CN108041099A - 一种农药增效剂 - Google Patents

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Abstract

本发明属于农药技术领域，特别涉及一种农药增效剂。本发明从重楼中提取有效活性菌株进行发酵，得到发酵产物，重楼中主要含有甾醇类、脂肪类、氨基酸类、皂苷类的活性物质，放线菌能与重楼形成比较亲密的关系，能繁殖于重楼内部组织，大量的放线菌共生或是寄生在大量的植物中，通过对具有特定药用价值的重楼内生放线菌进行分离和筛选，可以提取与药用植物的药用成分相似的活性物质，一方面抗菌活性物质对害虫和植物病原菌具有抑制和杀灭作用，高效、低毒、环保，另一方面可以辅助农药的施用，减少农药的用量，改善农业生态系统，保持植物微生态系统的生物多样性，以及维护农田生态平衡实现农业可持续发展将起到重要作用。

Description

一种农药增效剂
技术领域
本发明属于农药技术领域，特别涉及一种农药增效剂。
背景技术
农业的发展离不开农药，但农药在给农业发展做出重大贡献的同时，也给自然环境带来了危害。近年来，由于化学农药的滥用，增加了害虫的抗药性，导致农药用量和次数不断增加，进一步加剧了环境污染和生态破坏，造成了恶性循环，严重危害了人类的生活与健康。
在农药的施用过程中使用各种增效剂，提高农药喷洒过程中的利用率、提高药效、减少农药的使用量亦是一种现实可行的解决方法。
农药增效剂即添加在农药里的一种助剂，其本身没有杀虫、抗菌等农药活性，但其可以通过降低农药的表面张力、增加农药的渗透力或附着力、药效协同等作用，达到提高农药单位面积的防效，减少农药用量的目的。农药增效剂的使用是农药高效减量施用技术的重要方法，是目前降低农民用药成本，减缓害虫抗性，减少环境污染的重要手段之一。
农药增效剂本身对害虫无毒杀作用，但与农药混配使用，能提高杀虫效果，降低用药成本，减缓农药抗性，减少环境污染，表面活性剂能增加农药对昆虫及植物的湿润性和粘附性。昆虫及植物由于自身的保护作用，其表层均有一层蜡质保护层，一般的农药液不易湿润及粘附在上面，添加表面活性剂后，可大幅度增加对蜡质层的湿润及粘附；增加农药对昆虫细胞壁的渗透能力，增加触杀效果。
目前农药增效剂的品种，主要有增效胺、增效醚、增效磷、增效砜、二甲基二氧苯衍生物、八氯二丙醚等化学合成增效剂，增效效果略低，且其均采用石油化工原料制成，产品毒性较大，对人体与环境有害。
因此，我们有必要重新的研制出一种可以有效减少农药用量，且可以高效增加农药效力的农药增效剂，以此来解决现如今的市场上的农药行业所存在的问题，更好的促进社会与有关行业的需求。
发明内容
本发明所要解决的技术问题：针对目前农药增效剂使用效率低，稳定性差的问题，提供一种农药增效剂。
为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：
一种农药增效剂，按质量份数计，包括20~30份农药增效剂增效助剂A，7~9份农药增效剂增效助剂B，15~20份农药增效剂增效助剂C，5~8份农药增效剂增效助剂D。
所述农药增效剂增效助剂A是将预处理重楼研磨粉碎，按质量比1：9加入生理盐水，超声15~20min，涂布接种至重楼分离培养基中，25~28℃培养3~4周，挑取菌丝划线接种至纯化培养基上，于25~28℃培养3~5d，重复划线接种2~3次，得纯化菌株，挑取纯化菌株接种至TSB培养基中活化，26~28℃、250r/min培养3~5d，得种子液，将种子液按5%的接种量接于发酵培养基，25~30℃、250 r/min下培养5~7d，6000 r/min下离心20 min，取上清液按体积比 1:1 加入乙酸乙酯萃取2~3次，旋转蒸发，得农药增效剂增效助剂A。
所述预处理重楼是取重楼洗净，将根茎剪为2~3cm的片段，20~25℃干燥2~3h，用质量分数为0.1%吐温-20先浸泡20~30s，质量分数为5%的次氯酸钠溶液再冲洗6 ~7min，无菌水清洗3~4次，即得预处理重楼。
所述重楼分离培养基：按质量份数计，取纤维素2~3份，丙酮酸钠2~3份，脯氨酸0.8~1.2份，硝酸钾0.1~0.25份， MgSO4·7H2O 0.1~0.3份，K2HPO40.2~0.4份，CaCl2 0.5~0.8份，FeSO4·7H2O 0.01~0.02份，琼脂15~20份，水1000份，pH7.2~7.4，121℃灭菌20min；纯化培养基：按质量份数计，取葡萄糖4~6份 ，酵母膏3~5份，麦芽膏5~8份，质量分数0.1%的NaCl溶液1~2份，琼脂15~20份，双蒸水1000份，pH 7.2~7.5，121℃灭菌20min；发酵培养基：按质量份数计，取蔗糖50~60份，葡萄糖10~12份，酪蛋白氨基酸0.1~0.3份，酵母膏5~8份，硫酸钾0.2~0.5份，3-吗啉丙磺酸18~22份，微量元素0.8~1.5份，氯化镁10~12份，水1000份，pH 7.0~7.2，121℃灭菌20min。
所述农药增效剂增效助剂B是取粗竹酢液原液自然放置6~7个月，取上层清液，取上层清液于80~85℃、0.09Pa真空旋转蒸发，减压蒸馏2~3 h，取蒸馏液按质量比1：8加入丙酮萃取，取萃取液减压蒸馏回收丙酮，得农药增效剂增效助剂B。
所述农药增效剂增效助剂C是取 PEG-2000按质量比1：80~100：100加入浓度为0.1mol/L的氯化钙溶液和浓度为0.10 mol/L的碳酸钠溶液，于23~27℃陈化12~13h，过滤，取沉淀用蒸馏水和乙醇分别洗涤3次，真空干燥，得干燥物，取干燥物按质量比1：180~200：33~35加入无水乙醇和蒸馏水，超声分散10 min，于20~25℃加入水质量60~70%的氨水，得混合液A，将正硅酸乙酯按质量比1：9加入无水乙醇混合均匀，得混合液B，取混合液A按质量比6~7：1加入混合液B，得混合液，取混合液按质量比2：20：1加入蒸馏水和橄榄油，超声2~4 min，得农药增效剂增效助剂C。
所述农药增效剂增效助剂D是取白沙蒿干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒按质量比1：100加入水，置于反应釜中，通入CO2，于50~55℃、25~30MPa提取3~3.5h，加入石油醚萃取，旋转蒸发回收石油醚溶剂，得萃取物，即农药增效剂增效助剂D。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
1.本发明从重楼中提取有效活性菌株进行发酵，得到发酵产物，重楼中主要含有甾醇类、脂肪类、氨基酸类、皂苷类的活性物质，放线菌能与重楼形成比较亲密的关系，能繁殖于重楼内部组织，大量的放线菌共生或是寄生在大量的植物中，通过对具有特定药用价值的重楼内生放线菌进行分离和筛选，可以提取与药用植物的药用成分相似的活性物质，一方面抗菌活性物质对害虫和植物病原菌具有抑制和杀灭作用，高效、低毒、环保，另一方面可以辅助农药的施用，减少农药的用量，改善农业生态系统，保持植物微生态系统的生物多样性，以及维护农田生态平衡实现农业可持续发展将起到重要作用；
2.本发明通过对粗竹酢液进行提取，其中含有多种胺类等有机物质，对大量元素和铜、铁、锌、锰等微量元素的亲和交换能力、促进电离子传导和提高生物氧化还原能力，有改善植物组织的渗透性和吸收性等生理特点，以醋酸为主的各种有机酸也可以溶解各种物质，提高植物吸收的有效性，具有增加叶绿素，改善光合作用，提高叶对病害的抵抗能力，控制线虫、病原菌与病毒，以及显著促进植物的发芽和生长的作用；有机酸通过溶解、鳌合等作用，直接提高了土壤养分的有效性，改善土壤的养分状况，与农药联合使用则具有良好的增效作用；
3.本发明通过固体粒子稳定剂和相应的油水体系制备一种稳定型的乳液，其大量的分散相液滴本身就可以作为农药的储存场所，固体粒子形成的界面膜也具有一定的保护和缓释作用，另一方面，以乳液为模板，利用界面聚合法将固体或液体原药包覆于天然或合成高分子壁材中形成半透性的微容器，形成农药微胶囊形式，以起到延长药效，防止有效成分挥发，防止飘逸，减小环境污染等作用；
4.本发明提取白沙蒿活性物质，作为促渗物质，可以增加害虫、杂草与农药的接触机会，本身还能起到溶剂的作用，帮助溶解原药，改善农药的使用性能，具有破坏昆虫体壁结构，溶解体表角质层，有利于农药的穿透，促进农药组分的渗透、吸收、转运和进入气孔等的能力，提高了农药的使用效率。
具体实施方式
重楼采集及消毒：取重楼洗净，将根茎剪为2~3cm的片段，20~25℃干燥2~3h，用质量分数为0.1%吐温-20先浸泡20~30s，质量分数为5%的次氯酸钠溶液再冲洗6 ~7min，无菌水清洗3~4次，即得预处理重楼。
重楼分离培养基：按质量份数计，取纤维素2~3份，丙酮酸钠2~3份，脯氨酸0.8~1.2份，硝酸钾0.1~0.25份， MgSO4·7H2O 0.1~0.3份，K2HPO40.2~0.4份，CaCl2 0.5~0.8份，FeSO4·7H2O 0.01~0.02份，琼脂15~20份，水1000份，pH7.2~7.4，121℃灭菌20min。
纯化培养基：按质量份数计，取葡萄糖4~6份 ，酵母膏3~5份，麦芽膏5~8份，质量分数0.1%的NaCl溶液1~2份，琼脂15~20份，双蒸水1000份，pH 7.2~7.5，121℃灭菌20min。
发酵培养基：按质量份数计，取蔗糖50~60份，葡萄糖10~12份，酪蛋白氨基酸0.1~0.3份，酵母膏5~8份，硫酸钾0.2~0.5份，3-吗啉丙磺酸18~22份，微量元素0.8~1.5份，氯化镁10~12份，水1000份，pH 7.0~7.2，121℃灭菌20min。
粗竹酢原液：取自竹材加工厂，竹材经烧制热解后，收集粗竹酢原液。
农药增效剂增效助剂A是将预处理重楼研磨粉碎，按质量比1：9加入生理盐水，超声15~20min，涂布接种至重楼分离培养基中，25~28℃培养3~4周，挑取菌丝划线接种至培养基上，于25~28℃培养3~5d，重复划线接种2~3次，得纯化菌株，挑取纯化菌株接种至TSB培养基中活化，26~28℃、250r/min培养3~5d，得种子液，将种子液按5%的接种量接于发酵培养基，25~30℃、250 r/min下培养5~7d，6000 r/min下离心20 min，取上清液按体积比 1:1 加入乙酸乙酯萃取2~3次，旋转蒸发，得农药增效剂增效助剂A。
农药增效剂增效助剂B是取粗竹酢液原液自然放置6~7个月，取上层清液，取上层清液于80~85℃、0.09Pa真空旋转蒸发，减压蒸馏2~3 h，取蒸馏液按质量比1：8加入丙酮萃取，取萃取液减压蒸馏回收丙酮，得农药增效剂增效助剂B。
农药增效剂增效助剂C是取 PEG-2000按质量比1：80~100：100加入浓度为0.10mol/L的氯化钙溶液和浓度为0.1 mol/L的碳酸钠溶液，于23~27℃陈化12~13h，过滤，取沉淀用蒸馏水和乙醇分别洗涤3次，真空干燥，得干燥物，取干燥物按质量比1：180~200：33~35加入无水乙醇和蒸馏水，超声分散10 min，于20~25℃加入水质量60~70%的氨水，得混合液A，将正硅酸乙酯按质量比1：9加入无水乙醇混合均匀，得混合液B，取混合液A按质量比6~7：1加入混合液B，得混合液，取混合液按质量比2：20：1加入蒸馏水和橄榄油，超声2~4 min，得农药增效剂增效助剂C。
农药增效剂增效助剂D是取白沙蒿干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒按质量比1：100加入水，置于反应釜中，通入CO2，于50~55℃、25~30MPa提取3~3.5h，加入石油醚萃取，旋转蒸发回收石油醚溶剂，得萃取物，即农药增效剂增效助剂D。
一种农药增效剂，按质量份数计，包括20~30份农药增效剂增效助剂A，7~9份农药增效剂增效助剂B，15~20份农药增效剂增效助剂C，5~8份农药增效剂增效助剂D。
实施例1
重楼采集及消毒：取重楼洗净，将根茎剪为2cm的片段，20℃干燥2h，用质量分数为0.1%吐温-20先浸泡20s，质量分数为5%的次氯酸钠溶液再冲洗6 min，无菌水清洗3次，即得预处理重楼。
重楼分离培养基：按质量份数计，取纤维素2份，丙酮酸钠2份，脯氨酸0.8份，硝酸钾0.1份， MgSO4·7H2O 0.1份，K2HPO40.2份，CaCl2 0.5份，FeSO4·7H2O 0.01份，琼脂15份，水1000份，pH7.2，121℃灭菌20min。
纯化培养基：按质量份数计，取葡萄糖4份 ，酵母膏3份，麦芽膏5份，质量分数0.1%的NaCl溶液1份，琼脂15份，双蒸水1000份，pH 7.2，121℃灭菌20min。
发酵培养基：按质量份数计，取蔗糖50份，葡萄糖10份，酪蛋白氨基酸0.1份，酵母膏5份，硫酸钾0.2份，3-吗啉丙磺酸18份，微量元素0.8份，氯化镁10份，水1000份，pH 7.0，121℃灭菌20min。
粗竹酢原液：取自竹材加工厂，竹材经烧制热解后，收集粗竹酢原液。
农药增效剂增效助剂A是将预处理重楼研磨粉碎，按质量比1：9加入生理盐水，超声15min，涂布接种至重楼分离培养基中，25℃培养3周，挑取菌丝划线接种至培养基上，于25℃培养3d，重复划线接种2次，得纯化菌株，挑取纯化菌株接种至TSB培养基中活化，26℃、250r/min培养3d，得种子液，将种子液按5%的接种量接于发酵培养基，25℃、250 r/min下培养5d，6000 r/min下离心20 min，取上清液按体积比 1:1 加入乙酸乙酯萃取2次，旋转蒸发，得农药增效剂增效助剂A。
农药增效剂增效助剂B是取粗竹酢液原液自然放置6个月，取上层清液，取上层清液于80℃、0.09Pa真空旋转蒸发，减压蒸馏2 h，取蒸馏液按质量比1：8加入丙酮萃取，取萃取液减压蒸馏回收丙酮，得农药增效剂增效助剂B。
农药增效剂增效助剂C是取 PEG-2000按质量比1：80：100加入浓度为0.10 mol/L的氯化钙溶液和浓度为0.1 mol/L的碳酸钠溶液，于23℃陈化12h，过滤，取沉淀用蒸馏水和乙醇分别洗涤3次，真空干燥，得干燥物，取干燥物按质量比1：180：33加入无水乙醇和蒸馏水，超声分散10 min，于20℃加入水质量60%的氨水，得混合液A，将正硅酸乙酯按质量比1：9加入无水乙醇混合均匀，得混合液B，取混合液A按质量比6：1加入混合液B，得混合液，取混合液按质量比2：20：1加入蒸馏水和橄榄油，超声2 min，得农药增效剂增效助剂C。
农药增效剂增效助剂D是取白沙蒿干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒按质量比1：100加入水，置于反应釜中，通入CO2，于50℃、25MPa提取3h，加入石油醚萃取，旋转蒸发回收石油醚溶剂，得萃取物，即农药增效剂增效助剂D。
一种农药增效剂，按质量份数计，包括20份农药增效剂增效助剂A，7份农药增效剂增效助剂B，15份农药增效剂增效助剂C，5份农药增效剂增效助剂D。
实施例2
重楼采集及消毒：取重楼洗净，将根茎剪为2cm的片段，22℃干燥2h，用质量分数为0.1%吐温-20先浸泡25s，质量分数为5%的次氯酸钠溶液再冲洗6 min，无菌水清洗3次，即得预处理重楼。
重楼分离培养基：按质量份数计，取纤维素2份，丙酮酸钠2份，脯氨酸1.0份，硝酸钾0.2份， MgSO4·7H2O 0.2份，K2HPO40.3份，CaCl2 0.6份，FeSO4·7H2O 0.012份，琼脂17份，水1000份，pH7.3，121℃灭菌20min。
纯化培养基：按质量份数计，取葡萄糖5份 ，酵母膏4份，麦芽膏6份，质量分数0.1%的NaCl溶液1份，琼脂17份，双蒸水1000份，pH 7.3，121℃灭菌20min。
发酵培养基：按质量份数计，取蔗糖55份，葡萄糖11份，酪蛋白氨基酸0.2份，酵母膏7份，硫酸钾0.3份，3-吗啉丙磺酸20份，微量元素1.2份，氯化镁11份，水1000份，pH 7.1，121℃灭菌20min。
粗竹酢原液：取自竹材加工厂，竹材经烧制热解后，收集粗竹酢原液。
农药增效剂增效助剂A是将预处理重楼研磨粉碎，按质量比1：9加入生理盐水，超声15~20min，涂布接种至重楼分离培养基中，27℃培养3周，挑取菌丝划线接种至培养基上，于27℃培养4d，重复划线接种2次，得纯化菌株，挑取纯化菌株接种至TSB培养基中活化，27℃、250r/min培养4d，得种子液，将种子液按5%的接种量接于发酵培养基，28℃、250 r/min下培养6d，6000 r/min下离心20 min，取上清液按体积比 1:1 加入乙酸乙酯萃取2次，旋转蒸发，得农药增效剂增效助剂A。
农药增效剂增效助剂B是取粗竹酢液原液自然放置6个月，取上层清液，取上层清液于82℃、0.09Pa真空旋转蒸发，减压蒸馏2 h，取蒸馏液按质量比1：8加入丙酮萃取，取萃取液减压蒸馏回收丙酮，得农药增效剂增效助剂B。
农药增效剂增效助剂C是取 PEG-2000按质量比1：90：100加入浓度为0.10 mol/L的氯化钙溶液和浓度为0.1 mol/L的碳酸钠溶液，于24℃陈化12h，过滤，取沉淀用蒸馏水和乙醇分别洗涤3次，真空干燥，得干燥物，取干燥物按质量比1：190：34加入无水乙醇和蒸馏水，超声分散10 min，于23℃加入水质量65%的氨水，得混合液A，将正硅酸乙酯按质量比1：9加入无水乙醇混合均匀，得混合液B，取混合液A按质量比6：1加入混合液B，得混合液，取混合液按质量比2：20：1加入蒸馏水和橄榄油，超声3min，得农药增效剂增效助剂C。
农药增效剂增效助剂D是取白沙蒿干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒按质量比1：100加入水，置于反应釜中，通入CO2，于51℃、27MPa提取3.2h，加入石油醚萃取，旋转蒸发回收石油醚溶剂，得萃取物，即农药增效剂增效助剂D。
一种农药增效剂，按质量份数计，包括25份农药增效剂增效助剂A，9份农药增效剂增效助剂B，17份农药增效剂增效助剂C，8份农药增效剂增效助剂D。
实施例3
重楼采集及消毒：取重楼洗净，将根茎剪为3cm的片段，25℃干燥3h，用质量分数为0.1%吐温-20先浸泡30s，质量分数为5%的次氯酸钠溶液再冲洗7min，无菌水清洗4次，即得预处理重楼。
重楼分离培养基：按质量份数计，取纤维素3份，丙酮酸钠3份，脯氨酸1.2份，硝酸钾0.25份， MgSO4·7H2O 0.3份，K2HPO40.4份，CaCl20.8份，FeSO4·7H2O 0.02份，琼脂20份，水1000份，pH7.4，121℃灭菌20min。
纯化培养基：按质量份数计，取葡萄糖6份 ，酵母膏5份，麦芽膏8份，质量分数0.1%的NaCl溶液2份，琼脂20份，双蒸水1000份，pH7.5，121℃灭菌20min。
发酵培养基：按质量份数计，取蔗糖60份，葡萄糖12份，酪蛋白氨基酸0.3份，酵母膏8份，硫酸钾0.5份，3-吗啉丙磺酸22份，微量元素1.5份，氯化镁12份，水1000份，pH 7.2，121℃灭菌20min。
粗竹酢原液：取自竹材加工厂，竹材经烧制热解后，收集粗竹酢原液。
农药增效剂增效助剂A是将预处理重楼研磨粉碎，按质量比1：9加入生理盐水，超声20min，涂布接种至重楼分离培养基中，28℃培养4周，挑取菌丝划线接种至培养基上，于28℃培养5d，重复划线接种3次，得纯化菌株，挑取纯化菌株接种至TSB培养基中活化，28℃、250r/min培养5d，得种子液，将种子液按5%的接种量接于发酵培养基，30℃、250 r/min下培养7d，6000 r/min下离心20 min，取上清液按体积比 1:1 加入乙酸乙酯萃取3次，旋转蒸发，得农药增效剂增效助剂A。
农药增效剂增效助剂B是取粗竹酢液原液自然放置7个月，取上层清液，取上层清液于85℃、0.09Pa真空旋转蒸发，减压蒸馏3 h，取蒸馏液按质量比1：8加入丙酮萃取，取萃取液减压蒸馏回收丙酮，得农药增效剂增效助剂B。
农药增效剂增效助剂C是取 PEG-2000按质量比1：100：100加入浓度为0.10 mol/L的氯化钙溶液和浓度为0.1 mol/L的碳酸钠溶液，于27℃陈化13h，过滤，取沉淀用蒸馏水和乙醇分别洗涤3次，真空干燥，得干燥物，取干燥物按质量比1：200：35加入无水乙醇和蒸馏水，超声分散10 min，于25℃加入水质量70%的氨水，得混合液A，将正硅酸乙酯按质量比1：9加入无水乙醇混合均匀，得混合液B，取混合液A按质量比7：1加入混合液B，得混合液，取混合液按质量比2：20：1加入蒸馏水和橄榄油，超声4 min，得农药增效剂增效助剂C。
农药增效剂增效助剂D是取白沙蒿干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒按质量比1：100加入水，置于反应釜中，通入CO2，于55℃、30MPa提取3.5h，加入石油醚萃取，旋转蒸发回收石油醚溶剂，得萃取物，即农药增效剂增效助剂D。
一种农药增效剂，按质量份数计，包括30份农药增效剂增效助剂A，9份农药增效剂增效助剂B，20份农药增效剂增效助剂C，8份农药增效剂增效助剂D。
对比例1
重楼采集及消毒：取重楼洗净，将根茎剪为3cm的片段，25℃干燥3h，用质量分数为0.1%吐温-20先浸泡30s，质量分数为5%的次氯酸钠溶液再冲洗7min，无菌水清洗4次，即得预处理重楼。
重楼分离培养基：按质量份数计，取纤维素3份，丙酮酸钠3份，脯氨酸1.2份，硝酸钾0.25份， MgSO4·7H2O 0.3份，K2HPO40.4份，CaCl20.8份，FeSO4·7H2O 0.02份，琼脂20份，水1000份，pH7.4，121℃灭菌20min。
纯化培养基：按质量份数计，取葡萄糖6份 ，酵母膏5份，麦芽膏8份，质量分数0.1%的NaCl溶液2份，琼脂20份，双蒸水1000份，pH7.5，121℃灭菌20min。
发酵培养基：按质量份数计，取蔗糖60份，葡萄糖12份，酪蛋白氨基酸0.3份，酵母膏8份，硫酸钾0.5份，3-吗啉丙磺酸22份，微量元素1.5份，氯化镁12份，水1000份，pH 7.2，121℃灭菌20min。
粗竹酢原液：取自竹材加工厂，竹材经烧制热解后，收集粗竹酢原液。
农药增效剂增效助剂B是取粗竹酢液原液自然放置7个月，取上层清液，取上层清液于85℃、0.09Pa真空旋转蒸发，减压蒸馏3 h，取蒸馏液按质量比1：8加入丙酮萃取，取萃取液减压蒸馏回收丙酮，得农药增效剂增效助剂B。
农药增效剂增效助剂C是取 PEG-2000按质量比1：100：100加入浓度为0.10 mol/L的氯化钙溶液和浓度为0.1 mol/L的碳酸钠溶液，于27℃陈化13h，过滤，取沉淀用蒸馏水和乙醇分别洗涤3次，真空干燥，得干燥物，取干燥物按质量比1：200：35加入无水乙醇和蒸馏水，超声分散10 min，于25℃加入水质量70%的氨水，得混合液A，将正硅酸乙酯按质量比1：9加入无水乙醇混合均匀，得混合液B，取混合液A按质量比7：1加入混合液B，得混合液，取混合液按质量比2：20：1加入蒸馏水和橄榄油，超声4 min，得农药增效剂增效助剂C。
农药增效剂增效助剂D是取白沙蒿干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒按质量比1：100加入水，置于反应釜中，通入CO2，于55℃、30MPa提取3.5h，加入石油醚萃取，旋转蒸发回收石油醚溶剂，得萃取物，即农药增效剂增效助剂D。
一种农药增效剂，按质量份数计，包括9份农药增效剂增效助剂B，20份农药增效剂增效助剂C，8份农药增效剂增效助剂D。
对比例2
重楼采集及消毒：取重楼洗净，将根茎剪为3cm的片段，25℃干燥3h，用质量分数为0.1%吐温-20先浸泡30s，质量分数为5%的次氯酸钠溶液再冲洗7min，无菌水清洗4次，即得预处理重楼。
重楼分离培养基：按质量份数计，取纤维素3份，丙酮酸钠3份，脯氨酸1.2份，硝酸钾0.25份， MgSO4·7H2O 0.3份，K2HPO40.4份，CaCl20.8份，FeSO4·7H2O 0.02份，琼脂20份，水1000份，pH7.4，121℃灭菌20min。
纯化培养基：按质量份数计，取葡萄糖6份 ，酵母膏5份，麦芽膏8份，质量分数0.1%的NaCl溶液2份，琼脂20份，双蒸水1000份，pH7.5，121℃灭菌20min。
发酵培养基：按质量份数计，取蔗糖60份，葡萄糖12份，酪蛋白氨基酸0.3份，酵母膏8份，硫酸钾0.5份，3-吗啉丙磺酸22份，微量元素1.5份，氯化镁12份，水1000份，pH 7.2，121℃灭菌20min。
粗竹酢原液：取自竹材加工厂，竹材经烧制热解后，收集粗竹酢原液。
农药增效剂增效助剂A是将预处理重楼研磨粉碎，按质量比1：9加入生理盐水，超声20min，涂布接种至重楼分离培养基中，28℃培养4周，挑取菌丝划线接种至培养基上，于28℃培养5d，重复划线接种3次，得纯化菌株，挑取纯化菌株接种至TSB培养基中活化，28℃、250r/min培养5d，得种子液，将种子液按5%的接种量接于发酵培养基，30℃、250 r/min下培养7d，6000 r/min下离心20 min，取上清液按体积比 1:1 加入乙酸乙酯萃取3次，旋转蒸发，得农药增效剂增效助剂A。
农药增效剂增效助剂C是取 PEG-2000按质量比1：100：100加入浓度为0.10 mol/L的氯化钙溶液和浓度为0.1 mol/L的碳酸钠溶液，于27℃陈化13h，过滤，取沉淀用蒸馏水和乙醇分别洗涤3次，真空干燥，得干燥物，取干燥物按质量比1：200：35加入无水乙醇和蒸馏水，超声分散10 min，于25℃加入水质量70%的氨水，得混合液A，将正硅酸乙酯按质量比1：9加入无水乙醇混合均匀，得混合液B，取混合液A按质量比7：1加入混合液B，得混合液，取混合液按质量比2：20：1加入蒸馏水和橄榄油，超声4 min，得农药增效剂增效助剂C。
农药增效剂增效助剂D是取白沙蒿干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒按质量比1：100加入水，置于反应釜中，通入CO2，于55℃、30MPa提取3.5h，加入石油醚萃取，旋转蒸发回收石油醚溶剂，得萃取物，即农药增效剂增效助剂D。
一种农药增效剂，按质量份数计，包括30份农药增效剂增效助剂A，20份农药增效剂增效助剂C，8份农药增效剂增效助剂D。
对比例3
重楼采集及消毒：取重楼洗净，将根茎剪为3cm的片段，25℃干燥3h，用质量分数为0.1%吐温-20先浸泡30s，质量分数为5%的次氯酸钠溶液再冲洗7min，无菌水清洗4次，即得预处理重楼。
重楼分离培养基：按质量份数计，取纤维素3份，丙酮酸钠3份，脯氨酸1.2份，硝酸钾0.25份， MgSO4·7H2O 0.3份，K2HPO40.4份，CaCl20.8份，FeSO4·7H2O 0.02份，琼脂20份，水1000份，pH7.4，121℃灭菌20min。
纯化培养基：按质量份数计，取葡萄糖6份 ，酵母膏5份，麦芽膏8份，质量分数0.1%的NaCl溶液2份，琼脂20份，双蒸水1000份，pH7.5，121℃灭菌20min。
发酵培养基：按质量份数计，取蔗糖60份，葡萄糖12份，酪蛋白氨基酸0.3份，酵母膏8份，硫酸钾0.5份，3-吗啉丙磺酸22份，微量元素1.5份，氯化镁12份，水1000份，pH 7.2，121℃灭菌20min。
粗竹酢原液：取自竹材加工厂，竹材经烧制热解后，收集粗竹酢原液。
农药增效剂增效助剂A是将预处理重楼研磨粉碎，按质量比1：9加入生理盐水，超声20min，涂布接种至重楼分离培养基中，28℃培养4周，挑取菌丝划线接种至培养基上，于28℃培养5d，重复划线接种3次，得纯化菌株，挑取纯化菌株接种至TSB培养基中活化，28℃、250r/min培养5d，得种子液，将种子液按5%的接种量接于发酵培养基，30℃、250 r/min下培养7d，6000 r/min下离心20 min，取上清液按体积比 1:1 加入乙酸乙酯萃取3次，旋转蒸发，得农药增效剂增效助剂A。
农药增效剂增效助剂B是取粗竹酢液原液自然放置7个月，取上层清液，取上层清液于85℃、0.09Pa真空旋转蒸发，减压蒸馏3 h，取蒸馏液按质量比1：8加入丙酮萃取，取萃取液减压蒸馏回收丙酮，得农药增效剂增效助剂B。
农药增效剂增效助剂D是取白沙蒿干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒按质量比1：100加入水，置于反应釜中，通入CO2，于55℃、30MPa提取3.5h，加入石油醚萃取，旋转蒸发回收石油醚溶剂，得萃取物，即农药增效剂增效助剂D。
一种农药增效剂，按质量份数计，包括30份农药增效剂增效助剂A，9份农药增效剂增效助剂B，8份农药增效剂增效助剂D。
对比例4
重楼采集及消毒：取重楼洗净，将根茎剪为3cm的片段，25℃干燥3h，用质量分数为0.1%吐温-20先浸泡30s，质量分数为5%的次氯酸钠溶液再冲洗7min，无菌水清洗4次，即得预处理重楼。
重楼分离培养基：按质量份数计，取纤维素3份，丙酮酸钠3份，脯氨酸1.2份，硝酸钾0.25份， MgSO4·7H2O 0.3份，K2HPO40.4份，CaCl20.8份，FeSO4·7H2O 0.02份，琼脂20份，水1000份，pH7.4，121℃灭菌20min。
纯化培养基：按质量份数计，取葡萄糖6份 ，酵母膏5份，麦芽膏8份，质量分数0.1%的NaCl溶液2份，琼脂20份，双蒸水1000份，pH7.5，121℃灭菌20min。
发酵培养基：按质量份数计，取蔗糖60份，葡萄糖12份，酪蛋白氨基酸0.3份，酵母膏8份，硫酸钾0.5份，3-吗啉丙磺酸22份，微量元素1.5份，氯化镁12份，水1000份，pH 7.2，121℃灭菌20min。
粗竹酢原液：取自竹材加工厂，竹材经烧制热解后，收集粗竹酢原液。
农药增效剂增效助剂A是将预处理重楼研磨粉碎，按质量比1：9加入生理盐水，超声20min，涂布接种至重楼分离培养基中，28℃培养4周，挑取菌丝划线接种至培养基上，于28℃培养5d，重复划线接种3次，得纯化菌株，挑取纯化菌株接种至TSB培养基中活化，28℃、250r/min培养5d，得种子液，将种子液按5%的接种量接于发酵培养基，30℃、250 r/min下培养7d，6000 r/min下离心20 min，取上清液按体积比 1:1 加入乙酸乙酯萃取3次，旋转蒸发，得农药增效剂增效助剂A。
农药增效剂增效助剂B是取粗竹酢液原液自然放置7个月，取上层清液，取上层清液于85℃、0.09Pa真空旋转蒸发，减压蒸馏3 h，取蒸馏液按质量比1：8加入丙酮萃取，取萃取液减压蒸馏回收丙酮，得农药增效剂增效助剂B。
农药增效剂增效助剂C是取 PEG-2000按质量比1：100：100加入浓度为0.10 mol/L的氯化钙溶液和浓度为0.1 mol/L的碳酸钠溶液，于27℃陈化13h，过滤，取沉淀用蒸馏水和乙醇分别洗涤3次，真空干燥，得干燥物，取干燥物按质量比1：200：35加入无水乙醇和蒸馏水，超声分散10 min，于25℃加入水质量70%的氨水，得混合液A，将正硅酸乙酯按质量比1：9加入无水乙醇混合均匀，得混合液B，取混合液A按质量比7：1加入混合液B，得混合液，取混合液按质量比2：20：1加入蒸馏水和橄榄油，超声4 min，得农药增效剂增效助剂C。
一种农药增效剂，按质量份数计，包括30份农药增效剂增效助剂A，9份农药增效剂增效助剂B，20份农药增效剂增效助剂C。
对比例5：广州某生物科技有限公司生产的农药增效剂
方法：选取一块8亩大小的西瓜农田，将其等分的分为8个小组作为实验样品地，每亩地有100株西瓜，选取同一组分制备而成的农药，取等量的实施例与对比例所制备的农药增效剂添加其中，制成八分不同的农药，每隔5天使用一次，持续25天。根据标准 GB 20693-2006检测实施例与对比例所制备的农药增效剂对西瓜的生长调节效果，以此表征其性能的高低。
农药增效剂具体检测情况如表1
表1
检测项目 实施例1 实施例2 实施例3 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4 对比例5
生长提升率（%） 67.8 70.1 74.7 65.3 60.1 54.24 43.6 37
主根长度（平均值）（cm） 16.5 18 19.5 15 14.2 13 12.1 10
瓜蔓长度（平均值）（cm） 113 115 123 100 85 70 65 48
注：试验前，农田西瓜主根的平均长度为10cm，瓜蔓的平均长度为25cm。
由上可知，本发明所制备的农药增效剂个组分间具有协同作用，可以更好的增强农药增效剂的增效性，是一种安全且高效的农药增效剂，值得推广和使用。

Claims (7)

1.一种农药增效剂，按质量份数计，其特征在于，包括20~30份农药增效剂增效助剂A，7~9份农药增效剂增效助剂B，15~20份农药增效剂增效助剂C，5~8份农药增效剂增效助剂D。
2.根据权利要求1所述农药增效剂，其特征在于，所述农药增效剂增效助剂A是将预处理重楼研磨粉碎，按质量比1：9加入生理盐水，超声15~20min，涂布接种至重楼分离培养基中，25~28℃培养3~4周，挑取菌丝划线接种至纯化培养基上，于25~28℃培养3~5d，重复划线接种2~3次，得纯化菌株，挑取纯化菌株接种至TSB培养基中活化，26~28℃、250r/min培养3~5d，得种子液，将种子液按5%的接种量接于发酵培养基，25~30℃、250 r/min下培养5~7d，6000 r/min下离心20 min，取上清液按体积比 1:1 加入乙酸乙酯萃取2~3次，旋转蒸发，得农药增效剂增效助剂A。
3.根据权利要求2所述农药增效剂，其特征在于，所述预处理重楼是取重楼洗净，将根茎剪为2~3cm的片段，20~25℃干燥2~3h，用质量分数为0.1%吐温-20先浸泡20~30s，质量分数为5%的次氯酸钠溶液再冲洗6 ~7min，无菌水清洗3~4次，即得预处理重楼。
4.根据权利要求2所述农药增效剂，其特征在于，所述重楼分离培养基：按质量份数计，取纤维素2~3份，丙酮酸钠2~3份，脯氨酸0.8~1.2份，硝酸钾0.1~0.25份， MgSO4·7H2O 0.1~0.3份，K2HPO40.2~0.4份，CaCl2 0.5~0.8份，FeSO4·7H2O 0.01~0.02份，琼脂15~20份，水1000份，pH7.2~7.4，121℃灭菌20min；纯化培养基：按质量份数计，取葡萄糖4~6份 ，酵母膏3~5份，麦芽膏5~8份，质量分数0.1%的NaCl溶液1~2份，琼脂15~20份，双蒸水1000份，pH 7.2~7.5，121℃灭菌20min；发酵培养基：按质量份数计，取蔗糖50~60份，葡萄糖10~12份，酪蛋白氨基酸0.1~0.3份，酵母膏5~8份，硫酸钾0.2~0.5份，3-吗啉丙磺酸18~22份，微量元素0.8~1.5份，氯化镁10~12份，水1000份，pH 7.0~7.2，121℃灭菌20min。
5.根据权利要求1所述农药增效剂，其特征在于，所述农药增效剂增效助剂B是取粗竹酢液原液自然放置6~7个月，取上层清液，取上层清液于80~85℃、0.09Pa真空旋转蒸发，减压蒸馏2~3 h，取蒸馏液按质量比1：8加入丙酮萃取，取萃取液减压蒸馏回收丙酮，得农药增效剂增效助剂B。
6.根据权利要求1所述农药增效剂，其特征在于，所述农药增效剂增效助剂C是取 PEG-2000按质量比1：80~100：100加入浓度为0.1 mol/L的氯化钙溶液和浓度为0.10 mol/L的碳酸钠溶液，于23~27℃陈化12~13h，过滤，取沉淀用蒸馏水和乙醇分别洗涤3次，真空干燥，得干燥物，取干燥物按质量比1：180~200：33~35加入无水乙醇和蒸馏水，超声分散10 min，于20~25℃加入水质量60~70%的氨水，得混合液A，将正硅酸乙酯按质量比1：9加入无水乙醇混合均匀，得混合液B，取混合液A按质量比6~7：1加入混合液B，得混合液，取混合液按质量比2：20：1加入蒸馏水和橄榄油，超声2~4 min，得农药增效剂增效助剂C。
7.根据权利要求1所述农药增效剂，其特征在于，所述农药增效剂增效助剂D是取白沙蒿干燥，粉碎过100目筛，收集过筛颗粒按质量比1：100加入水，置于反应釜中，通入CO2，于50~55℃、25~30MPa提取3~3.5h，加入石油醚萃取，旋转蒸发回收石油醚溶剂，得萃取物，即农药增效剂增效助剂D。
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