CN108070600A

CN108070600A - 种子活力的调节

Info

Publication number: CN108070600A
Application number: CN201711344061.XA
Authority: CN
Inventors: W·E·芬奇萨维奇; K·莫里斯; G·C·贝克尔; T·G·布鲁格金克; P·范登维金加德
Original assignee: Syngenta Participations AG
Current assignee: Syngenta Participations AG
Priority date: 2012-02-29
Filing date: 2013-02-27
Publication date: 2018-05-25
Anticipated expiration: 2033-02-27
Also published as: CN113832162A; CA2865183A1; JP6280054B2; EP2820037B1; CN104520312A; ES2788128T3; US20150240255A1; JP2015508663A; US11479784B2; US10087459B2; EP3689895A1; EP2820037A1; US20190078113A1; CN113832162B; HK1206751A1; US10704054B2; HUE049492T2; AU2013225084A1; CN108070600B; KR20140135719A

Abstract

本发明提供一种多核苷酸，该多核苷酸使得能够调节种子活力、并且特别地提高种子活力，并且更特别地使得能够修饰萌发速度。还提供了一种包括所述多核苷酸的植物种子。还提供了一种生产该植物种子的方法，用于改善植物种子、转基因植物的萌发和活力的方法，以及本发明的多核苷酸用于产生具有改善的萌发和活力特征的生长植物的种子的用途。本发明特别地涉及芸苔属，更特别地甘蓝。

Description

种子活力的调节

本申请是申请日为2013年2月27日、申请号为201380011632.1、发明名称为“种子活力的调节”的发明专利申请的分案申请。

发明领域

本发明总体上涉及一种多核苷酸，该多核苷酸使得能够调节种子活力、特别是提高种子活力，并且更特别地使得能够修饰萌发速度。本发明还涉及包括所述多核苷酸的一种植物种子。另外，本发明中还提供了一种生产该植物种子的方法，用于改善植物种子、转基因植物萌发和活力的方法，以及本发明的多核苷酸用于产生具有改善的萌发和活力特征的生长植物的种子的用途。本发明的植物特别地涉及芸苔属，更特别地甘蓝。

发明背景

如由可从一个种子批次获得的均一的可用的植物的数目定义的，种子质量在发达的园艺市场中已成为更重要的性状。养育幼小植物在这些市场中是高技术活动，并且因此对于种子质量的需求是高的。对此需要可靠的和一致的高种子质量。在不利条件下的萌发也是一个重要的种子质量性状。这意味着，对于种子品种的商业成功的一个需求是一致和强健的种子质量。然而，目前商业品种的种子质量不总是稳定的和可预测的。

种子质量参数受种子发育期间的母体环境条件高度影响。给定所需的种子体积和商业可行性，这些条件中仅有限的管理是可能的。因此，种子质量的一致性受母体条件的敏感度限制。研究已显示母体环境可潜在地影响所有种子质量参数，包括在不利条件下的均一性和萌发。降低母体条件的影响将因此导致更一致的和强健的种子质量，这在发达的和发展中的市场中提供优势。

可预测的和均一的幼苗建立对于生产可持续的和可营利的作物是必要的。对于这种可预测性的关键促成因素是种子的萌发性能，种子的萌发性能受种子休眠和活力的直接影响。休眠自身(在一般的可允许条件下没有萌发)在许多作物种类上不被认为是实际问题，而低种子活力(实践中差的种子性能)不仅大大影响所有作物中出苗的数目，还影响出苗的时机和均一性。这样的影响对确定成本效率和所需投入的作物生产的许多方面具有重大影响，也对市场收益率有直接的作物特定影响(芬奇-萨维奇(Finch-Savage)，1995)。低种子活力可起因于许多类型的种子退化和损害，并且这具有极大商业意义。然而，在种子开始退化之前，其初始活力中也存在固有的区别，但是对此遗传、分子和生理学基础保持仍了解甚少。

已经鉴定了许多基因中的显示具有改变的种子萌发性能的表型的突变，并且这些在发展我们对于管理萌发的现有了解中是有用的(由芬奇-萨维奇(Finch-Savage)和罗伊贝尔-梅茨格(Leubner-Metzger)，2006；霍尔兹沃思(Holdsworth)等人，2008a和2008b综述)。然而，这些基因在野生型或作物种子中的相对影响是知之甚少的，并且未显露将形成针对种子活力的辨别测试的基础的清晰的候选者。在自然群体和作物基因型中可获得实验室诱发突变的遗传变异的可替代来源。使用这种变异来鉴定与种子活力相关联的QTL，并且然后影响这些性状的候选基因可提供鉴定实际上重要的基因的途径。

在西红柿(富拉德(Foolad)等人，1999)、甘蓝(贝特艾(Bettey)等人，2000，芬奇-萨维奇(Finch-Savage)等人，2005)以及拟南芥(格罗特(Groot)等人，2000，克列尔科斯(Clerkx)等人，2004)的一系列的种子活力性状的数量遗传分析中已利用了天然和作物植物变异。已在所有三个种类中鉴定了种子萌发速度QTL。在健康的未老化种子中，在萌发速度方面休眠和低种子活力之间的区别(如果存在)是未被了解的并且可具有相同的基础(希尔霍斯特(Hilhorst)和图罗普(Toorop)，1997)。在大部分情况下，例如在拟南芥中，生理休眠不是绝对的，但种子有条件地休眠，即萌发倾向于是慢的并且仅在有限范围的环境中是可能的。随着休眠逐渐消失，萌发倾向于加速并变得在更宽范围的环境中是可能的，并因此显得像活力的增加。

在对建立种子萌发和调节种子休眠负责的因子中，脱落酸(ABA)(一种众所周知的植物激素)发挥了重要作用。ABA对于种子萌发和种子成熟过程是特别必要的(综述参见芬克尔斯坦(Finkelstein)等人2002)，因为它造成种子休眠期的建立。至于萌芽，重要的是，种子不会在例如冬季或一个干季之前的不合时令的温和条件下过早萌发。该种子中的ABA强制这种休眠。仅如果该种子已被暴露于长时间的寒流和/或其他适合的环境信号并且如果存在足够的水以支持萌发的话，则休眠被抬升。除了在种子活力上的作用，ABA还调节植物生命的多个重要方面，包括对生物威胁和非生物胁迫像干旱和干燥的生理响应。

因此对具有更可靠的和一致的种子活力、尤其具有时间上定义的和均一的萌发速度的种子的存在长期需要，以提供独立于母体条件并且无论外部环境条件如何，以更恒定速率萌发的种子。这样的增加的种子活力在种子被一种给定制剂(化学的、生物的)包衣的情况下受到特别关注，因为这种情况下通常观察到种子萌发中的延迟。因此，包括提高种子活力、更特别地提高种子萌发的速度和均一性的序列的种子对于在中和包衣处理的影响是最重要的，同时仍施用杀昆虫剂和杀真菌剂。

另外，虽然在许多方面中增加种子活力将是非常有用的和所希望的形状，在一些情况下似乎降低种子活力会受到极大关注。特别地在胎萌种子中，降低种子活力可能是有益的。胎萌被定义为种子在仍处于母本植物上时或在干燥之前萌发，并可在未成熟的和成熟的种子中发生。已经在许多不同作物种类包括芸苔属作物中观察到胎萌(鲁安(Ruan)等人2000)。因此，包括能够降低种子活力的序列的种子能够延迟(如果不能去除的话)不希望的胎萌表型。

发明概述

因此，在这样的现有技术中，诸位发明人的贡献是从一个群体中鉴定包含一个小的跨越SOG1(萌发速度1)(由贝特艾(Bettey)等人(2000)在甘蓝中指定的种子萌发的一个速度QTL)的渗入区域的一种植物，并且特别地证明和鉴定涉及到调节种子活力、特别地涉及到种子萌发速度的调节中的对应的基因给。特别证明了，这些基因和它们对应的序列可被用作使能够获得展现修饰的种子活力表型的种子(或产生种子的植物)的工具。特别地，为了调节种子活力，基因序列可被引入新的背景中。更特别地，基因序列可被用于工程化一种新的植物，独立于外部环境条件并且不论母体条件如何，该植物的种子会更早出芽、更均一。另外，所述基因序列可被用作以下的工具：修饰该种子中的ABA含量，和/或该种子响应ABA，从而影响就种子休眠以及种子贮藏蛋白和脂质合成而论的种子行为。

实施例

因此，在一个第1实施例中，本发明提供一种多核苷酸，特别地一种分离的多核苷酸，包括选自下组的一种核酸分子，该组由以下各项组成：

a.一种包括如在SEQ ID NO:1(BolC.VG1.a的A12版本)中描述的核苷酸序列的核酸分子；

b.一种包括如在SEQ ID NO:2(BolC.VG2.a的A12版本)中描述的核苷酸序列的核酸分子；

c.一种包括如在SEQ ID NO:3(BolC.VG1.a的GD33版本)中描述的核苷酸序列的核酸分子；

d.一种包括如在SEQ ID NO:4(BolC.VG2.a的GD33版本)中描述的核苷酸序列的核酸分子；

e.一种包括其互补链与a)-d)中任一项所述的核酸分子杂交的核苷酸序列的核酸分子；

f.一种包括由于简并遗传密码而偏离a)-e)中任一项所定义的核苷酸序列的核苷酸序列的核酸分子；

其中在一种植物或植物部分中表达后，所述的如a)-f)中任一项所定义的核酸分子导致修饰的种子活力。

在一个第2实施例中，本发明提供根据实施例1所述的一种多核苷酸，特别地一种分离的多核苷酸，包括选自下组的一种核酸分子，该组进一步由以下各项组成：

a.一种包括如在SEQ ID NO:5(BolC.VG2.b的截短的A12等位基因)中描述的核苷酸序列的核酸分子；

b.一种包括如在SEQ ID NO:6(BolC.VG2.b的截短的GD33等位基因)中描述的核苷酸序列的核酸分子；

c.一种包括其互补链与a)-b)中任一项所述的核酸分子杂交的核苷酸序列的核酸分子；

d.一种包括由于简并遗传密码而偏离a)-c)中任一项所定义的核苷酸序列的核苷酸序列的核酸分子；

其中在一种植物或植物部分中表达后，所述的如a)-d)中任一项所定义的核酸分子导致修饰的种子活力。

在一个第3实施例中，本发明提供一种多核苷酸，特别地一种分离的多核苷酸，包括选自下组的一种核酸分子，该组由以下各项组成：

a.包括与如在下组中描述的序列中的任一项具有至少60％序列一致性的核苷酸序列的核酸分子，该组包括：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQID NO:5以及SEQ ID NO:6；

b.包括与如在下组中描述的序列中的任一项具有至少80％序列一致性的核苷酸序列的核酸分子，该组包括：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQID NO:5以及SEQ ID NO:6；

c.包括与如在下组中描述的序列中的任一项具有至少90％序列一致性的核苷酸序列的核酸分子，该组包括：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQID NO:5以及SEQ ID NO:6；

d.包括与如在下组中描述的序列中的任一项具有至少95％序列一致性的核苷酸序列的核酸分子，该组包括：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQID NO:5以及SEQ ID NO:6；

e.包括与如在下组中描述的序列中的任一项具有至少98％序列一致性的核苷酸序列的核酸分子，该组包括：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQID NO:5以及SEQ ID NO:6；

f.包括其互补链与a)-e)中任一项所述的核酸分子杂交的核苷酸序列的核酸分子；

g.包括由于简并遗传密码而偏离a)-f)中任一项所定义的核苷酸序列的核苷酸序列的核酸分子；

其中在一种植物或植物部分中表达后，所述的如a)-g)中任一项所定义的核酸分子导致修饰的种子活力。

在一个第4实施例中，本发明涉及根据第一、第二或第三实施例所述的一种多核苷酸，其中该修饰的种子活力表型由在下组中选择的一个另外的表型表征，该组包括：修饰的萌发速度、修饰的出苗速度、修饰的种子萌发均一性、修饰的出苗均一性、修饰的种子萌发百分比、修饰的该种子相对于外部环境和/或母体条件的耐受性、修饰的对ABA的敏感性或修饰的ABA含量。

在一个第5实施例中，本发明涉及一种多核苷酸，特别地一种分离的多核苷酸，包括在下组中选择的一种核酸分子，该组包括：

a.一种包括如在SEQ ID NO:3中描述的核苷酸序列的核酸分子；

b.一种包括如在SEQ ID NO:4中描述的核苷酸序列的核酸分子；

c.一种包括如在SEQ ID NO:6中描述的核苷酸序列的核酸分子；

d.一种包括其互补链与a)-c)中任一项所述的核酸分子杂交的核苷酸序列的核酸分子；

e.一种包括由于简并遗传密码而偏离a)-d)中任一项所定义的核苷酸序列的核苷酸序列的核酸分子；

其中在一种植物或植物部分中表达后，所述的如a)-e)中任一项所定义的核酸分子导致增加的种子活力。

在本发明的背景下，表述“增加的种子活力”意为可在种子萌发更快并且因此更茁壮的意义上修饰种子萌发速度。在一个具体实施例中，萌发速度被增加，允许待获得由于在其基因组中存在根据本发明的一种多核苷酸而萌发更快(与不包括所述多核苷酸的种子相比)的种子。这样的增加的萌发速度导致出苗显著更快，并因此提供具有提高的柔韧性和对各种环境更好适应的种子。发现鉴定的这2个基因具有意义重大的萌发表型，该萌发表型表明这些基因是不同程度上的萌发调节子。对应于根据本发明的SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4(这些基因的GD33等位基因)的多核苷酸的等位基因已被证明对应于增加的种子活力的表型，并因此允许修饰其中对此被渗入该等位基因的植物种子的萌发速度以及增加的萌发速度。

在一个第6实施例中，本发明涉及根据实施例5所述的一种多核苷酸，其中该增加的种子活力表型由在下组中选择的一个另外的表型表征，该组包括：增加的萌发速度、增加的出苗速度、增加的种子萌发均一性、增加的出苗均一性、增加的种子萌发百分比、增加的该种子相对于外部环境和/或母体条件的耐受性、降低的对ABA的敏感性或降低的ABA含量。

在一个第7实施例中，本发明涉及一种多核苷酸，特别地一种分离的多核苷酸，包括在下组中选择的一种核酸分子，该组包括：

a.一种包括如在SEQ ID NO:1中描述的核苷酸序列的核酸分子；

b.一种包括如在SEQ ID NO:2中描述的核苷酸序列的核酸分子；

c.一种包括如在SEQ ID NO:5中描述的核苷酸序列的核酸分子；

d.一种包括其互补链与a)至c)中任一项所述的核酸分子杂交的核苷酸序列的核酸分子；

其中在一种植物或植物部分中表达后，所述的如a)-e)中任一项所定义的核酸分子导致降低的种子活力。

在一个第8实施例中，本发明提供一种表达盒，该表达盒包括以上实施例中任一项所述的一种多核苷酸。

在一个第9实施例中，本发明提供一种载体分子，该载体分子包括根据第8实施例所述的表达盒。

在一个第10实施例中，本发明涉及根据实施例1至3所述的多核苷酸用于修饰种子活力的用途。

在一个第11实施例中，本发明涉及用于修饰种子活力的一种方法，该方法包括：通过杂交或通过植物转化技术将实施例1至10中任一项所述的多核苷酸、表达盒或载体分子渗入一种植物或植物部分中并在其中表达。

在一个第12实施例中，本发明涉及用于产生具有修饰的种子活力的种子的一种方法，包括：

a.获得一种第一植物，该第一植物被证实包含实施例1至7中任一项所述的多核苷酸；

b.使所述第一植物与被证实缺乏所述多核苷酸的一种第二植物杂交；并且

c.鉴定从该杂交中得到的一种植物种子，与由该第二植物产生的种子相比，该植物种子展现修饰的种子活力。

在一个第13实施例中，本发明涉及一种植物或植物部分，该植物或植物部分在其基因组内包含包括实施例1至9中任一项所述的多核苷酸、表达盒或载体分子的渗入，并且与不包括所述多核苷酸、表达盒或载体分子的一种植物或植物部分相比，展现种子活力的修饰。

在一个第14实施例中，本发明涉及一种植物或植物部分，该植物或植物部分在其基因组内包含包括根据实施例5所述的多核苷酸的渗入，并且与由不包括所述多核苷酸的一种植物或植物部分产生的种子相比，展现增加的种子活力。

在一个第15实施例中，本发明涉及一种植物或植物部分，该植物或植物部分在其基因组内包含包括根据实施例7所述的多核苷酸的渗入，并且与由不包括所述多核苷酸的一种植物或植物部分产生的种子相比，展现降低的种子活力。

在一个第16实施例中，本发明提供用于选择具有修饰的种子活力的植物或植物部分的一种方法，该方法包括在待测的植物或植物部分中检测存在或不存在根据实施例1至7中任一项所述的多核苷酸。

在一个第17实施例中，本发明提供用于选择具有修饰的种子活力的植物或植物部分的一种方法，包括使候选植物或植物部分接触一种选自下组的选择工具，该组包括实施例1至7中任一项所述的多核苷酸。

在一个第18实施例中，本发明涉及根据以上权利要求中任一项所述的植物或植物部分，该植物或植物部分是栽培的植物或栽培的植物部分，并且是在下组中选择的，该组包括甘蓝(Brassica oleracea)、甘蓝型油菜(Brassica napus)、白菜型油菜(Brassicarapa)、芸苔(Brassica campestris)、芥菜(Brassica juncea)、黑芥(Brassica nigra)、大白菜(Brassica pekinensis)、小白菜(Brassica chinensis)、塌棵菜(Brassicarosularis)、芸芥(Eruca vesicaria)、芝麻菜(Eruca sativa)、萝卜(Raphanus sativus)、家独行菜(Lepidium sativum)、豆瓣菜(Nasturtium officinale)、山葵(Wasabiajaponica)。

在一个第19施例中，本发明提供用于获得具有修饰的种子活力的植物或植物部分的一种非生物方法，该方法包括将根据实施例1至7中任一项所述的多核苷酸引入所述植物或植物部分的基因组中。

在一个实施例20中，本发明涉及根据实施例N°16所述的方法，包括(a)获得被证实包含实施例1至7中任一项所述的多核苷酸的一种第一植物；(b)使所述第一植物与被证实缺乏所述多核苷酸的一种第二植物杂交；并且(c)鉴定从该杂交中得到的展现修饰的种子活力并包含所述多核苷酸的一种植物。

在一个实施例21中，本发明涉及根据实施例20所述的方法，其中该多核苷酸的存在是通过使用一个分子标记，特别地通过一种物理地定位于包含该多核苷酸的遗传基因座的内部或外部的一个位置处的分子标记来证实的。

在一个实施例22中，本发明涉及根据实施例20所述的方法，其中该多核苷酸的存在是通过使用至少两个分子标记，特别地通过至少两个物理地定位于包含该多核苷酸的遗传基因座的侧翼的一个位置处的分子标记来证实的。

在一个实施例23中，本发明涉及一种包括根据实施例1至7所述的多核苷酸的种子，其中用任意类型的包衣对所述种子进行包衣。

在一个实施例24中，本发明涉及根据实施例13至18所述的植物或植物部分，其中该植物是一种杂种植物。

在一个实施例25中，本发明涉及根据实施例24所述的植物或植物部分，可从保藏于NCIMB的保藏号NCIMB 41951下的种子或其子代获得。

发明详细说明

根据以上实施例的多核苷酸序列已被鉴定并从具有不同的种子活力表型的一种甘蓝植物中分离。具有根据本发明的多核苷酸序列的等位基因被渗入到具有不同的种子质量和不同的种子活力的一种植物中。由于渗入根据本发明的多核苷酸序列中任一个，种子活力被显著修饰，并且因此植物或植物部分质量、特别是该植物的种子质量被显著地修饰，特别是种子活力，如通过萌发速度突出的。在一个实施例中，该种子能够萌发更好并且更快，特别地在冷的条件下，显示更强健的种子质量。渗入根据实施例5的一种多核苷酸序列允许获得不那么容易受到种子产生环境影响的植物种子质量。这意味着渗入根据本发明的多核苷酸序列使的能够从常规种子产生中交付一致的种子质量。

根据本发明的多核苷酸序列在商业栽培植物、特别是栽培芸苔属植物、更特别栽培甘蓝植物中的引入将确保更可靠地生产具有足够种子质量的种子。这将显著增加操作灵活性。

包括根据本发明的多核苷酸序列中任一项的杂种种子展现更均一的群丛建植，尤其在不利条件下。这将决定性地为该商业种子产品增添价值。

种子保藏详情

2012年4月4日根据布达佩斯条约(the Budapest Treaty)的规定以先正达公司(Syngenta Participations AG)的名义将以下种子样品保藏在英国苏格兰阿伯丁郡AB219YA贝克斯伯恩的克莱伯斯通庄园弗格森大厦的NCIMB(Ferguson Building,CraibstoneEstate,Bucksburn,Aberdeen AB219YA,Scotland,UK)：

NCIMB 41950甘蓝A12

NCIMB 41951甘蓝SL101

定义

在本申请的范围内所使用的技术术语和表述，如果在此以下没有另外说明，总体上将被给定通常地在植物基因工程、植物育种和栽培的相关领域中应用于它们之上的意义。

如在本说明书和所附的权利要求中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指示物，除非上下文中清楚地另外表明。因此，例如，涉及“一种植物”包括一种或多种植物，并且涉及“一种细胞”包括多种细胞、组织等的混合物。

“栽培植物”、特别“栽培芸苔属植物”、更特别“栽培甘蓝植物”在本发明的范围内被理解为是指不再是呈天然状态，而是已经通过人类的照料进行发育并且供人类使用和/或种植目的和/或消费的植物。“栽培植物”、特别“栽培芸苔属植物”、更特别“栽培甘蓝植物”应进一步被理解为不包括那些包含了本发明主题的性状作为天然性状和/或其天然遗传学的一部分的野生型物种。

在本发明的范围内“等位基因”被理解为是指与一个基因或任意类型的可鉴定遗传元件的不同形式相同的或关联的不同遗传单位的可替代或变体形式，这些遗传单位在遗传中是可替代的，因为它们处于同源染色体的相同的基因座。这类可替代或变体形式可以是单核苷酸多态性、插入、倒置、易位或缺失的结果，或是基因调控(由例如化学或结构修饰引起的)、转录调控或翻译后修饰/调控的结果。在二倍体细胞或生物中，一个给定基因或遗传元件的两个等位基因典型地占有同源染色体对上相应的基因座。

一个基因的“截短的”等位基因在本发明中意在表示一个基因的等位基因，当与其全长基因等位基因对应物相比时，已经失去单个或多个部分的核苷酸序列。

与质量性状关联的等位基因可包括不同遗传单位的可替代或变体形式，这些遗传单位包括与一个单基因或多基因或其产物或甚至一个基因破坏相同的或关联的或被促成由该基因座表示的表型的一个遗传因子控制的那些。

如此处使用的，术语“标记等位基因”是指当被用作在染色体上定位包含促成表型性状的可变性的等位基因的遗传基因座的一个标记物时的如此处以上定义的一个遗传单位的一个可替代或变体形式。

如此处使用的，术语“生殖”及其语法变体是指产生子代个体的任何过程。生殖可以是有性的或无性的，或其任意组合。繁殖的示例性非限制类型包括杂交、自交、双单倍体衍生世代、及其组合，这些都是本领域的普通技术人员已知的技术。

“回交”在本发明的范围内应理解为是指使杂种后代与亲本之一重复往回回交的过程。不同的轮回亲本可以被用在随后的回交中。重组体株系可通过将回交得到的子代进行自交产生。

“基因座”在本发明的范围内应理解为是指染色体上包含对性状有贡献的基因或任何其他遗传元件或要素的一个区域。

“渗入”(或渗入的(introgressed)在本发明的范围内被理解为指将核酸的基因或一个或多个区段从一个物种移动到另一个物种的基因池中，或在相同的物种内从一个株系移动到另一个株系的基因池中。渗入可通过有性相交、有性杂交或通过遗传转化实现。

如在此所使用，“标记位点”是指染色体上包含了存在于个体的基因组中并且与一个或多个感兴趣的位点相关的核苷酸或多核苷酸序列的一个区域，该区域可能包含对性状有贡献的基因或任何其他遗传元件或要素。“标记位点”还指染色体上包含与基因组序列互补的多核苷酸序列(如用作探针的核酸的序列)的一个区域。

出于本发明的目的，术语“分离”或“共分离”是指以下事实：针对性状的等位基因和针对标记的等位基因倾向于一起传递，这是因为它们在同一染色体上物理地紧靠在一起(它们之间的重组由于它们物理的邻近而减少)，导致它们的等位基因由于它们在同一染色体上的邻近而非随机关联。“共分离”还指单一植物内存在两种或更多种性状，已知其中至少一种是遗传的并且这些性状不能轻易地用偶然性解释。

如在此所使用，短语“基因标记”或“标记”是指个体的基因组中与一个或多个感兴趣的位点相关的特征(例如，存在于个体的基因组中的核苷酸或多核苷酸序列)。在一些实施例中，基因标记在感兴趣的群体中是多态性的，或位点被多态性占据，取决于上下文。基因标记包括例如单核苷酸多态性(SNP)、插入或缺失(indels)(即，插入/缺失)、简单序列重复(SSR)、限制片段长度多态性(RFLP)、随机扩增多态性DNA(RAPD)、裂解扩增多态性序列(CAPS)标记、多样性阵列技术(DArT)标记以及扩增片段长度多态性(AFLP)以及许多其他实例。基因标记可以例如用于对包含染色体上对表型性状的可变性有贡献的等位基因的基因位点进行定位。短语“基因标记”或“标记”还可以指与基因组序列互补的多核苷酸序列，如用作探针的核酸的序列。

“基因标记”或“标记”可以物理地定位于染色体上在与它关联的基因位点内部或外部(即，对应地是基因内的或基因外的)的一个位置。换句话说，尽管在相应于感兴趣的位点的基因或功能突变在染色体上的位置(例如，在基因外部的控制元件内)还没有被鉴别并且“基因标记”或“标记”与感兴趣的位点之间存在非零重组比率时典型地使用“基因标记”或“标记”，但本发明披露的主题还可以使用物理地处于基因位点的边界内的“基因标记”或“标记”(例如，在相应于基因的基因组序列内部，如但不限于基因的内含子或外显子内的多态性)。在本发明披露的主题的一些实施例中，该一个或多个“基因标记”或“标记”包含在一个与十个之间的标记，并且在一些实施例中，该一个或多个基因标记包括多于十个基因标记。

如在此所使用，术语“基因型”是指细胞或生物的基因组成。个体的“一组基因标记的基因型”包括个体的单倍型中存在的一个或多个基因标记位点的具体等位基因。如本领域中已知，基因型可以涉及单一位点或多个位点，无论这些位点是相关还是非相关的，和/或是关联还是非关联的。在一些实施例中，个体的基因型涉及一个或多个相关的基因，因为这些基因中的一个或多个参与感兴趣的表型的表达。因而，在一些实施例中，基因型包括个体内在数量性状的一个或多个基因位点处存在的一个或多个等位基因的汇总。在一些实施例中，基因型从单倍型方面来表达。

如在此所使用，术语“连锁”和它的语法变体是指同一染色体上不同的位点处的等位基因在它们的传递是单独的情况下倾向于比偶然所预期的更经常地一起分离，在一些实施例中是它们物理的邻近的结果。

例如，如此处使用的“多核苷酸序列”是指所有形式的天然产生的或重组产生的类型的核酸和/或核苷酸序列连同化学合成的核酸/核苷酸序列。该术语还囊括核酸类似物和核酸衍生物，例如像锁定的DNA、RNA、cDNA、PNA、硫代磷酸寡核苷酸和取代的核糖寡核苷酸。另外，术语“多核苷酸序列”还指包括核苷酸或核苷酸类似物的任何分子。短语“核酸”或“多核苷酸”是指可能相应于核苷酸串的任何物理单体单元串，包括核苷酸的聚合物(例如，典型的DNA、cDNA或RNA聚合物)(任选地包含能够结合入DNA或RNA聚合物中的合成的、非天然的或改变的核苷酸碱基)、修饰过的寡核苷酸(例如，包括对于生物RNA或DNA不典型的碱基的寡核苷酸，如2'-O-甲基化寡核苷酸)等等。术语“多核苷酸”在此应当理解为指高分子量的聚合物分子，该聚合物分子可以是由包含一种糖、磷酸盐和一种碱基的单体(核苷酸)组成的单链的或双链的、多链的、或其组合，该碱基是或者一种嘌呤或者一种嘧啶。除非另外指示，否则本发明披露的主题的具体核酸序列任选地还包括或编码除了明确指示的任何序列以外的互补序列。

优选地，术语“多核苷酸序列”是指一种核酸分子，即脱氧核糖核酸(DNA)和/或核糖核酸(RNA)。在本发明的背景下“多核苷酸序列”可以通过本领域的一个普通技术人员已知的合成化学方法、或通过使用重组技术制成，或可以从天然来源中分离，或通过其组合制成。DNA和RNA可任选地包括非天然核苷酸，并且可以是单链的或双链的。“多核苷酸序列”还指正义和反义DNA和RNA，即与DNA和/或RNA中的核苷酸的一个特异序列互补的一个多核苷酸序列。另外，术语“多核苷酸序列”可指DNA或RNA或其杂种或其现有技术中已知的修饰(参见例如US 5525711、US4711955、US 5792608或EP 302175，例如修饰的)。该多核苷酸序列可以是单链或双链的、线性或环状的、天然或合成的，并且没有任何尺寸限制。例如，该多核苷酸序列可以是基因组DNA、cDNA、mRNA、反义RNA、编码这类RNA的核酶或DNA或基因修正(chimeroplast)(甘佩尔(Gamper)，核酸研究，2000,28,4332-4339)。所述多核苷酸序列可以处于质粒的形式，或病毒DNA或RNA的形式。“多核苷酸序列”还可指一种或多种寡核苷酸，其中包括现有技术修饰例如硫代磷酸或肽核酸(PNA)中的任一个状态。

一个“多核苷酸片段”是一种给定的多核苷酸分子的一部分或一个“多核苷酸序列”的一部分。在高等植物中，脱氧核糖核酸(DNA)是遗传物质，而核糖核酸(RNA)涉及将DNA中包含的信息传递到蛋白中。一个“基因组”是在一种生物的每个细胞中所包含的遗传物质的整体。

除非另外表明，本发明的一种特定的核酸序列还暗示性地涵盖它的保守地修饰的变体(例如，简并密码子取代)以及互补序列、以及连同明确地指明的序列。确切地，简并密码子取代可通过产生以下序列来实现，在这些序列中一个或多个所选(或全部)密码子的第三位置被经混合的碱基和/或脱氧肌苷残基取代(巴泽尔(Batzer)等人，1991；大冢(Ohtsuka)等人，1985；罗索利尼(Rossolini)等人，1994)。术语多核苷酸与核酸、核苷酸序列可互换使用并且可以包括基因、cDNA、以及被一个基因编码的mRNA、等。

本发明的多核苷酸应当理解为是以一种分离的形式提供的。术语“分离的”指在此披露和要求的多核苷酸，如果它确实具有一个天然发生的对应物，该多核苷酸不是以其天然背景的方式出现的多核苷酸。因此，以下进一步描述的本发明的其他化合物应当理解为是分离的。如果要求在一个植物基因组的背景中，通过该基因组的插入侧以及位于该插入侧处的侧翼序列将本发明的多核苷酸与天然发生的对应物区别开。

在此使用的，术语“基因”是指与一种生物学功能相关联的核酸的任何区段。因此，基因包括对于它们的表达所要求的编码序列和/或调节序列。例如，“基因”是指表达mRNA或功能性RNA、或编码一种特异性蛋白的一个核酸片段，并且它包括调节序列。基因还包括非表达的DNA区段，例如形成针对其他蛋白的识别序列。基因可以获自多个来源，包括从一个感兴趣的来源进行克隆、或从已知的或预测的序列信息合成，并且可以包括被设计成具有所希望的参数的序列。

“基于标记的选择”在本发明的范围内应理解为是指例如使用基因标记从植物中检测一个或多个核酸，其中该核酸与所希望的性状相关联，以鉴别出携带令人希望的(或不希望的)性状的基因的植物，使得在选择性育种计划中可以使用(或避免)那些植物。一种“标记基因”编码一种可选择或可筛选的性状。

本发明中使用的适合的标记可以例如选自下组，该组由以下各项组成：单核苷酸多态性(SNP)标记、插入或缺失(indel)(即，插入/缺失)标记、简单序列重复(SSR)标记、限制片段长度多态性(RFLP)标记、随机扩增多态性DNA(RAPD)标记、裂解扩增多态性序列(CAPS)标记、多样性阵列技术(DArT)标记以及扩增片段长度多态性(AFLP)标记。

例如，RFLP涉及在具体的短限制位点使用限制酶来切割染色体DNA，由这些位点之间的复制或缺失或这些限制部位处的突变产生多态性。

RAPD利用低严格聚合酶链反应(PCR)扩增使用具有任意序列的单一引物来产生无特色DNA片段的株系特异性阵列。该方法仅需要很少的DNA样品并且分析大量的多态性位点。

AFLP需要在使用PCR和引物中的选择性核苷酸扩增具体片段之前用限制酶消化细胞DNA。利用这种方法，使用电泳技术来目测所获得的片段，每个引物组合可以测量多达100个多态性位点，并且每一测试仅需要少量的DNA样品。

SSR分析是基于广泛分布在真核生物的基因组中的DNA微卫星(短重复)序列，将这些序列选择性地扩增以检测简单序列重复中的变化。SSR分析仅需要很少的DNA样品。SNP使用可有效地获得点突变的PCR延伸检验。该程序每份样品需要极少DNA。在典型的基于标记的选择育种计划中可以使用上述方法中的一种或两种。

实现了跨越植物基因组多态性区的核苷酸片段的扩增的最优选的方法使用聚合酶链反应(“PCR”)(穆利斯(Mullis)等人，冷泉港定量生物学专题讨论会(Cold SpringHarbor Symp.Quant.Biol.)51:263 273(1986))，它使用了包括一个正向引物和一个反向引物的成对引物，这些引物能够呈其双股形式与界定了多态性的邻近序列杂交。如此处披露的，可将这类启动子用于精细作图、图位克隆以及用于表述分析。

在本发明的范围内“微卫星或SSR(简单序列重复)标记”被理解为指一种类型的遗传标记，由在整个植物基因组的基因座处发现的并具有高度多态的可能性的DNA碱基的短序列的众多重复组成。

“PCR(聚合酶链反应)”在本发明的范围内应理解为是指产生基因组的DNA或一个或多个子集的相对较大量的具体区域，从而进行可能的基于那些区域的不同的分析的方法。

“PCR引物”在本发明的范围内应理解为是指DNA的具体区域的PCR扩增中所使用的相对较短的单股DNA片段。

“表型”在本发明的范围内应理解为是指在基因上控制的性状的可区分的特征。

如在此所使用，短语“表型性状”是指个体中由个体的基因组、蛋白质组和/或代谢组与环境的相互作用产生的外观或其他可检测的特征。

“多态性”在本发明的范围内应理解为是指一个群体中存在两种或更多种不同形式的基因、基因标记或遗传性状或例如通过可替代的剪接、DNA甲基化等可获得的基因产物。

如在此所使用的“探针”是指能够识别并且结合于具体目标分子或细胞结构并且因而允许目标分子或结构的检测的一组原子或分子。特别地，“探针”是指可以用于通过分子杂交来检测互补序列的存在并且对其定量的经过标记的DNA或RNA序列。

能够杂交的这类多核苷酸序列可通过使用此处所述的多核苷酸序列或其反向互补序列进行鉴定或分离，例如通过根据标准方法进行杂交(参见例如萨姆布鲁克(Sambrook)和拉塞尔(Russell)(2001)，分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:ALaboratory Manual)，CSH出版社，冷泉港，NY,USA)。包括与如在SEQ ID NO 1、2或3中列出而指出的核苷酸序列、或其部分/片段相同或基本相同的核苷酸序列可以例如被用作杂交探针。用作杂交探针的片段还可以是通过一般合成技术制备的合成片段，其序列与根据本发明的核苷酸序列的序列基本相同。

如在此所使用的术语“杂交”是指常规的杂交条件，优选地是指以下杂交条件，即：使用5×SSPE、1％SDS、1×Denhardts溶液作为溶液和/或杂交温度在35℃与70℃之间，优选地65℃。杂交后，优选地首先用2×SSC、1％SDS并且随后用0.2×SSC在35℃到75℃之间的温度下、特别地在45℃到65℃之间、但尤其在59℃下进行洗涤(关于SSPE、SSC和Denhardts溶液的定义，参见上述引文中的萨姆布鲁克(Sambrook)等人)。如例如以上萨姆布鲁克等人中所述的高严格杂交条件是特别优选的。特别优选的严格杂交条件例如在如上指示杂交和洗涤在65℃下进行时存在。例如杂交和洗涤在45℃下进行的非严格杂交条件是不太优选的并且在35℃下是更不太优选的。

“序列同源性或序列一致性”在此被可互换地使用。在两个或更多个核酸或蛋白序列的背景下，术语“一致”或“一致性”百分比是指如使用以下序列比较算法之一或通过目测进行测量，当比较和比对最大相应性时，两个或更多个序列或子序列是相同的或具有指定百分比的相同的氨基酸残基或核苷酸。例如，该术语用在与另一个、优选地完整的核苷酸序列具有至少50％、55％、60％，优选地至少70％、75％，更优选地至少80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94、95％、96％、97％、98％，以及甚至最优选地至少99％的同源性(这就是说序列一致性)的一个核苷酸序列的背景下。

如果将彼此进行比较的两个序列长度不同，则序列一致性优选地涉及与较长序列的核苷酸残基一致的较短序列的核苷酸残基的百分比。如在此使用的，考虑了裂隙的数目以及每个裂隙的长度，这两种序列之间的百分比一致性/同源性是由这些序列共享的相同位置的数目的函数(即，％同源性＝相同位置的#/位置的总#×100)，在这两种序列的优化比对中需要引入百分比一致性。序列的比较和两种序列之间的百分比一致性的确定可以使用数学算法来完成，如下文所述的。例如，常规地通过使用计算机程序例如Bestfit程序(威斯康星序列分析包(Wisconsin Sequence Analysis Package)，针对Unix的版本8，遗传学计算机集团公司(Genetics Computer Group)，大学研究园区(University ResearchPark)，575科学先驱麦迪逊(575Science Drive Madison)，WI 53711)可以确定序列一致性。Bestfit使用史密斯(Smith)和华特曼(Waterman)，应用数学进展2(Advances inApplied Mathematics 2)(1981)，482-489的局部同源性算法以便找到两个序列之间具有最大序列一致性的区段。当使用Bestfit或其他序列比对程序来确定是否一个具体的序列与本发明的一个参照序列具有例如95％一致性时，优选地对参数进行这样的调整从而在参照序列的整个长度上对一致性的百分比进行计算并且允许该参照序列中同源性缺口占核苷酸总数的高达5％。当使用Bestfit时，优选地将所谓的任选的参数保留在它们预设(“默认”)值。在一个给定的序列和上述本发明的序列之间的比较中出现的偏差可能是由例如加入、缺失、取代、插入或重组引起的。优选地还可以使用程序“fasta20u66”(版本2.0u66，1998年9月，由威廉(William)R.皮尔森(Pearson)和佛吉尼亚大学编写，也参见W.R.皮尔森(Pearson)(1990)，酶学方法(Methods in Enzymology)183,63-98，所附的实例以及http://workbench.sdsc.edu/)进行这样一种序列比较。对于这个目的，可以使用“默认”参数设定。

两个核酸序列实质上一致的另一指示是这两种分子在严格条件下彼此杂交。短语“特异性杂交”是指一个分子在严格条件下仅与一个特定的核苷酸序列结合、双链化或杂交，这是在该序列存在于一种复合混合物(例如，总细胞)DNA或RNA中时进行的。“实质上结合”是指在一个探针核酸与一个靶核酸之间的互补杂交，并且涵盖少量错配，这些错配可以通过降低该杂交介质的严格来容纳，以实现该靶核酸序列的所希望的检测。

在核酸杂交实验(如DNA和RNA杂交)的背景下“严格杂交条件”和“严格杂交洗涤条件”是序列依赖性的，并且在不同的环境参数下是不同的。较长的序列特定地在较高的温度下杂交。对核酸杂交的广泛指导见于蒂森(Tijssen)(1993)生物化学和分子生物学实验室技术-使用核酸探针的杂交第2章第I部分“杂交原理和核酸探针检验策略综述”(Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridizationwith Nucleic Acid Probes part I chapter 2“Overview of principles ofhybridization and the strategy of nucleic acid probe assays”)，爱思唯尔，纽约。总体而言，对于在限定的离子强度和pH值下的具体序列，高严格杂交和洗涤条件被选择为比热熔点低约5℃。典型地，在“严格条件”下，探针将会与它的靶子序列进行杂交，但不会与其他序列杂交。

热熔点是50％的目标序列与完全匹配的探针杂交时温度(在限定的离子强度和pH值下)。极严格条件被选择为等于对于具体探针的解链温度(T.sub.m)。针对互补核酸(它们在DNA或RNA印迹中在滤纸上具有超过100个互补的残基)的杂交的严格杂交条件的一个实例是具有1mg肝素的50％甲酰胺、在42℃下、将该杂交过夜进行。高严格洗涤条件的一个实例是0.15M NaCl，在72℃下持续约15分钟。严格洗涤条件的一个实例是在65℃下，0.2×SSC洗涤，持续15分钟(关于SSC缓冲液的说明，参见萨姆布鲁克，以下)。经常，高严格洗涤之前会先进行低严格洗涤，以去除背景探针信号。对例如超过100个核苷酸的双链体进行中等严格洗涤的一个实例是在45℃下，1×SSC，持续15分钟。对例如超过100个核苷酸的双链体进行低严格洗涤的一个实例是在40℃下，4-6×SSC，持续15分钟。对于短探针(例如，大约10到50个核苷酸)，严格条件典型地涉及小于约1.0M的Na离子的盐浓度，典型地约0.01到1.0M的Na离子浓度(或其他盐类)，在pH 7.0到8.3下，并且该温度典型地是至少约30℃。还可以通过加入去稳定剂(如甲酰胺)来实现严格条件。总体而言，在具体的杂交检验中，信噪比是针对非相关的探针所观测到的2倍(或更高)指示检测到特异性杂交。如果在严格条件下彼此不杂交的核酸所编码的蛋白是实质上一致的，则它们仍然是实质上一致的。例如，当使用遗传密码所允许的最大程度的密码子简并而生成一个核酸拷贝时发生这种情况。

“植物”是在发育的任何阶段的任何植物，特别是种子植物。

如此处使用的“植物部分”是指植物的结构性和/或功能性亚单位，包括但不限于植物细胞、植物组织、植物材料、植物器官、可收获的植物部分等，如下文所定义的。

“可收获的植物部分”是植物的一部分，是指该植物的那些在任何合适的时间可以收获的并且可被进一步处理用于工业用途或消费的部分，包括花、果、叶、种子、纤维等。

“植物细胞”是植物的结构和生理单位，包括原生质体和细胞壁。植物细胞可以呈分离的单一细胞或培养细胞的形式，或作为高等组织化单位(如植物组织、植物器官或整株植物)的一部分。

“植物细胞培养物”意指植物单元(例如像，原生质体、细胞培养物细胞、植物组织中的细胞、花粉、花粉管、胚珠、胚囊、接合子以及处于不同发育阶段的胚)的培养物。

“植物材料”或“从植物可获得的植物材料”是指叶、茎、根、花或花的部分、果实、花粉、卵细胞、接合子、种子、切条、细胞或组织培养物、或植物的任何其他部分或产物。

“植物器官”是植物的一个独特而明显的已结构化并且分化的部分，如根、茎、叶、花蕾或胚。

如在此使用的“植物组织”意指组织化成结构和功能单元的一组植物细胞。包括植物中或培养物中的任何植物组织。这个术语包括但不限于：全株植物、植物器官、植物种子、组织培养物以及被组织化成结构和/或功能单元的任何植物细胞群组。这个术语与以上列出的或由该定义以其他方式涵盖的任何具体类型的植物组织的联合应用或单独应用并不旨在排除任何其他类型的植物组织。

如此处使用的，术语“群体”意指共享一个常见遗传衍生的植物的遗传上异质的集合。

如此处使用的，术语“品种”或“栽培品种”意指可以通过结构特点和表现从相同物种内的其他品种鉴定出来的一组相似的植物。

如此处使用的，术语“植物转化技术”涉及将一种转基因(赋予特异性状)引入宿主植物。该转基因被掺入宿主植物基因组并稳定地通过后代遗传。将正确的调节序列添加到感兴趣的基因中，即启动子和终止子，然后使用适合的载体将DNA转运到植物细胞培养物中。在一些实施例中，将该基因附接到一个选择标记上，该选择标记允许针对如上文所述的转基因的存在的选择。一旦该植物组织被转化，则选择包含该转基因的细胞并且重生回完整植物。

可以按多种不同的方式进行植物转化用于产生具有使植物宿主能够表达感兴趣的序列所需的委派功能的植物宿主，这取决于所讨论的植物物种。例如，可使用土壤杆菌介导的转化来转化根据本发明的植物。在这种转化方法中，植物或植物组织(例如叶)被切成小片，例如10×10mm，并在包含悬浮的土壤杆菌(包含由土壤杆菌属携带的一个Ti-质粒载体)的一种液体中浸泡10分钟(US 5,591,616；US 4,940,838；US 5,464,763)。放置在选择生根和发芽介质上，这些植物将会重新生长。

非农杆菌技术涉及直接通过原生质体或细胞的外源基因材料的摄入。这些技术包括但不限于PEG或电穿孔介导的摄入、粒子轰击介导的递送以及微注射。帕克沃斯基(Paszkowski)等人，欧洲分子生物学组织杂志(EMBO J.)3,2717-2722(1984)，拍特里库斯(Potrykus)等人，分子与普通遗传学(Mol.Gen.Genet.)199,169-177(1985)，里奇(Reich)等人，生物技术(Biotechnology)4:1001-1004(1986)，以及克莱恩(Klein)等人，自然(Nature)327,70-73(1987)中描述了这些技术的实例。在每一情况下，使用标准技术将这些转化的细胞再生为完整的植物。例如，在金或钨的粒子轰击粒子内用DNA涂覆，并且然后将其射入幼小植物细胞或植物胚胎中(US 05100792；EP 00444882B1；EP 00434616B1)。一些遗传物质将停留在这些细胞中并转化它们。还可使用这种方法来转化植物质体。另外，可使用电穿孔技术来转化根据本发明的植物。在电穿孔中，使用电击在细胞膜中制备瞬态孔允许DNA进入该细胞。本发明中的另一种转化技术可以是病毒转化(转导)。这里，将所希望的遗传物质装入适合的植物病毒中并允许该修饰的病毒感染该植物。如果该遗传物质是DNA，它可以与该染色体重组以产生转化的细胞。然而，大部分植物病毒的基因组由在受感染细胞的细胞质中复制的单链RNA组成。

用根据本发明的核苷酸序列或载体对该植物或植物细胞进行的转化或基因工程可以通过标准方法(如例如描述于萨姆布鲁克(Sambrook)和拉塞尔(Russell)(2001)，分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)，CSH出版社，冷泉港，NY,USA中的)开展。另外，本发明的转基因植物细胞是在营养培养基中培养，满足使用的具体细胞的需求，特别是关于pH值、温度、盐浓度、通风、抗生素、维生素、微量元素等的需求。

如此处使用的术语“载体”或“载体分子”可包括一种表达盒，该表达盒可包括可操作地连接到所述多核苷酸的表达控制序列。这种或这些载体可以处于质粒的形式，并可以单独或与其他质粒组合使用，使用如以下所述的转化方法将转基因并入这种或这些植物的遗传物质中来提供转化的植物。其他载体可包括粘粒、病毒、噬菌体和其他在基因工程中常用的载体。

“转基因”是指一个基因，该基因已经通过转化被引入该基因组中并且被稳定地保持。转基因可以包括例如对于有待转化的一个特定植物的基因而言或者是异源的或者是同源的基因。此外，转基因可以包括被插入非天然生物中的天然基因，或嵌合基因。

“编码序列”是指对特定氨基酸序列进行编码并排除非编码序列的一个DNA或RNA序列。它可由例如在cDNA中的一个“不间断的编码序列”构成，即缺乏内含子，或它可包括以适合的剪接点为界的一个或多个内含子。“内含子”是RNA的一个序列，它包含在原转录本中但通过该细胞内的RNA的裂解和再连接去除以建立可被翻译为蛋白质的成熟mRNA。

如此处使用的术语“表达盒”可由本发明的处于与控制其表达的调节核苷酸序列可操作连接的一个或多个核苷酸序列构成。如本领域中已知的，一个表达盒可由一个启动子序列(启动子)、一个开放阅读框或其一个功能件、一个3’非翻译区以及一个终止子序列(终止子)组成。该盒可以是如上文中所述的一种载体分子的部分。只要使用正确的调节序列，就可将不同的表达盒转化到植物或植物细胞中。

如在此使用的，术语“启动子”是指一个核苷酸序列，通常在它的编码序列的上游(5’)，它通过提供对适当的转录所要求的RNA聚合酶以及其他因子的识别来控制该编码序列的表达。“启动子”包括一种最小的启动子，该启动子是一个短DNA序列，该序列是由一个TATA盒以及其他多个序列(它们用来限定转录起始位点)构成，将调节元件加到该启动子上用于表达的控制。另外，“启动子”也指一个核苷酸序列，该核苷酸序列包括一种最小的启动子加上调控元件，它能够控制一个编码序列或功能性RNA的表达。这种类型的启动子序列由近端以及更远端的上游元件组成，这些后者元件经常被称为增强子。因此，一种“增强子”是一个DNA序列，它可以促进启动子的活性并且可以是该启动子或一种插入的异源元件的一个固有元件以增强一种启动子的水平或组织特异性。它能够在两个方向(正常或翻转)上进行操作，并且甚至当移动到该启动子的上游或下游时还能够发挥作用。增强子以及其他上游启动子元件均结合了介导它们的作用的序列特异性DNA结合蛋白。启动子可以是全部衍生自一种天然基因、或由衍生自在自然界中发现的不同启动子的不同元件构成、或甚至由合成的DNA区段构成。一种启动子可能还包含参与蛋白因子的结合的DNA序列，这些蛋白因子控制了响应于生理学的或发育状况的转录起始的有效性。

“起始位点”是围绕着该第一核苷酸的位置，该第一核苷酸是经转录的序列的一部分，它还被定义为位置+1。相对于这个位置，对该基因的所有其他序列及其控制区域进行编号。对下游序列(即，在3’方向上的其他蛋白编码序列)进行正性命名，而对上游序列(在5’方向上的大多数控制区域)进行负性命名。

启动子元件，特别是一种TATA元件(它们是无活性的或它们在上游激活作用不存在时具有大大降低的启动子活性)被称为“最小或核心启动子”。在一种适合的转录因子的存在下，该最小启动子发挥作用以允许转录。因此，一种“最小或核心启动子”仅仅由转录起始所需要的全部基础元件组成，例如，一个TATA盒和/或一个起始子。

根据本发明，术语“启动子”是驱动基因转录的核酸(例如DNA)的一个调节区域。启动子典型地位于它们调节的基因的附近，在相同的链和上游(向着正义链的5’区域)处。同其他可单独或与其他启动子组合使用的调节元件一样，一些类型的启动子是转化领域内熟知的。“植物启动子”是能够起始植物细胞中的转录的启动子。发育控制下的启动子的实例包括涉及以下受调节的启动子的“组织特异性启动子”，这些受调节的启动子不表达于所有植物细胞中而是仅仅在特异器官(如，叶或种子)的一个或多个细胞类型、特异性组织(如，胚或子叶)、或特异的细胞类型(如，叶实质或种子存储细胞)中。这些还包括受时间调节的启动子，例如在胚形成的初期或晚期、在种子或果实发育的果实成熟期间、在叶子被彻底分化中、或在衰老的起始时。

“细胞类型”-特异性启动子或也被称为“诱导型启动子”主要通过外界刺激例如一种化学品、光、激素、应激、或一种病原体，来驱动在一个或多个器官中的某些细胞类型(例如，根或叶中的维管细胞)中的表达。

“组成型表达”是指使用一种组成型或受调节的(regulated)启动子的表达。“有条件的”和“受调节的表达”是指由一种受调节的启动子所控制的表达。

“组成型启动子”是指一种启动子，该启动子能够在所有或几乎所有的植物组织中在植物的所有或几乎所有的发育阶段过程中表达它所控制的开放阅读框(ORF)。这些转录激活元件各自没有展示出一种绝对的组织特异性，但是却在大多数植物部分中以一种水平来介导转录激活，该水平是该植物中的转录最有活性的部分中所达到的水平的≥1％。

“受调节的启动子”是指非组成型地、但是却以一种暂时地和/或空间地调节方式指导基因表达的启动子，并且包括组织特异性启动子以及诱导型启动子这两者。它包括自然序列以及合成序列、连同可能是合成序列与自然序列的组合的多个序列。不同的启动子可以在不同的组织或细胞类型中、或在不同的发育阶段、或响应于不同的环境条件来指导一种基因的表达。在植物细胞中有用的不同类型的新型启动子正不断被发现，许多实例可见于由奥卡穆罗(Okamuro)等人(1989)的编辑物中。在植物中有用的典型的受调节的启动子包括但不限于：安全剂诱导的启动子、衍生自四环素诱导系统的启动子、衍生自水杨酸盐(酯)诱导系统的启动子、衍生自醇诱导系统的启动子、衍生自糖皮质激素诱导系统的启动子、衍生自病原体诱导系统的启动子、以及衍生自蜕皮激素(ecdysome)诱导系统的启动子。

“可操作地连接”是指在单核酸片段上的核酸序列的关联，这样使得一个的功能受另一个的影响。例如，一个调节DNA序列被认为是“可操作地连接到”对一个RNA或一种多肽进行编码的一个DNA序列或“与之相关联”，如果这两个序列处于使得该调节DNA序列影响该编码DNA序列的表达(即该编码序列或功能性RNA受该启动子的转录控制)的状况下。编码序列可操作地连接到正义或反义定向中的调节序列。

在以上背景下，术语“终止子”涉及一个DNA序列的一个调节区域，其标记用于转录的基因组DNA上的基因的末端，并且因此启动相应基因的转录的终止。

如此处使用的“表达”是指一种内源性基因、ORF或其部分、或一种转基因在植物中的转录和/或翻译。例如，在反义构建体的情况下，表达可仅指该反义DNA的转录。另外，表达是指正义(mRNA)或功能性RNA的转录和稳定累积。表达还可指蛋白质的产生。

“过表达”涉及转基因细胞或生物中的表达水平超过正常或未转化(非转基因)细胞或生物中的表达水平。

“反义抑制”是指能够抑制蛋白质从内源基因或转基因表达的反义RNA转录本的产生。

“基因沉默”是指病毒基因、转基因、或内源核基因的同源依赖抑制。当该抑制归因于受影响的基因的降低的转录时，基因沉默可以是转录的，或当该抑制归因于与受影响的基因同源的RNA种类的增加的周转(降解)时，基因沉默可以是转录后的(英格利什(English)等人，1996)。基因沉默包括病毒诱导性基因沉默(鲁伊斯(Ruiz)等人，1998)。

如此处使用的，术语“BAC”代表细菌人工染色体并基于功能性致育质粒定义了一个DNA构建体，用于在细菌(例如大肠杆菌)中转化和克隆。BAC可被用于对生物(例如植物)的基因组进行测序。将该生物的DNA的一小块在BAC中作为一个插入片段进行扩增，并且然后进行测序。最终，将经测序的部分计算机模拟地重新排序，得到该生物的基因组序列。

如此处使用的，“增加的种子活力”是指种子以下各方面的能力：以均一的方式快速萌发并达到萌发的高百分比；产生从土壤中快速出苗的幼苗并具有出苗的高百分比；产生生长快速并表现对各种应激(包括但不限于寒冷)的出众的耐受的幼苗。种子活力是上述的参数中任一项以及这些的任意组合的量化。

“种子萌发”被定义为胚根从种皮中露出。

下文的“萌发速度”是指种子吸胀和胚根从种皮中露出之间观察到的平均时间。

在本申请中，最后萌发速度可通过计算观察到种子萌发50％所需的时间段来测量(结果表示为T50测量)。

“增加的萌发速度”应被理解为包括根据实施例5的多核苷酸的种子与不包括所述多核苷酸中的种子的萌发之间可观察到的显著差异。典型地，增加的萌发速度意为包括根据实施例5的多核苷酸的种子比不包括SEQ ID NO 3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6的种子萌发更早。

“修饰的萌发速度”应被理解为包括根据实施例1至7的多核苷酸的种子与不包括所述多核苷酸中的种子的萌发之间可观察到的显著差异。典型地，修饰的萌发速度意为包括根据实施例1至7的多核苷酸的种子与不包括SEQ ID NO 1、2、3、4、5或6的种子不同地萌发。

如此处使用的，种子萌发均一性可被表示为10％萌发和90％萌发之间的时间。这个时间段越短，种子萌发均一性越好。

“不利外部环境条件”是抑制或延缓该种子萌发或该幼苗出苗的条件。在本发明的背景下，寒冷在其他事项中可被认为是不利于正常萌发条件的一个因子。

“出苗(幼苗的)”意在指该植物可观察到的生长。

“增加的出苗”应被理解为包括根据实施例5的多核苷酸的种子与不包括SEQ IDNO 3、4或6的种子的幼苗从种子中出苗之间可观察到的显著差异。

本发明将从以下的非限制实例连同如下述的相关联的序列表中更加显而易见：

SEQ ID NO 1：对应于BolC.VG1.a基因(At3g01060基因的甘蓝直系同源物)的A12DHd等位基因的多核苷酸序列。

SEQ ID NO 2：对应于BolC.VG2.a基因(At3g01150基因的甘蓝直系同源物)的A12DHd等位基因的多核苷酸序列。

SEQ ID NO 3：对应于BolC.VG1.a基因(At3g01060基因的甘蓝直系同源物)的GD33DHd等位基因的多核苷酸序列。

SEQ ID NO 4：对应于BolC.VG2.a基因(At3g01150基因的甘蓝直系同源物)的GD33DHd等位基因的多核苷酸序列。

SEQ ID NO 5：对应于BolC.VG2.b基因(At3g01150基因的甘蓝直系同源物)的截短的A12DHd等位基因的多核苷酸序列。

SEQ ID NO 6：对应于BolC.VG2.b基因(At3g01150基因的甘蓝直系同源物)的截短的GD33DHd等位基因的多核苷酸序列。

附图简要说明

图1是来自代换系SL101(○)和亲本系(A12DHd(■)和GDDH33(●))的种子在15℃在水上的累积萌发曲线的图解表示法。垂直线是标准误差。

图2是SL101(◇)和复发的A12DHd(■)亲本以及交互的F₁回交系(A12DHd×SL101(△)和SL101×A12DHd(○)的累积萌发曲线的图解表示法。垂直线是标准误差。

图3是来自代换系SL101()以及亲本系A12DHd(●)和GDD33H(■)的种子在大田中的累计出苗的图解表示。

图4是说明代换系SL101(白色柱)和亲本系GDDH33(黑色柱)和A12DHd(灰色柱)的种子的萌发过程中ABA的内源浓度的图。

图5是说明3个KO系(对于基因At3g01060(黑色柱)以及2个KO系(对于基因At3g01150(灰色柱)中的种子萌发速度的图。野生型对照系(白色柱)是col0。

图6是说明在温室(更加有压力的条件)中产生种子之后，与野生型对照系Col0(黑色线)相比，KO系102(淡灰色线)和18(低中等灰色线)(对于基因At3g01060)中以及KO系15(高中等灰色线)和3(深灰色线)(对于基因Atg01150)中的种子萌发速度的图。

实例1

材料和方法

种子生产和系的比较

对于源于双单倍体亲本系A12DHd(芥蓝变种)和GDDH33(西兰花变种；瑞伊(Rae)等人，1999)的一系列甘蓝染色体代换系，种子样品是从英国伯明翰大学获得。然后从这些代换系和GDDH33亲本的10株个体重复植物产生和收集大部分种子，并将作为代换系的复发的A12DHd亲本的20株植物与萌发试验中的后者相比。如通过贝特艾(Bettey)等人(2000)所述的在温室中以16h白天16℃-18℃以及夜晚10℃-15℃将植物以10个重复的随机化区组安排。当在16h白天期间光强度跌到300w m²以下时，补充照明(400W高压钠灯；欧司朗有限公司(Osram Ltd)，圣海伦斯(St Helens)，UK)。通过在花开放之前将花序封闭在包含绿头苍蝇的穿孔聚乙烯袋中使植物自体受粉。在收获之前允许心皮在封闭的袋子内的植物上完全干燥。在进行萌发试验之前，清洁这些种子，在15％rh和15℃平衡，并且然后储存在-20℃。在15℃记录从上述的10株重复植物(或20，A12DHd)中的每株采集的15颗种子的4个重复在湿润的滤纸上进行的累积萌发。先前的工作已显示这是足够的种子(贝特艾(Bettey)等人，2000)。进行频繁计数以允许来自这些测量的这个时间到50％萌发的精确计算。萌发百分比在所有种子份中是高的。

在后面的试验中，以如上所述的相同方式产生来自交互回交的F1种子。进行营期授粉以进行杂交，获得F1。同时产生来自亲本系的种子用于比较，以将种子生产过程中的环境差异的影响最小化。另外，在多种情况下，种子是在年度的不同时间在如上所述的温室中从亲本A12DHd和代换系SL101的重复植物中产生的。尽管温室的供暖、通风和照明设置如上述的那些保持相同，但环境温度不同并被记录。

萌发测定

将来自代换系和亲本系甘蓝的50颗种子的三个生物重复或来自拟南芥野生型和突变系的50颗种子的3至15个生物复制置于通过用水处理而保持湿润的2层滤纸上萌发(沃特曼国际有限公司(Whatman International Ltd.)，UK)。

在所有萌发试验中，在滤纸上的种子保持在透明的聚苯乙烯箱中，这些聚苯乙烯箱以随机化区组安排并保持在黑暗中。没有观察到真菌感染的证据，并且因此未将种子进行灭菌以避免影响萌发。时间间隔地记录萌发(胚根露出)，以构建累积萌发曲线。

大田出苗

作为来自甘蓝基因型的出苗的更大的未公开的比较的部分，将亲本系GDDH33、A12DHd和代换系SL101的100颗种子按随机化区组安排在5月31以4个重复1m行进行播种。种子是通过手动以15mm深犁沟播种，用筛过的土壤(筛孔尺寸<4mm)覆盖，并用斯坦哈伊(Stanhay)条播机压土轮将表面滚压一次。该土壤是沙壤土，并实施灌溉以在种子萌发和出苗期间维持土壤水分。定期记录后者直至没有更多幼苗出苗。

激素分析

将来自代换系和亲本系的种子样品作为未吸胀的干种子，并将种子在15℃湿润的滤纸上吸胀24和48小时。在吸胀前，将包含1g干种子的每个样品进行测量。立即将这些样品置于液氮中，冻干并且然后在-20℃置于家用冷冻机中直至萃取。这些样品处于10ml冷的(4℃)80％甲醇(包含20mg l-l BHT)中，然后添加500ng ABA和100ng GA标准中的每个。将这些样品在冷柜中搅拌过夜，并且然后离心。倾析上清液并将该沉淀重悬于另外10ml的80％甲醇中。将这些样品搅拌4h，离心并合并上清液。将上清液蒸发至水性(c.3-4ml)并添加10ml 0.5M pH 8.2磷酸盐缓冲液，将样品用2×15ml二氯甲烷进行分配，并弃去二氯甲烷。将水性馏分用1M磷酸调节至pH 3，用3×15ml乙酸乙酯进行分配。

将合并的乙酸乙酯用2×3.5ml pH 3.0水进行洗涤，并蒸发至干燥，重溶于5ml水中，并且将pH调节至8。然后将该溶液装载到QMA连接柱，随后将该连接柱用5ml 15％甲醇pH8.0进行洗涤。将GA和ABA用5％甲醇中的0.2M甲酸从该QMA连接柱直接洗脱到C18 21连接柱。然后将C18连接柱用5ml 20％甲醇进行洗涤，并在5ml 80％甲醇中回收样品，并蒸发至干燥。然后将样品溶于甲醇中，并且用过量含醚的重氮甲烷进行甲基化。在蒸发至干燥以后，将样品重溶于干乙酸乙酯中，并通过氨基连接柱。将所得到的样品通过GC-MS直接分析ABA含量，然后蒸发至干燥，并在通过GC-MS分析GA含量之前重溶于BSTFA。

标记分析

引物对被设计为30个拟南芥基因模型，这些基因模型间隔地横跨SOG1区域传播，使用引物3(Primer 3)软件(http://gene.pbi.nrc.ca/cgibin/primer/primer3_www.cgi)和来自泰尔(Tair)(http://www.arabidopsis.org/)的基因数据给出从200至700bp的PCR产物。使用的PCR混合是标准的，但使用了一个触地程序(touch-down program)。这由如下的循环参数组成：94℃持续5min；然后在65℃至55℃退火持续10个循环，每个循环降低1度，在72℃延伸30s并在94℃变性30s经10个循环；接着94℃ 30s、55℃ 30s、72℃ 45s循环30次；并在72℃最终延伸15min。给出多态结果的这些基因模型的引物序列被选作标记(表1)。

数据分析

使用统计包Genstat 5(佩恩(Payne)等人1993)进行所有分析，并且合适时，使所有数据经受方差分析。

结果

针对确认的和精细测谱的连锁群C1的萌发速度(SOG1)的QTL

比较代换系和亲本系的萌发数据的方差分析显示GDDH33亲本比A12DHd亲本萌发显著地(P<0.001)更快，证实萌发等位基因的正速度是由GDDH33提供，如通过贝特艾(Bettey)等人(2000)(图1)显示的。存在4个跨越SOG1QTL(SL101、SL111、SL118、SL119)的代换系，并且所有这些显著(P<0.005)比A12DHd亲本更快萌发。与A12DHd相比，代换系SL101具有最小的提高萌发速度的渗入区域(1-9cM；瑞伊(Rae)等人，1999)并且占据这些亲本系(图1)之间的萌发速度差异的大部分并因此被选择用于SOG1的进一步研究。

SOG1快速萌发表型不受母体基因型的影响

萌发速度由胚胎确定，但还可被围绕它的本源上是母体的组织显著影响。进行SL101和A12DHd之间以及GDDH33和A12DHd之间的交互回交，以确定在SOG1基因座处的母体和接合子的遗传组分。记录来自每次杂交的F1种子以及来自同时产生的自交亲本系的种子的萌发。在SL101和来自与A12DHd(SL101为母本植物并且花粉来自A12DHd，并且反之亦然)的交互回交的F1中的萌发速度不存在显著差异，但来自所有三种的种子比来自A12DHd的种子显著(P<0.01)萌发更快(图2)。这显示占主导的GDDH33等位基因更快的萌发对证实基于胚胎的性状的继承没有遗传母体影响。

萌发速度中的差异导致大田中出苗时机的差异

以上数据显示GDDH33和SL101种子的萌发速度比A12DHd的在恒定温度条件下显著更大。在大田中，这导致来自GDDH33和SL101的出苗比来自A12DHd的显著更早(图3)。

成熟时内源ABA浓度在基因型之间不同

使用GCMS测量ABA在这三种基因型的干燥和吸胀种子中的内源浓度。在SL101和GD33的干燥种子中或在胚根露出之前吸胀到48小时过程中ABA内源浓度不存在显著差异。这两个种子份中的ABA浓度在第一个24小时保持相同，并且然后通过48小时降低到它的一半。相比之下，A12DHd的种子中的ABA的内源浓度初始为SL101和GDDH33中的三倍更高，并且然后经吸胀的48小时时间逐渐降低，但保持显著高于其他两个种子份(图4)。有趣地是，如果A12DHd中的ABA以相同速度继续下降，在72小时之后它将达到与其他两个系萌发前看到的相同水平(萌发点)。

此处呈现的GDDH33、SL101和A12DHD系的结果显示更高的内源ABA含量和更低的萌发速度之间的清晰的遗传确定关系，并且反之亦然。

已进行甘蓝中萌发速度性状的数量遗传学分析。

通过以前述代换系SL101对QTL精细作图，我们最终鉴定了QTL(萌发速度(SOG1))下面的两个基因。在甘蓝中的缓慢萌发亲本(A12，羽衣甘蓝(Kale))的背景下，来自快速萌发亲本(GD33，西兰花(Broccoli))的C1的端粒端处，该系SL101具有短渗。通过使用横跨SL101的这个渗入区域的标记，在1,300个系内鉴定了沿着此区域的30个重组，这归功于BAC耕种路径策略。这一策略允许将这些系聚集到5个有区别的群组和这2个亲本系中。然后对这7个群组全部评价种子萌发，并且统计分析揭示更快的萌发与C1的端粒端处的2个标记相关联。通过荧光原位杂交进一步评估这些标记与C1的端粒端处的单BAC的共定位。对BAC进行测序，并发现12个全长基因存在其中。

在拟南芥中在染色体3的上臂(一个SOG1QTL位于此)处已经鉴定了这些芸苔属基因的假定直系同源物(克列尔科斯(Clerkx)等人2004)基于甘蓝中的C1的端粒端和拟南芥中的染色体3的上臂(参见以上和以下)之间的良好的遗传共线性，有理由认为在芸苔属和在拟南芥中鉴定的基因共享种子萌发中的常见功能。为了加强我们的假设，我们已经鉴定了已在芸苔属中发现的那些的假定直系同源基因中的拟南芥敲除(KO)突变系。发现这些KO系中的两个具有显著的萌发表型(与对照Col0系相比更快萌发)，表明这些基因充当萌发的负调节物(图5)。有趣地，注意到使用至少两个不同KO系来评估萌发表型，而且这些有区别的KO系针对萌发速度显示相似的结果。当在更有压力的条件下产生种子后评估时(图6)，结果是非常可比的。

因此，这种功能性研究已证实Atg01060和Atg01150基因在调节种子活力、特别地在调节萌发速度中的作用。这些基因BolC.VG1.a和BolC.VG1.b(已在甘蓝中的SOG1QTL内鉴定的)的芸苔属直系同源物可因此真正被认为是允许在十字花科中调节种子活力、更特别地调节种子萌发速度的工具。

证实了甘蓝连锁群C1和拟南芥的染色体三的上臂之间的连锁

以上对SL101的研究已经显示在连锁群C1(LGC1)的端粒端处的单渗入区域包含针对SOG1的QTL。在当前工作中我们目的在于在甘蓝和拟南芥基因组中的这个区域之间建立共线性，以使得能够与在该模型物种中进行的广泛QTL分析进行比较。先前已显示在芸苔属基因组和拟南芥之间有多个连锁(科根(Cogan)等人，2004；帕金(Parkin)等人，2005)。

特别地，LGC1和拟南芥之间的连锁(科根(Cogan)等人，2004)被利用于促进其他信息标记的开发。使用这种途径，对30个拟南芥基因模型设计了引物对，其跨这个区域分布。对这些引物进行测试来确定它们是否扩增了一个甘蓝产物并且然后在SL101和亲本系A12DHd和GD33DHd之间是否存在任何多态性(表1)。在SL101和GD33DHd中相同但与A12DHd中的不同的带型表明在这个基因座中它的存在，并且因此表明它作为用于SOG1的一个标记的有用性。用于三个基因模型的引物被鉴定为信息标记(At3g01190、At3g07130、At3g02420，表1)，其锚定拟南芥染色体三的上臂和甘蓝LGC1的SOG1区域之间的连锁。对共线性的证实证明了SOG1与对于定位于拟南芥基因组的这个区域的种子性能的QTL的比较是合理的。

表1.用于使用的选定的标记的引物锚定拟南芥的SL101渗入

总而言之，这些结果开启了使用根据实施例1至23中任一项的BolC.VG1.a A12/GD33等位基因或BolC.VG2.a A12/GD33等位基因或BolC.VG2.b A12/GD33等位基因的可能性，特别地将其中种子活力已被调节的植物、更特别地其中萌发速度已被调节的植物工程化。

实例2.突出关联到种子活力的另外的表型的试验

这些试验强调了具有(SL101)或不具有(A12)GD33等位基因的种子之间的萌发特征中的差异。

系A12和SL101的种子起源于UK并且在2009年在南非被一个商业种子生产者复制。该种子的萌发特征的确定发生于2010年早期，在荷兰恩克赫伊森(Enkhuizen,Netherlands)。

在标准商业条件下的种子性能

同正常商业实践中一样，将100粒种子的两个重复播种于标准的用土壤填充的托盘中。将托盘置于黑暗中的萌发室在18℃持续三天。然后将托盘转移到具有20℃平均温度的温室中。在播种后十天，对正常发育的幼苗的数目和未出苗的种子的数目进行计数。

在这些条件下的SL101性能比A12的好的多(表2)。

	正常幼苗	未萌发种子
			A12	19	80
SL101	91	7

表2.在幼苗生产的实际条件下测量的正常幼苗百分比和未萌发种子百分比

纸上萌发的温度敏感性

将A12和SL101每者的100粒种子的两个重复在透明塑料萌发箱中在湿滤纸上在10℃、20℃或30℃的温度下的组合下进行播种。将箱在提到的温度下保持在黑暗中或置于荧光下。

对萌发(测量为根突出)每天计数。对萌发进行计数直至开始该测量之后10天观察不到另外的萌发时。

数据显示在每种条件下，与A12相比，针对SL101的萌发百分比更高(表3)。

表3.在光照下或在黑暗中在不同温度下A12和SL101的最终萌发百分比

纸上萌发速度

萌发速度是在光照下在20℃的条件下确定的，这个条件下两个系具有它们的最大萌发。在提到的条件下，将每系50粒种子的两个重复置于塑料萌发箱中的纸上。确定t50(直至萌发种子的50％已经萌发的时间)(表4)。

如在表中所示的，与A12相比，针对SL101的直至50％萌发的时间大大缩短。

系	t50(h)
		A12	59.0
SL101	47.5

表4.针对A12和SL101的在光照下在20℃直至50％萌发的时间

在纸上萌发过程中对低温的敏感性

如前述的用于纸上萌发测试，将每个处理的50粒种子的两个重复在光照下在5℃或10℃进行孵化。孵化是在水中或在GA3的1mM溶液中。在10天之后，将已经萌发的种子去除。然后将带有余下的未萌发的种子的箱子置于20℃下光照下。在另外5天之后，对萌发的种子的数目进行计数。作为比较，不经预处理，A12和SL101两者的种子在光照下在20℃萌发。在10天以后，对这些种子的萌发百分比进行计数。

尤其在5℃下，在这两个系之间存在大的差异(表5)。在水中预处理很大程度阻止下文中在光照下在20℃的A12萌发。针对在1 mM GA3中预处理的情况并非如此。SL101显示在5℃在水中预处理之后萌发中仅有轻微减少。

	A12	SL101
			未预处理	99	100
10d 5C在水中	15	84
			10d 5C在1mMGA3中	100	100
10d 10C在水中	82	99
			10d 10C在1mMGA3中	100	100

表5.进行或没有进行用水或GA3的1mM水性溶液的孵化培养基在光照下在5℃或10℃的预处理的A12和SL101的种子萌发百分比

实例3.基因型对杂种种子性能的影响

杂种种子是在南非的商业种子生产条件下通过对两个雄性不育系的花用来自7个其他系的花粉进行授粉产生的。

雌性系1包含该GD33等位基因，雌性系2包含该A12等位基因。

针对这些种子测试萌发期间对低温的敏感性。将种子在润湿的滤纸上在白色荧光下在5℃孵育10天。在10天之后记录萌发百分数，并将未萌发的种子转移到光照下20℃。在五天之后，记录萌发的种子的百分比。

在包含该GD33等位基因的雌性系上产生的种子在5℃显示相当程度上更高的萌发，并且在转移到20℃之后萌发超过90％。在不具有该GD33等位基因的雌性上产生的种子显示仅有低的萌发百分比，并且在转移到20℃之后不会恢复。

表6.使用在光照下在5℃预处理10天，随后在20℃将未萌发的种子孵育5天的GD33或A12雌性系产生的杂种种子的萌发百分比。

在萌发测试中，将来自相同批次的杂种种子的种子在白色荧光下在25℃在纸上进行测试。从萌发的每日计数中，计算直至50％萌发的时间(t50)。在5天之后，确定最终萌发百分比。所有杂种具有至少85％萌发，大多数超过95％。在具有GD33等位基因的雌性系上产生的种子显示平均25％左右更快的萌发，通过与对于具有A12等位基因的雌性上产生的种子的1.80天相比，1.33天的更低的t50显示的。

表7.使用GD33或A12雌性系在光照下在25℃产生的杂种种子的萌发百分比和直至50％萌发(t50)所花费的时间。

参考文献

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鲁安(Ruan)S.L.,端(Duan)X.M.和胡(Hu)W.M.2000.杂交油菜(甘蓝型油菜)中种子胎萌的发生及其对种子质量的影响(Occurrence of seed vivipary in hybrid rape(Brassica napus L.)and its effect on seed quality).浙江大学学报(农业和生命科学)(Journal of Zhejiang University(Agriculture and Life Sciences))2000卷26第5期第573-578页。

序列比对

甘蓝VG2基因的DNA序列比对。使用ClustalW基于网络程序(http:// www.genome.jp/tools/clustalw/)进行比对和使用网络基础程序BOXSHADE(http:// www.ch.embnet.org/software/BOX_form.html)绘制注释。A12_BOLC.VG2.A是位于连锁群C1的SOG1区域中的基因的A12全长拷贝。A12_BOLC.VG2.B是位于50Kb的全长基因内的相似基因的截短的拷贝。已经使用一个相似的注释来说明该GD33基因组背景中的相同区域。

来自GD33和A12的VG2甘蓝直系同源蛋白的蛋白质序列比对使用基于网络的生物信息学程序FGENESH(http://mendel.cs.rhul.ac.uk/mendel.php？topic＝fgen-file)预测蛋白质序列。

VG1甘蓝基因的DNA序列比对

来自A12和GD33的VG1甘蓝直系同源蛋白的蛋白质序列比对使用基于网络的生物信息学程序FGENESH预测蛋白质序列。

本发明的一些实施方案如下：

1.一种多核苷酸，特别地一种分离的多核苷酸，包括选自下组的一种核酸分子，该组由以下各项组成：

2.根据实施方案1所述的多核苷酸，特别地一种分离的多核苷酸，包括选自下组的一种核酸分子，该组进一步由以下各项组成：

3.一种多核苷酸，特别地一种分离的多核苷酸，包括选自下组的一种核酸分子，该组由以下各项组成：

4.根据实施方案1至3所述的多核苷酸，其中该修饰的种子活力表型由在下组中选择的一个另外的表型表征，该组包括：修饰的萌发速度、修饰的出苗速度、修饰的种子萌发均一性、修饰的出苗均一性、修饰的种子萌发百分比、修饰的该种子相对于外部环境和/或母体条件的耐受性、修饰的对ABA的敏感性或修饰的ABA含量。

5.一种多核苷酸，特别地一种分离的多核苷酸，包括在下组中选择的一种核酸分子，该组包括：

a.一种包括如在SEQ ID NO:3中描述的核苷酸序列的核酸分子；

b.一种包括如在SEQ ID NO:4中描述的核苷酸序列的核酸分子；

c.一种包括如在SEQ ID NO:6中描述的核苷酸序列的核酸分子；

6.根据实施方案5所述的多核苷酸，其中该增加的种子活力表型由在下组中选择的一个另外的表型表征，该组包括：增加的萌发速度、增加的出苗速度、增加的种子萌发均一性、增加的出苗均一性、增加的种子萌发百分比、增加的该种子相对于外部环境和/或母体条件的耐受性、降低的对ABA的敏感性或降低的ABA含量。

7.一种多核苷酸，特别地一种分离的多核苷酸，包括在下组中选择的一种核酸分子，该组包括：

a.一种包括如在SEQ ID NO:1中描述的核苷酸序列的核酸分子；

b.一种包括如在SEQ ID NO:2中描述的核苷酸序列的核酸分子；

c.一种包括如在SEQ ID NO:5中描述的核苷酸序列的核酸分子；

8.一种表达盒，包括以上实施方案中任一项所述的多核苷酸。

9.一种载体分子，包括根据实施方案8所述的表达盒。

10.根据实施方案1至3所述的多核苷酸用于修饰种子活力的用途。

11.用于修饰种子活力的一种方法，该方法包括：通过杂交或通过植物转化技术将实施方案1至10中任一项所述的多核苷酸、表达盒或载体分子渗入一种植物或植物部分中并在其中表达。

12.用于产生具有修饰的种子活力的种子的一种方法，包括：

a.获得一种第一植物，该第一植物被证实包含实施方案1至7中任一项所述的多核苷酸；

13.一种植物或植物部分，该植物或植物部分在其基因组内包含包括实施方案1至9中任一项所述的多核苷酸、表达盒或载体分子的渗入，并且与不包括所述多核苷酸、表达盒或载体分子的一种植物或植物部分相比，展现种子活力的修饰。

14.一种植物或植物部分，该植物或植物部分在其基因组内包含包括根据实施方案5所述的多核苷酸的渗入，并且与由不包括所述多核苷酸的一种植物或植物部分产生的种子相比，展现增加的种子活力。

15.一种植物或植物部分，该植物或植物部分在其基因组内包含包括根据实施方案7所述的多核苷酸的渗入，并且与由不包括所述多核苷酸的一种植物或植物部分产生的种子相比，展现降低的种子活力。

16.用于选择具有修饰的种子活力的植物或植物部分的一种方法，包括在待测的植物或植物部分中检测存在或不存在根据实施方案1至7中任一项所述的多核苷酸。

17.用于选择具有修饰的种子活力的植物或植物部分的一种方法，包括使候选植物或植物部分接触一种选自下组的选择工具，该组包括实施方案1至7中任一项所述的多核苷酸。

18.根据以上实施方案中任一项所述的植物或植物部分，该植物或植物部分是栽培的植物或栽培的植物部分，并且是在下组中选择的，该组包括甘蓝、甘蓝型油菜、白菜型油菜、芸苔、芥菜、黑芥、大白菜、小白菜、塌棵菜、芸芥、芝麻菜、萝卜、家独行菜、豆瓣菜、山葵。

19.根据实施方案13至15或实施方案18所述的植物或植物部分，其中所述植物是一种杂种植物。

20.根据实施方案19所述的植物或植物部分，可从保藏于NCIMB的保藏号NCIMB41951下的种子或其子代获得。

21.用于获得具有修饰的种子活力的植物或植物部分的一种非生物方法，包括将根据实施方案1至7中任一项所述的多核苷酸引入所述植物或植物部分的基因组中。

22.根据实施方案16所述的方法，包括(a)获得被证实包含实施方案1至7中任一项所述的多核苷酸的一种第一植物；(b)使所述第一植物与被证实缺乏所述多核苷酸的一种第二植物杂交；并且(c)鉴定从该杂交中得到的展现修饰的种子活力并包含所述多核苷酸的一种植物。

23.根据实施方案22所述的方法，其中该多核苷酸的存在是通过使用一个分子标记，特别地通过一种物理地定位于包含该多核苷酸的遗传基因座的内部或外部的一个位置处的分子标记来证实的。

24.根据实施方案22所述的方法，其中该多核苷酸的存在是通过使用至少两个分子标记，特别地通过至少两个物理地定位于包含该多核苷酸的遗传基因座的侧翼的一个位置处的分子标记来证实的。

25.一种包括根据实施方案1至7所述的多核苷酸的种子，其中用任意类型的包衣对所述种子进行包衣。

序列表

<110> Syngenta Participations AG

<120> 种子活力的调节

<130> PROXXXX

<141> 2013-02-27

<160> 18

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 3061

<212> DNA

<213> 甘蓝

<400> 1

aaaaagcagg ctaagagtgt aagcgaccca tttcacatcg gatctaaaaa tcatataatc 60

tagagtctga caagaatcaa cgttgataga gagtgcgaga gaatagtaca gagccagtcg 120

tcgaggtaga aatgtttgtc ctgagcccaa atggtatagt tgatattggg attccagaac 180

ttgttatcac ccactatcca tctcttagcg gccacctcag tcaccggagc tgccgcaaga 240

aaagccagaa ccattgccgc agccatcaac gcaagtctag ccatagatca ctctagaaag 300

aaaaagaagc tcagtgctta atgactctta gtcttatctc tcaagaaata gcagttttat 360

gaatgaatgt atatgagcga gtggggctgt ttccaagtca aatcagacat acaaatttct 420

cgttttacgg ggaaaagatc tctcaagatc cgtaatttct tcaactaacg tttggaattt 480

tattactact ttaatcaacc tcgatgttga cgatgaagta cacgttaatt aaaggtacgc 540

gttatatagt taaaggagta attagatttt aattgctggc attattatta tttttctctg 600

gtatattttt aaaggaatat tttctcacct tttaggcggg aatttatttc cattttcttc 660

tttcaagggt tcagagattc aattccttta ttaacatacg aaatgagtat atagtatctt 720

ttgaatattt aaataattaa aataaaaata aattaccata acagtgatac atatcaaaat 780

ttccaaaact aatgtgagta cttatattag ttgtacttct tagtaaaata acgagatatg 840

ttatggctcg tcgcatacaa caaagcagag catatgttcc cgcaataaca tgcacacgca 900

actgatagca cgtcgtaacc atttccgcga accaaccaat ggatattgta attcgataag 960

acgacgtcgt gttgttgacc acgaatattt cttaaatttc cttttatctt ttgtttttga 1020

cgtcatcaca ttggtttatg tccacacgat atcagtcata aaatccacgt agggaacgac 1080

tatccattac acccatccac gtgttctcat aacagcttct agttccatta gctgaacgaa 1140

caatagaaac agagcatcga actgagaaag aagaagaaga agggaagcaa gagaaatggc 1200

ggcagcggcc atggccgttc atctcccgaa acattcatcg tttcttccta atcccaagct 1260

tccattgaat caaaactcta acttcctcgg tgtgtccttg aagatcggtc gacccatgtc 1320

cgttaaccgg aaaatgaaag gtccggttac ggtttcagct gcttcgaccg tcgaaggcga 1380

tcgaagcaaa cagttttaca taaacttcac tggattccca tttcctcttg gtcctttcct 1440

taaccggcgc accatcagaa ccgaggttag gctttctcca tccctcttga gttttgattt 1500

gaactcgttg agaatcccat atggatgtta tgcaggcggt taaaggaagc atatggatgt 1560

ttgaacaaga acaagcttta ggtttcagca gtgtctctac caatataaga atgactgtca 1620

tcagactcaa atccggtggc ttatgggttc atgcccctat tgctcccacc aaagagtgta 1680

ttcaggttcc ccctttttat tcattatcct tgataaagta tcatcctttc ttatcatttg 1740

ataataacca atgtctaaac tcttttttgg gttgttttgc aaactttttc tttgaggcag 1800

cttattgagg agttgggagc tccggttgag tacattgtcc tgccaacttt tgcttacgag 1860

cacaagatct tcgtcggtcc cttctctaga aagttcccca aggctcaagt atgggtggcg 1920

ccaagacaat ggagctggcc actgaactta ccactcgagt ttttcggtat ctttcgcgct 1980

aaaaccatta aagacggaga cttatctacc ccgtgggctg atgagatcga gcagaaagtc 2040

ttaagctctc ctgaagtcgg tacgttcctt cactttctca atcttgttgg ccctccttag 2100

ccaagcctca gtgaaacatt cgcctaaacc cgcactctcc tcctcttccc tccaaaatat 2160

ttgaaaagag ttatatatac atagcctccc aagttattaa aaaaaacgtt ttgtctccca 2220

aactattgaa atctttatca aattgtctat agcctccaaa atccgagggt cggtcctgta 2280

cttatgaaat aataatatac aggaatagga ccgtatgtgg aagtagcgtt ctaccataag 2340

cgttcaagaa ctctattagt cactgatgct gtgatcttcg tcccacggaa gccgccatcg 2400

agtatcagca gcgagtcctt gctggcctct gctaagaacg gactggctgt gaagatactt 2460

agcaaaggca aacaagtacc tgatgaccct gtcgttgata ccccaaacac ccgccaaaaa 2520

ggtcagccat cagcttcttg aaattcaaat tcatcaaaca aaagatctcg atgggtgtct 2580

tttaacgtgc aggatgggaa agaatggtgc tgcaaatcct gtttcttggt ccgtctaatc 2640

tcttggagcc aaacgcgagc ttcgcacaaa tgtcacagaa gctgatcgtt tctcccattg 2700

tcaagactct ggtctttagc aaagtccctg agaaggtgag ggactggatc gatgagatag 2760

cgagtgactg gagattcaag aggataatcc cagctcattt cgaggctccg gtaaacgcag 2820

ggaggtcaga atttctagct gcgtttgggt ttcttgatga tcttctaggg gaaagatatg 2880

tgaaccgtcc tccttcgctc tctgttctct tcacttcgct gatgggtaaa gcagcgagct 2940

attttcctcc ggatgatatg aggactctct cttctcttga tcagttctta gtctctgttg 3000

gtgctgttaa gaagaccgtc tctggtagaa aacgaagatg acggaacaaa cccagctttc 3060

t 3061

<210> 2

<211> 5108

<212> DNA

<213> 甘蓝

<400> 2

gtaggccaag ccaagcatat ggatcactta gttgagagaa gttatggcaa gaaataagcc 60

atgcagatta gaaaaagagt gcaacaaact aagtacagta ctaaaagact aagttaataa 120

tacaattaaa ccaaaattaa tggatgagta ccttcacaaa acattagtga attttcagac 180

cctctggacc aatacaagac taaggatgtg agacttaact gacagttagt tcatgtaggg 240

ccaataaaca gctcaaattc gttagctttc aagttccaat tttctgcgtt gtgttttgct 300

ttttgagggt tgatttggaa tttctccaaa gaggtcacat aatttaaaag aaattgatca 360

aaattatatt ggacaaggca agcaaatcca ttaagaagat cacaacaaaa gaaaaattaa 420

aaaccaacaa aagaaatttc ccatttgacg aaggtgatga acaagatcag tacgtatact 480

ccaccaatgc atgacactac tgaaaacata gacaaacaag gtcgtgatag ttgtgaccac 540

ctcacacatg aaaaaactcc atgaatgtca aaagtttgca cgattatgta aacacttaat 600

cacttattca ttgaaggata atgttggaca gaatattatc attgtttcta atggtaagca 660

taagcaaaca ttgtaaaaag aagtcatgat catgctatat cttataggag tttaatttat 720

tccaagttca catttagtga tgctctaatc ttcaacaata aaacataacc aactgatagt 780

cagagtaacc aattgaatgc cagttttcaa aagaaataat acatatctaa ctgatagtca 840

gtcaaatcaa ccaaataagt agaaagaacc aaacaaacac aactaggggt ggacacttcg 900

attattttgt aggttcggtt tggattcggt tcggtttggt taatttattc tagaattttt 960

taaactgaag taaaccataa gtttcagtct gatttgtatt cggcatggtt tgtgtttcag 1020

ttcagtttaa tcggattccc ttaatttaat tcttttaaga aaaatcatgt tttaaaacac 1080

ggtcatgaaa tcatcatgtt ggtgactatg aaaaaataaa ttatataatt aaatctaata 1140

tataactgaa acaaaaatcc taaaaaacca caaaaaaatt tataagaaca caatcaaacc 1200

aaagttaact aaagtaaata gaaaattaaa aaaaaaacaa tgtcaataaa gttaatactg 1260

actttagtgt taggatttag tataaaaatg tttaattcaa ataataacaa agacacattg 1320

gtttttcggt gcaatttgat tcggttcgat tcggttcggt ctgatttttt tgcttgtctg 1380

aacacaacga cggccgacag ataacttttt aaacgttacg tgaaaatgta ttggactatt 1440

gggccttagt aaaggctaat gaacagatta aatgggctta tagacgcaat tgcatggtat 1500

ctatcgggaa gcataaatcg tcaagtaatt caatttaggg gactcatttg caatttgtgc 1560

aaagatttta gctgtacaga gtagggctga acataaaatc cgtaacccga aatccgaacc 1620

gaaccgaaaa acccgatccg tacccgatcc aaaatgtaaa aaatacctca atgaatattg 1680

tagggtgtta taaaatatat ctgaacccga agtgttatta accgaacccg aacggataat 1740

ccgaaaaccc gaaaaaccaa aaaattcgaa aaaatatccg aaaaaactga tccgaatgcg 1800

taaattaata taaaatataa atatttgaaa catacattgg atatgatatc taacaataag 1860

tatttaaaat ttaaataaat actttaaata ctccattata tacaaagaag tatatatttt 1920

ttatgtttta cttttgaatt ttagatttta ctatggatat atccgagccg atccgataca 1980

atccgaatcc gaatgttata tggctacttt ggatatatct gaaccgatcc gaaaccgaag 2040

ttgttatatc cgaatctcat ccgtacttgt aaatttacta gaatgagaca taggggatga 2100

tacaaaatag aaccgaaatc cgaaaaaacc gatccgaacc cgaacgccga ggcctagtac 2160

agagttccga tcagagatag agagaatcct ttgagcgtcg gccttgcttt gtgcgtaggg 2220

atcatctccg actaattgtt gtaattataa agggcggccg cgccttttta gcggagagat 2280

ggcgagctca cagttcaggt atacgcagac gccgtcgaag gtggtgcacc tgaggaatct 2340

gccgtgggaa tgcgtggaag aggagctcat cgacctatgc aaacgattcg gcaagatcgt 2400

caatacgaag accaatgtcg gcgccaatcg caaccaagcc tttgtcgaat tcgtaacaac 2460

tttttattct cttggatcat cagattgttt ctttttttgg tatctcgttg ttgttttggt 2520

attgttgttt tgaagatgaa actgtatact ttgattcata ttcgcagggt gacgtgaatc 2580

aggcaatatc aatggtttct tactatgctt cgtcttcaga gccggctcag attcgaggga 2640

agactgttta tattcagtac tctaatcgcc atgagattgt caacaatcag agtcctggag 2700

aggtccctgg caatgtcctc ttggtcacct ttgaaggagt ccaatctcac catgtctgca 2760

tcgatgtcat ccatctggta tgtgaatatt cagcttacct tccactattg tttcttgtta 2820

tgttaagtga tttttttcgt ttcttcgagt agattctaat ctatgaaaat atttcaactt 2880

gttgttatta ggcaaacttc ttttgagtgt atttttttcc acttattgtt agacatacag 2940

tatgtcacat actattgtaa attacagtat atctgacgtt aatgaaaatg ctcgaatcac 3000

agatgttgat gcctctttat tataatcttt ctggagagag tttggaaaat agtttcatgt 3060

tcgtcattct catggacagg tgtcactctg cacttatcta gtcattctct tttttagtct 3120

cctaatttga gtttatttcg attgatttgc ttcccttagt tattatcaat ttactccact 3180

gtattatatg gacatgactc atatctagtc caaacttttg tttcaggtgt tttctgctta 3240

tggcttcgtg cacaaaattg ccacttttga gaaagctgct ggtttccagg ttagagatat 3300

cgagttttgt tttcaaggtc ttgcataaat ctaatgatgt ttaaactcat cgtctgccgt 3360

cataacctgc tcaggcactt gttcagttta ctgatgtgga cactgcctta gcggcaagga 3420

ctgcgctgga tggtagaagt atacccaagt atgctcaaat ccttcattca tgcttttgac 3480

cataagataa agctctgttg atggtttctt ccttttcttt tggtaaattc agatatctgc 3540

ttccagaaca tgtaggctca tgcaatttgc gaatgtctta ctcagctcat actgatctaa 3600

atatcaaatt tcagtcccac cgcagcaggt agagttttga gtcctcgcaa atgtgcctct 3660

ccattgttat actgctctta ctgttggaag ccttatggtt gaatagttac ttcatgtgtt 3720

taattctctt acgcactcag ggactacaca aatccatacc ttccggtgaa tcaaaccgct 3780

atggacggtt ctatgcaggt atatttttcc tttgatctaa tcttatctcc aacagcttat 3840

attattctta cactgaatgc gtttgtatta cgttactgat cgtctttgtc catcactgcg 3900

ttcagcctgc tttgggtgct gatggaaaga gggttgaaac tcagagcaac gtcctgcttg 3960

ctttgattga gaatatgcag tacgctgtca ccgtggatgt tcttcacacg gtgaggaaca 4020

acaatatgcc tgtttcttca tctcatcatg ctttcatatc tcaaaattaa ctattccttt 4080

gcttctcata ggtgttttcc gcttatggaa ctgtgcagaa gattgcaata tttgagaaaa 4140

atggttcaac gcaagcctta attcaatact ctggtacatg accttgataa tctgaataca 4200

tatatgattc tactatactt cttttggtta tatggtgaat cttcttatgt gtatgcaaag 4260

agaagagcct aagaatttga atatagtcat cgtttgcttc atgttccgtt ttattgattc 4320

ttctgtagac atttcaacgg cgacgatggc gaaagaagca ctggagggac actgcatata 4380

tgacggaggc tactgtaagc ttcgactaac ttactctcgg catactgatc tcaatgtaaa 4440

ggtacataag atcagttgct ttatgtaccc aaacaaaaag tgcagttaaa gagaataaga 4500

agtgatttct gcaagaaccg catgcttttt tctcatcaac aattgagtga aatctgaatt 4560

cgacattcta gttgattcaa ctaatgattt tcgtcttctt tcttcaggca tttagcgaca 4620

aaagcagaga ctacacactg cctgatctaa gccaactggt gggccaaaag gttccaggag 4680

tggctgcagc tagtgggcca acagatggtt ggcccaatgg gcaggtgcag actcaataca 4740

tgggaagttc gtatatgtac ccaccagctg atcccacagg agcttcacct tcttctggtc 4800

atcctcctta ttatggttga tccatgtact gttttctact ttatataaat ttcggattat 4860

gttgaagact agtttccatg ttataggttt caggtaaaag tgtgttgttc ttttatttgg 4920

ttaaataaac atgggaaaac caataatatt atgtagtata atttataaac attgtgtatt 4980

tgtttctatt tgactttgtt atggagcttc cgaagtgtta gagcttcttt ttctcgtact 5040

ttaaactgtt tcattcctgg atttgtttga agatctgcag acttacactt tagtgacttt 5100

tggtatcc 5108

<210> 3

<211> 3025

<212> DNA

<213> 甘蓝

<400> 3

aaaaagcagg ctaagagtgt aagcgaccca tttcacattg gatctaaaaa tcaaataatc 60

tagagtgtga caagaatcaa cgttgataga gagtgagaga gaatagtaca gagccagtcg 120

tcgaggtaga aatgtttgtc ctgagcccaa atggtatagt tgatattggg attccagaac 180

ttgttatcac ccactatcca tctcttagcg gccacctcag tcaccggagc tgccgcaaga 240

aaagccagaa ccactgccgc agccatcaac gcaagtctag ccatagatca ctctagaaag 300

aaaaagaagc tcagtgcttg atgactctta gtcttatctc tcaagaaata gcagttttat 360

gagtgagtgg ggctgtttcc aagtcaaatc agacatacaa atttctcgtt ttacggggaa 420

aagatctctc aagatccgta atttcttcaa ctaacgtttg gaatcttatt actactttaa 480

tcaacctcga tgttgacgat gacgtacacg ttaattaaag gtacgcgtta tatagttaag 540

ggagtaatta gattttaact gctggcatta ttattatttt tctctggtta ttacattatt 600

ctgttttgta gtaatatttt ctcacctttt aggcgggaat ttatttccat tttcttcttt 660

caagggttca gagattcaat tcctttatta acatacgaaa tgagtatata gtatctttta 720

aatatttaaa taattaaaat aaaaataaat tactataaca gtgatacata tcaaaatttc 780

caaaactaat gtgagtactt atattagttg tacttcttag taaaataacg agatatgtta 840

tggctcgtcg catacagcaa agcagagcat atgttcccgc aataacatgc acacgcaact 900

gatagcacgt cgtaaccatt tccgcgaacc aaccaatgga tattgtaatt cgataagacg 960

acgtcgtgtt gttgaccacg aatatttctt aaatttcctt ttatcttttg tttttgacgt 1020

catgacattg gtttatgtcc acacgatatc agtcataaaa tccacgtagg aacgactatc 1080

cattacaccc atccacgtgt tctcataaca gcttctagtt ccattagctg aacgaacaat 1140

agaaacagag catcgaactg agaaagaaga agaagaaggg aagcaagaga aatggcggca 1200

gcggccatgg ccgttcatct cccgaaacat tcatcgtttc ttacgaaacc caagcatcca 1260

tccgatcaaa actctaactt tctcggtggg tccttaaagt tcggtcgatc catgtctcta 1320

aaccggaaaa ctaaaggtcc agttatggtt tcagctgctt cgaccgtcga aggcgatcga 1380

agcaaacagt tttacataaa cttcactgga ttcccatttc ctcttggtcc tttccttaac 1440

cggcgcacca tcagaaccga ggttaggctt tctccatccc tcttgagttt tgatttgaac 1500

tcgttgagaa tcccatatgg ataatgttat gcaggcggtt aaaggaagca tatggatgtt 1560

tgaacaagaa caagctttag gtttcagcag tgtctcaacg aatataagaa tgactgtcat 1620

caaactcaaa tccggtggct tatgggttca tgcccctatt gctcccacca aagagtgtat 1680

tcaggttccc tcttttattc attatcagta tcatcctttc ttatcatttg ataaattaac 1740

caatgtctaa actctatttt gggttgtttt gcttactttt tctttggggc agcttattga 1800

ggagttggga gctccggttg agtacatcgt cctaccaacc ttcgcttacg agcacaagat 1860

cttcgtcggt cccttctcta gaaagttccc caaggctcaa gtatgggtgg cgccaagaca 1920

atggagctgg ccactgaact taccactcga gtttttcggt atctttcgcg ctaaaaccat 1980

taaagacggt gacttgtcta ccccgtgggc tgatgagatc gagcagaaag tcttaagctc 2040

tcctgaagtc ggtacgttcc ttcactttct caatcttgtt ggccctcctt agccaagcct 2100

cataaaacat tcgcttcaac ccctcacccc acccaaattt tttgaaaaaa gttacatata 2160

catagcccca aatttattaa aaaaatctat tgaaatcttt attaaattat ctacgtcccc 2220

tagaatctga gggtcggccc tgtacttatg gaataaataa tatacaggaa ttggaccgta 2280

tgtggaagta gcgttctacc ataagcgttc aagaactcta ttagtcaccg acgctgtgat 2340

cttcgtccca aagaagccgc catcgagtat cagcagcgag tctttgctgg cttctgctaa 2400

gaacggactg gctgtgaaga tacttagcaa aggcaaacaa gtacctaatg accctgtcgt 2460

tgatacccca aacacccgcc aaaaaggtca gccatcagct tcttgaaatt caaattcatc 2520

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tctagtctat ctccaacagc ttagacaatt cttacattga atgcgttact gattgtcttt 3780

gacgtcattg cattcagcct gctttgggtg ctgatggaaa gagggtagaa actcagagca 3840

acgtcctact tgctttgatt gagaatatgc aatacgctgt cacacggtga ggaacaccat 3900

tatgcacgtt tctgcatctc agcatccttt catttctcaa aattaattat ttcctttgct 3960

tgtcataggt gttttccgct tatgggactg tgcagaagat tgcaatattt gagaaaaatg 4020

gttcaacgca agccttaatt caatactctg gtacatgacc ttgatgatct gaatacatat 4080

attattatac tatacttctt tcggttatat ggcgaatcat cttatgtgta tgctaagaat 4140

ttgaatagtc atcatttgct tcatgttccg ttttcttgat tcttctgtag acataccaac 4200

ggcgacaata gcgaaagaag cattggaggg acactgcata tatgacggga ggctactgta 4260

agcttcgact aacatactcg tcatactgat ctcaatgtaa aggtacgtaa gatcagttgc 4320

tttcttgatt tgtgcaccca aacaaaaaag cttggggaaa gagaataata acttatgtct 4380

gcaagaacca tatgctattt tttttctctt caacaattgt atgaaatctg aattcgactt 4440

tctagtttat tcaactagtg atttttcgtc ttctttcttc aggcatttag cgacaaaagc 4500

ggagactaca cactgcctga tctaagccaa ctggtgggcc aaaaggttcc aggagtggcc 4560

gctgctagtg ggccaacaga ttgttggcac aatgggcagg tgcagactca atacacaaga 4620

agttcatata tgtacccact gtaagcaaag gtactagatt ttgataaagc gcgagtttat 4680

ttttaatttt ttttcaattg acaaatattt agtaaatgtc atattttcat atatttgtgt 4740

tttattttat aaaagactta aactttttat ctttatttat cgtattttat tttaaatgac 4800

tatttatgtt taaaaaatta aactttattt ctttaatgaa ttaagttgat ataactctga 4860

taaattaatt ttattatgtg gttaatattt taattaaaaa aaattatata cttttaataa 4920

agatttgtat ttttcaatga aaaaattcaa ttttttttat gaatgcttaa attatattaa 4980

gaaaagaaaa ga 4992

<210> 7

<211> 448

<212> PRT

<213> 甘蓝

<400> 7

Met Ala Ala Ala Ala Met Ala Val His Leu Pro Lys His Ser Ser Phe

1 5 10 15

Leu Pro Asn Pro Lys Leu Pro Leu Asn Gln Asn Ser Asn Phe Leu Gly

20 25 30

Val Ser Leu Lys Ile Gly Arg Pro Met Ser Val Asn Arg Lys Met Lys

35 40 45

Gly Pro Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Val Glu Gly Asp Arg Ser

50 55 60

Lys Gln Phe Tyr Ile Asn Phe Thr Gly Phe Pro Phe Pro Leu Gly Pro

65 70 75 80

Phe Leu Asn Arg Arg Thr Ile Arg Thr Glu Ala Val Lys Gly Ser Ile

85 90 95

Trp Met Phe Glu Gln Glu Gln Ala Leu Gly Phe Ser Ser Val Ser Thr

100 105 110

Asn Ile Arg Met Thr Val Ile Arg Leu Lys Ser Gly Gly Leu Trp Val

115 120 125

His Ala Pro Ile Ala Pro Thr Lys Glu Cys Ile Gln Leu Ile Glu Glu

130 135 140

Leu Gly Ala Pro Val Glu Tyr Ile Val Leu Pro Thr Phe Ala Tyr Glu

145 150 155 160

His Lys Ile Phe Val Gly Pro Phe Ser Arg Lys Phe Pro Lys Ala Gln

165 170 175

Val Trp Val Ala Pro Arg Gln Trp Ser Trp Pro Leu Asn Leu Pro Leu

180 185 190

Glu Phe Phe Gly Ile Phe Arg Ala Lys Thr Ile Lys Asp Gly Asp Leu

195 200 205

Ser Thr Pro Trp Ala Asp Glu Ile Glu Gln Lys Val Leu Ser Ser Pro

210 215 220

Glu Val Gly Ile Gly Pro Tyr Val Glu Val Ala Phe Tyr His Lys Arg

225 230 235 240

Ser Arg Thr Leu Leu Val Thr Asp Ala Val Ile Phe Val Pro Arg Lys

245 250 255

Pro Pro Ser Ser Ile Ser Ser Glu Ser Leu Leu Ala Ser Ala Lys Asn

260 265 270

Gly Leu Ala Val Lys Ile Leu Ser Lys Gly Lys Gln Val Pro Asp Asp

275 280 285

Pro Val Val Asp Thr Pro Asn Thr Arg Gln Lys Gly Trp Glu Arg Met

290 295 300

Val Leu Gln Ile Leu Phe Leu Gly Pro Ser Asn Leu Leu Glu Pro Asn

305 310 315 320

Ala Ser Phe Ala Gln Met Ser Gln Lys Leu Ile Val Ser Pro Ile Val

325 330 335

Lys Thr Leu Val Phe Ser Lys Val Pro Glu Lys Val Arg Asp Trp Ile

340 345 350

Asp Glu Ile Ala Ser Asp Trp Arg Phe Lys Arg Ile Ile Pro Ala His

355 360 365

Phe Glu Ala Pro Val Asn Ala Gly Arg Ser Glu Phe Leu Ala Ala Phe

370 375 380

Gly Phe Leu Asp Asp Leu Leu Gly Glu Arg Tyr Val Asn Arg Pro Pro

385 390 395 400

Ser Leu Ser Val Leu Phe Thr Ser Leu Met Gly Lys Ala Ala Ser Tyr

405 410 415

Phe Pro Pro Asp Asp Met Arg Thr Leu Ser Ser Leu Asp Gln Phe Leu

420 425 430

Val Ser Val Gly Ala Val Lys Lys Thr Val Ser Gly Arg Lys Arg Arg

435 440 445

<210> 8

<211> 395

<212> PRT

<213> 甘蓝

<400> 8

Met Ala Ser Ser Gln Phe Arg Tyr Thr Gln Thr Pro Ser Lys Val Val

1 5 10 15

His Leu Arg Asn Leu Pro Trp Glu Cys Val Glu Glu Glu Leu Ile Asp

20 25 30

Leu Cys Lys Arg Phe Gly Lys Ile Val Asn Thr Lys Thr Asn Val Gly

35 40 45

Ala Asn Arg Asn Gln Ala Phe Val Glu Phe Gly Asp Val Asn Gln Ala

50 55 60

Ile Ser Met Val Ser Tyr Tyr Ala Ser Ser Ser Glu Pro Ala Gln Ile

65 70 75 80

Arg Gly Lys Thr Val Tyr Ile Gln Tyr Ser Asn Arg His Glu Ile Val

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Asn Asn Gln Ser Pro Gly Glu Val Pro Gly Asn Val Leu Leu Val Thr

100 105 110

Phe Glu Gly Val Gln Ser His His Val Cys Ile Asp Val Ile His Leu

115 120 125

Val Phe Ser Ala Tyr Gly Phe Val His Lys Ile Ala Thr Phe Glu Lys

130 135 140

Ala Ala Gly Phe Gln Ala Leu Val Gln Phe Thr Asp Val Asp Thr Ala

145 150 155 160

Leu Ala Ala Arg Thr Ala Leu Asp Gly Arg Ser Ile Pro Lys Tyr Leu

165 170 175

Leu Pro Glu His Val Gly Ser Cys Asn Leu Arg Met Ser Tyr Ser Ala

180 185 190

His Thr Asp Leu Asn Ile Lys Phe Gln Ser His Arg Ser Arg Asp Tyr

195 200 205

Thr Asn Pro Tyr Leu Pro Val Asn Gln Thr Ala Met Asp Gly Ser Met

210 215 220

Gln Pro Ala Leu Gly Ala Asp Gly Lys Arg Val Glu Thr Gln Ser Asn

225 230 235 240

Val Leu Leu Ala Leu Ile Glu Asn Met Gln Tyr Ala Val Thr Val Asp

245 250 255

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260 265 270

Ile Phe Glu Lys Asn Gly Ser Thr Gln Ala Leu Ile Gln Tyr Ser Asp

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Tyr Asp Gly Gly Tyr Cys Lys Leu Arg Leu Thr Tyr Ser Arg His Thr

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Asp Leu Asn Val Lys Ala Phe Ser Asp Lys Ser Arg Asp Tyr Thr Leu

325 330 335

Pro Asp Leu Ser Gln Leu Val Gly Gln Lys Val Pro Gly Val Ala Ala

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Ala Ser Gly Pro Thr Asp Gly Trp Pro Asn Gly Gln Val Gln Thr Gln

355 360 365

Tyr Met Gly Ser Ser Tyr Met Tyr Pro Pro Ala Asp Pro Thr Gly Ala

370 375 380

Ser Pro Ser Ser Gly His Pro Pro Tyr Tyr Gly

385 390 395

<210> 9

<211> 448

<212> PRT

<213> 甘蓝

<400> 9

Met Ala Ala Ala Ala Met Ala Val His Leu Pro Lys His Ser Ser Phe

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Leu Thr Lys Pro Lys His Pro Ser Asp Gln Asn Ser Asn Phe Leu Gly

20 25 30

Gly Ser Leu Lys Phe Gly Arg Ser Met Ser Leu Asn Arg Lys Thr Lys

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Gly Pro Val Met Val Ser Ala Ala Ser Thr Val Glu Gly Asp Arg Ser

50 55 60

Lys Gln Phe Tyr Ile Asn Phe Thr Gly Phe Pro Phe Pro Leu Gly Pro

65 70 75 80

Phe Leu Asn Arg Arg Thr Ile Arg Thr Glu Ala Val Lys Gly Ser Ile

85 90 95

Trp Met Phe Glu Gln Glu Gln Ala Leu Gly Phe Ser Ser Val Ser Thr

100 105 110

Asn Ile Arg Met Thr Val Ile Lys Leu Lys Ser Gly Gly Leu Trp Val

115 120 125

His Ala Pro Ile Ala Pro Thr Lys Glu Cys Ile Gln Leu Ile Glu Glu

130 135 140

Leu Gly Ala Pro Val Glu Tyr Ile Val Leu Pro Thr Phe Ala Tyr Glu

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His Lys Ile Phe Val Gly Pro Phe Ser Arg Lys Phe Pro Lys Ala Gln

165 170 175

Val Trp Val Ala Pro Arg Gln Trp Ser Trp Pro Leu Asn Leu Pro Leu

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Glu Phe Phe Gly Ile Phe Arg Ala Lys Thr Ile Lys Asp Gly Asp Leu

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Ser Thr Pro Trp Ala Asp Glu Ile Glu Gln Lys Val Leu Ser Ser Pro

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Glu Val Gly Ile Gly Pro Tyr Val Glu Val Ala Phe Tyr His Lys Arg

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Ser Arg Thr Leu Leu Val Thr Asp Ala Val Ile Phe Val Pro Lys Lys

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Pro Pro Ser Ser Ile Ser Ser Glu Ser Leu Leu Ala Ser Ala Lys Asn

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Gly Leu Ala Val Lys Ile Leu Ser Lys Gly Lys Gln Val Pro Asn Asp

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Pro Val Val Asp Thr Pro Asn Thr Arg Gln Lys Gly Trp Glu Arg Met

290 295 300

Val Leu Gln Ile Leu Phe Leu Gly Pro Ser Asn Leu Leu Glu Pro Asn

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Ala Ser Phe Ala Gln Met Ser Gln Lys Leu Ile Val Ser Pro Ile Val

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Lys Thr Leu Val Phe Ser Lys Val Pro Glu Lys Val Arg Asp Trp Ile

340 345 350

Asp Glu Ile Ala Ser Asp Trp Arg Phe Lys Arg Ile Ile Pro Ala His

355 360 365

Phe Glu Ala Pro Ile Asn Ala Gly Arg Ser Glu Phe Leu Ala Ala Phe

370 375 380

Gly Phe Leu Asp Asp Leu Leu Gly Glu Arg Tyr Val Asn Arg Pro Pro

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Ser Leu Ser Val Leu Phe Thr Ser Leu Met Gly Lys Ala Ala Ser Tyr

405 410 415

Phe Pro Pro Asp Asp Met Arg Thr Leu Ser Ser Leu Asp Gln Phe Leu

420 425 430

Val Ser Val Gly Ala Val Lys Lys Thr Val Ser Gly Arg Lys Arg Arg

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<210> 10

<211> 395

<212> PRT

<213> 甘蓝

<400> 10

Met Ala Ser Ser Gln Phe Arg Tyr Thr Gln Thr Pro Ser Lys Val Val

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His Leu Arg Asn Leu Pro Trp Glu Cys Val Glu Glu Glu Leu Ile Asp

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Leu Cys Lys Arg Phe Gly Lys Ile Val Asn Thr Lys Thr Asn Val Gly

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Ala Asn Arg Asn Gln Ala Phe Val Glu Phe Gly Asp Val Asn Gln Ala

50 55 60

Ile Ser Met Val Ser Tyr Tyr Ala Ser Ser Ser Glu Pro Ala Gln Ile

65 70 75 80

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Asn Asn Gln Ser Pro Gly Glu Val Pro Gly Asn Val Leu Leu Val Thr

100 105 110

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115 120 125

Val Phe Ser Ala Tyr Gly Phe Val His Lys Ile Ala Thr Phe Glu Lys

130 135 140

Ala Ala Gly Phe Gln Ala Leu Val Gln Phe Thr Asp Val Asp Thr Ala

145 150 155 160

Leu Ala Ala Arg Thr Ala Leu Asp Gly Arg Ser Ile Pro Lys Tyr Leu

165 170 175

Leu Pro Glu His Val Gly Ser Cys Asn Leu Arg Met Ser Tyr Ser Ala

180 185 190

His Thr Asp Leu Asn Ile Lys Phe Gln Ser His Arg Ser Arg Asp Tyr

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Thr Asn Pro Tyr Leu Pro Val Asn Gln Thr Ala Met Asp Gly Ser Met

210 215 220

Gln Pro Ala Leu Gly Ala Asp Gly Lys Arg Val Glu Thr Gln Ser Asn

225 230 235 240

Val Leu Leu Ala Leu Ile Glu Asn Met Gln Tyr Ala Val Thr Val Asp

245 250 255

Val Leu His Thr Val Phe Ser Ala Tyr Gly Thr Val Gln Lys Ile Ala

260 265 270

Ile Phe Glu Lys Asn Gly Ser Thr Gln Ala Leu Ile Gln Tyr Ser Asp

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Tyr Asp Gly Gly Tyr Cys Lys Leu Arg Leu Thr Tyr Ser Arg His Thr

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Asp Leu Asn Val Lys Ala Phe Ser Asp Lys Ser Arg Asp Tyr Thr Leu

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Pro Asp Leu Ser Gln Leu Val Gly Gln Lys Val Pro Gly Val Ala Ala

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Ala Ser Gly Pro Thr Asp Gly Trp Pro Asn Gly Gln Val Gln Thr Gln

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Tyr Met Gly Ser Ser Tyr Met Tyr Pro Pro Ala Asp Pro Thr Gly Ala

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Ser Pro Ser Ser Gly His Pro Pro Tyr Tyr Gly

385 390 395

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<211> 326

<212> PRT

<213> 甘蓝

<400> 11

Met Ala Ser Ser Ser Gln Phe Arg Tyr Thr Gln Thr Pro Ser Lys Val

1 5 10 15

Val His Leu Arg Asn Leu Pro Trp Glu Cys Val Glu Glu Glu Leu Ile

20 25 30

Asp Leu Cys Lys Arg Phe Gly Lys Ile Val Asn Thr Lys Thr Asn Val

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Gly Ala Asn Arg Asn Gln Ala Phe Val Glu Phe Gly Asp Val Asn Gln

50 55 60

Ala Ile Ser Met Val Ser Tyr Tyr Ala Ser Ser Ser Glu Pro Ala Gln

65 70 75 80

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Val Asn Asn Gln Ser Pro Gly Glu Val Pro Gly Asn Val Leu Leu Val

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Thr Phe Glu Gly Val Gln Ser His His Val Cys Ile Asp Val Ile His

115 120 125

Leu Val Phe Ser Ala Tyr Gly Phe Val His Lys Ile Ala Thr Phe Glu

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Lys Ala Ala Gly Phe Gln Ala Leu Val Gln Phe Thr Asp Val Asp Thr

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Ala Leu Ala Ala Arg Thr Ala Leu Asp Gly Arg Ser Ile Pro Thr Tyr

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Leu Leu Pro Glu His Val Gly Ser Cys Asn Leu Arg Met Ser Tyr Ser

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Ala His Thr Asp Leu Asn Ile Lys Phe Gln Ser His Arg Ser Arg Asp

195 200 205

Tyr Thr Asn Pro Tyr Leu Pro Val Asn Gln Thr Ala Met Asp Gly Ser

210 215 220

Met Gln Val Phe Ser Ala Tyr Gly Thr Val Gln Lys Ile Ala Ile Phe

225 230 235 240

Glu Lys Asn Gly Ser Thr Gln Ala Leu Ile Gln Tyr Ser Asp Ile Pro

245 250 255

Thr Ala Thr Ile Ala Lys Glu Ala Leu Glu Gly His Cys Ile Tyr Asp

260 265 270

Gly Arg Leu Leu Asp Lys Ser Gly Asp Tyr Thr Leu Pro Asp Leu Ser

275 280 285

Gln Leu Val Gly Gln Lys Val Pro Gly Val Ala Ala Ala Ser Gly Pro

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Thr Asp Cys Trp His Asn Gly Gln Val Gln Thr Gln Tyr Thr Arg Ser

305 310 315 320

Ser Tyr Met Tyr Pro Leu

325

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<212> PRT

<213> 甘蓝

<400> 12

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1 5 10 15

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Asp Leu Cys Lys Arg Phe Gly Lys Ile Val Asn Thr Lys Thr Asn Val

35 40 45

Gly Ala Asn Arg Asn Gln Ala Phe Val Glu Phe Gly Asp Val Asn Gln

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180 185 190

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195 200 205

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Met Gln Val Phe Ser Ala Tyr Gly Thr Val Gln Lys Ile Ala Ile Phe

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Glu Lys Asn Gly Ser Thr Gln Ala Leu Ile Gln Tyr Ser Asp Ile Pro

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Thr Ala Thr Ile Ala Lys Glu Ala Leu Glu Gly His Cys Ile Tyr Asp

260 265 270

Gly Arg Leu Leu Asp Lys Ser Gly Asp Tyr Thr Leu Pro Asp Leu Ser

275 280 285

Gln Leu Val Gly Gln Lys Val Pro Gly Val Ala Ala Ala Ser Gly Pro

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Thr Asp Cys Trp His Asn Gly Gln Val Gln Thr Gln Tyr Thr Arg Ser

305 310 315 320

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325

<210> 13

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> At3g01190 正向引物

<400> 13

ttcttccacg actgcttcg 19

<210> 14

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> At3g01190 反向引物

<400> 14

ctaacaaaac tgatccgtca c 21

<210> 15

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> At3g02420 正向引物

<400> 15

gttgcgttgc catctgcag 19

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> At3g02420 反向引物

<400> 16

caggctgaga tagccattgg 20

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> At3g07130 正向引物

<400> 17

ctactaacca tggagttacc 20

<210> 18

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> At3g07130 反向引物

<400> 18

aacgctggtg ggattcac 18

Claims

1.一种多核苷酸，特别地一种分离的多核苷酸，其由选自下组的核酸分子组成，该组由以下各项组成：

a.由在SEQ ID NO:4或6中所描述的核苷酸序列组成的核酸分子；

b.由由于遗传密码的简并性而偏离在a)之中所定义的核苷酸序列的核苷酸序列组成的核酸分子；

其中在芸苔属植物或植物部分中表达后，在a)或b)之中所定义的所述核酸分子导致增加的种子活力。

2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中该增加的种子活力表型由在下组中选择的另外的表型来表征，该组包括：增加的萌发速度、增加的出苗速度、增加的种子萌发百分比或降低的ABA含量。

3.一种表达盒，其包含以上权利要求中任一项所述的多核苷酸。

4.一种载体分子，其包含根据权利要求3所述的表达盒。

5.根据权利要求1所述的多核苷酸用于增加种子活力的用途。

6.一种用于增加种子活力的方法，该方法包括：通过杂交或通过植物转化技术将权利要求1至4中任一项所述的多核苷酸、表达盒或载体分子渗入芸苔属植物或植物部分中并在其中表达。

7.一种用于产生具有增加的种子活力的芸苔属种子的方法，该方法包括：

a.获得第一芸苔属植物，该第一芸苔属植物被证实包含权利要求1或2所述的多核苷酸；

b.使所述第一芸苔属植物与被证实缺乏所述多核苷酸的第二芸苔属植物杂交；并且

c.鉴定从该杂交中得到的芸苔属植物种子，该植物种子展现出相比于由该第二芸苔属植物所产生的芸苔属种子而言增加的种子活力。

8.一种用于选择具有增加的种子活力的芸苔属植物或植物部分的方法，该方法包括在待测的芸苔属植物或植物部分中检测存在或不存在根据权利要求1或2所述的多核苷酸。

9.一种用于获得具有增加的种子活力的芸苔属植物或植物部分的非生物方法，该方法包括将根据权利要求1或2所述的多核苷酸引入所述芸苔属植物或植物部分的基因组中。

10.根据权利要求8所述的方法，该方法包括(a)获得被证实包含权利要求1或2所述的多核苷酸的第一芸苔属植物；(b)使所述第一芸苔属植物与被证实缺乏所述多核苷酸的第二芸苔属植物杂交；并且(c)鉴定从该杂交中得到的、展现出增加的种子活力的并包含所述多核苷酸的芸苔属植物。

11.根据权利要求10所述的方法，其中该多核苷酸的存在是通过使用分子标记，特别地通过在物理上位于在包含该多核苷酸的遗传基因座的内部或外部的位置处的分子标记，来证实的。

12.根据权利要求10所述的方法，其中该多核苷酸的存在是通过使用至少两个分子标记，特别地通过至少两个在物理上位于在包含该多核苷酸的遗传基因座的侧翼的位置处的分子标记，来证实的。