所述乳球菌液的有效活菌数为2.6×107CFU/g。
①益生菌溶液中酵母菌的筛选方法为：将酵母菌菌株接种到筛选培养基I上，在温度为37℃的条件下培养36h得到筛选后的酵母菌；其中，筛选培养基I成分为：壳聚糖15g、牛肉膏15g、酵母膏6g，蛋白胨15g，琼脂15g，芦荟甙5g，秋葵多糖5g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，洋葱汁30ml，纤维素10g，pH值7.1。
②益生菌溶液中枯草芽孢杆菌的筛选方法为：将枯草芽孢杆菌菌株接种到筛选培养基II上，在温度为35℃的条件下培养24h得到筛选后的枯草芽孢杆菌；其中，筛选培养基II成分为：蛋白胨15g、牛肉膏15g、酵母膏6g，琼脂15g，葡萄糖15g，火龙果多糖5g，水杨甙5g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，洋葱汁30ml，纤维素10g，pH值6.8。
③益生菌溶液中乳球菌的筛选方法为：将乳球菌菌株接种到筛选培养基III上，在温度为37℃的条件下培养36h得到筛选后的乳球菌；其中，筛选培养基III成分为：琼脂15g、水牛乳30ml、牛肉膏15g，酵母膏15g，红糖15g，葛根素15g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，洋葱汁30ml，纤维素10g，pH值5.6。
其中，步骤(3)1，1，1，2-四氟乙烷的体积百分数为25％。
实施例2：
本实施例提供了一种可保护猪肝脏的饲养方法，所述方法采用基础日粮进行饲喂，饲养的猪舍平均温度为20℃，相对湿度为70％；所述基础日粮由粗饲料、预混料和饲料添加剂按照质量比为21:7：1组成；
其中，粗饲料由如下重量份的成分组成：37份的麦麸、23份的玉米胚芽、40份的发酵苜蓿、27份的豆渣、16份的菜粕和18份的米糠；
其中，预混料由如下重量份的成分组成：33份的啤酒渣、18份的茶渣、5份的食盐、9份的叶酸和7份的氯化胆碱。
其中，饲料添加剂由如下重量份的成分组成：45份的洋葱花青素、23份的亚硫酸硒、23份的火龙果皮提取物、16份的芒果皮提取物和16份的核桃仁提取物。
①本实施例饲料添加剂中火龙果皮提取物的提取方法、芒果皮提取物的提取方法、核桃仁提取物的提取方法与实施例1完全一致。
其中，洋葱花青素的制备方法包括如下步骤：
(1)将成熟洋葱清洗、除杂后切碎，然后按照固液质量比为1:4与水进行混合，放入打浆机中打成浆液，过滤后取滤液得到洋葱汁；
(2)按照0.5g/ml的添加酶溶液在40℃的温度条件下进行酶解，酶解12h后一次离心分离取上清液用益生菌溶液进行益生菌处理、再进行二次离心取上清液得到洋葱清液；所述离心分离的离心转速为2500r/min；离心时间为20min；所述益生菌的添加量为0.6g/ml，益生菌处理温度为27℃，处理时间为20h；所述二次离心的的离心转速为5000r/min；离心时间为30min；
(3)将步骤(2)得到的洋葱清液进行旋转蒸发浓缩得到密度为4.15g/cm3的膏状物，然后将膏状物置于萃取釜中，在压力为5MPa时，用1，1，1，2-四氟乙烷对膏状物进行静态萃取80min，然后逐步释放压力，进行动态萃取，所述动态萃取时间为60min；动态萃取的1，1，1，2-四氟乙烷出口流量为0.9L/min，溶有产物的1，1，1，2-四氟乙烷离开萃取釜后通过一段缠有加热带的钢管，由减压阀减压后排出得到洋葱花青素粗提液；
(4)真空浓缩去除步骤(3)内的1，1，1，2-四氟乙烷得到洋葱花青素清液，将花青素清液用大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附时，花青素清液上柱流速为1倍柱体积/小时，上柱温度为40℃，吸附完成后用体积百分数为80％的乙醇溶液进行洗脱，得到花青素洗脱液，将洗脱液进行真空浓缩、冷冻干燥得到所述洋葱花青素；所述洗脱时乙醇溶液的上柱流速为1.5倍柱体积/小时。
其中，步骤(2)酶溶液由果胶酶、纤维素酶和洋葱假单胞菌脂肪酶按照质量比为1:2:3混合制得；所述果胶酶的酶活力为1200u/g，纤维素酶的酶活力为1000u/g，洋葱假单胞菌脂肪酶的酶活力为1500u/g。
其中，步骤(2)益生菌溶液由酵母菌、枯草芽孢杆菌和乳球菌经过筛选后按照质量比为1:3:4混合制得；所述酵母菌液的有效活菌数为8.9×108CFU/g、所述枯草芽孢杆菌液的有效活菌数为9.1×109CFU/g、所述乳球菌液的有效活菌数为6.4×107CFU/g。
①益生菌溶液中酵母菌的筛选方法为：将酵母菌菌株接种到筛选培养基I上，在温度为37℃的条件下培养36h得到筛选后的酵母菌；其中，筛选培养基I成分为：壳聚糖15g、牛肉膏15g、酵母膏6g，蛋白胨15g，琼脂15g，芦荟甙5g，秋葵多糖5g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，洋葱汁30ml，纤维素10g，pH值7.9。
②益生菌溶液中枯草芽孢杆菌的筛选方法为：将枯草芽孢杆菌菌株接种到筛选培养基II上，在温度为35℃的条件下培养24h得到筛选后的枯草芽孢杆菌；其中，筛选培养基II成分为：蛋白胨15g、牛肉膏15g、酵母膏6g，琼脂15g，葡萄糖15g，火龙果多糖5g，水杨甙5g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，洋葱汁30ml，纤维素10g，pH值7.5。
③益生菌溶液中乳球菌的筛选方法为：将乳球菌菌株接种到筛选培养基III上，在温度为37℃的条件下培养36h得到筛选后的乳球菌；其中，筛选培养基III成分为：琼脂15g、水牛乳30ml、牛肉膏15g，酵母膏15g，红糖15g，葛根素15g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，洋葱汁30ml，纤维素10g，pH值6.3。
其中，步骤(3)1，1，1，2-四氟乙烷的体积百分数为25％。
实施例3：
本实施例提供了一种本实施例提供了一种可保护猪肝脏的饲养方法，所述方法采用基础日粮进行饲喂，饲养的猪舍平均温度为18℃，相对湿度为65％；所述基础日粮由粗饲料、预混料和饲料添加剂按照质量比为17:5：1组成；
其中，粗饲料由如下重量份的成分组成：28份的麦麸、18份的玉米胚芽、37份的发酵苜蓿、21份的豆渣、12份的菜粕和11份的米糠；
其中，预混料由如下重量份的成分组成：27份的啤酒渣、15份的茶渣、3份的食盐、4份的叶酸和5份的氯化胆碱。
其中，饲料添加剂由如下重量份的成分组成：40份的洋葱花青素、18份的亚硫酸硒、19份的火龙果皮提取物、9份的芒果皮提取物和13份的核桃仁提取物。
①本实施例饲料添加剂中火龙果皮提取物的提取方法、芒果皮提取物的提取方法、核桃仁提取物的提取方法与实施例1完全一致。
其中，洋葱花青素的制备方法包括如下步骤：
(1)将成熟洋葱清洗、除杂后切碎，然后按照固液质量比为1:3与水进行混合，放入打浆机中打成浆液，过滤后取滤液得到洋葱汁；
(2)按照0.4g/ml的添加酶溶液在37℃的温度条件下进行酶解，酶解10h后一次离心分离取上清液用益生菌溶液进行益生菌处理、再进行二次离心取上清液得到洋葱清液；所述离心分离的离心转速为2300r/min；离心时间为17min；所述益生菌的添加量为0.4g/ml，益生菌处理温度为25℃，处理时间为19h；所述二次离心的的离心转速为4500r/min；离心时间为25min；
(3)将步骤(2)得到的洋葱清液进行旋转蒸发浓缩得到密度为3.89g/cm3的膏状物，然后将膏状物置于萃取釜中，在压力为4.5MPa时，用1，1，1，2-四氟乙烷对膏状物进行静态萃取70min，然后逐步释放压力，进行动态萃取，所述动态萃取时间为55min；动态萃取的1，1，1，2-四氟乙烷出口流量为0.8L/min，溶有产物的1，1，1，2-四氟乙烷离开萃取釜后通过一段缠有加热带的钢管，由减压阀减压后排出得到洋葱花青素粗提液；
(4)真空浓缩去除步骤(3)内的1，1，1，2-四氟乙烷得到洋葱花青素清液，将花青素清液用大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附时，花青素清液上柱流速为0.7倍柱体积/小时，上柱温度为35℃，吸附完成后用体积百分数为80％的乙醇溶液进行洗脱，得到花青素洗脱液，将洗脱液进行真空浓缩、冷冻干燥得到所述洋葱花青素；所述洗脱时乙醇溶液的上柱流速为1.2倍柱体积/小时。
其中，步骤(2)酶溶液由果胶酶、纤维素酶和洋葱假单胞菌脂肪酶按照质量比为1:1:3混合制得；所述果胶酶的酶活力为1100u/g，纤维素酶的酶活力为900u/g，洋葱假单胞菌脂肪酶的酶活力为1300u/g。
其中，步骤(2)益生菌溶液由酵母菌、枯草芽孢杆菌和乳球菌经过筛选后按照质量比为1:2:3混合制得；所述酵母菌液的有效活菌数为4.9×108CFU/g、所述枯草芽孢杆菌液的有效活菌数为6.1×109CFU/g、所述乳球菌液的有效活菌数为4.4×107CFU/g。
①益生菌溶液中酵母菌的筛选方法为：将酵母菌菌株接种到筛选培养基I上，在温度为37℃的条件下培养36h得到筛选后的酵母菌；其中，筛选培养基I成分为：壳聚糖15g、牛肉膏15g、酵母膏6g，蛋白胨15g，琼脂15g，芦荟甙5g，秋葵多糖5g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，洋葱汁30ml，纤维素10g，pH值7.5。
②益生菌溶液中枯草芽孢杆菌的筛选方法为：将枯草芽孢杆菌菌株接种到筛选培养基II上，在温度为35℃的条件下培养24h得到筛选后的枯草芽孢杆菌；其中，筛选培养基II成分为：蛋白胨15g、牛肉膏15g、酵母膏6g，琼脂15g，葡萄糖15g，火龙果多糖5g，水杨甙5g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，洋葱汁30ml，纤维素10g，pH值7.2。
③益生菌溶液中乳球菌的筛选方法为：将乳球菌菌株接种到筛选培养基III上，在温度为37℃的条件下培养36h得到筛选后的乳球菌；其中，筛选培养基III成分为：琼脂15g、水牛乳30ml、牛肉膏15g，酵母膏15g，红糖15g，葛根素15g，氯化钠5g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.25g，洋葱汁30ml，纤维素10g，pH值5.8。
其中，步骤(3)1，1，1，2-四氟乙烷的体积百分数为25％。
花青素提取效果测试实验：
对照组1：
本对照组不用生物酶对洋葱进行处理，其它制备方法与实施例1完全相同。
对照组2：
本对照组不使用益生菌菌液对洋葱进行处理，其它制备方法与实施例1完全相同。
对照组3：
本对照组使用益生菌菌液未经过筛选处理，其它制备方法与实施例1完全相同。
对照组4：
本对照组的益生菌菌液使用酵母菌和乳球菌经过筛选后按照质量比为1:2混合制得，其它筛选方法、制备方法与实施例1完全相同。
对照组5：
本对照组的益生菌菌液使用酵母菌和枯草芽孢杆菌经过筛选后按照质量比为1:2混合制得，其它筛选方法、制备方法与实施例1完全相同。
对照组6：
本对照组的益生菌菌液使用乳球菌和枯草芽孢杆菌经过筛选后按照质量比为1:1混合制得，其它筛选方法、制备方法与实施例1完全相同。
对照组7：
本对照组的1，1，1，2-四氟乙烷的体积百分数为20％，其它制备方法与实施例1完全相同。
对照组8：
本对照组的1，1，1，2-四氟乙烷的体积百分数为15％，其它制备方法与实施例1完全相同。
对照组9：
本对照组的1，1，1，2-四氟乙烷的体积百分数为30％，其它制备方法与实施例1完全相同。
对照组10：
本对照组的1，1，1，2-四氟乙烷的体积百分数为35％，其它制备方法与实施例1完全相同。
对照组11：
本对照组将1，1，1，2-四氟乙烷溶液替换为乙醇溶液，其它制备方法与实施例1完全相同。
测试实验：
测定实施例1-3和对照组1-11中，花青素的产量、提取率以及DPPH自由基清除率，具体情况见表1：
表1
| 组别 | 产量(mg/g) | 提取率(％) | DPPH自由基清除率(％) |
| 实施例1 | 14.34 | 5.34 | 90.22 |
| 实施例2 | 15.98 | 6.98 | 89.76 |
| 实施例3 | 14.77 | 5.47 | 89.07 |
| 对照组1 | 8.73 | 2.34 | 65.87 |
| 对照组2 | 3.54 | 0.58 | 43.98 |
| 对照组3 | 8.43 | 2.11 | 65.90 |
| 对照组4 | 7.45 | 1.98 | 65.07 |
| 对照组5 | 8.04 | 1.97 | 66.03 |
| 对照组6 | 7.98 | 1.56 | 64.75 |
| 对照组7 | 4.67 | 0.62 | 45.02 |
| 对照组8 | 5.78 | 0.74 | 46.43 |
| 对照组9 | 4.22 | 0.65 | 47.96 |
| 对照组10 | 4.06 | 0.68 | 43.54 |
| 对照组11 | 5.03 | 0.72 | 46.65 |
由上表可知，实施例1-3的花青素的产量、提取率以及DPPH自由基清除率均高于对照组1-11，其中，对照组2、对照组7-11的花青素产量和提取率比其他对照组低，说明本申请的益生菌处理、体积百分数为25％的1，1，1，2-四氟乙烷溶液亚临界提取能有效提高洋葱的花青素产量和提取率。
测试实验：
按照如下试验组制备基础日粮，并进行试验，试验组基础日粮的配置方法如下：
试验组1：按照实施例1的方法生产基础日粮；
试验组2：本试验组基础日粮不使用实施例1的饲料添加剂，即，组分为：粗饲料和预混料按照质量比为15:3组成，其中，粗饲料由如下重量份的成分组成：23份的麦麸、13份的玉米胚芽、35份的发酵苜蓿、17份的豆渣、6份的菜粕和7份的米糠；其中，预混料由如下重量份的成分组成：23份的啤酒渣、13份的茶渣、2份的食盐、5份的叶酸和3份的氯化胆碱。其他制备方法与实施例1完全一致。
试验组3：本试验组基础日粮的饲料添加剂中使用葡萄籽花青素替代洋葱花青素，即，组分为：粗饲料、预混料和饲料添加剂按照质量比为15:3：1组成，其中，粗饲料由如下重量份的成分组成：23份的麦麸、13份的玉米胚芽、35份的发酵苜蓿、17份的豆渣、6份的菜粕和7份的米糠；其中，预混料由如下重量份的成分组成：23份的啤酒渣、13份的茶渣、2份的食盐、5份的叶酸和3份的氯化胆碱，其中，饲料添加剂由如下重量份的成分组成：35份的葡萄籽花青素、13份的亚硫酸硒、11份的火龙果皮提取物、7份的芒果皮提取物和5份的核桃仁提取物。其他制备方法与实施例1完全一致。
试验组4：本试验组基础日粮的饲料添加剂中不使用洋葱花青素，即，组分为：粗饲料、预混料和饲料添加剂按照质量比为15:3：1组成，其中，粗饲料由如下重量份的成分组成：23份的麦麸、13份的玉米胚芽、35份的发酵苜蓿、17份的豆渣、6份的菜粕和7份的米糠；其中，预混料由如下重量份的成分组成：23份的啤酒渣、13份的茶渣、2份的食盐、5份的叶酸和3份的氯化胆碱，其中，饲料添加剂由如下重量份的成分组成：13份的亚硫酸硒、11份的火龙果皮提取物、7份的芒果皮提取物和5份的核桃仁提取物。其他制备方法与实施例1完全一致。
试验组5：本试验组基础日粮的饲料添加剂中不使用亚硫酸硒，即，组分为：粗饲料、预混料和饲料添加剂按照质量比为15:3：1组成，其中，粗饲料由如下重量份的成分组成：23份的麦麸、13份的玉米胚芽、35份的发酵苜蓿、17份的豆渣、6份的菜粕和7份的米糠；其中，预混料由如下重量份的成分组成：23份的啤酒渣、13份的茶渣、2份的食盐、5份的叶酸和3份的氯化胆碱，其中，饲料添加剂由如下重量份的成分组成：35份的洋葱花青素、11份的火龙果皮提取物、7份的芒果皮提取物和5份的核桃仁提取物。其他制备方法与实施例1完全一致。
试验组6：本试验组基础日粮的饲料添加剂中不使用火龙果皮提取物，即，组分为：粗饲料、预混料和饲料添加剂按照质量比为15:3：1组成，其中，粗饲料由如下重量份的成分组成：23份的麦麸、13份的玉米胚芽、35份的发酵苜蓿、17份的豆渣、6份的菜粕和7份的米糠；其中，预混料由如下重量份的成分组成：23份的啤酒渣、13份的茶渣、2份的食盐、5份的叶酸和3份的氯化胆碱，其中，饲料添加剂由如下重量份的成分组成：35份的洋葱花青素、13份的亚硫酸硒、7份的芒果皮提取物和5份的核桃仁提取物。其他制备方法与实施例1完全一致。
试验组7：本试验组基础日粮的饲料添加剂中不使用芒果皮提取物，即，组分为：粗饲料、预混料和饲料添加剂按照质量比为15:3：1组成，其中，粗饲料由如下重量份的成分组成：23份的麦麸、13份的玉米胚芽、35份的发酵苜蓿、17份的豆渣、6份的菜粕和7份的米糠；其中，预混料由如下重量份的成分组成：23份的啤酒渣、13份的茶渣、2份的食盐、5份的叶酸和3份的氯化胆碱，其中，饲料添加剂由如下重量份的成分组成：35份的洋葱花青素、13份的亚硫酸硒、11份的火龙果皮提取物和5份的核桃仁提取物。其他制备方法与实施例1完全一致。
试验组8：本试验组基础日粮的饲料添加剂中不使用核桃仁提取物，即，组分为：粗饲料、预混料和饲料添加剂按照质量比为15:3：1组成，其中，粗饲料由如下重量份的成分组成：23份的麦麸、13份的玉米胚芽、35份的发酵苜蓿、17份的豆渣、6份的菜粕和7份的米糠；其中，预混料由如下重量份的成分组成：23份的啤酒渣、13份的茶渣、2份的食盐、5份的叶酸和3份的氯化胆碱，其中，饲料添加剂由如下重量份的成分组成：35份的洋葱花青素、13份的亚硫酸硒、11份的火龙果皮提取物和7份的芒果皮提取物。其他制备方法与实施例1完全一致。
测试实验：
采用试验例1-8的基础日粮对猪进行饲喂，2个月后，测试猪的血清酶活性(包括谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶)具体见表3：
表3
| 组别 | 谷丙转氨酶(U/L) | 谷草转氨酶(U/L) | 碱性磷酸酶(U/L) |
| 试验组1 | 84.25 | 50.47 | 134.26 |
| 试验组2 | 123.39 | 65.78 | 107.48 |
| 试验组3 | 97.94 | 56.28 | 113.24 |
| 试验组4 | 103.26 | 62.15 | 110.58 |
| 试验组5 | 102.51 | 54.28 | 121.32 |
| 试验组6 | 98.45 | 56.34 | 116.35 |
| 试验组7 | 96.35 | 57.97 | 117.48 |
| 试验组8 | 99.16 | 56.86 | 119.61 |
由上表可知，试验组1的谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性低于试验组2，试验组1的碱性磷酸酶高于试验组2，说明本申请的饲料添加剂能有效降低谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性；试验组1的谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性低于试验组3，试验组1的碱性磷酸酶高于试验组3，说明洋葱花青素比葡萄籽花青素更有效降低谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性；试验组1的谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性低于试验组4-8，试验组1的碱性磷酸酶高于试验组4-8，说明本申请饲料添加剂的洋葱花青素、亚硫酸硒、火龙果皮提取物、芒果皮提取物、核桃仁提取物都能有效降低丙转氨酶和谷草转氨酶活性提高碱性磷酸酶活性，能有效保护动物的肝脏、促进动物生长。
综上所述，使用本发明的方法制备花青素能安全、有效提高洋葱的花青素产量和提取率；而且按照本申请的饲养方法饲养动物，并使用本申请研制的饲料添加剂能有效降低丙转氨酶和谷草转氨酶活性提高碱性磷酸酶活性，能有效保护动物的肝脏、促进动物生长。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (6)
1.一种可保护猪肝脏的饲养方法，其特征在于，所述方法采用基础日粮进行饲喂，饲养的猪舍平均温度为15-20℃，相对湿度为60％-70％；所述基础日粮由粗饲料、预混料和饲料添加剂按照质量比为15-21:3-7：1组成；
所述粗饲料由如下重量份的成分组成：23份-37份的麦麸、13份-23份的玉米胚芽、35份-40份的发酵苜蓿、17份-27份的豆渣、6份-16份的菜粕和7份-18份的米糠；
所述预混料由如下重量份的成分组成：23份-33份的啤酒渣、13份-18份的茶渣、2份-5份的食盐、5份-9份的叶酸和3份-7份的氯化胆碱。
2.根据权利要求1所述的饲养方法，其特征在于，所述饲料添加剂由如下重量份的成分组成：35份-45份的洋葱花青素、13份-23份的亚硫酸硒、11份-23份的火龙果皮提取物、7份-16份的芒果皮提取物和5份-16份的核桃仁提取物。
3.根据权利要求1所述的饲养方法，其特征在于，所述洋葱花青素的制备方法包括如下步骤：
(1)将成熟洋葱清洗、除杂后切碎，然后按照固液质量比为1:2-4与水进行混合，放入打浆机中打成浆液，过滤后取滤液得到洋葱汁；
(2)按照0.1g/ml-0.5g/ml的添加酶溶液在35-40℃的温度条件下进行酶解，酶解8h-12h后一次离心分离取上清液用益生菌溶液进行益生菌处理、再进行二次离心取上清液得到洋葱清液；所述离心分离的离心转速为2000r/min-2500r/min；离心时间为15min-20min；所述益生菌的添加量为0.2g/ml-0.6g/ml，益生菌处理温度为23-27℃，处理时间为18h-20h；所述二次离心的的离心转速为4000r/min-5000r/min；离心时间为20min-30min；
(3)将步骤(2)得到的洋葱清液进行旋转蒸发浓缩得到密度为3.26g/cm3-4.15g/cm3的膏状物，然后将膏状物置于萃取釜中，在压力为4-5MPa时，用1，1，1，2-四氟乙烷对膏状物进行静态萃取60-80min，然后逐步释放压力，进行动态萃取，所述动态萃取时间为50min-60min；动态萃取的1，1，1，2-四氟乙烷出口流量为0.7-0.9L/min，溶有产物的1，1，1，2-四氟乙烷离开萃取釜后通过一段缠有加热带的钢管，由减压阀减压后排出得到洋葱花青素粗提液；
(4)真空浓缩去除步骤(3)内的1，1，1，2-四氟乙烷得到洋葱花青素清液，将花青素清液用大孔吸附树脂柱进行吸附，吸附时，花青素清液上柱流速为0.5-1倍柱体积/小时，上柱温度为30-40℃，吸附完成后用体积百分数为80％的乙醇溶液进行洗脱，得到花青素洗脱液，将洗脱液进行真空浓缩、冷冻干燥得到所述洋葱花青素；所述洗脱时乙醇溶液的上柱流速为1-1.5倍柱体积/小时。
4.根据权利要求3所述的饲养方法，其特征在于，所述步骤(2)酶溶液由果胶酶、纤维素酶和洋葱假单胞菌脂肪酶按照质量比为1:1-2:2-3混合制得；所述果胶酶的酶活力为1000u/g-1200u/g，纤维素酶的酶活力为800u/g-1000u/g，洋葱假单胞菌脂肪酶的酶活力为1200u/g-1500u/g。
5.根据权利要求3所述的饲养方法，其特征在于，所述步骤(2)益生菌溶液由筛选后的酵母菌、枯草芽孢杆菌和乳球菌按照质量比为1:2-3:2-4混合制得；所述酵母菌液的有效活菌数为2.6×108～8.9×108CFU/g、所述枯草芽孢杆菌液的有效活菌数为4.5×109～9.1×109CFU/g、所述乳球菌液的有效活菌数为2.6×107～6.4×107CFU/g。
6.根据权利要求3所述的饲养方法，其特征在于，所述步骤(3)1，1，1，2-四氟乙烷的体积百分数为25％。
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