CN108026028B - 用可溶性环氧化物水解酶和过氧化物酶体增殖物激活受体的新型双重调节剂治疗糖尿病和代谢综合症 - Google Patents

用可溶性环氧化物水解酶和过氧化物酶体增殖物激活受体的新型双重调节剂治疗糖尿病和代谢综合症 Download PDF

Info

Publication number
CN108026028B
CN108026028B CN201680050731.4A CN201680050731A CN108026028B CN 108026028 B CN108026028 B CN 108026028B CN 201680050731 A CN201680050731 A CN 201680050731A CN 108026028 B CN108026028 B CN 108026028B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ocnh
ppar
nmr
ppm
compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201680050731.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108026028A (zh
Inventor
J·D·伊米格
M·A·H·汉
E·普罗沙克
R·布罗彻
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Goethe Universitaet Frankfurt am Main
Medical College of Wisconsin
Original Assignee
Goethe Universitaet Frankfurt am Main
Medical College of Wisconsin
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Goethe Universitaet Frankfurt am Main, Medical College of Wisconsin filed Critical Goethe Universitaet Frankfurt am Main
Publication of CN108026028A publication Critical patent/CN108026028A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108026028B publication Critical patent/CN108026028B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/64—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
    • C07C233/66—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by halogen atoms or by nitro or nitroso groups
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B18/00—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body
    • A61B18/04—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body by heating
    • A61B18/12—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body by heating by passing a current through the tissue to be heated, e.g. high-frequency current
    • A61B18/14—Probes or electrodes therefor
    • A61B18/1492—Probes or electrodes therefor having a flexible, catheter-like structure, e.g. for heart ablation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
    • A61B5/06—Devices, other than using radiation, for detecting or locating foreign bodies ; determining position of probes within or on the body of the patient
    • A61B5/061—Determining position of a probe within the body employing means separate from the probe, e.g. sensing internal probe position employing impedance electrodes on the surface of the body
    • A61B5/062—Determining position of a probe within the body employing means separate from the probe, e.g. sensing internal probe position employing impedance electrodes on the surface of the body using magnetic field
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M25/00—Catheters; Hollow probes
    • A61M25/0009—Making of catheters or other medical or surgical tubes
    • A61M25/0012—Making of catheters or other medical or surgical tubes with embedded structures, e.g. coils, braids, meshes, strands or radiopaque coils
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M25/00—Catheters; Hollow probes
    • A61M25/01—Introducing, guiding, advancing, emplacing or holding catheters
    • A61M25/0105—Steering means as part of the catheter or advancing means; Markers for positioning
    • A61M25/0127—Magnetic means; Magnetic markers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/64—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
    • C07C233/65—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings having the nitrogen atoms of the carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to carbon atoms of unsubstituted hydrocarbon radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/64—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
    • C07C233/67—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C07C233/68—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom
    • C07C233/73—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom of a carbon skeleton containing six-membered aromatic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B18/00—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body
    • A61B2018/00005—Cooling or heating of the probe or tissue immediately surrounding the probe
    • A61B2018/00011—Cooling or heating of the probe or tissue immediately surrounding the probe with fluids
    • A61B2018/00029—Cooling or heating of the probe or tissue immediately surrounding the probe with fluids open
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B18/00—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body
    • A61B2018/00571—Surgical instruments, devices or methods for transferring non-mechanical forms of energy to or from the body for achieving a particular surgical effect
    • A61B2018/00577—Ablation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B34/00—Computer-aided surgery; Manipulators or robots specially adapted for use in surgery
    • A61B34/20—Surgical navigation systems; Devices for tracking or guiding surgical instruments, e.g. for frameless stereotaxis
    • A61B2034/2046—Tracking techniques
    • A61B2034/2051—Electromagnetic tracking systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
    • A61B5/68—Arrangements of detecting, measuring or recording means, e.g. sensors, in relation to patient
    • A61B5/6846—Arrangements of detecting, measuring or recording means, e.g. sensors, in relation to patient specially adapted to be brought in contact with an internal body part, i.e. invasive
    • A61B5/6847—Arrangements of detecting, measuring or recording means, e.g. sensors, in relation to patient specially adapted to be brought in contact with an internal body part, i.e. invasive mounted on an invasive device
    • A61B5/6852—Catheters

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Human Computer Interaction (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

作为可溶性环氧化物水解酶(sEH)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)双重可溶性调节剂的N‑苄基苯甲酰胺，其可作为药物用于治疗包括糖尿病的代谢综合征(MetS)疾病簇。还提供了其制造和使用的方法。

Description

用可溶性环氧化物水解酶和过氧化物酶体增殖物激活受体的 新型双重调节剂治疗糖尿病和代谢综合症
相关申请的交叉援引
本申请要求2015年7月2日提交的美国临时申请号62/188,010的权益，所述申请通过引用纳入本文用于所有目的。
关于联邦资助研究或开发的声明
本发明是在政府支持下由国家卫生研究院(National Institutes of Health)授予的基金号1R01DK103616-0A1资助完成。政府对本发明拥有一定的权利。
发明领域
本发明主要涉及代谢综合征(MetS)和相关病症的治疗。更具体地，本发明是关于作为可溶性环氧化物水解酶(sEH)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)双重可溶性调节剂的N-苄基苯甲酰胺，其可作为药物用于治疗包括糖尿病的MetS疾病簇(clusterdiseases)。
背景技术
代谢综合症(MetS)是一组导致动脉硬化性心血管疾病(ASCVD)(如冠心病、中风和外周血管疾病)以及2型糖尿病(T2D)的风险因素(如向心性肥胖、致动脉粥样硬化性血脂异常、胰岛素抗性和内皮功能障碍)的总称1–4。此外，T2D患者会发生长期微血管并发症：2/3的个体患有神经性疼痛5并且1/3的个体会发生糖尿病肾病6。MetS的病理生理学非常复杂，人们对其仅有部分理解。参见图1。流行病学证据显示，西方社会MetS患病率的上升是由于西方生活方式因素，如失衡、高热量食物摄入，久坐的生活方式和压力3。迄今为止，涉及所有风险因素的MetS一线治疗是改变生活方式，即减重、增加体育活动和抗动脉粥样硬化饮食3,7,8。尽管如此，已经形成的个别紊乱,如内皮功能障碍和T2D等并不能完全被这种方法所逆转，并且随着年龄的增长症状会恶化。因此，各种风险因素累加的患者也随时间累加了相当数量的分别治疗各种病症的药物治疗。
肥胖形成了MetS中多个风险因素的基础，因此是一个重要的靶标。可以通过改变食欲或热量吸收来实现药物体重控制。食欲改变可以通过干扰中枢神经系统(CNS)来实现，但是由于其严重的副作用，许多药物已经退市10,11。奥利司他是唯一获批的药物，其直接改变卡路里吸收，抑制胰腺和胃脂肪酶，并在CNS外起作用8。
MetS的另一个方面，即致动脉粥样硬化性血脂异常，其基础是导致斑块形成和动脉粥样硬化的异常脂蛋白代谢。在此，3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG CoA)还原酶抑制剂(他汀)12和PPARα激动剂(贝特类)目前被用于降低血浆胆固醇和甘油三酯水平13。长期高血压部分由于动脉粥样硬化形成所引起，其引起导致MetS患者死亡的大血管事件，如心血管疾病(CVD)和中风14。高血压治疗通常涉及诸如利尿剂和β阻断剂等药物的组合。然而，在MetS患者的治疗中，这可能并不是一个选择，因为胰岛素抗性以及血脂异常可能在治疗期间加重15。在此，优选使用其他降血压药物，如血管紧张素转换酶拮抗剂和血管紧张素-II受体阻断剂。
T2D可能是由MetS所导致的最相关的紊乱。在此，外周胰岛素抗性是由代谢功能障碍所诱导的，其导致高胰岛素血症以及升高的血糖。随着疾病的进展，胰腺β-胰岛细胞功能逐渐丧失，导致系统性胰岛素缺乏和高血糖16,17。在晚期状况中，治疗不善的T2D患者发生许多微血管并发症，如视网膜病变、疼痛性神经病变和肾病，而严格的血糖控制以及血压水平调整是预防的唯一途径18。目前为止，相较于对MetS其他风险因素的治疗，已确立的治疗或缓解T2D的疗法不那么有效或成功。增加可用胰岛素是补偿肌肉和肝细胞中外周胰岛素抗性的一种方式。这可以通过应用触发胰腺胰岛素释放的磺酰脲类或双胍，或通过胰岛素治疗(外部注射)实现19,20。
综上，MetS风险因素和继发疾病的治疗需要大量的药物，而这导致多药现象。在此，患者的药代动力学和药理学情况变得复杂而不利，并且可能发生不可预测的药物-药物间相互作用。此外，存在医疗合规(medical compliance)方面的风险。尽管治疗费用上升，但是用药错误的概率增加3。就此而言，明智的做法是令药物研究注重能够治疗MetS不止一个方面的化合物。因此，一次解决多个风险因素的多靶标配体在此类情形中的应用是合理的21。
PPARγ是PPAR核受体家族的成员，由长链脂肪酸和类二十烷酸等多种亲脂性化合物内源性激活。共活化剂募集之后，该受体与类视色素(retionid)X受体(RXR)异二聚化22并且配体依赖性和非依赖性地影响多种靶基因的转录/转录阻抑。PPARγ在脂肪形成，调节脂代谢和葡萄糖平衡以及抗炎过程中起重要作用，并且因此被用于治疗T2D 23。采用如罗格列酮和吡格列酮的噻唑烷二酮(TZD)对受体的药理学活化显示出对胰岛素作用和血糖水平的有益作用24。在“脂质偷窃假说(lipid steal hypothesis)”中，这些作用来源于白色脂肪组织摄取游离脂肪酸(FFA)和甘油三酯(TG)。这通过上调数种PPARγ靶基因来维持，如FABP4(人脂肪细胞脂肪酸结合蛋白4，对应于小鼠ap4)、LPL(脂蛋白脂肪酶)、脂肪酸转运蛋白(CD36，脂肪酸移位酶，FATP，甘油转运蛋白水通道蛋白)和PEPCK(磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶)25–30。此外，已将PPARγ的胰岛素敏化作用与生物活性脂肪因子的上调相关联，如导致降低肝葡萄糖输出以及改善葡萄糖摄取的脂连蛋白31–34，并且与PPAR□活化的抗炎性质相关联，如对胰岛素抗性有负面影响的肿瘤坏死因子α(TNFα)和抵抗素抑制35,36。最近的研究还表明，TZD可以对胰腺β-细胞的功能具有预防作用，稳定胰岛素分泌，并且支持全血胰岛素作用37–39。同样值的关注的是，PPARγ活化被论述为上调HDL-C脂蛋白，并且其可能具有治疗血脂异常方面的价值40,41。
然而，TZD的临床应用受限于治疗患者体重增长过度、体液潴留和骨质疏松症风险增加42,43。临床试验的荟萃分析已经表示罗格列酮会增加充血性心力衰竭、心肌梗塞、心血管疾病和全因死亡率的风险，这导致其在美国的可及性被严格限制，并被提议退出欧洲市场。曲格列酮由于其肝毒性而退出市场，而吡格列酮似乎会引发膀胱癌44。另一个缺点是TZD对于大血管事件发生的不佳效果，尽管血糖水平的平衡降低微血管并发症45。就此而言，需要说明的是，某些使用TZD所见的不良事件如癌症发生和肝毒性似乎是个别化合物的特性，而不是类别特有现象46–48。
可溶性环氧化物水解酶(sEH)在脂肪组织中大量表达，并且其表达和活性随着肥胖而增加49。sEH是花生四烯酸级联的酶，其促进细胞色素P450衍生的环氧二十碳三烯酸(EET)水解为其生物活性较低的对应二醇，二羟基环氧二十碳三烯酸(dihydroxyepoxyeicosatrienoicacid(DHET))50。通过sHE抑制，EET水平增加。内皮细胞来源的EET活化平滑肌细胞上钙激活的钾通道，导致超极化和血管舒张51,52。许多研究显示EET对多种MetS相关的紊乱有作用，如心血管疾病(CVD)53、血脂异常54、神经病变55-57和肾病58。在高血压动物模型中，EET起内皮来源松弛因子的作用，并且对心血管系统具有多种保护作用。最近的研究显示，由EET累积致sEH抑制和随后PPARγ活化的急性心肌梗死患者来源的内皮祖细胞改善血管生成。Hammock等已报导了sEH抑制在血脂异常治疗中的相关性。在该研究中，LDL受体敲除小鼠中sEH抑制增加了脂肪组织中ABCA1(ATP结合盒转运子A1)表达，ABCA1是促进胆固醇从细胞输出以及随后形成新生HDL的胆固醇流出调节蛋白。这伴随着循环HDL的增加，其增强反向胆固醇运输通路。此外，sEH抑制降低LDL-C水平，并且减小动物中已形成动脉粥样硬化斑块的尺寸54。而且，sEH抑制在多个体内糖尿病神经性疼痛模型中展现出镇痛作用56,61,62。如之前所述，胰岛β-细胞的功能受损是导致T2D的潜在机制之一。这显示，sEH抑制可以预防高血糖症，并且在糖尿病小鼠中增强胰岛葡萄糖刺激的胰岛素分泌。此外，sEH敲除小鼠展现出STZ诱导的糖尿病中胰岛细胞凋亡减弱63。而且，多个小鼠模型显示sEH抑制具有肾脏保护作用58。目前，市场上并没有sEH抑制剂。因此，由于存在尚未满足的对于更安全且兼具心脏和肾脏保护性质的PPARγ的需要，PPARγ激动与sEH拮抗作用合并于一种化合物中将在治疗MetS和T2D方面具有显著的优势。
发明内容
此处，发明人提供了通过给予特定的N-苄基苯甲酰胺以影响可溶性环氧化物水解酶(sEH)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的同步调节来治疗MetS疾病簇(包括糖尿病)的多靶标方法。
因此，第一方面，本发明包括特定的化合物，其具有以下结构：
Figure BDA0001585995500000051
其中：X-Y是CH＝C或CH2-CH；R1是CH2CH3，CH3或H；并且R3是氟取代的芳基；或其盐。位于R3的所述氟取代的芳基基团优选含三氟甲基或三氟甲氧基取代的苯基基团，更优选苯基基团上邻位取代的。
在根据本发明的一些化合物中，R3是：
Figure BDA0001585995500000052
本发明优选的化合物希望R3是：
Figure BDA0001585995500000053
本发明的化合物包括这样一些，其中：X-Y是CH2-CH和R1是CH2CH3；X-Y是CH＝C和R1是CH2CH3；X-Y是CH2-CH和R1是H；以及X-Y是CH＝CH和R1是H。
本发明特别优选的化合物希望X-Y是CH2CH，R1是H，R3是
Figure BDA0001585995500000054
在特别优选的实施方式中，给予对象时所述化合物表现出小于1.0微摩尔的对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)半最大有效浓度(EC50)以及对可溶性环氧化物水解酶(sEH)半最大抑制浓度(IC50)。
在另一方面，本发明提供了一种组合物，其包括：(a)本发明的N-苄基苯甲酰胺；以及(b)药学上可接受的运载体。在优选的实施方式中，组合物被配制成口服剂型。
在另一方面中，本发明提供了一种在对象中治疗代谢综合症的方法，其包括给予对象治疗有效量的本发明N-苄基苯甲酰胺，其中，可溶性环氧化物水解酶(sEH)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)被该化合物同时调节，从而治疗对象中的代谢综合症。
在优选的实施方式中，治疗有效量在对象中提供了小于1.0微摩尔的对PPARγ半最大有效浓度(EC50)以及对sEH半最大抑制浓度(IC50)。
在其他实施方式中，本发明包括本发明N-苄基苯甲酰胺在制备用于治疗对象MetS的药剂中的应用。同样，本发明还包括本发明化合物在治疗对象MetS中的应用。
在另一方面中，本发明提供了一种在对象中治疗糖尿病的方法，其包括给予对象治疗有效量的本发明N-苄基苯甲酰胺，其中，可溶性环氧化物水解酶(sEH)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)被该化合物同时调节，从而治疗对象中的糖尿病。
在优选的实施方式中，治疗有效量在对象中提供了小于1.0微摩尔的对PPARγ半最大有效浓度(EC50)以及对sEH半最大抑制浓度(IC50)。
在其他实施方式中，本发明包括本发明N-苄基苯甲酰胺在制备用于治疗对象糖尿病的药剂中的应用。同样，本发明还包括本发明化合物在治疗对象糖尿病中的应用。
在另一方面中，本发明提供了一种在对象中同时调节可溶性环氧化物水解酶(sEH)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)活性的方法，其包括给予对象治疗有效量的本发明N-苄基苯甲酰胺化合物，其中可溶性环氧化物水解酶(sEH)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在对象中被所述化合物同时调节。
在优选的实施方式中，治疗有效量在对象中提供了小于1.0微摩尔的对PPARγ半最大有效浓度(EC50)以及对sEH半最大抑制浓度(IC50)。
在其他实施方式中，本发明包括本发明N-苄基苯甲酰胺化合物在生产药剂中的应用，所述药剂用于在对象中同时调节可溶性环氧化物水解酶(sEH)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)活性。同样，本发明还包括本发明化合物在对象中同时调节可溶性环氧化物水解酶(sEH)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)活性的应用。
根据以下详细说明、权利要求和图片之后，本发明的其他目的、特征和优点将显而易见。
附图说明
图1展示MetS疾病簇以及提出的通过sEH和PPARγ双调节的多致病相互作用。
图2显示了3T3-L1小鼠成纤维细胞在不同化合物存在下分化。随后，a)用油红对细胞染色，或b)通过qPCR分析确定PPARγ靶基因表达(GLUT4、脂联素、FABP4、LPL)。c)与Spargue-Dawley大鼠肝微粒体孵育后化合物1c的留存浓度。d)每两个时间点向3只动物单次p.o施用30mg/kg体重后，小鼠中化合物1c的血浆浓度。e)化合物1c单次施用后(30mg/kg体重；8小时；3只动物)，小鼠肝脏中PPARγ靶基因CD36的表达。f)化合物1c单次p.o.施用(30mg/kg体重；每两个时间点3只动物)后，小鼠血浆中EET/DHET比例。示出的是3个独立实验的平均值±s.e.m.。
图3显示了a)通过饮水施用(30mg/kg体重；6只动物)的小鼠中化合物14c的血浆浓度；b)14天30mg/kg体重饮水施用化合物14c后，小鼠肝脏中PPARγ靶基因CD36的表达。
图4显示sEH活性与PPARγ活性值的图。
图5显示化合物14c的结合模式，模拟化合物嵌入化合物GSK1997132B共结晶的PPARγLBD的X射线结构。
图6显示了新型双配体(dual ligand)设计的典型结构。GSK1997132B，非酸性PPARγ激动剂。GSK2188931B，体内活性sEH抑制剂。KCL，PPARα激动剂，其包含苄基苯甲酰胺部分。1c，首个新型双配体，以及SAR的起源。
图7显示了(a)IBCF，TEA，无水DCM，12小时；(b)NaH，THF，0℃，2小时；(c)H2，Pt/C，EtOH，12小时；(d)MeOH|H2O|THF，KOH，MW，100℃，30分钟；(e)Me3SO+I-，NaH，DMSO，6小时；(f)KOH，EtOH|H2O，16小时；(g)二乙基苄基膦酸酯，NaH，THF，0℃，2小时(h)DIPEA，16小时。
图8显示了(a)EDC，DMAP，无水DCM，12小时；(b)Pd(AcO)2，K2CO3，丙酮|H2O，65℃，1小时；(c)NaN3，NH3Cl，DMF，12小时。
图9显示了人分化的原代脂肪细胞的油红染色。前脂肪细胞在各种化合物存在下分化。G：未处理的对照；H：10μM CIU(sEH抑制剂)；I：2μM罗格列酮(PPARγ激动剂)；J：1μM1c；K：5μM 1c；L：10μM 1c。示出的是三个实验中的一个代表性实验。照片放大100倍。
图10显示了在不同刺激物存在下分化的人原代脂肪细胞中PPARγ靶基因(GLUT4，脂连蛋白，FABP4，LPL)的qPCR分析。OF+FCS代表只在基础培养基中的细胞分化。对照显示了没有PPARγ刺激物的实验。示出的是3个独立实验的平均值±s.e.m.。
图11显示了对小鼠p.o.施用1b(30mg/kg单剂量)后1c的PK。示出的是每两个时间点3只小鼠血浆的平均值±s.e.m.。
图12显示了对小鼠p.o.施用1b(30mg/kg单剂量)后1c的大脑浓度。示出的是每个时间点3只小鼠大脑阻止的平均值±s.e.m.。
图13显示了大鼠肝微粒体中化合物14c的代谢稳定性。示出的是3个独立实验的平均值±s.e.m.。
图14显示了肌醇磷酸盐1(IP1)测量所得化合物1c&14c在GSK40(FFA1)上的作用。用指定的化合物刺激稳定表达hFFA1的人重组HEK293细胞，并定量IP1积累。包括TUG488(升)，将其作为强劲FFA1活化的参照。pEC50：1c：5.08±0.22；14c：4.85±0.25。示出的是3个独立实验的平均值±s.e.m.。
图15显示了肌醇磷酸盐1(IP1)测量所得化合物1c&14c在GSK40(mFFA1)上的作用。用指定的化合物刺激稳定表达FFA1的小鼠同源物(mFFA1)的人重组HEK293细胞，并定量IP1积累。包括TUG488 1，将其作为强劲mFFA1活化的参照。pEC50：1c：5.31±0.31；14c：4.63±0.23。示出的是3个独立实验的平均值±s.e.m.。
图16提供了RB394分析体外和体内数据的比较。
图17显示SHROB模型中RB394的收缩压数据。
图18显示SHROB模型中RB394的体重数据。
图19显示SHROB模型中RB394的尿蛋白数据。
图20显示SHROB模型中RB394的血糖数据。
图21描述了MetS大鼠模型和RB394分析时间进程。
图22显示血糖和葡萄糖AUC数据。
图23显示尿蛋白和肾小球损伤评分。
图24显示了描述肾脏中管型形成的过碘酸希夫染色(x200)(上图)和描述纤维化的Picrosirus红染色(x200)。*P<0.05，WKY+载剂比SHROB+载剂，#P<0.05，SHROB+载剂比SHROB+RB394。
图25显示接受8周载剂或RB394处理的WKY和SHROB肾脏中炎性标志物MCP-1排泄(左上)，巨嗜细胞浸润的半定量评分(右上)和巨噬细胞浸润(x200；箭头)的代表性显微照片(下)。*P<0.05，WKY+载剂比SHROB+载剂；#P<0.05，SHROB+载剂比SHROB+RB394。
图片26描述了发明人所用方法以及2型糖尿病大鼠模型。
图27显示ZSF1大鼠的收缩压。
图28显示ZSF1大鼠的收缩压。
图29显示ZSF1大鼠的蛋白尿/肌酸酐比例。
具体实施方式
I.概述
描述本发明材料和方法之前，应理解，本发明不限于所述具体方法、方案、材料和试剂，这些都是可变的。还应理解，本文所用术语的目的仅是描述具体实施方式，不应用来限制本发明的范围，所述范围仅受任何随后提交的非临时申请的限制。
必须注意到，本文和所附权利要求书所用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数含义，除非上下文另有明确说明。同样，术语“一个”(或“一种”)、“一个或多个”和“至少一个”在本文中可互换使用。还应当注意，术语“包括”、“包含”、和“具有”可以互换使用。
除非另外定义，否则，本文中所使用的所有技术和科学术语都具有本发明所属领域普通技术人员通常所理解的同样含义。虽然可采用与本文所述类似或等同的任何方法和材料实施或测试本发明，但在此描述的是优选的方法和材料。本文具体提及的所有出版物和专利都通过引用全文纳入本文用于所有目的，包括描述和公开所述出版物报道的可与本发明联合使用的化学物质、设备、统计分析和方法。本说明书引用的所有参考文献都应看作对本领域技术水平的指示。本文中所有内容均不应解释为承认本发明不是先于这些公开内容的在先发明。
II.发明内容
发明人在此公开了新型的N-苄基苯甲酰胺，包含这类化合物的组合物，合成这样化合物的方法，以及这样的化合物在治疗包括糖尿病的MetS疾病簇中的应用。本发明人已经表明，本发明的化合物展现出治疗效果，并且在相关啮齿类模型中耐受良好。虽然本文并未采用任何一种操作模式，但是发明人已经证明本发明的化合物是sEH和PPARγ的双重调节剂。
已知的PPARγ活化剂主要副作用是导致体重增加和水肿的水分滞留。幸运地是，sEH抑制和EET是(促)尿钠排泄的，并且正向影响水和电解质平衡64,65。Imig等已经表明，在自发性高血压肥胖(SHROB)大鼠中，sEH抑制剂(t-AUCB)和PPARγ激动剂(罗格列酮)降低血压，降低全身葡萄糖、TC和FFA。采用这三个生物标志物，他还证明了减轻肾脏损伤的肾脏保护作用。值得注意的是，本文报道了组合相较于单一sEH/PPARγ治疗的进一步阳性协同作用66。发明人现在已经研究了双重sEH/PPARγ治疗，并且其意想不到的发现部分构成本发明的基础。
本文所用“对象”指的是哺乳动物和非哺乳动物。“哺乳动物”指的是任意的哺乳动物纲成员，包括但不限于人类、非人灵长类，例如大猩猩和其他猿类和猴类；农场动物，例如牛、马、山羊、绵羊和猪；家养动物，例如兔、狗和猫；实验室动物，包含啮齿动物，例如大鼠、小鼠和豚鼠；等等。非哺乳动物的示例包括但不限于鸟类等。术语“对象”不表示特定年龄或性别。
本为所用“给予”或“给药”包含把本发明化合物引入到身体中的任何方式，所述方式优选通过系统循环。示例包括但不限于口服、口颊、舌下、经肺、透皮、经粘膜，以及皮下、腹膜内、静脉内、和肌内注射。
“治疗有效量”指给予对象用于治疗疾病或病征时足以实现疾病治疗的化合物的用量。根据所述化合物、治疗的疾病状态、治疗的疾病严重程度、所述对象的年龄和相对健康状态、给药路径和方式、主治医生或兽医从业者的判断、和其他因素，所述“治疗有效量”可以改变。
就本发明目的而言，“治疗”或“处理”描述了以对抗疾病、病症、或紊乱为目的对患者的管理和护理。该术语包括预防性治疗或处理(即预防)和缓解性治疗或处理。治疗或处理包括给予本发明的化合物以防止所述症状或并发症的发作、缓解所述症状或并发症、或消除所述疾病、病症、或紊乱。
化合物以治疗有效量给予患者。化合物可以单独给予，或者作为药学可接受组合物的一部分给予。另外，化合物或组合物可以一次性给予(例如通过推注)，多次给药(例如一系列片剂)，或在一段时间内基本均匀地递送(例如使用透皮递送)。此外，所述化合物的剂量可以随着时间改变。化合物的给予可以使用速释制剂、控释制剂或其组合。术语“控释”包含缓释、延迟释放和其组合。
本发明的药物组合物能大量、以单个单位剂量、或以多个独立单位剂量来制备、包装或出售。本文所用“单位剂量”是一个独立量的药物组合物，所述药物组合物包含预定量的活性成分。活性成分的含量通常等于将给予患者的活性成分的剂量，或者是该剂量的适当的一部分(例如该剂量的一半或三分之一)。
根据接受治疗的人其个体特征(identity)、体形和病情，并且还根据组合物的给药途径，本发明药物组合物中活性成分、药学可接受运载体和任意其他成分的相对量会有所不同。举例而言，组合物可包含0.1％至100％(w/w)活性成分。本发明药物组合物的单位剂量通常包含约100毫克到约2毫克的活性成分，优选包含约200毫克到约1.0毫克的活性成分。
人的优选剂量可以是在每天一次口服给药的低mg/kg范围内。也可以接受每天两次。
为了提高水溶性，优选的化合物可与环糊精或环糊精衍生产物一起配制，用如聚乙二醇或其他极性官能团的取代基衍生化，或者包括在脂质体中。为了口服递送，化合物可以用亲脂性官能团修饰或与积极吸收分子(actively absorbed molecule)偶联。其他方法在"提高口服药物生物可利用性的方案(Strategies to improve oral drugbioavailability)"(Isabel Gomez-Orellana，Expert Opinion on Drug Delivery，2005年5月，卷2，No.3：第419-433页)中讨论，所述文献通过引用纳入本文。
本发明另一方面涉及包括本发明药物组合物和说明材料的试剂盒。说明材料包括用于向人告知本发明药物组合物能用于本文所述目的之一的发表物、记录、图表或任何其他表达媒介。说明材料还可以，例如，描述本发明药物组合物的适当剂量。例如，可将试剂盒的说明材料附着至含有本发明的药物组合物的容器，或与含有药物组合物的容器一起运输。或者，可将说明材料与容器分开运输，目的在于由用药者将说明材料和药物组合物配合使用。
本发明还包括这样的试剂盒，其中包含本发明药物组合物以及用于将所述组合物递送给人的递送装置。举例而言，递送装置可以是可挤压喷雾瓶，定量喷雾瓶，气溶胶喷雾装置，雾化器，干粉输送装置，自推进溶剂/粉末分配装置，注射器，针头，棉栓或剂量测量容器。所述试剂盒还包括本文所述的说明材料。所述试剂盒还包括分装组合物的容器，如分装瓶(divided bottle)或分装箔片包装。容器的其他示例包含注射器、盒、袋等。通常，试剂盒包含各不同组分的给药用法说明。当各组分优选以不同剂型(如口服和胃肠外)给予、以不同的剂量间隔给予时，或者当处方医生希望对组合的个别成分进行调量时，所述试剂盒形式特别有优势。
试剂盒上可能需要提供记忆辅助工具(memory aid)，例如以临近片剂或胶囊的数字的形式，其中所述数字与应该摄取特定片剂或胶囊的方案的天数对应。这种记忆辅助工具的另一个示例是印在卡片上的日历，例如，以“第一周，星期一、星期二...等，第二周，星期一、星期二”等。其他记忆辅助工具是显而易见的。“日剂量”可以是在指定日期服用的单一片剂或胶囊或若干药丸或胶囊。
在本发明的另一个实施方式中，提供了分配器，其被设计成按设定使用顺序一次一个地分配日剂量。优选地，分配器配有记忆辅助工具，从而进一步协助服从用药方案。这样的记忆辅助工作的一个示例是机械计数器，其指示已分配的日剂量的数量。这样的记忆辅助工具的另一个示例是电池供电的微芯片存储器，其与液晶读出器组合，或与声音信号提醒组合，例如，其读出服用上次日剂量的日期和/或提醒何时服用下一次剂量。
本发明的化合物(任选地包括其他药物活性化合物)可以口服、直肠、胃肠道外(例如，静脉内、肌肉内或皮下)、脑池内、阴道内、腹膜内、膀胱内、局部(例如，粉末、软膏或滴剂)或者以口颊或鼻喷雾给予患者。考虑的其他制剂包含预计的纳米颗粒、脂质体制备物、包含活性成分的再密封的红血球和免疫制剂。
药物组合物的胃肠道外给予包括任何以下特征的给予途径：通过物理手段突破人组织并经由该组织突破口给予药物组合物。因此，胃肠道外给予包括通过注射组合物，经外科切口施用组合物、经组织穿透性非手术伤口施用组合物等方式给予药物组合物。具体而言，胃肠外给予包括皮下、腹膜内、静脉内、动脉内、肌肉内或胸骨内注射以及静脉内、动脉内或肾透析输注技术。例如，本发明的组合物可以通过脑(通过vPAG)注射、鞘内注射、腹膜内注射或血液注射的方式给予对象。
适合胃肠道外注射的组合物包括与药学上可接受的运载体(如生理学可接受的水性或非水性无菌溶液、分散系、悬浮液或乳液)结合的活性成分，或可以包括用于重建成无菌可注射溶液或分散系的无菌粉末。合适的水性或非水性运载体、稀释剂、溶剂或载剂的示例包括水、等渗盐溶液、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)，其合适混合物，甘油三羧酸酯，包含植物油如橄榄油或可注射的有机酯如油酸乙酯。例如，可以通过使用包衣(如卵磷脂)、通过保持所需粒度(就分散系而言)和/或通过使用表面活性剂，来维持合适的流动性。可以适合推注给予或连续给予的形式制备、包装或出售这类制剂。可注射制剂可以单位剂量形式制备、包装或出售，如含于安瓿中，含有防腐剂的多剂量容器中，或在由医师注射或自动注射的单次使用装置中。
用于胃肠道外给予的制剂包括悬浮液、溶液、油性或水性载剂中的乳液、糊料和可植入的缓释制剂或可生物降解的制剂。这种制剂还可以包含一种或多种其他成分，包含悬浮剂、稳定剂或分散剂。在用于胃肠道外给予的制剂的一个实施方式中，活性制剂以干燥(即，粉末或颗粒)形式提供，用于与适当的载剂(例如，无菌无热自由水)重建后胃肠道外给予重建所得组合物。
药物组合物可以无菌可注射水性或油性悬浮液或溶液的形式制备、包装或出售。该悬浮液或溶液可以根据现有技术制备，并且可以包含除了活性成分以外的其他成分，如本文所述分散剂、润湿剂或悬浮剂。例如，这种无菌可注射制剂可使用胃肠道外可接受的无毒稀释剂或溶剂(如水或1,3-丁二醇)制备。其他可接受的稀释剂或溶剂包含林格氏(Ringer)溶液、等渗氯化钠溶液、和不挥发油(合成的甘油一酯和甘油二酯)。其它有用的可肠胃外给予的制剂包括那些包含活性成分为微晶形式、含于脂质体制备物内或作为生物可降解聚合物系统组分之一的制剂。用于缓释或植入的组合物可包含药学上可接受的聚合材料或疏水性材料，如乳液、离子交换树脂、难溶性聚合物、或者难溶性盐。
本发明所述化合物还可以包含佐剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂、和/或分散剂，包括例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等。还可能需要包括等渗剂，例如，糖、氯化钠等。通过使用能够延迟吸收的物质例如单硬脂酸铝和/或明胶可延长可注射药物组合物的吸收。具体而言，脂质体、胶粒(mysomes)和乳化剂可以用于增加本发明化合物的可溶性，便于递送。
剂型可以包括固体或可注射的埋植剂(implant)或储库式剂型(depot)。在优选实施方式中，埋植剂包含有效量的活性剂和生物可降解聚合物。在优选的实施方式中，合适的生物可降解聚合物可以选自：聚天冬氨酸、聚谷氨酸、聚(L-丙交酯)、聚(D，L-丙交酯)，丙交酯-乙交酯共聚物、聚(E-己内酯)、聚酸酐、聚(β-羟基丁酸酯)，聚(原酸酯)和聚磷腈。在其他实施方式中，埋植剂包含有效量的活性剂和硅橡胶聚合物。埋植剂在约1周到数年的时期内持续释放有效量的活性剂。
用于口服给予的固体剂型包括胶囊、片剂、粉剂和颗粒剂。在这类固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或运载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸氢钙或(a)填料或补充剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇或硅酸；(b)粘合剂，例如，羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖或阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂-琼脂(agar-agar)、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐或碳酸钠；(e)溶液缓凝剂，例如，石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季铵化合物；(g)湿润剂，例如，十六烷醇或单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土或膨润土；和/或(i)润滑剂，例如，滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠或其混合物。就胶囊和片剂而言，剂型中还可含有缓冲剂。
例如，可以将所述活性成分，优选伴与一种或多种其他成分，通过压缩或模塑来制成包含活性成分的片剂。压缩片剂可通过在合适的装置中压缩诸如粉末或颗粒制备物等自由流动形式的活性成份，其中可任选地混合有粘结剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。模塑片剂可通过在合适的装置中对活性成分、药学上可接受的运载体和至少足以润湿混合物的液体的混合物进行模塑。
用于制备片剂的药学上可接受的赋形剂包括惰性稀释剂、造粒剂和崩解剂、结合剂和润滑剂。已知的分散剂包括马铃薯淀粉和淀粉乙醇酸钠。已知的表面活性剂包括月桂基硫酸钠。已知的稀释剂包括碳酸钙、碳酸钠、乳糖、微晶纤维素、磷酸钙、磷酸氢钙和磷酸钠。已知的颗粒剂和崩解剂包括玉米淀粉和藻酸。已知的结合剂包括明胶、阿拉伯胶、预胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基甲基纤维素。已知的润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸、二氧化硅和滑石。
片剂可以是无包衣的，或者可以使用已知方法对其进行包覆以实现在人胃肠道中的延迟崩解从而提供活性成分的缓释和吸收。举例而言，如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯等材料能用于包衣片剂。并且，举例来说，可以使用如美国专利号4,256,108、4,160,452和4,265,874中所述方法对片剂进行包衣，以形成渗透控释片剂。片剂还可以包括甜味剂、调味剂、着色剂、防腐剂或这些的组合，以提供药学品质优良且可口的制备物。
片剂可以是固体剂型，如片剂、糖衣丸、胶囊和颗粒，并且可以制备成有包衣或外壳的，如肠溶衣或本领域熟知的其它包衣或外壳。还可包含乳浊剂，并且也可以是以延迟方式释放活性化合物的组合物。可以使用的包埋组合物的示例是聚合物和蜡。活性化合物也可以视情况与一种或多种上述赋形剂配制成微囊化形式。
使用诸如乳糖或乳糖等赋形剂以及高分子量聚乙二醇等，相似类型的固体组合物也可以用作软或硬填充明胶胶囊中的充填物。包含活性成分的硬胶囊可以使用如明胶的生理可降解组合物制造。这样的硬胶囊包含活性成分，并且还可以进一步包含其他成分，例如包括惰性固体稀释剂，如碳酸钙、磷酸钙或高岭土。包含活性成分的软明胶胶囊可以使用如明胶的生理可降解组合物制造。这样的软胶囊包含能与水或油介质(如花生油、液状石蜡或橄榄油)混合的活性成分。
口服组合物可以使用这样的已知技术制造：所述技术在人患者的小肠或大肠特异性地释放经口给予的试剂。例如，递送到胃肠系统(包含结肠)的制剂具有基于例如甲基丙烯酸酯共聚物(如聚(甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯))的肠衣系统，所述肠衣系统仅在pH 6或更高pH下溶解，因而聚合物在进入小肠后才开始溶解。这样的聚合物制剂崩解的位点取决于小肠转运的速率和聚合物的含量。例如，使用相对厚的聚合物包衣以递送到近侧结肠(Hardy等，Aliment.Pharmacol.Therap.(1987)1:273-280)。也可以使用能够提供位点特异性结肠递送的聚合物，其中，聚合物依赖于大肠菌群来提供聚合物包衣的酶降解并因此释放药物。例如，偶氮类聚合物(美国专利号4,663,308)、糖苷(Friend等，J.Med.Chem.(1984)27:261-268)和多种天然可得和修饰的多糖(参见PCT申请PCT/GB89100581)可以用于这种制剂。
如美国专利号4,777,049中所描述的脉冲释放技术也可用于将活性剂给予胃肠道内的特定位置。这种系统允许在预定的时间递送药物并且可以用于将活性剂直接递送到结肠，任选地，与可改变局部微环境的其他添加剂一起来促进试剂稳定性和摄入，除了用于体内释放的水以外不依赖于其他外部条件。
用于口服给予的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、溶液剂、悬浮液、糖浆剂和酏剂。除活性化合物外，液体剂型可包含本领域常用的惰性稀释剂，如水和其它溶剂、等渗盐溶液；增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺，油，具体而言，杏仁油、花生油、椰子油、棉花籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻籽油、MIGLYOL TM、甘油、分馏植物油、矿物油，如液状石蜡、四氢糠醇、聚乙二醇、山梨聚糖的脂肪酸酯或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂，本发明的化合物还可以包括佐剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、缓和剂、防腐剂、缓冲液、盐、甜味剂、调味剂、着色剂和芳香剂。悬浮液除了活性化合物外，可以包含助悬剂，例如，乙氧基化异硬脂酰醇、聚氧乙烯山梨糖醇或去水山梨糖酯、微晶纤维素、氢化食用脂肪、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶、阿拉伯树胶、琼脂-琼脂、和纤维素衍生物(如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素)、偏氢氧化铝、膨润土、或这些物质的混合物等。合适口服给予的本发明药物组合物的液体制剂能以液体形式或干燥产物的形式制备、包装和出售，所述干燥产物形式打算在使用前与水或其他合适的载剂重建。
已知的分散剂或湿润剂包括天然磷脂如卵磷脂，氧化烯与脂肪酸、与长链脂族醇、与脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯、或与脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的缩合产物(例如，分别是聚氧乙烯硬脂酸酯、十七-氧乙烯十六烷醇(heptadecaethyleneoxycetanol)、聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯和聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)已知的乳化剂包括惰性和阿拉伯胶。已知的防腐剂包括甲基，乙基或正丙基对羟基苯甲酸酯，抗坏血酸和山梨酸。已知的甜味剂包括例如甘油、丙二醇、梨糖醇、蔗糖和糖精。已知的油性悬浮液的增稠剂包括例如蜂蜡、硬石蜡和鲸蜡醇。
水性或油性溶剂中活性成分的液体溶液可用与悬浮液基本相同的方式制备，主要区别在于活性成分是溶解而不是悬浮在溶剂中。本发明的药物组合物的液体溶液可以包含就液体悬浮液所述的各组分，应当理解的是，悬浮剂不一定有助于活性成分在溶剂中的溶解。水性溶剂包括例如水和等渗盐溶液。油性溶剂包括例如杏仁油、油性酯(oily ester)、乙醇、植物油，如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油、分馏植物油和矿物油，如液状石蜡。
用于直肠或阴道给予的组合物通过将本发明化合物和任意其他化合物与诸如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡等合适的无刺激赋形剂或运载体混合来制备，这些赋形剂或运载体在正常室温下为固态，但在体温下为液态，因此其在直肠或阴道腔内融化并释放活性成分。这样的组合物可以是这样的形式，例如栓剂、滞留灌肠制备物，和用于直肠或结肠灌洗的溶液。栓剂剂型还可以包含各种其它成分，包括抗氧化剂和防腐剂。滞留灌肠制备物或用于直肠或结肠灌洗的溶液可以通过将活性成分与药学上可接受的液体运载体结合来制造。如本领域已知，灌肠制备物可以使用适合人直肠构造的递送装置给予，并且可以包装于其中。灌肠制备物还可以包含各种其它成分，包括抗氧化剂和防腐剂。
本发明的药物组合物可以以合适阴道给予的制剂来制备、包装或出售。这样的组合物可以这样的形式，例如，栓剂、浸渍或有包衣的阴道内置物，如棉栓、灌洗制备物、或阴道灌注溶液。
用于局部给予本发明化合物的剂型包括软膏剂、粉末剂、喷雾剂和吸入剂。化合物在无菌条件下与生理上可接受的运载体以及任何可能需要的防腐剂、缓冲剂和/或推进剂混合。适合局部给予的制剂包括液体或半液体制备物，如搽剂、洗剂、水包油或油包水乳剂，如乳膏、软膏或糊剂，以及溶液剂或混悬剂。例如，可局部给予的制剂可以包含例如约0.1％至约10％(w/w)活性成分，尽管活性成分的浓度可以高至活性成分在溶剂中的溶解度极值。用于局部给予的制剂还可以包括一种或多种本文所述的其它成分。
眼科制剂、眼膏、粉末剂和溶液也在本发明范围内。例如，这样的制剂可以是滴眼液的形式，例如在水性或油性液体运载体中0.1至1.0％(w/w)活性成分的溶液或悬浮液。这样的滴液还可以包括缓冲剂、盐、或其它一种或多种本文所述的其它成分。在其它实施方式中，可眼科给予的制剂包括微晶形式或含于脂质体制备物中的活性成分。
配制为肺部递送的本发明药物组合物可以以溶液或悬浮液的液滴的形式提供活性成分。这样的制剂可以包含活性成分的水性或稀释的醇性溶液或悬浮液(可以是无菌的)制备、包装或出售，并且能方便地使用任意雾化或雾状装置给予。这样的制剂还可以包含一种或多种其他成分，包括调味剂如糖精钠、挥发油、缓冲剂、表面活性剂、或防腐剂如羟基苯甲酸甲酯。以此途径给予的液滴优选具有范围在约0.1至约200纳米的平均直径。
本发明的药物组合物可以适合口腔给予的制剂来制备、包装或出售。例如，这样的制剂可以是使用传统方法制造的片剂或锭剂形式，并且可以包含例如0.1至20％(w/w)的活性成分，其余部分包含口服可溶解的或可降解的组合物以及任选地一种或多种本文所述的其他成分。或者，适合口腔给予的制剂可以包含含有活性成分的粉末或雾化或雾状的溶液或悬浮液。分散时，这样的粉末化、雾化或雾状制剂优选具有范围在约0.1至约200纳米的平均颗粒或液滴尺寸，并且还可以包含一种或多种本文所述的其他成分。
就非人动物中胃肠道外给予而言，本发明的化合物可以制备成糊状或丸粒状的形式，并且通常作为动物头部皮肤或耳朵下面的埋植剂给予。糊剂可以通过将一种或多种化合物分散于药学上可接受的油(如花生油、芝麻油、玉米油等)中来制备。包含治疗有效量的一种或多种化合物的丸剂可以通过将化合物与稀释剂(如碳蜡(carbowax)、巴西棕榈蜡等)混合来制备，并且可以加入润滑剂(如硬脂酸镁或硬脂酸钙)以改善形成丸粒的工艺。当然，应认识到的是，可以将一个以上的丸剂给予动物以达到所需的剂量水平。另外，已经发现也可以在动物治疗期间内周期性给予这种埋植剂，从而在动物体内维持合适的活性剂水平。
可按约0.01至约1,000mg/天范围的剂量水平向患者给予本发明化合物和其药学上可接受的盐。对体重约70kg的普通成年人而言，约0.01至约300mg范围的剂量通常就足够了，优选1至10mg/kg的剂量。然而，常见剂量范围可以根据所治疗对象的年龄和体重、给药途径、所给特定化合物等因素产生一些变化。本领域普通技术人员阅读本文后完全能够确定特定患者的剂量范围和最优剂量。还应注意，本发明化合物能用于缓释制剂、控释制剂和延迟释放制剂，这些也是本领域普通技术人员所熟知的。
本发明化合物是否直接给到细胞、包含细胞的组织、与细胞接触的体液、或所述化合物能扩散到或转运到细胞的身体位点，这些并不重要。化合物以一定的量并通过一定的途径给予从而使足以调动细胞中的脂质的化合物量直接或间接地到达细胞，这就可以了。最小量根据化合物的性质而不同。
可用的特定剂量和剂量范围取决于多种因素，包括患者需求、受治病症的严重程度以及所用化合物的药理学活性。本领域普通技术人员能够根据本发明确定具体患者的剂量范围和最优剂量。应当理解的是，普通专业医生或兽医能够容易地确定组合物的有效量并开出处方，以调动脂质存储，引起体重降低，或抑制患者的胃口。在这种过程中，举例来说，医生或兽医可以首先给出相对较低剂量的处方，随后增加剂量，直到获得适当的效果。另外可以理解的是，针对各自特定患者的具体剂量水平取决于各种因素，包括采用的具体化合物的活性，人的年龄、体重、总体健康情况、性别、饮食，给予的时间，给予的途径，排泄的速度，各种药物组合，以及具体接受治疗的疾病的严重程度。
本发明化合物以药学上可注射剂型的形式配制时特别有用，其中包含本文所述和要求保护的化合物与可注射运载体系统的组合。本文中，可注射和输注剂型(即胃肠外剂型)包括但不限于脂质体注射剂或脂质双层囊泡，其具有将活性药物包封在内的磷脂。注射剂包括胃肠道外使用的无菌制备物。
UPS定义了5种不同类别的注射剂：乳液、脂质、粉末、溶液和悬液。乳液注射剂包括包含用于胃肠道外给予的无菌无热源制备物的乳液。用于溶液注射的脂质复合物和粉末是无菌制备物，旨在重建成溶液供胃肠外使用。悬液注射的粉末是无菌制备物，旨在重建成悬液供胃肠外使用。用于脂质体悬液注射的冻干粉末是无菌冷冻干燥制备物，旨在重建后供胃肠外使用，其制备方式允许纳入脂质体，例如具有磷脂的脂双层载剂，由此将活性药物包封在脂双层内或水性空间中，从而可在重建后形成制剂。用于溶液的冻干粉末为通过冻干(“冷冻干燥”)制备的用于溶液的剂型，过程涉及在极低压下从冷冻状态的产物中去除水分，随后加入液体产生在所有方面均符合注射要求的溶液。经冻干用于悬液注射的粉末是液体制备物，旨在胃肠外使用，其包含悬浮于合适的液体介质中的固体，且其在所有方面符合无菌悬液的要求，从而通过冻干制备用于悬液的药用试剂。溶液注射剂涉及液体制备物，其包含一种或多种溶解于适合注射的合适溶剂或相互混溶的溶剂混合物中的药物物质。溶液浓缩注射剂涉及用于胃肠道外使用的无菌制备物，在加入合适的溶剂时生成在所有方面均符合注射要求的溶液。悬液注射剂涉及(适合注射的)液体制备物，其包含分散于液相中的固体颗粒，所述颗粒是不溶性的，油相分散于水相或反之。悬液脂质体注射剂是(适合注射的)液体制备物，具有分散于水相的油相，以此方式其形成脂质体(一种脂质双层囊泡，通常包含用于将活性药物物质包封在脂质双层内或水性空间中的磷脂)。悬液超声注射剂是(适合注射的)液体制备物，其包含分散于水相中的固体颗粒，颗粒因此不可溶。此外，可在悬液内鼓泡的同时对该产物进行超声处理，从而由固体颗粒形成微球。
胃肠外运载体系统包括一个或多个药学上合适的赋形剂，如溶剂或共溶剂、增溶剂、润湿剂、悬浮剂、增稠剂、乳化剂、螯合剂、缓冲剂、pH调节剂、抗氧化剂、还原剂、抗菌防腐剂，膨胀剂、保护剂、张力调节剂和特殊的添加剂。
发明人当前描述了并要求保护这样一种多靶标方法，其通过给予特定的N-苄基苯甲酰胺以影响可溶性环氧化物水解酶(sEH)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的同步调节来治疗MetS系列疾病，包括糖尿病。
因此，第一方面，本发明包括特定化合物，其具有以下结构：
Figure BDA0001585995500000211
其中：X-Y是CH＝C或CH2-CH；R1是CH2CH3，CH3或H；并且R3是氟取代的芳基；或其盐。位于R3的所述氟取代的芳基基团优选是含三氟甲基或三氟甲氧基取代的苯基基团，更优选苯基基团上邻位取代的。
本发明的一些化合物中，R3是：
Figure BDA0001585995500000212
本发明优选的化合物希望R3是
Figure BDA0001585995500000213
本发明的化合物包括这样一些，其中：X-Y是CH2-CH和R1是CH2CH3；X-Y是CH＝C和R1是CH2CH3；X-Y是CH2-CH和R1是H；以及X-Y是CH＝CH和R1是H。
本发明特别优选的化合物希望X-Y是CH2CH，R1是H，R3是
Figure BDA0001585995500000221
在特别优选的实施方式中，给予对象时所述化合物表现出小于1.0微摩尔的对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)半最大有效浓度(EC50)以及对可溶性环氧化物水解酶(sEH)半最大抑制浓度(IC50)。。
在另一方面，本发明提供了一种组合物，其包括：(a)本发明的N-苄基苯甲酰胺；以及(b)药学上可接受的运载体。在优选的实施方式中，组合物被配制成口服剂型。
在另一方面中，本发明提供了一种在对象中治疗代谢综合症的方法，其包括给予对象治疗有效量的本发明N-苄基苯甲酰胺，其中，可溶性环氧化物水解酶(sEH)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)被该化合物同时调节，从而治疗对象的代谢综合症。
在优选的实施方式中，治疗有效量在对象中提供了小于1.0微摩尔的对PPARγ半最大有效浓度(EC50)以及对sEH半最大抑制浓度(IC50)。
在其他实施方式中，本发明包括本发明的N-苄基苯甲酰胺在制备用于治疗对象MetS的药剂中的应用。同样，本发明还包括本发明化合物在治疗对象MetS中的应用。
在另一方面中，本发明提供了一种在对象中治疗糖尿病的方法，其包括给予对象治疗有效量的本发明N-苄基苯甲酰胺，其中，可溶性环氧化物水解酶(sEH)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)被该化合物同时调节，从而治疗对象的糖尿病。
在优选的实施方式中，治疗有效量在对象中提供了小于1.0微摩尔的对PPARγ半最大有效浓度(EC50)以及对sEH半最大抑制浓度(IC50)。
在其他实施方式中，本发明包括本发明N-苄基苯甲酰胺在制备用于治疗对象糖尿病的药剂中的应用。同样，本发明还包括本发明化合物在治疗对象糖尿病中的应用。
在另一方面中，本发明提供了一种在对象中同时调节可溶性环氧化物水解酶(sEH)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)活性的方法，其包括给予对象治疗有效量的本发明N-苄基苯甲酰胺化合物，其中可溶性环氧化物水解酶(sEH)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在对象中被所述化合物同时调节。
在优选的实施方式中，治疗有效量在对象中提供了小于1.0微摩尔的对PPARγ半最大有效浓度(EC50)以及对sEH半最大抑制浓度(IC50)。
在其他实施方式中，本发明包括本发明N-苄基苯甲酰胺化合物在生产药剂中的应用，所述药剂用于在对象中同时调节可溶性环氧化物水解酶(sEH)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)活性。同样，本发明还包括本发明化合物在对象中同时调节可溶性环氧化物水解酶(sEH)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)活性的应用。
根据本发明的组合物和方法的各种示例性实施方式在如下的实施例中进行描述。在这些实施方式中，阿拉伯数字(例如，1、2、3等)标示的特定产物对应于说明书中同样标示的特定结构，特别是后文表格以及所附权利要求书中的特定结构。
III.实施例
提供以下实施例仅用于说明目的，并非旨在以任何方式限制本发明的范围。事实上，除了本文所示和所述的那些以外，本发明的各种修改对于本领域技术人员而言从前面的描述和以下实施例将变得显而易见，并落入所附权利要求的范围内。
实施例1：N-苄基苯甲酰胺：可口服的双重sEH/PPARγ调节剂的新型支架(scaffold)
代谢综合症(MetS)是一种多因子疾病簇，其包括血脂异常、心血管疾病、2型糖尿病和肥胖症。MetS的药物介入依赖于多种药物，因此多重给药(polypharmacy)在MetS患者的治疗中是一个突出的问题。本研究着重于双重靶向方法，以实现更高效的MetS治疗。双配体设计针对的两个靶标是可溶性环氧化物水解酶(sEH)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ配体(PPARγ)。对两个靶标进行构效关系研究，得到等效亚微摩尔(sEH IC50＝0.3±0.05μM/PPAR EC50＝0.3±0.09μM)的丙酸苄基苯甲酰胺衍生物。体外和体内评估显示良好的ADME性质，将该新型双重调节剂定性为用于MetS长期动物模型的药理学工具化合物。
鉴定融合的sEH/PPARγ药效团
在双重调节剂的设计过程中鉴定常见药效团是一项富有挑战的任务。GlaxoSmithKline在2011发表了一种不具有常用酸性头部基团的PPARγ激动剂(GSK1997132B)，出于血脑屏障渗透的原因(图6)。共结晶配体结合模型显示苄基酰胺部分能够取代酸性头部基团，同时保留配体完全的激动剂性质。几乎所有报道的sEH抑制剂都是环氧化物模拟物，包含作为药效团的尿素或酰胺结构。在该情况中，苄基酰胺结构将代表sEH和PPAR的合并药效团，这是双配体设计的最佳起点。已有几种作为sEH抑制剂的苄基酰胺，此研究中最先进的化合物是GSK2188931B(图6)。基于报告的SAR，我们调整了对化合物的代谢稳定性和sEH的抑制活性来说重要的邻位三氟甲基苄基取代。最终，杏林制药株式会社(Kyorin Pharmaceutical Co.Ltd.)的研究显示了用于PPARα活化的取代的苄基酰胺(KCL)，但是只示出了典型的PPAR结合模型(图6)。虽然如此，该信息促使我们使用N-苄基苯甲酰胺部分作为合并药效团获得图6中示出的分子设计。
合成
制备所有被检N-苄基苯甲酰胺衍生物的合成途径如图7和8中所示。主要的衍生物是α-取代的N-苄基苯甲酰胺丙酸(1c-19c)，经4步制备。对于各种衍生物，经由合成途径自然出现N-苄基苯甲酰胺肉桂酸酯(1a-19a)和N-苄基苯甲酰胺丙酸(1b-19b)类型的化合物。这些化合物进一步接受体外扩展SAR研究评估。N-苄基苯甲酰胺肉桂酸酯(1a-19a)还水解成其对应的N-苄基苯甲酰胺肉桂酸(1d-19d)，由此完备该结构领域的多样性并拓展活性数据范围。
N-苄基苯甲酰胺丙酸(1c-19c)的合成(图7)起始于在干燥碱性条件下，用氯甲酸异丁酯(IBCF)在DCM中活化4-甲酰基苯甲酸或3-甲酰基苯甲酸，然后添加各种2-或2,4-取代的苄基酰胺，以产生化合物1-1571,72。通过维蒂希反应(Wittig reaction)，使用三乙基2-膦酰基丁酸，化合物1-15转变成其对应的N-苄基苯甲酰胺肉桂酸酯衍生物(1a-15a)73,74。使用与此相同的反应类型，4个不同的α取代基(氢基、甲基、丙基和苯基)被引入N-苄基苯甲酰胺肉桂酸酯支架，而苄基酰胺被固定在2-三氟甲基取代(16a-19a)。在氢气氛下，用碳载钯催化剂在无水EtOH中还原所有的α,β-不饱和羟基化合物(1a-19a)，以保持N-苄基苯基酰胺丙酸甲酯结构类型(1b-19b)74。通过相同的微波反应，在碱性条件下，使用1|2|1比例的MeOH|H2O|THF的混合溶剂进行N-苄基苯基酰胺肉桂酸酯(1a-19a)或N-苄基苯甲酰胺丙酸酯(1b-19b)的去保护，得到其对应的酸，即苄基苯基酰胺肉桂酸(1d-19d)和N-苄基苯甲酰胺丙酸(1c-19c)75。
α,β-环丙烷酸(22)经3个步骤合成(图7)76,77。起始于化合物1的维蒂希反应，获得N-甲氧基-N-甲基(三苯基亚正膦基)乙酰胺化合物20。然后进行科里-柴可夫斯基反应(Corey-Chaykovsky Reaction)，产生衍生物21。在EtOH|H2O混合溶剂中碱性去保护后，获得最终产物(22)78。
通过化合物1和邻-苄基羟胺盐酸盐的洛伊卡特-瓦拉赫反应(Leukart-Wallachreaction)79，合成非酸性邻-(苄基羟基)亚胺衍生物(23)，如图7所示。
联苯邻位和间位酸衍生物(25,26)以图8中所示的两步途径合成。在第一步骤中，4-碘苯甲酸通过EDC在DMAP催化作用下活化，并且与2-三氟甲基苄胺结合成化合物2480。通过铃木(Suzuki)偶联化合物24与4-羧基以及3-羧基苯硼酸，获得所需的联苯酸衍生物(25,26)81,82。
四唑衍生物(28)也通过两步合成产生(图8)。腈中间体(27)以与化合物(24)相同的条件制备。四唑合成采用DMF中的NaN3和NH4Cl83。
结果&讨论
基于前述假设，设计并合成了非酸性sEH/PPAR双重调节剂(27)的第一个原型。只在sEH显示出体外抑制(IC50＝0.064μM)，所有的PPAR亚型保持未受影响(表1)。在重新引入酸性头部基团并扩展芳香核心后，制得新的一组两个异构体化合物(25,26)。通过将酸性头部从对位转换到间位，sEH抑制下降几乎一个数量级，从0.17μM到1μM。酸性头部基团的对位似乎更适合亲脂性隧道形的sEH结合口袋84,85。对位和间位衍生物在10μM浓度的PPAR活性据测定为约30％(相较于吡格列酮)，这表明酸性功能团或至少H-键受体仍然是PPAR活化所必需的。然而，假设经典PPAR结合模型中羟基基团负责活化，那么PPAR亚型α和γ之间的活性值应该相差更大86。在另一个设计的分子(28)中，核心片段被减至一个芳环，并且羧酸被四唑生物电子等排体取代。这些改变引起PPAR活性丧失，并得到微摩尔级的sEH抑制(IC50＝5μM)(表1)。与化合物26相似，化合物28的酸性头部为旁侧取向。极性部分朝向疏水性隧道形sEH结合口袋可能导致了化合物26和28的个位数微摩尔级抑制。为了改善PPAR活化的明显不足而不增加分子量，引入α-取代的丙酸70,87这一常成功使用的酸性部分。如在合成段落中提及，丙酸结构类型的各种取代模式生成4种类型的羰基衍生物。4种类型中的第一种(1a-d)中，发现了一类等效亚型选择性sEH/PPARγ双重调节剂(1c)(表2)，它们具有完全激动性PPARγ性质和个位数微摩尔级两靶标效力。在该结构类型中，从酸到酯衍生物，sEH抑制提高了一个数量级，对此的解释可能主要在于亲脂性sEH结合口袋88。除了1a，该系列的所有衍生物表现出类似的PPARγ活化作用，最显著地是化合物1b与1c效力相当。酯衍生物的完全PPARγ活化可能提示另一种PPAR结合模型，其中酸性部分影响很小。酯不太可能被COS-7细胞水解，因为我们从未在之前使用该试验系统的项目中观察到乙酯的活性也未在文献中找到该情况的示例74,86,89–91。一组中心间位取代的异构体(15a-d)的产生显示活性无改善以及PPARγ选择性丢失(表2)。鉴于试验条件下合理的对两个靶标具有可接受的效力，小分子量，PPARγ亚型选择性以及水溶性，化合物1c成为药理分析的良好起点。
表1.来自第一结构系列和两种非酸性中间化合物的双重sEH/PPAR调节剂的抑制和活化值。
Figure BDA0001585995500000271
表2.来自Hit化合物及其间位衍生物的双重sEH/PPAR调节剂的抑制和活化值。
Figure BDA0001585995500000281
WST-1试验92显示，上至30μM浓度的化合物1c并不损害HepG2细胞的细胞存活率。在Spargue-Dawley大鼠肝微粒体中，测定了化合物1c的体外代谢稳定性(图2)。1小时后，约92％的1c保持完整。通过测量对脂肪细胞分化的影响，在不同的细胞系统中评估1c对PPARγ的活化。测定1c在小鼠3T3-L1成纤维细胞和人原代前脂肪细胞中诱导脂肪细胞分化的能力，并与罗格列酮(PPARγ激动剂)86和N-环己基-N′-碘苯基尿素(CIU,sEH抑制剂)93比较。在3T3-L1成纤维细胞中，可见1c对脂肪细胞分化的剂量依赖性作用(1至10μM)(图2a)。分化的脂肪细胞使用油红染色使之可见。相较于2μM浓度的罗格列酮，在10μM浓度的1c，较少脂肪细胞积累脂质。令人惊讶地，CIU能够在没有直接PPARγ活化下启动脂肪细胞分化。对于该现象的假设是通过EET–PPARγ途径的后续PPARγ活化58,94,60。在人脂肪细胞中观测到1c相似的作用(参见图9)。通过油红O染色，测定的对脂肪细胞分化的剂量依赖性(1至10μM)作用，其也比2μM罗格列酮低。与小鼠3T3-L1成纤维细胞相反，CIU不能启动人脂肪细胞的分化。此外，分化的小鼠和人脂肪细胞中四个PPARγ靶基因(GLUT4，葡萄糖转运蛋白4型；脂连蛋白；FABP4，脂肪酸结合蛋白4，LPL，脂蛋白脂肪酶)的表达通过qPCR分析来测定，作为靶标活化的指标95。在小鼠3T3-L1成纤维细胞中(图2b-e)，1c剂量依赖性地激活所有被分析靶基因的表达。相较于罗格列酮(2μM)对照，1c在10μM浓度显示出较低的所有4个PPARγ靶基因表达。在人脂肪细胞中，1c在PPARγ靶标表达上的作用更加多变(参见图10)。此处，10μM的1c浓度下GLUT4表达的上调与罗格列酮(2μM)对照相当。相反，脂连蛋白、FABP4和LPL在1c刺激所引起的上调中仅表现出较小的作用。1c在PPARγ靶基因表达上的不同的作用需要更详细的研究。已知某些PPARγ激动剂可以选择性地反式激活某些PPARγ靶基因而不影响其它基因。对此的生理结果目前尚不完全了解，并且现在正在进行深入研究96,97。根据该体外表现，在小鼠中进行两项体内PK/PD研究。为了实现前药作用，对1c的乙酯衍生物化合物1b进行体内鉴定。在给9只(RijOrl:SWISS/CD-1)小鼠一次口服施用(管饲)30mg/kg体重后，所有时间点都未在血浆中检测到1b，这表明快速的酯水解。血浆中出现对应的酸(1c)，0.5小时(t最大)后C最大＝787ng/ml(～2μM)、AUC0→∞＝4026ng*h/ml、Cl/f＝7.5l/h*kg和Vz/f＝54.3l/kg(参见图11)。最近的研究显示，通过控制食物摄取和能量消耗，CNS中的PPARγ活化参与市售PPARγ活化剂相关的体重增加98,99。因此，为了确定1c的血脑屏障扩散能力测定了受处理小鼠脑中的1c浓度100,44。在此，1c的浓度不超过30ng/g脑组织(参见图12)。这将我们指向了这样一种假设，即1c仅微弱穿越血脑屏障。不幸地是，30mg/kg剂量的1b后的C最大＝787ng/ml表明其生物利用度较低。这可能是由于1b水溶性较低。因此，在小鼠中进行了第二项PK/PD研究，给9只(RijOrl:SWISS/CD-1)小鼠口服(管饲)30mg/kg体重的1c(1b的酸性衍生物)(图2)。幸运地是，0.5小时后(t最大)，小鼠血浆中的1c达到最大浓度7200ng/ml(～20μM)，这比1b的C最大高出一个数量级，并且比对两个靶标的体外EC50值高出几乎一个数量级。也改善了整体动力学表现(AUC 0→∞＝15847ng*h/ml、Cl/f＝1.9l/h*kg、Vz/f＝8l/kg)。
血浆中EET与DHET的比例直接提示sEH抑制有效性50。将1c施用于小鼠后8小时，血浆EET/DHET比例提高至少两倍(图2i)。为了确定体内PPARγ活化，通过qPCR分析定量测定受处理小鼠肝组织中PPARγ靶基因CD36的表达95。相较于未处理的小鼠，表达增加了至少两倍(图2h)。1c的体外和体内鉴定得出适度的药理学概况，具有提高效力和生物利用度的能力。因此，接着进行以下SAR研究。
表3.双重sEH/PPAR调节剂的体外活性值-α取代基的变化。
Figure BDA0001585995500000311
考虑到在代谢综合征的动物模型中的应用，我们探索了α取代的苄基苯甲酰胺丙酸衍生物的SAR。因此，确定了两个主要的优化标准。第一个目标是改善水溶性，以适应长期饮水应用。化合物1b与1c(酯到酸衍生物)之间显著的暴露差异突显了增强水溶性对于生物利用度的重要性101。第二个目标是在低于血浆稳态浓度的浓度范围内实现足够的效力。假设经典的PPAR结合模型，那么在羟基功能基团α-位置的取代在PPARγ活化中起关键作用86,91。鉴于此，化合物的第一项改变是α-乙基修饰。无论是降至甲基或将此α-取代基完全去除，还是扩大为丙基或苯基取代，都不显示对PPARγ活化的任何明显作用(表3)。我们将这个SAR解释为存在其他结合模式的另一个指示。具有相同取代模式的a-d型衍生物的普遍现象是从酯到酸衍生物的水溶性改善。例如，对于化合物16a-d、18a-d和19a-d，差异可达两个数量级(表3)。生成了α,β-环丙基衍生物(22)，其对任何靶标不具有增强的效力。合成途径产生某些非酸性前期阶段物(pre-stages)(21、22；表1)，对其进行了两个研究靶标的评估。如所预期，它们显示对sEH良好的两位数纳摩尔级抑制效力。令人惊奇的是，具有与预估化合物22相似支架但缺少酸性部分的化合物21表现出略高的PPARγ活性。这再次引出这样的假设，即酸性头部基团的作用是次要的，并且存在其它结合模式。另一项改变在苄基环的邻位(2a-6c)上进行(表4)。-CF3基团被-H、-CH3、-Cl、-Br和-OCF3取代，都导致效力丧失。只有-OCF3酯衍生物(6b)显示出边际性sEH抑制改善。没有邻位取代，sEH抑制几乎消失，并且PPAR活性下降了近一个数量级。这突显了邻位-CF3取代的相关性。在如下24个衍生物(7a-11c)中(表4)，研究着重于苄基部分的对位取代。当在苄基环的对位引入了有空间需求的基团(sterically demanding group)(-CF3，-OCF3和-O-苯基)，PPARγ亚型选择性丧失，且对PPARγ没有大的改善。文献中也有记载通过在相似支架上对位苄基环位置中引入较大基团来活化PPARα亚型，但是大部分不作用于PPARγ活化70。尽管如此，对-O-苯基酸衍生物(12c)，作为得自该研究的唯一化合物，显示出对所有PPAR亚型的活性。12c还达到了最高的PPARγ效力，其具有0.3μM的EC50以及相对于吡格列酮181％的峰值活化。对于缺少邻位取代的对位取代的衍生物，sEH抑制降低了几乎一个数量级。12c代表了良好的PPAR泛激动剂，但它缺乏合适的sEH抑制效力。在苄基对位位置采用较小的取代基(-F、-O-CH3、-Cl)并没有改善对任意一个靶标的效力，但是保留了PPARγ亚型选择性。在下一步骤中，制造了苄基部分的邻位、对位组合取代模式(13a-14d)(表4)。已经探索了苄基环邻位-CF3取代的影响。作为该组合中的对位取代伴侣(substitution partner)，选择了-F和-O-CH3，这参考了之前产生的数据中-F和-O-CH3亚型对PPARγ的选择性活化。据-O-CH3取代基，还估计水溶性提高。邻位-CF3、对位-F取代模式改善了亚型选择性PPARγ活性，但对sEH抑制并没有增强作用。化合物14c(邻位-CF3、间位-O-CH3)对两个靶标的效力改善了几乎一个速量级(sEH IC50＝0.3μM、PPARγEC50＝0.3μM/160％)。此外，化合物14c对两个靶标是等效的，并且在PBS缓冲液中的水溶性从100μM增加到500μM。14c满足促使我们进行第二项药理分析的需求。WST-1试验92显示，上至30μM浓度的化合物14c并不损害HepG2细胞的细胞存活率。14c与Spargue-Dawley大鼠肝微粒体孵育1小时后，约96％的化合物保持完整(参见图13)。在6只小鼠中体内2周的药代动力学研究中，随饮水施用14c(30mg/kg体重)，实现了986±363ng/ml(约3±1.1μM)的最终血浆浓度(图3a)。2周处理后，小鼠肝脏的qPCR分析显示PPARγ靶基因CD36的上调(图3b)。由于14c的血浆比两个体外值都高一个数量级，并且PPARγ靶基因表达改善，该化合物能够作为糖尿病动物模型的药理学工具。
表4.具有不同苄基环取代基的双重sEH/PPAR调节剂的抑制和活化值。
Figure BDA0001585995500000341
Figure BDA0001585995500000351
i.a.＝无活性，n.t.未测试，E最大-％＝最大活性百分比，w.s.＝水溶性，compd.＝化合物
结论
本项研究能够产生一系列被明确鉴定的sEH/PPARγ双重调节剂。从命中化合物(1c)到先导化合物(14c)的研发，效力和PK/PD参数得到了改善。还生成了关于sEH和PPARγ的药物靶标相互作用特征的信息。散点图(图4)显示了体外生成的数据的概况，将它们分完成酸衍生物(红色)和酯衍生物(蓝色)。可以观察到酯衍生物明显改善sEH抑制的趋势。该现象复合对于sEH结合口袋特征的通常认识102–105。此前还显示，相比侧向酸性头部基团(26)，酸性头部基团优选的位置是在亲脂性直链行分子(25)的对位位置106。GlaxoSmithKline还研究了该特定类型支架上苄基部分邻位-CF3基团对sEH抑制的重要性69。就PPARγ活性值而言，未见对酸衍生物的明显偏好。事实与绝大多数公开的通常包含酸性头部基团的PPAR激动剂相矛盾86,89。将本研究与杏林制药株式会社所做研究相比70,87,107,108，虽然在两项研究中均使用了基本的苄基苯甲酰胺支架，但是可以在选择性方面看到显著的差异。杏林制药株式会的化合物对PPARα具有高度选择性，而本研究的化合物是几乎全是PPARγ选择性激动剂。在苄基环的对位位置引入有空间需求的基团引起活性特征向更类似于杏林制药株式会社数据的方向改变。结果表明，要实现项目预期目标的结构变化空间非常局促。图5显示了对接研究产生的化合物14c可能的其它PPARγ配体结合模式，基于GlaxoSmithKline的共结晶苄基苯甲酰胺衍生物(PDB：3S9S)68。在这种情况中，苄基苯基酰胺可能负责PPAR活化。
假设的结合模式使苄基苯甲酰胺成为两个研究靶点的合并药效团。然而，这个假设的唯一证据是来自本研究的PPARγ共结晶化合物。在结构相似性的驱动下，测定化合物1c和14c对游离脂肪酸受体1(FFA1，以前的GPR40)活化的影响。FFA1或GPR40是与胰腺β-细胞胰岛素分泌相关的受体。辅助信息(参见14和15)中显示的部分激动作用被认为是致病性干扰中的次要作用。虽然如此，已经产生了药理学工具化合物14c，其具有对于研究代谢综合征来说的有意义的特征。人们对2型糖尿病的sEH/PPAR联合治疗有很高的期望。Imig等已经表示罗格列酮(PPARγ激动剂)和t-AUCB(sEH抑制剂)的组合应用在自发性高血压肥胖(SHROB)大鼠中对肾脏损伤产生积极的协同作用66。2型糖尿病的一个主要后果是肾脏损伤，继而导致糖尿病性肾病。sEH/PPAR双重治疗对糖尿病肾病的临床疗效尚待证实。2/3的2型糖尿病患者发生神经性疼痛。Hammock等探索了sEH抑制剂在糖尿病体内模型中降低神经性疼痛的能力55–57。某些单PPARγ激动剂特别是TZD的一个缺点是常常观察到钠和水潴留。这对于患有充血性心力衰竭的患者可能是危险的109,110。sEH和EET是(促)尿钠排泄的，并且辅助维持体液和电解质平衡64,65。据推测，PPARγ激动剂与sEH抑制剂的组合可能通过保留有益特征并扩展新特征共同克服现有副作用。此外，相较于两种药物的联合治疗，双配体方法通过简化药代动力学提供了巨大的益处111。药物组合的复杂的药代动力学不容忽视，不可预知的药物间相互作用可能发生，并且可能增加副作用。总之，80个合成的衍生物确认了对于sEH结合口袋特征的认识，并且对PPARγ配体结合情况的传统认识提出了争议性阐述。对原支架的两个部分的关注足以改善效力以及ADME值，从而使得化合物适合进行长期体内实验
实验部分
化学
概述。所有离析物、试剂和溶剂购自阿法埃莎有限责任公司(Alfa-Aesar GmbH&CoKG)(德国卡尔斯鲁厄)、西格玛-艾尔德里奇化学品有限公司(Sigma Aldrich ChemieGmbH)(德国汉诺威)、阿波罗科技有限公司(Apollo Scientific Ltd)(英国曼彻斯特)、JRD氟化学有限公司(JRD Fluorochemicals,Ltd.)(英格兰萨里郡)，并且无需进一步纯化即可使用。这些公司保证纯度在97％以上。TLC用购自默克公司(Merk KGaA)(德国达姆施塔特)的二氧化硅涂覆铝箔(颗粒尺寸为60μm)进行。瓦里安医疗系统德国有限公司(VarianMedical Systems Deutschland GmbH)(德国达姆施塔特)的Intelli Flash 310色谱仪用于纯化合成的化合物。使用了SF25-80g和SF25-60g两种填充柱，两者均用硅胶(颗粒尺寸为50μm)涂覆，并且同样购自于瓦里安医疗系统德国有限公司(德国达姆施塔特)。用Burker公司(德国卡尔斯鲁厄)的DPX250和AV400核磁共振分光计测量1H(250/400MHz)和13C(64MHz)。所有光谱使用同样来自Burker公司(德国卡尔斯鲁厄)的TopSpin程序分析。使用四甲基硅烷作为内标。DMSO-d6和甲醇-d3作为溶剂。HPLC和质谱分析用岛津公司(Shimadzu)(德国杜伊斯堡)的LCMS 2020进行，其中使用来自CS色谱-服务有限公司(CS Chromatography-Service GmbH)(德国兰格尔韦黑)的100x 2mm柱，MultoHigh 100RP 18,3μ。20-75％乙腈/水梯度洗脱。电子喷雾电离产生阳性光谱(+)以及阴性光谱(-)，并且UV色谱测量两个波长(λ＝254和280nm)。用赛默飞世尔科技公司(Thermo Scientific)的MALDI LTQ ORBITRAPXL进行高分辨质谱。经由HPLC确定，全部最终化合物具有≥95％的纯度。
制备化合物1-17的一般过程，使用4-甲酰基-N-(2-(三氟甲基)苄基)苯甲酰胺(1)为例。将1g(6.7mmol)4-甲酰基苯甲酸,0.9ml(6.7mmol)三乙胺和1ml(7.3mmol)氯甲酸异丁酯(isobutylchlorformiat)在0℃、氩气气氛下溶解于30ml氯仿。1h小时后，加入0.9ml(6.7mmol)2(三氟甲基)苄胺。将溶液温热至室温并搅拌12小时。洗涤反应混合物三次，各次均用20ml的2M HCl溶液，20ml的1M NaOH溶液，以及用20ml盐水一次。用MgSO4干燥有机层，并减压移除溶剂。从EE/Hex混合物中重结晶粗产物。留下白色固体。产率：1.43g(70％)；1HNMR(DMSO-d6):δ10.17(s,1H,Ph1-CHO),9.38(t,J＝5.9Hz,1H,Ph1-OCNH),9.08-8.19(m,4H,CHO-Ph1),7.83-7.52(m,4H,OCNH-CH2-Ph2),4.75(d,J＝5.6Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm.MS-ESI:m/z 342[M+Cl-]。
4-甲酰基-N-(苄基)苯甲酰胺(2)。产率：0.99g(68％)；1H NMR(DMSO-d6):δ10.1(s,1H,Ph1-CHO),9.27(t,J＝5.9Hz,1H,Ph1-OCNH),8.11-7.99(m,4H,CHO-Ph1),7.37-7.23(m,4H,OCNH-CH2-Ph2),4.52(d,J＝5.8Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm.MS-ESI:m/z 240[M+H+]。
4-甲酰基-N-(2-(甲基)苄基)苯甲酰胺(3)。产率：1g(65％)；1H NMR(DMSO-d6):δ10.1(s,1H,Ph1-CHO),9.14(t,J＝5.4Hz,1H,Ph1-OCNH),8.13-7.99(m,4H,CHO-Ph1),7.31-7.14(m,4H,OCNH-CH2-Ph2),4.49(d,J＝5.6Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.34(s,3H,Ph2-CH3)ppm.MS-ESI:m/z 254[M+H+]。
4-甲酰基-N-(2-(氯)苄基)苯甲酰胺(4)。产率：1.16g(70％)；1H NMR(DMSO-d6):δ10.14(s,1H,Ph1-CHO),9.28(t,J＝6Hz,1H,Ph1-OCNH),8.13-8.02(m,4H,CHO-Ph1),7.5-7.28(m,4H,OCNH-CH2-Ph2),4.58(d,J＝5.8Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm.MS-ESI:m/z 274[M+H+]。
4-甲酰基-N-(2-(溴)苄基)苯甲酰胺(5)。产率：1.33g(69％)；1H NMR(DMSO-d6):δ10.11(s,1H,Ph1-CHO),9.29(t,J＝5.6Hz,1H,Ph1-OCNH),8.14-8.01(m,4H,CHO-Ph1),7.67-7.02(m,4H,OCNH-CH2-Ph2),4.55(d,J＝5.8Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm.MS-ESI:m/z 319[M+H+].
4-甲酰基-N-(2-(三氟甲氧基)苄基)苯甲酰胺(6)。产率：1.18g(70％)；1H NMR(DMSO-d6):δ10.11(s,1H,Ph1-CHO),9.27(t,J＝5.7Hz,1H,Ph1-OCNH),8.11-8.02(m,4H,CHO-Ph1),7.51-7.37(m,4H,OCNH-CH2-Ph2),4.59(d,J＝5.7Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm.MS-ESI:m/z 324[M+H+]。
4-甲酰基-N-(4-氟苄基)苯甲酰胺(7)。产率：0.97g(70％)；1H NMR(DMSO-d6):δ10.15(s,1H,Ph1-CHO),9.33(t,J＝5.7Hz,1H,Ph1-OCNH),8.16-8.04(m,4H,CHO-Ph1),7.47-7.18(m,4H,OCNH-CH2-Ph2),4.54(d,J＝5.9Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm.MS-ESI:m/z 258[M+H+]。
4-甲酰基-N-(4-(三氟甲基)苄基)苯甲酰胺(8)。产率：1.3g(70％)；1H NMR(DMSO-d6):δ10.1(s,1H,Ph1-CHO),9.37(t,J＝5.9Hz,1H,Ph1-OCNH),8.12-8(m,4H,CHO-Ph1),7.74-7.54(m,4H,OCNH-CH2-Ph2),4.6(d,J＝5.8Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm.MS-ESI:m/z 308[M+H+]。
4-甲酰基-N-(4-(三氟甲氧基)苄基)苯甲酰胺(9)。产率：1.37g(70％)；1H NMR(DMSO-d6):δ10.15(s,1H,Ph1-CHO),9.36(t,J＝6Hz,1H,Ph1-OCNH),8.18-8.04(m,4H,CHO-Ph1),7.55-7.36(m,4H,OCNH-CH2-Ph2),4.58(d,J＝6Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm.MS-ESI:m/z324[M+H+]。
4-甲酰基-N-(4-(甲氧基)苄基)苯甲酰胺(10)。产率：1.3g(70％)；1H NMR(DMSO-d6):δ10.14(s,1H,Ph1-CHO),9.24(t,J＝5.5Hz,1H,Ph1-OCNH),8.15-8.03(m,4H,CHO-Ph1),7.34-6.93(m,4H,OCNH-CH2-Ph2),4.49(d,J＝5.9Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm.MS-ESI:m/z270[M+H+]。
4-甲酰基-N-(4-氯苄基)苯甲酰胺(11)。产率：1.14g(69％)；1H NMR(DMSO-d6):δ10.1(s,1H,Ph1-CHO),9.3(t,J＝6.4Hz,1H,Ph1-OCNH),8.1-8.01(m,4H,CHO-Ph1),7.43-7.35(m,4H,OCNH-CH2-Ph2),4.5(d,J＝6Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm.MS-ESI:m/z 274[M+H+]。
4-甲酰基-N-4-(苯氧苄基)苯甲酰胺(12)。产率：1.39g(69％)；1H NMR(DMSO-d6):δ10.1(s,1H,Ph1-CHO),9.26(t,J＝5.9Hz,1H,Ph1-OCNH),8.17-7.99(m,4H,CHO-Ph1),7.42-6.96(m,9H,OCNH-CH2-Ph2+Ph2-O-Ph3),4.5(d,J＝6Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm.MS-ESI:m/z332[M+H+]。
4-甲酰基-N-(4-氟-2-(三氟甲基)苄基)苯甲酰胺(13)。产率：1.37g(67％)；1HNMR(DMSO-d6):δ10.11(s,1H,Ph1-CHO),9.34(t,J＝5.5Hz,1H,Ph1-OCNH),8.17-8.01(m,4H,CHO-Ph1),7.68-7.51(m,3H,OCNH-CH2-Ph2),4.66(d,J＝5.5Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm.MS-ESI:m/z 326[M+H+]。
4-甲酰基-N-(4-甲氧基-2-(三氟甲基)苄基)苯甲酰胺(14)。产率：1.41g(70％)；1H NMR(DMSO-d6):δ10.09(s,1H,Ph1-CHO),9.23(t,J＝5.9Hz,1H,Ph1-OCNH),8.1-8(m,4H,CHO-Ph1),7.48(d,J＝9.5Hz,1H,OCNH-CH2-Ph2-3H),7.26-7.2(m,2H,OCNH-CH2-Ph2 -2,5H),4.6(d,J＝5.7Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.81(s,1H,CH2-Ph2-4-OCH3)ppm.MS-ESI:m/z 338[M+H+]。
3-甲酰基-N-(2-(三氟甲基)苄基)苯甲酰胺(15)。产率：1.38g(70％)；1H NMR(DMSO-d6):δ10.11(s,1H,Ph1-CHO),9.36(t,J＝5.9Hz,1H,Ph1-OCNH),8.27-8.1(m,4H,CHO-Ph1),7.79-7.46(m,4H,OCNH-CH2-Ph2),4.71(d,J＝5.8Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm.MS-ESI:m/z 308[M+H+]。
制备化合物24&27的一般过程，使用4-碘代-N-(2-(三氟甲基)苄基)苯甲酰胺(24)为例。在氩气气氛下，1g(6.7mmol)4-碘代苯甲酸,1.5g(8mmol)EDC和0.16g(1.3mmol)DMAP在25ml无水DCM中混合，0℃搅拌悬浮液1小时。随后一次性加入0.9g(7.3mmol)2-三氟甲基苄胺。将混合物温热至室温，继续搅拌24小时。用20ml的2M HCl溶液洗涤有机溶液两次，并用20ml的盐水洗涤一次。用MgSO4干燥有机溶剂，减压移除溶剂。从EE/Hex混合物中重结晶粗产物，并保留白色固体。产率：0.89g(64％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.38(t,J＝6.3Hz,1H,Ph1-OCNH),8.11-8(m,4H,CHO-Ph1),7.79-7.48(m,4H,OCNH-CH2-Ph2),4.7(d,J＝5.7Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm.MS-ESI:m/z 405[M+H+]。
4-氰基-N-(2-(三氟甲基)苄基)苯甲酰胺(27)。产率：0.92g(65％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.38(t,J＝6.3Hz,1H,Ph1-OCNH),8.11-8(m,4H,CHO-Ph1),7.79-7.48(m,4H,OCNH-CH2-Ph2),4.7(d,J＝5.7Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm.MS-ESI:m/z 305[M+H+]。
制备化合物(1a-19a)的一般过程，使用(E)-4-[N-((2-(三氟甲基)苄基)苯基酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(1a)为例。0℃氩气气氛下，将1.2ml(4.9mmol)三乙基2-膦酰丁酸酯缓慢加入156mg(6.5mmol)NaH的5ml无水THF溶液中。30分钟后，将10ml无水THF中的1g(3.3mmol)4-甲酰基-N-(2-(三氟甲基)苄基)苯基酰胺(1)溶液加入反应混合物，并搅拌2小时。用25ml水淬灭反应。获得的混合物使用10ml EE稀释。用盐水洗涤有机层三次，并用MgSO3干燥。减压蒸发溶剂。EE/Hex重结晶后，保留白色固体。产率：0.92g(70％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.25(t,J＝5.8Hz,1H,Ph2-OCNH),8.09-7.38(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),7.67(s,1H,OCNH-Ph1-CH),4.74(d,J＝5.4Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.3(q,J＝7.1Hz,2H,C-COO-CH2),2.4(q,J＝6.9Hz,2H,CH-C-CH2),1.36(t,J＝7.06Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.18(t,J＝7.38Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):13C-NMR(DMSO-d6):169.4,167.3,136.9,136.5,136.3,135.8,135.7,131.5,129.4,128.8,128.4,127.3,126.3,125.1,125,124.9,124.1,60.5,40.2,23.7,13.3,10ppm；HRMS:测得m/z 405.1550(理论：405.1551)。
(E)-4-[N-苄基苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(2a)。产率：0.92g(65％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.12(t,J＝6.1Hz,1H,Ph2-OCNH),7.98-7.21(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),7.33(s,1H,OCNH-Ph1-CH),4.5(d,J＝5.7Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.23(q,J＝7Hz,2H,C-COO-CH2),2.41(q,J＝7Hz,2H,CH-C-CH2),1.3(t,J＝7.8Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.12(t,J＝7.3Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):167.5,165.7,137.9,137.5,137.1,136.1,135.9,131.5,129,128.3,127.5,127.4,126.7,125.6,125.5,124.4,61.7,39.8,24.9,14.2,10.5ppm；HRMS:测得m/z 338.1752(理论：338.1750)。
(E)-4-[N-((2-甲基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(3a)。产率：0.9g(66％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.1(t,J＝6Hz,1H,Ph2-OCNH),7.7-7.21(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),7.2(s,1H,OCNH-Ph1-CH),4.3(d,J＝5.7Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.18(q,J＝6.9Hz,2H,C-COO-CH2),2.39(q,J＝6.8Hz,2H,CH-C-CH2),2.41(s,3H,Ph2-CH3),1.25(t,J＝7.7Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.1(t,J＝7.2Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):167.4,165.3,136.8,136.3,136.1,136,135.9,132.5,129,128.4,128.5,127.4,126.5,125.8,125.3,124.1,60.7,40.1,23.9,18.7,13.2,10.1ppm；HRMS:测得m/z 352.1907(理论：352.1907).(E)-4-[N-((2-氯)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(4a)。产率：0.87g(64％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.15(t,J＝5.8Hz,1H,Ph2-OCNH),8.02-7.27(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),7.4(s,1H,OCNH-Ph1-CH),4.57(d,J＝5.7Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.24(q,J＝7.2Hz,2H,C-COO-CH2),2.38(q,J＝6.9Hz,2H,CH-C-CH2),1.3(t,J＝7.5Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.11(t,J＝6.7Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):167.3,165.1,138.1,137.4,137.2,135.8,135.7,132.2,129.3,128.1,127.4,127.3,126.5,125.6,125.2,123.9,60.5,39.6,24.7,14.1,10ppm；HRMS:测得m/z 372.1363(理论：372.1361)。
(E)-4-[N-((2-溴)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(5a)。产率：0.85g(65％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.19(t,J＝5.8Hz,1H,Ph2-OCNH),8.06-7.23(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),7.2(s,1H,OCNH-Ph1-CH),4.58(d,J＝5.6Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.29(q,J＝7.3Hz,2H,C-COO-CH2),2.37(q,J＝7Hz,2H,CH-C-CH2),1.35(t,J＝6.8Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.17(t,J＝5.4Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):168.3,166.1,137.8,137.4,137.1,135.7,135.5,132.1,129.5,128.2,127.5,127.2,126.3,125.8,125.3,122.9,61.5,40.6,25.7,14.4,10.5ppm；HRMS:测得m/z 416.0855(理论：416.0856)。
(E)-4-[N-((2-三氟甲氧基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(6a)。产率：0.86g(66％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.1(t,J＝5.8Hz,1H,Ph2-OCNH),7.96-7.33(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),7.4(s,1H,OCNH-Ph1-CH),4.69(d,J＝5.5Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.3(q,J＝7.2Hz,2H,C-COO-CH2),2.57(q,J＝7.5Hz,2H,CH-C-CH2),1.37(t,J＝7Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.18(t,J＝7.6Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):173.3,168.5,167.1,138.8,138.4,137.1,136.7,135.4,132.2,129.2,128.4,127.4,127.3,125.3,125.1,124.1,123.1,60.5,42.6,24.7,14.7,10.1ppm；HRMS:测得m/z 421.1501(理论：421.1503)。
(E)-4-[N-((4-氟)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(7a)。产率：0.93g(67％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.18(t,J＝6Hz,1H,Ph2-OCNH),8.02-7.18(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),7.66(s,1H,OCNH-Ph1-CH),4.53(d,J＝6.1Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.28(q,J＝7Hz,2H,C-COO-CH2),2.54(q,J＝7.9Hz,2H,CH-C-CH2),1.34(t,J＝7.11Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.18(t,J＝7.6Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):167.5,167.2,161.8,139.7,138.3,138.1,133.4,131.2,128.2,128.1,127.2,127,126.1,125.1,124.5,118.9,61.5,42.6,16.7,14.6,14.1ppm；HRMS:测得m/z 356.1657(理论：356.1657)。
(E)-4-[N-((4-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(8a)。产率：0.92g(65％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.23(t,J＝6.5Hz,1H,Ph2-OCNH),7.99-7.53(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),7.62(s,1H,OCNH-Ph1-CH),4.59(d,J＝6.3Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.24(q,J＝7.4Hz,2H,C-COO-CH2),2.5(q,J＝7.9Hz,2H,CH-C-CH2),1.3(t,J＝7.4Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.12(t,J＝7.6Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):167.4,167,164.8,139.3,137.1,136.7,131.3,132.4,130.2,128.6,128.4,127.4,127.1,126.1,124.9,124.3,117.9,61.3,41.6,17.7,14.1,14ppm；HRMS:测得m/z 406.1626(理论：406.1625)。
(E)-4-[N-((4-三氟甲氧基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(9a)。产率：0.83g(65％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.14(t,J＝5.9Hz,1H,Ph2-OCNH),7.99-7.27(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),7.42(s,1H,OCNH-Ph1-CH),4.5(d,J＝5.4Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.21(q,J＝7.2Hz,2H,C-COO-CH2),2.4(q,J＝7.8Hz,2H,CH-C-CH2),1.27(t,J＝7.3Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.09(t,J＝6.6Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):173.1,169,168.3,155.8,140.3,136.7,135.1,131.4,131.2,128.7,128.3,127.6,127.1,125.1,123.9,122.3,116.9,59.3,40.6,16.7,14.5,14.1ppm；HRMS:测得m/z 422.1574(理论：422.1574)。
(E)-4-[N-((4-甲氧基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(10a)。产率：0.91g(67％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.8-6.6(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),7.5(s,1H,OCNH-Ph1-CH),4.41(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.17(q,J＝7Hz,2H,C-COO-CH2),3.67(s,Ph2-O-CH3),2.44(q,J＝7.5Hz,2H,CH-C-CH2),1.24(t,J＝7.6Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.05(t,J＝5Hz,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):167,166.3,140.4,138.3,135.7,135.1,131.7,130.3,128.7,128.5,127.3,127.1,124.2,123.1,122.1,115.9,58.3,55.1,40.1,16.5,14.6,14.1ppm；HRMS:测得m/z367.1783(理论：367.1784)。
(E)-4-[N-((4-氯)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(11a)。产率：0.93g(69％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.93-7.34(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),7.36(s,1H,OCNH-Ph1-CH),4.58(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.3(q,J＝7.5Hz,2H,C-COO-CH2),2.56(q,J＝7.4Hz,2H,CH-C-CH2),1.37(t,J＝7.5Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.18(t,J＝7.2Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):166.6,165.3,154.4,137.4,136.1,135.5,131.6,130.2,129.1,128.6,126.9,126.8,125.3,123.1,122.8,115.9,59.3,40.2,16.1,14.6,14.1ppm；HRMS:测得m/z371.1296(理论：371.1298)。
(E)-4-[N-((4-苯氧基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(12a)。产率：0.85g(69％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.11(t,J＝5.9Hz,1H,Ph1-OCNH),7.97-6.98(m,12H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph2-O-Ph3),7.4(s,1H,OCNH-Ph1-CH),4.49(d,J＝6.5,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.24(q,J＝7.2Hz,2H,C-COO-CH2),2.45(q,J＝7.3Hz,2H,CH-C-CH2),1.3(t,J＝7.7Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.12(t,J＝7.8Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):166.1,164.2,156.6,155.4,137.4,136.1,135.5,131.6,130.2,129.1,128.7,128.6,128.3,126.9,126.8,125.3,123.1,122.8,121.5,118.1,118.7,115.9,59.3,40.2,16.2,14.5,14ppm；HRMS:测得m/z 430.2017(理论：430.2013)。
(E)-4-[N-((4-氟(2-三氟甲基))苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(13a)。产率：0.85g(70％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.19(t,J＝5.3Hz,1H,Ph2-OCNH),8-7.53(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.65(d,J＝4.6Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.24(q,J＝7Hz,2H,C-COO-CH2),2.48(q,J＝8.5Hz,2H,CH-C-CH2),1.3(t,J＝7.4Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.13(t,J＝7.1Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):175.4,165.3,141.9,136.3,135.3,135.1,132.6,132.5,129.4,128.8,128.2,126.1,126,125.3,125.1,124.8,124.1,60.4,40.1,24.6,14.1,11ppm；HRMS:测得m/z 424.1530(理论：424.1530)。
(E)-4-[N-((4-甲氧基(2-三氟甲基))苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(14a)。产率：0.9g(70％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.1(t,J＝4.7Hz,1H,Ph2-OCNH),8.02-7.24(m,7H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),7.4(s,1H,OCNH-Ph1-CH),4.61(d,J＝5.1Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.25(q,J＝7.1Hz,2H,C-COO-CH2),2.45(q,J＝7.7Hz,2H,CH-C-CH2),1.3(t,J＝8.5Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.12(t,J＝7.2Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):168.4,166.3,158.9,136.4,136.3,135.9,135.6,132.5,129.4,128.8,128.2,126.3,126.1,125.3,125,124.8,124.1,60.1,55.3,40.1,23.6,13,11ppm；HRMS:测得m/z 436.1728(理论：436.1730)。
(E)-3-[N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(15a)。产率：0.91g(70％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.82-7.32(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),7.48(s,1H,OCNH-Ph1-CH),4.7(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.18(q,J＝7.22Hz,2H,COO-CH2),2.45(q,J＝7.6Hz,2H,CH-C-CH2),1.25(t,J＝7.1Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.07(t,J＝7.6Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):169.9,169.4,138.5,137.5,137.4,135.8,133.5,133.2,130,129.8,128.5,128.3,127.1,127,125,124.8,124.1,62.1,41.3,21.7,14.6,14.1ppm；HRMS:测得m/z 405.1552(理论：405.1553)。
(E)-4-[N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺]-肉桂酸乙酯(16a)。产率：0.78g(67％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.19(t,J＝6Hz,1H,Ph2-OCNH),8-7.47(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),6.77(d,J＝16.2Hz,1H,Ph1-CH-CH),4.69(d,J＝5.7Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.33(q,J＝7.5Hz,2H,CH-COO-CH2),1.28(t,J＝7.4Hz,3H,COO-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):170.9,168.4,137.5,136.5,136.4,135.8,132.5,131.2,130,129.6,128.4,128.1,127.5,127.3,125.1,124.8,124.2,62.3,41.1,14.1ppm；HRMS:测得m/z378.1312(理论：378.1312)。
(E)-4-[N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺]-α-甲基肉桂酸甲乙酯(17a)。产率：0.83g(65％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.23(t,J＝6Hz,1H,Ph2-OCNH),8.06-7.51(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.73(d,J＝5.6Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.28(q,J＝7.2Hz,2H,C-COO-CH2),3.37(d,J＝2.1,3H,CH-C-CH3),1.34(t,J＝7Hz,3H,COO-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):168,165,139.5,136.4,136.3,135.8,129.5,129.1,128.9,127.4,127.1,126.5,126.3,125.9,125.1,124.4,124.2,59.9,42.1,13.7,11.9ppm；HRMS:测得m/z392.1469(理论：392.1468)。
(E)-4-[N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺]-α-丙基肉桂酸乙酯(18a)。产率：0.81g(65％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.18(t,J＝6Hz,1H,Ph2-OCNH),8-7.3(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.67(d,J＝5.3Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.23(q,J＝7.4Hz,2H,C-COO-CH2),2.49-2.3(m,2H,CH-C-CH2),1.56-1.47(m,2H,C-CH2-CH2),1.34(t,J＝7Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.9(t,J＝7Hz,3H,CH2-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):167,165.5,138.5,136.3,136.2,135.7,130.5,129.1,128.7,127.1,127,126.5,126.2,126.1,125.7,125,124.6,60,42.1,29,20.1,14.2,13.7ppm；HRMS:测得m/z 420.1780(理论：420.1781)。
(E)-4-[N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺]-α-苯基肉桂酸乙酯(19a)。产率：0.62g(60％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.06(t,J＝6Hz,1H,Ph2-OCNH),7.98-7.15(m,14H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH+C-Ph4),4.62(d,J＝6Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.23(q,J＝6.6Hz,2H,C-COO-CH2),1.24(t,J＝7.4Hz,3H,COO-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):166.5,165.3,136.5,136.3,136.2,135.7,134.2,130.5,129.1,128.8,128.6,128.5,128.4,127.7,127.1,126.6,126.5,126.6,126.2,126.1,125.7,125,124.6,60,42.1,13.7ppm；HRMS:测得m/z 454.1622(理论：454.1625)。
制备化合物(1b-19b)的一般过程，使用2-乙基3-[4-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(1b)为例。250mg(0.617mmol)1a和9.8mg(0.1mmol)钯碳(palladium oncarbon)溶解于无水乙醇，并在氢气氛中搅拌12小时。用硅藻土过滤反应混合物，减压去除溶剂。无需进一步纯化，得清澈的树脂油。产率：0.2g(90％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.1(t,J＝5.8Hz,1H,Ph2-OCNH),7.91-7.34(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.71(d,J＝5.5Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.11-4.01(m,2H,CH-COO-CH2),2.97-2.83(m,2H,Ph1-CH2),2.73-2.64(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.65-1.56(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.14(t,J＝6.6Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.93(t,J＝7.4,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):175.5,168.8,143.8,137,132.6,132.04,131.9,128.2,127.1,127,125.7,125.6,125.5,125.4,124.9,60,49,39.8,37.7,25.2,13.2,10.5ppm；HRMS:测得m/z 408.1781(理论：408.1781)。
2-乙基3-[4-(N-苄基苯甲酰胺)]丙酸乙酯(2b)。产率：0.21g(84％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.69-7.11(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.46(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.98-3.88(m,2H,CH-COO-CH2),2.86-2.72(m,2H,Ph1-CH2),2.58-2.48(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.62-1.47(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.02(t,J＝6.3Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.83(t,J＝8,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):175.5,168.6,143.6,138.8,132.4,128.8,128.1,127.1,127,126.8,125.6,125.5,125.4,125.3,60,49.1,43,37.7,25,13.3,10.7ppm；HRMS:测得m/z 340.191(理论：340.1907)。
2-乙基3-[4-(N-((2-甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(3b)。产率：0.19g(75％)；1H NMR(DMSO-d6):δ8.85(t,J＝5.7Hz,1H,Ph2-OCNH),7.85-7.15(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.46(d,J＝6.2,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.16-3.96(m,2H,CH-COO-CH2),2.92-2.77(m,2H,Ph1-CH2),2.68-2.59(m,1H,Ph1-CH2-CH),2.34(s,3H,Ph2-CH3),1.61-1.5(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.09(t,J＝7.5Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.88(t,J＝8.1,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):167.8,165.4,137.8,136.2,136,135.8,129,128.2,128.1,127.4,125.9,125.8,125.3,124.2,124,60.3,40.1,38.3,23.9,18.9,13.2,12.1ppm；HRMS:测得m/z354.2065(理论：354.2064)。
2-乙基3-[4-(N-((2-氯)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(4b)。产率：0.2g(90％)；1HNMR(甲醇-d3):δ7.83-7.26(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.61(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.11-4(m,2H,CH-COO-CH2),3-2.84(m,2H,Ph1-CH2),2.71-2.62(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.74-1.59(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.15(t,J＝6.8Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.96(t,J＝8.7,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):167.8,166.2,137.4,136.4,135.9,135.8,129.2,128.5,128.3,127.6,126.9,126.8,125.4,124.5,124,58.3,40,38.6,23.9,18.5,13.1,11.7ppm；HRMS:测得m/z 375.1423(理论：375.1422)。
2-乙基3-[4-(N-((2-溴)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(5b)。产率：0.18g(70％)；1HNMR(甲醇-d3):δ7.81-7.25(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.59(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.09-4(m,2H,CH-COO-CH2),2.9-2.85(m,2H,Ph1-CH2),2.69-2.61(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.72-1.58(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.14(t,J＝7.9Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.95(t,J＝8.1,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):176,167.5,144.9,130.2,129.5,128.5,128.4,128.2,127.2,127,126,125.7,125.6,125.5,61.4,50.4,44.4,39.1,26.6,14.5,11.9ppm；HRMS:测得m/z 418.1013(理论：418.1012)。
2-乙基3-[4-(N-((2-三氟甲氧基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(6b)。产率：0.2g(90％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.69-7.17(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.55(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.97-3.89(m,2H,CH-COO-CH2),2.86-2.73(m,2H,Ph1-CH2),2.58-2.51(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.61-1.47(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.02(t,J＝7Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.84(t,J＝7.6,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):177.5,175,166.5,145.1,133.5,132.6,130.4,130.3,129.9,128.6,128.4,127,125.8,125.6,61.4,50.5,44.4,39.1,26.5,14.7,12ppm；HRMS:测得m/z423.1667(理论：423.1665)。
2-乙基3-[4-(N-((4-氟)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(7b)。产率：0.23g(91％)；1HNMR(DMSO-d6):δ8.91(t,J＝5.8Hz,1H,OCNH),7.75-7.03(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.37(d,J＝6,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.98-3.86(m,2H,CH-COO-CH2),2.84-2.69(m,2H,Ph1-CH2),2.6-2.48(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.53-1.41(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.01(t,J＝7.4Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.79(t,J＝7.4,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):177.6,165.6,143.4,138.6,133.4,133.2,132.1,127.5,127.1,126.7,126.6,126.5,125.4,125.2,56,48.2,45,37.6,24,13.1,11.7ppm；HRMS:测得m/z 358.1814(理论：358.1813)。
2-乙基3-[4-(N-((4-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(8b)。产率：0.23g(87％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.7-7.17(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.54(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.99-3.88(m,2H,CH-COO-CH2),2.87-2.72(m,2H,Ph1-CH2),2.59-2.49(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.62-1.46(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.03(t,J＝7.5Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.83(t,J＝7.2,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):175.6,166.3,143.5,132.7,132.3,131.5,130.4,128.8,127.5,127.1,125.1,125.1,125,125,124.9,60,49,42.7,37.7,25.1,13.2,10.7ppm；HRMS:测得m/z408.178(理论：408.1781)。
2-乙基3-[4-(N-((4-三氟甲氧基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(9b)。产率：0.24g(94％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.69-7.12(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.48(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.98-3.88(m,2H,CH-COO-CH2),2.87-2.71(m,2H,Ph1-CH2),2.58-2.48(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.64-1.42(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.02(t,J＝5.7Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.84(t,J＝7.4,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):177.8,175.6,168.6,143.8,138.2,132.1,130.2,130.3,128.8,128.7,127,125.3,125.2,125.1,120.7,60.1,49.2,42.5,37.7,25.2,13.1,10.6ppm；HRMS:测得m/z 424.1726(理论：424.1730)。
2-乙基3-[4-(N-((4-甲氧基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(10b)。产率：0.2g(90％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.78-6.88(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.45(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.1-3.98(m,2H,CH-COO-CH2),3.78(s,3H,Ph2-O-CH3),2.96-2.83(m,2H,Ph1-CH2),2.68-2.61(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.73-1.56(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.14(t,J＝7.1Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.95(t,J＝7.5,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):177.1,160.5,144.9,133.8,132.2,130.1,129.9,128.4,127.2,127,125.3,125.2,125.1,114.9,61.4,55.8,44,39.1,37.7,26.6,14.6,11.9ppm；HRMS:测得m/z 370.2017(理论：370.2013)。
2-乙基3-[4-(N-((4-氯)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(11b)。产率：0.2g(91％)；1HNMR(甲醇-d3):δ7.68-7.12(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.46(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.98-3.87(m,2H,CH-COO-CH2),2.85-2.73(m,2H,Ph1-CH2),2.57-2.5(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.62-1.45(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.02(t,J＝7.1Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.83(t,J＝7.4,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):177,164.1,145,140.2,130.2,129.5,128.5,128.5,128.4,127,125.5,125.3,125.1,114.4,61.4,50.5,44.5,39,26.6,14.5,12.1ppm；HRMS:测得m/z 374.1518(理论：374.1518)。
2-乙基3-[4-(N-((4-苯氧基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(12b)。产率：0.2g(90％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.68-7.12(m,13H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.46(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.98-3.87(m,2H,CH-COO-CH2),2.85-2.73(m,2H,Ph1-CH2),2.57-2.5(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.62-1.45(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.02(t,J＝7.1Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.83(t,J＝7.4,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):175.7,168.5,157.4,156.5,143.7,136.1,134,132.4,130.2,129.5,128.8,128.7,127,126.9,126.8,125.3,123.1,122,121.5,118.5,118.3,115.9,60.1,42.2,25.2,13.2,10.5ppm；HRMS:测得m/z 370.2017(理论：370.2013)。
2-乙基3-[4-(N-(4-氟(2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(13b)。产率：0.2g(90％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.83-7.18(m,7H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.63(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.01-3.86(m,2H,CH-COO-CH2),2.88-2.72(m,2H,Ph1-CH2),2.59-2.49(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.65-1.43(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.03(t,J＝7.04Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.84(t,J＝7.7,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):175.6,168.8,163,159.7,143.8,133.1,131.9,131,130.9,128.9,127.1,118.9,118.6,113.3,112.9,60,49.1,39.3,37.4,25.2,13,10.6ppm；HRMS:测得m/z 426.1686(理论：426.1687)。
2-乙基3-[4-(N-(4-甲氧基(2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(14b)。产率：0.2g(90％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.71-7.02(m,7H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.59(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.01-3.86(m,2H,CH-COO-CH2),3.74(s,3H,Ph2-O-CH3),2.87-2.72(m,2H,Ph1-CH2),2.59-2.49(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.65-1.43(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.03(t,J＝7Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.84(t,J＝7.3,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):175.7,168.8,158.8,151.2,143.9,132.1,130.3,128.8,128.7,128.6,128.3,127.2,116.7,111.8,111.7,67.9,59.9,55.1,39.5,37.9,25.1,13.2,10.8ppm；HRMS:测得m/z438.1882(理论：438.1887)。
2-乙基3-[3-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(15b)。产率：0.14g(55％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.65-7.27(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.69(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.93(q,J＝7.2,2H,CH-COO-CH2),2.87-2.74(m,2H,Ph1-CH2),2.59-2.51(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.64-1.46(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.01(t,J＝7.1Hz,3H,COO-CH2-CH3),0.84(t,J＝7.4Hz,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):177.1,168.8,141.6,140.5,135.4,133.5,133.5,129.7,129.1,128.5,127.1,126.5,125.5,125.4,124.9,61.5,50.7,39.8,39.2,26.5,14.6,12.1ppm；HRMS:测得m/z 408.1781(理论：408.1781)。
3-[4-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(16b)。产率：0.24g(95％)；1HNMR(DMSO-d6):δ9.1(t,J＝5.8Hz,1H,OCNH),7.94-7.35(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.71(d,J＝6.2Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.1(q,J＝7Hz,2H,CH2-COO-CH2),2.97(t,J＝7.6Hz,2H,Ph1-CH2),2.71(t,J＝7.1Hz,2H,Ph1-CH2-CH2),1.21(t,J＝7Hz,3H,COO-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):177.1,168.8,141.6,140.5,135.4,133.5,133.5,129.7,129.1,128.5,127.1,126.5,125.5,125.4,124.9,61.5,50.7,39.8,39.2ppm；HRMS:测得m/z380.1468(理论：380.1468)。
2-甲基3-[4-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(17b)。产率：0.2g(93％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.04(t,J＝6Hz,1H,OCNH),7.86-7.27(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.65(d,J＝5.5Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.01(q,J＝6.8Hz,2H,CH-COO-CH2),3-2.88(m,1H,Ph1-CH2-CH),2.82-2.7(m,2H,Ph1-CH2),1.14-1.05(m,6H,COO-CH2-CH3+CH2-CH-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):177.4,166.8,143.5,140.5,133.1,132.5,131.5,129.7,129.3,128.6,127.8,126.5,125.5,125.4,124.9,60.2,50.7,39.8,39.2,17.2,14.6ppm；HRMS:测得m/z394.1625(理论：394.1525)。
2-丙基3-[4-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(18b)。产率：0.17g(66％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.06(t,J＝5.75Hz,1H,OCNH),7.85-7.28(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.65(d,J＝4.25Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.99(q,J＝7.3Hz,2H,CH-COO-CH2),3.07-2.9(m,2H,Ph1-CH2),2.82-2.76(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.61-1.39(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),1.07(t,J＝7.2Hz,3H,COO-CH2-CH3),1.35-1.16(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2-CH2),0.85(t,J＝7.13Hz,3H,CH-CH2-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):175,166.7,143.5,138.1,132.9,132.4,131.5,129.7,129.2,128.6,127.7,126.2,125.5,125.4,124.9,42.7,38.1,34.6,34.4,20.3,14.5,14.2ppm；HRMS:测得m/z 422.1936(理论：422.1937)。
2-苯基3-[4-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸乙酯(19b)。产率：0.1g(40％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.02(t,J＝6Hz,1H,OCNH),7.81-7.24(m,13H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+CH2-CH-Ph4),4.63(d,J＝5.5Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),4.08-3.92(m,2H,CH-COO-CH2),3.4-3.31(m,2H,Ph1-CH2),3.11-3.03(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.07(t,J＝7.1Hz,3H,COO-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):173,166.8,143.1,139,138.2,138.1,133.1,132.5,129.4,129,128.6,128.3,127.7,127.7,127.7,126.6,126.5,126.6,126.2,126.1,125.7,125,124.6,60.9,19,14.5ppm；HRMS:测得m/z 456.1785(理论：456.1781)。
制备化合物(1d-19d和1c-19c)的一般过程，使用(E)-4-[N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸(1d)为例。将100mg(0.2mmol)的(E)-4-[N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸乙酯(1a)和69mg(1.2mmol)溶解在2ml的1:2:1比例的THF|H2O|MeOH混合物中，在70℃和35瓦的微波中搅拌30分钟。减压移除有机层。用1ml H2O稀释水层，用12M HCl溶液酸化，并储存在4℃。沉淀纯产物，无需进一步纯化。产率：0.06g(60％)；1HNMR(DMSO-d6):δ12.71(s,1H,COOH),9.24(t,J＝5.9Hz,1H,Ph2-OCNH),8.06-7.47(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.74(d,J＝5.2Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.51(q,J＝8Hz,2H,CH-C-CH2),1.17(t,J＝7.5Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):169.8,168.4,139.3,137,136.7,133.5,132.1,128.9,128.3,127.9,127.7,127.3,127.1,127,126.9,125.7,125.6,40,20.4,12.8ppm；HRMS:测得m/z 378.1312(理论：378.1313)。
(E)-4-[N-苄基苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸(2d)。产率：0.06g(65％)；1H NMR(DMSO-d6):δ12.61(s,1H,COOH),9.11(t,J＝5.9Hz,1H,Ph2-OCNH),7.99-7.22(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),7.33(s,1H,Ph1-CH),4.5(d,J＝6.1Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.47(q,J＝7.7Hz,2H,CH-C-CH2),1.11(t,J＝7.2Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):168.9,165.7,139.7,138,136.4,136.3,128.9,128.3,127.5,127.2,126.7,125.2,125.1,124,123.5,123,42.7,20.3,13.3ppm；HRMS:测得m/z 310.1438(理论：310.1438)。
(E)-4-[N-((2-甲基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸(3d)。产率：0.02g(19％)；1HNMR(DMSO-d6):δ12.62(s,1H,COOH),8.97(t,J＝5.8Hz,1H,Ph2-OCNH),7.98-7.13(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),7.17(s,1H,Ph1-CH),4.48(d,J＝5.7Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.48(q,J＝8.5Hz,2H,CH-C-CH2),2.34(s,3H,Ph2-CH3),1.12(t,J＝7.1Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):169.8,168.1,139.1,137,136.6,136,135.9,133.9,129.9,128.9,128.6,127.9,127.4,127.2,126.9,126.9,41.4,20.3,18.7,12.8ppm；HRMS:测得m/z324.1595(理论：324.1594)。
(E)-4-[N-((2-氯)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸(4d)。产率：0.06g(62％)；1HNMR(DMSO-d6):δ12.69(s,1H,COOH),9.17(t,J＝6Hz,1H,Ph2-OCNH),8.05-7.35(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.62(d,J＝5.8Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.5(q,J＝6.4Hz,2H,CH-C-CH2),1.17(t,J＝7.2Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):169.8,168.3,139.2,137,136.6,135.7,133.7,132.9,129.1,128.9,128.6,128.4,127.9,127.3,126.9,126.4,41.2,20.3,12.7ppm；HRMS:测得m/z 344.1052(理论：344.1048)。
(E)-4-[N-((2-溴)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸(5d)。产率：0.06g(61％)；1HNMR(DMSO-d6):δ12.68(s,1H,COOH),9.18(t,J＝5.7Hz,1H,Ph2-OCNH),8.08-7.26(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.58(d,J＝5.4Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.5(q,J＝8.2Hz,2H,CH-C-CH2),1.18(t,J＝7Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):169.8,168.3,139.2,137.2,137,136.6,133.7,132.4,128.9,128.6,127.9,127.4,127.3,126.9,125.6,122.7,43.7,20.4,12.8ppm；HRMS:测得m/z 388.0544(理论：388.0543)。
(E)-4-[N-((2-三氟甲氧基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸(6d)。产率：0.06g(65％)；1H NMR(DMSO-d6):δ12.71(s,1H,COOH),9.15(t,J＝6.7Hz,1H,Ph2-OCNH),8.03-7.4(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.62(d,J＝5.9Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.51(q,J＝6.9Hz,2H,CH-C-CH2),1.16(t,J＝7.9Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):171.3,169.2,166.5,166.4,149.7,146.6,138.8,136.9,134.1,133.1,132.2,129.7,129.5,129.1,128.2,128,128,37.7,20.8,14.1ppm；HRMS:测得m/z 394.1261(理论：394.1261)。
(E)-4-[N-((4-氟)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸(7d)。产率：0.07g(70％)；1HNMR(DMSO-d6):δ12.63(s,1H,COOH),9.12(t,J＝6.3Hz,1H,Ph2-OCNH),7.97-7.12(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.48(d,J＝5.6Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.44(q,J＝8.9Hz,2H,CH-C-CH2),1.11(t,J＝6.9Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):169.8,168.1,139.1,137,136.6,134.9,133.8,129.1,129,128.9,127.9,127.2,126.8,125.6,114.9,114.6,42.4,20.3,12.7ppm；HRMS:测得m/z 328.1345(理论：328.1344)。
(E)-4-[N-((4-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸(8d)。产率：0.05g(50％)；1H NMR(甲醇-d3):δ8.08-7.29(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.7(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.57(q,J＝7.5Hz,2H,CH-C-CH2),1.22(t,J＝7.2Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):167.2,166.5,144.2,138.4,138.1,137,136.5,133.8,133.6,132.2,129.6,129.4,128.6,128.5,127.1,127,126.8,29.5,19.4,12.6ppm；HRMS:测得m/z377.1245(理论：377.1246)。
(E)-4-[N-((4-三氟甲氧基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸(9d)。产率：0.07g(69％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.96-7.24(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.64(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.56(q,J＝7.4Hz,2H,CH-C-CH2),1.19(t,J＝9.6Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):169.7,168.2,165.5,145.2,139.2,138.2,137,136.6,134.1,133.7,132.2,129.7,129.5,129.1,128.2,128,120.8,28.5,20.4,12.7ppm；HRMS:测得m/z394.1258(理论：394.1261)。
(E)-4-[N-((4-甲氧基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸(10d)。产率：0.06g(64％)；1H NMR(DMSO-d6)δ12.51(s,1H,COOH),8.93(t,J＝6.2Hz,1H,Ph2-OCNH),7.87-6.78(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.33(d,J＝5.7Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.64(s,3H,Ph2-O-CH3),2.36(q,J＝7.9Hz,2H,CH-C-CH2),1.01(t,J＝7.1Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):169.8,168,159,139,137,136.5,133.9,130.8,128.9,128.7,128.5,128.5,127.9,127.2,126.8,113.5,54.3,46.8,20.3,12.7ppm；HRMS:测得m/z 340.1544(理论：340.1543)。
(E)-4-[N-((4-氯)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸(11d)。产率：0.06g(66％)；1HNMR(DMSO-d6)δ12.54(s,1H,COOH),9.03(t,J＝5.8Hz,1H,Ph2-OCNH),7.87-7.23(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.39(d,J＝6.1Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.37(q,J＝7.4Hz,2H,CH-C-CH2),1.01(t,J＝7.6Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):168.7,166.1,137.1,137,135.6,133.9,133.6,129.4,129.2,128.9,128,127.6,126.4,125.4,114.8,114.6,37.4,21.3,12.7ppm；HRMS:测得m/z 344.1045(理论：344.1048)。
(E)-4-[N-((4-苯氧基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸(12d)。产率：0.02g(16％)；1H NMR(甲醇-d3)δ7.96-6.95(m,14H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH+Ph2-O-Ph3),4.6(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.56(q,J＝7.1Hz,2H,CH-C-CH2),1.2(t,J＝7.5Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):169.8,168.1,157.4,155.4,139.1,137,136.5,133.9,133.8,133.8,129.5,128.9,128.8,127.9,127.2,126.9,122.9,122.8,121.5,118.5,118.3,115.9,42.8,20.3,12.8ppm；HRMS:测得m/z 402.1696(理论：402.1699)。
(E)-4-[N-((4-氟(2-三氟甲基))苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸(13d)。产率：0.06g(60％)；1H NMR(甲醇-d3)δ8.11-7.36(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.79(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.57(q,J＝7.43Hz,2H,CH-C-CH2),1.2(t,J＝7.4Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):169.7,168.4,141.9,139.4,136.9,136.7,133.5,131.2,131,128.9,128.2,127.3,126,125.3,125.1,124.8,124.1,39.4,20.4,12.8ppm；HRMS:测得m/z396.1215(理论：396.1217)。
(E)-4-[N-((4-甲氧基(2-三氟甲基))苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸(14d)。产率：0.05g(55％)；1H NMR(甲醇-d3)δ7.97-6.65(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.75(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.87(s,3H,Ph2-CH3),2.57(q,J＝7.6Hz,2H,CH-C-CH2),1.2(t,J＝7.4Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):169.7,168.3,158.9,139.3,137.1,136.6,133.6,130.5,128.9,128.1,127.9,127.3,126.9,126.1,116.7,112,111.8,54.7,20.3,12.6ppm；HRMS:测得m/z 408.1415(理论：408.1417)。
(E)-3-[N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺]-α-乙基肉桂酸(15d)。产率：0.05g(50％)；1H NMR(DMSOl-d6):δ12.66(s,1H,COOH),9.22(t,J＝5.8,1H,OCNH),8.02-7.47(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+OCNH-Ph1-CH),4.73(d,J＝6,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.54-2.43(m,2H,CH-C-CH2),1.17(t,J＝7.2Hz,3H,C-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):170,165,137.5,137,136,135.6,133.4,133,130,129.4,128.3,128.3,127.2,127,124.9,124.8,124.1,38.2,20.1,14.2ppm；HRMS:测得m/z 377.3571(理论：377.3572)。
(E)-4-[N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺]-肉桂酸(16d)。产率：0.07g(72％)；1HNMR(DMSO-d6):δ12.4(s,1H,COOH),9.1(t,J＝5.5Hz,1H,Ph2-OCNH),7.91-7.38(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),6.58(d,J＝16Hz,1H,H),4.6(d,J＝5.7Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):169.8,168.3,139.3,137,136.7,133.5,132.1,128.9,128.3,127.9,127.3,127.1,127,126.9,126.7,125.7,125.6,40ppm；HRMS:测得m/z 350.1(理论：350.1)。
(E)-4-[N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺]-α-甲基肉桂酸(17d)。产率：0.07g(71％)；1H NMR(DMSO-d6):δ12.62(s,1H,COOH),9.23(t,J＝5.8Hz,1H,Ph2-OCNH),8.06-7.51(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.74(d,J＝5.6Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.12(d,J＝1.4,3H,CH-C-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):169.1,166,138.6,137.5,136.7,134.9,133.5,132.7,130.2,130,130,129.6,128.2,127.5,127.4,127.3,126.8,41.1,12.3ppm；HRMS:测得m/z 364.1158(理论：364.1155)。
(E)-4-[N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺]-α-丙基肉桂酸(18d)。产率：0.02g(18％)；1H NMR(DMSO-d6):δ12.67(s,1H,COOH),9.17(t,J＝5.9Hz,1H,Ph2-OCNH),8.05-7.41(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH),4.69(d,J＝5.2Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.55-2.33(m,2H,CH-C-CH2),1.6-1.42(m,2H,C-CH2-CH2),0.91(t,J＝7.7Hz,3H,CH2-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):168.9,166,138.5,137.5,137.4,136.8,135.1,133.8,133.5,132.7,129.3,129,128.5,128.2,127.6,127.3,125.9,42.1,29,18.4,14ppm；HRMS:测得m/z392.1471(理论：392.1468)。
(E)-4-[N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺]-α-苯基肉桂酸(19d)。产率：0.02g(17％)；1H NMR(DMSO-d6):δ8.94(t,J＝5.8Hz,1H,Ph2-OCNH),7.79-6.91(m,14H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH+C-Ph4),4.54(d,J＝5.5Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):166.2,155.5,129.6,129.2,129,128.9,128.3,128.2,128.1,128,128,128,127.5,127.2,126.9,126.2,125.8,125.8,126.1,126,125.3,125,124.6,41ppm；HRMS:测得m/z426.1309(理论：426.1312)。
2-乙基3-[4-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(1c)。产率：0.06g(60％)；1H NMR(DMSO-d6):δ12.2(s,COOH),9.1(t,J＝5.9Hz,1H,Ph2-OCNH),7.93-7.36(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.72(d,2H,J＝5.6Hz,Ph1-OCNH-CH2),2.98-2.78(m,2H,CH2-CH-CH2),2.59-2.5(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.64-1.53(m,Ph1-CH2),0.94(t,J＝7.4Hz,CH-CH2-CH3)ppm.13C-NMR(DMSO-d6):177.6,168.9,144.1,137.1,132.1,131.9,128.8,128.1,127,127.4,125.7,125.6,125.5,125.4,122.8,49,39.8,37.6,24.9,10.5ppm；HRMS:m/z380.1469(理论：380.1468)。
2-乙基3-[4-(N-苄基苯甲酰胺)]丙酸(2c)。产率：0.05g(55％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.83-6.92(m,9H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.46(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.89-2.67(m,2H,Ph1-CH2),2.51-2.42(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.62-1.39(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),0.85(t,J＝7.6,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):178.2,168.7,144.1,138.9,132.1,128.8,128.8,128.1,128.1,127.1,127.1,127,127,126.7,49.5,43.1,37.8,25.2,10.7ppm；HRMS:测得m/z312.1601(理论：312.1594)。
2-乙基3-[4-(N-((2-甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(3c)。产率：0.02g(20％)；1HNMR(甲醇-d3):δ8.01-7.03(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.47(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.91-2.69(m,2H,Ph1-CH2),2.55-2.45(m,1H,Ph1-CH2-CH),2.26(s,3H,Ph2-CH3),1.63-1.42(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),0.86(t,J＝7.4,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):176.1,167.3,166.1,145.1,143.2,137.3,135.6,132.3,129.8,129.3,129,128.7,127.3,126.6,125.6,48.1,37.2,24.7,18.5,11.4ppm；HRMS:测得m/z 326.1752(理论：326.1751)。
2-乙基3-[4-(N-((2-氯)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(4c)。产率：0.05g(50％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.68-7.1(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.46(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.89-2.69(m,2H,Ph1-CH2),2.54-2.44(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.63-1.41(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),0.86(t,J＝7.6,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):177.6,168.7,143.8,138.9,132.2,128.8,128.8,128.1,128.1,127.1,127,126.9,126.8,126.5,49,43.1,37.5,25,10.6ppm；HRMS:测得m/z346.1206(理论：346.1205)。
2-乙基3-[4-(N-((2-溴)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(5c)。产率：0.05g(51％)；1H NMR(DMSO-d6):δ12.12(s,1H,COOH),8.96(t,J＝6.1Hz,1H,Ph2-OCNH),7.81-7.19(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.46(d,J＝6.1,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.9-2.71(m,2H,Ph1-CH2),2.6-2.5(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.6-1.41(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),0.87(t,J＝7.6,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):176.4,166.5,143.7,140.2,132.7,129.2,128.7,128.1,128.1,127.7,127.6,126.9,126.8,126.5,48.5,40.5,39.7,25.1,11.9ppm；HRMS:测得m/z 390.07(理论：390.0699)。
2-乙基3-[4-(N-((2-三氟甲氧基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(6c)。产率：0.07g(66％)；1H NMR(DMSO-d6):δ12.18(s,1H,COOH),9.03(t,J＝6Hz,1H,Ph2-OCNH),7.88-7.26(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.53(d,J＝6,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.96-2.76(m,2H,Ph1-CH2),2.63-2.59(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.64-1.5(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),0.9(t,J＝7.6,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):177.5,176.4,166.5,143.7,140.2,133.1,132.7,129.2,129,128.7,127.7,127.6,127.1,126.8,126.5,48.5,40.3,39.1,26.5,11.9ppm；HRMS:测得m/z396.1417(理论：396.1417)。
2-乙基3-[4-(N-((4-氟)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(7c)。产率：0.05g(50％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.68-6.91(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.43(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.89-2.69(m,2H,Ph1-CH2),2.54-2.44(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.62-1.41(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),0.86(t,J＝7.4,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):177.6,168.7,163.7,160.5,143.9,135,135,132.1,129.1,129,129,127,114.9,114.6,49.1,42.4,37.6,25,10.6ppm；HRMS:测得m/z 330.1503(理论：330.15)。
2-乙基3-[4-(N-((4-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(8c)。产率：0.05g(53％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.7-7.1(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.61(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.03-2.82(m,2H,Ph1-CH2),2.66-2.56(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.76-1.53(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),0.99(t,J＝8.3,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):177.5,168.8,144,132.5,132.2,132.1,131.1,129.1,129,127.5,127,125,125,124.9,124.6,49,47.4,37.5,25,10.6ppm；HRMS:测得m/z 380.1467(理论：380.1468)。
2-乙基3-[4-(N-((4-三氟甲氧基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(9c)。产率：0.06g(60％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.82-7.24(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.61(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.03-2.82(m,2H,Ph1-CH2),2.66-2.56(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.76-1.53(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),0.99(t,J＝8.3,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):178,175.6,168.7,148.1,144.1,138.3,132,128.8,128.7,128.5,127,125.3,125.2,125.1,120.7,49.3,47,37.6,25,10.6ppm；HRMS:测得m/z396.1416(理论：396.1417)。
2-乙基3-[4-(N-((4-甲氧基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(10c)。产率：0.06g(62％)；1HNMR(DMSO-d6):δ12.19(s,1H,COOH),8.95(t,J＝6.7Hz,1H,Ph2-OCNH),7.86-6.91(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.45(d,J＝5.8,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.78(s,3H,Ph2-O-CH3),2.96-2.77(m,2H,Ph1-CH2),2.63-2.6(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.64-1.49(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),0.93(t,J＝7.6,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):176.4,166.4,158.6,143.6,132.8,132.2,129.1,129,127.6,127,125.3,125.2,125.1,114.1,55.5,42.4,40.8,37.5,25.1,11.9ppm；HRMS:测得m/z 342.17(理论：342.17)。
2-乙基3-[4-(N-((4-氯)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(11c)。产率：0.05g(50％)；1H NMR(DMSO-d6):δ12.13(s,1H,COOH),8.97(t,J＝6Hz,1H,Ph2-OCNH),7.83-7.27(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.53(d,J＝6.4,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.9-2.71(m,2H,Ph1-CH2),2.57-2.52(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.58-1.43(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),0.88(t,J＝7.1,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):176.4,166.7,146.6,143.9,132.4,132.4,129.6,129.2,129.1,128,127.7,125.2,125.1,121.1,48.5,39.4,37.5,25.1,11.9ppm；HRMS:测得m/z346.1206(理论：346.1205)。
2-乙基3-[4-(N-((4-苯氧基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(12c)。产率：0.03g(30％)；1HNMR(甲醇-d3):δ7.69-6.82(m,13H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.44(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.89-2.69(m,2H,Ph1-CH2),2.54-2.44(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.62-1.41(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),0.85(t,J＝7.6,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):177.5,168.6,157.4,156.4,133.9,132.4,132.2,129.4,128.8,128.7,127,126.9,126.8,125.3,123.1,122.9,121.5,118.5,118.3,118,47.6,42.2,37.5,25,10.6ppm；HRMS:测得m/z 404.1858(理论：404.1856)。
2-乙基3-[4-(N-(4-氟(2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(13c)。产率：0.05g(50％)；1H NMR(甲醇-d3):δ7.84-7.18(m,7H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.64(s,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.91-2.71(m,2H,Ph1-CH2),2.55-2.45(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.64-1.42(m,2H,Ph1-CH2-CH-CH2),0.86(t,J＝7.6,3H,CH-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(甲醇-d3):177.5,168.9,159.7,144.8,143.1,133.1,131.8,131,131,128.8,127.1,118.8,118.6,112.9,112.9,60,46.7,37.5,25,10.6ppm；HRMS:测得m/z 398.137(理论：398.1374)。
2-乙基3-[4-(N-(4-甲氧基(2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(14c)。产率：0.7g(79％)；1H NMR(DMSO-d6):δ12.15(s,CH2-CH-COOH),8.97(t,J＝5.6Hz,1H,Ph2-OCNH),7.87-7.2(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.58(d,2H,J＝5.5,Ph1-OCNH-CH2),3.81(s,3H,Ph2-O-CH3),2.94-2.72(m,2H,CH2-CH-CH2),2.9-2.72(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.57-1.46(m,Ph1-CH2),0.9(t,J＝7.5Hz,CH-CH2-CH3)ppm.13C-NMR(DMSO-d6):176.8,166.8,158.5,144.3,132.4,130.8,129.6,129.3,128,127.8,127.4,126.5,122.8,118.2,112.1,56.3,50.5,48.4,37.5,25.1,11.8ppm；HRMS:m/z 410.1572(理论：410.1573)。
2-乙基3-[3-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(15c)。产率：0.06g(60％)；1H NMR(DMSO-d6):δ12.15(s,COOH),9.13(t,J＝5.5Hz,1H,Ph2-OCNH),7.85-7.43(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.72(d,2H,J＝5.1Hz,Ph1-OCNH-CH2),2.99-2.78(m,2H,CH2-CH-CH2),2.66-2.6(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.66-1.5(m,Ph1-CH2),0.95(t,J＝7.3Hz,CH-CH2-CH3)ppm.13C-NMR(DMSO-d6):176.5,167,140.5,138.2,134.4,133.1,132.4,128.7,128.7,128.2,127.7,126.2,126.1,125.6,122.8,48.7,39.4,37.6,25.1,11.9ppm,HRMS:测得m/z380.1473(理论：380.1468)。
3-[4-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(16c)。产率：0.05g(50％)；1H NMR(DMSO-d6):δ12.21(s,1H,COOH),9.04(t,J＝6.8Hz,1H,OCNH),7.86-7.34(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.65(d,J＝5.6Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.88(t,J＝8,2H,Ph1-CH2),2.57(t,J＝8.6Hz,2H,Ph1-CH2-CH2)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):174,166.7,145,138.3,135.4,133.1,132.2,129.7,129.1,128.8,127.8,126.3,125.5,125.4,123.4,50.7,39.8,35.5ppm；HRMS:测得m/z 352.1156(理论：352.1155)。
2-甲基3-[4-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(17c)。产率：0.05g(50％)；1H NMR(DMSO-d6):δ12.17(s,1H,COOH),9.04(t,J＝6.2Hz,1H,OCNH),7.86-7.3(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.65(d,J＝6.6Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),3-2.9(m,1H,Ph1-CH2-CH),2.73-2.64(m,2H,Ph1-CH2),1.05(d,J＝6.4,3H,CH2-CH-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):177.1,166.7,143.9,140.5,133.2,132.4,131.5,129.4,129.3,128.6,127.7,126.5,125.4,125.4,124.8,50.7,40.8,39.1,17.2ppm；HRMS:测得m/z 366.1314(理论：366.1312)。
2-丙基3-[4-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(18c)。产率：0.02g(20％)；1H NMR(DMSO-d6):δ12.47(s,1H,CCOH),9.04(t,J＝4.7Hz,1H,OCNH),7.85-7.29(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.65(d,J＝5.5Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.91-2.71(m,2H,Ph1-CH2),2.65-2.45(m,1H,Ph1-CH2-CH),1.59-1.2(m,4H,Ph1-CH2-CH-CH2+CH2-CH-CH2-CH2),1.35-0.85(t,J＝7.1Hz,3H,CH-CH2-CH2-CH3)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):176.6,167.1,144,138.4,133.2,132.4,131.5,129.4,129.2,128.1,127.7,126.2,125.9,125.4,124.9,38,34.6,34.1,20.3,14.5ppm；HRMS:测得m/z 394.1623(理论：394.1625)。
2-苯基3-[4-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丙酸(19c)。产率：0.2g(16％)；1H NMR(DMSO-d6):δ12.47(s,1H,COOH),9.08(t,J＝6.9Hz,1H,OCNH),7.87-7.27(m,13H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+CH2-CH-Ph4),4.7(d,J＝5.4Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.45-3.05(m,2H,Ph1-CH2),4(t,J＝7.8,1H,Ph1-CH2-CH)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):174.7,166.9,143.7,139.4,138.2,138.1,133.2,132.2,129.3,128.8,128.6,128.3,127.7,127.7,127.7,126.6,126.5,126.6,126.2,126.1,125.7,125,124.6,52.7ppm；HRMS:测得m/z 428.1465(理论：428.1468)。
(E)-N-甲氧基-N-甲基3-[4-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丁-2-烯酰胺(20)。在氩气气氛下，将1.3g(3.6mmol)N-甲氧基-N-甲基(三苯基亚正膦基)乙酰胺加入1g(3.3mmol)4-甲酰基-N-(2-(三氟甲基)苄基)苯甲酰胺(1)的20ml氯仿溶液中。16小时候，减压蒸发溶剂。通过快速色谱用1:1比例的EE/Hex溶剂混合物纯化粗产物。残留的白色固体为纯产物。产率：0.6g(47％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.2(t,J＝5.8Hz,1H,Ph1-OCNH),8-7.2(m,10H,OCNH-Ph1+OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH+Ph1-CH-CH),4.7(d,J＝5.4Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.78(s,3H,OCN-O-CH3),3.25(s,3H,OCN-CH3)ppm.MS-ESI:m/z 393[M+H+]。
N-甲氧基-N-甲基3-[4-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]环丙烷羧酰胺(21)。在氩气气氛下，将97mg(2.55mmol)NaH分小份加入561mg(2.6mmol)三甲基碘化锍的3.15ml无水DMSO溶液中。搅拌反应混合物1小时后，注入500mg(1.3mmol)(E)-N-甲氧基-N-甲基3-[4-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]丁-2-烯酰胺(20)的1.05ml无水DMSO溶液。6小时后，用10ml饱和的NH4Cl溶液淬灭反应。用5ml DCM提取产物3次。合并有机层用4ml盐水洗涤一次，并用MgSO3干燥。减压去除溶剂。从EE/Hex混合物中重结晶纯产物，呈白色固体。产率：0.62g(60％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.06(t,J＝5.4Hz,1H,OCNH),7.88-7.31(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.67(d,J＝5.4Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),3.66(s,3H,OCN-O-CH3),3.16(s,3H,OCN-CH3),2.57-2.36(m,2H,Ph1-CH+Ph1-CH-CH),1.54-1.4(m,2H,Ph1-CH-CH2)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):167.4,143.8,135.7,130.8,130.6,126.9,126.4,126.2,126.1,125.7,124.6,124.3,123,122.3,122,38.5,37.4,32,27.8,24,20.6ppm；HRMS:测得m/z 407.1578(理论:407.1577).
2-[4-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]环丙烷羧酸(22)。将3ml KOH溶液(10％)添加到100mg(0.25mmol)N-甲氧基-N-甲基3-[4-(N-((2-三氟甲基)苄基)苯甲酰胺)]环丙烷羧酰胺(21)的3ml EtOH溶液中。反应混合物回流24小时。从反应溶液减压移除EtOH，并用DEE洗涤留存水性溶液三次。水性溶液pH用12M HCl溶液调整至1。沉淀出纯白色产物，并通过过滤收集。产率：0.05g(55％)；1H NMR(DMSO-d6):δ12.27(s,1H,COOH),8.99(t,J＝5.4Hz,1H,OCNH),7.8-7.2(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.59(d,J＝5.5Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2),2.3-2.4(m,1H,Ph1-CH),1.86-1.8(m,1H,Ph1-CH-CH),1.44-1.31(m,2H,Ph1-CH-CH2)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):173.7,166.2,144.2,137.7,137.1,132.6,132.2,131.8,128.1,128,127.4,127.3,125.9,125.9,125.8,39.7,37.4,25.1,24.5ppm；HRMS:测得m/z364.1158(理论：364.1155)。
4-[N-(2-(三氟甲基)苄基))苯甲酰胺]-(E)-4-甲基(邻-(苄基羟基)亚胺)(23)。将250mg(0.8mmol)4-甲酰基-N-(2-(三氟甲基)苄基)苯甲酰胺(1)、195mg(1.2mmol)邻-苄基羟胺盐酸盐和213μL(1.2mmol)DIPEA溶解于4ml MeOH，并搅拌12小时。减压蒸发溶剂，并从EE/Hex混合物重结晶粗产物。残留的白色固体为纯产物。产率：0.25g(74％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.17(t,J＝5.5Hz,1H,OCNH),8.37(s,1H,Ph1-CH),7.98-7.29(m,13H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-CH-N-O-CH2-Ph5),5.2(s,2H,Ph1-CH-N-O-CH2),4.65(d,J＝5.7Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):166,137.4,135,135,132.7,131.5,128.6,128.4,128.3,128.2,127.9,127.6,127.4,127.3,126.8,126.6,126.3,126.1,126,125.9,125.7,125,124.6,50ppm；HRMS:测得m/z 413.1473(理论:413.1471)。
制备化合物25&26的一般过程，使用4-[N-(2-(三氟甲基)苄基))苯甲酰胺]-(1,1'-联苯)-4-酸(25)为例。将250mg(1.5mmol)4-羧基苯硼酸、555mg(1.4mmol)4-碘代-[N-(2-(三氟甲基)苄基))苯甲酰胺](24)、9.2mg(0.04mmol)钯(II)乙酸盐和568mg(4.1mmol)K2CO3溶解在1:1比例的丙酮/H2O混合物中。反应在65℃搅拌1小时。然后混合物过滤通过硅藻土，并减压蒸发丙酮。用12M HCl溶液酸化水层后，产物沉淀。留存白色固体，无需进一步纯化。产率：0.36g(66％)；1H NMR(DMSO-d6):δ13.03(s,1H,COOH),9.21(t,J＝6.1Hz,1H,OCNH),8.09-7.48(m,12H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-Ph7),4.71(d,J＝5.5Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):167,166,162.4,143.2,142.1,141.8,137.9,134.7,133.5,132.7,130.2,130,128.9,128.2,127.4,127.3,127.1,127.1,127,125.1,125,48.1ppm；HRMS:测得m/z 400.1156(理论：400.1155)。
4-[N-(2-(三氟甲基)苄基))苯甲酰氨]-(1,1'-二苯基)-3-羧酸(26).得率：0.37g(67％)；1H NMR(DMSO-d6):δ13.08(s,1H,COOH),9.14(t,J＝5.7Hz,1H,OCNH),8.2-7.39(m,12H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2+Ph1-Ph7),4.63(d,J＝5.5Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):168.1,166,144,143.1,142.1,140.8,136.8,134.8,133.4,132.9,130,130,128.8,128.1,127.7,127.5,127.1,126.1,126,125.1,124,49.1ppm；HRMS:测得m/z400.1155(理论：400.1155)。
[N-(2-(三氟甲基)苄基)苯甲酰胺]-4-(1H-四唑)(28)。100mg(0.3mmol)4-氰基-[N-(2-(三氟甲基)苄基))苯甲酰胺](27)、43mg(0.7mmol)NaN3和23mg(0.4mmol)NH4Cl在氩气气氛下溶解于2ml无水DMF中，并在150℃搅拌12小时。在反应混合物到达室温后，加入1mlH2O。向水层加入12M HCl溶液，产物沉淀。过滤收集浅黄色固体，其不在需要进一步纯化。产率：0.11g(92％)；1H NMR(DMSO-d6):δ9.35(t,J＝5.6Hz,1H,OCNH),8.25-7.54(m,8H,OCNH-Ph1+Ph1-OCNH-CH2-Ph2),4.76(d,J＝5.6Hz,2H,Ph1-OCNH-CH2)ppm；13C-NMR(DMSO-d6):166.6,160.3,137.9,136.9,135.5,132.7,132.3,129.2,128.6,128.2,127.7,127.2,126.7,125.5,125.1,125,48.2ppm；HRMS:测得m/z 348.1067(理论：348.1067)。
sEH活性试验
通过96孔模式的荧光试验系统确定化合物的IC50值。非荧光PHOME(3-苯基-氰基-(6-甲氧基-2-萘基)甲酯-2-环氧乙烷-乙酸，卡曼化学品公司(Cayman Chemicals))用作底物，其可以被sEH水解成荧光6-甲氧基萘醛112。可用Tecan Infinite F200Pro酶标仪对产物的形成进行测量
Figure BDA0001585995500000631
该试验按照相关文献进行67。因此，重组人sEH 90(2μg/well)含于pH 7的Bis-Tris缓冲液中，其中含0.1mg/ml BSA，含最终浓度0.01％Triton-X 100。室温下，100μl的蛋白质与不同浓度的化合物(DMSO，最终浓度1％)孵育30分钟。此后，添加10μl的底物(最终浓度50μM)。测量水解底物30分钟(每分钟一个点)。排除空白对照(无蛋白质并且无化合物)以及阳性对照(无化合物)。所有测量都重复三次。
PPAR活性试验113。
细胞培养
COS-7细胞(PPAR)在补充有10％胎牛血清(FCS)、1％丙酮酸钠(SP)和1％青霉素/链霉素(PS)的高葡萄糖DMEM中于37℃和5％CO2生长。在辅助信息中显示了PPAR反式活化所使用的质粒。
PPAR反式活化试验
转染前一天，将COS-7细胞以30,000细胞/孔的密度接种到96孔板。瞬时转染使用脂质体LTX试剂(美国加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司(Invitrogen))进行，根据生产商的方案，对各种PPAR亚型，相应使用pFR-Luc(司查塔基公司(Stratagene))、pRL-SV40(普洛麦格公司(Promega))和Gal4-融合受体质粒(pFA-CMV-hPPAR-LBD)。转染后5小时，将培养基换成没有酚红和10％FCS的DMEM，其中补充有1％SP、1％PS和1％L-谷胺酰胺，现在还另外包含0.1％DMSO加各测试化合物或仅0.1％DMSO作为无处理的对照。每个浓度进行3个孔的重复测试，每个实验独立地重复至少三次。与测试化合物孵育过夜后，根据生产商的方案，使用Dual-GloTM荧光素酶检测系统(普洛麦格公司)对细胞进行荧光素酶活性试验。用Infinite m200光度计(Tecan Deutschland GmbH)测量发光。每个化合物浓度进行3个孔的重复测试。转染效率和细胞生长的标准化为萤火虫荧光素酶数据除以海肾荧光素酶数据得相对光单位。除以DMSO对照得活化因数。用SigmaPlot 2001(德国埃克拉特Systat软件有限公司(Systat Software GmbH))采用四参数逻辑回归由至少三个测定的平均值计算EC50和标准偏差值。所有的化合物通过将各自所得最大效果与参照化合物(吡格列酮对应PPARγ、GW7647对应PPARα、并且L165041对应PPARδ，各自使用1μM)的进行比较来进行评估。数据表示为平均值±SE；n≥3。
WST-细胞毒性试验。
在用化合物处理后，使用WST-1试验(德国曼海姆罗氏诊断有限公司(RocheDiagnostic GmbH))确定细胞活力。为此，将Hela和HepG2细胞以1x 104/孔的密度各自接种到96孔板，细胞含于含酚红和10％FCS的DMEM。24小时候，更换培养基。添加含10％FSC的新鲜DMEM，并用化合物处理细胞48小时。根据生产商的方案，使用酶标仪(infinity M200，德国克赖尔斯海姆Tecan集团有限公司(Tecan Group Ltd.))测定细胞活力。所有实验都至少重复三次。
水溶性近似估算
将含0.01％聚山梨酯20(吐温)的pH 7.4的PBS与测试化合物的1％DMSO溶液在96孔透明平底微量滴定板中结合。用Tecan Infinite 200(瑞士门内多夫Tecan集团有限公司)在650nm测量化合物的沉淀。
大鼠肝微粒体中的体外药物代谢
在100％DMSO中制备测试化合物(1mM)的溶液。432μl磷酸缓冲液(0.1M,pH 7.4)以及50μl NADPH-再生系统(30mM葡萄糖-6-磷酸,4U/ml葡萄糖-6-磷酸脱氢酶,10mM NADP,30mM MgCl2)和5μl的对应的测试化合物在37℃预孵育。测试化合物的最终浓度是10μM。5分钟后，通过添加13μl来自Sprague-Dawley大鼠肝脏的微粒体混合物(
Figure BDA0001585995500000641
德国达姆施塔特；0.1M磷酸盐缓冲液中20mg蛋白质/ml)开始反应。孵育在37℃振动型恒温水浴中进行。在0、15、30和60分钟添加500μl冰冷甲醇终止反应。样品以10 000g在4℃离心5分钟。分析上清液并通过HPLC定量。始终进行对照样品操作以检查反应混合物中化合物的稳定性。第一个对照是无NADPH，NADPH是微粒体酶活性所需要的。第二个对照是含失活的微粒体(90℃孵育20分钟的微粒体)。第三个对照是没有测试化合物(以确定基线)。使用7-乙氧基香豆素(1mM)作为阳性对照。在试验条件下，对照化合物的最终浓度还是10μM。测试化合物的量通过外部校准曲线定量。
小鼠3T3-L1细胞的分化
3T3-L1细胞在包含10％新生小牛血清的DMEM中在37℃、5％CO2加湿气氛中次培养。根据Zebisch等114的方法，细胞在14天分化成脂肪细胞。简言之，将细胞接种到6孔板(2.5x 106/孔)。在第3天，将1μg/ml胰岛素、0.25μM地塞米松和0.5mM异丁基甲基黄嘌呤添加到补充用10％胎牛血清的DMEM中启动分化。在第5天，用只包含胰岛素的培养基替换培养基，然后再培养两天。之后，在无添加的基础培养基中维持细胞，用于脂滴积累，直到第15天。罗格列酮(2μM)和N-环己基-N′-(碘苯基)脲(CIU)(10μM)分别用作PPARγ和sEH阳性对照。3T3-L1细胞的分化通过油红O染色确认。用PBS清洗细胞，并随后在甲醛溶液(PBS中4％)固定60分钟。此后，用60％异丙醇漂洗细胞，并用油红O溶液(0.3％)孵育120分钟。
定量聚合酶链反应(qPCR)
用
Figure BDA0001585995500000651
试剂(Ambion，美国卡尔斯巴德生命技术公司(Life Technologies))裂解3T3-L1细胞或小鼠组织匀浆，并照制造商的方案分离mRNA。使用DNA酶(DNA酶I，不含RNA酶的试剂盒；美国沃特汉姆市赛默飞世尔公司)消化DNA污染物，并且用NANODROP2000分光光度计(美国沃特汉姆市赛默飞世尔公司)测量mRNA浓度。随后，使用高容量RNA到cDNA试剂盒(美国福斯特城应用生物系统公司(Applied Biosystems))进行逆转录。通过StepOnePlus实时PCR系统(美国福斯特城应用生物系统公司)，使用针对GLUT-4、FABP-4、LPL、脂联素和CD36的特异性引物(在辅助信息中显示)进行PCR。NoNo(3T3-L1)和β-肌动蛋白(小鼠组织)用作参照基因。所有的样品进行三次测量，并用ΔΔCT方法分析。
两个小鼠PK研究均由Pharmacelsus有限公司(德国萨尔布吕肯)进行并在辅助信息中描述，Pharmacelsus有限公司是一个商业研究组织。sEH PD数据通过LC/MS-MS测定环氧二十碳三烯酸(EET)及其代谢产物二羟基环氧二十碳三烯酸(DHET)来获取115。使用的方法和仪器细节在辅助信息中描述。
缩写
ABCA1，ATP结合盒转运蛋白1；ADME，吸收、分布、代谢和排泄；AMI，急性心肌梗塞；aP2，人脂肪细胞脂肪酸结合蛋白；ASCVD，动脉硬化性心血管疾病；ATP，三磷酸腺苷；AUC 0→∞，浓度-时间曲线下面积，外推至无穷大；bis-tris，2-[双(2-羟乙基)氨基]-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇；-Br，溴取代基；BSA，双(三甲基硅烷基)乙酰胺；Bw，体重；CD36，脂肪酸位移酶；-CH3，甲基取代基；CIU，N-环己基-N′-碘苯基脲；-Cl，氯取代基；Cl/f，机体总清除率(标准化为生物利用度)；C最大，最大浓度；CNS，中枢神经系统；compd.，化合物；COS7，CV-1(猿)来源，并且携带SV40遗传物质；CVD，心血管疾病；DCM，二氯甲烷；DEE，二乙醚；DHET，二羟基环氧二十碳三烯酸；DIPEA，二异丙基乙胺；DMAP，4-二甲基氨基吡啶；DMEM，杜尔贝克改性培养基(dulbecco's Modifizierte Medien)；；DMF，二甲基甲酰胺；DMSO-d6，氘代二甲基亚砜；DNA，脱氧核糖核酸；EC50，半最大有效浓度；EDC，1-乙基-3-(3-二甲基丙基)碳化二亚胺；EE，醋酸乙酯(ethylacetat)；EET，环氧二十碳三烯酸；E最大-％，以百分比表示的最大活化；EPC，内皮祖细胞；ESI，电喷射离子化；EtOH，乙醇；-F，氟取代基；FABP4，脂肪酸结合蛋白4；FATP，脂肪酸转运蛋白；FCS，肽牛血清；FFA，游离脂肪酸；FFA1/GPR40，游离脂肪酸受体1；GLUT-4，葡萄糖转运蛋白4型；GSIS，葡萄糖激发的胰岛素分泌；GSK1997132B，(R)-1-((3,5-二氟吡啶-2-基)甲基)-2-甲基-N-(1-苯基丙基)-1H-苯并[d]咪唑-5-甲酰胺；GSK2188931B，(N-({4-溴-2-[(三氟甲基)氧]苯基}甲基)-1-[4-甲基-6-(甲基氨基)-1,3,5-三嗪-2-基]-4-哌啶甲酰胺)；GW7647，2-(4-(2-(1-环己基丁基)-3-环己基脲基)乙基)-苯基-巯基)-2-甲基-丙酸；-H，氢取代基；H2O，水；HCl，盐酸；HDL，高密度脂蛋白；HDL-C，高密度脂蛋白胆固醇；HepG2，肝细胞癌；Hex，己烷；HMG CoA，3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A；HPLC，高效液相色谱法；HRMS，高分辨质谱；i.a.，失活的；IBCF，异丁基氯甲酸酯；IC50，半最大抑制浓度；K2CO3，碳酸钾；KCL，(S)-2-(4-甲氧基-3-((4-(三氟甲基)苄基)氨甲酰基)苄基)丁酸；KOH，氢氧化钾；L165041，[4-[3-(4-乙酰基-3-羟基-2-丙基苯氧基)丙氧基]苯氧基]乙酸；LBD，配体结合域；LC-MS，液相色谱–质谱；LC-MS/MS，液相色谱–质谱/质谱；LDL-C，低密度脂蛋白胆固醇；LPL，脂蛋白脂肪酶；M，摩尔；m/z，质荷比；MALDI，基质辅助激光解吸/电离；Me3SO+I-，三甲基氧化锍碘；MeOH，甲醇；甲醇-d3，氘代甲醇；MetS，代谢综合症；MgCl2，氯化镁；MgSO4，硫酸镁；mRNA，信使核糖核酸；MW，微波；n.t.，未测试；NADPH，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐；NaH，氢化钠；NaN3，叠氮化钠；NaOH，氢氧化钠；NH4Cl，氯化铵；NMR，核磁共振谱；-OCF3，三氟甲氧基取代基t；-O-CH3，甲氧基取代基；-O-苯基，氧苯基取代基；p.o.，口服；P/S，青霉素/链霉素；PBS，磷酸盐缓冲液体系；Pd(AcO)2，乙酸钯(II)；PEPCK，磷酸烯醇式丙酮酸-羧化激酶；PHOME，(3-苯基-氰基-(6-甲氧基-2-萘基)甲酯-2-环氧乙烷-乙酸；PK/PD，药代动力学/药效学；PPAR，过氧化物酶体增殖物激活受体；PPARα，过氧化物酶体增殖物激活受体α；PPARγ，过氧化物酶体增殖物激活受体γ；qPCR，实时聚合酶链反应；RCT，反向胆固醇运输；RP，反相；RXR，类视色素(retionid)X受体；SAR，结构活性关系；sEH，可溶性环氧化物水解酶；sEH-KO，sEH敲除；SHROB，自发性高血压肥胖；SP，丙酮酸钠；STZ，链脲佐菌素；T2D，2型糖尿病；t-AUCB，反式-4-[4-(3-金刚烷-1-基-脲基)-环己氧基]-苯甲酸；TG，甘油三酸酯；THF，四氢呋喃；TLC，薄层色谱法；t最大，达到最大浓度的时间；TNFα，肿瘤坏死因子α；TZD，噻唑烷二酮；UV，紫外线；Vz/f，分布体积(标准化为生物利用度)；w.s.，水溶性；WAT，白色脂肪组织；WST-1，水溶性四唑鎓/(4-[3-(4-碘苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-5-四唑基]-1,3-苯基-二磺酸盐).
其它材料和方法
a.用于PPAR反式活化试验中的质粒
Gal4-融合受体质粒pFA-CMV-PPARα-LBD、pFA-CMV-PPARδ-LBD和pFA-CMV-PPARγ-LBD分别包含各PPAR亚型的配体结合结构域(LBD)和铰链区，如下构建(已发表)：将人单核细胞PCR扩增所得cDNA片段整合到pFA-CMV载体的SmaI/XbaI切割位点(司查塔基公司，美国加利福尼亚州拉荷亚)。cDNA片段分别由PPARα、PPARδ和PPARγ的bps 499-1407(NM_005036)、bps 412-1323(NM_006 238)和bps 610-1518(NM_015 869)构成。融合受体的框架和序列通过测序进行验证。将pFR-Luc(司查塔基公司)用作报告质粒，并将pRL-SV40(洛麦格公司)用于转染效率和细胞生长的标准化。
b.人前脂肪细胞的分化，RNA分离和分析
原代人前脂肪细胞的制备和分化
人原代前脂肪细胞获得自接受选择性整容手术的匿名志愿者的皮下脂肪的基质血管部分。37℃恒定摇动下，用胶原酶溶液(0.3U/ml，在1％BSA/PBS中)消化脂肪组织45分钟。移除漂浮的成熟脂肪细胞，并将包含基质血管部分的团块重悬在红细胞裂解缓冲液中。经由100μm、70μm和40μm细胞滤器连续过滤后，将前脂肪细胞接种到补充有10％FCS、33μM生物素和17μM泛酸的MEM/Ham’s F12(1:1)营养混合物。次日，将培养基换成QuickDiff培养基(补充有33μM生物素、17μM泛酸、0.01mg/ml转铁蛋白、20nM胰岛素100nM皮质醇、200pM T3、25nM地塞米松、250μM IBMX和2μM罗格列酮的DMEM/Ham’s F12)。4天后，将培养基换成3FC培养基(无地塞米松、IBMX和罗格列酮的QuickDiff培养基)。对脂肪细胞再进行14天的培养，然后将培养基换成基础培养基，所述基础培养基由无生物素和泛酸的DMEM/Ham’s F12构成。本项研究符合赫尔辛基宣言中的道德原则，并得到大学伦理委员会(美因河畔法兰克福歌德大学医学院伦理委员会(Ethik-Kommission des Fachbereichs Medizin der derGoethe-
Figure BDA0001585995500000681
am Main))的批准。根据生产商的说明，使用PeqGold RNAPure(Peqlab)分离总RNA，并且根据生产商的说明，使用Maxima第一链cDNA合成试剂盒(赛默飞世尔科技公司)转录为cDNA。使用CFX96(伯乐公司)系统，用iQ SYBR green Supermix(伯乐公司(Bio-Rad))进行定量PCR。相对于肌动蛋白RNA对表达进行标准化。
c.体内PK研究
po PK小鼠研究
本研究中使用了9只雄性RjOrl:Swiss(CD-1)小鼠(体重为28-42g，购自法国Janvier实验室)。将动物置于控温室内(20-24℃)，并保持在12h光照/12h黑暗循环中。随意获取水和食物。在两个不同研究中，分别管饲30mg/kg体重的化合物1b和1c，以及0.5％甲基纤维素，注射体积为10ml/kg。施用试验品后15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时和8小时采集血样，施用载剂的则仅在8小时后采集血样。经药物处理的各小鼠进行两次眼球后穿刺采样(0.25和0.5小时、1和2小时，4和8小时)。血液收集于包含肝素锂的试管，储存于冰上，随后在4℃以6000rpm离心10分钟(贺力氏(Heraeus)biofuge fresco)。血浆在取样后45分钟内制备，并在-20℃保存直到进行试验。为了进一步的动力学和动态分析，在经药物处理的各小鼠第二次血浆取样后，收集用药后30分钟、2小时和8小时的组织(脑、肝、腹部脂肪)。载剂组只在用药后8小时进行一次组织取样。将40μl体积包含内标(300ng/ml安定)的乙腈添加到20μl的小鼠血浆样品、血浆校准标准品和血浆QC样品。剧烈摇晃样品，并在20℃以6000g进行10分钟的离心。用水1:1稀释不含颗粒的上清液。将等分试样转移到200μl取样瓶，随后用20μl的注射体积进行LC MS。使用Precellys 24/双均质器(Dual homogenizer)将脑样品在PBS(1+1,w/v)中匀化。将20μl体积的脑匀浆(1+1v/v/)与20μl的小鼠空白血浆混合。然后添加包含内标(300ng/ml安定)的80μl乙腈。剧烈摇晃样品，并在20℃以6000g进行10分钟的离心。用水1:1稀释不含颗粒的上清液。将等分试样转移到200μl取样器瓶，随后用20μl的注射体积进行LC MS。在TSQ Quantum Discovery Max三重四极杆质谱仪上进行质谱，所述质谱仪配备有电喷雾(electrospray)(ESI)界面(美国赛默飞世尔科技公司)，并连接运行标准软件Xcalibur2.0.7的PC。设定HPLC泵流速为600μl/分钟，并且将试验品在带有前置柱的Kinetex苯基-己基、2.6μm、50x2.1mm(德国菲罗门公司(Phenomenex))分析柱上进行分离。用水/0.1％甲酸作为水相(A)并用乙腈/0.1％甲酸作为有机相(B)进行梯度洗脱：％B(t(分钟))，5(0-0.1)-97(0.8-1.7)-5(1.8-2.5)。
2周饮水PK小鼠研究
本研究中使用了9只雄性C57BL/6JRj小鼠(体重为23-27g，购自法国Janvier实验室)。将动物置于控温室内(20-24℃)，并保持在12h光照/12h黑暗循环中。随意获取水和食物。14c不溶于纯饮用水。因此，本研究中不同的时间段使用不同的助溶剂。通过将283.4mg14c溶解在94.46ml乙醇中制备3mg/ml的14c母液。将10ml体积的该母液加入饮用瓶中的190ml自来水中以获得0.15mg/ml最终浓度(估测目标剂量为30mg/kg)。从第1天下午到第5天下午将其提供给小鼠。当在第5天从笼中移除时，未在该混合物中观察到沉淀。将100mg14c溶解在1％吐温80中制备1.5mg/ml的14c母液。由于试验品未完全溶解，混合物在37℃下进行超声处理。由于失误，将10ml所得轻微混浊悬浮液加入饮用瓶中190ml而不是90ml的自来水中，并且从第5天下午到第7天下午将其提供给小鼠。这对应仅0.075mg/ml的最终浓度(估测剂量为0.05％Tween 80中15mg/kg 14c)。当在第7天将该混合物从笼中移除时，观察到少许沉淀。对20.9.2014的1.5mg/ml的14c母液在37℃下再次进行超声处理，将体积为10ml所得轻微混浊悬浮液加入饮用瓶中的90ml自来水，并从第7天下午到第10天下午将其提供给小鼠。这对应于0.15mg/ml的最终浓度(估测剂量为0.1％吐温80中30mg/kg 14c)。当在第10天从笼中取出时，在该混合物中观察到较少的沉淀。将29.77mg 14c混合在19.85ml1％吐温80中制备1.5mg/ml新鲜的14c母液。该混合物在37℃下进行超声处理，将体积为10ml所得轻微混浊悬浮液加入饮用瓶中的90ml自来水，并从第10天下午到第14天下午将其提供给小鼠。这对应于0.15mg/ml的最终浓度(估测剂量为0.1％吐温80中30mg/kg 14c)。当在第14天从笼中取出时，在该混合物中观察到较少的沉淀。每2-4天将试验品新鲜溶解于饮用水中，并按照14天的总周期中提供给动物。每次在提供新鲜溶液之前，记录各笼的水摄入量。每次在提供新鲜溶液之前，记录各笼的水摄入量。对应的最终浓度是0.15mg/ml(估测剂量为0.1％吐温80中30mg/kg 14c)。在第7天和第10天进行血液采样，从异氟烷短暂麻醉的小鼠的球后静脉丛收集血液，并存放于包含肝素锂的试管中。血液储存于冰上，随后在4℃以6000rpm离心10分钟(贺力氏biofuge fresco)。血浆在取样后45分钟内制备，并保存在-20℃直到进行试验。14天后，对血浆和组织(完整的肝、双肾、胰腺、腹部脂肪)进行采样，用于进一步的药效研究。如上所述收集全血浆。为了收集组织，通过颈脱位法处死小鼠。将组织在液氮中速冻并储存于-80℃待分析。通过PO PK小鼠研究部分中描述的相同方法仅测定了试验品在血浆中的浓度。
d.EET/DHET比分析：通过LC/MS-MS测定环氧二十碳三烯酸(EET)及其代谢产物二羟基环氧二十碳三烯酸(DHET)。
提取样品的5.6EET、8.9EET、11.12EET、14.15EET及其脱氢代谢物含量采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进行分析。LC/MS-MS系统包括API 5500QTrap(德国达姆施塔特ABSciex公司)，其装有以负ESI模式运行的Turbo-V-source、Agilent 1200二元HPLC泵和脱气机(德国瓦尔德布龙安捷伦公司(Agilent))和配有25μL LEAP注射器(德国施普洛和弗AxelSemrau有限公司)的HTC Pal自动取样器(德国伊德斯坦因Chromtech公司)。用于质谱的高纯度氮通过NGM 22-LC/MS氮气发生器(德国埃施波恩cmc仪器公司(cmc Instruments))生成。所有物质购自美国密歇根州安娜堡的卡曼化学品公司(Cayman Chemical)。在甲醇中制备含有2500ng/ml分析物的母液。进一步稀释至0.1-250ng/ml浓度范围，由此制备环氧二十碳三烯酸和其脱氢代谢产物各自的工作标准品(Working standard)。样品提取用液-液-萃取进行。因此，将150μl的基质匀浆与20μl的内标(甲醇中均为200ng/ml浓度的5.6EET-d11、8.9EET-d8、11.12EET-d8和14.15EET-d8)的温和混合，然后用600μL的乙酸乙酯提取两次。以相似的方法制备用于标准曲线和质量控制的样品，所不同的是用150μL的PBS代替150μl的基质匀浆，并进一步加入20μL甲醇、20μL工作标准和20μL内标。以45℃的温度在温和的氮气流下移除有机相。残留物用50μL的甲醇/水/(50:50,v/v)重建，以10,000g离心2分钟并转移到玻璃瓶(德国迪伦Macherey-Nagel公司)中，然后注入LC-MS/MS。色谱分离使用GeminiNX C18柱以及前置柱(150mm×2mm内径，5μm颗粒尺寸和
Figure BDA0001585995500000711
孔尺寸，来自德国阿沙芬堡菲罗门公司(Phenomenex))。使用线性梯度，0.5ml/min流速的流动相，17.5分钟的总运行时间。流动相是A水/氨(100:0.05,v/v)和B乙腈/氨(100:0.05,v/v)。梯度在12分钟内从85％A至10％，在10％A保持1分钟。0.5分钟内，流动相变回85％A，并且保持3.5分钟进行柱平衡，以用于下一个样品。样品注入体积为20μl。采用内标法(同位素稀释质谱法)，用AnalystSoftware V 1.5.1(德国达姆施塔特应用生物系统公司(Applied Biosystems))进行定量。将分析物峰面积和内标面积的比率(y轴)相对于浓度(x轴)绘图，并且通过1/浓度2权重的最小二乘回归计算校准曲线。
e.IP1(肌醇单磷酸酯)测量的方法
细胞培养
稳定转染的Flp-InTM T-RExTM 293细胞(英杰公司)在杜尔贝克改良培养基(DMEM)中于37℃和5％CO2培养，所述DMEM中包含10％(v/v)胎牛血清(FBS)、青霉素(100U/mL)、链霉素(100μg/mL)、潮霉素B(100μg/mL)和杀稻瘟菌素(15μg/mL)。所有的实验在用1μg/mL多西环素根据生产商说明(英杰公司)诱导受体表达约18小时后进行。
IP1测量
根据生产商说明，使用
Figure BDA0001585995500000721
-IP-One试剂盒(Cisbio国际公司(CisbioInternational))通过测量肌醇单磷酸酯(IP1)的细胞内水平来评估化合物在Gq偶联的FFA1受体构建体上的活性。简言之，将10,000个受体表达细胞接种到384孔微板，并在37℃孵育20分钟。然后用激动剂刺激细胞30分钟，并且使用
Figure BDA0001585995500000722
-IP-One试剂盒以及具有665nm/620nm发射/激发滤波器的Mithras LB 940多功能酶标仪(Berthold科技公司(Berthold Technologies))对IP水平进行定量。使用GraphPad Prism软件v5.04(Graphpad软件公司(Graphpad Software))进行数据分析和非线性回归曲线拟合。
参考文献：
(1)Christiansen,E.；Due-Hansen,M.E.；Urban,C.；Grundmann,M.；Schmidt,J.；Hansen,S.V.F.；Hudson,B.D.；Zaibi,M.；Markussen,S.B.；Hagesaether,E.；Milligan,G.；Cawthorne,M.a.；Kostenis,E.；Kassack,M.U.；Ulven,T.具有低亲脂性和高口服生物利用度的高效和选择性游离脂肪酸受体1激动剂的发现(Discovery of a Potent andSelective Free Fatty Acid Receptor 1Agonist with Low Lipophilicity and HighOral Bioavailability).Journal of Medicinal Chemistry 2013,56,982–992。
实施例2：自发性高血压肥胖大鼠(SHROB)模型中的体内研究
发明人推测双重可溶性环氧化物抑制剂和PPARg激动剂RB394(即化合物14c)在自发性高血压肥胖大鼠(SHROB)中具有降低血压，降低胰岛素抗性，并预防靶器官损伤(endorgan damage)的协同作用。用RB394(10mg/kg/d，p.o.；n＝6)对SHROB进行8周的处理。SHROB血压升高，用RB394处理的SHROB血压未升高。胰岛素耐性测试显示RB394处理的SHROB组胰岛素敏感性改善。SHROB尿蛋白增加，但RB394使之显著降低。超声心动图显示RB394处理的SHROB心脏功能改善(分别参见图16、17、18、19和20)。这些结果表明RB394在心脏代谢综合症SHROB大鼠中具有有益效果。
市场上有许多药物可以用于治疗糖尿病、肥胖症、高血压和靶器官损伤(如慢性肾病和心力衰竭)。治疗糖尿病的药物包括胰岛素、二甲双胍、噻唑烷二酮类(thaizolidinediones)、二肽基抑制剂、格列奈类(megalitinides)和α葡萄糖苷酶抑制剂。去甲肾上腺素激活剂(noradrenergic agent)、苯丁胺/托吡酯和选择性5-羟色胺受体激动剂是FDA在2012年批准的用于治疗肥胖症的药物。但是，先天畸型和心动过速是苯丁胺/托吡酯的副作用。肥胖2型糖尿病中存在与“Loracaserin”相关的心脏瓣膜病风险。高血压药物包括肾素-血管紧张素系统阻断剂、利尿剂和β-阻断剂。对于慢性肾病的分析显示市场上的产品之间的竞争是微弱的。现有超过12个市售慢性肾病产品，它们效果一般，副作用严重，以至于不得不中断对人治疗。患有糖尿病、肥胖症、高血压和慢性肾病的患者还使用降脂药和抗血小板药来预防靶器官损伤和死亡。尽管在这些患者群体中使用了多药方案，但靶器官损伤的发生率仍在增加，并且这些患者群体中的死亡率仍然是严重的健康问题。基于RB394的可溶性环氧化物水解酶抑制剂/PPARg激动剂是一种独特的治疗方法，因为RB394在自发性高血压肥胖大鼠中显示出抗高血压，降低的胰岛素抗性和降低终末器官损伤的巨大前景。
RB394亦称为化合物14c。
实施例3：RB394在自发性高血压肥胖(SHROB)大鼠和ZSF1(fa-facp)大鼠中改善胰岛素抗性和糖尿病，降低血压，降低肾脏损伤。
代谢综合症(MetS)是包括高血压、高血糖、高甘油三酯血症和肥胖的症状集群。由于该综合症的复杂性，患者常常服用多种药物，继而导致药物不良相互作用风险的增加，以及用药成本增加。发明人推测研发双重调节剂(结合两种药效团的药物)能够治疗超过一种MetS症状并预防肾脏损伤。可溶性环氧化物水解酶(sEH)抑制剂和PPAR-γ激动剂对MetS具有治疗潜力。发明人合成了新型双重sEH抑制剂-PPAR-γ激动剂(sEHi/PPAR-γ)——RB394，并在MetS鼠模型中研究了其效果(参见图21)。采用了三组大鼠；第1组：WisterKyoto(WKY)+载剂(n＝6)；第2组：自发性高血压肥胖(SHROB)+载剂(n＝5)；第3组：SHROB+RB394(10mg/kg/d p.o.；n＝5)。给予RB394或载剂处理56天，测量血压，并在处理周期结束时收集尿液和肾脏组织。相较于WKY大鼠(137±5mmHg,P<0.05)，SHROB大鼠具有高血压(187±7mmHg)，而RB394显著降低SHROB大鼠的高血压(144±4mmHg,P<0.05)。肾脏损伤由蛋白尿评估，并通过对肾小管管型形成、胶原形成和肾小球损伤的过碘酸席夫(PAS)染色和天狼星红染色组织病理学分析进行评估。相较于WKY(1.0±0.1mg/d,P<0.05)，SHROB大鼠发生有明显蛋白尿(243±18mg/d)的肾脏损伤，而RB394通过减少蛋白尿(59±11mg/d,P<0.05)减轻了肾脏损伤。SHROB大鼠的肾脏具有显著增加的蛋白管型和胶原，而RB394使管型和胶原形成降低40-50％。SHROB大鼠的肾小球损伤也是显著的，RB394使其降低了45％。SHROB大鼠还有显著的肾脏炎症，其在肾脏中具有浸润的免疫细胞，而RB394将其降低20％。总之，我们的结果显示，双重sEHi/PPAR-γ，即RB394，在SHROB MetS大鼠中预防肾脏损伤。这些结果提示有望形成治疗MetS患者更有效的新方法，这是令人兴奋的。
材料和方法
动物组
威斯康星州医药大学(The Medical College of Wisconsin)实验动物管理与使用委员会(Institutional Animal Care and Use Committee)根据美国国家卫生研究院的实验动物护理和使用指南批准了所有的动物研究。8-9周龄的雄性Wistar-Kyoto(WKY)和SHROB购买自查尔斯河实验室(Charles River Laboratories)(美国马萨诸塞州威尔明顿)。动物被安置在威斯康星州医药大学的生物医学资源中心，使用12小时光照-黑暗循环，并且自由获取饮用水以及大鼠饲料。WKY大鼠(n＝6)用作对照组，作为疾病进展的比较。SHROB大鼠被分成2组。第1组接受8周载剂(n＝5)，而第2组接受8周RB394(10mg/kg/d p.o.；n＝5)。称量大鼠体重，并通过尾套体积描记法(tail-cuff plethysmography)测量收缩压。
葡萄糖耐受测试
8周处理方案期间，在通宵禁食并注射葡萄糖(2g/kg i.p.)的大鼠中进行腹膜内葡萄糖耐受测试。在葡萄糖注射之前或之后不同时间点由尾静脉收集血液样品。使用血糖仪LifeScan(美国加利福尼亚州Miltipas公司)测量尾静脉血糖浓度。
尿液和血浆生化分析
在实验期间，收集置于代谢笼24小时的大鼠的尿液。尿液生化分析使用市售ELISA试剂盒；白蛋白，来自Exocell(宾夕法尼亚州费城)。使用异氟烷麻醉大鼠并从动脉收集血浆。甘油三酯、胆固醇、蛋白质和肌酸酐试验试剂盒来自卡曼公司(美国密歇根州安娜堡)，游离脂肪酸来自Zen-Bio有限公司(北卡罗来纳州三角科技园)。使用血糖仪测量尾静脉的血糖水平。
组织病理学分析
切除肾脏，浸入10％中性缓冲福尔马林中固定并石蜡包埋。将包埋的肾脏和胰腺切成4μm切片用于组织学试验。将福尔马林固定的石蜡包埋的组织切片脱石蜡，复水，并且用过碘酸希夫(PAS)和Masson三色对肾组织切片染色。使用以下分值对用PAS染色的肾切片的肾小球硬化症和系膜区扩张进行盲测评分：0＝无损伤；+1＝非常轻微；+2＝轻微；+3＝中度和+4＝严重。两名观察者以盲测的方式在X200的放大倍数下使用尼康NIS Elements软件(美国纽约州梅尔维尔市的尼康仪器公司(Nikon instruments inc.))进行组织学分析。同样在X200的放大倍数下使用尼康NIS Elements软件在PAS染色的肾切片中测定肾中蛋白管型。由各动物8个皮层区域和5个髓质区域的平均值计算蛋白性管型阳性面积百分比。200倍放大下测定Masson三色染色肾切片中的肾纤维化。由各动物8个皮层区域和5个髓质区域的平均值计算胶原阳性面积百分比，将其作为纤维化区。由两个盲测观察者测定肾切片中肾小管管型和胶原阳性的纤维化区。用苏木精和曙红染色对胰腺切片进行染色，并且以盲测的方式在不同实验组中研究胰腺的组织学特征。
免疫组织病理学分析
将福尔马林固定的石蜡包埋的肾切片脱石蜡，复水并进行免疫组织化学检测。肾切片经抗-CD68(1:100；美国北卡罗来纳州罗利Serotec公司)免疫染色以测定肾中巨噬细胞/单核细胞浸润。生物素化的大鼠抗-小鼠二抗(1:200)用于与亲和素-生物素化的HRP复合物(Vectastain ABC Elite试剂盒，美国加利福尼亚州伯林盖姆维克多实验室公司(Vector Laboratories))显影，然后用苏木精复染，并将其固定用于成像捕获。通过光学显微镜在400x放大倍数下将染色的切片可视化，并且使用尼康NIS Elements软件(美国纽约州梅尔维尔市的尼康仪器公司)对染色的肾进行数字成像用于分析。由两位有经验的盲测观察人，通过CD68阳性细胞点计数来确定巨噬细胞/单核细胞浸润。将每图的阳性细胞数量除以成像公制面积以获得每mm2的阳性细胞数量。
结论
体重、血压、血糖、甘油三酯、胆固醇和游离脂肪酸
在基线和整个研究期间测量所有实验组的平均体重。体重、收缩压和血糖如表5所示。在8周研究结束时，相较于WKY，SHROB的体重显著较高。用RB394处理的SHROB的体重比经载剂处理的SHROB增加约40g。RB394处理组中的收缩压比经载剂处理的SHROB低约44mmHg。相较于WKY，SHROB的空腹血糖并没有升高。表格示出了针对甘油三酯、类固醇和游离脂肪酸的血浆生化分析结果。相较于正常血压的WKY组，经载剂处理的SHROB中的甘油三酯、类固醇和游离脂肪酸水平显著升高。当用RB394处理时，SHROB具有显著改善的甘油三酯。经RB394处理的SHROB组中的类固醇水平在8周处理期间降低。用RB394处理的SHROB血浆游离脂肪酸水平降低。
表5
指标 WKY+载剂 SHROB+载剂 SHROB+RB394
体重(g) 351±4 *562±7 600±8
收缩压(mmHg) 137±7 *187±9 #143±9
空腹血糖(mg/dL) 90±3 89±4 83±7
甘油三酯(mg/dL) 29±4.2 *313±50 #133±18
血清胆固醇(mM) 2.5±0.2 *10.0±0.5 #4.0±0.7
血清LDL(mg/mL) 35±3 *72±7 #44±6
游离脂肪酸(μm) 152±27 *732±121 #322±24
胰岛素抗性
相较于WKY大鼠，SHROB大鼠具有胰岛素抗性。RB394并不改变空腹血糖，但是改善了SHROB大鼠的血糖耐受。相较于WKY大鼠，SHROB大鼠也具有胰岛素抗性和高葡萄糖曲线下面积，RB394在SHROB大鼠中降低胰岛素抗性。参见图22。
肾损伤
对尿白蛋白排泄水平进行分析，以评估SHROB中肾损伤程度。相较于WKY，SHROB中白蛋白排泄显著增加，RB394降低白蛋白水平。通过对组织学切片每肾100个肾小球的抽样进行评分，进一步半定量地评价肾损伤。WKY中肾小球损伤最小，经载剂处理的SHROB则显示显著较高的肾小球损伤评分。经载剂处理的SHROB显示肾小球基底膜损伤和系膜扩增，这与白蛋白排泄速率一致。用RB394处理的SHROB显示肾小球损伤减少(参见图23)。此外，RB394显著降低肾皮质和髓质区域内的管内蛋白性管型形成(参见图24)。综上，这些发现证明RB394降低肾损伤。
肾炎症
图25表示尿MCP-1排泄和用抗-CD68免疫染色的肾切片中巨噬细胞浸润的代表性分析和照片，所述抗-CD68是在单核细胞和巨噬细胞中表达的糖蛋白。相较于WKY组，MCP-1水平在SHROB中显著升高。RB394在SHROB中降低尿MCP-1排泄。与MCP-1数据一致，相较于WKY组，SHROB载剂组的肾巨噬细胞浸润增加。用RB394处理的SHROB的巨噬细胞浸减少。这些数据表明RB394处理在SHROB中降低肾浸润。
ZSF1方法与SHROB研究相似。参见图26。高血压、糖尿病、肾损伤通过测量16周龄时ZSF1肥胖大鼠的血压、空腹血糖和尿蛋白进行验证。RB394处理在ZSF1肥胖大鼠16周龄时开始，并持续8周。示出了血压、血糖耐受和尿蛋白的原始图表。
结论
血压
ZSF1肥胖大鼠的收缩压从16周龄到24周龄升高。参见图27。RB394处理在16周龄开始，并且持续8周至24周龄。用RB394处理8周降低ZSF1肥胖大鼠收缩压。
血糖
如图28所示，相较于ZSF瘦大鼠，ZSF1肥胖大鼠在20周龄(左图)和24周龄(右图)具有升高的空腹血糖和受损的葡萄糖耐受。RB394处理在16周龄开始，并且持续8周至24周龄。RB394处理4周(左图)或8周(右图)在ZSF1肥胖大鼠中降低空腹血糖并改善葡萄糖耐受。
肾损伤-蛋白尿
如图29所示，相较于ZSF1瘦大鼠，ZSF1肥胖大鼠在16周龄具有增加的尿蛋白排泄(0WK)。在未处理的ZSF1肥胖大鼠中，尿蛋白排泄在20周龄(4WK)和24周龄(8WK)进一步增加。RB394处理始于16周龄，该处理预防ZSF1肥胖大鼠尿蛋白排泄升高。
本申请中的各参考文献通过引用全文纳入本文。虽然已经参考特定实施方式描述了本发明的概念，本领域普通技术人员将认识到可对实施方式进行各种替换和/或其他修改而不偏离本发明概念的精神。因此，前述说明是示例性的，并且不会限制本发明概念的范围。
参考文献
(1)Scott M.Grundy,H.Bryan Brewer,Jr,James I.Cleeman,Sidney C.Smith,J.和C.L.代谢综合症的定义：国家心脏、肺和血液研究所/美国心脏协会关于定义的科学问题的会议的报告(Definition of Metabolic Syndrome:Report of the National Heart,Lung,and Blood Institute/American Heart Association Conference on ScientificIssues Related to Definition).Arterioscler Thromb Vasc Biol.Journal of theAmerican Heart Association 2004,24,433–438.
(2)Antonova,P.；Jacobs,D.I.；Bojar,M.；
Figure BDA0001585995500000781
R.；Ciharová,K.；Frick,M.A.；Fintel,B.；Dehovitz,J.；Bennett,C.L.代谢综合征(The Metabolic Syndrome).thelancet 2009,375,181–183.
(3)Grundy,S.M.代谢综合症的药物治疗：最小化多重用药中出现的危险(DrugTherapy of the Metabolic Syndrome:Minimizing the Emerging Crisis inPolypharmacy).Nature reviews.Drug discovery 2006,5(4),295–309.
(4)Aydin,S.；Aksoy,A.；Suna Aydin,Mehmet Kalayci,Musa Yilmaz,T.K.；Citil,Cihan,Z.C.今日和昨日的病理生理学：代谢综合症的生物化学和动物模型(Today’Sand Yesterday’S of Pathophysiology:Biochemistry of Metabolic Syndrome andAnimal Models).Nutrition 2014,30(1),1–9.
(5)Javed,S.；Petropoulos,I.N.；Alam,U.；Malik,R.A.痛性糖尿病神经病变的治疗(Treatment of Painful Diabetic Neuropathy).Therapeutic Advances in ChronicDisease 2015,6(1)15–2,15–28.
(6)Chan,G.C.W.；Tang,S.C.W.糖尿病性肾病：里程碑意义的临床试验和困难(Diabetic Nephropathy:Landmark Clinical Trials and Tribulations).Nephrol DialTransplant 2015,1–10.
(7)Grundy,S.M.；Cleeman,J.I.；Daniels,S.R.；Donato,K.A.；Eckel,R.H.；Franklin,B.A.；Gordon,D.J.；Krauss,R.M.；Savage,P.J.；Smith,S.C.；Spertus,J.A.；Costa,F.代谢综合症的诊断和管理(Diagnosis and Management of the MetabolicSyndrome).Circulation 2006,112,285–290.
(8)National Heart Lung and Blood Institute；National Institutes ofHealth(NIH)National Heart,Lung,and Blood Institute,N.鉴定、评价和治疗承认超重和肥胖的临床指南(Clinical Guidelines on the Identification,Evaluation,andTreatment of Overweight and Obesity in Adults).The Evidence Report,NIHPublication No.98-4083.；1998；Vol.158,p 51S–209S.
(9)Buse,R.K.J.；Stern,E.F.M.代谢综合症：是时候由美国糖尿病协会和欧洲委员会做出重要的评估联合声明(The Metabolic Syndrome:Time for a CriticalAppraisal Joint Statement from the American Diabetes Association and theEuropean).Diabetologia 2005,48,1684–1699.
(10)Nawrocki,A.R.；Scherer,P.E.主题回顾：脂肪细胞作为药物发现的靶标(Keynote Review:The Adipocyte as a Drug Discovery Target).Drug DiscoveryToday 2005,10(18),1219–1230.
(11)George,M.；Rajaram,M.；Shanmugam,E.针对肥胖症的新型和新兴药物分子(New and Emerging Drug Molecules Against Obesity).Journal of CardiovascularPharmacology and Therapeutics 2013,19(1),65–76.
(12)Sp,A.；Ss,S.；Jm,W.罗素伐他汀的降脂效率(Lipid-Lowering Efficacy ofRosuvastatin)(Review).the cochrane libary 2014,No.11.
(13)Sahebkar,A.；Watts,G.F.贝特类疗法和循环脂联素浓度：随机安慰剂对照试验的非系统评价和荟萃分析(Fibrate Therapy and Circulating AdiponectinConcentrations:Asystematic Review and Meta-Analysis of Randomized Placebo-Controlled Trials).Atherosclerosis 2013,230(1),110–120.
(14)Azimova,K.；Juan,Z.S.；Mukherjee,D.目前可用的糖尿病药物的心血管安全概况(Cardiovascular Safety Profile of Currently Available Diabetic Drugs).TheOchsner Journa 2014,14,616–632.
(15)Pollare,T.；Lithell,H.；Selinus,I.；Berne,C.阿替洛尔和美托洛尔治疗期间胰岛素的敏感性：高血压患者对碳水化合物和脂蛋白代谢影响的随机、双盲研究(Sensitivity to Insulin during Treatment with Atenolol and Metoprolol:ARandomised,Double Blind Study of Effects on Carbohydrate and LipoproteinMetabolism in Hypertensive Patients).BMJ(Clinical research ed.)1989,298(April),1152–1157.
(16)Khan,M.Z.连接糖尿病和肥胖症的机制(Mechanism Linking DiabetesMellitus and Obesity).Diabetes,Metabolic Syndrom and Obesity:Targets andTherapy2014,587–591.
(17)Gustafson,B.；Hedjazifar,S.；Gogg,S.；Hammarstedt,A.；Smith,U.胰岛素抗性和受损脂肪形成(Insulin Resistance and Impaired Adipogenesis).Trends inEndocrinology&Metabolism 2015,1–8.
(18)Tran,L.；Zielinski,a.；Roach,a.H.；Jende,J.a.；Householder,a.M.；Cole,E.E.；Atway,S.a.；Amornyard,M.；Accursi,M.L.；Shieh,S.W.；Thompson,E.E.2型糖尿病的药物治疗：口服药物(The Pharmacologic Treatment of Type 2Diabetes:OralMedications).Annals of Pharmacotherapy 2015,No.119.
(19)Stumvoll,M.；Nurjhan,N.；Perriello,G.；Dailey,G.；Gerich,J.E.非胰岛素依赖性糖尿病中二甲双胍的代谢作用(Metabolic Effects of Metformin in Non-Insulin-Dependent Diabetes Mellitus).The New England journal of medicine1995,333,550–554.
(20)Beck-Nielsen,H.；Hother-Nielsen,O.；Staehr,P.肝葡萄糖生成增加2型糖尿病？(Is Hepatic Glucose Production Increased in Type 2Diabetes Mellitus？)Curr Diab Rep 2002,2,231–236.
(21)Morphy,R.；Rankovic,Z.Designed Multiple Ligands.新兴药物发现方式(An Emerging Drug Discovery Paradigm).Journal of medicinal chemistry 2005,48(21),6523–6543.
(22)Lefebvre,P.；Shankaranarayanan,P.；Lera,A.R.De；Bourguet,W.Editorial核受体治疗应用中的进展(Current Advances In Therapeutic Applications ofNuclear Receptors).Current topics in medicinal chemistry 2012,12,484–485.
(23)Tontonoz,P.；Spiegelman,B.M.Fat和beyond:PPARγ的多样性生物(TheDiverse Biology of PPAR Gamma).Annual review of biochemistry 2008,77,289–312.
(24)Chaudhary,S.；Dube,A.；Kothari,V.；Sachan,N.；Upasani,C.D.NS-1：一种新型部分过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂以改善胰岛素敏感性和代谢特征(NS-1:ANovel Partial Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Gamma Agonist toImprove Insulin Sensitivity and Metabolic Profile).European Journal ofPharmacology 2012,684,154–160.
(25)Tontonoz,P.；Nagy,L.；Alvarez,J.G.a；Thomazy,V.a.；Evans,R.M.PPARγ促进单核细胞/巨噬细胞分化和摄取氧化的LDL(PPAR Gamma Promotes Monocyte/macrophage Differentiation and Uptake of Oxidized LDL).Cell 1998,93,241–252.
(26)Tontonoz,P.；Hu,E.；Devine,J.；Beale,E.G.；Spiegelman,B.M.PPARγ调节磷酸烯醇丙酮酸激酶基因的脂肪表达(PPAR Gamma 2Regulates Adipose Expression ofthe Phosphoenolpyruvate Carboxykinase Gene).Molecular and cellular biology1995,15(1),351–357.
(27)Tontonoz,P.；Hu,E.；Graves,R.A.；Budavari,A.I.；Spiegelman,B.M.mPPARgamma2:Tissue-Specific Regulator of an Adipocyte Enhancer.Genes&Development 1994,4,1224–1234.
(28)Martin,G.；Schoonjans,K.；Lefebvre,a M.；Staels,B.；Auwerx,J.同股沟通过PPARα和PPARγ激活子协同调节脂肪酸转运蛋白和酰基辅酶A合成酶基因的表达(Coordinate Regulation of the Expression of the Fatty Acid Transport Proteinand Acyl-CoA Synthetase Genes by PPARalpha and PPARgamma Activators).TheJournal of biological chemistry 1997,272(45),28210–28217.
(29)Schoonjans,K.；Peinado-Onsurbe,J.；Lefebvre,a M.；Heyman,R.a；Briggs,M.；Deeb,S.；Staels,B.；Auwerx,J.PPARα和PPARγ激活子通过脂蛋白脂肪酶基因中的PPRE指导不同组织特异性转录应答(PPARalpha and PPARgamma Activators Direct aDistinct Tissue-Specific Transcriptional Response via a PPRE in theLipoprotein Lipase Gene).The EMBO journal 1996,15(19),5336–5348.
(30)Ken Kishida,Iichiro Shimomura,Hitoshi Nishizawa,Norikazu Maeda,Hiroshi Kuriyama,Hidehiko Kondo,Morihiro Matsuda,Hiroyuki Nagaretani,NoriyukiOuchi,Kikuko Hotta,Shinji Kihara,Takashi Kadowak,Tohru Funahashi,和Y.M.PPARγ-AQPap诱导的转录活化(PPARγ-Induced Transcriptinal Activation of AQPap).Theamerican society of Biochemistry and Molecular Biology 2001.
(31)Yamauchi,T.；Kamon,J.；Waki,H.；Terauchi,Y.；Kubota,N.；Hara,K.；Mori,Y.；Ide,T.；Murakami,K.；Tsuboyama-Kasaoka,N.；Ezaki,O.；Akanuma,Y.；Gavrilova,O.；Vinson,C.；Reitman,M.L.；Kagechika,H.；Shudo,K.；Yoda,M.；Nakano,Y.；Tobe,K.；Nagai,R.；Kimura,S.；Tomita,M.；Froguel,P.；Kadowaki,T.脂肪衍生的激素脂联素逆转与脂肪萎缩和肥胖相关的胰岛素抗性(The Fat-Derived Hormone Adiponectin Reverses InsulinResistance Associated with Both Lipoatrophy and Obesity).Nature medicine2001,7,941–946.
(32)Yamauchi,T.；Kamon,J.；Minokoshi,Y.；Ito,Y.；Waki,H.；Uchida,S.；Yamashita,S.；Noda,M.；Kita,S.；Ueki,K.；Eto,K.；Akanuma,Y.；Froguel,P.；Foufelle,F.；Ferre,P.；Carling,D.；Kimura,S.；Nagai,R.；Kahn,B.B.；Kadowaki,T.脂联素通过活化AMP活化的蛋白激酶刺激葡萄糖利用和脂肪酸氧化(Adiponectin Stimulates GlucoseUtilization and Fatty-Acid Oxidation by Activating AMP-Activated ProteinKinase).Nature medicine 2002,8(11),1288–1295.
(33)Berg,A.H.；Combs,T.P.；Scherer,P.E.ACRP30/脂联素：一种调节葡萄糖和脂质代谢的脂肪因子(ACRP30/adiponectin:An Adipokine Regulating Glucose and LipidMetabolism).Trends in Endocrinology and Metabolism 2002,13(2),84–89.
(34)Hu,E.；Liang,P.；Spiegelman,B.M.AdipoQ是一种在肥胖症中失调的新型脂肪特异性基因(AdipoQ Is a Novel Adipose-Specific Gene Dysregulated inObesity).Journal of Biological Chemistry 1996,271(18),10697–10703.
(35)Steppan,C.M.；Bailey,S.T.；Bhat,S.；Brown,E.J.；Banerjee,R.R.；Wright,C.M.；Patel,H.R.；Ahima,R.S.；Lazar,M.a.将肥胖症连接到糖尿病的激素抗性(TheHormone Resistin Links Obesity to Diabetes).Nature 2001,409,307–312.
(36)Banerjee,R.R.；Rangwala,S.M.；Shapiro,J.S.；Rich,a S.；Rhoades,B.；Qi,Y.；Wang,J.；Rajala,M.W.；Pocai,A.；Scherer,P.E.；Steppan,C.M.；Ahima,R.S.；Obici,S.；Rossetti,L.；Lazar,M.a.通过抵抗素调整禁食血糖(Regulation of Fasted BloodGlucose by Resistin).Science(New York,N.Y.)2004,303(1997),1195–1198.
(37)Leiter,L.a.β细胞保护：噻唑烷二酮类在2型糖尿病中改善临床护理的潜在作用(Beta-Cell Preservation:A Potential Role for Thiazolidinediones toImprove Clinical Care in Type 2Diabetes).Diabetic medicine:a journal of theBritish Diabetic Association 2005,22,963–972.
(38)Anny H.Xiang,Ruth K.Peters,Siri L.Kjos,Aura Marroquin,Jose Goico,Cesar Ochoa,Miwa Kawakubo,和T.A.B.吡格列酮对患有妊娠前糖尿病西班牙裔女性胰腺Β细胞功能和糖尿病风险的影响(Effect of Pioglitazone on PancreaticΒ-CellFunction and Diabetes Risk in Hispanic Women With Prior GestationalDiabetes).Diabetes 2006,55(2),517–522.
(39)Kahn,S.E.；Lachin,J.M.；Zinman,B.；Haffner,S.M.；Aftring,R.P.；Paul,G.；Kravitz,B.G.；Herman,W.H.；Viberti,G.；Holman,R.R.；Jones,N.；O’Neill,C.罗格列酮、格列苯脲和二甲双胍在ADOPT中对B细胞功能和胰岛素敏感性的影响(Effects ofRosiglitazone,Glyburide,and Metformin onΒ-Cell Function and InsulinSensitivity in ADOPT).Diabetes 2011,60(May),1552–1560.
(40)Sripalakit,P.；Maphanta,S.；Neamhom,P.；Saraphanchotiwitthaya,A.；Polnok,S.；Yokubol,D.两种吡格列酮制剂在泰国健康男性志愿者中生物等效性的比较研究(Comparative Study on the Bioequivalence of Two Formulations ofPioglitazone Tablet in Healthy Thai Male Volunteers).Drug development andindustrial pharmacy 2007,33,1362–1368.
(41)GlaxoSmithKline.文迪雅片剂—医疗指南(Avandia Tablets-MedicationGuide).2014,1–42.
(42)STEPHEN ARONOFF,SID ROSENBLATT,SUSAN BRAITHWAITE,J.W.E.盐酸吡格列酮单药治疗在治疗患有2型糖尿病的患者中改善血糖控制(Pioglitazone HydrochlorideMonotherapy Improves Glycemic Control in the Treatment of Patients With Type2Diabetes).Diabetes Care 2000,23(11),1605–1611.
(43)Lawrence S.Phillips,George Grunberger,Elizabeth Miller,R.P.罗格列酮改善2型糖尿病患者的血糖控制(Rosiglitazone Improves Glycemic Control inPatients With Type 2Diabetes).Diabetes Care 2001,24(2),308–315.
(44)Ahmadian,M.；Suh,J.M.；Hah,N.；Liddle,C.；Atkins,A.R.；Downes,M.；Evans,R.M.PPARγ信号转导和代谢：优点、缺点和未来(PPARγSignaling andMetabolism:The Good,the Bad and the Future).Nature Medicine 2013,99(5),557–566.
(45)Rohatgi,A.；McGuire,D.K.噻唑烷二酮药物对糖尿病患者微血管和大血管并发症的影响(Effects of the Thiazolidinedione Medications on Micro-andMacrovascular Complications in Patients with Diabetes-Update 2008).Cardiovascular Drugs and Therapy 2008,22,233–240.
(46)Vivian Fonseca,MD Julio Rosenstock,MD Rita Patwardhan,PhD AlanSalzman,MD,P.二甲双胍和罗格列酮联合治疗对2型糖尿病患者的作用(Effect ofMetformin and Rosiglitazone Combination Therapy in Patients With Type2Diabetes Mellitus).JAMA 2000,283(13),1695–1703.
(47)Einhorn,D.；Rendell,M.；Rosenzweig,J.；Egaq,J.W.；Mathisen,A.L.；Schneider,R.L.；Study,P.盐酸吡格列酮联合二甲双胍治疗Qpe2糖尿病：随机、安慰剂对照研究(Pioglitazone Hydrochloride in Combination with Metformin in theTreatment of Qpe 2Diabetes Mellitus:A Randomized,Placebo-Controlled Study).Clinical Therapeutics 2000,22(12),1395–1409.
(48)Lebovitz,H.E.；Dole,J.F.；Patwardhan,R.；Rappaport,E.B.；Freed,M.I.罗格列酮单药治疗对2型糖尿病患者有效(Rosiglitazone Monotherapy Is Effective inPatients with Type 2Diabetes).The Journal of clinical endocrinology andmetabolism2001,86(1),280–288.
(49)Taeye,B.M.De；Morisseau,C.；Coyle,J.；Covington,J.W.；Yang,J.；Murphy,S.B.；Friedman,D.B.；Hammock,B.B.；Vaughan,E.脂肪组织中表达和调节可溶性环氧化物水解酶(Expression and Regulation of Soluble Epoxide Hydrolase in AdiposeTissue).Obesity(Silver Spring)2011,18(3),489–498.
(50)Imig,J.D.；Hammock,B.D.可溶性环氧化物水解酶作为心血管疾病的治疗靶标(Soluble Epoxide Hydrolase as a Therapeutic Target for CardiovascularDiseases).Nature reviews.Drug discovery 2009,8(10),794–805.
(51)Huang,A.；Sun,D.；Jacobson,A.；Carroll,M.a.；Falck,J.R.；Kaley,G.环氧二十碳三烯酸涉及介导小动脉平滑肌的剪切应力依赖性超极化(EpoxyeicosatrienoicAcids Are Released to Mediate Shear Stress-Dependent Hyperpolarization ofArteriolar Smooth Muscle.)Circulation Research 2005,96,376–383.
(52)Archer,S.L.；Gragasin,F.S.；Wu,X.；Wang,S.；McMurtry,S.；Kim,D.H.；Platonov,M.；Koshal,A.；Hashimoto,K.；Campbell,W.B.；Falck,J.R.；Michelakis,E.D.人乳内动脉内皮细胞衍生的超极化因子是11,12-环氧二十碳三烯酸并通过活化平滑肌BKCa通道引起放松(Endothelium-Derived Hyperpolarizing Factor in Human InternalMammary Artery Is 11,12-Epoxyeicosatrienoic Acid and Causes Relaxation byActivating Smooth Muscle BKCa Channels).Circulation 2003,107,769–776.
(53)Todd R.Harris,Ning Li,Nipavan Chiamvimonvat,和B.D.；Hammock.可溶性环氧化物水解酶抑制在心肌肥厚治疗中的潜能(The Potential of Soluble EpoxideHydrolase Inhibition in the Treatment of Cardiac Hypertrophy).Congest HeartFail.2008,14(4),219–224.
(54)Shen,L.；Peng,H.；Peng,R.；Fan,Q.；Zhao,S.；Xu,D.；Morisseau,C.；Chiamvimonvat,N.；Hammock,B.D.小鼠中可溶性环氧化物水解酶的抑制促进逆转胆固醇运输和动脉粥样硬化的消退(Inhibition of Soluble Epoxide Hydrolase in MicePromotes Reverse Cholesterol Transport and Regression of Atherosclerosis).Atherosclerosis 2015,239,557–565.
(55)Wagner,K.；Inceoglu,B.；Dong,H.；Yang,J.；Hwang,S.H.；Jones,P.；Morisseau,C.；Hammock,B.D.3种可溶性环氧化物水解酶抑制剂在大鼠神经性和炎症性疼痛模型中的比较效率(Comparative Efficacy of 3Soluble Epoxide HydrolaseInhibitors in Rat Neuropathic and Inflammatory Pain Models).European Journalof Pharmacology 2013,700(1-3),93–101.
(56)Wagner,K.；Yang,J.；Inceoglu,B.；Hammock,B.D.可溶性环氧化物水解酶抑制在糖尿病神经病变小鼠模型中抗疼痛(Soluble Epoxide Hydrolase Inhibition IsAntinociceptive in a Mouse Model of Diabetic Neuropathy).Journal of Pain2013,1–8.
(57)Lee,K.S.S.；Liu,J.-Y.；Wagner,K.M.；Pakhomova,S.；Dong,H.；Morisseau,C.；Fu,S.H.；Yang,J.；Wang,P.；Ulu,A.；Mate,C.a；Nguyen,L.V；Hwang,S.H.；Edin,M.L.；Mara,A.a；Wulff,H.；Newcomer,M.E.；Zeldin,D.C.；Hammock,B.D.可溶性环氧化物水解酶的优选抑制剂改善体外靶标滞留时间和体内效率(Optimized Inhibitors of SolubleEpoxide Hydrolase Improve in Vitro Target Residence Time and in VivoEfficacy).Journal of medicinal chemistry 2014.
(58)Kim,J.；Yoon,S.P.；Toews,M.L.；Imig,J.D.；Hwang,S.H.；Hammock,B.D.；Padanilam,B.J.可溶性环氧化物水解酶的药理学抑制在阻塞性肾病变中预防肾间质纤维化(Pharmacological Inhibition of Soluble Epoxide Hydrolase Prevents RenalInterstitial Fibrogenesis in Obstructive Nephropathy).AJP:Renal Physiology2014,308(35),F131–F139.
(59)Liu,Y.；Zhang,Y.；Schmelzer,K.；Lee,T.-S.；Fang,X.；Zhu,Y.；Spector,A.A.；Gill,S.；Morisseau,C.；Hammock,B.D.；Shyy,J.Y.-J.层流的抗炎作用：PPARγ、环氧二十碳三烯酸和可溶性环氧化物水解酶的作用(The Antiinflammatory Effect ofLaminar Flow:The Role of PPARgamma,Epoxyeicosatrienoic Acids,and SolubleEpoxide Hydrolase).Proceedings of the National Academy of Sciences of theUnited States of America 2005,102(46),16747–16752.
(60)Xu,D.Y.；Davis,B.B.；Wang,Z.H.；Zhao,S.P.；Wasti,B.；Liu,Z.L.；Li,N.；Morisseau,C.；Chiamvimonvat,N.；Hammock,B.D.有效的可溶性环氧化物水解酶抑制剂T-AUCB通过PPARγ调节急性心肌梗塞患者内皮祖细胞的功能(A Potent Soluble EpoxideHydrolase Inhibitor,T-AUCB,Acts through PPARγto Modulate the Function ofEndothelial Progenitor Cells from Patients with Acute Myocardial Infarction).International Journal of Cardiology 2013,167(4),1298–1304.
(61)Hammock,Bruce D.Ahmet Bora Inceoglu,S.L.J.用EET和sEH抑制缓解神经性疼痛(Alleviating Neurophatic Pain with EETs and sEH Inhibition)(Patent),2010.
(62)Lee,K.S.S.；Liu,J.-Y.；Wagner,K.M.；Pakhomova,S.；Dong,H.；Morisseau,C.；Fu,S.H.；Yang,J.；Wang,P.；Ulu,A.；Mate,C.a；Nguyen,L.V；Hwang,S.H.；Edin,M.L.；Mara,A.a；Wulff,H.；Newcomer,M.E.；Zeldin,D.C.；Hammock,B.D.可溶性环氧化物水解酶的优选抑制剂改善体外靶标滞留时间和体内效率(Optimized Inhibitors of SolubleEpoxide Hydrolase Improve in Vitro Target Residence Time and in VivoEfficacy).Journal of medicinal chemistry 2014,57,7016–7030.
(63)Luo,P.；Chang,H.-H.；Zhou,Y.；Zhang,S.；Hwang,S.H.；Morisseau,C.；Wang,C.-Y.；Inscho,E.W.；Hammock,B.D.；Wang,M.-H.可溶性环氧化物水解么的缺失或抑制防止高血糖症，促进胰岛素分泌，并降低胰岛凋亡(Inhibition or Deletion of SolubleEpoxide Hydrolase Prevents Hyperglycemia,Promotes Insulin Secretion,andReduces Islet Apoptosis).The Journal of pharmacology and experimentaltherapeutics 2010,334(2),430–438.
(64)Imig,J.D.心血管生理学中的环氧化物和可溶性环氧化物水解么(Epoxidesand Soluble Epoxide Hydrolase in Cardiovascular Physiology).PhysiologicalReviews 2012,92,101–130.
(65)Capdevila,J.H.；Falck,J.R.；Imig,J.D.细胞色素P450花生四烯酸单氧酶在控制全身血压和实验性高血压中的作用(Roles of the Cytochrome P450ArachidonicAcid Monooxygenases in the Control of Systemic Blood Pressure andExperimental Hypertension).Kidney international 2007,72,683–689.
(66)Imig,J.D.；Walsh,K.a；Hye Khan,M.A.；Nagasawa,T.；Cherian-Shaw,M.；Shaw,S.M.；Hammock,B.D.可溶性环氧化物水解酶抑制和过氧化物酶体增殖物激活受体Γ激动剂在肥胖高血压大鼠中改善血管功能并降低肾脏损伤(Soluble Epoxide HydrolaseInhibition and Peroxisome Proliferator Activated ReceptorΓAgonist ImproveVascular Function and Decrease Renal Injury in Hypertensive Obese Rats).Experimental biology and medicine(Maywood,N.J.)2012,237,1402–1412.
(67)La Buscató,E.；
Figure BDA0001585995500000861
R.；Lamers,C.；Klingler,F.-M.；Hahn,S.；Steinhilber,D.；Schubert-Zsilavecz,M.；Proschak,E.可溶性环氧化物水解酶和过氧化物酶体增殖物激活受体的双重调节剂的设计和合成(Design and Synthesis of DualModulators of Soluble Epoxide Hydrolase and Peroxisome Proliferator-ActivatedReceptors).Journal of medicinal chemistry 2012,55(23),10771–10775.
(68)Sime,M.；Allan,A.C.；Chapman,P.；Fieldhouse,C.；Giblin,G.M.P.；Healy,M.P.；Lambert,M.H.；Leesnitzer,L.M.；Lewis,A.；Merrihew,R.V.；Rutter,R.a.；Sasse,R.；Shearer,B.G.；Wilson,T.M.；Xu,R.X.；Virley,D.J.GSK1997132B作为一种新型中心渗透苯并咪唑PPARγ部分激动剂的发现(Discovery of GSK1997132B a Novel CentrallyPenetrant Benzimidazole PPARγPartial Agonist).Bioorganic and MedicinalChemistry Letters 2011,21(18),5568–5572.
(69)Thalji,R.K.；McAtee,J.J.；Belyanskaya,S.；Brandt,M.；Brown,G.D.；Costell,M.H.；Ding,Y.；Dodson,J.W.；Eisennagel,S.H.；Fries,R.E.；Gross,J.W.；Harpel,M.R.；Holt,D.a.；Israel,D.I.；Jolivette,L.J.；Krosky,D.；Li,H.；Lu,Q.；Mandichak,T.；Roethke,T.；Schnackenberg,C.G.；Schwartz,B.；Shewchuk,L.M.；Xie,W.；Behm,D.J.；Douglas,S.a.；Shaw,A.L.；Marino,J.P.1-(1,3,5-三嗪-2-基)哌啶-4-甲酰胺作为可溶性环氧化物水解酶抑制剂的发现(Discovery of1-(1,3,5-Triazin-2-Yl)piperidine-4-Carboxamides as Inhibitors of Soluble Epoxide Hydrolase).Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 2013,23,3584–3588.
(70)Nomura,M.；Tanase,T.；Ide,T.；Tsunoda,M.；Suzuki,M.；Uchiki,H.；Murakami,K.；Miyachi,H.设计、合成和评价取代的苯基丙酸衍生物作为人过氧化物酶体增殖物激活受体。发现有效的和人过氧化物酶体增殖物激活受体α亚型选择性活化剂(Design,Synthesis,and Evaluation of Substituted Phenylpropanoic AcidDerivatives as Human Peroxisome Proliferator Activated ReceptorActivators.Discovery of Potent and Human Peroxisome Proliferator ActivatedReceptor Alpha Subtype-Selective Activators).Journal of medicinal chemistry2003,46(Chart 1),3581–3599.
(71)Schmitt,M.L.；Hauser,A.T.；Carlino,L.；Pippel,M.；Schulz-Fincke,J.；Metzger,E.；Willmann,D.；Yiu,T.；Barton,M.；Schüle,R.；Sippl,W.；Jung,M.非肽类炔丙胺作为具有细胞活性的赖氨酸特异性脱甲基酶1(LSD1)的抑制剂(NonpeptidicPropargylamines as Inhibitors of Lysine Specific Demethylase 1(LSD1)withCellular Activity).Journal of Medicinal Chemistry 2013,56,7334–7342.
(72)Valeur,E.；Bradley,M.PS-IIDQ：高效聚合物支持的酰胺偶联试剂(PS-IIDQ:An Efficient Polymer-Supported Amide Coupling Reagent).Chemicalcommunications(Cambridge,England)2005,No.Table 1,1164–1166.
(73)La Ferla,B.；Orsato,A.；Zona,C.；Cervi,G.；Papeo,G.；Felder,E.R.；Nicotra,F.合成针对生物活性化合物文库生成适当功能化的β-咔啉支架(Synthesis of aBeta-Carboline Scaffold Properly Functionalized for the Generation ofLibraries of Bioactive Compounds).Synthesis 2010,601–604.
(74)Hieke,M.；Ness,J.；Steri,R.；Greiner,C.；Werz,O.；Schubert-Zsilavecz,M.；Weggen,S.；Zettl,H.酸性双重γ-分泌酶/PPARγ调节剂的SAR研究(SAR Studies ofAcidic Dual Gamma-secretase/PPARgamma Modulators).Bioorganic and MedicinalChemistry 2011,19(18),5372–5382.
(75)Proschak,E.；Sander,K.；Zettl,H.；Tanrikulu,Y.；Rau,O.；Schneider,P.；Schubert-Zsilavecz,M.；Stark,H.；Schneider,G.从分子形状到有效的生物活性剂II：基于片段的从头设计(From Molecular Shape to Potent Bioactive Agents II:Fragment-Based de Novo Design).ChemMedChem 2009,4(1),45–48.
(76)Giannetti,A.M.；Zheng,X.；Skelton,N.J.；Wang,W.；Bravo,B.J.；Bair,K.W.；Baumeister,T.；Cheng,E.；Crocker,L.；Feng,Y.；Gunzner-toste,J.；Ho,Y.；Hua,R.；Liederer,B.M.；Liu,Y.；Ma,X.；Brien,T.O.；Oeh,J.；Sampath,D.；Shen,Y.；Wang,C.；Wang,L.；Wu,H.；Xiao,Y.；Yuen,P.；Zak,M.；Zhao,G.；Zhao,Q.；Dragovich,P.S.基于P.S.片段鉴定衍生自反式-2-(吡啶-3-基)环丙烷羧酸的酰胺的酰胺作为人烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)的抑制剂(Fragment-Based Identi Fi Cation of Amides Derived from Trans-2-(Pyridin-3-Yl)cyclopropanecarboxylic Acid as Potent Inhibitors of HumanNicotinamide Phosphoribosyltransferase(NAMPT)).Journal of medicinal chemistry2014.
(77)Toy,P.H.；Dhanabalasingam,B.；Newcomb,M.；Hanna,I.H.；Hollenberg,P.F.取代的超敏原探针，用于酶催化的羟基化反应：外消旋和对映体富集形式的合成及其在细胞色素P450催化氧化(A Substituted Hypersensitive Radical Probe for Enzyme-Catalyzed Hydroxylations:Synthesis of Racemic and Enantiomerically EnrichedForms and Application in a Cytochrome P450-Catalyzed Oxidation).J.Org.Chem.1997,62(11),9114–9122.
(78)Reichelt,A.；Gaul,C.；Frey,R.R.；Kennedy,A.；Martin,S.F.设计、合成和评价包括环丙烷衍生的模拟肽作为P1’和P2'替代的基质金属蛋白酶抑制剂(Design,Synthesis,and Evaluation of Matrix Metalloprotease Inhibitors BearingCyclopropane-Derived Peptidomimetics as P1’and P2'Replacements).Journal ofOrganic Chemistry 2002,67(c),4062–4075.
(79)Johnson,S.M.；Petrassi,H.M.；Palaninathan,S.K.；Mohamedmohaideen,N.N.；Purkey,H.E.；Nichols,C.；Chiang,K.P.；Walkup,T.；Sacchettini,J.C.；Sharpless,K.B.；Kelly,J.W.双芳基肟醚作为转甲状腺素蛋白原纤维蛋白形成的有效抑制剂(Bisaryloxime Ethers as Potent Inhibitors of Transthyretin Amyloid FibrilFormation).Journal of Medicinal Chemistry 2005,48,1576–1587.
(80)Henderson,T.J.；Cullinan,D.B.通过定量(13)C NMR光谱分析氰化氢的纯度、氯化氰和光气(Purity Analysis of Hydrogen Cyanide,Cyanogen Chloride andPhosgene by Quantitative(13)C NMR Spectroscopy).Magnetic resonance inchemistry:MRC 2007,45(March),954–961.
(81)Miyaura,N.；Suzuki,有机硼化合物的钯催化的交叉偶联反应(A.Palladium-Catalyzed Cross-Coupling Reactions of Organoboron Compounds).Chemical Reviews1995,95(1),2457–2483.
(82)Morini,G.；Comini,M.；Rivara,M.；Rivara,S.；Bordi,F.；Plazzi,P.V.；Flammini,L.；Saccani,F.；Bertoni,S.；Ballabeni,V.；Barocelli,E.；Mor,M.具有中度抗胆碱酯酶活性的联苯H3受体拮抗剂的合成和结构-活性关系(Synthesis and Structure-Activity Relationships for Biphenyl H3Receptor Antagonists with ModerateAnti-Cholinesterase Activity).Bioorganic and Medicinal Chemistry 2008,16(23),9911–9924.
(83)Zhao,H.氘标记的5-取代1H-四唑的合成和结构(The Synthesis andStructures of Deuterium-Labeled 5-Substituted 1H-Tetrazoles).Journal ofLabelled Compounds and Radiopharmaceuticals 2008,51(December 2007),293–296.
(84)Pillarisetti,S.；Khanna,I.靶向针对炎症和疼痛的可溶性过氧化物水解酶-药理学和抑制剂的概述(Targeting Soluble Epoxide Hydrolase for Inflammationand Pain-an Overview of Pharmacology and the Inhibitors).Inflammation&allergydrug targets 2012,11(2),143–158.
(85)Xing,L.；McDonald,J.J.；Kolodziej,S.a；Kurumbail,R.G.；Williams,J.M.；Warren,C.J.；O’Neal,J.M.；Skepner,J.E.；Roberds,S.L.通过组合文库设计和基于结构的虚拟筛选发现可溶性过氧化物水解酶的高效抑制剂(Discovery of Potent Inhibitorsof Soluble Epoxide Hydrolase by Combinatorial Library Design and Structure-Based Virtual Screening).Journal of medicinal chemistry 2011,54(5),1211–1222.
(86)Lamers,C.；Schubert-Zsilavecz,M.；Merk,D.过氧化物酶体增殖物-活化受体(PPAR)的治疗性调节剂：专利分析(2008至今)(Therapeutic Modulators ofPeroxisome Proliferator-Activated Receptors(PPAR):A Patent Review(2008-Present)).Expert opinion on therapeutic patents 2012,22(7),803–841.
(87)Ohashi,M.；Nakagome,I.；Kasuga,J.I.；Nobusada,H.；Matsuno,K.；Makishima,M.；Hirono,S.；Hashimoto,Y.；Miyachi,H.设计、合成和体外评价一系列α-取代的苯基丙酸PPARγ动剂以进一步研究立体化学-活性关系(Design,Synthesis and inVitro Evaluation of a Series of Alpha-Substituted Phenylpropanoic AcidPPARgamma Agonists to Further Investigate the Stereochemistry-ActivityRelationship).Bioorganic and Medicinal Chemistry 2012,20(21),6375–6383.
(88)Gomez,G.A.；Morisseau,C.；Hammock,B.D.；Christianson,D.W.人可溶性过氧化物水解酶：通过4-(3-环己基脲基)羧酸抑制的结构基础(Human Soluble EpoxideHydrolase:Structural Basis of Inhibition by4-(3-Cyclohexylureido)-CarboxylicAcids).Protein science:a publication of the Protein Society 2006,15(1),58–64.
(89)Pirat,C.；Farce,A.；Lebègue,N.；Renault,N.；Furman,C.；Millet,R.；Yous,S.；Speca,S.；Berthelot,P.；Desreumaux,P.；Chavatte,P.靶向过氧化物酶体增殖物-活化受体(PPAR)：调节剂的研究(Targeting Peroxisome Proliferator-Activated Receptors(PPARs):Development of Modulators).Journal of Medicinal Chemistry2012,55,4027–4061.
(90)Hahn,S.；Achenbach,J.；Buscató,E.；Klingler,F.-M.；Schroeder,M.；Meirer,K.；Hieke,M.；Heering,J.；Barbosa-Sicard,E.；Loehr,F.；Fleming,I.；Doetsch,V.；Schubert-Zsilavecz,M.；Steinhilber,D.；Proschak,E.互补筛选计数获得抑制可溶性过氧化物水解酶的磷酸酶活性的片段(Complementary Screening Techniques YieldedFragments That Inhibit the Phosphatase Activity of Soluble EpoxideHydrolase).ChemMedChem 2011,6(12),2146–2149.
(91)Thieme,T.M.；Steri,R.；Proschak,E.；Paulke,A.；Schneider,G.；Schubert-Zsilavecz,M.合理设计的匹立尼酸酸衍生物作为亚型选择性PPARγ调节剂(RationalDesign of a Pirinixic Acid Derivative That Acts as Subtype-SelectivePPARgamma Modulator).Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 2010,20(8),2469–2473.
(92)Ishiyama,M.；Tominaga,H.；Shiga,M.；Sasamoto,K.；Ohkura,Y.；Ueno,K.用高度水溶性四唑盐、中性红和结晶紫的体外细胞毒性和细胞活力组合试验(A CombinedAssay of Cell Viability and in Vitro Cytotoxicity with a Highly Water-SolubleTetrazolium Salt,Neutral Red and Crystal Violet).Biological&pharmaceuticalbulletin 1996,19,1518–1520.
(93)Morisseau,C.；Goodrow,M.H.；Newman,J.W.；Wheelock,C.E.；Dowdy,D.L.；Hammock,B.D.基于尿素的可溶性环氧化物抑制剂的结构细化(Structural Refinement ofInhibitors of Urea-Based Soluble Epoxide Hydrolases).Biochemical pharmacology2002,63(9),1599–1608.
(94)Morin,C.；Sirois,M.；
Figure BDA0001585995500000912
V.；Albadine,R.；Rousseau,E.17,18-环氧二十碳三烯酸靶向PPARγ和p38分裂素活化的蛋白激酶以介导其在可溶性环氧化物水解酶的肺作用中的抗炎症作用(17,18-Epoxyeicosatetraenoic Acid Targets PPARγandp38Mitogen-Activated Protein Kinase to Mediate Its Anti-Inflammatory Effectsin the Lung Role of Soluble Epoxide Hydrolase).American Journal ofRespiratory Cell and Molecular Biology 2010,43(21),564–575.
(95)Guan,Y.过氧化物酶体增殖物-活化受体(PPAR)：肾病中新型治疗靶标(Peroxisome Proliferator-Activated Receptors(PPARs):Novel Therapeutic Targetsin Renal Disease).Kidney international 2001,61,354–355.
(96)Choi,J.H.；Banks,A.S.；Estall,J.L.；Kajimura,S.；
Figure BDA0001585995500000911
P.；Laznik,D.；Ruas,J.L.；Chalmers,M.J.；Kamenecka,T.M.；Blüher,M.；Griffin,P.R.；Spiegelman,B.M.抗糖尿病药物通过Cdk5抑制肥胖关联的PPARγ的磷酸化(Anti-Diabetic DrugsInhibit Obesity-Linked Phosphorylation of PPARgamma by Cdk5).Nature 2010,466(July),451–456.
(97)Choi,J.H.；Banks,A.S.；Kamenecka,T.M.；Busby,S.a.；Chalmers,M.J.；Kumar,N.；Kuruvilla,D.S.；Shin,Y.；He,Y.；Bruning,J.B.；Marciano,D.P.；Cameron,M.D.；Laznik,D.；Jurczak,M.J.；Schürer,S.C.；
Figure BDA0001585995500000913
D.；Shulman,G.I.；Spiegelman,B.M.；Griffin,P.R.非激活剂PPARγ配体的抗糖尿病作用阻断Cdk5-介导的磷酸化(Antidiabetic Actions of a Non-Agonist PPARγLigand Blocking Cdk5-MediatedPhosphorylation).Nature 2011,477,477–481.
(98)Min Lu,David A.Sarruf,Saswata Talukdar,Shweta Sharma,Pingping Li,Gautam Bandyopadhyay,Sarah Nalbandian,WuQiang Fan,Jiaur R.Gayen,S.K.；Mahata,Nicholas J.Webster,Michael W.Schwartz2,4,and J.M.O.头PPARγ促进肥胖症并且是的噻唑烷二酮的胰岛素-致敏效应所需要的(Brain PPARγPromotes Obesity and IsRequired for the Insulin–Sensitizing Effect of Thiazolidinediones).NatMed.2012,127(5),358–366.
(99)Karen K.Ryan,Bailing Li,Bernadette E.Grayson,Emily K.Matter,Stephen C.Woods,和R.J.S.CNS PPARΓ在调节能力平衡中的作用(A Role for CNS PPARΓin the Regulation of Energy Balance).Nat Med.2011,17(5),623–626.
(100)Higgins,L.S.；Depaoli,A.M.选择性过氧化物酶体增殖物-活化受体G(PPARγ)调节作为更安全的治疗性PPAR G活化1-3的策略(Selective PeroxisomeProliferator-Activated Receptor G(PPAR Gamma)Modulation as a Strategy forSafer Therapeutic PPAR G Activation 1–3).The American journal of clinicalnutrition 2010,91,267–272.
(101)Sun,Y.；Zhang,X.；Lu,T.；Yuan,Y.；Ding,Q.；Lu,C.通过LC-MS/MS方法确定小鼠机体针对益母草碱O/O微乳液的PK和BA概况的研究(A Study on the PK and BAProfiles in the Mouse Body for Leonurine O/O Microemulsion with Determinationby the LC-MS/MS Method).European Journal of Drug Metabolism andPharmacokinetics 2015.
(102)Hwang,S.H.；Wecksler,A.T.；Zhang,G.；Morisseau,C.；Nguyen,L.V.；Fu,S.H.；Hammock,B.D.索拉非尼和瑞戈非尼样sEH抑制剂的合成和生物评估(Synthesis andBiological Evaluation of Sorafenib-and Regorafenib-like sEH Inhibitors).Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 2013,23(13),3732–3737.
(103)Hwang,S.H.；Wagner,K.M.；Morisseau,C.；Liu,J.-Y.；Dong,H.；Wecksler,A.T.；Hammock,B.D.作为环氧酶-2和可溶于环氧化物水解酶的双重抑制剂的包含尿素的吡唑的合成和结构-活性关系研究(Synthesis and Structure-Activity RelationshipStudies of Urea-Containing Pyrazoles as Dual Inhibitors of Cyclooxygenase-2and Soluble Epoxide Hydrolase).Journal of medicinal chemistry2011,54(8),3037–3050.
(104)Jones,P.D.；Tsai,H.-J.；Do,Z.N.；Morisseau,C.；Hammock,B.D.可溶性环氧化物水解酶构象限制的抑制剂的合成和SAR(Synthesis and SAR of ConformationallyRestricted Inhibitors of Soluble Epoxide Hydrolase).Bioorganic&medicinalchemistry letters 2006,16,5212–5216.
(105)Li,H.Y.；Jin,Y.；Morisseau,C.；Hammock,B.D.；Long,Y.Q.5-取代的哌嗪作为新型的二级药效团大大改善了基于尿素的可溶性环氧化物水解酶抑制剂的物理性质(The 5-Substituted Piperazine as a Novel Secondary Pharmacophore GreatlyImproving the Physical Properties of Urea-Based Inhibitors of Soluble EpoxideHydrolase).Bioorganic and Medicinal Chemistry 2006,14,6586–6592.
(106)Huang,S.X.；Li,H.Y.；Liu,J.Y.；Morisseau,C.；Hammock,B.D.；Long,Y.Q.将哌嗪基功能基整合到1,3-而取代的尿素作为第三位药效团向可溶性环氧化物水解酶的高效抑制剂提供了改善的药物动力学性质(Incorporation of PiperazinoFunctionality into 1,3-Disubstituted Urea as the Tertiary PharmacophoreAffording Potent Inhibitors of Soluble Epoxide Hydrolase with ImprovedPharmacokinetic Properties).Journal of Medicinal Chemistry 2010,53(Figure 1),8376–8386.
(107)Miyachi,H.；Nomura,M.；Tanase,T.；Suzuki,M.；Murakami,K.；Awano,K.人过氧化物酶体增殖物激活受体α上光学活性苯丙酸衍生物的外消旋依赖性结合和反式激活(Enantio-Dependent Binding and Transactivation of Optically ActivePhenylpropanoic Acid Derivatives at Human Peroxisome Proliferator-ActivatedReceptor Alpha).Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 2002,12,333–335.
(108)Miyachi,H.；Nomura,M.；Tanase,T.；Takahashi,Y.；Ide,T.；Tsunoda,M.；Murakami,K.；Awano,K.设计、合成和评估取代的苯丙酸衍生物作为过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)激活剂：新型人PPARα选择性激活剂(Design,Synthesis and Evaluation ofSubstituted Phenylpropanoic Acid Derivatives as Peroxisome Proliferator-Activated Receptor(PPAR)Activators:Novel Human PPARalpha-SelectiveActivators).Bioorganic&medicinal chemistry letters 2002,12,77–80.
(109)Tang,W.H.W.；Maroo,A.PPARγ激活剂：安全地解决心脏衰竭(PPARgammaAgonists:Safety Issues in Heart Failure).Diabetes,obesity&metabolism 2007,9,447–454.
(110)Yang,T.；Soodvilai,S.噻唑烷二酮诱导液保留的肾脏和血管机制(Renaland Vascular Mechanisms of Thiazolidinedione-Induced Fluid Retention).PPARresearch 2008,2008.
(111)Hwang,S.H.；Wecksler,a.T.；Wagner,K.；Hammock,B.D.合理设计针对炎症和疼痛的多靶标试剂(Rationally Designed Multitarget Agents againstInflammation and Pain).Current medicinal chemistry 2013,20,1783–1799.
(112)Wolf,N.M.；Morisseau,C.；Jones,P.D.；Hock,B.；Hammock,B.D.开发针对可溶性环氧化物水解酶抑制的高通量筛选(Development of a High-Throughput Screenfor Soluble Epoxide Hydrolase Inhibition).Analytical biochemistry 2006,355(1),71–80.
(113)Rau,O.；Wurglics,M.；Paulke,A.；Zitzkowski,J.；Meindl,N.；Bock,A.；Dingermann,T.；Abdel-Tawab,M.；Schubert-Zsilavecz,M.鼠尾草酸和鼠尾草酚，香草迷迭香和鼠尾草的酚类二萜化合物是活化的人过氧化物酶体增殖物受体γ(Carnosic Acidand Carnosol,Phenolic Diterpene Compounds of the Labiate Herbs Rosemary andSage,Are Activators of the Human Peroxisome Proliferator-Activated ReceptorGamma).Planta medica 2006,72(10),881–887.
(114)Zebisch,K.；Voigt,V.；Wabitsch,M.；Brandsch,M.3T3-L1细胞高效分化至脂肪细胞的方法(Protocol for Effective Differentiation of 3T3-L1Cells toAdipocytes).Analytical Biochemistry 2012,425(1),88–90.
(115)Sisignano,M.；Park,C.-K.；Angioni,C.；Zhang,D.D.；von Hehn,C.；Cobos,E.J.；Ghasemlou,N.；Xu,Z.-Z.；Kumaran,V.；Lu,R.；Grant,A.；Fischer,M.J.M.；Schmidtko,A.；Reeh,P.；Ji,R.-R.；Woolf,C.J.；Geisslinger,G.；Scholich,K.；Brenneis,C.5,6-EET在神经活性后释放并通过中性传入终端诱导机械性疼痛超敏反应(5,6-EET IsReleased upon Neuronal Activity and Induces Mechanical Pain Hypersensitivityvia TRPA1on Central Afferent Terminals).The Journal of neuroscience:theofficial journal of the Society for Neuroscience 2012,32(18),6364–6372.

Claims (14)

1.一种化合物或其盐，其具有以下结构：
Figure FDF0000013211230000011
其中：X-Y是CH＝C或CH2-CH；R1是CH2CH3，CH3或H；并且R3是氟取代的芳基基团；其中R3是
Figure FDF0000013211230000012
其中，所述化合物能够同时抑制可溶性环氧化物水解酶(sEH)并选择性表现出相较于过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)和过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)而言针对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的激动剂活性，以治疗对象中的代谢综合症。
2.如权利要求1所述的化合物，其中，R3是：
Figure FDF0000013211230000013
3.如权利要求1所述的化合物，其中X-Y是CH2-CH，并且R1是CH2CH3。
4.如权利要求1所述的化合物，其中X-Y是CH2-CH，并且R1是H。
5.如权利要求1所述的化合物，其中，给予对象时，所述化合物表现出小于1.0微摩尔的对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)半最大有效浓度(EC50)以及对可溶性环氧化物水解酶(sEH)半最大抑制浓度(IC50)，其中所述化合物表现出大于10微摩尔的对过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)和过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)半最大有效浓度(EC50)。
6.一种组合物，其包括：(a)权利要求1-5中任一项所述的化合物；和(b)药学上可接受的运载体。
7.权利要求6所述的组合物，其被配制成口服剂型。
8.如权利要求1所述的化合物在生产用于治疗对象代谢综合症的药剂中的应用。
9.如权利要求1所述的化合物在生产用于治疗对象糖尿病的药剂中的应用。
10.如权利要求1所述的化合物在生产药剂中的应用，所述药剂用于在对象中同时调节可溶性环氧化物水解酶(sEH)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)活性。
11.如权利要求8所述的应用，其中X-Y是CH2CH，并且R1是H，R3是
Figure FDF0000013211230000021
12.如权利要求9所述的应用，其中X-Y是CH2CH，并且R1是H，R3是
Figure FDF0000013211230000022
13.如权利要求10所述的应用，其中X-Y是CH2CH，并且R1是H，R3是
Figure FDF0000013211230000031
14.如权利要求1所述的化合物，其中X-Y是CH2CH，并且R1是H，R3是
Figure FDF0000013211230000032
CN201680050731.4A 2015-07-02 2016-07-01 用可溶性环氧化物水解酶和过氧化物酶体增殖物激活受体的新型双重调节剂治疗糖尿病和代谢综合症 Active CN108026028B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562188010P 2015-07-02 2015-07-02
US62/188,010 2015-07-02
PCT/US2016/040708 WO2017004525A1 (en) 2015-07-02 2016-07-01 Diabetes and metabolic syndrome treatment with a novel dual modulator of soluble epoxide hydrolase and peroxisome proliferator-activated receptors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108026028A CN108026028A (zh) 2018-05-11
CN108026028B true CN108026028B (zh) 2021-11-09

Family

ID=56413910

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680050731.4A Active CN108026028B (zh) 2015-07-02 2016-07-01 用可溶性环氧化物水解酶和过氧化物酶体增殖物激活受体的新型双重调节剂治疗糖尿病和代谢综合症

Country Status (7)

Country Link
US (2) US10927069B2 (zh)
EP (1) EP3317249A1 (zh)
JP (1) JP6957359B2 (zh)
CN (1) CN108026028B (zh)
AU (1) AU2016288642B2 (zh)
CA (1) CA2991161A1 (zh)
WO (1) WO2017004525A1 (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018215070A1 (en) * 2017-05-24 2018-11-29 Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main Dual modulators of farnesoid x receptor and soluble epoxide hydrolase
WO2021053234A1 (en) * 2019-09-19 2021-03-25 Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main Compounds and compositions for treating kidney disease
CN110898047A (zh) * 2019-12-23 2020-03-24 河北科技大学 一种眼用制剂及其制备方法和应用
US20230201169A1 (en) * 2020-04-27 2023-06-29 The Research Institute At Nationwide Children's Hospital PPARy AGONISTS FOR TREATMENT OF KIDNEY DISEASE
CN114014779A (zh) * 2021-12-14 2022-02-08 安徽师范大学 一种双芳基肟醚化合物及其制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002044127A1 (fr) * 2000-11-29 2002-06-06 Kyorin Pharmaceutical Co., Ltd. Dérivés d'acide carboxylique substitué
CN102643248A (zh) * 2006-04-18 2012-08-22 日本化学医药株式会社 过氧化物酶体增殖剂激活受体δ的激活剂

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4618845B2 (ja) * 1999-06-09 2011-01-26 杏林製薬株式会社 ヒトペルオキシゾーム増殖薬活性化受容体（ＰＰＡＲ）αアゴニストとしての置換フェニルプロピオン酸誘導体
WO2002044131A1 (fr) * 2000-11-29 2002-06-06 Kyorin Pharmaceutical Co., Ltd. Dérivés d'acide carboxylique substitués
CA2637620A1 (en) * 2006-02-16 2007-08-30 Boehringer Ingelheim International Gmbh Substituted pyridineamide compounds useful as soluble epoxide hydrolase inhibitors
EP2240026A4 (en) * 2008-01-30 2011-10-19 Glaxosmithkline Llc NEW SEE INHIBITORS AND THEIR USE

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002044127A1 (fr) * 2000-11-29 2002-06-06 Kyorin Pharmaceutical Co., Ltd. Dérivés d'acide carboxylique substitué
CN102643248A (zh) * 2006-04-18 2012-08-22 日本化学医药株式会社 过氧化物酶体增殖剂激活受体δ的激活剂

Also Published As

Publication number Publication date
US11447445B2 (en) 2022-09-20
JP6957359B2 (ja) 2021-11-02
CA2991161A1 (en) 2017-01-05
AU2016288642A1 (en) 2018-01-18
EP3317249A1 (en) 2018-05-09
US20180297936A1 (en) 2018-10-18
AU2016288642B2 (en) 2020-11-26
CN108026028A (zh) 2018-05-11
JP2018524353A (ja) 2018-08-30
WO2017004525A1 (en) 2017-01-05
US20210238125A1 (en) 2021-08-05
US10927069B2 (en) 2021-02-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108026028B (zh) 用可溶性环氧化物水解酶和过氧化物酶体增殖物激活受体的新型双重调节剂治疗糖尿病和代谢综合症
Duan et al. Design, synthesis, and antidiabetic activity of 4-phenoxynicotinamide and 4-phenoxypyrimidine-5-carboxamide derivatives as potent and orally efficacious TGR5 agonists
US11192849B2 (en) Compounds, compositions, and methods for modulating ferroptosis and treating excitotoxic disorders
US20210053905A1 (en) Curcumin analogues as zinc chelators and their uses
Porcelli et al. Synthesis, characterization and biological evaluation of ureidofibrate-like derivatives endowed with peroxisome proliferator-activated receptor activity
US10399971B2 (en) Compound for treating or preventing hyperuricemia or gout
KR102268357B1 (ko) 항염증성 및 항종양성 2-옥소티아졸 및 2-옥소티오펜 화합물
RU2584986C2 (ru) Агонисты протеинтирозинфосфатазы-1, содержащей домен гомологии-2 src, и способы лечения с применением указанных агонистов
KR20200010387A (ko) 파르네소이드 x 수용체 및 가용성 에폭사이드 가수분해효소의 이중 조절제
TW200924755A (en) Novel methyl-benzimidazole derivatives
JP7466534B2 (ja) 代謝性疾患及び／又はその臨床状態を抑制及び／又は処置するための組成物及び方法
He et al. Development of FABP4/5 inhibitors with potential therapeutic effect on type 2 Diabetes Mellitus
AU2011274665B2 (en) Pharmaceutical compositions including carbamoyloxy arylalkanoyl arylpiperazine compound
JP2020505413A (ja) Ｒｏｒガンマモジュレーター及びその使用
JP2008214222A (ja) フェノール誘導体及びその医薬用途
CN116217511B (zh) 一种双靶点化合物及其制备方法和在制备sEH抑制剂与PPARs激动剂中的应用
Jung et al. A novel partial PPARα/γ dual agonist SN159 improves insulin sensitivity
Zhang et al. Design, synthesis and insulin-sensitizing activity of indomethacin and diclofenac derivatives
US10647673B2 (en) Acetophenone compound, preparation method thereof, and application thereof in fatty liver prevention and treatment

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant