CN108072711A - 高效液相色谱法分离测定雷美替胺中间体光学异构体 - Google Patents

Abstract

本发明属分析化学领域，本发明公开了一种用液相色谱法分离雷美替胺中间体(S)–N–[2‑(1,6,7,8‑tetrahydro‑2H‑indeno‑[5,4‑b]furan‑8‑yl)ethyl]propionamide及其光学异构体的方法，该方法采用以表面涂敷有纤维素‑三（3,5‑二甲苯基氨基甲酸酯）的硅胶为填料的手性色谱柱，以正己烷‑低级醇‑碱性添加剂‑酸性添加剂为流动相，可以定量测定雷美替胺中间体光学异构体的含量，指示雷美替胺中间体光学异构体的稳定性。本发明方法专属性强，灵敏度和准确度高，操作简便。

Description

高效液相色谱法分离测定雷美替胺中间体光学异构体

技术领域

本发明公开了一种液相色谱分析方法，具体涉及一种分离雷美替胺中间体及其光学异构体的分析方法。

背景技术

雷美替胺是一种褪黑激素受体激动剂药物，与褪黑激素MT1和MT2受体有较高的亲和力，对MT1和MT2受体呈特异性完全激动作用，而不与MT3受体作用。此外，它不与GABA受体复合物等神经递质受体结合，在一定的范围内也不干扰多数酶的活性，因此，能避免与GABA药物相关的注意力分散以及药物成瘾和依赖性。临床上用于治疗难以入睡型失眠症，对慢性失眠和短期失眠也有确切疗效。

雷美替胺化学名为 (S)–N–[2-(1,6,7,8-tetrahydro-2H-indeno-[5,4-b]furan-8-yl)ethyl]propio-

namide，分子式为C₁₆H₂₁NO₂。雷美替胺中间体化学名(S)-N-2-(1,6,7,8-tetrahydro-2H-indeno[5,4-b]furan-8-yl)ethanamine hydrochloride，分子式为C₁₃H₁₈ClNO，结构式为：

，

该化合物的光学异构体结构式为：

。

对雷美替胺中间体光学杂质进行控制，在终产品的合成及其质量控制方面具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离测定雷美替胺中间体及其光学异构体的高效液相色谱分析方法，从而保证雷美替胺中间体的光学纯度，减少副反应的发生和杂质的生产，实现终产品雷美替胺的质量控制。

本方法所述的用高效液相色谱法分离检测雷美替胺中间体的光学纯度的方法，是采用以表面涂敷有纤维素-三（3,5-二甲苯基氨基甲酸酯）的硅胶为填料的手性色谱柱，以正己烷-低级醇-碱性添加剂-酸性添加剂为流动相。

流动相中的低级醇选自甲醇、无水乙醇、异丙醇、丙醇、丁醇中的一种或几种，优选无水乙醇、异丙醇，碱性添加剂为二乙胺、三乙胺、丁胺、乙醇胺中的一种，酸性添加剂为甲酸或三氟乙酸或乙酸。

本发明采用的手性色谱柱为CHIRALPAK OD或CHIRALPAK OD-H。

本发明流动相的配比为正己烷-低级醇的体积比为90:10~100:0，碱性添加剂的体积比为0.05%~0.2%，酸性添加剂的体积比为0.1%~0.4%。正己烷-低级醇的最优体积比为90:10～95:5。

本发明所述的分离分析方法，可按照以下方法实现：

(1) 取雷美替胺中间体适量，用无水乙醇溶解样品，配制成每1mL含雷美替胺中间体约0.1~0.2 mg的样品溶液；

(2) 设置流动相流速为0.5~1.5 mL/min，检测波长为200~250 nm，柱温：20 ℃~40 ℃；

(3) 取(1)的样品溶液10～50 μL注入液相色谱仪，完成雷美替胺中间体光学异构体的分离与测定。

其中：

岛津高效液相色谱仪：LC-20AB泵；SPD-20A检测器；SIL-20A自动进样器；CTO-10ASVP柱温箱；DGU-20A₃脱气机；

色谱柱：CHIRALPAK OD-H (250 mm*4.6 mm，5 μm)；

流动相：正己烷-乙醇-二乙胺-三氟乙酸（93:7:0.1:0.2）；

流速：1.0 mL/min；

检测波长：225nm；

柱温：40℃；

进样体积：10 μL。

本发明采用色谱柱CHIRALPAK OD-H ( 250 mm*4.6 mm，5 μm)，能够有效分离雷美替胺中间体及其光学异构体，准确测定雷美替胺中间体的光学纯度；本发明解决了雷美替胺中间体及其光学异构体的分离分析问题，确保了雷美替胺中间体的纯度，从而保证了雷美替胺的质量可控（结果见附图1～4）。

附图说明：

图1为实施例1时的雷美替胺中间体及其光学异构体HPLC图；

图2为实施例2时的溶剂HPLC图；

图3为实施例2时的雷美替胺中间体及其光学异构体的HPLC图；

图4为实施例2时的雷美替胺中间体的HPLC图。

具体实施方式：

以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。以下通过实例形式，对本发明涉及的分离测定草酸艾司西肽普兰中间体光学异构体的方法作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1

仪器与条件

岛津高效液相色谱仪：LC-20AB泵；SPD-20A检测器；SIL-20A自动进样器；CTO-10ASVP柱温箱；DGU-20A₃脱气机；

色谱柱：CHIRALPAK OD-H (250 mm*4.6 mm，5 μm)；

流动相：正己烷-乙醇-二乙胺-三氟乙酸（93:7:0.1:0.2）；

流速：1.0 mL/min；

检测波长：225nm；

柱温：35℃；

进样体积：10 μL。

实验步骤

取雷美替胺中间体及其光学异构体适量，分别用无水乙醇溶解样品，配制成含雷美替胺中间体及其光学异构体约0.1 mg/mL的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图1，图1中保留时间7.489min的色谱峰为雷美替胺中间体的色谱峰，保留时间8.424min的色谱峰为雷美替胺中间体的光学异构体。在此条件下，各物质峰形良好，雷美替胺中间体与其光学异构体实现完全分离。

实施例2

仪器与条件

岛津高效液相色谱仪：LC-20AB泵；SPD-20A检测器；SIL-20A自动进样器；CTO-10ASVP柱温箱；DGU-20A₃脱气机；

色谱柱：CHIRALPAK OD-H (250 mm*4.6 mm，5 μm)；

流动相：正己烷-乙醇-二乙胺-三氟乙酸（93:7:0.1:0.2）；

流速：1.0 mL/min；

检测波长：225nm；

柱温：40℃；

进样体积：10 μL。

实验步骤

取雷美替胺中间体及其光学异构体适量，分别用无水乙醇溶解样品，配制成含雷美替胺中间体及其光学异构体约0.1mg/mL的样品溶液；另取无水乙醇适量作为空白溶剂。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图2~4，图2为溶剂色谱图；图3中保留时间7.030min的色谱峰为雷美替胺中间体，保留时间7.879min的色谱峰为雷美替胺中间体的光学异构体；图4中保留时间6.984 min的色谱峰为雷美替胺中间体。从图中可以看出，在该条件下雷美替胺中间体及其光学异构体之间分离度符合要求。

对上述雷美替胺中间体及其光学异构体的分析方法进行如下验证：

1、系统适用性试验

取雷美替胺中间体及其光学异构体适量，分别用无水乙醇溶解样品，配制成含雷美替胺中间体及其光学异构体约0.1 mg/mL的溶液作为供试品溶液。按实施例2的色谱条件进行分离测定，记录色谱图。由图2~图4可知，在此条件下，雷美替胺中间体及其光学异构体的色谱峰峰形良好，分离度符合要求，且溶剂对雷美替胺中间体及其光学异构体的测定无干扰。

2、进样重复性

取雷美替胺中间体及其光学异构体的供试品溶液，按实施例2的色谱条件，重复进样6针，考察样品定量测定时的进样重复性。由结果可见，各物质保留时间和峰面积无明显变化，RSD%值符合要求，进样重复性良好。

。

3、溶液稳定性

取雷美替胺中间体及其光学异构体的供试品溶液，在室温条件下，按实施例2的色谱条件，分别于0、1、2、4、6、8、10和12小时进样，考察样品定量测定时溶液的稳定性，由结果可见，该供试品溶液在12小时内稳定。

。

4、耐用性

我们进一步考察了方法对色谱柱品牌的耐用性。结果发现，在不同品牌色谱柱条件下，雷美替胺中间体及其光学异构体保留时间无显著变化，且均能达到有效分离。该方法对不同品牌的色谱柱的耐用性良好。

5、定量限和检测限

取雷美替胺中间体适量，精密称定，加无水乙醇溶解样品，配制成供试液，再精密量取供试液适量，逐级稀释，按实施例2的色谱条件进样考察。定量限和检测限数据如下表所示：

。

Claims (10)

1.高效液相色谱法分离雷美替胺中间体光学异构体：采用以表面涂敷有纤维素-三（3,5-二甲苯基氨基甲酸酯）的硅胶为填料的手性色谱柱，以正己烷-低级醇-碱性添加剂-酸性添加剂为流动相。

2.根据权利要求1所述的分离分析方法，手性色谱柱选自CHIRALPAK OD或CHIRALPAKOD-H。

3.根据权利要求1 所述的分离分析方法，所说的低级醇选自以下化合物中的一种或几种：甲醇、无水乙醇、异丙醇、丙醇、丁醇。

4.根据权利要求3 所述的分离测定方法，所说的低级醇优选无水乙醇、异丙醇。

5.根据权利要求1 所述的分离分析方法，所说的碱性添加剂为以下化合物中的一种：二乙胺、三乙胺、丁胺、乙醇胺。

6.根据权利要求1 所述的分离分析方法，所说的酸性添加剂为以下化合物中的一种：甲酸、三氟乙酸、乙酸。

7.根据权利要求1 所述的分离分析方法，所说的流动相的配比为正己烷-低级醇的体积比为90:10~100:0，碱性添加剂的体积比为0.05%~0.2%，酸性添加剂的体积比为0.1%~0.4%。

8.根据权利要求7所述的分离测定方法，所说的正己烷-低级醇的最优体积比为90:10～95:5。

9.根据权利要求1所述的分离分析方法，其特征在于包括以下几个步骤：

(1) 取雷美替胺中间体适量，用无水乙醇溶解样品，配制成每1mL含雷美替胺中间体约0.1~0.2 mg的样品溶液；

(2) 设置流动相流速为0.5~1.5 mL/min，检测波长为200~250 nm，柱温：20 ℃~40 ℃；

(3) 取(1)的样品溶液10～50 μL注入液相色谱仪，完成雷美替胺中间体光学异构体的分离与测定。

10.根据权利要求9所述的分离分析方法，步骤2）所说的检测波长优选225 nm，流速优选1.0 mL/min，柱箱温度优选40℃。