CN108026110B - 作为蛋白激酶抑制剂的稠合三环化合物 - Google Patents

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Abstract

提供式I的化合物和其药学上可接受的酯、酰胺、溶剂合物或盐，
Figure DDA0001592936040000011
其中R1、R2、R3、R4、R5R6、R7a和R7b具有说明书中给出的含义，其化合物可用于治疗希望和/或需要抑制蛋白质或脂质激酶(例如CDK8和/或单激酶激酶)的疾病，特别是用于治疗癌症或增殖性疾病。

Description

作为蛋白激酶抑制剂的稠合三环化合物
发明领域
本发明涉及新的药学上有用的化合物，该化合物可用作激酶抑制剂(如CDK8和/或单激酶激酶的抑制剂)。该化合物在治疗疾病如癌症(尤其是结肠直肠癌/结肠癌、乳腺癌、胰腺癌和宫颈癌)中具有潜在的效用。本发明还涉及这样的化合物作为药物的用途、这样的化合物在对哺乳动物细胞(或相关病理状态)的体外、原位和体内诊断或处理中的用途、含有它们的药物组合物、以及其生产的合成途径。
背景技术
蛋白质激酶(PK)的功能障碍是很多疾病的标志。大部分参与人类癌症的癌基因和原癌基因编码PK。PK的增强的活性还涉及许多非恶性疾病，如良性前列腺增生、家族性腺瘤性息肉病、结肠息肉病、神经纤维瘤病、银屑病、与动脉粥样硬化有关的血管平滑细胞增殖、肺纤维化、关节炎肾小球肾炎和术后狭窄和再狭窄。PK还涉及炎症病症和病毒与寄生虫的增殖。PK还可在神经退行性疾病的发病机理和发展中起到主要作用。
作为PK功能障碍或异常的通用参考，例如参见《化学生物学最新观点(CurrentOpinion in Chemical Biology)》1999,3,459–465。通常，蛋白质激酶是通过影响磷酰基从三磷酸腺苷转移到参与信号转导路径的蛋白质受体来介导胞内信号转导转移的酶。这些磷酸化事件作为分子开/关开关起作用，可调节或调整靶蛋白生物学功能。这些磷酸化事件作为各种胞外和其它刺激物的响应而被触发。许多疾病，如上述那些(或本文后述)，与被这些类型的蛋白质激酶介导的事件所触发的异常的细胞响应相关。
哺乳动物细胞周期的起始、持续和完成受各种周期蛋白依赖性激酶(CDK)复合物调节，其对细胞成长是至关重要的。CDK8是一种激酶，其参与细胞周期控制，并且还涉及转录的调控。CDK8与其紧密相关的同种型或横向同源CDK19以及其伴侣细胞周期蛋白C、MED12和MED13都是将转录因子的功能和进行转录的分子机制偶联起来的多蛋白中介体复合物的组分，例如Cdk8将基础转录机制与序列特异性转录因子如Notch、p53、β-连环蛋白偶联起来，并且还抑制其他基因的转录(Rzymski,T.等，《生物化学和生物物理学报－蛋白质和蛋白质组学(Biochim.Biophys.Acta,Proteins and Proteomics)》(2015)，电子出版物提前发布(doi:10.1016/j.bbapap.2015.05.011))。作为中介体独立作用，CDK8已经显示作为单独的复合物的一部分起到组蛋白激酶(Knuesel M.T.，等，《分子细胞生物学(Mol CellBiol)》2009,29(3):650-61)在S10(一个与IER基因的转录激活有关的标记)处磷酸化H3的作用。CDk8还与乙酰转移酶2A(也称为GCN5L)相互作用，并且两种蛋白质都作为复合物协同地将组蛋白H3磷酸乙酰化以产生双H3S10p/K14Ac标记(Meyer,K.D.，等，《EMBO杂志(EMBOJournal)》(2008),27(10),1447-1457)。
肿瘤的发展与遗传改变和CDK及其调节物的失调相关，提示了CDK抑制剂可能用作抗癌治疗。
具体而言，CDK8是一种由CDK8基因编码的丝氨酸－苏氨酸蛋白质激酶。已经发现CDK8是调节β-联蛋白活性的原癌基因(参见例如Firestein等的《自然(Nature)》(2008)第455(25)卷547-553页和Firestein等的《癌症研究(Cancer Research)》(2009)；69(20):7899-7901页)。CDK8已被鉴定为既调节β-联蛋白活性又是结肠癌细胞增殖所必需的基因。编码中介体复合物的一个成员的基因位于13q12.13，已经发现该区域是大部分结肠癌(约60％)复发拷贝数增加的区域。因而该基因的表达涉及结肠癌细胞的增殖，并且其抑制会抑制这样的增殖(Firestein等《自然(Nature)》(2008)第455(25)卷547-553页；Firestein等《国际癌症杂志(Int.J.Cancer:)》126,2863–2873(2010)；Seo,J.-O.等，《肿瘤学报告(Oncology Reports)》(2010),24(1),285-291。该基因的表达涉及乳腺癌(Xiao-Yu Li等，《国际临床与实验病理学杂志(Int.J.Clin.Exp.Pathol.)》2014,7(1):92–100；Xu D.等，《自然通讯(Nat.Commun.)》2015,6:6641)、恶性黑素瘤(Kapoor A.等《自然(Nature)》2010,468,1105)、胃癌(Kim等《国际肿瘤学杂志(Int.J.Oncol.)》2011；38(5):1375-832011；Song,Y.-Q.等，《诊断病理学(Diagnostic Pathology)》(2014),9,64/1-164/6)、卵巢癌(Roninson等《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》,2012；109(34):13799-804)、和胰腺癌(Xu W等《癌症快报(Cancer Lett.)》2015；356(2Pt B):613-27)的增殖。Porter D.C.等在《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》2012；109(34):13799-804中也已经报告了CDK8表达与乳腺癌和卵巢癌的存活率不良相关。鉴于CDK8过表达的特征是高水平的CDK8和β-联蛋白过度活跃，CDK8可活化β-联蛋白和其它基因以推动结肠癌进展。因此，鉴于CDK8抑制剂可抑制对致癌进展而言重要和受CDK8的控制的基因的表达、和/或它们可调整β-联蛋白的活性，CDK8抑制剂可用于治疗这样的癌症(我们将减少其进展包括在内)。
CDK8已经被鉴定为IFN信号转导介导的STAT1-S727磷酸化的响应中的主要激酶(Bancerek J.等，《免疫(Immunity)》2013 38(2):250-62)。而且，已经显示了STAT1-S727磷酸化对NK细胞细胞毒性的抑制作用(Putz E.M.等，《细胞报告(Cell Rep.)》2013 4(3):437-44)，以及CDK8的敲减证实了其在NK细胞中对基础的STAT1-S727磷酸化的必需作用以及显著增强的细胞毒性。这可能是一种新型的基于免疫细胞的策略，与其它疗法相结合可以提高临床疗效和结果。
CDK8还涉及对细胞命运的确定的控制。使用可诱导的短发夹策略的CDK8的沉默显示在体内的肿瘤生长中需要CDK8表达，保持肿瘤处于未分化状态，以及调节源自具有拷贝数增加和CDK8的过表达的细胞系的异种移植物中多能胚胎干细胞中正常表达的基因的子集的表达。CDK8表达还在胚胎干细胞中调节潜能状态中起到关键作用，并且MYC是基本的下游靶标(Adler A.S.等，《癌症研究(Cancer Res.)》2012 72(8):2129-39)。此外，将胚胎干细胞保持在未分化状态下需要CDK8表达。
证明了CDK在增殖细胞中协调和驱动细胞周期的关键作用，以及它们参与的生化路径。具体而言，如上所述，已经显示CDK8与某些癌症有关。鉴于对某些癌症的靶向治疗存在显著的医疗需求，显然开发CDK8抑制剂显然是特别有益的。
抗有丝分裂治疗也用于靶向癌症。不幸的是，对有丝分裂毒素的抗性是临床中反复出现的问题，并且新的抗有丝分裂疗法已经证明有限的临床响应可能是由于需要通过许多细胞周期的持续暴露或有丝分裂的时间来引起最大的治疗响应。
单激酶抑制剂可以起到强有丝分裂细胞死亡促进剂的作用。组蛋白H3的磷酸化的单激酶抑制抑制了促进染色体过客复合体(CPC，chromosomal passenger complex)形成、在染色体分离和胞质分裂中产生缺陷的存活蛋白。已知存活蛋白抑制有丝分裂细胞凋亡(MCD)。因此单激酶抑制可能是在有丝分裂中抑制存活蛋白的间接途径。
单激酶(也称为生殖细胞特异性基因2蛋白/GSG2或单倍体生殖细胞特异性核蛋白激酶)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶(Tanaka H等，《FEBS通讯(FEBS Lett.)》1994,355(1):4-10；Tanaka H等，《生物化学杂志(J Biol Chem.)》1999,274(24):17049-57；和Higgins JM,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11311556《基因(Gene)》2001,267(1):55-69)。单激酶活性限于有丝分裂。单激酶在睾丸中表达最强烈，但在增殖体细胞中也普遍存在(Higgins JM,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11311556《基因(Gene)》2001,267(1):55-69)。与有丝分裂结束时降解的有丝分裂激酶如Aurora B和PLK1不同，人类单激酶在整个细胞周期中以接近恒定水平表达(Dai J等，《基因和发育(Genes Dev.)》2005,19(4):472-88)。
在Huertas D等，《原癌基因(Oncogene)》2012,31(11):1408-18.中，单激酶抑制剂CHR-6494显示出以剂量依赖性方式减少来自结肠、乳腺和宫颈的肿瘤细胞中的H3T3ph，并引起具有特征性纺锤体和中心体表型的有丝分裂突变。H3T3的磷酸化对于将Aurora-B补充到着丝粒上及其上游激活至关重要(Kelly A.E.等《科学(Science)》(2010)330(6001):235-9；Wang F.等《科学(Science)》(2010)330(6001):231-5)。H3T3ph直接被染色体过客复合体(CPC)成员存活蛋白识别。该结合介导CPC补充到染色体并激活其激酶亚基Aurora B以确保精确的细胞分裂调节动粒-微管附着。它还建立了一个正反馈环路，其中Aurora B进一步增加单激酶的激酶活性(Wang F,等《当代生物学(Curr.Biol.)》(2011)21(12):1061-9)。同步化后或正常生长条件下磷酸化H3T3的调节可用于评估细胞的单激酶激酶抑制。
抑制CDK8和/或单激酶活性的化合物的鉴定表示用于治疗CDK8和/或单激酶相关疾病的药理学药物所需开发的理想药物设计方法。
为了治疗癌症，靶向疗法变得越来越重要。即，具有干扰与肿瘤生长和/或致癌相关的特定靶分子的效果的疗法。这种治疗可能比目前的治疗(例如化疗)更有效并且对正常细胞的危害更小(例如，因为化疗有杀死正常细胞以及癌细胞的潜力)。这以及靶向治疗可能具有选择性(即与其他分子靶标相比它可以更有选择性地抑制某种靶向分子，例如如下文所述)的事实可能具有减少副作用的益处，并且也可能具有某些特定癌症可以被(也选择性地)治疗的益处。后者反过来也可以减少副作用。
因此，目前肿瘤学家的一个明确的目标是开发靶向治疗药物(例如选择性治疗的药物)。在这方面，应该指出的是，可能存在与某些疾病(例如癌症)相关的几种不同的分子靶标。然而，人们无法预测对一种靶分子进行干扰或抑制的疗法(例如作为治疗剂的小分子)是否可以抑制不同的分子靶标(不管是最终会产生治疗同一种疾病或不同疾病的效果)。
与目前的抗癌治疗相比，靶向治疗(如CDK8和/或单激酶靶向治疗)潜在地具有其他优势，例如因为它可能不直接与DNA相互作用(与某些已知的抗肿瘤治疗相比)，应该会因此降低继发性肿瘤发展的风险。
可能用作MAPKAP-K2抑制剂的多环化合物公开于Revesz L.等《生物有机化学和药物化学通讯(Bioorg.Med.Chem.Lett.)》20(2010)4719-4723，和T.-J.Wang等《药物化学研究(Med.Chem.Res.)》(2013)22:4818-4829。其中公开的化合物通常含有四环核心。
WO2014/154723中公开了据称可用作CDK8抑制剂的化合物。在其中公开的多环化合物中，环不稠合在一起，而是通过单键偶联在一起。
WO 2008/065054中公开了可能用作Cdc7和AKT抑制剂的吡咯并-[2,3-f]-异喹啉和二氢吡咯并异喹啉化合物。WO2010/049366中公开了可以是代谢型受体-亚型5的负变构调节剂的三环化合物。WO2011/058149中公开了潜在地用作PI3K抑制剂的多环化合物。没有公开这些化合物中任一个可用作CDK8或单激酶抑制剂，并且这些化合物的结构在许多方面与本文公开的化合物不同。
本说明书中明显在先公布的文件的列表或讨论不一定被视为承认该文件是现有技术状态的一部分或是公知常识。
发明内容
根据本发明，提供了式I的化合物，
Figure BDA0001592936020000071
其中：
R1和R2各自独立地表示氢、C1-12烷基、C3-12环烷基或杂环烷基(后三个基团任选地被选自＝O和Q1的一个或多个取代基所取代)，条件是R1和R2中的至少一个不是氢；或
R1和R2可连接在一起以形成(例如与和它们都连接的碳原子)3-到12-(例如3-到8-)元环，任选地含有一个或多个杂原子(例如选自氧、氮和硫的一个或多个杂原子)，任选地含有一个或多个不饱和基团(例如双键)，并且环任选地被选自＝O、＝S、＝N(R20)和E1的一个或多个取代基所取代；
R3表示氢、卤素、-CN、C1-12烷基(任选地被一个或多个Q2基团所取代)、C3-12环烷基、杂环烷基(后两个基团任选地被选自＝O和Q3的一个或多个取代基所取代)、芳基或杂芳基(后两个基团任选地被一个或多个Q4基团所取代)；
R4表示-N(R40)R41或-OR42；
R5表示氢、C1-12烷基、-C(O)-C1-12烷基或-C(O)O-C1-12烷基，后三个基团任选地被一个或多个Q5基团所取代；
R6表示氢、卤素、-CN、-N(R60)R61、C1-12烷基、C3-12环烷基、杂环烷基(后三个基团任选地被选自＝O和Q6的一个或多个取代基所取代)、芳基或杂芳基(后两个基团任选地被一个或多个Q7基团所取代)；
R7a和R7b各自独立地表示氢、卤素、-N(R70)R71或-C(O)N(R72)R73；
在本文中，在每次使用时，每个R20、R40、R41、R42、R60和R61独立地表示氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、杂环烷基(后三个基团任选地被选自E2和＝O的一个或多个取代基所取代)、芳基或杂芳基(后两个基团任选地被选自E3的一个或多个取代基所取代)；或
任何相关的一对R40、R41、R60和R61可(例如，当连接到同一个原子时)连接在一起以形成(例如以及它们可能连接的必需的氮原子)4-到12-(例如4-到8-)元环，任选地含有一个或多个杂原子(例如，除了那些可能已经存在的以外的，例如选自氧、氮和硫的杂原子)，任选地含有一个或多个不饱和基团(例如三键或优选双键)，并且环任选地被选自E4的一个或多个取代基所取代；
在本文中，在每次使用时，每个R70、R71、R72和R73独立地表示氢或任选地被一个或多个卤素原子所取代的C1-3烷基；
在本文中，在每次使用时，每个Q1、Q2、Q3、Q4、Q5、Q6和Q7独立地表示：
卤素、-CN、-N(R80)R81、-OR80、-C(＝Y)-R80、-C(＝Y)-OR80、-C(＝Y)N(R80)R81、-OC(＝Y)-R80、-OC(＝Y)-OR80、-OC(＝Y)N(R80)R81、-OS(O)2OR80、-OP(＝Y)(OR80)(OR81)、-OP(OR80)(OR81)、-N(R82)C(＝Y)R81、-N(R82)C(＝Y)OR81、-N(R82)C(＝Y)N(R80)R81、-NR82S(O)2R80、-NR82S(O)2N(R80)R81、-S(O)2N(R80)R81、-SC(＝Y)R80、-SC(＝Y)OR80、-SC(＝Y)N(R80)R81、-S(O)2R80、-SR80、-S(O)R80、-S(O)2OR80、C1-12烷基、C3-12环烷基、杂环烷基(后三个基团任选地被选自＝O和E5的一个或多个取代基所取代)、芳基或杂芳基(后两个基团任选地被选自E6的一个或多个取代基所取代)；
在本文中，在每次使用时，每个E1、E2、E3、E4、E5和E6独立地表示：
(i)Q8；
(ii)C1-6烷基、C3-6环烷基或杂环烷基，其中每个任选地被选自＝O和Q9的一个或多个取代基所取代；或
(iii)芳基或杂芳基，两者均任选地被一个或多个Q10基团所取代；
在本文中，在每次使用时，每个Q8、Q9和Q10独立地表示：
卤素、-CN、-N(R83)R84、-OR83、-C(＝Ya)-R83、-C(＝Ya)-OR83、-C(＝Ya)N(R83)R84、-N(R85)C(＝Ya)R84、-NR85S(O)2R83、-S(O)2R83、-SR83、-S(O)R83、C1-6烷基或芳基，其中后两个基团任选地被一个或多个氟原子所取代；
在本文中，在每次使用时，每个Y和Ya独立地表示＝O或＝S；
在本文中，在每次使用时，每个R80、R81、R82、R83、R84和R85独立地表示氢或任选地被选自氟、-OR90和-N(R91)R92的一个或多个取代基所取代的C1-6烷基；和
R90、R91和R92独立地表示氢或任选地被一个或多个氟原子所取代的C1-6烷基；
或其药学上可接受的酯、酰胺、溶剂合物或盐，
这些化合物、酯、酰胺、溶剂合物和盐在下文中被称为“本发明的化合物”。
药学上可接受的盐包括酸加成盐和碱加成盐。这些盐可以通过常规手段形成，例如通过使游离酸或游离碱形式的式I化合物与一个或多个当量的合适的酸或碱任选地在溶剂中，或在不溶解盐的介质中进行反应，随后使用标准技术除去所述溶剂或所述介质(例如在真空中，通过冷冻干燥或通过过滤)。盐也可以通过将盐形式的本发明的化合物的抗衡离子与另一抗衡离子交换来进行制备，例如使用合适的离子交换树脂。
对于“药学上可接受的酯、酰胺、溶剂合物或盐”，我们包括这样的酯或酰胺的盐，以及这样的酯、酰胺或盐的溶剂合物。例如，可以提及药学上可接受的酯和酰胺，例如本文定义的那些，以及药学上可接受的溶剂合物或盐。
本发明的化合物的药学上可接受的酯和酰胺也包括在本发明的范围内。式I化合物的药学上可接受的酯和酰胺可以具有合适的基团，例如酸基团，转化成合适的酯或酰胺。例如，可提及的药学上可接受的(羧酸的)酯包括任选地取代的C1-6烷基、C5-10芳基和/或C5-10芳基-C1-6烷基酯。本文中的任选取代基包括但不限于卤素原子。可提及的药学上可接受的(羧酸的)酰胺包括式-C(O)N(Rz1)Rz2的那些，其中Rz1和Rz2独立地表示任选地取代的C1-6烷基、C5-10芳基、或C5-10芳基-C1-6亚烷基-。优选地，药学上可接受的酯和酰胺的上下文中可提及的C1-6烷基基团不是环状的，例如直链和/或支链。本文中的任选取代基包括但不限于卤素原子。
优选地，可提及的本发明的化合物的特定的酯和酰胺包括本发明的化合物的酯和酰胺。
可提及的本发明的其他化合物包括氨基甲酸酯、羧酰胺基(carboxamido)或脲基衍生物，例如现有的氨基官能团的这样的衍生物。
为避免疑惑，虽然本发明的化合物可具有药理学活性，但本发明的化合物的某些药学上可接受的(例如“保护的”)衍生物可存在或被制备成其不具有此类活性、但可以肠胃外或口服施用、然后在体内代谢以形成本发明的化合物。因此这样的化合物(其可以具有一些药理学活性，条件是这种活性明显低于它们所代谢的“活性”化合物的活性)可以被描述为本发明的化合物的“前药”。因此，为了本发明的目的，本发明的化合物的前药也包括在本发明的范围内。
相关的本发明的化合物的术语“前药”包括任何化合物，其在口服或肠胃外给药后，其经体内代谢以在预定时间内形成实验可检测的量化合物(例如在6-24小时之间(即每天一次至四次)的给药间隔内)。为避免疑义，术语“肠胃外”给药包括除口服给药以外的所有形式的给药。
此外，本发明的某些化合物本身可以不具有或具有最小的药理学活性，但可以通过肠胃外或口服给药，然后在体内代谢形成本身具有药理学活性的本发明的化合物。这样的化合物(还包括可能具有一些药理学活性，但是其活性明显低于它们经代谢的本发明的“活性”化合物)也可以被描述为“前药”。
因此，本发明的化合物是有用的，因为它们具有药理学活性，和/或在口服或肠胃外给药后在体内代谢以形成具有药理学活性的化合物。
本发明的化合物的前体药物可以通过修饰化合物上存在的官能团来制备，以使得修饰物在将这种前药给予哺乳动物受试者时在体内被切割。通常通过合成具有前药取代基的母体化合物来实现修饰。前药包括本发明的化合物，其中本发明的化合物中的羟基、氨基、巯基、羧基或羰基基团与可在体内切割的任何基团连接以分别再生游离的羟基、氨基、巯基、羧基或羰基基团。
前药的例子包括但不限于羟基官能团的酯和氨基甲酸酯、羧基官能团的酯基团、N-酰基衍生物和N-曼尼希碱。前药的一般信息可以参见例如Bundegaard，H.“前药的设计(Design of Prodrugs)”l-92页，爱思唯尔出版公司(Elesevier)，纽约-牛津(1985)。
本发明的化合物可以含有双键并且因此可以作为对于每个单独的双键为E(异测)和Z(同侧)的几何异构体而存在。本发明的化合物也可以包含位置异构体。所有这些异构体(例如，如果本发明的化合物包含双键或稠环，则包含顺式和反式形式)及其混合物均包括在本发明的范围内(例如单个位置异构体和位置异构体的混合物可以包括在本发明的范围内)。
本发明的化合物也可以表现出互变异构。所有互变异构的形式(或互变异构体)及其混合物都包括在本发明的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构的形式”是指可通过低能垒互相转化的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子异构互变异构体)包括通过质子的迁移(例如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化)的相互转化。价键互变异构体包括通过重组一些键合电子而相互转化。
本发明的化合物还可以含有一个或多个不对称碳原子，并且因此可以存在光学和/或非对映异构。非对映异构体可以用常规技术分离，例如层析或分步结晶。各种立体异构体可以通过使用常规的技术例如分步结晶或HPLC分离化合物的外消旋或其他混合物来进行分离。或者，所需的旋光异构体可以通过在不会引起外消旋化或差向异构化的条件(即‘手性池'方法)下使适当的光学活性起始材料反应来制备，通过适当的起始材料与随后可以通过衍生化(即分辨率，包括动态分辨率)在合适的阶段除去的“手性助剂”例如与同型手性酸反应，然后通过常规方法如色谱法分离非对映体衍生物，或者通过与所有本领域技术人员公知的条件下的合适的手性试剂或手性催化剂反应来进行。
所有立体异构体(包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体)及其混合物(例如外消旋混合物)均包括在本发明的范围内。
在本文所示的结构中，在未指定任何特定手性原子的立体化学的情况下，则所有立体异构体均被考虑并包括为本发明的化合物。如果立体化学通过表示特定构型的实心楔形或虚线来指定，则该立体异构体被如此指定和定义。
本发明的化合物可以以非溶剂化形式以及与药学上可接受的溶剂例如水、乙醇等的溶剂化形式存在，并且意味着本发明包括溶剂化和非溶剂化两种形式。
本发明还包括与本文所述相同的本发明的同位素标记的化合物，但事实是一个或多个原子被具有不同于自然界中常见(或自然界中发现的最丰富的之一)的原子质量或质量数的原子质量或质量数的原子取代。如本文所指定的任何特定原子或元素的所有同位素均涵盖在本发明的化合物的范围内。可掺入本发明的化合物的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，例如2H、3H、11C、13C、14C、13N、15O、17O、18O、32P、33P、35S、18F、36Cl、123I、和125I。本发明的某些同位素标记的化合物(例如3H和14C标记的那些)可用于化合物并用于底物组织分布试验。氚化(3H)和碳-14(14C)同位素因其易于制备和检测而有用。另外，用较重的同位素如氘即2H取代可能因代谢稳定性较高，例如，体内半衰期延长或所需剂量降低而产生某些治疗优势，因此在某些情况下更优选同位素变体。正电子发射同位素如15O、13N、11C和18F可用于正电子发射断层(PET)研究以检查底物受体占据情况。同位素标记的本发明的化合物通常可通过以下与流程1和/或下文实施例中公开的方法类似的程序、通过用同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂来制备。
除非另有说明，否则本文定义的术语C1-q烷基和C1-q亚烷基(其中q是范围的上限)可以是直链的、或者当存在足够数量的碳原子时可以是支链的，饱和的或不饱和的(因此形成例如烯基或炔基)。
可被提及的C3-q环烷基团(其中q为范围的上限)可以是单环或双环烷基基团，该环烷基可以进一步桥接(因此形成例如稠环体系、如三个稠合的环烷基基团)。此类环烷基基团可以是饱和或不饱和的，其含有一个或多个双键或三键(形成例如环烯基或环炔基基团)。取代基可以连接在环烷基基团上的任何点。此外，在有足够数量(即最少四个)的情况下，这样的环烷基基团也可以是部分环状的。为了避免疑问，任选的取代基也可以是其他环状基团，其可以通过两个环共有的单个碳原子连接，从而形成螺环。
本文所用术语“卤素”包括氯、溴、碘和氟。
可提及的杂环烷基基团包括非芳族单环和双环杂环烷基基团，其中环系统中的至少一个(例如一到四个)原子不是碳(即杂原子)，并且其中环系统中的原子总数在5和10之间。这种杂环烷基基团也可以被桥接。此外，这样的杂环烷基基团可以是饱和或不饱和的，其包含一个或多个双键和/或三键，形成例如C2-q杂环烯基(其中q是范围的上限)或C7-q杂环炔基基团。可提及的C2-q杂环烷基基团包括7-氮杂双环[2.2.1]庚基、6-氮杂双环[3.1.1]庚基、6-氮杂双环[3.2.1]-辛基、8-氮杂双环-[3.2.1]辛基、氮丙啶基、吖丁啶基、二氢吡喃基、二氢吡啶基、二氢吡咯基(包括2,5-二氢吡咯基)、二氧戊环基(包括1,3-二氧戊环基)、二噁烷基(包括1,3-二噁烷基和1,4-二噁烷基)、二噻烷基(包括1,4-二噻烷基)、二硫戊环基(包括1,3-二硫戊环基)、咪唑烷基、咪唑啉基、吗啉基、7-氧杂二环[2.2.1]庚基、6-氧杂二环-[3.2.1]辛基、环氧丙烷基、环氧乙烷基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡唑烷基、吡咯烷酮、吡咯烷基、吡咯啉基、奎宁环基、环丁砜基(sulfolenyl)、3-环丁砜基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、四氢吡啶基(如1,2,3,4-四氢吡啶基和1,2,3,6-四氢吡啶基)、硫杂环丁基、硫杂环丙基、硫代茴香基、硫代吗啉基、三噻烷基(包括1,3,5-三噻烷基)、托烷基等。杂环烷基基团上的取代基可以在适当的情况下位于包含杂原子的环系统中的任何原子上。杂环烷基基团的连接点可以是经由环系统中的任何原子，包括(合适的情况下)杂原子(例如氮原子)，或可以作为环系统的一部分存在的任何稠合碳环上的原子。杂环烷基还可以是N-或S-氧化形式(即合适的情况下，那些杂原子可以被一个或两个＝O取代基所取代)。如本文所述，本文提及的杂环烷基基团的其它碳原子也可以被一个或多个＝O取代基所取代。为了避免疑问，任选的取代基也可以是其他环状基团，其可以通过两个环共有的单个碳原子连接(从而形成螺环)。
为避免疑义，术语“双环”(例如，当在杂环烷基基团的上下文中使用时)是指其中在第一环的两个相邻原子之间形成双环系统的第二环的基团。术语“桥接”(例如，当在环烷基或杂环烷基基团的上下文中使用时)是指其中两个非相邻原子通过亚烷基或杂亚烷基链(如果合适)连接的单环或双环基团。
可以提及的芳基基团包括C6-10芳基基团。这样的基团可以是单环、双环或三环并具有6至10个环碳原子，其中至少一个环是芳族的。C6-10芳基包括苯基、萘基等，如1,2,3,4-四氢萘基。芳基的连接点可以是通过环系统的任何原子。但是，当芳基基团是二环或三环时，它们通过芳环与分子的其余部分连接。为了避免疑问，任选的取代基包括本文定义的那些，并且还包括可以连接到多环(例如二环)芳基基团的任何非芳族环上的＝O取代基(然而，在实施方式中，不包括＝O取代基)。为了避免疑问，任选的取代基也可以是其他环状基团，其当连接到芳基基团的非芳族环时，可以通过两个环共有的单个碳原子连接(从而形成螺环)。
除非另有说明，在本文中使用时，术语“杂芳基”是指含有一个或多个优选选自N、O和S的杂原子(例如一至四个杂原子)的芳族基团。杂芳基包括具有5至10个成员并且可以是单环或双环的那些，条件是至少一个环是芳香族的(因此形成例如单环、双环或三环杂芳族基团)。但是，当杂芳基基团是二环或三环时，它们通过芳环与分子的其余部分连接。可提及的杂芳基基团包括吖啶基、苯并咪唑基、苯并二噁烷基、苯并二氧杂环庚烯基(benzodioxepinyl)、苯并间二氧杂环戊烯基(包括1,3-苯并间二氧杂环戊烯基)、苯并呋喃基、苯并呋吖基、苯并噻二唑基(包括2,1,3-苯并噻二唑基)、苯并噻唑基、苯并噁二唑基(包括2,1,3-苯并噁二唑基)、苯并噁嗪基(包括3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪基)、苯并噁唑基、苯并吗啉基、苯并硒二唑基(包括2,1,3-苯并硒二唑基)、苯并噻吩基、咔唑基、色满基(chromanyl)、噌啉基、呋喃基、咪唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吲唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异苯并呋喃基、异色满基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异硫代色满基、异噁唑基、萘啶基(包括1,6-萘啶基或者优选1,5-萘啶基和1,8-萘啶基)、噁二唑基(包括1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基和1,3,4-噁二唑基)、噁唑基、吩嗪基、吩噻嗪、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹嗪基、喹喔啉基、四氢异喹啉基(包括1,2,3,4-四氢异喹啉基和5,6,7,8-四氢异喹啉基)、四氢喹啉基(包括1,2,3,4-四氢喹啉基和5,6,7,8-四氢喹啉基)、四唑基、噻二唑基(包括1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基和1,3,4-噻二唑基)、噻唑基、硫代色满基、硫代乙氧苯基、噻吩基、三唑基(包括1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基和1,3,4-三唑基)等。杂芳基基团上的取代基可以在适当的情况下位于包含杂原子的环系统中的任何原子上。为了避免疑问，任选的取代基包括本文定义的那些，并且还包括可以连接到多环(例如二环)杂芳基基团的任何非芳族环上的＝O取代基(但在实施方式中，不包括＝O取代基)。为了避免疑问，任选的取代基也可以是其他环状基团，其当连接到杂芳基基团的非芳族环时，可以通过两个环共有的单个碳原子连接(从而形成螺环)。杂芳基基团的连接点可以是经由环系统中的任何原子，包括(合适的情况下)杂原子(例如氮原子)，或可以作为环系统的一部分存在的任何稠合碳环上的原子。杂芳基基团也可以是N-或S-氧化形式。
可特别指出，杂芳基基团是单环或双环。在指定杂芳基为双环的情况下，其可以由与另一个五元、六元或七元环(例如单环芳基或杂芳基环)稠合的五元、六元或七元单环(例如单环杂芳基环)组成。
可提及的杂原子包括磷、硅、硼，并且优选氧、氮和硫。
为避免疑惑，在本发明的化合物中两个或更多个取代基的种类可能相同的情况下，各个取代基的实际种类不以任何方式相互依赖。例如，在存在多于一个Q1取代基的情况下，那些Q1取代基可以相同或不同。此外，在存在两个Q1取代基的情况下，其中一个表示-OR70，另一个表示-C(O)-R70，则这些R70基团不被认为是相互依赖的。
为了避免疑问，在环状取代基(例如环烷基或杂环烷基基团)存在于基团(例如烷基)上的情况下，那些环状取代基可以连接到相同的碳原子上，从而形成例如螺环基团。
本文提及的所有单独特征(例如，优选特征)可以独立地或与本文提及的任何其他特征(包括优选特征)组合使用(因此，优选特征可以结合其他优选特征或独立于它们采用)。
本领域技术人员将会理解，作为本发明主题的本发明的化合物包括那些稳定的化合物。也就是说，本发明的化合物包括足够稳定以经受从例如反应混合物中分离至有用纯度的那些化合物。
为避免疑义，当在此使用诸如“R80至R85”的术语时，本领域技术人员将理解为包括R80、R81、R82、R83、R84和R85。
在本发明的化合物中，R1和R2中的至少一个表示氢以外的基团。在一个优选的实施方案中，R1和R2都不表示氢。
在另一个实施方式中，R1和R2可独立地表示C1-12烷基、C3-12环烷基或杂环烷基(其中的每一个如上所定义任选地被取代)；或
R1和R2可连接在一起形成3-到12-(例如3-到8-)元环，任选地含有一个或多个杂原子，任选地含有一个或多个不饱和部分，并且环任选地如上所定义地被取代。
在一种具体的实施方式中，R1和R2独立地表示氢、C1-6烷基、C3-6环烷基或3-到6-元杂环烷基基团(其中每个如上所定义地被任选取代)，条件是R1和R2的至少一个不是氢；或
R1和R2可连接在一起以形成3-到6-元环，任选地含有一个或两个杂原子(其中杂原子选自氧、氮和硫)，任选地含有一个或两个双键，并且环如上所定义地被任选取代。
在另一个具体的实施方式中，R1和R2独立地表示C1-6烷基、C3-6环烷基或3-到6-元杂环烷基基团(其中每个如上所定义地被任选地取代)；或
R1和R2可连接在一起以形成3-到6-元环，任选地含有一个或两个杂原子(其中杂原子选自氧、氮和硫)，任选地含有一个或两个双键，并且环如上所定义地被任选取代。
在在另一个实施方式中，R1和R2独立地表示C1-6烷基、C3-6环烷基或3-到6-元杂环烷基基团(其中每个如上所定义地被任选取代)。
在另一个实施方式中，R1和R2被连接在一起以形成3-到6-元环，任选地含有一个或两个选自氧、氮和硫的杂原子，任选地含有一个或两个双键，并且环如上所定义地被任选取代。
在实施方式中，R1和R2被连接以形成3-到12-元环，可提及的环上的具体的取代基包括选自E1a的取代基，其中E1a表示(i)卤素；(ii)C1-6烷基、C3-6环烷基或杂环烷基，其中每个任选地被选自Q9的一个或多个取代基所取代；或(iii)芳基或杂芳基，均任选地被一个或多个Q10基团所取代。特别地在这样的实施方式中，E1a表示卤素、C1-4烷基(任选地被一个或多个卤素和苯基基团所取代)或C3-6环烷基。
在实施方式中，R1和R2被连接以形成3-到12-元环，可提及的环上的具体的取代基包括选自E1a的取代基，其中E1a表示(i)卤素；(ii)C1-6烷基、C3-6环烷基或杂环烷基，其中每个任选地被选自＝O和Q9的一个或多个取代基所取代；或(iii)芳基或杂芳基，均任选地被一个或多个Q10基团所取代。特别地在这样的实施方式中，E1a表示卤素、C1-4烷基(任选地被一个或多个选自＝O、卤素和苯基所取代)或C3-6环烷基。
在更具体的实施方式中，R1和R2独立地表示C1-3烷基、C4-6环烷基、或4-到6-元杂环烷基基团(其后一个基团任选地被一个或多个甲基基团所取代)，其中杂环烷基基团包括一个或两个选自氮和氧的杂原子；或
R1和R2被连接在一起以形成4-到6-元环烷基或杂环烷基环，其中的环任选地被一个或多个E1a基团所取代，其中杂环烷基环含有选自氧和氮的杂原子，并且其中E1a表示卤素、C1-4烷基(任选地被一个或多个卤素和苯基基团所取代)或C3-6环烷基。
在更具体的实施方式中，R1和R2独立地表示氢、C1-3烷基、任选地被一个或多个卤素基团所所取代的C4-6环烷基、或4-到6-元杂环烷基基团(其后一个基团任选地被一个或多个甲基基团所取代)，其中杂环烷基基团包括一个或两个选自氮和氧的杂原子；或
R1和R2被连接在一起以形成4-到6-元环烷基或杂环烷基环，其中的环任选地被一个或多个E1a基团所取代，其中杂环烷基环含有选自氧和氮的杂原子，并且其中E1a表示卤素、C1-4烷基(任选地被一个或多个选自＝O、卤素和苯基的取代基所取代)或C3-6环烷基。
优选当R1和R2被连接在一起以形成含有氮原子的4-到6-元杂环烷基环时，氮原子被E1(例如E1a)所取代。
在另一个实施方式中，R1和R2被连接在一起以形成含有未取代的氮原子的4-到6-元杂环烷基环。
在另一个实施方式中，R1和R2独立地表示：
氢、环戊基、四氢吡喃基、4,4-二氟环己基或，具体地甲基、丙基、环己基或
Figure BDA0001592936020000191
条件是R1和R2中的至少一个不表示氢；或
R1和R2被连接在一起以形成根据以下结构之一的环：
Figure BDA0001592936020000201
或具体地，
Figure BDA0001592936020000202
其中波浪线表示R1和R2基团与吡喃环的连接点，并且包围在波浪线之间的顶点表示与R1和R2直接连接的碳原子。
在又一实施方式中，R1和R2均为甲基。
可提及的具体的R3基团包括氢、卤素、C1-6烷基(任选地被一个或多个Q2基团所取代)、C3-6环烷基、杂环烷基(后两个基团任选地被选自＝O和Q3的一个或多个取代基所取代)、和芳基(任选地被一个或多个Q4基团所取代)。
可提及的具体的R3基团表示氢、卤素、C1-6烷基(任选地被一个或多个Q2基团所取代)、C3-6环烷基、杂环烷基(后两个基团任选地被选自＝O和Q3的一个或多个取代基所取代)、芳基(任选地被一个或多个Q4基团所取代)、和杂芳基(任选地被一个或多个Q4基团所取代)。
可提及的进一步具体的R3基团包括氢、卤素、C1-4烷基、杂环烷基和芳基(任选地被一个或多个选自卤素、OR80、-S(O)2N(R80)R81、-S(O)2R80、和C1-4烷基的基团所取代)。
可提及的进一步具体的R3基团包括氢、卤素、C1-4烷基、C3-6环烷基、杂环烷基、杂芳基和芳基(任选地被一个或多个选自卤素、OR80、-S(O)2N(R80)R81、-S(O)2R80、和任选地被一个或多个卤素基团所取代的C1-4烷基的基团所取代)。
在一个实施方式中，R3表示氢、卤素、C1-2烷基、环丙基、6-元杂环烷基、吲唑基、或苯基(其后一个基团任选地被一个或多个卤素、OCH3、OH、CF3或-S(O)2NH2基团所取代)。例如，R3可表示H。
就R40、R41、和R42，可提及的具体的基团包括氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、杂环烷基(其后三个基团任选地被一个或多个选自E2的取代基所取代)或芳基(任选地被一个或多个选自E3的取代基所取代)；或
R40和R41可连接在一起以形成4-到8-元环，任选地含有一个或多个另外的杂原子和/或一个或多个不饱和部分，并且环任选地被一个或多个选自E4的取代基所取代。
就R40、R41、和R42，可提及的其他具体的基团包括氢、C1-4烷基、杂环烷基(其后两个基团任选地被一个或多个选自E2的取代基所取代)或芳基(任选地被一个或多个选自E3的取代基所取代)；或
R40和R41可连接在一起以形成4-到6-元环，任选地含有一个或多个选自氧、氮和硫的其他杂原子，并且环任选地被一个或多个选自E4的取代基所取代。
在一个实施方式中，R40、R41和R42独立地表示氢、C1-4烷基、杂环烷基(其后两个基团任选地被选自卤素、-O-C1-4烷基、-C(O)O-C1-4烷基、和苯基的一个或多个取代基所取代)或芳基(任选地被一个或多个卤素基团所取代)；或
R40和R41被连接在一起以形成4-到6-元环，任选地含有另外的选自氧和氮的杂原子，且环任选地被一个或多个卤素基团所取代。
在一个具体的实施方式中，R40、R41和R42独立地表示氢、C1-3烷基、6-元杂环烷基基团(其后两个基团任选地被选自卤素、-O-C1-4烷基、-C(O)O-C1-4烷基、和苯基的一个或多个取代基所取代)或芳基；或
R40和R41被连接在一起以形成6-元环，任选地含有选自氧和氮的另外的杂原子。
在另一优选的实施方式中，R40、R41和R42独立地表示氢或C1-2烷基，或R40和R41被连接在一起以形成吗啉基环。
特别优选的本发明的化合物包括R40、R41和R42独立地表示氢或甲基的那些化合物。可提及的具体的R4基团包括-NH2、-N(H)Me、-OH和-OMe。
可提及的具体的R5基团包括氢、C1-6烷基、-C(O)-C1-6烷基和-C(O)O-C1-6烷基，其后三个基团如上所定义地任选被取代。
在一个实施方式中，R5表示氢、C1-4烷基(任选地被选自卤素、-O-C1-4烷基或苯基的一个或多个基团所取代)、苄氧羰基(Cbz)、对甲氧基苄基羰基(Moz或MeOZ)、叔丁基羰基(BOC)、乙酰基(Ac)、苄基(Bn)对甲氧基苄基(PMB)或3,4-二甲氧基苄基(DMPM)。
在一个具体的实施方式中，R5表示氢或任选地被一个或多个卤素原子或-OMe基团所取代的C1-2烷基。
在更具体的实施方式中，R5表示氢或甲基。
可提及的具体的R6基团包括氢、卤素、-CN、-N(R60)R61、C1-6烷基、C3-6环烷基、杂环烷基(其后三个基团如上所定义地被任选取代)、芳基或杂芳基(其后两个基团如上所定义地被任选取代)。
可提及的另外的具体的R6基团包括氢、卤素、C1-4烷基(任选地被一个或多个卤素原子所取代)或芳基(任选地被一个或多个卤素原子所取代)。
在一个实施方式中，R6表示氢、卤素(例如氯)或芳基。在另一个实施方式中，R6表示氢或卤素。
可提及的具体的R7a和R7b基团包括氢、卤素、-NH(R70a)和-C(O)NHR73a，其中R70a和R73a表示氢或C1-3烷基(任选地被一个或多个卤素原子所取代)。
在一个实施方式中，R7a和R7b独立地表示氢、卤素、-NH2、-C(O)NH2、-NH(R70b)、或-C(O)NHR73b，其中R70b和R73b表示C1-3烷基。
在具体的实施方式中，R7a和R7b表示氢或卤素。例如，R6、R7a和R7b可各自独立地表示氢或卤素。
在本发明的另一种实施方式中，提供了如上所定义的本发明的化合物，但是其中：
R1和R2各自独立地表示C1-3烷基基团、C4-6环烷基基团或任选地被Q1基团所取代的杂环烷基基团；或
R1和R2可连接在一起以形成4-到6-元环，任选地含有一个或多个杂原子(例如，选自氧和氮的一个或多个杂原子)，其环任选地被选自E1的一个或多个取代基所取代；
R3表示氢、卤素、C1-2烷基、6-元杂环烷基基团或芳基(其后一个基团任选地被一个或多个Q4基团所取代)；
R4表示-N(R40)R41或-OR42；
R5表示氢或任选地被一个或多个Q5基团所取代的C1-3烷基；
R6表示氢、卤素或芳基；
R7a和R7b各自独立地表示氢或卤素；
每个R40、R41和R42独立地表示氢、C1-3烷基、杂环烷基(其后两个基团任选地被一个或多个E2基团所取代)、或任选地被一个或多个E3基团所取代的芳基；或
R40和R41可连接在一起以形成6-元环，其任选地含有一个或多个杂原子(例如选自氧和氮的杂原子)；
在本文中，在每次使用时，每个Q1、Q4、和Q5独立地表示卤素、-OR80、-S(O)2N(R80)R81、C1-2烷基、或芳基；
在本文中，在每次使用时，每个E1、E2和E3独立地表示：
(i)Q8；
(ii)C1-4烷基或C3环烷基，其中每个任选地被一个或多个Q9基团所取代；或
(iii)芳基；
在本文中，在每次使用时，每个Q8和Q9独立地表示：卤素、-OR83、-C(O)-OR83或芳基；和
在本文中，在每次使用时，每个R80、R81和R83独立地表示：氢或C1-4烷基。
在本发明的另一种实施方式中，提供了如上所定义的本发明的化合物，但是其中：
R1和R2各自独立地表示氢、C1-3烷基基团、任选地被Q1基团所取代的C4-6环烷基基团、或任选地被Q1基团所取代的杂环烷基基团，条件是R1和R2的至少一个不为氢；或
R1和R2可连接在一起以形成4-到6-元环，任选地含有一个或多个杂原子(例如，选自氧和氮的一个或多个杂原子)，其环任选地被选自E1的一个或多个取代基所取代；
R3表示氢、卤素、C1-2烷基、C3环烷基、6-元杂环烷基基团、杂芳基或芳基(其后一个基团任选地被一个或多个Q4基团所取代)；
R4表示-N(R40)R41或-OR42；
R5表示氢或任选地被一个或多个Q5基团所取代的C1-3烷基；
R6表示氢、卤素或芳基；
R7a和R7b各自独立地表示氢或卤素；
每个R40、R41和R42独立地表示氢、C1-3烷基、杂环烷基(其后两个基团任选地被一个或多个E2基团所取代)、或任选地被一个或多个E3基团所取代的芳基；或
R40和R41可连接在一起以形成6-元环，其任选地含有一个或多个杂原子(例如选自氧和氮的杂原子)；
在本文中，在每次使用时，每个Q1、Q4、和Q5独立地表示卤素、-OR80、-S(O)2N(R80)R81、任选地被一个或多个卤素原子所取代的C1-2烷基、或芳基；
在本文中，在每次使用时，每个E1、E2和E3独立地表示：
(i)Q8；
(ii)C1-4烷基或C3环烷基，其中每个任选地被选自＝O和Q9的一个或多个取代基所取代；或
(iii)芳基；
在本文中，在每次使用时，每个Q8和Q9独立地表示：卤素、-OR83、-C(O)-OR83或芳基；和
在本文中，在每次使用时，每个R80、R81和R83独立地表示：氢或C1-4烷基。
在本发明的另一种实施方式中，提供了如上所定义的本发明的化合物，但是其中：
R1和R2各自独立地表示氢、C1-3烷基基团、C4-6环烷基基团、或4-到6-元杂环烷基基团(其后一个基团任选地被甲基基团所取代)，条件是R1和R2的至少一个不为氢；或
R1和R2被连接在一起以形成4-到6-元环，任选地含有一个或多个杂原子(例如，选自氧和氮的一个或多个杂原子)，其环任选地被一个或多个E1所取代；
R3表示氢、卤素、C1-2烷基、环丙基、6-元杂环烷基或芳基(其后一个基团任选地被一个或多个卤素、OH、CF3、OCH3或-S(O)2NH2基团所取代)；
R4表示-N(R40)R41或-OR42；
R5表示氢、甲基或乙基(其后两个基团任选地被一个或多个卤素或OCH3基团所取代)；
R6表示氢、卤素或芳基；
R7a和R7b各自独立地表示氢或卤素；
在本文中，在每次使用时，每个R40、R41和R42独立地表示氢或C1-2烷基(其后一个基团任选地被一个或多个E2基团所取代)；或
R40和R41可连接在一起以形成吗啉基环；和
在本文中，在每次使用时，每个E1和E2独立地表示：
(i)卤素；
(ii)任选地被选自卤素、＝O和苯基的一个或多个基团所取代的C1-4烷基；或
(iii)芳基。
在本发明的另一种实施方式中，提供了如上所定义的本发明的化合物，但是其中：
R1和R2独立地表示氢、C1-3烷基基团、6-元杂环烷基基团或C4-6环烷基基团，条件是R1和R2的至少一个不为氢；或
R1和R2被连接在一起以形成4-到6-元环，任选地含有一个或多个杂原子(例如，选自氧和氮的一个或多个杂原子)，其环任选地被一个或多个E1所取代；
R3表示氢、卤素、C1-2烷基、环丙基、6-元杂环烷基基团(例如二氢吡喃基)或芳基(其后一个基团任选地被一个或多个OCH3、CF3、或-S(O)2NH2基团所取代)；
R4表示-N(R40)R41或-OR42；
R5表示氢、甲基或乙基(其后两个基团任选地被一个或多个卤素或-OCH3基团所取代)；
R6表示氢或卤素；
R7a和R7b表示氢；
R40、R41和R42各自独立地表示氢或甲基；和
E1表示任选地被选自卤素和＝O的一个或多个基团所取代的C1-2烷基。
在本发明的另一种实施方式中，提供了如上所定义的本发明的化合物，但是其中：
R1和R2独立地表示氢、C1-3烷基基团、6-元杂环烷基基团或环己基基团，条件是R1和R2的至少一个不为氢；或
R1和R2被连接在一起以形成4-到6-元环，任选地含有一个或多个杂原子(例如，一个或多个氧原子或氮原子)，其环任选地被一个或多个E1所取代；
R3表示氢、卤素、C1-2烷基、环丙基、6-元杂环烷基基团(例如二氢吡喃基)或芳基(其后一个基团任选地被一个或多个OCH3、CF3、或-S(O)2NH2基团所取代)；
R4表示-NH2、-OH或-OMe；
R5表示氢、甲基或乙基(其后两个基团任选地被一个或多个卤素或-OCH3基团所取代)；
R6表示氢或卤素；和
R7a和R7b表示氢；
E1表示任选地被选自卤素和＝O的一个或多个基团所取代的C1-2烷基。
在本发明的另一种实施方式中，提供了如上所定义的本发明的化合物，但是其中：
R1和R2独立地表示氢、C1-3烷基基团、四氢吡喃基基团或环己基基团，条件是R1和R2的至少一个不为氢；或
R1和R2被连接在一起以形成4-到6-元碳环或6-元杂环烷基环，其杂环烷基环任选地被一个或多个E1基团所取代；
R3表示氢、卤素、环丙基或被一个或多个-OMe或-S(O)2NH2基团所取代的芳基；
R4表示-NH2、-OH或OMe；
R5表示氢、甲基或乙基(其后两个基团任选地被一个或多个卤素或-OCH3基团所取代)；
R6表示氢或卤素；
R7a和R7b表示氢；和
E1表示任选地被选自卤素和＝O的一个或多个基团所取代的C1-2烷基。
在本发明的另一种实施方式中，提供了如上所定义的本发明的化合物，但是其中：
R1和R2各自独立地表示氢、甲基、乙基、丙基、环己基或四氢吡喃基，条件是R1和R2的至少一个不为氢；或
R1和R2可连接在一起以形成4-到6-元环，任选地含有一个或多个杂原子(例如，选自氧和氮的一个或多个杂原子)，其环任选地被选自E1的一个或多个取代基所取代；
R3表示氢、卤素、C1-2烷基、环丙基、6-元杂环烷基基团、杂芳基或芳基(其后一个基团任选地被一个或多个Q4基团所取代)；
R4表示–NH2、-N(H)Me或-OH；
R5表示氢或任选地被一个或多个Q5基团所取代的C1-2烷基；
R6表示氢或卤素；
R7a和R7b表示氢；
在本文中，在每次使用时，每个Q4和Q5独立地表示卤素、-CF3、-OR80或-S(O)2N(R80)R81；
每个E1表示任选地被一个或多个Q9所取代的C1-2烷基；
Q9表示卤素或芳基；和
R80和R81独立地表示氢或甲基。
在本发明的另一种实施方式中，提供了如上所定义的本发明的化合物，但是其中：
R1和R2各自独立地表示氢、C1-3烷基或环己基，条件是R1和R2的至少一个不为氢；或
R1和R2被连接在一起以形成4-到6-元环，任选地含有选自氧和氮的一个或两个杂原子，且环任选地被一个或多个选自E1的取代基所取代。
R3表示氢、卤素、C1-2烷基、环丙基或芳基；
R4表示-NH2或-OH；
R5表示氢、甲基或乙基(其后两个基团任选地被一个或多个卤素基团所取代)；
R6表示氢或卤素；
R7a和R7b各自表示氢；和
E1表示任选地被一个或多个卤素基团所取代的C1-2烷基；
特别优选的化合物是对CDK8抑制和/或单激酶抑制(优选CDK8抑制)具有选择性的化合物。抑制某种激酶的选择性可以通过给定化合物对不同激酶的相对抑制浓度来确定。如果第二激酶的IC50值比第一激酶的IC50值大至少30倍(或优选至少100倍)，则认为化合物相对于第二激酶对第一激酶是选择性的。优选的化合物是能够比任何其他激酶更大程度地抑制CDK8和/或CDK8与单激酶的化合物(例如，其中其他激酶的IC50值比CDK8和/或单激酶的IC50值大至少30倍(或优选大至少100倍))。
在本发明的另一个实施方案中，提供了如上所定义的本发明的化合物，但是其中：
R1和R2各自独立地表示氢、甲基、环己基或四氢吡喃基，条件是R1和R2的至少一个不是氢；或
R1和R2可连接在一起以形成环己基、四氢吡喃基或哌啶基环，任选地其中所述哌啶基环被C1-2烷基基团或氟化的C1-2烷基基团所取代；
R3表示氢或芳基(其后一个基团任选地被一个或多个Q4基团所取代)；
R4表示–NH2、N(H)R40或-OH；
R5表示氢或任选地被一个或多个Q5基团所取代的C1-2烷基；
R6、R7a和R7b表示氢；
R40表示C1-2烷基基团或氟化的C1-2烷基基团；
每个Q4和Q5独立地表示卤素、-OR80或-S(O)2N(R80)R81；和
在本文中，在每次使用时，每个R80和R81独立地表示氢或甲基。
考虑到与该化合物相关的高CDK8选择性，如下所定义的实施例30的化合物是特别优选的。
某些化合物，如下面定义的实施例12的化合物，相对于CDK8，对单激酶显示出选择性，并且也是感兴趣的。
本发明特别优选的化合物包括下文所述实施例的那些化合物。
本发明的化合物可根据本领域技术人员熟知的技术制备，例如如下文所述。
根据本发明的另一方面，提供了制备式I的化合物的方法，该方法包括：
(i)对于R6代表芳基或杂芳基(任选地如上文所定义地取代)的式I化合物，使相应的式II化合物
Figure BDA0001592936020000301
其中L1表示合适的离去基团如碘、溴、氯或磺酸基团(例如-OS(O)2CF3，-OS(O)2CH3或-OS(O)2PhMe)(最优选L1表示碘)，并且R1、R2、R3、R4、R5、R7a和R7b如文中所定义，与式III的化合物反应，
L2-R6 III
其中L2表示合适的基团如-B(OH)2、-B(ORwx)2或-Sn(Rwx)3，其中每个Rwx独立地表示C1-6烷基基团，或在-B(ORwx)2的情况下，各个Rwx基团可连接在一起以形成4-到6-元环基团(如4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基基团)，且R6是芳基或杂芳基基团(任选地如上文所定义地取代；最优选L2表示-B(ORwx)2)。该反应例如在合适的催化剂体系，例如金属(或其盐或复合物)如CuI、Pd/C、PdCl2、Pd(OAc)2、Pd(Ph3P)2Cl2、Pd(Ph3P)4(即四(三苯基膦)钯)、Pd2(dba)3或NiCl2和配体如t-Bu3P、(C6H11)3P、Ph3P、AsPh3、P(o-Tol)3、1,2-双(二苯基膦基)乙烷、2,2'-双(二叔丁基膦基)-1,1'-二苯基、2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-二-萘、1,1’-双(二苯基-膦基-二茂铁)、1,3-双(二苯基膦基)丙烷、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(xantphos)、或其混合物，还有合适的碱如Na2CO3、K3PO4、Cs2CO3、NaOH、KOH、K2CO3、CsF、Et3N、(i-Pr)2NEt、t-BuONa或t-BuOK(或其混合物)的存在下，在合适的溶剂如二噁烷、甲苯、乙醇、二甲基甲酰胺、乙二醇二甲醚、水、二甲亚砜、乙腈、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、四氢呋喃、二甲氧基乙烷(DME)或其混合物(优选使用极性非质子溶剂，例如二噁烷或DME)中进行。反应也可以在例如室温或更高温度下进行(例如在高温如溶剂体系的回流温度下)。反应也可以在微波辐射反应条件下进行，例如在升高的温度下(例如在100℃以上，如在约135至140℃)。可提及的另一种L1包括可转化为卤化镁(即格氏试剂)的碱金属基团(例如锂)和卤素基团，其中镁可以进行“转金属化(trans-metallation)”反应，从而例如与锌交换；
(ii)对于其中R3和R5都是氢且R4表示OR42的式I化合物，使相应的式IV化合物环化，
Figure BDA0001592936020000321
其中R1、R2、R42、R6、R7a和R7b如文中所定义，在本领域技术人员已知的反应条件下，例如反应可在约室温或更高温度下进行(例如高达40-180℃)。反应也可以在微波辐射反应条件下进行，例如在升高的温度下(例如在100℃以上，如在约135至140℃)。
(iii)对于R4代表NH2的式I化合物，
(a)使R4表示-OR42的式I的化合物与氨源(例如氨、乙酸铵、碳酸氢铵或氢氧化铵)在合适的溶剂如低级醇、二甲基甲酰胺或其混合物的存在下反应，其中R42如文中所定义，条件是R42不表示氢；优选该反应在约50℃至约100℃的温度范围内在氢氧化铵的甲醇/二甲基甲酰胺混合物中进行；
(b)使R4表示-N(H)CH2-芳基的式I的化合物(其中所述芳基任选地如上文所定义地取代)与合适的脱保护试剂反应，如例如通过与三氟乙酸反应或通过在合适的还原反应条件下还原(例如在化学选择性还原剂如LiAlH4存在下进行)；
(iv)对于R4表示-N(R40)R41的式I的化合物，其中R40和R41如上文所定义，使相应的R4表示OR42的式I的化合物与式V的化合物反应，其中R42如文中所定义，
HN(R40)R41 V
其中R40和R41如上文所定义，可在本领域技术人员已知的条件下例如通过酰胺偶联反应(即由羧酸或其酯形成酰胺(即-C(O)-OR42基团))被转化为-C(O)N(R40a)R41a基团(其中R40a和R41a如文中所定义)，并且该反应(例如对于-COOH)可在合适的偶联试剂(例如1,1’-羰基二咪唑、N,N'-二环己基碳二亚胺等)的存在下进行或在为酯的情况下(例如-C(O)OCH3或-C(O)OCH2CH3)，在例如三甲基铝存在的情况下进行，或可以首先将-C(O)OH基团活化为相应的酰卤(例如-C(O)Cl，通过用草酰氯、亚硫酰氯、五氯化磷、三氯氧磷等处理)，并且在所有情况下，使相关化合物与式HN(R10a)R11a(其中R10a和R11a如上文所定义)的化合物在本领域技术人员公知的标准条件下(例如任选地在合适的溶剂，合适的碱和/或惰性气氛中)反应；
(v)对于R4表示-OH的式I的化合物，在本领域广泛已知的碱性或酸性水解条件下，使相关的R4表示-OR42的式I的化合物水解(其中R42如上文所定义，条件是R42不表示氢)；
(vi)对于R5表示C1-12烷基基团(任选地如上文所定义地取代)的式I的化合物，使相关的R5表示氢的式I的化合物与式VI的化合物反应，
L3-R5 VI
其中R5如上文所定义，且L其中R5表示C1-12烷基基团(任选地如上文所定义地取代)，且L3表示合适的离去基团，如上文中对L1的描述，反应条件如在适当的金属催化剂(或其盐或复合物)如Cu、Cu(OAc)2、CuI(或CuI/二胺复合物)、铜三(三苯基膦基)溴、Pd(OAc)2、三(二亚苄基丙酮)-二钯(0)(Pd2(dba)3)或NiCl2和任选的添加剂如Ph3P、2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽、NaI或适当的冠醚如18-冠-6-苯的存在下，在适当的碱如NaH、Et3N、吡啶、N,N'-二甲基乙二胺、Na2CO3、K2CO3、K3PO4、Cs2CO3、t-BuONa或t-BuOK(或其混合物，任选地在
Figure BDA0001592936020000342
分子筛的存在下)的存在下，在合适的溶剂(例如二氯甲烷、二噁烷、甲苯、乙醇、异丙醇、二甲基甲酰胺、乙二醇、乙二醇二甲醚、水、二甲亚砜、乙腈、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、四氢呋喃或其混合物)中。该反应可以在升高的温度下或在微波辐射反应条件下进行，例如如方法步骤(i)中所述；
(vii)对于R3表示卤素的式I的化合物，使相关的R3表示氢的式I的化合物与卤离子源，例如提供包括碘、二碘乙烷、二碘四氯乙烷的碘离子源(优选N-碘代琥珀酰亚胺)、包括N-溴代琥珀酰亚胺和溴的溴离子，和包括N-氯代琥珀酰亚胺、氯和一氯化碘的氯离子源的亲电子试剂发生反应；
(viii)对于R3表示烷基基团或芳基基团的式I的化合物，使式VII的化合物
Figure BDA0001592936020000341
其中R1、R2、R4、R5、R6、R7a和R7b如文中所定义，并且L4表示合适的离去基团，如上文中对L1的描述，与式VIII的化合物反应，
L5-R3 VIII
其中L5表示合适的基团如-B(OH)2、-B(ORwx)2或-Sn(Rwx)3、如文中所定义，并且R3如上文所定义，在诸如关于上述方法步骤(i)所述的反应条件下进行；或
(ix)对于R5表示氢的式I的化合物，将式IX的化合物氧化，
Figure BDA0001592936020000351
其中R1、R2、R3、R4、R6、R7a和R7b，如上文所定义且R5表示氢，在本领域技术人员公知的条件下，例如在合适的氧化剂存在下，例如DDQ(2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌)、MnO2或m-cpba等。
式II、IV、VII和IX的化合物(以及某些其他中间体化合物)可商业获得、在文献中已知、或者可以通过与本文所述方法类似的方法或通过常规合成程序、根据标准技术、使用合适的试剂和反应条件从可获得的起始材料获得。本发明的化合物还可以以其药学上可接受的盐的形式分离，例如本文先前描述的那些。
本发明的化合物可以根据以下方案和实施例的程序、使用适当的材料制备，并且通过下文提供的具体实施例进一步举例说明。而且，通过利用本文所述的方法，本领域普通技术人员可以容易地制备落入本文所要求保护的本发明范围内的其他化合物。但是，在所述实施例中阐明的化合物不能被理解为是构成被认为是本发明的唯一化合物。所述实施例进一步阐明了用于制备本发明的化合物的细节。本领域技术人员容易理解，可用以下制备步骤的条件和过程的已知变化来制备这些化合物。
式(I)化合物及其各自的中间体可使用常规合成方法制备，例如但不限于方案1至6中概述的途径。
Figure BDA0001592936020000371
Figure BDA0001592936020000381
Figure BDA0001592936020000391
Figure BDA0001592936020000401
Figure BDA0001592936020000411
Figure BDA0001592936020000421
此外，制备式I的化合物的方法可以在文献中描述，例如：
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可提及的具体转化步骤包括在WO2011/072064中描述的那些，其描述了通过羟乙酰吡啶与酮(例如丙酮)的反应合成双环前体分子。这些方法有助于在R1和R2位置引入非氢基团。
可提及的其他特定转化步骤(包括可用于形成式I的化合物的那些步骤)包括：
(i)使用适当的还原条件将羧酸(或酯)还原成醛或醇(例如分别使用DIBAL和LiAlH4(或类似的化学选择性还原剂)将-C(O)OH(或其酯)转化为-C(O)H或-CH2-OH基团)；
(ii)使用适当的还原条件如上述(i)中提到的那些条件,将醛(-C(O)H)基团还原成醇基团(-CH2OH)；
(iii)醛和胺的还原性胺化，在适当的反应条件例如以“一锅法”方法在适当的还原剂的存在下，如化学选择性还原剂、如氰基硼氢化钠或优选三乙酸基硼氢化钠等。或者，这样的反应可以以两步进行，例如缩合步骤(在例如脱水剂的如原甲酸三甲酯或MgSO4或分子筛等的存在下)之后进行还原步骤(例如通过在还原剂例如上述化学选择性的还原剂或NaBH4、AlH4等的存在下反应)，例如在丙酮(H3C-C(O)-CH3)的存在下通缩合，然后在还原剂如氰基硼氢化钠的存在下进行还原(即整体还原性胺化)，将-NH2转化为-N(H)-异丙基；
(iv)磺酰胺的形成，例如通过磺酰氯和胺反应，例如-S(O)2OH可被转化为-S(O)2N(R70)R71基团(其中R70和R71如上文所定义，且可连接在一起，例如如上定义)，且该反应可在合适的偶联试剂(例如1,1’-羰基二咪唑，N,N'-二环己基碳二亚胺等)的存在下进行，且使相关的化合物与式HN(R70)R71的化合物(其中R70和R71如文中所定义)在本领域技术人员公知的标准条件下(例如任选地在合适的溶剂，合适的碱和/或惰性气氛中)反应；
(v)例如在脱水反应条件下、例如在POCl3存在下等将伯酰胺转化为腈官能团；
(vi)亲核取代反应(例如芳族亲核取代)，其中用任何亲核试剂取代离去基团，例如胺可以代替-S(O)CH3离去基团；
(vii)通过在合适的试剂如氟化硼-二甲基硫醚复合物或BBr3的存在下反应将甲氧基基团转化成羟基基团(例如在合适的溶剂如二氯甲烷的存在下)；
(viii)烷基化、酰化或磺酰化反应，其可以在碱和溶剂(如上文所述的)的存在下进行；
(ix)特定的脱保护步骤，例如通过在酸的存在下进行反应、对N-Boc保护基团进行脱保护，或者作为甲硅烷基醚(例如叔丁基二甲基甲硅烷基保护基团)保护的羟基，可以通过与氟离子源进行反应而脱保护，例如通过使用试剂四丁基氟化铵(TBAF)。
本发明最终化合物或相关中间体的取代基R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7a和R7b(或其上的取代基，例如每个R20、R40、R41、R42、R60、R61、R70、R71、R72和R73或Q1、Q2、Q3、Q4、Q5、Q6和/或Q7所定义的)可在通过本领域技术人员熟知的方法在上述过程之后或期间被修饰一次或多次。此类方法的例子包括取代、还原、氧化、烷基化、酰化、水解、酯化、醚化，卤化或硝化。前体基团可以在反应过程中的任何时候变成不同的这种基团，或者变成式I中定义的基团。例如，在存在-CO2H的情况下，本领域技术人员将会理解，在合成过程中的任何阶段(例如最终步骤)，相关的酯基团可以被水解以形成羧酸官能团。
带有羧基酯官能团的本发明的化合物可根据本领域公知的方法转化为多种衍生物，以将羧基酯基团转化成羧酰胺、N-取代的羧酰胺、N,N-二取代的羧酰胺、羧酸等。操作条件是本领域中广泛公知的，并且可以包括例如在羧基酯基团转化为甲酰胺基团的过程中，如关于上述方法(iii)(a)中所述的与氨或氢氧化铵的反应。类似的操作条件适用于制备N-取代的或N,N-二取代的甲酰胺，其中使用合适的伯胺或仲胺来代替氨或氢氧化铵。此外，本发明的化合物的氨基衍生物可以容易地被转化为相应的氨基甲酸酯、甲酰氨基或脲基衍生物。
本发明的化合物可以使用常规技术(例如重结晶)从其反应混合物中被分离出来。
本领域技术人员将理解，在上文和下文所述的方法中，中间体化合物的官能团可能需要被保护基团所保护。
官能团的保护和脱保护可以在上述方案的反应之前或之后进行。
可以根据本领域技术人员熟知的技术和下文所述的技术去除保护基团。例如，本文所述的被保护的化合物/中间体可以使用标准的脱保护技术被化学转化为未被保护的化合物。
所涉及的化学类型将决定保护基团的需求和类型以及完成合成的顺序。
保护基的使用在《有机合成中的保护基(Protective Groups in OrganicSynthesis)》，第三版，T.W.Greene和P.G.M.Wutz，威利-国际科学(Wiley-Interscience(1999)中被充分描述。
医疗和医药用途
本发明的化合物被用作药物。根据本发明的另一方面，提供了用作药物的如上文所定义的本发明的化合物。
本发明的化合物可抑制蛋白激酶，如CDK8和/或单激酶，例如可在下面描述的测试和/或本领域技术人员已知的测试中所显示的。由于CDK8激酶活性可能涉及核β联蛋白活性的调节，本发明的化合物因此可用于治疗希望和/或需要抑制CDK8的个体的疾病(其包括希望和/或需要调节或减少核β-联蛋白活性和/或抑制或调节CDK8(即原癌基因)表达的疾病)。
单激酶激酶活性可能涉及有丝分裂期间组蛋白H3的磷酸化。因此，本发明的化合物可用于治疗希望和/或需要抑制单激酶的个体的疾病(其包括希望/需要调节或减少组蛋白H3在有丝分裂期间的磷酸化的疾病)。
术语“抑制”可以指催化激酶(例如CDK8)活性的任何可测量的减少和/或预防。激酶活性的降低和/或预防可以通过比较在不存在本发明的化合物的情况下含有本发明的化合物的样品和激酶(例如CDK8)的等同样品中的激酶活性来进行测量，这对于本领域技术人员来说是显而易见的。可测量的变化可以是客观(例如通过某些测试或标记可测量的、例如在体外或体内测定或测试中、例如在下文中描述的试验或测试、或本领域技术人员已知的其他合适的试验或测试)或主观的(例如，受试者给出指示或感觉到效果)。
当在试验(或其他测试)中测试时，发现本发明的化合物在浓度为10μM或更低(例如浓度低于5μM、或者甚至低于1μM、如低于0.1μM)时表现出对蛋白激酶活性(例如CDK8)的50％抑制，例如如下文所述，或本领域技术人员公知的其他合适的试验或测试。
因此预计本发明的化合物可用于治疗其中已知蛋白激酶(例如CDK8和/或单激酶)发挥作用并且其特征在于或与该激酶的整体升高的活性相关的疾病(由于例如激酶的量增加或激酶的催化活性增加)。本发明的化合物还可用于治疗与核β-联蛋白活性升高和/或CDK8表达(即已知致癌基因)升高(或过度表达)相关的情况/疾病。
因此，本发明的化合物被预期用于治疗由与蛋白激酶(例如CDK8和/或单激酶)相关的异常细胞生长、功能或行为引起的病症/疾病。这样的病症/疾病包括癌症、免疫疾病、心血管疾病、病毒感染、炎症、代谢/内分泌功能失调、神经疾病和自身免疫疾病。特别地，这样的情况/疾病包括癌症，尤其是特定的癌症如非小细胞肺癌、前列腺癌，具体地是结肠/结肠直肠癌、胃腺瘤、胃腺癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、宫颈癌和恶性黑色素瘤，并且因此特别优选将本发明的化合物用于治疗这些特定的癌症。
因此，本发明的化合物可用于治疗的疾病/情况包括癌症(淋巴瘤、实体瘤或如下文所述的癌症)、阻塞性气道疾病、过敏性疾病、炎症性疾病(如哮喘、变态反应和克罗恩病)、免疫抑制(如移植排斥和自身免疫性疾病)、与器官移植有关的疾病、艾滋病相关疾病和其他相关疾病。可提及的其他相关疾病(特别是由于激酶在调节细胞增殖中的关键作用)包括其他细胞增殖性病症和/或非恶性疾病，例如良性前列腺增生、家族性腺瘤病、息肉病、神经纤维瘤病、银屑病、骨疾病、动脉粥样硬化、与动脉粥样硬化有关的血管平滑细胞增殖、肺纤维化、关节炎肾小球肾炎以及手术后狭窄和再狭窄。可提及的其他疾病状态包括心血管疾病、中风、糖尿病、肝肿大、阿尔茨海默病、囊性纤维化、激素相关疾病、免疫缺陷疾病、破坏性骨疾病、传染性疾病、与细胞死亡相关的病症、凝血酶诱导的血小板聚集、慢性骨髓性白血病、肝脏疾病、涉及T细胞活化和CNS疾病的病理性免疫情况。
如上所述，本发明的化合物可用于治疗癌症。更具体地，本发明的化合物因此可用于治疗多种癌症，包括但不限于：癌症如膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌肺癌(包括非小细胞癌和小细胞肺癌)、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、皮肤癌、鳞状细胞癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、喉癌、恶性胶质瘤、神经母细胞瘤、角化棘皮瘤、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、骨癌、腺瘤、腺癌、滤泡癌、未分化癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、骨髓疾病、淋巴样疾病、多毛细胞癌、口腔和咽(口部)癌、唇癌、舌癌、口癌、咽癌、小肠癌、结肠-直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑和中枢神经系统癌、霍奇金和白血病；淋巴谱系造血肿瘤包括包括白血病、急性淋巴瘤白血病、急性成淋巴细胞白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和伯克特氏淋巴瘤；骨髓谱系造血肿瘤包括急性和慢性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征和早幼粒细胞白血病；间充质来源的肿瘤包括包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢和外周神经系统的肿瘤包括星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；和其他肿瘤包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、色素干皮病、角化黄瘤、甲状腺滤泡癌和卡波西肉瘤。在这方面可提及的癌症的具体形式包括非小细胞肺癌和前列腺癌，特别是结肠/结肠直肠癌、胃腺瘤、胃腺癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、宫颈癌和恶性黑色素瘤。
本发明的化合物在上述病症的治疗性和/或预防性治疗中可使用。
根据本发明的另一方面，提供了治疗与抑制蛋白激酶(例如CDK8和/或单激酶)相关的疾病(例如本文提到的癌症或另一种疾病，特别是结肠/结肠直肠癌)的方法，即希望和/或需要这种抑制的情况下(该疾病也可能与增加的核β-联蛋白活性和/或CDK8表达升高有关)，例如治疗由与蛋白激酶例如CDK8和/或单激酶有关的异常细胞生长、功能或行为引起的疾病/病症的方法，该方法包括将治疗有效量的如上文定义的本发明的化合物给予患有或易患这种病症的患者。
根据本发明的又一方面，提供了用于治疗希望和/或需要抑制CDK8和/或单激酶的疾病的如上文所定义的本发明的化合物。例如，提供了本发明的化合物，其用于治疗如本文所述的癌症或另一种疾病，如非小细胞肺癌、前列腺癌或特别是结肠/结肠直肠癌、胃腺瘤、胃腺癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、宫颈癌或恶性黑色素瘤。
“患者”包括哺乳动物(包括人类)患者。因此，上面讨论的治疗方法可以包括治疗人体或动物体。
术语“有效量”是指赋予被治疗的患者治疗效果的化合物的量。效果可能是客观的(例如通过一些测试或标记可测量的)或主观的(例如，受试者给出指示或感觉到效果)。
本发明的化合物可以以药学上可接受的剂型，经口服、静脉内、皮下、口腔、直肠、皮肤、鼻腔、气管、支气管、舌下、通过任何其他肠胃外途径或通过吸入给药。
本发明的化合物可以单独给药，但优选通过已知的药物制剂给药，包括用于口服给药的片剂、胶囊剂或酏剂，用于直肠给药的栓剂，用于肠胃外或肌内给药的无菌溶液剂或混悬剂等。药物制剂的类型可根据预期的给药途径和标准药物实践来选择。这种药学上可接受的载体对活性化合物可以是化学惰性的，并且在使用条件下可不具有有害的副作用或毒性。
这样的制剂可以根据标准和/或可接受的药物实践来制备。否则，本领域技术人员可以使用常规技术和/或根据标准和/或可接受的药物实践来非创造性地实现合适的制剂的制备。
根据本发明的另一方面，提供了药物制剂，其包含如上文所定义的本发明的化合物以及药学上可接受的佐剂、稀释剂和/或载体。
根据例如本发明的化合物(即活性成分)的性能和物理特性，可提及的药物制剂包括其中活性成分以至少1重量％(或至少10重量％、至少30重量％或至少50重量％)存在的那些。也就是说，药物组合物的活性成分与其他组分(即佐剂、稀释剂和载体的添加)的重量比为至少1：99(或至少10：90、至少30：70或至少50：50)。
制剂中本发明的化合物的量将取决于病症的严重程度、以及待治疗的患者以及所使用的化合物，但是可由本领域技术人员非创造性地确定。
本发明进一步提供了制备如上文所定义的药物制剂的方法，该方法包括将如上文定义的本发明的化合物或其药学上可接受的酯、酰胺、溶剂合物或盐与药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体结合。
本发明的化合物还可以与作为激酶(例如蛋白质或脂质激酶，如CDK8和/或单激酶)的抑制剂和/或用于治疗癌症和/或增殖性疾病的其它治疗剂结合。本发明的化合物还可以与其他疗法(例如辐射)组合。
根据本发明的另一方面，提供了一种组合产品，其包括：
(A)如上文所定义的本发明的化合物；和
(B)可用于治疗癌症和/或增殖性疾病的另一种治疗剂，
其中组分(A)和(B)中的每一种都与药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体混合配制。
这种组合产品提供了本发明的化合物与其他治疗剂的联合给药，并且因此可以作为单独的制剂提供，其中这些制剂中的至少一种包含本发明的化合物，并且至少一种包含其他治疗剂，或者可以作为组合制剂提供(即配制)(即呈现为包含本发明的化合物和其他治疗剂的单一制剂)。
因此，还提供了：
(1)包含如上文定义的本发明的化合物，可用于治疗癌症和/或增殖性疾病的另一种治疗剂，以及药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体的药物制剂；和
(2)包含组分部分的试剂盒：
(a)包含与药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体混合的如上文所定义的本发明的化合物的药物制剂；和
(b)包含与药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体混合的可用于治疗癌症和/或混合增殖性疾病的另一种治疗剂的药物制剂，
其中组分(a)和(b)各自以适合与另一组分联合给药的形式提供。
可用于治疗癌症和/或增殖性疾病并可与本发明的化合物组合使用的其它治疗剂的例子包括小分子抑制剂抗癌剂如酪氨酸激酶抑制剂、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂、脂质激酶抑制剂、蛋白质-蛋白质抑制剂等，用于治疗癌症的细胞毒素剂、抗体和癌症疫苗、DNA损伤性化学治疗药物(例如阿霉素和放射疗法)。在这方面可提及的其它抗癌剂包括Aurora B抑制剂和Aurora A、Plk1和驱动蛋白-5抑制剂(Lens，S.M等，《自然癌症综述(Nat.Rev.Cancer)》10：825-841,2010)。
示例性的细胞毒剂可以选自抗微管剂、铂配位复合物、烷化剂、抗生素、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢物、拓扑异构酶I抑制剂、激素和激素类似物、信号转导途径抑制剂、非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂、免疫治疗剂、促凋亡剂、LDH-A抑制剂；脂肪酸生物合成抑制剂；细胞周期信号抑制剂；HDAC抑制剂、蛋白酶体抑制剂；和癌症代谢的抑制剂。
可用于治疗癌症和/或增殖性疾病的治疗剂可被称为“化疗剂”。化疗剂的例子包括ABT-751(微管抑制剂)、阿立塞替(alisertib)(Aurora A激酶抑制剂)、伊利司莫(elesclomol)(氧化应激诱导剂)和克唑替尼(酪氨酸激酶抑制剂)。其它化疗剂的例子包括硼替佐米(
Figure BDA0001592936020000531
千年制药公司(Millennium Pharm.))、埃罗替尼(
Figure BDA0001592936020000532
基因泰克公司(Genentech)/OSI制药公司(OSI Pharm.))、双硫仑、表焙儿茶素焙酸盐、盐孢酰胺A(salinosporamide A)、卡非佐米、17-AAG(格尔德霉素)、根赤壳菌素、乳酸脱氢酶A(LDH-A)、氟维司群(
Figure BDA0001592936020000533
阿斯利康公司(AstraZeneca))、舒尼替尼(
Figure BDA0001592936020000534
辉瑞公司(Pfizer)/Sugen公司(Sugen))、来曲唑(
Figure BDA0001592936020000535
诺华公司(Novartis))、甲磺酸伊马替尼(
Figure BDA0001592936020000536
诺华公司)、菲那酸酯(finasunate)(
Figure BDA0001592936020000537
诺华公司)、奥沙利铂(
Figure BDA0001592936020000538
赛诺菲公司(Sanofi))、5-FU(5-氟尿嘧啶)、甲酰四氢叶酸、雷帕霉素(西罗莫司，
Figure BDA0001592936020000539
惠氏公司(Wyeth))、拉帕替尼
Figure BDA00015929360200005310
GSK572016(葛兰素史克公司(Glaxo Smith Kline))、洛那法尼(SCH 66336)、索拉非尼(
Figure BDA00015929360200005311
拜尔实验室(BayerLabs))、吉非替尼(
Figure BDA00015929360200005312
阿斯利康公司)、AG1478，烷化剂如噻替哌和
Figure BDA00015929360200005313
环磷酰胺；烷基磺酸盐如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；吖丙啶如苄替哌、美妥替哌、卡波醌、和乌瑞替哌；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺包括六甲蜜胺、三乙撑蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三甲基邻三聚氰胺(trimethylomelamine)；乙酰基蛋白(特别是膨松素(bullatacin)和布鲁啉酮(bullatacinone))；喜树碱(包括拓扑替康和伊立替康)；苔藓抑素；卡利他汀；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；念珠藻素(特别是自念珠藻环肽1和自念珠藻环肽8)；肾上腺皮质激素(包括泼尼松和泼尼松龙)；环丙孕酮乙酸酯；5α-还原酶(包括非那雄胺和度他雄胺)；伏立诺他、罗米地辛、帕比司他、丙戊酸、莫西司他、多拉司他汀；阿地白介素、滑石多卡霉素(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素；水鬼蕉碱；匍枝珊瑚醇；软海绵素；氮芥如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、双氯乙基甲胺、盐酸氧氮芥、美法仑、新恩比兴(novembichin)、苯芥胆甾醇、泼尼氮芥(prednimustine)、曲磷胺、乌拉莫司汀；亚硝基脲如卡莫司汀、吡葡亚硝脲、福莫司汀、洛莫司丁、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素如烯二炔抗生素(例如，卡奇霉素，特别是卡奇霉素γ1I和卡奇霉素ω1I(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.199433:183-186)；达内霉素包括达内霉素A；二膦酸盐如氯屈膦酸；埃斯培拉霉素；以及新抑癌蛋白发色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素发色团)、放线菌素、阿柔比星、安曲霉素、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素c、卡拉比星(carabicin)、洋红霉素、嗜癌菌素、色霉素、放线菌素d、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素(多柔比星)、吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、马赛罗霉素、丝裂霉素如丝裂霉素C、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、甲基丝裂霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、块菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢剂如氨甲喋呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物如二甲叶酸、氨甲喋呤、氨蝶并蝶呤、三甲曲沙；嘌呤类似物如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物如安西他宾、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他宾、氮尿苷；雄激素如卡鲁睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酪；抗肾上腺如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；二氢嘧啶脱氢酶灭活剂；安吖啶；阿莫司汀(bestrabucil)；比生群；乙茎去氮氨蝶呤(edatraxate)；磷胺氮芥(defofamine)；秋水仙胺；亚丝醌；依氟鸟氨酸碱盐酸盐(elfornithine)；依利醋铵；大环内酯；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇菌多糖；氯尼达明；类美坦西醇，例如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；二胺硝吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；
Figure BDA0001592936020000551
多糖复合物(JHSNatural Products，Eugene，Oreg.)；雷佐生；根霉素；西佐喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；单端孢菌毒素(特别是T-2毒素、疣孢漆斑霉素A、露湿漆斑霉素A和蛇形菌素(anguidine))；氨基钾酸酯；长春地辛；达卡巴嗪；盐酸甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；胍血生；卡胞核嘧啶(gacytosine)；阿糖胞苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替哌；紫杉烷如TAXOL(紫杉醇；新泽西州普林斯顿的布里斯托-迈尔斯施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，NJ))、
Figure BDA0001592936020000552
(无克列莫佛)、紫杉醇的白蛋白工程纳米粒子制剂(美国制药合作伙伴，绍姆堡，111.)、和
Figure BDA0001592936020000553
(多西他赛、烯紫杉醇；赛诺菲-安万特(Sanofi-Aventis))；苯丁酸氮芥；
Figure BDA0001592936020000554
(吉西他滨)；巯基嘌呤；6-硫鸟嘌呤；氨甲喋呤；铂类似物如顺铂和卡铂；长春碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；
Figure BDA0001592936020000555
(长春瑞滨)；诺肖林；替尼泊苷；依达曲沙；道诺霉素；氨喋呤；卡培他滨
Figure BDA0001592936020000556
伊班膦酸钠；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄醇如视黄酸；以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸和衍生物。
化疗剂还包括(i)用于调节或抑制激素对肿瘤作用的抗激素剂，例如抗雌激素剂和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包含例如他莫昔芬(包括NOLVADEX；柠檬酸他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、艾多昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮和
Figure BDA0001592936020000557
(托瑞米芬柠檬酸盐)；(ii)肾上腺中调节雌激素生成的芳香化酶抑制剂，例如4(5)-咪唑、氨鲁米特、
Figure BDA0001592936020000561
(乙酸甲地孕酮)、
Figure BDA0001592936020000562
(依西美坦；辉瑞公司)、法倔唑、福司曲星(formestanie)、
Figure BDA0001592936020000563
(伏氯唑)、
Figure BDA0001592936020000564
(来曲唑；诺华公司)和
Figure BDA0001592936020000565
(阿那曲唑；阿斯利康公司)；(iii)抗雄激素药如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮脯利特和戈舍瑞林；布舍瑞林、曲匹瑞林(tripterelin),乙酸甲羟孕酮、己烯雌酚、普雷马林、氟羚甲基睾丸素、所有的反式视黄酸、芬维A胺以及曲沙他滨(1，3-二氧戊烷核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是在牵涉异常细胞增殖的信号转导通路中抑制基因表达的那些反义寡核苷酸，例如，PKC-α、Ralf和H-Ras；(vii)核酶如VEGF表达抑制剂(例如，
Figure BDA0001592936020000566
)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗如基因疗法疫苗，例如例如，
Figure BDA0001592936020000567
和
Figure BDA0001592936020000568
rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂如
Figure BDA0001592936020000569
rmRH；和(ix)上述任何一个的药学上可接受盐、酸和衍生物。
化学治疗剂还包括抗体如阿来组单抗(Campath)、贝伐单抗(
Figure BDA00015929360200005610
基因泰克公司)；西妥昔单抗(
Figure BDA00015929360200005611
因克隆公司(Imclone))；帕尼单抗(
Figure BDA00015929360200005612
安进公司(Amgen))、利妥昔单抗(
Figure BDA00015929360200005613
基因泰克公司/百集公司(Biogen Idee))、帕妥珠单抗(
Figure BDA00015929360200005614
2C4，基因泰克公司)、托西莫单抗(Bexxar，Corixa公司(Corixia))、曲妥单抗(
Figure BDA00015929360200005615
基因泰克公司)、以及抗体药物缀合物吉姆单抗奥佐米星(
Figure BDA00015929360200005616
惠氏公司)。作为与本发明的化合物组合的具有治疗潜力的其它人源化单克隆抗体包括：阿泊珠单抗、阿塞珠单抗、阿特立珠单抗(atlizumab)、巴匹珠单抗、比伐妥珠单抗、莫坎妥珠单抗、西利珠单抗、赛妥珠单抗、西弗斯妥珠单抗、西妥珠单抗、达克珠单抗、艾库组单抗、依法利珠单抗、依帕珠单抗、厄利珠单抗、非维珠单抗、芳妥珠单抗(fontolizumab)、吉妥珠单抗奥唑米星、奥英妥珠单抗、易普利姆玛(ipilimumab)、拉贝珠单抗(Iabetuzumab)、林妥珠单抗、马妥珠单抗、美泊利单抗、莫维珠单抗、莫托珠单抗(motovizumab)、那他珠单抗、尼妥珠单抗、诺洛维珠单抗、努马维珠单抗、厄克利珠单抗、奥马珠单抗、帕利珠单抗、帕考珠单抗、帕氟珠单抗、帕妥珠单抗、培克珠单抗、拉里珠单抗(ralivizumab)，兰尼单抗、热利维珠单抗、瑞利珠单抗、热西维珠单抗、罗维珠单抗、鲁利单抗、西罗珠单抗、希普利珠单抗、索土珠单抗、他珠单抗四氢西泮、他度珠单抗、他利珠单抗、特非珠单抗、托珠单抗、托利珠单抗、西莫白介素单抗、图库斯珠单抗、乌吗维珠单抗、乌珠单抗、乌斯克努单抗、维西珠单抗，和抗白细胞介素-12(ABT-874/J695，惠氏研究和雅培实验室(Wyeth Research and AbbottLaboratories))，其是这是一种重组专有的人类序列，经过基因修饰可识别白细胞介素-12p40蛋白的全长IgG1λ抗体。
化疗剂还包括“EGFR抑制剂”，其是指与EGFR结合或直接相互作用EGFR并防止或降低其信号活性的化合物，并且可选地被称为“EGFR拮抗剂”。这样的试剂的例子包括与EGFR结合的抗体和小分子。与EGFR结合的抗体包括MAb 455(ATCC CRL HB8507)、MAb 579(ATCCCRL HB 8506)、MAb 225(ATCC CRL 8508)，MAb 528(ATCC CRL 8509)(参见美国专利号第4,943，533，Mendelsohn等)和其变体，如嵌合的225(C225或西妥昔单抗；
Figure BDA0001592936020000571
)和重构的人类225(H225)(参见WO 96/40210，因克隆系统公司)；IMC-11F8，完全人类的EGFR靶向的抗体(因克隆公司)；与II型突变体EGFR结合的抗体(美国专利号第5,212,290)；美国专利号第5,891,996中描述的与EGFR结合的人源化和嵌合抗体；和与EGFR结合的人类抗体，如ABX-EGF或帕尼单抗(参见WO98/50433，阿布吉尼公司(Abgenix)/安进公司)；EMD 55900(Stragliotto等《欧洲癌症杂志(Eur.J.Cancer)》32A:636-640(1996))；EMD7200(马妥珠单抗)直接针对EGFR的人源化的EGFR抗体，对于EGFR结合，其与EGF和TGF-alpha均竞争(EMD/默克公司(Merck))；人类EGFR抗体，HuMax-EGFR(基麦公司(Genmab))；作为El.l、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.l l、E6.3和E7.6.3的完全人类抗体，并在美国专利US6,235,883中描述；DX-447(麦得莱克斯公司(Medarex Inc))；和mAb806或人源化mAb 806(Johns等，《生物化学杂志(J.Biol.Chem.)》279(29):30375-30384(2004))。抗EGFR抗体可以与细胞毒性剂缀合，从而产生免疫缀合物(参见例如，EP 659 439A2，默克专利有限公司(Merck PatentGmbH))。EGFR拮抗剂包括小分子如美国专利号第5,616,582、5,457,105、5,475,001、5,654,307、5,679,683、6,084,095、6,265,410、6,455,534、6,521,620、6,596,726、6,713,484、5,770,599、6,140,332、5,866,572、6,399,602、6,344,459、6,602,863、6,391,874、6,344,455、5,760,041、6,002,008、和5,747,498，以及下述PCT公开：WO98/50038、WO98/14451、WO99/09016、和WO 99/24037中描述的化合物。具体的小分子EGFR拮抗剂包括OSI-774(CP-358774，埃罗替尼，
Figure BDA0001592936020000581
基因泰克公司/OSI药物公司)；PD 183805(CI 1033，2-丙烯酰胺，N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-6-喹唑啉基]-，二盐酸盐，辉瑞公司)；ZD1839、吉非替尼
Figure BDA0001592936020000582
4-(3'-氯-4'-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉丙氧基)喹唑啉、阿斯利康公司)；ZM 105180((6-氨基-4-(3-甲基苯基-氨基)-喹唑啉，Zeneca)；BIBX-1382(N8-(3-氯-4-氟-苯基)-N2-(l-甲基-哌啶-4-基)-嘧啶并[5,4-d]嘧啶-2,8-二胺、勃林格殷格翰公司(Boehringer Ingelheim))；PKI-166((R)-4-[4-[(l-苯乙基)氨基]-lH-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-苯酚)；(R)-6-(4-羟苯基)-4-[(l-苯乙基)氨基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶)；CL-387785(N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁酰胺)；EKB-569(N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-4-(di甲基氨基)-2-丁烯酰胺)(惠氏公司)；AG1478(辉瑞公司)；AG1571(SU 5271；辉瑞公司)；双EGFR/HER2酪氨酸激酶抑制剂如拉帕替尼(
Figure BDA0001592936020000583
GSK572016或N-[3-氯-4-[(3-氟苯基)甲氧基]苯基]-6[5[[[2甲基磺酰基)乙基]氨基]甲基]-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺)。
化疗剂还包括“酪氨酸激酶抑制剂”，包括前段所述的EGFR靶向药物；小分子HER2酪氨酸激酶抑制剂如TAK165(获得自武田制药(Takeda))；CP-724,714，ErbB2受体酪氨酸激酶的口服选择性抑制剂(辉瑞公司和OSI公司)；双-HER抑制剂如EKB-569(获得自惠氏公司)其优选地与EGFR结合但抑制HER2和EGFR-过表达细胞；拉帕替尼(GSK572016；获得自葛兰素史克公司)，口服HER2和EGFR酪氨酸激酶抑制剂；PKI-166(获得自诺华公司)；全HER抑制剂如卡纽替尼(CI-1033；法玛西亚公司(Pharmacia))；Raf-1抑制剂如反义试剂ISIS-5132，获得自ISIS药物公司，其抑制Raf-1信号；非HER靶向TK抑制剂如甲磺酸伊马替尼(
Figure BDA0001592936020000591
获得自葛兰素史克公司)；VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂如瓦他拉尼(PTK787/ZK222584，获得自诺华公司/先灵公司(Schering AG))；多靶向酪氨酸激酶抑制剂如舒尼替尼(
Figure BDA0001592936020000592
获得自辉瑞公司)；MAPK胞外调节激酶I抑制剂CI-1040(获得自法玛西亚公司)；喹唑啉如PD153035,4-(3-氯苯胺)喹唑啉；吡啶并嘧啶；嘧啶并嘧啶；吡咯并嘧啶如CGP 59326、CGP60261和CGP 62706；吡唑并嘧啶、4-(苯基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶；姜黄素(二阿魏酰甲烷，4,5-双(4-氟苯胺基)苯邻二甲酰亚胺)；含有硝基噻吩部分的酪氨酸磷酸化抑制剂；PD-0183805(华纳兰伯特公司(Warner-Lamber))；反义分子(例如那些结合编码HER的核酸)；喹喔啉(美国专利号第5,804,396)；酪氨酸磷酸化抑制剂(tryphostins)(美国专利号第5,804,396)；ZD6474(阿斯利康公司)；PTK-787(诺华公司/先灵公司)；全HER抑制剂如CI-1033(辉瑞公司)；Affinitac(ISIS 3521；Isis/Lilly)；甲磺酸伊马替尼(GLEEVEC)；P I166(诺华公司)；GW2016(葛兰素史克公司)；CI-1033(辉瑞公司)；EKB-569(惠氏公司)；塞马悉尼(辉瑞公司)；ZD6474(阿斯利康公司)；PTK-787(诺华公司/先灵公司)；INC-lCl l(因克隆公司)、雷帕霉素(西罗莫司，
Figure BDA0001592936020000593
)；或如以下任何专利公开中所述：美国专利号第5,804,396；WO1999/09016(美国氰氨公司)；WO1998/43960(美国氰氨公司)；WO1997/38983(华纳兰伯特)；WO1999/06378(华纳兰伯特)；WO1999/06396(华纳兰伯特)；WO1996/30347(辉瑞公司)；WO1996/33978(捷利康公司)；WO1996/3397(捷利康公司)和WO1996/33980(捷利康公司)。
本发明进一步提供了制备如上文所定义的组合产品的方法，该方法包括如上文定义的本发明的化合物或药学上可接受的酯、酰胺、溶剂合物或盐与可用于治疗癌症和/或增殖性疾病的其他治疗剂和至少一种药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体的结合。
通过“结合”，我们的意思是这两个组成部分被认为适合于彼此联合给予。
因此，关于如上文所定义的部分的试剂盒的制备方法，通过将两个组分“结合”，我们包括部分的试剂盒的两个组分可以是：
(i)作为单独的制剂(即彼此独立)提供，随后将它们一起联合用于彼此联合治疗；或
(ii)作为“组合包”的单独组分一起包装和呈现，以在组合疗法中彼此联合使用。
本发明的化合物可以根据病症、待治疗的患者以及给药途径，以不同的治疗有效剂量给予有需要的患者。然而，在本发明的上下文中给予哺乳动物特别是人的剂量应该足以在合理的时间范围内在哺乳动物中实现治疗响应。本领域技术人员将认识到精确剂量和组合物以及最合适的递送方案的选择还将受到但不限于制剂的药理学性质、被治疗病症的性质和严重程度、受体的身体状况和精神敏感度、以及特定化合物的效力、待治疗的患者的年龄、状况、体重、性别和反应、以及疾病的阶段/严重程度的影响。
给药可以是连续的或间歇的(例如通过弹丸式注射)。剂量也可以通过给药的时间和频率来确定。在口服或肠胃外给药的情况下，剂量可以以每天约0.01mg至约1000mg的本发明的化合物来变化。
无论如何，医学从业者或其他技术人员将能够常规地确定最适合于个体患者的实际剂量。上述剂量是平均情况的示例；肯定有应采用较高或较低剂量的个体情况，但它们均应落入本发明范围。
本发明的化合物可具有它们作为蛋白激酶(例如CDK8和/或单激酶)的有效抑制剂的优点。有利的是，本发明的化合物可以选择性地抑制某些蛋白激酶(例如CDK8和/或单激酶)，而不显示其他蛋白质或脂质激酶的抑制(或显著抑制)。例如，本发明的化合物可以是某些蛋白质或脂质激酶的选择性抑制剂。选择性抑制剂可以是有用的，因为与选择性较低的抑制剂相比，与这些化合物相关的副作用的数量减少。作为选择性抑制剂的化合物可以通过在453-468激酶组(来自DiscoveRx的KINOMEscan TM)中筛选来鉴定。例如，选择性抑制剂可显示S(20)＜0.05的选择性得分。
选择性分数(或S分数)是化合物选择性的定量性度量。它是通过将化合物结合的激酶数除以测试的不同激酶总数(即S＝命中数/试验数)而计算的。S(20)＝(符合效能阈值的激酶数量：[＜对照测试的20％])/(测试的激酶总数)。实施例43的化合物是高选择性化合物的一个例子。在468种激酶的一组中(使用来自DiscoveRx的KINOMEscanTM方法)，该化合物的S(20)结果为0.038。
本发明的化合物还可以具有这样的优点，它们与现有技术中已知的化合物相比可能更有效，毒性更小，效果更长，效果更强，副作用更少，更容易吸收，和/或具有更好的药代动力学特征(例如较高的口服生物利用度和/或较低的清除率)，和/或具有其他有用的药理学、物理学或化学性质，无论是用于上述适应症还是其他方面。特别在本发明的化合物是某些激酶的选择性抑制剂(例如CDK8的选择性抑制剂)的情况下。
本发明的化合物可能是有益的，因为它们是具有靶向治疗的药物，即通过干扰或抑制其特定分子实体(例如，在这种情况下通过抑制如上所述的蛋白激酶)来靶向特定分子实体。因此，本发明的化合物也可以具有这样的益处，即它们具有新的效果(例如与现有技术中的已知化合物相比)，例如新的效果可能是特定的作用模式或靶向治疗的其他效果。靶向疗法可能是有益的，因为它们可能具有期望的效果(例如通过减少肿瘤生长或致癌作用来减少癌症如结肠/结肠直肠癌)，但也可以具有减少副作用的优点(例如通过防止使用例如化疗可能发生的杀死正常细胞)。
此外，与其他已知的蛋白质或脂质激酶相比，本发明的化合物可以选择性靶向特定的蛋白激酶(例如CDK8和/或单激酶)。因此，本发明的化合物可以具有这样的优点，即可以通过使用该化合物作为单一药剂或与目前的疗法组合来对某些特定的癌症(例如结肠/结肠直肠癌)进行选择性治疗，所述选择性治疗也可以具有减少副作用的效果。
实施例/生物测试
CDK8/细胞周期蛋白C结合试验
结合试验依赖于LanthaScreenTM Eu-激酶结合测定(英杰公司(Invitrogen))。这是基于测定激酶活性位点处ATP竞争性激酶抑制剂(激酶示踪剂236，PV5592)的
Figure BDA0001592936020000621
647偶联物的结合和置换的激酶试验平台。示踪剂与激酶的结合通过添加铕(Eu)标记的抗His抗体(英杰公司PV 5596)来对感兴趣的激酶进行特异性标记，以此来检测。这种结合导致高度的荧光共振能量转移(FRET)，而用激酶抑制剂置换示踪剂导致FRET损失。
已经从英杰公司购买了该酶(PV4402)作为全长His标签重组人蛋白质的二聚体。
测定条件如试剂盒制造商所示，具有以下改变：
●试验缓冲液：50mM HEPES，pH 7.5，1mM EGTA，0.01％Brij-35，10mM MgCl2
●试验体积：25μl
●培育时间和温度：25℃下60分钟
●Cdk8-细胞周期蛋白C浓度：5nM
●示踪剂浓度：10nM
●(Eu)标记的抗His抗体浓度：1.5nM
●测试化合物：连续1：3稀释
●试验中的最终DMSO浓度：1％
测定在384孔板中进行。使用EnVision读板仪(帕金埃尔默公司(Perkin-Elmer))生成最终读数。通过将受体/示踪剂发射(665nm)除以抗体/供体发射(615nm)来计算发射比率。
CDK19/细胞周期蛋白C结合试验
结合试验依赖于LanthaScreenTM Eu-激酶结合测定(英杰公司)。这是基于测定激酶活性位点处ATP竞争性激酶抑制剂(激酶示踪剂236，PV5592)的
Figure BDA0001592936020000631
647偶联物的结合和置换的激酶试验平台。示踪剂与激酶的结合通过添加铕(Eu)标记的抗His抗体(英杰公司PV 5596)来对感兴趣的激酶进行特异性标记，以此来检测。这种结合导致高度的荧光共振能量转移(FRET)，而用激酶抑制剂置换示踪剂导致FRET损失。
已经从蛋白激酶公司(Prokinase)(1384-0390-1)购买了该酶作为GST-His-CDK19和His-细胞周期蛋白C重组人蛋白质的二聚体。
测定条件如试剂盒制造商所示，具有以下改变：
●试验缓冲液：50mM HEPES，pH 7.5，1mM EGTA，0.01％Brij-35，10mM MgCl2
●试验体积：20μl
●培育时间和温度：25℃下60分钟
●Cdk19-细胞周期蛋白C浓度：2nM
●示踪剂浓度：20nM
●(Eu)标记的抗GST抗体浓度：2nM
●测试化合物：连续1：3稀释
●试验中的最终DMSO浓度：1％
测定在384孔板中进行。使用EnVision读板仪(帕金埃尔默公司)生成最终读数。通过将受体/示踪剂发射(665nm)除以抗体/供体发射(615nm)来计算发射比率。
单激酶激酶试验
激酶试验依赖于ADP-GloKM生化激酶测定(普洛麦格公司(Promega))。这是一种发光激酶试验法，其测量由激酶反应形成的ADP。然后ADP被转化为ATP，通过Ultra-GloTM荧光素酶将其转化为光信号。发光信号与激酶活性正相关。该测定法对内在的ATP酶活性(在不存在肽底物作为磷酸盐受体的情况下)进行测量。
从英杰公司(PV5708)购买该酶作为GST标记的重组人蛋白的激酶结构域。
测定条件如试剂盒制造商所示，具有以下改变：
●试验缓冲液：15mM HEPES pH 7.4，20mM NaCl，1mM EGTA，0.02％Tween 20，10mMMgCl2，0.1mg/ml BGG
●试验体积：20μl
●培育时间和温度：30℃下60分钟
●单激酶浓度：20nM
●ATP浓度：150M
●测试化合物：连续1：3稀释
●试验中的最终DMSO浓度：1％
测定在384孔板中进行。使用EnVision读板仪(帕金埃尔默公司)生成最终读数。将发光相对单位针对每种化合物所包括的对照活性(即，100％单激酶活性，无化合物)进行标准化，并计算抑制百分比。
测定β-联蛋白转录活性的报告基因系统
在发光报告基因试验中测量本发明的化合物抑制CDK8驱动的β联蛋白转录活性的效力。
TOPFlash萤光素酶报告基因系统已被用作检测β-联蛋白驱动的转录激活的标准。使用的报告基因是6X TOPFlash报告基因，它包含6个TCF/LEF-1结合位点，位于驱动萤火虫萤光素酶表达的最小启动子上游。将在增强子区域中的海肾荧光素酶开放框的上游含有突变的TCF位点的FOPFlash报告基因用作阴性对照，以显示萤光素酶活性的变化具体是由于β-联蛋白转录活性(普洛麦格公司)引起的。用
Figure BDA0001592936020000651
萤光素酶试验系统(普洛麦格公司)完成检测；这是一种均质的试剂系统，可以快速简单地定量来自单个样品中两个报告基因的稳定发光信号。这种方便的“添加和读取”系统从尚未预处理或预裂解的细胞中产生萤火虫和海肾荧光素酶发光信号。该测定在96孔板中进行，使其适合于自动化高通量筛选(HTS)。
方案
将HTC116结肠癌细胞接种到96孔板中，每孔15000个细胞，并在37℃、5％CO2下培育16小时。在第二天，使用Effectene反应性(Quiagen)和TOPFlash和FOPFlash萤光素酶报道基因质粒来转染细胞。在正常生长条件下将细胞与转染复合物培育5小时。在96孔板中在DMSO中制备8个连续的1：3化合物稀释液。使用FX BECKMAN机器人(贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter))一式两份地将化合物添加至96孔细胞板中的孔中，并在37℃和CO2气氛下培育过夜。第三天，使用
Figure BDA0001592936020000652
萤光素酶试验系统(普洛麦格公司)测量β-联蛋白转录活性的抑制并在VICTOR(帕金埃尔默)上读数。使用IDBS的ActivityBase计算EC50值。
细胞的CDK8抑制试验
使用蛋白质印迹试验筛选化合物抑制细胞内CDK8的能力来检测IFN-γ处理的细胞中CDK8底物STAT1(S727)的磷酸化。将SW620细胞以每孔1×106个细胞铺板在补充有10％胎牛血清(西格玛奥德里奇F7524)，以1：100稀释的青霉素/链霉素溶液(吉布科公司15070-063)和两性霉素B(fungizone)(吉布科公司，15290-018)的RPMI培养基(西格玛奥德里奇R6504)的6孔板(Solmeglas 13118)中，并使其在37℃下在5％CO2中粘附过夜。然后将化合物以10倍连续稀释的最终浓度10μM加入到细胞培养基中，并在37℃、5％CO2下培育细胞。1小时后，加入IFNγ(R&D系统，参考文献RYD-285-IF-100)至最终浓度为50μg/ml。用IFNγ处理3小时后，将细胞在PBS中洗涤、加入100μl蛋白质裂解缓冲液(62.5mM Tris pH 6.8，6.25％，2％SDS和10％甘油)室温下培育10分钟并在95℃加热10分钟进行裂解。通过DC蛋白测定法(伯乐公司(Biorad)，参考文献5000116)确定裂解物的蛋白质含量。通过SDS-PAGE解析蛋白质并转移至硝酸纤维素膜(VWR国际欧洲实验室(VWR International eurolab)，参考文献732-4007)。在4℃下、与对总STAT1(BD转导实验室(BD Transduction laboratory)#610115)、磷酸丝氨酸-727STAT1(细胞信号参考文献9177)具有特异性的抗体中将膜培育过夜，然后洗涤，之后用IRDye800偶联的抗小鼠(Pierce/Cultek，35521)和Alexa Fluor 680山羊抗兔IgG二抗(英杰公司，A21076)培育。使用Odyssey红外成像系统(LI-COR生物科学公司(Li-Cor Biosciences))使谱带可视化和量化。用IFNγ处理的细胞中磷酸化的STAT1与总STAT1的百分比被认为是磷酸化的百分比。最终将STAT1磷酸化的百分比对每种化合物的浓度作图，并使用来自IDBS的ActivityBase计算细胞内CDK8抑制的EC50。
可以在10％FBS中生长的细胞中筛选内源磷酸化STAT1抑制。如前所述对细胞进行铺板并用前述化合物处理8小时。然后裂解细胞并如前所述评估磷酸化STAT1。用DMSO处理的细胞中磷酸化的STAT1与总STAT1的百分比被认为是磷酸化的百分比。最终将STAT1磷酸化的百分比对每种化合物的浓度作图，并使用来自IDBS的ActivityBase计算细胞内CDK8抑制的EC50。
细胞的单激酶抑制试验
使用蛋白质印迹试验筛选化合物抑制细胞内单激酶的能力来检测同步细胞中单激酶底物H3T3的磷酸化。将SW620细胞以每孔200000个细胞铺板在补充有10％胎牛血清(西格玛奥德里奇F7524)的RPMI培养基(西格玛奥德里奇R6504)，以1：100稀释的青霉素/链霉素溶液(吉布科公司15070-063)和两性霉素B(吉布科公司，15290-018)的6孔板(Solmeglas13118)中，并使其在37℃下在5％CO2中粘附过夜。然后用Nocadazole(西格玛奥德里奇公司M1404)以250ng/ml处理细胞16小时以使它们停滞在有丝分裂中。加入蛋白酶体抑制剂MG132(西格玛奥德里奇公司C2211)至最终浓度为10nM以保持细胞停滞在有丝分裂中。然后将化合物以10倍连续稀释的最终浓度10μM加入到细胞培养基中，并在37℃、5％CO2下培育细胞。用化合物处理1小时30分钟后，将细胞在PBS中洗涤、加入100μl的蛋白质裂解缓冲液(62.5mM Tris pH 6.8，6.25％，2％SDS和10％甘油)室温下培育10分钟并在95℃加热10分钟进行裂解。通过DC蛋白测定法(伯乐公司(Biorad)，参考文献5000116)确定裂解物的蛋白质含量。通过SDS-PAGE解析蛋白质并转移至硝酸纤维素膜(VWR国际欧洲实验室(VWRInternational eurolab)，参考文献732-4007)。在4℃下、与对总H3(密理博公司(Millipore)#07424)、磷酸化苏氨酸—3H3(细胞信号参考文献14269)具有特异性的抗体中将膜培育过夜，然后洗涤，之后用IRDye800偶联的抗小鼠(Pierce/Cultek，35521)和AlexaFluor 680山羊抗兔IgG二抗(英杰公司，A21076)培育。使用Odyssey红外成像系统(LI-COR生物科学公司(Li-Cor Biosciences))使谱带可视化和量化。同步细胞中磷酸化的H3与总H3的百分比被认为是磷酸化的百分比。最终将H3磷酸化的百分比对每种化合物的浓度作图，并使用来自IDBS的ActivityBase计算细胞内单激酶抑制的EC50。
可以在10％FBS中生长的细胞中筛选内源磷酸化H3抑制。如前所述对细胞进行铺板并用前述化合物处理8小时。然后裂解细胞并如前所述评估磷酸化H3。用DMSO处理的细胞中磷酸化的H3与总H3的百分比被认为是磷酸化的百分比。最终将H3磷酸化的百分比对每种化合物的浓度作图，并使用来自IDBS的ActivityBase计算细胞内单激酶抑制的EC50。
集落形成试验
通过集落形成试验测定化合物的体外效力。将处于对数增长阶段的SW620细胞以每孔800个细胞铺板在补充有10％胎牛血清(西格玛奥德里奇F7524)，以1：100稀释的青霉素/链霉素溶液(吉布科公司15070-063)和两性霉素B(吉布科公司，15290-018)的RPMI培养基(西格玛奥德里奇R6504)的6孔板(Solmeglas 13118)中，并使其在37℃下在5％CO2中粘附过夜。然后将化合物以10倍连续稀释的最终浓度10μM加入到细胞培养基中，并在37℃、5％CO2下培育细胞。每三天用新鲜培养基更换培养基，并再次添加化合物。11天后，将集落用PBS洗涤并固定在0.5％结晶紫(西格玛奥德里奇公司参考文献V5265)、6％戊二醛(西格玛奥德里奇公司参考文献G5882)中30分钟。充分洗涤后，将集落溶于2ml的10％冰醋酸(西格玛奥德里奇公司参考文献537020)中，并在Victor 1420多标记计数器(帕金埃尔默公司)中测定590nm处的吸光度。将用DMSO处理的细胞中的吸光度取为增殖的百分比。最终将增殖的百分比对每种化合物的浓度作图，并使用来自IDBS的ActivityBase计算集落形成抑制的EC50。
细胞周期试验
可使用碘化丙啶测定法和流式细胞术分析法来筛选化合物影响细胞周期的能力。将SW620以每孔500000个细胞铺板在补充有10％胎牛血清(西格玛奥德里奇F7524)，以1：100稀释的青霉素/链霉素溶液(吉布科公司15070-063)和两性霉素B(吉布科公司，15290-018)的RPMI培养基(西格玛奥德里奇公司R6504)的6孔板(Solmeglas 13118)中，并使其在37℃下在5％CO2中粘附过夜。然后将细胞用最终浓度为5、2.5、1和0.5μM的化合物处理24小时。通过胰蛋白酶消化收集细胞并在1250rpm下离心，并用PBS(西格玛公司(Sigma)参考文献D8537)洗涤。将细胞用70％冷乙醇(默克公司(Merck)参考文献100983)固定并保持在4℃下至少12小时。离心后，用PBS洗涤细胞，用0.2mg/mL RNA酶(凯杰公司(Qiagen)参考文献1007885)和0.02mg/mL碘化丙锭(西格玛公司参考文献P4864)的溶液染色DNA。在黑暗中于室温培育30分钟后，通过FACSCaliburTM(BD生物科学公司)和Flowjo软件分析细胞。
体外细胞增殖试验
通过购自威斯康星州麦迪逊的普洛麦格公司的细胞增殖试验
Figure BDA0001592936020000691
发光细胞活力试验来测定化合物的体外效力。这种均相测定方法基于鞘翅目萤光素酶(US5583024；US 5674713；US 5700670)的重组表达并基于定量存在的ATP(所述代谢活性细胞的指示剂)来确定培养物中活细胞的数量(Crouch等(1993)《免疫学方法杂志(J.Immunol.Meth.)》160：81-88；US 6602677)。
Figure BDA0001592936020000692
试验在96孔板中进行，使其适用于自动化高通量筛选(HTS)(Cree等(1995)《抗癌药物(AntiCancer Drugs)》6：398-404)。
均相测定法包括将单一试剂(
Figure BDA0001592936020000693
试剂)直接添加到在补充有血清的培养基中培养的细胞中。不需要细胞洗涤、移除培养基和多次移液步骤。在加入试剂和混合10分钟后，系统以96孔的形式检测少至15个细胞/孔。
均质的“添加-混合-测定”形式导致细胞裂解并产生与ATP存在量成正比的发光信号。ATP的量与培养中存在的细胞数量直接成正比。
Figure BDA0001592936020000694
试验产生荧光素酶反应产生的“辉光型”发光信号，其半衰期通常大于5小时，取决于所使用的细胞类型和培养基。活细胞反映在相对发光单位(RLU)中。底物甲虫荧光素通过重组萤火虫荧光素酶进行氧化脱羧，伴随着ATP向AMP的转化并产生光子。延长的半衰期消除了使用试剂注射器的需要，并为连续或批量模式处理多块板提供了灵活性。该细胞增殖测定可以以各种多孔形式使用，例如96或384孔形式。数据可以通过光度计或CCD相机成像设备进行记录。发光输出呈现为相对光单位(RLU)，随时间测定。
组合试验
可以测试
Figure BDA0001592936020000701
体外细胞增殖试验中某些实例化合物和各种化疗剂的组合的组合指数(CI)。组合指数得分通过Chou和Talalay方法(CalcuSyn软件，拜软公司(Biosoft))计算。使用Chou和Talalay分级系统对协同作用的强度进行评分：CI小于0.8表示协同作用，0.8至1.2之间的CI表示加和性，CI大于1.2表示拮抗作用。
还计算代表性的组合的EC50值。将化疗剂和实施例化合物的单独测量的EC50值与组合的EC50值进行比较。用肿瘤类型来表征细胞系。组合试验如下进行：“Pim 1激酶抑制剂ETP-45299抑制细胞增殖并与PI3K抑制协同作用(Pim 1 kinase inhibitor ETP-45299suppresses cellular proliferation and synergizes with PI3K inhibition)”。Blanco-Aparicio,Carmen；Collazo,Ana Maria Garcia；Oyarzabal,Julen；Leal,Juan F.；Albaran,Maria Isabel；Lima,Francisco Ramos；Pequeno,Belen；Ajenjo,Nuria；Becerra,Mercedes；Alfonso,Patricia；Reymundo,Maria Isabel；Palacios,Irene；Mateos,Genoveva；Quinones,Helena；Corrionero,Ana；Carnero,Amancio；Pevarello,Paolo；Lopez,Ana Rodriguez；Fominaya,Jesus；Pastor,Joaquin；Bischoff,James R。《癌症快报(Cancer Letters)》，爱尔兰香农，2011,300(2),145-153。
体内靶调节研究
测量化合物的体内效力来确定人结肠异种移植物中的靶调节。对八周龄雌性无胸腺裸小鼠(HSD公司(Harlan Sprague Dawley Inc))皮下移植10×106个SW620人结肠癌细胞。当肿瘤达到200-400mm3的大小时，给小鼠口服5mg/kg的实施例43或载剂。给药后1、4、8和24小时后切除肿瘤(每个时间点n＝3只小鼠)，并进行处理用于Western印迹和HPLC/MS/MS，以确定肿瘤中实施例43的浓度。为了western印迹，切下肿瘤并在补充有1mM二硫苏糖醇(西格玛奥德里奇公司)、2mM TAME(西格玛奥德里奇公司)、5mM苯甲酰胺(西格玛奥德里奇公司)、10μg/ml抑肽酶(西格玛奥德里奇公司)、40μg/ml苯丁抑制素(西格玛奥德里奇公司)、10μg/ml亮抑酶肽(西格玛奥德里奇公司)、0.7μg/ml抑胃酶肽(西格玛奥德里奇公司)、1μg/ml胰蛋白酶抑制剂(西格玛奥德里奇公司)，1mg/ml pefablock(罗氏诊断(RocheDiagnostics))、和蛋白酶抑制剂混合物片剂(罗氏诊断)的500μl RIPA缓冲液(西格玛奥德里奇化学公司(Sigma Aldrich Chemical))中匀浆。匀浆后，将组织样品在冰上培育20分钟，然后在4℃下以12000x g离心10分钟两次。除去上清液并通过Bradford方法(伯乐公司蛋白质试验)测定蛋白质浓度。这些样品储存在-20℃下直到处理。如细胞CDK8抑制试验中所述，通过用于STAT1P/STAT1调节的western印迹对30-60μg的总蛋白提取物进行分析。为了确定肿瘤组织中实施例43的浓度，将肿瘤样品在3体积H2O中匀浆并超声处理5分钟，然后在2000g下离心5分钟。将上清液保存在4℃下直至处理。开发了特定的固相萃取方法以及LC-MS/MS分析和定量方法，达到1ng/ml的LLOQ。为了将组织浓度(ng/mL)转换成ng/g，假定组织密度为1。
通过以下实施例说明本发明，其中：
图1A至1C显示实施例43、70和73对处理11天的SW620细胞的集落形成试验的影响。图像显示了(1A)：实施例43，(1B)：实施例70，以及(1C)：实施例73的剂量依赖效应；
图2显示了实施例43对SW620细胞的细胞周期的影响；
图3和4显示了实施例43对体内CDK8活性的影响。图3中的直方图表示四个时间点的平均水平(ng/g组织)+标准偏差。图4显示P-STAT1的时间依赖性抑制(S727)。
实施例和实验
以下实施例说明本发明。
文中，术语“CCTLC”是指离心圆形薄层色谱，“DAD”是指二极管阵列检测器，“DCM”是指二氯甲烷，“DIPEA”是指二异丙基乙胺，“DME”是指1,2-二甲氧基乙烷，“DMF”是指二甲基甲酰胺，“eq”是指当量，“EtOAc”是指乙酸乙酯，“h”是指小时，“min”是指分钟，“HPLC”是指高效液相色谱，“MeOH”是指甲醇，“mw”是指微波，“nBuOH”是指正丁醇，“NMR”是指核磁共振，“Pd(PPh3)4”是指四(三苯基膦基)-钯，“THF”是指四氢呋喃，“CHCl3”是指氯仿，“PdCl2dppf”是指1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯化合物二氯甲烷复合物，“AcCN”是指乙腈，“Na2SO4”是指硫酸钠，“rt”是指室温，“c-Hex”是指环己烷，“CDCl3”是指氘代氯仿，“DMSO”是指二甲亚砜，“NaHCO3”是指碳酸氢钠，“H2O”是指水，“NaCl”是指氯化钠，“NH4Cl”是指氯化铵，“Na2S2O3”是指硫代硫酸钠，“EtOH”是指乙醇，“AcOH”是指乙酸，“KOH”是指氢氧化钾，“Na2CO3”是指碳酸钠，“aq”是指水溶液，“AlMe3”是指三甲基铝。
一般步骤：
NMR光谱记录在Bruker Avance II 300光谱仪和配有5mm QXI 700S4反相、Z-梯度单元和可变温度控制器的Bruker Avance II 700光谱仪中。
HPLC测量使用来自安捷伦科技(Agilent Technologies)的HP 1100进行，其包括具有脱气机的泵(二元)、自动取样器、柱温箱、二极管阵列检测器(DAD)和柱，如下面各个方法中所述。来自色谱柱的流量被分配到MS光谱仪。MS检测器配置有电喷雾电离源或API/APCI。使用氮气作为雾化器气体。采用ChemStation LC/MSD quad软件进行数据采集。
方法1
在Gemini-NX C18(100×2.0mm；5μm)上进行反相HPLC。
溶剂A：含有0.1％甲酸的水；溶剂B：含有0.1％甲酸的乙腈。梯度：50℃、DAD下8分钟内5％至100％的B
方法2
在Gemini-NX C18(100×2.0mm；5μm)上进行反相HPLC。
溶剂A：含0.1％甲酸的水；溶剂B：含有0.1％甲酸的乙腈。梯度：50℃、DAD下8分钟内5％至40％的B
方法3
在Gemini-NX C18(100×2.0mm；5μm)上进行反相HPLC。
溶剂A：含0.1％甲酸的水；溶剂B：含有0.1％甲酸的乙腈。梯度：50℃、DAD下8分钟内0％至30％的B。
方法4
在Gemini-NX C18柱(50×2mm，3μm)上进行反相HPLC。
溶剂A：含0.1％甲酸的水；溶剂B：含有0.1％甲酸的乙腈。梯度：50℃、DAD下4分钟内10％至95％的B。
方法5
在Gemini-NX C18柱(50×2mm，3μm)上进行反相HPLC。溶剂A：含0.1％甲酸的水；溶剂B：含有0.1％甲酸的乙腈。梯度：50℃、DAD下4分钟内0％至30％的B。
“发现质量”是指在HPLC-MS中检测到的最丰富的同位素。
中间体I的合成。
Figure BDA0001592936020000741
在0℃和氩气下向3-羟基吡啶(30g，315.456mmol，1eq)在DMF(158mL)中的溶液在5分钟内逐份加入60％NaH(12.62g，315.456mmol，1eq)。将反应在0℃下搅拌1h，然后加入氯甲基甲基醚(24mL，315.456mmol，1eq)，将该悬浮液在0℃搅拌2h，然后温热至室温并搅拌15h。缓慢加入饱和NaHCO3并将悬浮液搅拌30分钟并升温至室温。加入EtOAc并将混合物通过硅藻土过滤。分离有机层，再用EtOAc萃取水相。合并的有机层用H2O、饱和NaCl洗涤，用(Na2SO4)干燥，并且真空浓缩。用快速色谱(拜泰齐公司(Biotage)，c-Hex中0％至40％EtOAc)纯化残余物，得到淡黄色油(24.6g，收率：56％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝0.6,[M+H]+140.
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.37(d,J＝2.8Hz,1H),8.23(dd,J＝4.8,1.3Hz,1H),7.43(ddd,J＝8.5,2.8,1.3Hz,1H),7.32–7.23(m,1H),5.19–5.13(m,2H),3.46–3.39(m,3H)。
中间体II的合成。
Figure BDA0001592936020000742
在-78℃和氩气氛下，向中间体I(10.830g，77.828mmol，1eq)的THF(101.4mL)溶液中加入叔丁基锂(1.76M的戊烷溶液，92mL，155.656mmol，2eq)溶液。将反应在-78℃下搅拌1小时，并加入乙醛(7.4mL，132.308mmol，1.7eq)。反应在-78℃下搅拌3小时，然后升温至室温并在该温度下搅拌21h。通过加入饱和NH4Cl水溶液将反应淬灭，并用EtOAc(x3)萃取。合并的有机层用饱和NaCl洗涤，用(Na2SO4)干燥，并且真空浓缩得到橙色油。用快速色谱(拜泰齐公司，c-Hex中0％至80％EtOAc)纯化残余物，得到淡黄色油(8.0g，收率：56％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝0.4,[M+H]+184.
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.29(s,1H),8.18(d,J＝4.8Hz,1H),7.36(d,J＝4.8Hz,1H),5.15(d,J＝6.7Hz,2H),5.13–5.03(m,1H),3.44-3.37(m,3H),1.41(t,J＝6.4Hz,3H)。
中间体III的合成。
Figure BDA0001592936020000751
在室温下将戴斯-马丁氧化剂(18.521g，43.667mmol，1.6eq)加入到CHCl3(83mL)中的中间体II(5g，27.292mmol，1eq)和NaHCO3(6.878g，81.875mmol，3eq)的搅拌混合物中。16h后，加入1.0M Na2S2O3水溶液，将反应混合物搅拌90分钟，在EtOAc和1.0M Na2S2O3水溶液之间分配。分层，用1.0M Na2S2O3水溶液、水和盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤，并浓缩滤液。通过快速色谱法(拜泰齐公司，c-Hex/EtOAc)纯化残余物，得到4.255g所需化合物(收率：86.0％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝1.3,[M+H]+182.
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.56(s,1H),8.29(d,J＝4.8Hz,1H),7.39(d,J＝4.8Hz,1H),5.25(s,2H),3.45(s,3H),2.56(s,3H)。
中间体IV的合成。
Figure BDA0001592936020000752
向中间体III(6g，33.114mmol，1sq)的EtOH(96mL)溶液中加入5M盐酸(53mL)，并将混合物在室温下搅拌16h。蒸发溶剂，将残余物溶于MeOH中，并加入硅胶并蒸发。通过快速色谱(拜泰齐公司，0％至20％MeOH的DCM溶液)纯化，得到橙色固体(4.5g，99％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝0.7,[M+H]+138.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.58(s,1H),8.33(d,J＝4.9Hz,1H),7.80(d,J＝5.3Hz,1H),2.64(s,3H)。
中间体V的合成。
Figure BDA0001592936020000761
将中间体IV(4.5g，32.814mmol，1eq)、DIPEA(4.6mL，32.814mmol，1eq)、吡咯烷(4.1mL，49.221mmol，1eq)和丙酮(2.4mL，32.814mmol，1eq)在四氢呋喃(328mL)中的混合物在70℃下在压力管中加热16h。将反应浓缩并通过快速色谱法(拜泰齐公司，c-Hex中0％至30％EtOAc)纯化残余物，得到白色固体(1.825mg，收率：31％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.0,[M+H]+178.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.42(s,1H),8.22(d,J＝5.0Hz,1H),7.49(dd,J＝5.0,0.7Hz,1H),2.86(s,2H),1.34(s,6H)。
中间体VI的合成。
Figure BDA0001592936020000762
向中间体V(1g，5.643mmol，1eq)的MeOH(56ml)溶液中加入三乙胺(1.573mL，11.287mmol，2eq)和盐酸羟胺(784mg，11.287mmol，2eq)。将反应混合物在室温下搅拌16h。然后，将反应浓缩，得到白色固体(912mg，收率：84％)。残余物无需进一步纯化即可用于下一步骤。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝0.8,[M+H]+193.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ11.73(s,1H),8.14(s,1H),8.04(d,J＝5.1Hz,1H),7.54(d,J＝5.3Hz,1H),2.76(s,2H),1.26(s,6H)。
中间体VII的合成。
Figure BDA0001592936020000771
在0℃下向中间体VI(900mg，4.682mmol，1eq)在DCM(38ml)中的溶液中加入三乙胺(131μl，0.936mmol，0.2eq)和丙炔酸甲酯(787μl，9.364mmol，2eq)，反应变成橙色。将混合物在室温下搅拌1h。加入冰水并用DCM(x3)萃取。将有机相干燥(Na2SO4)，蒸发，残余物通过快速色谱(拜泰齐公司，c-Hex中0％至50％EtOAc)纯化，得到期望的化合物(1.250g，97％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.2,[M+H]+277.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.33(s,1H),8.19(d,J＝5.1Hz,1H),7.76(dd,J＝5.1,0.6Hz,1H),5.80(d,J＝1.1Hz,1H),5.76(t,J＝1.0Hz,1H),3.66(s,3H),3.33(s,2H),1.39(s,6H)。
中间体VIII的合成。
Figure BDA0001592936020000772
将中间体VII(2.6g，9.410mmol，1eq)在AcOH(36ml)中的溶液在MW(拜泰齐公司)中在120℃下加热4h。将反应混合物蒸发并通过快速色谱法(拜泰齐公司，c-Hex中0％至40％EtOAc)纯化残余物，得到期望的产物，为白色固体(800mg，33％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.7,[M+H]+259.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ12.61(s,1H),8.08(s,1H),8.06(d,J＝4.9Hz,1H),7.69(d,J＝4.9Hz,1H),6.76(s,1H),3.75(s,3H),1.50(s,6H)。
中间体VIII的另一种合成。
在室温下，将2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(560mg，2.466mmol，1eq)加入到中间体CIV(642mg，2.466mmol，1eq)在二氯甲烷(49mL)中的混合物中。室温下搅拌该反应16小时。在真空下蒸发溶剂，并将残余物溶于MeOH中并加至阳离子交换树脂(Isolute SCX)上。用MeOH洗涤杂质，然后用MeOH+5％7N NH3的MeOH溶液洗脱，得到所需中间体。通过快速色谱(拜泰齐公司，1％至5％MeOH的DCM溶液)再次纯化中间体，得到期望的中间体，为黄色固体(360mg，收率：57％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.66,[M+H]+259.0。
中间体IX的合成。
Figure BDA0001592936020000781
向中间体VIII(250mg，0.968mmol，1eq)中加入2M KOH(10mL)。在80℃下将混合物加热1h。加入1M HCl中和，然后用正丁醇萃取。将有机相干燥(Na2SO4)，蒸发，残余物通过快速色谱(拜泰齐公司，DCM中0％至20％MeOH)纯化，得到期望的化合物(220mg，收率：93％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝0.4&0.9,[M+H]+245.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ11.99(s,1H),8.00(s,2H),7.69(d,J＝4.6Hz,1H),6.42(s,1H),1.48(s,6H)。
中间体X的合成。
Figure BDA0001592936020000791
向中间体IX(30mg，0.123mmol，1eq)在二氯甲烷(2.5mL)中的溶液中加入n，n'-二环己基碳化二亚胺(28mg，0.135mmol，1.1eq)、4-二甲基氨基吡啶(3mg，0.025mmol，0.2eq)和4-甲氧基苄胺(0.015mL，0.135mmol，1.1eq)。该反应混合物在室温下搅拌3h。反应混合物用水(10ml)淬灭。用EtOAc(2×20ml)萃取混合物。用无水Na2SO4干燥合并的有机层并蒸发。通过快速色谱(拜泰齐公司，0％至20％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到所需的化合物(20mg，收率：90％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.1,[M+H]+364。
中间体XI的合成。
Figure BDA0001592936020000792
按照制备中间体I中所用的相同方案制备中间体，但是使用2-氯-5-羟基吡啶代替3-羟基吡啶作为起始材料。(收率：57％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.5,[M+H]+174.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.10(dd,J＝3.1,0.5Hz,1H),7.49(dd,J＝8.8,3.1Hz,1H),7.39(dd,J＝8.8,0.6Hz,1H),5.20(s,2H),3.31(s,3H)。
中间体XII的合成。
Figure BDA0001592936020000801
按照制备中间体I中所用的相同方案制备中间体，但是使用2-氯-3-羟基吡啶代替3-羟基吡啶作为起始材料。(收率：43％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.2,[M+H]+174.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ7.98(dd,J＝4.6,1.6Hz,1H),7.62–7.57(m,1H),7.33(dd,J＝8.2,4.6Hz,1H),5.29(s,2H),3.35(s,3H).
中间体XIII的合成。
Figure BDA0001592936020000802
按照制备中间体I中所用的相同方案制备中间体，但是使用3-羟基-5-氯吡啶代替3-羟基吡啶作为起始材料。(收率：75％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.7,[M+H]+174.
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.21(d,J＝2.5Hz,1H),8.16(d,J＝2.0Hz,1H),7.33(t,J＝2.3Hz,1H),5.12(s,2H),3.41(s,3H)。
中间体XIV的合成。
Figure BDA0001592936020000803
按照制备中间体II所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XI作为起始材料(收率：14％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.3,[M+H]+218.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.05(s,1H),7.37(s,1H),5.29–5.22(m,2H),4.87(dt,J＝12.3,6.3Hz,1H),3.34(s,3H),1.24(d,J＝6.5Hz,3H)。
中间体XV的合成。
Figure BDA0001592936020000811
按照制备中间体II所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XII作为起始材料(收率：36％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.1,[M+H]+218.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.12(d,J＝4.9Hz,1H),7.45(dd,J＝4.9,0.4Hz,1H),5.05(d,J＝1.8Hz,2H),4.98(ddd,J＝11.0,6.3,2.0Hz,1H),3.47(s,3H),1.26(d,J＝6.5Hz,3H)。
中间体XVI的合成。
Figure BDA0001592936020000812
按照制备中间体II所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XIII作为起始材料(收率：90％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.1,[M+H]+218.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.25(s,1H),8.17(s,1H),5.26(s,2H),5.24–5.16(m,1H),3.37(s,3H),1.39(d,J＝6.6Hz,3H)。
中间体XVII的合成。
Figure BDA0001592936020000821
按照制备中间体III所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XIV作为起始材料(收率：77％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.8,[M+H]+215.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.38(s,1H),7.54(s,1H),5.39(s,2H),3.43(s,3H),2.58(s,3H)。
中间体XVIII的合成。
Figure BDA0001592936020000822
按照制备中间体III所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XV作为起始材料(收率：65％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.8,[M+H]+216.
1H NMR(300MHz,DMSO)d 8.32(d,J＝4.9Hz,1H),7.57(d,J＝4.9Hz,1H),5.10(s,2H),3.43(s,3H),2.59(s,3H)。
中间体XIX的合成。
Figure BDA0001592936020000823
按照制备中间体III所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XVI作为起始材料(收率：40％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.6,[M+H]+216.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.51(s,1H),8.41(d,J＝0.4Hz,1H),5.37(s,2H),3.39(s,3H),2.52(s,3H)。
中间体XX的合成。
Figure BDA0001592936020000831
按照制备中间体IV所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XVII作为起始材料(收率：77％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.0,[M+H]+172.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ11.22(s,1H),8.19(s,1H),7.57(s,1H),2.61(s,3H)。
中间体XXI的合成。
Figure BDA0001592936020000832
按照制备中间体IV所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XVIII作为起始材料(收率：28％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.0,[M+H]+172.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ11.72(s,1H),8.06(d,J＝5.0Hz,1H),7.77(d,J＝5.0Hz,1H),2.68(s,3H)。
中间体XXII的合成。
Figure BDA0001592936020000833
按照制备中间体IV所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XIX作为起始材料(收率：80％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.3,[M+H]+172.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ11.03(s,1H),8.21(s,1H),8.17(s,1H),2.48(d,J＝3.2Hz,3H)。
中间体XXIII的合成。
Figure BDA0001592936020000841
按照制备中间体V所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XX作为起始材料(收率：37％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.1,[M+H]+212.
中间体XXIV的合成。
Figure BDA0001592936020000842
按照制备中间体V所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XXI作为起始材料(收率：37％)。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.0,[M+H]+212。
中间体XXV的合成。
Figure BDA0001592936020000843
按照制备中间体V所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XXII作为起始材料(收率：18％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.9,[M+H]+212.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.35(s,1H),8.20(s,1H),2.88(s,2H),1.36(s,6H)。
中间体XXVI的合成。
Figure BDA0001592936020000851
按照制备中间体VI所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XXIII作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.0,[M+H]+227。
中间体XXVII的合成。
Figure BDA0001592936020000852
按照制备中间体VI所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XXIV作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.0,[M+H]+227。
中间体XXVII的合成。
Figure BDA0001592936020000853
按照制备中间体VI所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XXV作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.7,[M+H]+227。
中间体XXIX的合成。
Figure BDA0001592936020000861
按照制备中间体VII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XXVI作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.6,[M+H]+311。
中间体XXX的合成。
Figure BDA0001592936020000862
按照制备中间体VII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XXVII作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.6,[M+H]+311。
中间体XXXI的合成。
Figure BDA0001592936020000871
按照制备中间体VII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XXVIII作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.4,[M+H]+311。
中间体XXXII的合成。
Figure BDA0001592936020000872
按照制备中间体VIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XXIX作为起始材料。在这种情况下，纯化在DCM/MeOH 0-10％中进行(收率：17％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.4,[M+H]+293。
中间体XXXIII的合成。
Figure BDA0001592936020000873
按照制备中间体VIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XXX作为起始材料。在这种情况下，纯化在DCM/MeOH 0-10％中进行(收率：31％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.3,[M+H]+293。
中间体XXXIV的合成。
Figure BDA0001592936020000881
按照制备中间体VIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XXXI作为起始材料。在这种情况下，纯化在DCM/MeOH 0-10％中进行(收率：49％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.5,[M+H]+293。
中间体XXXV的合成。
Figure BDA0001592936020000882
向中间体XXXIV(50mg，0.171mmol，1eq)在1,2-二甲氧基乙烷(0.8mL)的混合物中加入苯基硼酸(42mg，0.342mmol，2eq)、PdCl2(dppf)(14mg，0.017mmol，0.1eq)和饱和Na2CO3水溶液(0.5mL)并将其在MW(拜泰齐公司)中在130℃加热1h。蒸发溶剂，通过快速色谱法(拜泰齐公司，cHex/EtOAc)纯化粗产物，得到期望的化合物(45mg，收率：79％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.2,[M+H]+335。
中间体XXXVI的合成。
Figure BDA0001592936020000883
按照制备中间体IX所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XXXV作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.4,[M+H]+321。
中间体XXXVII的合成。
Figure BDA0001592936020000891
向中间体XXXVI(39mg，0.122mmol，1eq)在DCM(2.4mL)中的溶液中加入n，n'-二环己基碳化二亚胺(28mg，0.134mmol，1.1eq)、4-二甲基氨基吡啶(3mg，0.024mmol，0.2eq)和4-甲氧基苄胺(0.017mL，0.134mmol，1.1eq)。在80℃下搅拌所述反应混合物16h。减压浓缩该反应混合物。通过快速色谱法(拜泰齐公司，0％至20％MeOH的DCM溶液)纯化粗产物，得到作为橙色固体的最终化合物(30mg，收率：56％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.1,[M+H]+440。
中间体XXXVIII的合成。
Figure BDA0001592936020000892
用迪安斯塔克冷阱，在140℃下将中间体IV(0.300mg，2.188mmol，1eq)、N，N-二异丙基乙胺(0.381mL，2.188mmol，1eq)、吡咯烷(0.274mL，3.281mmol，1.5eq)和1-Boc-4-哌啶酮(1.090g，5.469mmol，2.5eq)在甲苯(36mL)中的混合物加热2h。将该混合物冷却至室温，并用EtOAc稀释。将有机层用水、饱和NH4Cl水溶液和饱和NaCl水溶液洗涤。然后用Na2SO4干燥并浓缩至干。通过快速色谱(拜泰齐公司，c-Hex中0％至40％EtOAc)纯化残余物，得到期望的中间体(319mg，收率：46％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.2,[M+H]+319.3。
中间体XXXIX的合成。
Figure BDA0001592936020000901
按照制备中间体VI所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XXXVIII作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.5,[M+H]+334.1。
中间体XL的合成。
Figure BDA0001592936020000902
按照制备中间体VII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XXXIX作为起始材料(收率：77％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.6,[M+H]+418.1.
1H NMR(700MHz,CDCl3)δ8.35(d,J＝28.6Hz,1H),8.17(s,1H),7.96(d,J＝12.6Hz,1H),7.73(s,1H),5.62(dd,J＝12.5,5.1Hz,1H),3.91–3.72(m,2H),3.67–3.65(m,3H),3.06(brs,2H),2.88(s,2H),1.80(brs,2H),1.54(brs,2H),1.37(d,J＝4.3Hz,9H)。
中间体XLI的合成。
Figure BDA0001592936020000911
按照制备中间体VIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XL作为起始材料(收率：29％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.5,[M+H]+400.1。
中间体XLII的合成。
Figure BDA0001592936020000912
将中间体XLI(79mg，0.198mmol，1eq)在氨(7N的MeOH溶液，6mL)中的溶液在100℃的压力管中加热48小时。真空下蒸发溶剂，通过快速色谱法(拜泰齐公司，0％至40％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到期望的中间体，为黄色固体(30mg，收率：39％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.1,[M+H]+385.1.
1H NMR(300MHz,DMSO)δ12.79(s,1H),8.42(s,1H),8.29(d,J＝5.7Hz,1H),8.06(d,J＝5.8Hz,1H),7.79(s,1H),7.37(s,1H),6.80(d,J＝2.0Hz,1H),3.77(s,2H),1.95(d,J＝13.7Hz,2H),1.73(d,J＝12.2Hz,2H),1.35(s,9H),1.15(s,1H),0.74(s,1H)。
中间体XLIII的合成。
Figure BDA0001592936020000921
用迪安斯塔克冷阱，在140℃下将中间体IV(0.300mg，2.188mmol，1eq)、n,n-二异丙基乙胺(0.381mL，2.188mmol，1eq)、吡咯烷(0.274mL，3.281mmol，1.5eq)和环己酮(0.567mL，5.469mmol，2.5eq.)在甲苯(36mL)中的混合物加热2h。将混合物冷却至室温。用EtOAc稀释反应物。将有机层用水、饱和NH4Cl水溶液和饱和NaCl水溶液洗涤。然后用Na2SO4干燥并浓缩至干。通过柱色谱法(拜泰齐公司，cHex/EtOAc)纯化残余物，得到期望的化合物(245mg，收率：52％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.2,[M+H]+218。
中间体XLIV的合成。
Figure BDA0001592936020000922
按照制备中间体VI所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XLIII作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.0,[M+H]+233。
中间体XLV的合成。
Figure BDA0001592936020000923
按照制备中间体VII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XLIV作为起始材料(收率：91％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.6,[M+H]+371.
1H NMR(700MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),8.12(s,1H),7.97(d,J＝12.5Hz,1H),7.86(s,1H),5.63(t,J＝11.2Hz,1H),3.67(s,3H),2.88(s,2H),1.81(s,2H),1.60(s,4H),1.46(s,4H)。
中间体XLVI的合成。
Figure BDA0001592936020000931
按照制备中间体VIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XLV作为起始材料(收率：17％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.4,[M+H]+299.
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.21(s,1H),8.14(d,J＝5.1Hz,1H),7.64(d,J＝5.1Hz,1H),6.84(s,1H),3.95(s,3H),2.13(d,J＝13.9Hz,2H),2.01–1.63(m,8H)。
中间体XLVII的合成。
Figure BDA0001592936020000932
按照制备中间体XLIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用环丁酮来代替环己酮(收率：40％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.5,[M+H]+190。
中间体XLVIII的合成。
Figure BDA0001592936020000941
按照制备中间体VI所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XLVII作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝1.5,[M+H]+205。
中间体XLIX的合成。
Figure BDA0001592936020000942
按照制备中间体VII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XLVIII作为起始材料(收率：69％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.3,[M+H]+289。
中间体L的合成。
Figure BDA0001592936020000943
按照制备中间体VIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XLIX作为起始材料(收率：19％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝0.4&2.9,[M+H]+271.
1H NMR(700MHz,CDCl3)δ10.40(s,1H),8.27(m,1H),8.15(s,1H),7.63(s,1H),6.85(s,1H),3.84(s,3H),2.60(d,J＝9.9Hz,2H),2.38(d,J＝10.3Hz,2H),1.95–1.91(m,7.7Hz,1H),1.84–1.78(m,1H)。
中间体LI的合成。
Figure BDA0001592936020000951
按照制备中间体V所使用的相同方案制备中间体，但是使用1-环丙基-4-哌啶酮来代替丙酮(收率：71％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝0.4,[M+H]+259。
中间体LII的合成。
Figure BDA0001592936020000952
按照制备中间体VI所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LI作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝0.4,[M+H]+274。
中间体LIII的合成。
Figure BDA0001592936020000953
按照制备中间体VII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LII作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝1.2,[M+H]+358。
中间体LIV的合成。
Figure BDA0001592936020000961
按照制备中间体VIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LIII作为起始材料(收率：13％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝0.4,[M+H]+340。
中间体LV的合成。
Figure BDA0001592936020000962
按照制备中间体V所使用的相同方案制备中间体，但是使用1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-酮来代替丙酮(收率：34％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.6,[M+H]+301。
中间体LVI的合成。
Figure BDA0001592936020000963
按照制备中间体VI所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LV作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.2&2.6,[M+H]+316。
中间体LVII的合成。
Figure BDA0001592936020000971
按照制备中间体VII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LVI作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.4,[M+H]+400。
中间体LVIII的合成。
Figure BDA0001592936020000972
按照制备中间体VIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LVII作为起始材料(收率：35％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.2,[M+H]+382。
中间体LIX的合成。
Figure BDA0001592936020000973
按照制备中间体V所使用的相同方案制备中间体，但是使用四氢-4H-吡喃-4-酮来代替丙酮(收率：50％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.4,[M+H]+220。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.51(s,1H),8.24(d,J＝4.9Hz,1H),7.50(dd,J＝4.9,0.7Hz,1H),3.64–3.61(m,4H),2.92(brs,2H),1.87–1.59(m,4H)。
中间体LX的合成。
Figure BDA0001592936020000981
按照制备中间体VI所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LIX作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝1.2&1.8,[M+H]+235。
中间体LXI的合成。
Figure BDA0001592936020000982
按照制备中间体VII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LX作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.8,[M+H]+319。
中间体LXII的合成。
Figure BDA0001592936020000983
按照制备中间体VIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LXI作为起始材料(收率：38％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.0&2.4分钟,[M+H]+301。
中间体LXIII的合成。
Figure BDA0001592936020000991
将中间体VIII(50mg，0.194mmol，1eq)与碳酸钾(59mg，0.426mmol，2.2eq)和碘甲烷(14uL，0.232mmol，1.2eq)在乙腈(1.9mL)中的混合物在120℃下加热48h。将混合物冷却至室温并真空浓缩。通过柱色谱法(拜泰齐公司，c-Hex中0％至50％EtOAc和DCM中0％至20％MeOH)纯化残余物，得到预期产物(17mg，收率：31％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝0.368,0.582,2.552分钟,[M+H]+287.
1H NMR(300MHz,DMSO)d 8.70(s,1H),8.53(d,J＝6.5Hz,1H),8.22(d,J＝6.5Hz,1H),7.03(s,1H),4.22(d,J＝6.5Hz,6H),3.83(s,3H),1.63(s,6H)。
中间体LXIV的合成。
Figure BDA0001592936020000992
在0℃下向搅拌的中间体VIII(40mg，0.155mmol，1eq)在DMF(1.5ml)中的溶液中加入氢化钠(矿物油中的60％悬浮液，24mg，0.155mmol，1eq)在DMF(0.4ml)中的溶液。将混合物在0℃搅拌10分钟，然后加入甲基碘(0.010ml，0.155mmol，1eq)。所得反应混合物在0℃下搅拌1h。然后反应混合物用水(10ml)淬灭。用EtOAc(2×50ml)萃取混合物。用无水Na2SO4干燥合并的有机层并蒸发至干。用快速色谱(拜泰齐公司，c-Hex中0％至40％EtOAc)纯化残余物，得到期望的化合物(35mg，收率：83％)。。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.2分钟,[M+H]+273。
中间体LXV的合成。
Figure BDA0001592936020001001
向中间体VIII(20mg，0.077mmol，1eq)在AcCN(0.8ml)中的搅拌溶液中加入叔丁醇锂(1M的THF溶液，0.085mL，0.085mmol，1.1eq)。将该混合物搅拌5分钟，然后加入苄基溴(0.009ml，0.077mmol，1eq)。所得反应混合物在室温下搅拌1h。将反应混合物浓缩至干。通过快速色谱(拜泰齐公司，0％至20％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到希望的化合物(20mg，收率：74％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.2分钟,[M+H]+349。
中间体LXVI的合成。
Figure BDA0001592936020001002
向中间体VIII(40mg，0.155mmol，1eq)在AcCN(1.6ml)中的搅拌溶液中加入叔丁醇锂(1M的THF溶液，0.170mL，170mmol，1.1eq)。将该混合物搅拌5分钟，然后加入2-碘丙烷(0.0015ml，0.077mmol，1eq)。将反应混合物在120℃加热16h。将反应混合物浓缩，残余物通过快速色谱(拜泰齐公司，DCM中0％至20％MeOH)纯化，得到期望的化合物(45mg，收率：97％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.2分钟,[M+H]+301。
中间体LXVII的合成。
Figure BDA0001592936020001011
按照制备中间体LXVI所使用的相同方案制备中间体，但是使用2-氯乙基甲基醚来代替2-碘丙烷(收率：61％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.1,[M+H]+317。
中间体LXVIII的合成。
Figure BDA0001592936020001012
将N-溴代琥珀酰亚胺(262mg，1.471mmol，1eq)的溶液加入到中间体VIII(380mg，1.471mmol，1eq)的AcCN(14.7mL)溶液中。所得混合物在40℃下加热2h。除去溶剂后，通过快速色谱法(拜泰齐公司，c-Hex中0％至40％EtOAc)纯化残余物，得到期望的产物，为白色固体(430mg，收率：87％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.2,[M+H]+337
1H NMR(300MHz,DMSO)δ12.95(s,1H),8.10(s,1H),8.08(d,J＝5.0Hz,1H),7.78(d,J＝5.0Hz,1H),3.79(s,3H),1.61(s,6H)。
中间体LXIX的合成。
Figure BDA0001592936020001021
向中间体LXVIII(20mg，0.059mmol，1eq)在1,2-二甲氧基乙烷(1mL)中的混合物中加入苯基硼酸(14mg，0.119mmol，2eq)、PdCl2(dppf)(5mg，0.006mmol，0.1eq)和饱和Na2CO3水溶液(0.2mL)，并将其在微波辐射下(拜泰齐公司)在100℃加热1h。然后加入水并用二氯甲烷萃取，用Na2SO4干燥并蒸发至干。用快速色谱(拜泰齐公司，c-Hex中0％至40％EtOAc)纯化残余物，得到黄色固体(20mg，收率：99％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.8,[M+H]+335。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ12.69(s,1H),8.23–8.10(m,2H),7.88(d,J＝4.9Hz,1H),7.37(s,3H),7.26(s,2H),3.57(s,3H),1.28(s,6H)。
中间体LXX的合成。
Figure BDA0001592936020001022
按照制备中间体LXIX所使用的相同方案制备中间体，但是使用4-氨磺酰基苯基硼酸频哪醇酯来代替苯基硼酸(收率：41％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.8,[M+H]+414。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ12.77(s,1H),8.11(d,J＝5.0Hz,1H),8.09(s,1H),7.83(d,J＝5.0Hz,1H),7.77(d,J＝8.2Hz,2H),7.50–7.27(m,4H),3.54(s,3H),1.24(s,6H)。
中间体LXXI的合成。
Figure BDA0001592936020001031
按照制备中间体LXIX所使用的相同方案制备中间体，但是使用苯磺酰胺-3-硼酸频哪醇酯来代替苯基硼酸(收率：41％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.9,[M+H]+414。
中间体LXXII的合成。
Figure BDA0001592936020001032
向中间体LXXI(20mg，0.048mmol)的AcCN(0.4mL)溶液中加入氢氧化铵(0.5mL)。将反应混合物在150℃的密封管中加热48h。然后将溶剂蒸发至干。残余物无需进一步纯化即可用于下一步处理(19mg)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.6,[M+H]+400。
中间体LXXIII的合成。
Figure BDA0001592936020001033
按照制备中间体XXXVII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LXXII作为起始材料(收率：40％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.3,[M+H]+519。
中间体LXXIV的合成。
Figure BDA0001592936020001041
将n-碘代琥珀酰亚胺(61mg，0.271mmol，1eq)的溶液加入到中间体VIII(70mg，0.271mmol，1eq)的AcCN(2.7mL)溶液中。所得混合物在40℃下加热2h。除去溶剂后，通过快速色谱法(拜泰齐公司，DCM中0％至10％MeOH)纯化残余物，得到期望的产物，为橙色固体(100mg，96％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.4,[M+H]+385。
中间体LXXV的合成。
Figure BDA0001592936020001042
按照制备中间体LXIX所使用的相同方案制备中间体，但是使用乙烯基硼酸频哪醇酯来代替苯基硼酸(收率：54％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.2,[M+H]+285。
中间体LXXVI的合成。
Figure BDA0001592936020001043
按照制备中间体IX所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LXXV作为起始材料。在这种情况下，残留物未通过快速色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.1,[M+H]+271。
中间体LXXVII的合成。
Figure BDA0001592936020001051
按照制备中间体XXXVII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LXXVI作为起始材料(收率：48％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.7,[M+H]+390。
中间体LXXVIII的合成。
Figure BDA0001592936020001052
向中间体LXII(65mg，0.216mmol)的AcCN(1mL)中的溶液加入氢氧化铵(2mL)。将混合物在MW中在130℃加热1h。蒸发溶剂。粗品通过制备型HPLC纯化并检测到两种产物：酸衍生物(10mg，收率16％)和酰胺衍生物(1mg，收率2％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝0.8,[M+H]+287。
中间体LXXIX的合成。
Figure BDA0001592936020001053
按照制备中间体X所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LXXVIII作为起始材料(收率：28％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.1,[M+H]+406。
中间体LXXX的合成。
Figure BDA0001592936020001061
将N-氯琥珀酰亚胺(26mg，0.194mmol，1eq)在无水AcCN(2mL)中的溶液滴加到冰冷的中间体VIII(50mg，0.194mmol，1eq)的AcCN(2mL)溶液中。加完后(约20分钟)，使所得混合物升温至室温，并再搅拌16h。然后，反应在50℃再加热16h。除去溶剂后，通过快速色谱法(拜泰齐公司，c-Hex中0％至40％EtOAc)纯化残余物，得到期望的产物(20mg，收率：35％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.2,[M+H]+293。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.32(s,1H),8.44(s,1H),8.31(s,1H),7.96(d,J＝4.7Hz,1H),3.82–3.73(m,3H),1.71(dd,J＝14.4,6.4Hz,6H)。
中间体LXXXI的合成。
Figure BDA0001592936020001062
按照制备中间体IX所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LXIX作为起始材料(收率：84％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.3,[M+H]+321。
中间体LXXXII的合成。
Figure BDA0001592936020001063
按照制备中间体X所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LXXXI作为起始材料(收率：26％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.8,[M+H]+440。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.28(s,2H),7.97(d,J＝8.4Hz,2H),7.82(d,J＝8.4Hz,2H),7.68–7.60(m,4H),7.30(d,J＝8.4Hz,2H),3.42(s,2H),1.35(s,9H)。
中间体LXXXIII的合成。
Figure BDA0001592936020001071
在室温下，将碳酸铯(178mg，0.547mmol，3eq)加入到搅拌的中间体XXXIV(80mg，0.273mmol，1eq)的乙腈(2.7mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌5分钟，然后加入碘甲烷(1N的乙腈溶液，0.273mL，0.273mmol，1eq)溶液。所得反应混合物在室温下搅拌16小时。用水(10mL)淬灭反应，并用EtOAc(2×50mL)萃取水层。用无水Na2SO4干燥合并的有机层，过滤并减压蒸发，得到粗产物，将其不经进一步纯化地用于下一步。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.7,[M+H]+307.2。
中间体LXXXIV的合成。
Figure BDA0001592936020001072
按照制备中间体LXXXIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用碘代乙烷来代替碘甲烷，并使用中间体VIII作为起始材料。用快速色谱(拜泰齐公司，c-Hex中0％至40％EtOAc)纯化中间体，得到所需的产物(收率：72％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.2,[M+H]+287.3。
中间体LXXXV的合成。
Figure BDA0001592936020001081
按照制备中间体LXXXIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用2-溴乙基甲基醚来代替碘甲烷，并使用中间体VIII作为起始材料。用快速色谱(拜泰齐公司，c-Hex中0％至40％EtOAc)纯化中间体，得到所需的产物(收率：90％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.2,[M+H]+317.3。
中间体LXXXVI的合成。
Figure BDA0001592936020001082
按照制备中间体XLIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用1-(3-甲基-氧杂环丁烷-3-基)乙酮来代替环己酮(收率：22％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.7,[M+H]+234.1。
中间体LXXXVII的合成。
Figure BDA0001592936020001083
按照制备中间体VI所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XXXVIII作为起始材料带来代替中间体V。
在40℃下加热而不是在室温下进行反应。该中间体无需进一步纯化即可使用。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝0.7,[M+H]+249.1。
中间体LXXXVIII的合成。
Figure BDA0001592936020001091
按照制备中间体VII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LXXXVII作为起始材料带来代替中间体VI。在这种情况下，中间体未经柱色谱纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.6,[M+H]+333.1。
中间体LXXXIX的合成。
Figure BDA0001592936020001092
按照制备中间体VIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体LXXXVIII作为起始材料带来代替中间体VII(收率：22％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.2,[M+H]+315.3。
中间体XC的合成。
Figure BDA0001592936020001101
按照制备中间体LXIX所使用的相同方案制备中间体，但是使用4-氟苯基硼酸来代替苯基硼酸。通过快速色谱法(拜泰齐公司)进行纯化，用0％至2％MeOH/DCM(收率：88％)洗脱。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.5,[M+H]+353.1。
中间体XCI的合成。
Figure BDA0001592936020001102
按照制备中间体IX所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XC作为起始材料。通过在100℃下加热16小时而不是在80℃下加热1小时来进行反应。在这种情况下，中间体未经快速色谱法纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.3,[M+H]+339.1。
中间体XCII的合成。
Figure BDA0001592936020001103
按照制备中间体LXIX所使用的相同方案制备中间体，但是使用4-甲氧基苯基硼酸来代替苯基硼酸。通过快速色谱法(拜泰齐公司)进行纯化，用0.5％至3％MeOH/DCM(收率：56％)洗脱。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.5,[M+H]+365.1。
中间体XCIII的合成。
Figure BDA0001592936020001111
按照制备中间体IX所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XCII作为起始材料。通过在100℃下加热16小时而不是在80℃下加热1小时来进行反应。在这种情况下，中间体未经快速色谱法纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.0,[M+H]+351.1。
中间体XCIV的合成。
Figure BDA0001592936020001112
按照制备中间体X所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XCIII作为起始材料。反应在回流条件下进行16小时而不是在室温下进行3小时。在这种情况下，中间体未经快速色谱法纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.6,[M+H]+470.4。
中间体XCV的合成。
Figure BDA0001592936020001113
按照制备中间体LXXXIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用1-氟-2-碘代乙烷来代替碘甲烷，并使用中间体VIII作为起始材料。通过在50℃下加热16小时而不是在室温下16小时来进行反应。用快速色谱(拜泰齐公司，c-Hex中0％至40％EtOAc)纯化中间体，得到黄色固体的所需的中间体(收率：93％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.1,[M+H]+305.3。
中间体XCVI的合成。
Figure BDA0001592936020001121
按照制备中间体LXXXIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用2-碘-1,1,1-三氟乙烷来代替碘甲烷，并使用中间体VIII作为起始材料。通过在80℃下加热16小时而不是在室温下16小时来进行反应。中间体无需进一步纯化即可用于下一步骤。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.7,[M+H]+341.3。
中间体XCVII的合成。
Figure BDA0001592936020001122
按照制备中间体XLIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用3-甲基-2-丁酮来代替环己酮。通过快速色谱(拜泰齐公司，0％至30％MeOH的DCM溶液)纯化中间体，得到白色固体的所需的中间体(收率：22％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.9,[M+H]+206.1。
中间体XCVIII的合成。
Figure BDA0001592936020001123
按照制备中间体VI所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XCVII作为起始材料。通过在40℃下加热16小时而不是在室温下16小时来进行反应。该中间体无需进一步纯化即可使用。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.7,[M+H]+221.3。
中间体XCIX的合成。
Figure BDA0001592936020001131
按照制备中间体VII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XCVIII作为起始材料。在这种情况下，中间体未经快速色谱法纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.3,[M+H]+305.3。
中间体C的合成。
Figure BDA0001592936020001132
按照制备中间体VIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体XCIX作为起始材料(收率：28％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.9,[M+H]+287.1。
中间体CI的合成。
Figure BDA0001592936020001133
在0℃和氩气下，将甲磺酰氯(2.29mL，29.649mmol，1.3eq)加入到2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-羟基丙酸甲酯(5g，22.807mmol，1eq)在N，N-二甲基甲酰胺(57mL)中的混合物中，然后滴加三乙胺(7.95mL，57.016mmol，2.5eq)，历时30分钟。当添加完成时，移走冷却浴并将黄色反应在室温下搅拌16小时。将反应混合物在冰冷的水和二乙醚之间分配。分层，用饱和NH4Cl水溶液洗涤有机相。用Na2SO4干燥有机相，过滤并真空蒸发，得到浅黄色固体的所需中间体。中间体无需进一步纯化即可用于下一步骤。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.12,[M+H-Boc]+102.2。
中间体CII的合成。
Figure BDA0001592936020001141
在室温下，将二碳酸二叔丁酯(4.83g，22.115mmol，1eq)加入中间体CI(4.45g，22.115mmol 1eq)在乙腈(44mL)中的混合物中，然后加入4-二甲基氨基吡啶(540mg，4.423mmol，0.2eq)。室温再搅拌该反应混合物16小时。真空除去挥发物后，用AcOEt稀释残余物。用10％柠檬酸水溶液和饱和NaCl水溶液洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到米黄色固体的所需中间体。中间体无需进一步纯化即可用于下一步骤。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.44,[M+H-2Boc]+102.2。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ6.28(d,J＝0.8Hz,1H),5.86(d,J＝0.8Hz,1H),3.74(s,3H),1.40(s,18H)。
中间体CIII的合成。
Figure BDA0001592936020001142
在-50℃和氩气下，将二异丙基氨基锂(1.8M在己烷中，3.90mL，7.054mmol，2.5eq)滴加到中间体V(500mg，2.822mmol，1eq)在四氢呋喃(18mL)中的混合物中。在-50℃搅拌该反应混合物90分钟。然后，在10分钟内滴加中间体CII(1.70g，5.643mmol，2eq)的四氢呋喃(10mL)溶液。室温下搅拌该反应16小时。用饱和NH4Cl水溶液淬灭反应混合物，并用EtOAc萃取水相。用饱和NaCl水溶液洗涤有机相，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过快速色谱法(拜泰齐公司，0％至2％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到淡黄色固体且为非对映异构体混合物的所需的中间体(1.29g，收率：95％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.78,[M+H]+479.2。
中间体CIV的合成。
Figure BDA0001592936020001151
在0℃下，将三氟乙酸(6.20mL，80.871mmol，30eq)加入到中间体CIII(1.29g，2.696mmol，1eq)在二氯甲烷(27mL)中的溶液中。反应液室温搅拌90分钟。然后，用二氯甲烷稀释反应混合物，并用饱和NaHCO3水溶液和饱和NaCl水溶液洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物不经进一步纯化用作下一步的非对映体混合物。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.60,[M+H]+261.2。
中间体CV的合成。
Figure BDA0001592936020001152
将中间体LXVIII(119mg，3.53mmol，1eq)、3,6-二氢-2H-吡喃-4-硼酸频哪醇酯(111mg，0.529mmol，1.5eq)、二氯双(三苯基膦)钯(II)(50mg，0.071mmol，0.2eq)和2MNa2CO3(0.53mL，1.059mmol，3eq)在1,4-二噁烷(3.5mL)中的水溶液的混合物在100℃的压力管中加热16小时。将反应混合物冷却至室温，并在水和二氯甲烷之间分配。分离各相，用Na2SO4干燥有机相，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(拜泰齐公司，0.5％至1.5％MeOH的DCM溶液)再次纯化残余物，得到黄色固体的期望的中间体(93mg，收率：74％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.81,[M+H]+341.3。
中间体CVI的合成。
Figure BDA0001592936020001161
在0℃下将亚硫酰氯(12.58mL，172.527mmol，8eq)加入到3-羟基-4-吡啶甲酸(3.00g，21.566mmol，1eq)在乙醇(144mL)中的混合物中。然后，在回流条件下将该反应混合物加热16小时。在真空下蒸发溶剂，并在DCM和1M NaHCO3水溶液之间分配残余物。分离各相，用Na2SO4干燥有机层，过滤并浓缩，得到所需的中间体。中间体无需进一步纯化即可用于下一步骤。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.91,[M+H]+168.0。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.35(s,1H),8.39(s,1H),8.17(d,J＝5.0Hz,1H),7.56(dd,J＝5.0,0.6Hz,1H),4.35(q,J＝7.1Hz,2H),1.32(t,J＝7.1Hz,3H)。
中间体CVII的合成。
Figure BDA0001592936020001162
在-78℃和氩气下，将正丁基锂(2.5M在己烷中，18.00mL，44.866mmol，5eq)加入到二异丙基胺(6.92mL，14.357mmol，5.5eq)的四氢呋喃(36mL)溶液中。在-78℃下将该反应搅拌45分钟。然后，在10分钟内将乙酸叔丁酯(1.93mL，14.357mmol，1.6eq)逐滴加入到反应混合物中。在-78℃下搅拌90分钟后，将中间体CVI(1.50g，8.973mmol，1eq)的四氢呋喃(18mL)的溶液加入到混合物中，并使其升温至室温。室温下搅拌该反应16小时。用饱和NH4Cl水溶液淬灭混合物，并用EtOAc萃取水相。用饱和NaCl水溶液洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(拜泰齐公司，0％至2％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到褐色固体的期望的中间体(1.66g，收率：78％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.59,[M+H]+238.1。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ11.13(s,1H),8.41(s,1H),8.16(d,J＝5.0Hz,1H),7.51(dd,J＝5.0,0.4Hz,1H),3.96(s,2H),1.36(s,9H)。
中间体CVIII的合成。
Figure BDA0001592936020001171
使用迪安斯塔克冷阱将中间体CVII(250mg，1.054mmol，1eq)、环己烷甲醛(0.13mL，1.054mmol，1eq)、哌啶(5μL，0.053mmol，0.05eq)和乙酸(4μL，0.053mmol，0.05eq)在甲苯(5mL)中的混合物在回流条件下加热48小时。然后，使反应冷却至室温，并加入EtOAc。用饱和NaCl水溶液洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(拜泰齐公司，0％至1％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到淡黄色固体的期望的中间体(237mg，收率：97％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.36,[M+H]+232.3。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.53(s,1H),8.29(d,J＝5.0Hz,1H),7.56(dd,J＝5.0,0.7Hz,1H),4.44(ddd,J＝13.1,5.6,2.7Hz,1H),2.94(dd,J＝16.9,13.1Hz,1H),2.70(dd,J＝16.9,2.8Hz,1H),1.90–1.77(m,1H),1.84–1.59(m,5H),1.29–1.04(m,5H)。
中间体CIX的合成。
Figure BDA0001592936020001181
按照制备中间体CIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体CVIII作为起始材料来代替中间体V。也通过快速色谱法(拜泰齐公司，0％至2％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到黄色固体且为非对映异构体混合物的所需的中间体(收率：67％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.80,[M+H]+533.3。
中间体CX的合成。
Figure BDA0001592936020001182
按照制备中间体CIV所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体CIX作为起始材料。将残余物不经进一步纯化用作下一步的非对映体混合物。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.12&4.33,[M+H]+315.2。
中间体CXI的合成。
Figure BDA0001592936020001183
按照制备中间体VIII所使用的相同方案制备中间体，使用2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌，但是使用中间体CX作为起始材料(收率：29％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.54,[M+H]+313.1。
中间体CXII的合成。
Figure BDA0001592936020001191
按照制备中间体IX所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体CXI作为起始材料(收率：60％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.09,[M+H]+299.1。
中间体CXIII的合成。
Figure BDA0001592936020001192
按照制备中间体CVIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用乙醛来代替环己烷甲醛(收率：86％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝1.96,[M+H]+164.1。
中间体CXIV的合成。
Figure BDA0001592936020001193
按照制备中间体CIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体CXIII作为起始材料。该反应在室温下4小时而不是在室温下16小时进行。通过快速色谱法(拜泰齐公司，0％至2％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到黄色固体且为非对映异构体混合物的所需的中间体(收率：51％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.70,[M+H]+465.2。
中间体CXV的合成。
Figure BDA0001592936020001201
按照制备中间体CIV所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体CXIV作为起始材料。通过快速色谱法(拜泰齐公司，0％至3％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到黄色固体且为非对映异构体混合物的所需的中间体(收率：51％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.49,[M+H]+247.0。
中间体CXVI的合成。
Figure BDA0001592936020001202
按照制备中间体VIII所使用的相同方案制备中间体，使用2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌，但是使用中间体CXV作为起始材料(收率：54％)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.10,[M+H]+245.0。
中间体CXVII的合成。
Figure BDA0001592936020001203
按照制备中间体IX所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体CXVI作为起始材料。在这种情况下，中间体未经快速色谱法纯化。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝0.45,[M+H]+231.0。
中间体CXVIII的合成。
Figure BDA0001592936020001211
在室温下，将二碳酸二叔丁酯(74mg，0.339mmol，3eq)加入中间体CXVII(26mg，0.113mmol，1eq)在1,4-二噁烷(1.13mL)中的混合物中，随后加入碳酸氢铵(27mg，0.339mmol，3eq)和吡啶(18μL，0.226mmol，1eq)。室温下搅拌该反应混合物16小时。在真空下蒸发溶剂，并将残余物溶于EtOAc中。用1N HCl水溶液洗涤有机相。用正丁醇萃取水相。合并的有机层用Na2SO4干燥，在真空下过滤并浓缩。中间体无需进一步纯化即可用于下一步骤。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.88,[M+H]+330.1。
中间体CXIX的合成。
Figure BDA0001592936020001212
该中间体按照制备中间体CV所使用的相同方案制备，但是使用2-甲氧基苯基硼酸来代替3,6-二氢-2H-吡喃-4-硼酸频哪醇酯作为起始材料。通过快速色谱(拜泰齐公司，二氧化硅，0％至4％MeOH的DCM溶液)纯化中间体，得到黄色油的希望的中间体CXIX(收率：76％)。HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.43分钟,[M+H]+365.1。
中间体CXX的合成。
Figure BDA0001592936020001221
按照制备中间体IX所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体CXIX作为起始材料来代替中间体VIII。通过在100℃下加热16小时而不是在80℃下加热1小时来进行反应。中间体无需进一步纯化即可用于下一步骤。HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.11分钟,[M+H]+351.2。
中间体CXXI的合成。
Figure BDA0001592936020001222
该中间体按照制备中间体CV所使用的相同方案制备，但是使用吲唑-5-硼酸频哪醇酯来代替3,6-二氢-2H-吡喃-4-硼酸频哪醇酯作为起始材料。通过在100℃下加热16小时而不是在80℃下加热1小时来进行反应。通过快速色谱(拜泰齐公司，二氧化硅，2％至6％MeOH的DCM溶液)纯化中间体，得到黄色固体的希望的中间体CXXI(收率：51％)。HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.98分钟,[M+H]+375.1。
中间体CXXII的合成。
Figure BDA0001592936020001223
按照制备中间体IX所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体CXXI作为起始材料来代替中间体VIII。通过在100℃下加热16小时而不是在80℃下加热1小时来进行反应。通过快速色谱(拜泰齐公司，二氧化硅，5％至20％MeOH的含有5％NH3(7N在MeOH中)的DCM溶液)纯化中间体，得到黄色固体的希望的中间体CXXII(收率：33％)。HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.56分钟,[M+H]+361.0.1H NMR(300MHz,DMSO)δ13.02(s,1H),8.06(dd,J＝14.3,8.2Hz,4H),7.89(d,J＝5.1Hz,1H),7.55(s,1H),7.47(d,J＝8.2Hz,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,1H),1.27(s,6H)。
中间体CXXIII的合成。
Figure BDA0001592936020001231
该中间体通过在二碳酸二叔丁酯存在下酰胺形成中间体CXXII来制备，按照与制备中间体CXVIII所使用的相同的方案(收率：83％)。HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.12分钟,[M+H]+460.3。
中间体CXXIV的合成。
Figure BDA0001592936020001232
按照制备中间体CVIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用四氢-吡喃-4-甲醛来代替环己烷甲醛作为起始材料(收率：75％)。HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.19分钟,[M+H]+234.1。
中间体CXXV的合成。
Figure BDA0001592936020001233
按照制备中间体CIII所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体CXXIV作为起始材料来代替中间体V，并使用2eq二异丙基氨化锂而非2.5eq。通过快速色谱法(拜泰齐公司，20％至80％EtOAc的环己烷)纯化中间体，得到黄色油且为非对映异构体混合物的所需的中间体(收率：59％)。HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.45分钟,[M+H]+535.2。
中间体CXXVI的合成。
Figure BDA0001592936020001241
按照制备中间体CIV所使用的相同方案制备中间体，但是使用中间体CXXV作为起始材料。通过快速色谱法(拜泰齐公司，0％至3％MeOH的DCM)纯化中间体，得到黄色油且为非对映异构体混合物的所需的中间体(收率：69％)。HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.80分钟,[M+H]+317.1。
中间体CXXVII的合成。
Figure BDA0001592936020001242
该中间体CXXVII通过在DDQ(1.1eq)存在下使无水二噁烷中的中间体CXXVI在室温下进行氧化反应来制备。
中间体CXXVIII的合成。
Figure BDA0001592936020001243
按照制备中间体LXIX所使用的相同方案制备中间体，但是使用2-(三氟甲基)苯基硼酸来代替苯基硼酸作为起始材料(收率：42％)。HPLC-MS(方法4):Rt＝3.723,[M+H]+403.10。
中间体CXXIX的合成。
Figure BDA0001592936020001251
向中间体CXXVIII(25mg，0.062mmol，1eq)在乙腈(0.6ml)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(40mg，0.124mmol，2eq)。搅拌混合物5分钟，然后加入碘乙烷1N的乙腈溶液(0.062ml，0.062mmol，1eq)。所得的反应混合物在室温下搅拌2h。然后反应混合物用水(10ml)淬灭。用EtOAc(2×50ml)萃取混合物。用无水Na2SO4干燥合并的有机层。将溶剂蒸发，并所得残余物中间体CXXIX不经进一步纯化用于下一反应步骤。HPLC-MS(方法4):Rt＝4.385,[M+H]+431.15。
中间体CXXX的合成。
Figure BDA0001592936020001252
在存在碳酸铯(2eq)的乙腈(1.5ml)溶液中，通过中间体LVIII(35mg，0.153mmol)与碘乙烷(1eq)的烷基化反应制备中间体CXXX。将反应混合物在密封管中在80℃搅拌4h，然后用水(10ml)猝灭。用EtOAc(2×50ml)萃取混合物。用无水Na2SO4干燥合并的有机层。在减压下从干燥的有机层中蒸发溶剂以获得粗产物中间体CXXX，其不经进一步纯化即用于下一反应步骤。HPLC-MS(方法4):Rt＝3.696,[M+H]+410.20。
中间体CXXXI的合成。
Figure BDA0001592936020001261
在碳酸铯(365mg，1.12mmol)和碘代环丁烷(1eq)的存在下，通过在室温下搅拌16h，通过乙腈(6ml)中的中间体XLVI(167mg，0.56mmol)的烷基化反应制备中间体CXXXI。加入水和EtOAc。将有机相干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩以获得粗产物中间体CXXXI，其不经进一步纯化即用于下一反应步骤。HPLC-MS(方法4):Rt＝3.903,[M+H]+327.15。
中间体CXXXII的合成。
Figure BDA0001592936020001262
在碳酸铯(434mg，1.332mmol，2eq)和碘甲烷(1eq)的存在下，通过在室温下搅拌16h，通过乙腈(7ml)中的中间体LXII(200mg，0.666mmol，1eq)的烷基化反应制备中间体CXXXII。加入水和EtOAc。将有机相干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩以获得粗产物中间体CXXXII，其不经进一步纯化即用于下一反应步骤。HPLC-MS(方法4):Rt＝2.744,[M+H]+315.10。
中间体CXXXIII的合成。
Figure BDA0001592936020001263
在碳酸铯(434mg，1.332mmol，2eq)和碘代乙烷(1eq)的存在下，通过在室温下搅拌16h，通过乙腈(7ml)中的中间体LXII(200mg，0.666mmol，1eq)的烷基化反应制备中间体CXXXIII。加入水和EtOAc。将有机相干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩以获得粗产物中间体CXXXIII，其不经进一步纯化即用于下一反应步骤。HPLC-MS(方法4):Rt＝3.008,[M+H]+329.15。
中间体CXXXIV的合成。
Figure BDA0001592936020001271
在碳酸铯(365mg，1.120mmol，2eq)和碘甲烷(1eq)的存在下，通过在室温下搅拌16h，通过乙腈(6ml)中的中间体XLVI(167mg，0.560mmol，1eq)的烷基化反应制备中间体CXXXIV。加入水和EtOAc。将有机相干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩以获得粗产物中间体CXXXIV，其不经进一步纯化即用于下一反应步骤。HPLC-MS(方法4):Rt＝3.538,[M+H]+313.15。
中间体CXXXV的合成。
Figure BDA0001592936020001272
通过中间体XLVI(167mg，0.560mmol，1eq)与1-氟-2-碘乙烷(1eq)的烷基化反应，按照中间体CXXXIV所使用的相同的合成方案来制备中间体CXXXV。后处理之后获得的所得粗制化合物不经进一步纯化即作为中间体CXXXV用于下一个反应步骤中。HPLC-MS(方法4):Rt＝3.783,[M+H]+345.20。
中间体CXXXVI的合成。
Figure BDA0001592936020001273
将LXVIII(150mg，0.445mmol；1eq)、3-甲氧基苯基硼酸(101mg，0.667mmol，1.5eq)与2M Na2CO3水溶液(0.7mL)和PdCl2(PPh3)2(62mg，0.089mmol，0.2eq)在二噁烷(4.5mL)中的混合物在密封管中在100℃下加热16h。将深色混合物冷却至室温并用DCM萃取。干燥、过滤并真空浓缩有机相。通过拜泰齐公司Flash色谱法(拜泰齐公司，SiO2，20g，c-己烷/EtOAc100/0至60/40)纯化残余物，得到黄色固体(150mg，93％)的中间体CXXXVI。HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.394,[M+H]+365.10。
中间体CXXXVII的合成。
Figure BDA0001592936020001281
按照合成中间体CXXXVI所使用的相同的合成途径，在2M Na2CO3的二噁烷溶液(4.5mL)存在下，通过使LXVIII(150mg，0.445mmol；1eq)与环丙基硼酸(57mg，0.667mmol，1.5eq)在150℃下进行48h Suzuki偶联反应，制备中间体CXXXVII。通过拜泰齐公司快速色谱法(SiO2，20g，c-正己烷/EtOAc 100/0至60/40)得到黄色固体(85mg，64％收率)的中间体CXXXVII。HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.005,[M+H]+299.05)其不经进一步纯化即用于下一步反应。
中间体CXXXVIII的合成。
Figure BDA0001592936020001282
在碳酸铯(325mg，0.999mmol，2eq)和2-溴乙基甲基醚(1eq)的存在下，通过在室温下搅拌16h，通过乙腈(5ml)中的中间体LXII(150mg，0.499mmol，1eq)的烷基化反应制备中间体CXXXVIII。加入水和EtOAc。将有机相干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩，得到粗产物，通过拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，20g，DCM/MeOH 100/0至80/20)纯化粗产物，得到黄色固体(75mg，42％收率)的中间体CXXXVIII。HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.998,[M+H]+359.20。
中间体CXXXIX的合成。
Figure BDA0001592936020001291
在碳酸铯(174mg，0.549mmol，2eq)和碘代乙烷(1eq)的存在下，通过在室温下搅拌16h，通过乙腈(3ml)中的中间体CXXXVI(100mg，0.274mmol，1eq)的烷基化反应制备中间体CXXXIX。加入水和EtOAc。将有机相干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩，得到粗产物，通过拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，20g，DCM/MeOH 100/0至80/20)纯化粗产物，得到黄色固体(25mg，23％收率)的中间体CXXXIX。HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.977,[M+H]+393.15。
中间体CXL的合成。
Figure BDA0001592936020001292
通过使中间体CXLI(33mg)与MeOH(50ml)中的NH3/MeOH(7N)和1M CaCl2在密封管中在110℃下加热72小时进行酰胺化反应来制备中间体CXL。通过溶剂的真空浓缩来分离最终化合物，通过在DCM/MeOH(100至85/15)中的快速色谱纯化，得到12mg所需中间体CXL。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.082,[M+H]+413.2。
中间体CXLI的合成。
Figure BDA0001592936020001301
按照与合成中间体CXXXIX所使用的类似的合成方案，通过使中间体XLI(50mg，0.12mmol)与碘乙烷(0.2mmol)进行烷基化来制备中间体CXLI，在SiO2(EtOAc/环己烷25/75至100/0)中拜泰齐公司快速柱色谱后得到所需的化合物(33mg，64％收率)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.946,[M+H]+428.2。
中间体CXLII的合成。
Figure BDA0001592936020001302
通过中间体LXII(150mg，0.499mmol)与1-氟-2-碘乙烷(1eq)的烷基化反应，按照中间体CXXXII所使用的相同的合成方案来制备中间体CXLII。通过拜泰齐公司快速色谱(拜泰齐公司，20g，0％至20％MeOH的DCM溶液)纯化得到的粗制化合物，得到希望的化合物(40mg)。
HPLC-MS(方法4):Rt＝3.004,[M+H]+347.15。
中间体CXLIII的合成。
Figure BDA0001592936020001303
将四氢呋喃(73mL)中的1-(3-羟基吡啶-4-基)乙酮(1g，7.292mmol，1eq)、DIPEA(1.27mL，7.292mmol，1eq)、吡咯烷(0.609mL，7.292mmol，1eq)、4,4-二氟环己酮(0.978g，7.292mmol，1eq)在70℃下在压力管中加热16h。将反应浓缩并通过快速色谱法(拜泰齐公司，c-己烷中0％至30％EtOAc)纯化残余物，得到白色固体(1.41g，76％收率)的中间体CXLIII。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.701,[M+H]+254.00。
中间体CXLIV的合成。
Figure BDA0001592936020001311
向CXLIII(1.41g，5.568mmol，1eq)的MeOH(56ml)溶液中加入TEA(1.55mL，11.135mmol，2eq)和盐酸羟胺(0.774g，11.135mmol，2eq)。将反应混合物在室温下搅拌16h。然后浓缩反应物，并用水淬灭粗品，并用EtOAc(x3)萃取以获得白色固体(1.4g)，其不经另外纯化即用于下一反应步骤。
中间体CXLV的合成。
Figure BDA0001592936020001312
向中间体CXLIV(1.4g，5.219mmol，1eq)的DCM(52ml)溶液中加入TEA(0.873mL，6.263mmol，1.2eq)和丙炔酸甲酯(0.929mL，10.438mmol，2eq)，反应转为橙色。所述混合物室温下搅拌3h。加入水并用DCM萃取(x3)。将有机相干燥(Na2SO4)，蒸发，并通过拜泰齐公司快速色谱(拜泰齐公司，12g，0％至40％EtOAc的c-Hex溶液)纯化残余物。所得残留物无需进一步纯化即可作为中间体CXLV用于下一反应。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.283,[M+H]+353.1。
中间体CXLVI的合成。
Figure BDA0001592936020001321
按照与合成中间体VIII所使用的相同方案，但使用化合物CXLV(5.219mmol)作为起始材料来制备中间体CXLVI，得到300mg(17％)黄色固体的中间体CXLVI。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.017,[M+H]+335.1。
中间体CXLVII的合成。
Figure BDA0001592936020001322
向中间体CXXXVII(40mg，0.134mmol，1eq)在乙腈(1.3ml)中的搅拌溶液中加入碳酸铯(87mg，0.268mmol，2eq)。搅拌混合物5分钟，然后加入碘乙烷1N的AcCN溶液(0.134ml，0.134mmol，1eq)。在室温下搅拌所得反应混合物24h。然后反应混合物用水(10ml)淬灭。用EtOAc(2×50ml)萃取混合物。用无水Na2SO4干燥合并的有机层。在减压下蒸发溶剂以获得粗产物，通过拜泰齐公司快速色谱(拜泰齐公司，20g，0％至20％MeOH的DCM溶液)纯化粗产物，得到黄色固体的中间体CXLVII(25mg，57％收率)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.479,[M+H]+327.15。
中间体CXLVIII的合成。
Figure BDA0001592936020001331
在Ar下，将在THF(12mL)中的CXLIX(416mg，1eq)冷却至-50℃，然后滴加LDA(1.53mL，1.5eq 2M的己烷)溶液。在该温度下搅拌混合物1h。然后在10分钟内通过套管滴加2-丙烯酸2-[双[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-甲酯(CAS 201338-62-7)(760mg；1.5eq)的THF(5mL)溶液。该溶液在-50℃搅拌过夜。用水淬灭反应并用CHCl3：异丙醇(1：1)萃取，用盐水洗涤合并的有机相，干燥(MgSO4)并真空浓缩。通过自动快速色谱法(CicloHx/EtOAc梯度：0％至70％)纯化残余物，得到CXLVIII(320mg)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.582,[M+H]+549.3。
中间体CXLIX的合成。
Figure BDA0001592936020001332
将THF(60mL)中的中间体IV(812mg，1eq)、DIPEA(1.1mL，1eq)、吡咯烷(0.500mL，1eq)和1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酮(CAS 137052-08-5；0.741mL，1eq)在密封管中90℃下加热6小时。将反应混合物浓缩并通过自动快速色谱(CicloHx/EtOAc梯度：0％至100％)纯化残余物，得到黄色油状的CXLIX(494mg，38％收率)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.114,[M+H]+248.1。
中间体CL的合成。
Figure BDA0001592936020001341
按照与中间体CLI所使用的类似的合成途径制备中间体CL，但是使用中间体CXLIX(217mg)作为起始材料，以在几个步骤中形成希望的三环化合物CL，将其通过用DCM/MeOH的纯化色谱分离，梯度：0％至50％,(58mg，棕色油)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.385,[M+H]+357.1。
中间体CLI的合成。
Figure BDA0001592936020001342
中间体CLI按照与中间体CLII所使用的类似的合成途径来制备，但使用中间体CLVI作为起始材料。通过DCM/MeOH梯度：1％至23％的自动快速色谱来分离化合物，得到CLI(86mg，黄色固体)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.176,[M+H]+355.2。
中间体CLII的合成。
Figure BDA0001592936020001343
在氩气下，向化合物CLV(640mg；1.17mmol，1eq；非对映异构体的混合物)在无水CH2Cl2(12mL)中的冷却溶液中加入三氟乙酸(2.7mL)。在室温搅拌90分钟后，反应结束。将溶液冷却，并用DCM稀释，并用NaHCO3水溶液洗涤。所述有机相用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过自动快速色谱(DCM/MeOH；梯度：1％至5％)纯化残余物，得到作为非对映异构体混合物的三环化合物(部分氧化的)(280mg；73％收率)。将该化合物悬浮于无水DCM(17mL)中并加入DDQ(194mg；1.0eq)，将混合物在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂，并将深色残余物溶于MeOH中并加至阳离子交换树脂(Isolute SCX)上。用MeOH洗涤杂质，然后用NH3/MeOH(7N)洗脱以回收所需产物。除去溶剂后，通过自动快速色谱(DCM/MeOH；梯度：1％至7％)纯化残余物以获得黄色固体(145mg，52％收率)的中间体CLII。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝5.031,[M+H]+547.3
中间体CLIII的合成。
Figure BDA0001592936020001351
在氩气下，向中间体CXLVIII(314mg；1eq；两个非对映异构体的混合物)在无水CH2Cl2(6mL)中的冷却溶液中加入三氟乙酸(1.4mL)。将该反应搅拌3h，然后用NaHCO3水溶液洗涤。所述有机相用盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过自动快速色谱(DCM/MeOH；梯度：1％至3％)纯化残余物，得到淡黄色油状的作为非对映异构体混合物的三环化合物(部分氧化的)(97mg)。将该混合物(90mg；1eq)悬浮于无水DCM(5.5mL)中并加入DDQ(62mg；1eq)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂，并将得到的深色残余物溶于MeOH中并加至阳离子交换树脂(Isolute SCX)上。用MeOH洗涤杂质，然后用NH3/MeOH(7N)洗脱所需的化合物。除去溶剂后，通过拜泰齐公司快速色谱法(二氧化硅；在DCM/MeOH中；梯度：1％至10％)纯化残余物，得到橙色油的中间体CLIII。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝2.607,[M+H]+329.1
中间体CLIV的合成。
Figure BDA0001592936020001361
将四氢呋喃(95mL)中的1-(3-羟基吡啶-4-基)乙酮(1.3g，9.4mmol，1eq)、DIPEA(1.6mL，1eq)、吡咯烷(0.8mL，1eq)、1-环己基乙-1-酮(1.2mL，1eq)在90℃下在密封管中加热过夜。浓缩反应物并通过自动快速色谱(CicloHx/AcOEt：梯度：10％至50％)纯化残余物，得到所需的化合物CLIV(775mg；35％收率)。
中间体CLV的合成。
Figure BDA0001592936020001362
在Ar下将化合物CLIV(450mg；1.83mmol；1.0eq)的THF(12mL)的溶液冷却至-50℃，滴加LDA(1.4mL；1.5eq；2.0M的己烷溶液)溶液。在该温度下搅拌混合物1h。然后在10分钟内通过套管滴加2-丙烯酸2-[双[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-甲酯(CAS 201338-62-7)(830mg；1.5eq)的THF(6mL)溶液。将溶液在-50℃搅拌过夜。用NH4Cl水溶液(饱和)淬灭反应并用EtOAc萃取，用盐水洗涤合并的有机相，干燥(MgSO4)并真空浓缩。通过自动快速色谱(CicloHx/EtOAc梯度：10％至50％)和AcOEt/MeOH梯度：5％至20％纯化残余物，得到CLV(640mg；64％收率)。
中间体CLVI的合成。
Figure BDA0001592936020001363
按照合成中间体CLV所使用的相同的合成方案合成该中间体，但使用2-丙烯酸2-(1,1-二甲基乙氧基羰基乙基氨基)甲酯(CAS 1414376-52-5)。通过DCM/MeOH梯度：0％至3％的自动快速色谱来分离化合物CLVI，得到CLVI(294g，51％收率)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝5.218,[M+H]+475.2
中间体CLVII的合成。
Figure BDA0001592936020001371
将N-氯代琥珀酰亚胺(14mg，1eq)的溶液加入到化合物CXXXIII(35mg，0.107mmol，1eq)的AcCN(1mL)溶液中。在室温下将所得混合物搅拌10天。在真空中除去溶剂后，通过拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，0％至40％EtOAc在环己烷中)纯化残余物，得到固体的所需产物CLVII(23mg)。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝3.664,[M+H]+363.0/365.0
中间体CLVIII的合成。
Figure BDA0001592936020001372
在室温下搅拌10天后，在存在N-氯代琥珀酰亚胺(1eq)的乙腈中，进行化合物CXXXI(30mg，1eq)的氯化反应。通过拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，0％至40％EtOAc的环己烷溶液)分离所需的化合物，得到固体(21mg)的CLVIII。
HPLC-MS(方法4)：Rt＝4.411,[M+H]+361.1/363.0
中间体CLIX的合成。
Figure BDA0001592936020001381
在碳酸铯作为碱存在下，通过ACN 1N(0.15ml，0.15mmol，1eq)中CXLVI(50mg，0.150mmol，1eq)与碘乙烷的烷基化反应来制备中间体CLIX，在拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，0％至40％EtOAc的环己烷)后，得到25mg(46％)的CLIX。
HPLC-MS(方法4)：Rt 4.160＝,[M+H]+363.1.
实施例1:最终产物1的合成。
Figure BDA0001592936020001382
方案A。
将三氟乙酸(1.7mL，22.701mmol，50eq)加入到中间体X(165mg，0.454mmol，1eq)中。将反应混合物在MW(拜泰齐公司)中在100℃下加热1h。减压蒸发三氟乙酸。将得到的粗产物溶于DCM-MeOH中，并用MeOH(约2mL)中的NH3 7N处理。然后将该混合物(pH＝8)浓缩并载入硅胶柱中。通过快速色谱(拜泰齐公司，0％至10％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到白色固体的最终产物(50mg，收率：45％)。
方案B。
向中间体X(81mg，0.314mmol，1eq)的DMF(3.60mL)和MeOH(3.60mL)溶液中加入32％NH3水溶液(7.14mL)。将反应混合物在80℃下在密闭容器中加热24h。蒸发溶剂，通过HPLC纯化粗产物，制备得到为白色固体的酰胺产物(38mg，收率：50％)。
实施例2:最终产物2的合成。
Figure BDA0001592936020001391
按照方案B，作为最终产物1的合成中的副产物获得该产物(收率：24％)。可通过TLC分离实施例1和2的化合物(DCM/MeOH 10：1)：Rf＝0.5(实施例1)且Rf＝0.2(实施例2)。
实施例3:最终产物3的合成。
Figure BDA0001592936020001392
将中间体VIII(50mg，0.194mmol，1eq)溶于DCM(4.8mL)中并加入甲胺(0.140mL，3.872mmol，20eq)和AlMe3(0.041mL，0.387mmol，2eq)。在100℃下搅拌混合物16h。将混合物冷却至室温并真空蒸发。通过快速色谱法(拜泰齐公司，c-Hex中0％至50％EtOAc和DCM中0％至20％MeOH)纯化残余物，得到不纯的预期产物(15mg)。通过用MeOH/DCM(从0％至10％MeOH)的溶剂体系洗脱的快速柱色谱(Isolute Si II 5g)纯化所得的粗产物，得到浅黄色固体的最终化合物(3mg，收率：6％)。
实施例4:最终产物4的合成。
Figure BDA0001592936020001393
在室温下在氩气气氛下，将AlMe3(2M在己烷中，0.102ml，0.203mmol，1.5eq)缓慢加入到苯胺(0.018mL，0.203mmol，1.5eq)的DCM(0.4mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌15分钟，然后在反应中加入中间体VIII(35mg，0.136mmol，1eq)的DCM(0.4mL)的溶液。将混合物在100℃的密封管中加热48h。冷却后，蒸发溶剂，通过快速色谱法(拜泰齐公司，c-Hex中0％至50％EtOAc和DCM中0％至20％MeOH)纯化残余物，得到不纯的预期产物(26mg)。通过用MeOH/DCM(从0％至10％MeOH)的溶剂体系洗脱的快速柱色谱(Isolute Si II 5g)纯化所得的产物，得到不纯的浅黄色固体的最终化合物(15mg)。通过使用c-Hex/EtOAc(0％至50％EtOAc)的溶剂系统洗脱的快速柱色谱(Isolute Si II 2g)重新纯化数次，得到白色固体的最终化合物(5mg，收率：12％)。
实施例5:最终产物5的合成。
Figure BDA0001592936020001401
向中间体IX(20mg，0.082mmol，1eq)在DCM(1.6mL)中的溶液中加入n，n'-二环己基碳化二亚胺(19mg，0.09mmol，1.1eq)、4-二甲基氨基吡啶(2mg，0.016mmol，0.2eq)和4-氨基-1-boc-哌啶偶联(18mg，0.090mmol，1.1eq)。该反应混合物在室温下搅拌16h。然后反应混合物用水(10ml)淬灭。用EtOAc(2×20ml)萃取混合物。用无水Na2SO4干燥合并的有机层。在减压下从干燥的有机层中蒸发溶剂以获得粗产物，通过快速色谱(拜泰齐公司，c-Hex中的0％至40％EtOAc)纯化粗产物，得到期望的化合物(17mg，收率：49％)。
实施例6:最终产物6的合成。
Figure BDA0001592936020001402
按照制备实施例5所使用的相同方案制备产物，但是使用异丙胺来代替4-氨基-1-boc-哌啶(收率：46％)。
实施例7:最终产物7的合成。
Figure BDA0001592936020001411
按照制备实施例5所使用的相同方案制备产物，但是使用2-甲氧基乙胺来代替4-氨基-1-boc-哌啶(收率：22％)。
实施例8:最终产物8的合成。
Figure BDA0001592936020001412
按照制备实施例5所使用的相同方案制备产物，但是使用苄胺来代替4-氨基-1-boc-哌啶(收率：42％)。
实施例9:最终产物9的合成。
Figure BDA0001592936020001413
按照制备实施例5所使用的相同方案制备产物，但是使用二乙胺来代替4-氨基-1-boc-哌啶(收率：20％)。
实施例10:最终产物10的合成。
Figure BDA0001592936020001414
在室温下，将HCl(4N在1,4-二噁烷中，0.22mL)加入到最终产物5(13mg，0.030mmol，1eq)在1,4-二噁烷(1mL)中的混合物中。室温下搅拌该反应2小时。真空下蒸发溶剂。(收率：90％)。
实施例11:最终产物11的合成。
Figure BDA0001592936020001421
按照制备实施例5所使用的相同方案制备产物，但是使用2-苯基乙胺来代替4-氨基-1-boc-哌啶(收率：28％)。
实施例12:最终产物12的合成。
Figure BDA0001592936020001422
在室温下，将HCl(4M在1,4-二噁烷中，3.25mL，1.014mmol，13eq)加入到中间体XLII(30mg，0.078mmol，1eq)在1,4-二噁烷(0.4mL)中的混合物中。室温下搅拌该反应16小时。过滤得到的沉淀并用乙醚洗涤，得到期望的化合物(17mg，收率：68％)。
实施例13:最终产物13的合成。
Figure BDA0001592936020001423
在120℃下加热中间体XLVI(17mg，0.057mmol，1eq)在氢氧化铵(1mL)中的悬浮液4h。然后将溶剂蒸发至干。通过制备HPLC纯化残余物，得到酰胺衍生物(1mg，收率：5％)。
实施例14:最终产物14的合成。
Figure BDA0001592936020001424
该化合物作为最终产物13的合成中的副产物获得(收率：12％)。可通过TLC分离实施例13和14的化合物(DCM/MeOH 10：1)：Rf＝0.5(实施例13)且Rf＝0.2(实施例14)。
实施例15:最终产物15的合成。
Figure BDA0001592936020001431
按照制备实施例13所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体L作为起始材料(收率：8％)。
实施例16:最终产物16的合成。
Figure BDA0001592936020001432
按照制备实施例13所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体LIV作为起始材料(收率：5％)。
实施例17:最终产物17的合成。
Figure BDA0001592936020001433
该化合物作为最终产物16的合成中的副产物获得(收率：20％)。可通过TLC分离实施例16和17的化合物(DCM/MeOH 10：1)：Rf＝0.5(实施例16)且Rf＝0.2(实施例17)。
实施例18:最终产物18的合成。
Figure BDA0001592936020001441
按照制备实施例13所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体LVIII作为起始材料(收率：5％)。
实施例19:最终产物19的合成。
Figure BDA0001592936020001442
该化合物作为最终产物18的合成中的副产物获得(收率：7％)。可通过TLC分离实施例18和19的化合物(DCM/MeOH 10：1)：Rf＝0.5(实施例18)且Rf＝0.2(实施例19)。
实施例20:最终产物20的合成。
Figure BDA0001592936020001443
将三氟乙酸(0.5mL)加入到中间体LXXIX(4mg，0.010mmol)中。将反应混合物在MW中在100℃下加热30分钟。减压蒸发三氟乙酸。通过使用DCM/MeOH(0％至10％MeOH在DCM)的溶剂系统洗脱的快速柱色谱(Isolute Si II 2g)多次纯化残余物，得到为白色固体的最终化合物(2mg，收率：81％)。
实施例21:最终产物21的合成。
Figure BDA0001592936020001451
按照制备实施例5所使用的相同方案制备产物，但是使用吗啉来代替4-氨基-1-boc-哌啶(收率：39％)。
实施例22:最终产物22的合成。
Figure BDA0001592936020001452
按照制备实施例13所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体LXIV作为起始材料。在该情况下，用快速色谱(拜泰齐公司，c-Hex中0％至40％EtOAc)纯化产物(收率：11％)。
实施例23:最终产物23的合成。
Figure BDA0001592936020001453
该化合物作为最终产物22的合成中的副产物获得(收率：11％)。可通过TLC分离实施例22和23的化合物(DCM/MeOH 10：1)：Rf＝0.5(实施例22)且Rf＝0.2(实施例23)。
实施例24:最终产物24的合成。
Figure BDA0001592936020001454
按照制备实施例13所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体LXV作为起始材料。在该情况下，用快速色谱(拜泰齐公司，0％至20％MeOH在DCM中)纯化产物(收率：52％)。通过HPLC-MS检测相应的酰胺。
实施例25:最终产物25的合成。
Figure BDA0001592936020001461
按照制备实施例13所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体LXVI作为起始材料。在该情况下，用快速色谱(拜泰齐公司，0％至20％MeOH在DCM中)纯化产物(收率：5％)。
实施例26:最终产物26的合成。
Figure BDA0001592936020001462
该化合物作为最终产物25的合成中的副产物获得(收率：7％)。可通过TLC分离实施例25和26的化合物(DCM/MeOH 10：1)：Rf＝0.5(实施例25)且Rf＝0.2(实施例26)。
实施例27:最终产物27的合成。
Figure BDA0001592936020001463
按照制备实施例13所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体LXVII作为起始材料。在该情况下，用快速色谱(拜泰齐公司，0％至20％MeOH在DCM中)纯化产物(收率：7％)。通过HPLC-MS检测相应的酰胺化合物。
实施例28:最终产物28的合成。
Figure BDA0001592936020001471
按照制备实施例13所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体LXXX作为起始材料。在该情况下，用快速色谱(拜泰齐公司，0％至20％MeOH在DCM中)纯化产物(收率：62％)。
实施例29:最终产物29的合成。
Figure BDA0001592936020001472
向中间体LXVIII(10mg，0.003mmol，1eq)中加入2M KOH(1mL)。在80℃下将混合物加热1h。加入1M HCl中和反应混合物，然后用正丁醇萃取。将有机相干燥(Na2SO4)并蒸发至干。通过快速色谱(拜泰齐公司，0％至40％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到最终化合物(5mg，收率：52％)。
实施例30:最终产物30的合成。
Figure BDA0001592936020001473
按照制备实施例13所使用的相同方案制备该产物，但使用中间体LXX作为起始材料并在150℃下加热48h而不是在120℃下加热4h。在该情况下，用快速色谱(拜泰齐公司，0％至20％MeOH在DCM中)纯化产物(收率：47％)。
实施例31:最终产物31的合成。
Figure BDA0001592936020001481
按照制备实施例20所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体LXXXII作为起始材料(收率：46％)。
实施例32:最终产物32的合成。
Figure BDA0001592936020001482
按照制备实施例13所使用的相同方案制备该产物，但使用中间体LXX作为起始材料并在150℃下加热48h而不是在120℃下加热4h。在该情况下，用快速色谱(拜泰齐公司，0％至20％MeOH在DCM中)纯化产物(收率：10％)。可通过TLC分离实施例30和32的化合物(DCM/MeOH 9：1)：Rf＝0.3(实施例30)且Rf＝0.1(实施例32)。
实施例33:最终产物33的合成。
Figure BDA0001592936020001483
按照制备实施例20所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体LXXVII作为起始材料(收率：22％)。
实施例34:最终产物34的合成。
Figure BDA0001592936020001484
按照制备实施例13所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体XXXIV作为起始材料。在该情况下，用快速色谱(拜泰齐公司，0％至20％MeOH在DCM中)纯化产物(收率：26％)。
实施例35:最终产物35的合成。
Figure BDA0001592936020001491
该化合物作为最终产物34的合成中的副产物获得(收率：21％)。可通过TLC分离实施例34和35的化合物(DCM/MeOH 10：1)：Rf＝0.5(实施例34)且Rf＝0.2(实施例35)。
实施例36:最终产物36的合成。
Figure BDA0001592936020001492
按照制备实施例13所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体XXXIII作为起始材料。在该情况下，用快速色谱(拜泰齐公司，0％至20％MeOH在DCM中)纯化产物(收率：21％)。
实施例37:最终产物37的合成。
Figure BDA0001592936020001493
该化合物作为最终产物36的合成中的副产物获得(收率：21％)。可通过TLC分离实施例36和37的化合物(DCM/MeOH 10：1)：Rf＝0.5(实施例36)且Rf＝0.2(实施例37)。
实施例38:最终产物38的合成。
Figure BDA0001592936020001501
按照制备实施例13所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体XXXII作为起始材料。在该情况下，用快速色谱(拜泰齐公司，0％至20％MeOH在DCM中)纯化产物(收率：18％)。
实施例39:最终产物39的合成。
Figure BDA0001592936020001502
按照制备实施例20所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体XXXVII作为起始材料(收率：14％)。
实施例40:最终产物40的合成。
Figure BDA0001592936020001503
按照制备实施例20所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体LXXIII作为起始材料(收率：54％)。
实施例41:最终产物41的合成。
Figure BDA0001592936020001504
在室温下，将氨(7N的MeOH溶液，2mL)和氯化钙(1M的MeOH溶液，0.5mL)加入到中间体LXXXIII(84mg，0.273mmol，1eq)中。将反应混合物在压力管中在120℃加热16小时。使反应混合物冷却至室温，并在真空下蒸发溶剂。用饱和NH4Cl水溶液和水处理残余物。用盐酸将所得混合物调节至pH 5，并在室温下搅拌混合物20分钟。再用EtOAc萃取水层。用Na2SO4干燥有机层，过滤并浓缩。通过快速色谱(拜泰齐公司，0％至40％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到为白色固体的所需产物(4mg，收率：5％)。
实施例42:最终产物42的合成。
Figure BDA0001592936020001511
按照合成实施例16所用的相同的方案制备该产物，但使用1-乙基-4-哌啶酮(CAS：3612-18-8)来代替1-环丙基-4-哌啶酮。
实施例43:最终产物43的合成。
Figure BDA0001592936020001512
按照制备实施例41所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体LXXXIV作为起始材料(收率：8％)。
实施例44:最终产物44的合成。
Figure BDA0001592936020001513
该产物作为最终产物43的合成中的副产物获得(收率：89％)。可通过TLC分离实施例43和44的化合物(DCM/MeOH 10：1)：Rf＝0.5(实施例43)且Rf＝0.2(实施例44)。
实施例45:最终产物45的合成。
Figure BDA0001592936020001521
按照制备实施例41所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体LXXXV作为起始材料(收率：10％)。
实施例46:最终产物46的合成。
Figure BDA0001592936020001522
按照合成实施例16所用的相同的方案制备该产物，但使用1-苯乙基-4-哌啶酮(CAS：39742-60-4)来代替1-环丙基-4-哌啶酮。
实施例47:最终产物47的合成。
Figure BDA0001592936020001523
按照合成实施例16所用的相同的方案制备该产物，但使用1-(3,3,3-三氟丙基)哌啶-4-酮(MFCD 18262851)来代替1-环丙基-4-哌啶酮。
实施例48:最终产物48的合成。
Figure BDA0001592936020001531
按照合成实施例16所用的相同的方案制备该产物，但使用1-(4,4,4-三氟丙基)哌啶-4-酮(MFCD 24222711)来代替1-环丙基-4-哌啶酮。
实施例49:最终产物49的合成。
Figure BDA0001592936020001532
按照制备实施例41所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体LXXXIX作为起始材料(收率：18％)。
实施例50:最终产物50的合成。
Figure BDA0001592936020001533
在室温下，将N，N'-二环己基碳二亚胺(46mg，0.225mmol，2eq)加入到中间体XCl(38mg，0.112mmol，1eq)在N，N-二甲基甲酰胺(1.1mL)中的混合物中，接着加入乙酸铵(113mg，1.460mmol，13eq)。然后，在回流条件下将该反应混合物加热16小时。然后，将反应冷却至室温，并用水淬灭。再用EtOAc萃取水层。所述有机层用Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩。首先通过快速色谱(拜泰齐公司，3％至10％MeOH的DCM溶液)纯化粗产物，然后通过制备型HPLC得到浅黄色固体的所需的最终产物(3mg，收率：8％)。
实施例51:最终产物51的合成。
Figure BDA0001592936020001541
按照制备实施例1(方案A)所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体XCIV作为起始材料。首先通过快速色谱(拜泰齐公司，5％至20％MeOH的DCM溶液)纯化产物，然后通过制备型HPLC得到浅黄色固体的所需的最终产物(收率：40％)。
实施例52:最终产物52的合成。
Figure BDA0001592936020001542
按照制备实施例41所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体XCV作为起始材料(收率：34％)。
实施例53:最终产物53的合成。
Figure BDA0001592936020001543
按照制备实施例41所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体XCVI作为起始材料。反应通过在压力管中120℃下加热2天来进行而不是16小时。首先通过快速色谱(拜泰齐公司，0％至40％MeOH的DCM溶液)纯化产物，然后通过制备HPLC得到白色固体的所需的最终产物(收率：5％)。
实施例54:最终产物54的合成。
Figure BDA0001592936020001551
按照制备实施例41所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体C作为起始材料。通过快速色谱(拜泰齐公司，0％至40％MeOH的DCM溶液)纯化产物，得到白色固体的所需的最终产物(收率：21％)。
实施例55:最终产物55的合成。
Figure BDA0001592936020001552
按照制备实施例41所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体CV作为起始材料。通过快速色谱(拜泰齐公司，2％至10％MeOH的DCM溶液)纯化产物，得到白色固体的所需的最终产物(收率：27％)。
实施例56:最终产物56的合成。
Figure BDA0001592936020001553
该产物作为最终产物55的合成中的副产物获得(收率：12％)。通过TLC分离实施例55和56的化合物(DCM/MeOH 10：1)：Rf＝0.5(实施例55)且Rf＝0.2(实施例56)。
实施例57:最终产物57的合成。
Figure BDA0001592936020001561
在室温下，将二碳酸二叔丁酯(30mg，0.136mmol，1.5eq)加入中间体CXII(27mg，0.091mmol，1eq)在1,4-二噁烷(0.4mL)中的混合物中，随后加入碳酸氢铵(11mg，0.136mmol，1.5eq)和吡啶(7μL，0.091mmol，1eq)。室温下搅拌该反应混合物16小时。在真空下蒸发溶剂，并将残余物溶于EtOAc中。用1N HCl水溶液洗涤有机相。用正丁醇萃取水相。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过快速色谱(拜泰齐公司，2％至8％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到白色固体的所需的最终产物(5mg，收率：19％)。
实施例58:最终产物58的合成。
Figure BDA0001592936020001562
在室温下，将三氟乙酸(0.061mL，0.789mmol，20eq)加入到中间体CXVIII(13mg，0.039mmol，1eq)在二氯甲烷(0.79mL)中的溶液中。室温下搅拌该反应1小时。将二氯甲烷加入到反应混合物中，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。用正丁醇萃取水相。用饱和NaCl水溶液洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过快速色谱(拜泰齐公司，2％至10％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到白色固体的所需的最终产物(4mg，收率：44％)。
实施例59:最终产物的分析数据
表1中提供了实施例1至58的化合物的特征数据。
表1：实施例1至58的化合物的LCMS和NMR数据
Figure BDA0001592936020001571
Figure BDA0001592936020001581
Figure BDA0001592936020001591
Figure BDA0001592936020001601
Figure BDA0001592936020001611
Figure BDA0001592936020001621
Figure BDA0001592936020001631
Figure BDA0001592936020001641
Figure BDA0001592936020001651
Figure BDA0001592936020001661
Figure BDA0001592936020001671
实施例60
如在上文所述的结合试验中所测试的，发现本发明的化合物抑制CDK8。表2列出了某些实施例的CDK8中的生物学活性。
表2：IC50值[M]表示的实施例的化合物、和作为有用的中间体提及的某些其他化合物中的CDK8活性的抑制。
Figure BDA0001592936020001681
Figure BDA0001592936020001691
实施例61
如在上文所述的ADP-GloTM试验中所测试的，发现本发明的化合物抑制单激酶激酶。表3列出了某些实施例的单激酶激酶中的生物学活性。
表3：IC50值[M]表示的某些实施例的化合物中的单激酶激酶活性的抑制。
Figure BDA0001592936020001692
Figure BDA0001592936020001701
实施例62
如在上文所述的结合试验中所测试的，发现本发明的化合物抑制CDK19-CYCC活性。表4列出了某些实施例的CDK19-CYCC中的生物学活性。
表4：IC50值[M]表示的某些实施例的化合物中的CDK19-CYCC活性的抑制。
Figure BDA0001592936020001711
Figure BDA0001592936020001721
实施例63:最终产物63的合成。
Figure BDA0001592936020001722
在氩气下，将中间体CXX(20mg，0.057mmol，1eq)、1-羟基苯并三唑水合物(15mg，0.097mmol，1.7eq)和n-(3-二甲基氨基丙基)-n'-乙基碳化二亚胺盐酸盐(22mg，0.114mmol，2eq)在N，N-二甲基甲酰胺(0.6mL)中的混合物在50℃下加热30分钟。然后，将反应混合物冷却至室温，加入氢氧化铵(28％w/w水溶液，0.03mL)。在室温下搅拌反应16小时，然后在80℃下加热1小时。冷却后，将反应混合物真空蒸发。将水加入到残余物中，首先用EtOAc然后用iPrOH/CHCl3(1：1)萃取。用水和饱和NaCl水溶液洗涤合并的有机层，然后用Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发。通过快速色谱(拜泰齐公司，二氧化硅，1％至10％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，以得到白色固体的最终产物63(3mg，收率：15％)。
实施例64:最终产物64的合成。
Figure BDA0001592936020001731
在0℃下，将氟化硼-二甲基硫醚复合物(0.027mL，0.258mmol，10eq)加入到终产物63(9mg，0.026mmol，1eq)的二氯甲烷(1mL)和乙腈(0.172mL)溶液中。室温下搅拌该反应16小时。将饱和NaHCO3水溶液加入到反应混合物中，并用iPrOH/CHCl3(1：1)萃取两次。合并的有机层用Na2SO4干燥，在真空下过滤并浓缩。通过快速色谱(拜泰齐公司，二氧化硅，2％至10％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，以得到白色固体的最终产物64(2mg，收率：23％)。
实施例65:最终产物65的合成。
Figure BDA0001592936020001732
按照制备实施例58所使用的相同方案制备产物，用三氟乙酸对二氯甲烷中的中间体CXXIII进行BOC脱保护(收率：14％)。
实施例66:最终产物66的合成。
Figure BDA0001592936020001733
在室温下，将碳酸铯(46mg，0.141mmol，4eq)加入到最终产物15(9mg，0.035mmol，1eq)在乙腈(0.4mL)和N，N-二甲基甲酰胺(0.071mL)中的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后加入碘乙烷(1N在乙腈中，0.053mL，0.053mmol，1.5eq)。室温下搅拌该反应16小时。用水淬灭反应混合物，并用EtOAc萃取3次。合并的有机层用Na2SO4干燥，在真空下过滤并蒸发。通过快速色谱(拜泰齐公司，二氧化硅，2％至7％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，以得到白色固体的最终产物66(3mg，收率：30％)。
实施例67:最终产物67的合成。
Figure BDA0001592936020001741
按照制备实施例66所使用的相同方案制备该产物，但是使用碘代甲烷作为烷化剂。通过快速色谱(拜泰齐公司，二氧化硅，1％至5％MeOH的DCM溶液)纯化产物，以得到白色固体的最终产物67(2mg，收率：15％)。
实施例68:最终产物68的合成。
Figure BDA0001592936020001742
按照制备实施例66所使用的相同方案，通过碘乙烷与最终产物63的烷基化反应制备该产物(收率：15％)。
实施例69:最终产物69的合成。
Figure BDA0001592936020001743
在室温和氩气下，将氢氧化铵(32％水溶液，3.500mL)加入到中间体CXI(57mg，0.182mmol，1eq)在甲醇(1.825mL)和N，N-二甲基甲酰胺(1.825mL)的混合物中。将反应在压力管中在120℃加热16小时。冷却后，真空蒸发反应混合物，并通过快速色谱(拜泰齐公司，二氧化硅，2％至8％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，以得到白色固体并且为外消旋混合物的最终产物(13mg，收率：24％)。通过手性柱色谱(CHIRALPAK AC柱(10×250mm))通过制备型HPLC对外消旋混合物进行分离。流动相：甲醇/乙醇30：70。流速：5mL/分钟，10分钟，225nm)以得到最终产物69(第一洗脱峰，Rt＝5.163分钟)(ee 99％)和最终产物70(第二洗脱峰，Rt＝6.645分钟)(ee99％)。该化合物已被画成R-对映体，然而对于化合物69，该不对称中心的绝对构型尚未确定。
实施例70:最终产物70的合成。
Figure BDA0001592936020001751
最终产物70：第二洗脱峰(Rt＝6.645分钟)(ee 99％)。该化合物已被画成S-对映体，然而对于化合物70，该不对称中心的绝对构型尚未确定。
实施例71:最终产物71的合成。
Figure BDA0001592936020001752
按照制备实施例69所使用的相同方案制备该产物，但是使用中间体CXXVII作为起始材料(收率：18％)。通过手性柱色谱(CHIRALPAK AC柱(10×250mm))通过制备型HPLC对外消旋混合物进行分离。流动相：甲醇/乙醇30：70。流速：5mL/分钟，10分钟，225nm)以得到白色固体的最终产物71(第一洗脱峰，Rt＝5.163分钟)(ee 99％)和白色固体的最终产物72(第二洗脱峰，Rt＝6.645分钟)(ee99％)。该化合物已被画成R-对映体，然而对于化合物71，该不对称中心的绝对构型尚未确定。
实施例72:最终产物72的合成。
Figure BDA0001592936020001753
最终产物72：第二洗脱峰(Rt＝6.645分钟)(ee 99％)。该化合物已被画成R-对映体，然而对于化合物72，该不对称中心的绝对构型尚未确定。
实施例73:最终产物73的合成。
Figure BDA0001592936020001761
按照制备实施例66所使用的相同方案，通过最终产物63与1-氟-2-碘乙烷的烷基化反应制备该产物(收率：38％)。
实施例74:最终产物74的合成。
Figure BDA0001592936020001762
按照制备实施例13所用的酰胺形成的相同方案，通过中间体CXXVIII(50mg，0.124mmol)与氨氢氧化铵的反应得到最终产物74(2mg，4％收率)制备该产物。
实施例75:最终产物75的合成。
Figure BDA0001592936020001763
在N2下,向化合物CXXIX(0.062mmol，1eq)在0.6ml DMF中的溶液中加入甲酰胺(0.074mL，1.860mmol，30eq)并逐滴加入MeONa(0.5M，在MeOH中)(0.372mL，0.186mmol，3eq)。将混合物在100℃的密封管中搅拌16h。然后加入饱和NH4Cl水溶液和二乙醚。分离有机相并用Na2SO4干燥。然后将溶剂蒸发至干。通过在环己烷/EtOAc(90/10至60/40)的溶剂混合物中通过拜泰齐公司(快速自动色谱)纯化所得残余物，得到黄色固体的期望的最终化合物75(5mg，19％收率)。
实施例76:最终产物76的合成。
Figure BDA0001592936020001771
按照制备实施例66所使用的相同方案，通过最终产物15(8mg，0.031mmol)与1-氟-2-碘乙烷的烷基化制备该产物。通过快速色谱(拜泰齐公司，二氧化硅，1％至7％MeOH的DCM溶液)纯化产物，以得到白色固体的最终产物76(3mg，收率：32％)。
实施例77:最终产物77的合成。
Figure BDA0001592936020001772
在三乙胺(1.1eq)作为碱存在下，在0℃下，通过产物12(75mg，0.251mmol)与乙酰氯(1eq)在DCM中的酰化反应合成终产物77。在用NH4Cl水溶液处理水溶液后，萃取有机相，干燥并蒸发至干。在DCM/MeOH100/0至97/3中通过自动色谱纯化所得残余物，得到15mg的最终产物77(18％收率)。
实施例78:最终产物78的合成。
Figure BDA0001592936020001773
按照与化合物66中报道的类似的合成方案，通过产物63与2eq的1-氟-2-碘乙烷的烷基化反应合成最终产物78。通过拜泰齐公司快速色谱(拜泰齐公司，12g，0％至20％MeOH的DCM溶液)分离终产物，然后HPLC纯化，得到白色固体的所需产物78(2mg)。
实施例79:最终产物79的合成。
Figure BDA0001592936020001781
在N2下,向中间体CXXX(64mg，0.157mmol，1eq)在1.6ml DMF中的溶液中加入甲酰胺(0.094mL，2.355mmol，15eq)并逐滴加入MeONa(0.5M，在MeOH中)(0.236mL，0.471mmol，3eq)溶液。将混合物在100℃的密封管中搅拌16h。然后加入饱和NH4Cl水溶液和二乙醚。用Na2SO4干燥有机层并蒸发至干。通过拜泰齐公司快速色谱(DCM/MeOH 100/0至80/20)纯化残余物，得到黄色固体的所需化合物79(20mg，32％收率)。
实施例80:最终产物80的合成。
Figure BDA0001592936020001782
在N2下,向中间体CXXXI(0.560mmol，1eq)在7ml DMF中的溶液中逐滴加入甲酰胺(0.334mL，8.400mmol，15eq)和MeONa(0.5M，在MeOH中)(3.36mL，1.680mmol，3eq)。将混合物在100℃的密封管中搅拌16h。然后加入饱和NH4Cl水溶液和二乙醚。用Na2SO4干燥有机层并蒸发至干。通过拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，DCM/MeOH 100/0至80/20)纯化残余物，得到黄色固体的所需产物80(48mg，27％收率)。
实施例81:最终产物81的合成。
Figure BDA0001592936020001783
在N2下,向中间体CXXXII(0.666mmol，1eq)在7ml DMF中的溶液中加入甲酰胺(0.397mL，9.990mmol，15eq)并逐滴加入MeONa(0.5M在MeOH中)(4mL，1.998mmol，3eq)溶液。将混合物在120℃的密封管中搅拌16h。然后加入饱和NH4Cl水溶液和丁醇。用Na2SO4干燥有机层并蒸发至干。通过拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，DCM/MeOH 100/0至80/20)纯化残余物，得到黄色固体的最终化合物81(45mg，21％收率)。
实施例82:最终产物82的合成。
Figure BDA0001592936020001791
按照与合成化合物81所使用的相同合成途径合成最终产物82，通过中间体CXXXIII(0.666毫摩尔，1eq)与甲酰胺的酰胺化反应，用拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，DCM/MeOH 100/0至80/20)纯化得到最终化合物82(20mg，收率12％)。
实施例83:最终产物83的合成。
Figure BDA0001592936020001792
按照与合成化合物80所使用的相同合成途径合成最终产物83，通过中间体CXXXIV(0.560毫摩尔)与甲酰胺的酰胺化反应，用拜泰齐公司(二氧化硅，DCM/MeOH 100/0至80/20)纯化后得到最终化合物83(20mg，收率11％)。
实施例84:最终产物84的合成。
Figure BDA0001592936020001793
按照与合成化合物80所使用的相同合成方案合成最终产物84，通过中间体CXXXV(0.560毫摩尔)与甲酰胺的酰胺化反应，用拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，DCM/MeOH 100/0至80/20)纯化后得到最终化合物84(5mg，收率3％)。
实施例85:最终产物85的合成。
Figure BDA0001592936020001801
按照合成化合物81所使用的相同合成途径合成最终产物85，通过在N2下1.4mlDMF中的中间体CXXXVI(50mg，0.137mmol，1eq)与甲酰胺(0.082mL，2.058mmol，15eq)和MeONa(0.5M，在MeOH中)(0.824mL，0.412mmol，3eq)在100℃下进行酰胺化反应48h，之后在水相处理和用拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，DCM/MeOH 100/0至80/20)纯化后得到黄色固体的最终化合物85(3mg，收率6％)。
实施例86:最终产物86的合成。
Figure BDA0001592936020001802
按照合成化合物81所使用的相同合成途径合成最终产物86，通过在N2下1.5mlDMF中的中间体CXXXVII(40mg，0.134mmol，1eq)与甲酰胺(0.08mL，2.011mmol，15eq)和MeONa(0.5M，在MeOH中)(0.8mL，0.402mmol，3eq)在100℃下进行酰胺化反应48h，之后在水相处理和用拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，DCM/MeOH 100/0至80/20)纯化后得到黄色固体的最终化合物86(5mg，收率13％)。
实施例87:最终产物87的合成。
Figure BDA0001592936020001803
按照合成化合物81所使用的相同合成途径合成最终产物87，通过在N2下2ml DMF中的中间体CXXXVIII(65mg，0.181mmol，1eq)与甲酰胺(0.108mL，2.72mmol，15eq)和MeONa(0.5M，在MeOH中)(1.088mL，0.544mmol，3eq)在50℃下进行酰胺化反应16h，之后在水相处理和用拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，DCM/MeOH 100/0至80/20)纯化后得到黄色固体的最终化合物87(30mg，收率48％)。
实施例88:最终产物88的合成。
Figure BDA0001592936020001811
按照合成化合物81所使用的相同合成途径合成最终产物88，通过在N2下2ml DMF中的中间体CXXXIX(25mg，0.064mmol，1eq)与甲酰胺(15eq)和MeONa(0.5M，在MeOH中)(3eq)在100℃下进行酰胺化反应16h，之后在水相处理和用拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，DCM/MeOH 100/0至80/20)纯化后得到黄色固体的最终化合物88(15mg，收率62％)。
实施例89和实施例90：最终产物89和90的合成
Figure BDA0001592936020001812
按照与合成化合物实施例66所使用的相同合成途径，通过化合物实施例57与碘乙烷的烷基化反应合成最终产物89和90。在快速色谱纯化(SiO2，DCM/MeOH 98：2至93：7)后得到外消旋混合物，然后在手性柱色谱(CHIRALPAK IA柱(10×250mm))中通过制备型HPLC进行分离最终产物。流动相：c-己烷/乙醇80：20。流速：3mL/分钟，14分钟，300nm)以得到白色固体的最终产物89(第一洗脱峰，Rt＝10.519分钟)(ee 99％)和白色固体的最终产物90(第二洗脱峰，Rt＝11.568分钟)(ee 99％)。该化合物已被画成具体的对映体，然而对于化合物89和90，不对称中心的绝对构型尚未确定。
实施例91:最终产物91的合成。
Figure BDA0001592936020001821
在室温下搅拌二噁烷(0.5mL)中的中间体CXL(12mg)与二噁烷溶液(0.2mL)中的4MHCl的混合物3小时。收集形成的白色固体，用乙醚洗涤并真空干燥。所需的最终产物作为盐酸盐获得，白色固体，实施例91(4mg)。
实施例92:最终产物92的合成。
Figure BDA0001592936020001822
最终产物92通过在NaCN(0.03eq)的3ml氨的甲醇溶液(7N)的存在下，在45℃在密封管中2周的中间体CXLII(20mg，1eq)的酰胺化反应来合成。将溶剂真空浓缩并通过自动色谱(二氧化硅，梯度0％至10％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到最终化合物92(10mg，白色固体)。
实施例93
Figure BDA0001592936020001823
最终产物93通过在甲酰胺(30eq)和MeONa(0.5M，在MeOH中)(3eq)存在下使中间体CXLVI(50mg，1eq)在100℃下酰胺化反应16小时合成，在水性处理和拜泰齐公司快速色谱法纯化(二氧化硅，DCM/MeOH 98/2至90/10)后得到最终化合物93(12mg)。
实施例94:最终产物94的合成。
Figure BDA0001592936020001831
在N2下,向酯中间体CXLVII(25mg，0.077mmol，1eq)在0.8ml DMF中的溶液中加入甲酰胺(0.046mL，1.149mmol，15eq)并逐滴加入MeONa(0.5M，在MeOH中)(0.46mL，0.230mmol，3eq)。将混合物在50℃的密封管中搅拌16h。然后加入饱和NH4Cl溶液和二乙醚。用Na2SO4干燥有机层并蒸发至干。通过拜泰齐公司快速色谱(拜泰齐公司，20g，0％至20％MeOH的DCM溶液)纯化所得残余物，得到黄色固体，将其通过HPLC再纯化，得到白色固体的最终化合物94(3mg，12％收率)。
实施例95和实施例96：最终产物95和96的合成
Figure BDA0001592936020001832
向乙腈(1mL)和DMF(1mL)中的手性化合物实施例71和72(59mg，0.197mmol，1eq)的外消旋混合物中加入碳酸铯(128mg，2eq)。搅拌混合物30分钟，然后加入碘乙烷1N的乙腈溶液(0.24ml，1.2eq)。在24h后加入过量的碳酸铯(65mg)直至反应完成。然后用水淬灭反应混合物并用iPrOH/CHCl3(1：1)的混合物萃取。用Na2SO4干燥合并的有机层。在减压下蒸发溶剂以获得粗产物，通过拜泰齐公司快速色谱纯(二氧化硅，DCM/MeOH；梯度：2％至10％)一起纯化12246302，以获得最终化合物实施例96(15mg)。通过手性柱色谱(CHIRALPAK IA柱(10×250mm))通过制备型HPLC对外消旋混合物进行分离。流动相：正己烷/乙醇80：20。流速：5mL/分钟，15分钟，300nm)以得到白色固体的最终产物95(第一洗脱峰，Rt＝8.296分钟)(ee96％)和白色固体的最终产物96(第二洗脱峰，Rt＝9.137分钟)(ee 90％)。该化合物已被画成具体的对映体，然而对于化合物95和96，不对称中心的绝对构型尚未确定。
实施例97：最终产物97和对映异构体106和107的合成
Figure BDA0001592936020001841
按照合成化合物81所使用的相同合成途径合成最终产物97，通过在N2下DMF中的中间体CLI与甲酰胺(15eq)和MeONa(0.5M，在MeOH中)(3eq)在100℃下进行酰胺化反应16h，之后在水相处理和用拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，DCM/MeOH；梯度：1％至5％)纯化后得到最终化合物97(42mg；52％收率；白色固体)。
通过手性柱色谱(CHIRALPAK IA柱(10×250mm))通过制备型HPLC对外消旋混合物进行分离。流动相：正己烷/乙醇80：20。流速：5mL/分钟，7分钟，300nm)以得到白色固体的最终产物106(第一洗脱峰，Rt＝4.80分钟)和白色固体的最终产物107(第二洗脱峰，Rt＝5.15分钟)。化合物106和107已经被绘制为特定的对映体，然而不对称中心的绝对构型尚未确定。
实施例98:最终产物98的合成。
Figure BDA0001592936020001842
按照合成化合物81所使用的相同合成途径合成最终产物98，通过在N2下DMF中的中间体CLII与甲酰胺(30eq)和MeONa(0.5M，在MeOH中)(3eq)在100℃下进行酰胺化反应16h，之后在水相处理和用拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，DCM/MeOH 98/2到92/8)纯化后得到淡黄色固体的最终化合物98(8mg；15％收率)。
实施例99和实施例100：最终产物99和100的合成
Figure BDA0001592936020001851
通过在手性柱色谱(CHIRALPAK IC柱(10×250mm))中制备型HPLC来手性分离实施例98。流动相：正己烷/乙醇80：20。流速：0.8mL/分钟，15分钟，300nm)以得到白色固体的最终产物99(第一洗脱峰，Rt＝9.1分钟)(ee 95％)和白色固体的最终产物100(第二洗脱峰，Rt＝10.23分钟)(ee 94％)。
实施例101:最终产物101的合成。
Figure BDA0001592936020001852
最终产物101通过在甲酰胺(30eq)和MeONa(0.5M，在MeOH中)(3eq)存在下使中间体CLIX(25mg，1eq)在100℃下酰胺化反应16小时合成，在水性处理和拜泰齐公司快速色谱法纯化(二氧化硅，DCM/MeOH 98/2至92/8)后得到最终化合物101(8mg)。
实施例102:最终产物102的合成。
Figure BDA0001592936020001861
按照合成化合物81所使用的相同合成途径合成最终产物102，通过在N2下DMF中的中间体CLIII(37mg，1eq)与甲酰胺(15eq)和MeONa(0.5M，在MeOH中)(3eq)在100℃下进行酰胺化反应16h，之后在水相处理和用拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，DCM/MeOH梯度：0％至10％)纯化后得到最终化合物102(3mg)。
实施例103:最终产物103的合成。
Figure BDA0001592936020001862
按照合成化合物81所使用的相同合成途径合成最终产物103，通过在N2下DMF中的中间体CL(58mg，1eq)与甲酰胺(15eq)和MeONa(0.5M，在MeOH中)(3eq)在100℃下进行酰胺化反应16h，之后在水相处理和用拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，DCM/MeOH梯度：0％至5％)纯化后得到最终化合物103(20mg)。
实施例104:最终产物104的合成。
Figure BDA0001592936020001863
按照合成化合物81所使用的相同合成途径合成最终产物104，通过在N2下DMF中的中间体CLVII(20mg，1eq)与甲酰胺(15eq)和MeONa(0.5M，在MeOH中)(3eq)在室温下进行酰胺化反应16h，之后在水相处理和用拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，DCM/MeOH梯度：0％至10％)纯化后得到最终化合物104(3mg)。
实施例105:最终产物105的合成。
Figure BDA0001592936020001871
按照合成化合物104所使用的相同合成途径合成最终产物104，通过中间体CLVIII(22mg，1eq)与甲酰胺(15eq)和MeONa(0.5M，在MeOH中)(3eq)加热到50℃下进行酰胺化反应16h，之后用拜泰齐公司快速色谱(二氧化硅，DCM/MeOH梯度：0％至10％)纯化后得到最终化合物105(3mg)。
实施例106和107
见实施例97。
实施例108:最终产物的分析数据
表5中提供了实施例63至107的化合物的特征数据。
表5：实施例63至107的化合物的LCMS和NMR数据
Figure BDA0001592936020001872
Figure BDA0001592936020001881
Figure BDA0001592936020001891
Figure BDA0001592936020001901
Figure BDA0001592936020001911
Figure BDA0001592936020001921
Figure BDA0001592936020001931
Figure BDA0001592936020001941
Figure BDA0001592936020001951
Figure BDA0001592936020001961
实施例109
如在上文所述的结合试验中所测试的，发现本发明的化合物抑制CDK8。表6列出了某些实施例的CDK8中的生物学活性。
表6：IC50值[M]表示的实施例的化合物、和作为有用的中间体提及的某些其他化合物中的CDK8活性的抑制。
Figure BDA0001592936020001962
Figure BDA0001592936020001971
实施例110
如在上文所述的ADP-GloTM中所测试的，发现本发明的化合物抑制单激酶激酶。表7列出了某些实施例的单激酶激酶中的生物学活性。
表7：IC50值[M]表示的某些实施例的化合物中的单激酶激酶活性的抑制。
Figure BDA0001592936020001972
Figure BDA0001592936020001981
实施例111
如在上文所述的结合试验中所测试的，发现本发明的化合物抑制CDK19-CYCC活性。表8列出了某些实施例的CDK19-CYCC中的生物学活性。
表8：IC50值[M]表示的某些实施例的化合物中的CDK19-CYCC活性的抑制。
Figure BDA0001592936020001991
Figure BDA0001592936020002001
实施例112
使用蛋白质印迹试验检测IFN-γ处理的细胞中CDK8底物STAT1(S727)的磷酸化来筛选各个化合物抑制细胞内CDK8的能力。还使用蛋白质印迹试验检测同步细胞中单激酶底物H3T3的磷酸化来筛选化合物抑制细胞内单激酶的能力。结果列于表9和10。
表9：生物标志物调节定量值
Figure BDA0001592936020002002
表10：生物标志物调节半定量值
Figure BDA0001592936020002003
Figure BDA0001592936020002011
半定量值的定义：***<500nM；500nM<**<10μM
实施例113
测试化合物的体外效力通过上文描述的体外细胞增殖试验来测定。结果列于表11和12。
表11：生长抑制-定量值
Figure BDA0001592936020002012
Figure BDA0001592936020002021
表12：生长抑制-半定量值
Figure BDA0001592936020002022
Figure BDA0001592936020002031
半定量值的定义：***<1μM；1μM<**<10μM；10μM<*<100μM
实施例114
表13中显示了在MTT体外细胞增殖试验中针对本发明的化合物和各种化疗剂的组合而计算的组合指数(CI)。
表13：组合指数数据
Figure BDA0001592936020002032
Figure BDA0001592936020002041
协同称谓基于CI值：CI<0.1(++++),0.1<CI<0.3(+++),0.3<CI<0.7(++),0.7<CI<1.2(+)
实施例115
实施例43、70和73的化合物在上文所述的集落形成试验中进行测试，并发现其表现出剂量依赖效应。这些化合物的活性列于表14中。结果也显示在图1中。
表14：从集落形成试验获得的实施例43、70和73的平均EC50值：
Figure BDA0001592936020002051
实施例116
可使用碘化丙啶测定法和流式细胞术分析法来筛选实施例43的化合物影响细胞周期的能力。
图2中显示的数据表示细胞周期的各个阶段(G1、S、G2M、多倍化和亚G1)中细胞的百分比。实施例43浓度的增加诱导了G2M阻滞和细胞凋亡。
实施例117
使用上文所述的方法测定测试化合物的体内效力以确定人结肠异种移植物中的靶调节。使携带SW620人结肠癌异种移植物的小鼠接受5mg/kg单次口服剂量的实施例43或载剂。给药后1、4、8和24小时采集肿瘤。
结果汇总在图3和4中。在1和4h观察到明确的靶调节。

Claims (33)

1.式I的化合物，
Figure FDA0003355410640000011
其中：
R1和R2各自独立地表示氢、C1-6烷基、C3-6环烷基或3-到6-元杂环烷基，后三个基团任选地被选自＝O和Q1的一个或多个取代基所取代，条件是R1和R2中的至少一个不是氢；或
R1和R2与和它们都连接的碳原子可连接在一起以形成3-到12-元环，任选地含有一个或多个杂原子，且任选地含有一个或多个不饱和基团，并且环任选地被选自＝O、＝S、＝N(R20)和氟的一个或多个取代基所取代；
R3表示氢、卤素、C1-12烷基、C3-12环烷基、杂环烷基、任选地被一个或多个Q4基团所取代的苯基；
R4表示-N(R40)R41或-OR42；
R5表示氢、C1-12烷基、-C(O)-C1-12烷基，后两个基团任选地被一个或多个Q5基团所取代；
R6表示氢、卤素、或苯基C6H5；
R7a和R7b各自独立地表示氢或卤素；
R20表示氢、-C(O)CH3、-CH2CH3、-(CH2)1-3CF3、-环丙基、-(CH2)2C6H5；
R20表示氢或C1-6烷基；
每个R40和R41独立地表示氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-12元杂环烷基、芳基，其中C1-6烷基、C3-6环烷基、4-12元杂环烷基任选地被选自E2和＝O的一个或多个取代基所取代；或
任何相关的一对R40和R41可在当连接到同一个原子时与它们任选连接的必需的氮原子连接在一起以形成4-到8-元环，任选地含有一个或多个双键，并且环任选地被选自E4的一个或多个取代基所取代；
Q1表示卤素、C1-12烷基、酰基、氧杂环丁烷，Q4表示卤素、-OCH3、-CF3、-OH、-SO2NH2，Q5表示卤素、-OCH3、C6H5、(CH3)2；
E2表示C1-6烷基、苯基或-OCH3，E4表示氢或叔丁基羰基；
或其药学上可接受的盐。
2.如权利要求1所述的化合物，其中任何相关的一对R40和R41可在当连接到同一个原子时与它们任选连接的必需的氮原子连接在一起以形成4-到8-元环，并含有一个或多个选自氧、氮和硫的杂原子。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其中：
R1和R2与和它们都连接的碳原子可连接在一起以形成3-到12-元环，任选地含有一个或多个杂原子，任选地包含一个或多个不饱和态，并且环任选地被选自＝O、＝S、＝N(R20)和氟的一个或多个取代基所取代，其中
i)所述环是3-到8-元环；和/或
ii)任选地含有的杂原子选自氧、氮和硫；和/或
iii)任选地含有的不饱和态是双键。
4.如权利要求1或2所述的化合物，其中：
R1和R2各自独立地表示氢、甲基、异丙基、环丁基、环己基、四氢吡喃基、氧杂环丁烷、甲基氧乙烷或4-哌啶基，条件是R1和R2中的至少一个不表示氢；或
R1和R2与和它们都连接的碳原子连接在一起，形成3-至6-元环，任选地含有一个或两个选自氧、氮和硫的杂原子，任选包含一个或两个双键，该环任选地被选自以下的一个或多个取代基所取代：＝O、＝S、＝N(R20)和E1，其是环丁基、环己基、4,4-氟-1-环己基、4-哌啶基、1-环丙炔基-4-哌啶基、1-(2,2,2-三氟乙基)-4-哌啶基、1-乙基-4-哌啶基、1-苯基乙基-4-哌啶基、1-(3,3,3，-三氟丙基)-4-哌啶基、1-(4,4,4-三氟丁基)-4-哌啶基、1-乙酰基-4-哌啶基、乙氧基乙烷和四氢吡喃中的一种。
5.如权利要求1或2所述的化合物，其中R3表示氢、氯、溴、C1-4烷基、乙烯基、环丙基、二氢吡喃基或苯基，所述苯基可任选地被氟、-OCH3、-CF3、-OH、或-SO2NH2所取代。
6.如权利要求1或2所述的化合物，其中：
R42表示氢或C1-4烷基，R40和R41独立地表示氢、CH3、-CH2CH3、乙苯基CH2CH2C6H5、苯甲酰基、-CH2CH2OCH3-、异丙基-CH(CH3)2、哌啶基、叔丁氧羰基哌啶基；
R40和R41与它们连接的必需的氮原子连接在一起以形成吗啉环。
7.如权利要求1或2所述的化合物，其中R4表示-NH2、-NHCH3、-N(CH2CH3)2、-NH(CH2CH2C6H5)、-NH(苯甲酰基)、-NHCH2CH2OCH3、-NH(CH(CH3)2)、-NH(哌啶基)、-NH(叔丁氧羰基哌啶基)、吗啉环、-OH,或-O-C1-4-烷基。
8.如权利要求1或2所述的化合物，其中R5表示氢、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2F、-CH2CH2OCH、-CH2CF3、-CH2C6H5、-CH(CH3)2。
9.如权利要求1或2所述的化合物，其中R6表示氢、氯或苯基C6H5。
10.如权利要求1或2所述的化合物，其中R7a和R7b独立地表示氢或氯。
11.如权利要求4所述的化合物，其中：
R1和R2各自独立地表示氢、甲基、异丙基、环丁基、环己基、四氢吡喃基、氧杂环丁烷、甲基氧乙烷或4-哌啶基，条件是R1和R2中的至少一个不表示氢；或
R1和R2与和它们都连接的碳原子连接在一起，形成3-至6-元环，任选地含有一个或两个选自氧、氮和硫的杂原子，任选包含一个或两个双键，该环任选地被选自以下的一个或多个取代基所取代：＝O、＝S、＝N(R20)和E1，其是环丁基、环己基、4,4-氟-1-环己基、4-哌啶基、1-环丙炔基-4-哌啶基、1-(2,2,2-三氟乙基)-4-哌啶基、1-乙基-4-哌啶基、1-苯基乙基-4-哌啶基、1-(3,3,3，-三氟丙基)-4-哌啶基、1-(4,4,4-三氟丁基)-4-哌啶基、1-乙酰基-4-哌啶基、乙氧基乙烷和四氢吡喃中的一种。
12.如权利要求4所述的化合物，其中R3表示氢、氯、溴、C1-4烷基、乙烯基、环丙基、二氢吡喃基或苯基，所述苯基可任选地被氟、-OCH3、-CF3、-OH、或-SO2NH2所取代。
13.如权利要求4所述的化合物，其中：
R42表示氢或C1-4烷基，R40和R41独立地表示氢、CH3、-CH2CH3、乙苯基CH2CH2C6H5、苯甲酰基、-CH2CH2OCH3-、异丙基-CH(CH3)2、哌啶基、叔丁氧羰基哌啶基；
R40和R41与它们连接的必需的氮原子连接在一起以形成吗啉环。
14.如权利要求4所述的化合物，其中R4表示-NH2、-NHCH3、-N(CH2CH3)2、-NH(CH2CH2C6H5)、-NH(苯甲酰基)、-NHCH2CH2OCH3、-NH(CH(CH3)2)、-NH(哌啶基)、-NH(叔丁氧羰基哌啶基)、吗啉环、-OH,或-O-C1-4-烷基。
15.如权利要求4所述的化合物，其中R5表示氢、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2F、-CH2CH2OCH、-CH2CF3、-CH2C6H5、-CH(CH3)2。
16.如权利要求4所述的化合物，其中R6表示氢、氯或苯基C6H5。
17.如权利要求4所述的化合物，其中R7a和R7b独立地表示氢或氯。
18.如权利要求3所述的化合物，其中：
R1和R2各自独立地表示氢、甲基、异丙基、环丁基、环己基、四氢吡喃基、氧杂环丁烷、甲基氧乙烷或4-哌啶基，条件是R1和R2中的至少一个不表示氢；或
R1和R2与和它们都连接的碳原子连接在一起，形成3-至6-元环，任选地含有一个或两个选自氧、氮和硫的杂原子，任选包含一个或两个双键，该环任选地被选自以下的一个或多个取代基所取代：＝O、＝S、＝N(R20)和E1，其是环丁基、环己基、4,4-氟-1-环己基、4-哌啶基、1-环丙炔基-4-哌啶基、1-(2,2,2-三氟乙基)-4-哌啶基、1-乙基-4-哌啶基、1-苯基乙基-4-哌啶基、1-(3,3,3，-三氟丙基)-4-哌啶基、1-(4,4,4-三氟丁基)-4-哌啶基、1-乙酰基-4-哌啶基、乙氧基乙烷和四氢吡喃中的一种。
19.如权利要求3所述的化合物，其中R3表示氢、氯、溴、C1-4烷基、乙烯基、环丙基、二氢吡喃基或苯基，所述苯基可任选地被氟、-OCH3、-CF3、-OH、或-SO2NH2所取代。
20.如权利要求3所述的化合物，其中：
R42表示氢或C1-4烷基，R40和R41独立地表示氢、CH3、-CH2CH3、乙苯基CH2CH2C6H5、苯甲酰基、-CH2CH2OCH3-、异丙基-CH(CH3)2、哌啶基、叔丁氧羰基哌啶基；
R40和R41与它们连接的必需的氮原子连接在一起以形成吗啉环。
21.如权利要求3所述的化合物，其中R4表示-NH2、-NHCH3、-N(CH2CH3)2、-NH(CH2CH2C6H5)、-NH(苯甲酰基)、-NHCH2CH2OCH3、-NH(CH(CH3)2)、-NH(哌啶基)、-NH(叔丁氧羰基哌啶基)、吗啉环、-OH,或-O-C1-4-烷基。
22.如权利要求3所述的化合物，其中R5表示氢、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2F、-CH2CH2OCH、-CH2CF3、-CH2C6H5、-CH(CH3)2。
23.如权利要求3所述的化合物，其中R6表示氢、氯或苯基C6H5。
24.如权利要求3所述的化合物，其中R7a和R7b独立地表示氢或氯。
25.如权利要求1～24中任一项所定义的式I的化合物或其药学上可接受的盐在CDK8抑制剂药物制造中的用途。
26.药物制剂，其包括如权利要求1～24中任一项所定义的式I的化合物或其药学上可接受的盐，其与药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体混合。
27.如权利要求1～24中任一项所定义的式I的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗希望和/或需要抑制CDK8和/或单激酶的疾病的药物中的用途。
28.权利要求27所述的用途，其中所述疾病选自癌症、免疫失调、心血管疾病、病毒感染、炎症、代谢/内分泌功能失调、神经失调、自身免疫失调和其他相关疾病。
29.权利要求28所述的用途，其中所述疾病选自非小细胞肺癌、前列腺癌、结肠/结肠直肠癌、胃腺瘤、胃腺癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、宫颈癌和恶性黑色素瘤。
30.一种组合产品，其包含：
(A)如权利要求1～24中任一项所定义的式I的化合物或其药学上可接受的盐；和
(B)可用于治疗癌症和/或增殖性疾病的另一种治疗剂，
其中组分(A)和(B)中的每一种都与药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体混合配制。
31.制备如权利要求1～3中任一项所定义的式I的化合物的方法，该方法包括：
(i)对于R6表示芳基或杂芳基且任选地如权利要求1～3中任一项所定义地被取代的式I化合物，使相应的式II的化合物与式III的化合物反应，
Figure FDA0003355410640000071
其中L1表示离去基团，并且R1、R2、R3、R4、R5、R7a和R7b如权利要求1～3中任一项所定义，
L2-R6 III
其中L2表示基团，并且R6为芳基或杂芳基基团且任选地如权利要求1～3中任一项所定义地被取代；
(ii)对于其中R3和R5都是氢且R4表示OR42的式I的化合物，使相应的式IV的化合物环化，
Figure FDA0003355410640000072
其中R1、R2、R42、R6、R7a和R7b如权利要求1～3中任一项所定义；
(iii)对于R4表示NH2的式I的化合物，
(a)使R4表示-OR42的式I的化合物与氨源反应，其中R42如权利要求1～3中任一项所定义，条件是R42不表示氢；或
(b)使R4表示-N(H)CH2-芳基的式I的化合物与脱保护试剂反应，其中所述芳基任选地如权利要求1～3中任一项中E2所定义的那样被取代；
(iv)对于R4表示-N(R40)R41的式I的化合物，其中R40和R41如权利要求1～3中任一项所定义，使相应的R4表示OR42的式I的化合物与式V的化合物反应，其中R42如权利要求1～3中任一项所定义，
HN(R40)R41 V
其中R40和R41如权利要求1～3中任一项所定义；
(v)对于R4表示–OH的式I的化合物，使相关的R4表示如权利要求1～3中任一项所定义的-OR42的式I的化合物水解，条件是R42不表示氢；
(vi)对于R5表示C1-12烷基基团且任选地如权利要求1～3中任一项所定义地被取代的式I的化合物，使相关的R5表示氢的式I的化合物与式VI的化合物反应，
L3-R5 VI
其中R5表示C1-12烷基基团且任选地如权利要求1～3中任一项所定义地被取代，并且L3表示离去基团；
(vii)对于R3表示卤素的式I的化合物，使相关的R3表示氢的式I的化合物与卤离子源反应；
(viii)对于R3表示烷基基团或芳基基团的式I的化合物，使式VII的化合物与式VIII的化合物反应，
Figure FDA0003355410640000091
其中R1、R2、R4、R5、R6、R7a和R7b如权利要求1～3中任一项所定义，并且L4表示离去基团，
L5-R3 VIII
其中L5表示基团，并且R3如权利要求1～3中任一项所定义；或
(ix)对于R5表示氢的式I的化合物，使式IX的化合物氧化，
Figure FDA0003355410640000101
其中R1、R2、R3、R4、R6、R7a和R7b如权利要求1～3中任一项所定义，并且R5表示氢。
32.如权利要求26所述的药物制剂的制备方法，其包括将如权利要求1～24中任一项定义的式I的化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体结合。
33.如权利要求30所述的组合产品的制备方法，所述方法包括将如权利要求1～24中任一项定义的式I的化合物或其药学上可接受的盐与可用于治疗癌症和/或增殖性疾病的其他治疗剂和至少一种药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体结合。
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